MICROSCOPIOS ESPECIALES:

Al longitud de onda de rayos, + angulo de apertura, se consigue

de 0.1 micras a 2000 aumentos
MICROSCOPIO DE POLARIZACIN
o

La luz:
En medios homogneos (monorrefrigentes e istropos)
forma lineal, el campo se ver oscuro
o
En medios anistropos y birrefrigentes difraccin (rayo ord.
y extraord. solo vibra en un plano-) Ejm; cuarzo, turmalia, espato
de Islandia, topacio, fibras musculares y nerviosas, fibras de tejido
conjuntivo (colgenas elsticas y de reticulina), conos y bastones
de la retina, gotitas de lquido en corteza suprarrenal, cilios,
flagelos, tejido oseo calcificado.
-

M. polarizacin: M. ptico + debajo del condensador

(POLARIZADOR; es desgastado oblicuamente inclinacin 60 en
cara inf.) y encima del ocular un PRISMA DE NICOL DE ESPATO DE
ISLANDIA seccionado diagonalmente y pegado de nuevo con
blsamo- (ANALIZADOR)
El rayo llega a una cara de NICOL, all se difracta en un rayo
ordinario por llegar al blsamo con mucha inclinacin
superando ang. Lmite es rechazado hacia afuera y rayo
extraordinario penetra el Nicol vibrando en 1 plano (paralelo a
seccin principal), es reflejado hacia el eje ptico del microscpio
pasando por el objetivo y llegando a Nicol analizador.
Si plano de polarizacin o seccin principal es paralelo a
seccin principal del prisma de Nicol polarizador, el rayo
polarizado que se difracta es un rayo ordinario que no pasa Nicol y
rayo extraordinario atraviesa sin dificultad, iluminando el campo
(aparece sustancia anistropa clara)
Si rota analizador (seccin principal perpendicular a seccin
de polarizador) el rayo polarizado es extraordinario, no atraviesa
analizador y campo se ver oscuro. ASI SE ESTUDIA LA
BIRREFIGENCIA DE UNA SUSTANCIA.
Se reemplaz Nicol con filtros polaroide formados por cristales
de HERAPERITA compuesto yodado de la quinina- solo dejan
pasar rayos que vibran perpendicular a ellos

BIRREFIRNGENTES: alto grado de organizacin interna y

asimetra, estas sust. Coloreadas con colores vivos debido a
matices de colores de interferencia.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA Y DE CONTRASTE DE
FASE
-LONGITUD DE ONDA: distancia entre 2 crestas. Da el color
-AMPLITUD DE ONDA: distancia entre vrtice sup. De una cresta y
vrtico inf. De siguiente. Da intensidad osea brillo (+ amplitud ->
+ brillo) (- -> -)
-ONDAS EN FASE: 2 ondas con crestas y valles en paralelo. Si se
interfieren toman ondas de amplitud doble: INTERFERENCIA
CONSTRUCTIVA brillo + intenso
ONDAS LUMINOSAS CON FASE ALTERADA
Crestas y valles no coincidentes, al interferirse forma onda
luminosa de menos amplitud o se destruye: INTERFERENCIA
DESTRUCTIVA contraste negro
-Si onda de > amplitud atraviesa filtro segura -> - amplitud
-Si onda luminosa atraviesa material transparente
absorvente, ondas se retrasan y no altera amplitud

no

-Si onda luminosa atraviesa material transparente y absorvente,

ondas retardan, - amplitud al salir restable velocidad
*Estructuras de tejidos actan como filtros neutro dan casi mismo
grado de brillo, para diferenciarlo habra que teirlos, retarda
velocidad en de onda, altera fase de onda luminosa (no
perceptible al hombre) se pueden ver mediante INTERFERENCIA
CONSTRUCTIVA dar + o amplitud se distinguir estructuras
MICROSCOPIO INTERFERENCIA
-Usado de interfermetro para medir grosor o ndice de refraccin
del objetoj. Midiendo Cuantitativamente grado de fase alterada

-Se usa 2 haces de ondas luminosas del mismo origen (ondas

coherentes) . se logra colocando el condensador un separador de
haces luminosos.
*Un haz del OBJETO que pasa por este y altera fase segn
estructura que atraviesa.
*Un haz de REFERENCIA mantiene ondas en fase, al llegar al
objetivo por accin de otro separador se junta con el haz del
objeto (con fases alteradas) all se interfieren, dando + o
amplitud. Como haz de REFERENCIA es inalterable, proporciona un
Standard de medicinMIDE PESO Y DENSIDAD DE LA SUSTANCIA.
PERMITE VER ESTRUCTURAS SIN COLOR

