Apoptoza

Apoptoza reprezint procesul fiziologic de moarte celular programat (PCD = Programmed Cellular Death).
Timp ndelungat au fost studiate doar mecanismele de proliferare i difereniere celulara,
n vreme ce procesul de moarte celular a fost considerat doar un proces haotic.
Procesul apoptotic are loc n toate organismele vii, atat n viaa embrionar cat i n cea
adult, prin acest mecanism organismele eliminand celulele nedorite, nocive sau anormale din
punct de vedere funcional.
Apoptoza nu rezult din leziune, nu este reversibil i nici nociv pentru organism, ci
chiar necesar pentru meninerea normalitii.
Aceast moarte celular programat din cursul dezvoltrii animale a fost descris de ctre
Glucsman (1951), Kerr (1965), Saunders (1966), Troyer i Fernandez (1975) Thompson
(1995), Warner i colab. (1995).
Drept sinonime pentru apoptoza celular se mai folosesc denumirile: moarte celular
normal, moarte celular fiziologic, sinucidere celular.
Astzi se cunoate c procesul de apoptoza are rol n medierea proceselor de dezvoltare i
a efectelor nutriionale care prelungesc cursul vieii. Descreterea anormal a apoptozei poate
avea rol n declanarea bolilor autoimune i a evenimentelor legate de senescen
(tumorigeneza).
MECANISMELE DE PRODUCERE A APOPTOZEI
In apoptoza, care este un proces normal i activ, nu exist o reactie inflamatorie i nici
vreo reacie de umflare a organitelor_celulare. In cursul procesului de apoptoza se elimin un
numr mare de celule far a se produce vreun proces inflamator. Arhitectura tisular i
celular adiacent este pstrat intact i ea umple spaiile lsate goale de celula apoptotic.
Celulele apoptotice sunt caracterizate printr-un proces de adunare i redistribuire a cromatinei
sub forma unei mase compacte care rmane pe membrana nuclear, urmat de zbarcirea
suprafeei celulare. Organitele celulare i n special mitocondriile sunt bine conservate, iar
celula apoptotic se rupe n corpusculi apoptotici. Asemenea corpi apoptotici pot transporta
antigne (incluzand fragmente de ADN intacte), care, n condiii anormale, pot deveni
responsabile de dezvoltarea de anticorpi( in lupusul eritematos sistemic). Deoarece aceti
corpusculi sunt rapid ingerai de celulele vecine i fagocite, ei sunt observai foarte rar chiar
i n timus, acolo unde viteza apoptozei este foarte mare.
Procesul de apoptoza se desfoar n trei timpi:

n faza iniial, celulele individuale, enclavate n esutul normal, pierd

legturile cu_celulele vecine, cromatina nuclear se condenseaz, rczultand
fragmentarea ADN-ului celular; celulele se retracta din cauza pierderii de continut
citoplasmic i a condensrii proteinei citoplasmatice; cele mai multe organite
citoplasmatice rman ns intacte;

n faza a doua, membrana celular se zbarcete, se gurete i se fragmenteaz,

formndu-se corpi apoptotici care conin resturi nucleare;
n faza final, celulele vecine i macrofagele fagociteaz aceste fragmente pan la
degradare.
Procesul de apoptoz este foarte rapid i dureaz n total cateva ore. Procesul biochimic
apoptotic cel mai bine cunoscut este fragmentarea ADN-ului nuclear; clivarea lanului dublu

ADN se produce la nivelul regiunilor linker dintre nucleozomi (la gel-electro-forez apar
fragmente de ADN cu cate 180-200 de perechi de baze).
Modificrile structurale care apar n apoptoz au fost atribuite endonucleazelor Ca2+
dependente, transglutaminazelor, proteazelor.Totui pan n prezent un au fost inca
identificate endonucleazele responsabile de aceast fragmentare a ADN-ului.
Apoptoza ca proces activ necesit atat energie n form deATP cat i sinteza de ARN si de
proieine. Fornarea inozitolfosfailor care determin creterea concentraiei intracelulare de
ioni de Ca2+ este un eveniment precoce al apoptozei, urmat de exportul rapid i selectiv de
ioni i ap, ceea ce are drept consecin condensarea citoplasmei i cromatinei i formarea
fragmentelor de ADN.
Corpusculii apoptotici conin un schelet de proteine crosslinkate (anvelope) rezistente la
proteoliz.
Recunoaterea celulelor apoptotice i fagocitarea lor de ctre celulele fagocite par a fi
mediate de ctre numeroi receptori (vitronectina, tromboplastina etc.) de pe celulele umflate;
proteazele dependente de prezena ionilor de Ca2+ pot participa la degradarea citoscheletului
corpusculilor apoptotici.
In cursul apoptozei, pe partea extern a membranei plasmatice apare fosfatidilserina, care,
n mod normal, i are sediul pe partea intern a acesteia, aspect ce trebuie luat n considerare,
deoarece poate semnifica un semnal de activare a fagocitrii celulelor apoptotice.

NECROZA
Spre deosebire de apoptoz (moartea celular normal), necroza reprezint o moarte
celulara patologica; este un proces pasiv care apare sub aciunea unor noxe celulare, avand
drept consecin leziuni grave. In cursul necrozei se produce dilatarea reticulului
endoplasmic, creterea volumului mitocondriilor, flocularea cromatinei nucleare, umflarea
celulelor urmat de ruperea, printr-un dezechilibru osmotic a respectivelor celule. Cromatina
devine tot mai compact i nu apare distribuita pe membrana nuclear; apar leziuni
ultrastructurale ale organitelor celulare; n final, membrana plasmatica, organitele i nucleul
se dezintegreaz, iar resturile snut digerate de ctre fagocitele infiltrate.
In contrast cu apoptoza, n care procesul se produce ntr-o celul solitar, n cazul necrozei procesul apare simultan ntr-un grup de celule n care s-a produs n prealabil o leziune
n arhitectura celular. n final, ingestia fagocitar de celule necrozate (n contrast cu cele
apoptotice) este acompaniat de eliberarea de mediatori chimici ai inflamaiei, care induc un
rspuns de tip inflamator. Aceste aspecte se explic prin existena unui set diferit de semnale,
implicat n fagocitoza celulelor apoptotice, n comparaie cu setul de semnale implicat n
fagocitarea celulelor necrotice sau a agenilor infecioi.

FRECVENA PROCESULUI DE APOPTOZ

Dup cum s-a artat mai sus, apoptoza este un mecanism eficient de eliminare atat a
anumitor celule n cursul dezvoltrii embrionare cat i a celulelor adulte normale.
Exist de obicei un numr de celule normale care sunt depite la un moment dat dintr-o
multitudine de cauze; un exemplu este cel al celulelor neuronale care se produc n exces n
sistemul nervos al vertebratelor; n acest caz, 50% din diferitele tipuri de neuroni mor curand
dup ce au format conexiunile sinapice cu celulele tinta.. Aceste celule neuronale au avut
probabil o funcie n timpul evolutiei i dezvoltrii, dar au ncetat la un moment dat sa mai fie
necesare (au atins momentul de regresie a metamorfozei lor).
Apoptoza are loc i n celulele adulte somatice, n cursul reanoirii (primenirii) normale a
esuturilor (procesul de turnover), n cursul formrii keratocitelor, al atofierii prostatei dup
castrare, al regresiei glandei mamare dup perioada de lactatie, ca si in cursul atreziei foliculilor
ovarieni.

GENE IMPLICATE IN PROCESUL APOPTOTIC

A. Genele letale
In prezent exist evidena unei gene sau a unui set de gene care codific proteine cu efect letal (de
sinucidere) asupra celulei purttoare. Astfel, la organismul nevertebrat Caenorhabditis elegans
(nematod) au fost descrise dou asemenea gene: Ced 3 i Ced 4 cu aciune letal; n cazul n care una
din aceste gene este inactivat prin mutaie, nu mai survine moartea celular. Aceste dou gene
acioneaz autonom pentru a produce moartea celular programat. In mod similar, un numr de gene
letale au fost evideniate la mamifere; astfel, s-a artat c gena protooncogen, c-myc, care in mod
normal stimuleaz diviziunea celular, este implicat i n inducerea apoptozei (anume n creterea
expresiei ARN i a proteinei induse de gena c-myc care duce la apoptoza fibroblastelor).
In cazul genei supresoarc de tumori p53, s-a observat cum creterea nivelului proteinei p53 este
asociat.cu moartea celular apoptotic .
Aceste gene s-au dovedit eseniale pentru moartea celular apoptic, apoptoza rezultand n cazul
supraexpresiei genelor c-myc sau p53 prin coexpresia simultan a mai multor gene .
Apoptoza trebuie privit ca un proces fiziologic normal fa de influenele mediului extern; acest
proces este mediat de o cascad de transducii de semnale la suprafaa celular, probabil printr-un
program genetic ndreptat mpotriva unei stri antiproliferative. Astzi se tiu nc puine lucruri despre
caile acestei mori celulare. S-a demonstrat c multe gene letale sunt activate n cursul apoptozei. Dup
cum am artat deja, se pare ca o cretere a concentraiei ionilor de Ca 2+ n citosol ar avea un rol
important n funcia de reglare a apoptozei; totui acest mecanism rmane nc neclarificat. Se pare c
acest calciu citosolic ar declana i evenimentele secundare legate de activarea transglutaminazelor.
Enzimele de membran i citosolice (n particular proteinaza C) implicate n fosforilarea proteinelor au
rol central n transducerea semnalelor apoplotice.
Pornirea apoptozei necesit inducerea unui program genetic nou. Este posibil ca i oncogenele
nucleare cu activitate reglatorie transcripional s aib un rol n apoptoza; n acest sens s-a demonstrat
cum dereglarea expresiei c-myc este asociat cu inducerea apoptozei n celulele mieloide murine i
fibroblastele de obolan. De asemenea, s-a demonstrat cum produsul genei supresoare de tumori p53
(forma slbatic) induce apoptoza n celulele leucemice mieloide i n linia de celule oncogene de la
nivelul colonului. In schimb inhibarea genei p53 determin rezistena organismului la apoptoza (prin
inducere de ctre radiaiile ionizante).

B. Genele supravieuirii (gene antiapoptotice)

Genele supravieuirii sunt acelea care, n mod normal, acioneaz ca o fran asupra mecanismului
de moarte celular normal. Dac aceste gene sunt inactivate printr-o mutaie, multe celule care ar tri n
mod normal mai departe sunt supuse, n acest caz, apoptozei.
La organismul Caenorhabditis elegans, gena Ced 9 s-a dovadit c acioneaz drept
antagonist al morii apoptotice celulare. Activarea anormal a acestei gene Ced-9 face ca
moartea celular s nu se mai produc. In cazul contrar, cand se inactiveaz gena Ced-9 celula
intra sub influena genelor Ced-3 i Ced-4, care determin moartea precoce a respectivului organism.
Astzi este demonstrat faptul c asemenea gene de supravieuire exista i n celulele mamiferelor.
Astfel, la mamifere, s-a descris o protein din constituia membranei interne a mitocondriilor bcl-2,
care, n condiii de supraexprimare, determin inhibarea apoptozei. Aceasta protem bcl-2 nu stimuleaz
proliferarea celular, ci favorizeaz supravieuirea celular ntr-o stare nonciclic; aceeai gen bcl-2
inhib inducerea apoptozei de ctre gena c-myc i face celulele mai puin sensibile.la radiaii i droguri
citotoxice

C. Rolul apoptozei n embriogenez i dezvoltare

In prezent se tie c echilibrul apoptotic joac un rol important n embriogenez i
dezvoltare. Exprimarea fiziologic a genei bcl-2 (inhibitoare a apoptozei) este prezent n
esuturile fetale unde probabil joac un rol n dezvoltarea i morfogeneza normala. Este
demonstrat faptul c exist un impact important al nutriiei din cursul embriogenezei i
perioadei precoce de dup natere asupra dezvoltrii nou-nascutului si evoluiei individului n
cursul vieii adulte. La specia uman, greutatea mai mare la natere i alptare la san
micoreaz riscul dezvoltrii bolilor cardiace la vrst adult. Pe modele animale s-a dovedit
experimental existena unei tumorigeneze crescute n cazul n care respectivele animale au
primit o diet bogat n grsimi n cursul embriogenezei, prin scderea nivelului apoptozei,
dar nu i atunci cnd aceast diet a fost administrat dup natere i nrcare. Respectivele
efecte tumorigene imprimate de dieta bogat n grsimi din cursul embriogenezei au aprut
abia la a doua generaie.
D. Aspecte de reglare a apoptozei
De mare importan pentru un organism este meninerea balanei ntre genele letale i
genele de supravieuire, dar modul n care se menine aceast balan este n prezent foarte
puin cunoscut Se tie c semnalele extracelulare pot rupe aceast balan, rezultatul fiind
supravieuirea sau moartea, dup cum sunt induse sau supresate respectivele gene.
S-a dovedit ca niveluri nalte ale proteinei corespunztoare genei bcl-2 de la mamifere inhib
apoptoza, iar cele ale proteinei corespunztoare genei Ced 9 de la nematodul Caenorhabditis
elegans au un efect similar.
Experiena in vivo a demonstrat ca, n absena hormonilor specifici, multe celule dependente de sistemul endocrin (de exemplu, neuronii i oligodendrocitele) necesit pentru
dezvoltare factori neurotrofici i citokine, iar alte celule (tip celule hematopoietice) necesita
unul sau mai muli factori de stimulare (de exemplu, limfocitele T necesit interleukina 2).
Trebuie menionat cazul particular al blastomerelor, care supravieuiesc i se divid n
cultur, n absena moleculelor semnal exogene; blastomerele sunt singurele celule embrionare care necesit un minimum de comunicare. In general, atat supravieuirea cat i proliferarea sunt stimulate prin semnale provenite de la alte celule; se pare c exist un control
al mediului asupra vieuirii i morii celulare.

FACTORI IMPLICAI N REGLAREA APOPTOZEI

A. Factori inductori
Printre factorii interni care declaneaz i controleaz apoptoza se numr tiroxina,
glucocorticoizii, retinoizii (molecule lipofile). Acetia interacioneaz cu receptorii nucleari,
determinand activarea transcrierii genelor legate de inducerea apoptozei. S-a demonstrat, de
asemenea, c un antigen de suprafa al timocitelor (antigenul Fas) este implicat in procesul
de apoptoza. Agenti externi nefiziologicci, ca radiatiile ionizanta, substante toxice (toxine),
drogurile (agenti antitumorali chemoterapeutici), socul termic,ester-forbolul, ionii de Ca2+ ,
actioneaza tot ca inductori ai apoptozei.

B. Factori inhibitori
Factorii de cretere, factorii de activare a macrofagelor, factorii serici [ citoldnele (ccTNF) inhib apoptoza. De asemenea, la vertebrate, apoptoza este inhibat de catre toi
inhibitorii sintezei ARN-ului, ai sintezei proteice, ai proteinkinazei, ai tirozinfosforilrii, ai
endonucleazelor, ai transaminazelor i ai proteazelor.
A fost evideniat existena unui timing (intrare n funcie la un moment precis) al
apoptozei, n special n cursul morfogenezei i dezvoltrii. Aceste aspecte sunt ns foarte
greu de urmrit i clarificat, deoarece citoplasma celular i nucleul celular sunt potenial
autonome n declanarea procesului de apoptoza, i anume: celulele far nucleu pot declana
apoptoza, dar i nucleii pot declana modificri caracteristice de apoptoza n ADN-ul unor
celule intacte.

C. Glucocorticoizi sistem imun apoptoza

Nelson (1992) emite ipoteza conform creia ar exista o implicare neuroendocrin
nntarzierea mbtrnirii ca urmare a dietei hipocalorice. La oareci s-a demonstrat
experimental c o diet hipocaloric crete nivelul glicocorticoizilor in cadrul ritmului
circadian, cu ncepere nainte de miezul nopii, atingand varful chiar nainte de ora pranzului;
scderea nivelului de corticosteron are loc dup administrarea hranei; acest rezultat demonstreaz importana ritmului circadian atunci cand se urmrete msurarea nivelelor
circulatorii ale adrenocorticosteroizilor, cat i faptul c reducerea aportului de calorii poate
afecta semnificativ secreia de adrenocorticoizi. Se pare c atat ingestia total de calorii cat i
pattern-urile de alimentare (perioada de post cu hrnire intermitent/ acces continuu la hran)
ar putea influena viteza apoptozei i a proliferrii celulare. Hrana. hipocaloric cronic crete
atat nivelul diurn al corticoizilor plasmatici, ct i rata apoptozei. Hrnirea dup o perioad de

post apare asociat cu o scdere a ratei de apoptoza. Dieta hipocaloric favorizeaz, prin
creterea nivelului corticoizilor (cu rol important n modularea apoptozei), ntarzierea
mbtranirii celulare i a fenomenelor de tumorigenez.
Sistemul imun produce un mare exces de limfocite care sunt programate s moar dac
nu sunt recrutate pentru rspunsul imun. Se presupune c, n organele nonlimfoide, apoptoza
este foarte restrans i foarte rar n comparaie cu cea din sistemul imun.
La un individ normal, nivelul de corticoizi i rspunsul glucocorticoid la stres scade cu
varsta, dar acest declin poate fi atenuat printr-o diet hipocaloric. Nivelul crescut de
corticoizi cu capacitate de a elimina selectiv, prin apoptoza, celulele limfoide n exces (de
exemplu, celule T autoreactive ale sistemului imunitar) caracterizeaz un sistem imunitar
tanr. Prelungirea acestei capaciti n cursul vieii adulte ar putea fi ntreinut timp
ndelungat printr-o diet hipocaloric.
Pentru meninerea unei funcii normale a timusului este necesar un anumit nivel de baz
al glucocorticoizilor circulani. Celulele timice intrinseci exprim enzime steroidogene i
produc pregnenolon i dezoxicorticosteron. Se pare c aceti steroizi sintetizai local
acioneaz ntr-o manier paracrin.
Faptul c glucocorticoizii pot fi sintetizai local de organele aparatului imunitar (incluzand
aici i timusul) ridic posibilitatea ca o diet hipocaloric s aib efecte favorabile asupra
bolii autoimune, prin modularea generat local de glucocorticoizi. S-a avansat ipoteza
conform creia glucocorticoizii ar putea modula procesul de selecie i maturare, n cursul
dezvoltrii sistemului imun.
Din cele prezentate mai sus reiese c sistemul imun incluznd timusul ar putea fi un focar
important pentru dezvoltarea i pentru efectele de maturare ale glucocorticoizilor, n funcie
de modularea dietei alimentare. Corticoizii (sintetizai fie sistemic, fie local) ar putea avea un
efect critic asupra proceselor timice i de imprinting, incluzand selecia pozitiv a celulelor
CD4 i CD8.

APOPTOZA IMBTRANIRE SENESCEN

Printr-un proces de apoptoz controlat genetic n cursul vieii, se produce treptat o pierdere
de masa celulara, ceea ce duce la imbatranire. Procesul normal de mbtranire , evolueaza
catre stadiul final de senescenta, cand celulele nu mai evolueaz, devenind rezistente atat
la proliferare cat i la apoptoz. O data cu naintarea n vart scade eficiena apoptozei,
organismul fiind predispus la modificrile legate de varst (dereglari imune, degenerari,
tumorigenez). Dereglarea apoptozei poate duce la alterarea functiei imune, la dezvoltarea
bolii autoimune si la tumorigeneza.
In prezent se tie ca o diet hipocaloric (fr malnutriie sau deficiene de elemente
eseniale, dar cu scderea aportului de carbohidrai, proteine, .grsimi) duce la creterea
nivelului apoptozei , intarziind imbatranirea, prelungind perioada de viata si intarziind
momentul apariiei modificrilor legate de varst (degenerri, dereglri imune, tumorigenez); pn n prezent s-a dat totui prea puin atenie legturii existente ntre prelungirea perioadei de viaa (prin administrarea unei diete hipocalorice), pe de o parte, i
nivelul apoptozei, pe de alt parte.

Dei mecanismele implicate n procesul de senescen i tumorigenez rman insuficient clarificate, se cunoate faptul c acumularea de radicali liberi derivai dintr-un metabolism oxidativ i leziunile celulare rezultate din aciunea radicalilor liberi joac un rol
important n aceste fenomene.
Printr-o diet hipocaloric se poate reduce stresul oxidativ, homeostazia celular fiind
meninut i asigurandu-se prelungirea vieii.
APOPTOZA I STAREA DE BOAL
A. Agenii infectiosi virali si infecia virala
Agenii virali patogeni dezvolt strategii pentru inhibarea apoptozei, pemiand astfel
replicarea viral n celula gazd, a crei viata este prelungit. Astfel, s-a demonstrat c
adenovirusurile, virusul papilloma uman i sV40 pot modula apoptoz, prin interaciunea
unei proteine virale cu proteina celular p53.
n cazul infeciei cu virusul HIV 1,. depleia de limfocite este rezultatul unui proces
complex, n care legarea glicoproteinei gp120 (de pe suprafaa virusului HIV 1) de antigenul
CD4 al limfocitelor T CD4 face celula sensibil la apoptoz, la a doua stimulare. inand cont
de acest aspect, Sindromul de Imunodeficien Acut la Om (SIDA) poate fi privit ca un
dezechilibru ntre viteza mortii celulelor limfocitelor T CD4 si procesul de reannoire a
acestor celule.
Apoptoza crescut peste normal poate fi deci nociv prin pierderea unor celule CD4, a cror
prezenta ar fi atat de necesara in cazul de mai sus.

B. Boala autoimuna
Boala autoimuna reprezint o alt consecin a dereglrii apoptozei n sistemul
imunologic.
In condiii normale, limfocitele (autoreactive) mor prin apoptoz. Un deficit n deleia
(dispariia, moartea) lor, predispune la boala autoimuna. Supresia apoptozei joac
un rol important atat n bolile autoimune, cat i n patogeneza cancerului (de exemplu, n
limfoame). Administrarea de glucocorticoizi exogeni amelioreaz boala autoimuna (de
exemplu, lupusul eritematos) prin creterea apoptozei. S-a observat de asemenea ca o
perioad scurt de post sau de regim hipocaloric are efecte evidente asupra sintezei de
glucocoricoizi i asupra creterii apoptozei, care contribuie la eradicarea celulelor autoreactive din boala autoimuna in vivo.
S-a demonstrat c administrarea de uleiuri W-3 (din peste oceanic) duce la supresia bolii
autoimune i la prelungirea vieii.
Celulele CD4-, CD8-, (precursoare ale celulelor timice T) rezistente la apoptoz, exprim o
cantitate mai mare de proteina bcl-2 de cat celulele CD4+ i CD8+ sensibile la apoptoz,
confirmand astfel ca ar exista o corelatie intre exprimarea genei bcl-2 si rezistenta la
apoptoza.