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

-Permite observar finos detalles de estructuras transparente y al
estado fresco (ind refraccin no puede modificar amplitud para ser
visible)
-Incluye placas pticas (retardora de la longitud de la onda) en el
objetivo y en el condensador un diafragma anular que lanza un
cono luminoso encargado de variar la amplitud, lo que lo hace
visible.
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
-Lentes de cuarzo (ocular, objetivo, condensador, porta cubre
objeto luz UV absorbida por vidrio ptico). La imagnes
producidas por UV sern recogidas a nivel del ocular por un filme
fotogrfico, por uv ser invisible y daina,
-Luz UV: long. Onda pequea (2400 3650 Angstroms) ->
resolucin mayor que luz visible
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
-Se
basa en que algunas sustancias qumicas(fluorescentes)
pueden absorber energa de ondas UV y luego las emite como
ondas de mayor longitud de ondas comprendidas dentro del
espectro de la luz visible. El proceso se llama: FLUORESCENCIA
-Las estructuras histolgicas que contienen esta sustancia
aparecen con un brillo caracterstico, mientras las que no son
invisibles.
-Hay 2 tipos de fuorescencia:

* FLUORESCENCIA PRIMARIA O AUTOFLUORESCENCIA:

existe en Vit A, bacilo tuberculoso, la clorofila (fluorescencia roja)
riboflavina (fluorescencia amarilla), etc
*FLUORESCENCIA
SECUNDARIA:
inducida
utilizando
colorantes fluorescentes (fluorocromos)
-Microscopa de fluorescencia: microscopio corriente + fuente de
luz UV + uno a ms filtros capaces de impedir que la luz UV llegue
al ojo.
-Aplicacin:
Inmunofluorescencia: acoplar sustanciasfluorescentes a
antgenos y anticuerpos, sin que pierdan capacidad de
reaccin. As se detecta reacciones antgeno- anticuerpo
Citogentica: estudio de cromosomas, la mostaza de
quinacrina se usa para identificar las bandas de Q1 y con ello
se puede tipificar los distintos tipos de cromosomas del
cariotipo.
Identificacin
de sustancias qumicas varias protenas han sido
identificadas as
MICROSCOPIO DE CAMPO OBSCURO
-Microscopio corriente + diafragma o interceptor para campo
obscuro, que deja pasar un hilo de luz perifrica concntrica,
tambin se puede usar iluminacin oblicua, para mejores
resultados condensador parablico de Siedentopf, formado por un
lente gruesa plano-convexa, cuya curvatura es paraboloide de
revolucin con foco corto, calculado para concentrar los rayos en
la cara superior del portaobjeto. Un disco opaco central intercepta
todos los rayos de abertura numrica inferior, permitiendo solo
una iluminacin lateral anular, as se obtiene fondo negro por la
reflexin total que sufren los rayos luminoso a la salida del
cubreobjeto al pasar al aire, ya que el rayo perifrico llega hasta
el objeto y como su ngulo lmite es mayor, regresa a
condensador, pero si choca con partculas del objeto que refractan
el rayo, el campo ser iluminado.

MICROSCOPIO ELECTRNICO
1.MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN:

(Knoll y Ruska.Alemania) usa corriente de electrones y campos

electromagnticos para producir imgenes, los microscopios de
luz usan ondas luminosas y lentes de vidrio.
Se aplica las sgts propiedades del electron:
-Se propagan en el vaco, un trayecto ondulatorio, longitudes
de onda de 1000 a 1000 veces menor que los rayos visibles. La
longitud de onda se determina por voltaje que son acelerados.
-Pueden ser desviados de su trayectoria y concentrados por
campos electromagnticos
-Son invisibles para el ojo humano, son capaces de
impresionar las pantallas fluorescentes y placas fotogrficas
FUNCIONAMIENTO:
- La corriente de e es generada por un filamento de
tungsteno al que se aplica una diferencia de potencial de
60000 a 80000 voltios.
- EL haz es concentrado por un primer campo
electromagntico generado por una bobina, que acta de
condensador, y es enviado al objeto, luego de atravesarlo
es concentrado por un segundo campo electromagntico
generado por una bobina que acta de objetivo, as se
forma una imagen real, aumentada e invertida del objeto.
Los e- son recibidos por un tercer campo electromagntico
generado por una bobina que hace las veces de ocular
proyectando la imagen sobre una pantalla fluorescente,
donde se hacen visibles las imgenes.
- Los e que llegan al preparado y lo atraviesan sin modificar
curso al llegar a la pantalla producen fluorescencia. Los e
que chocan las estructuras del preparado tienen mayo
densidad, se dispersan y se desvan, siendo detenidos por
un diafragma y no llega a pantalla -> zonas oscuras son
regiones de alta densidad.
- La imagen til se obtiene reemplazando la pantalla por una
placa fotogrfica la cual es impresionada por los electrones
- En m. electr. Modernos se usa lentes auxiliares que se
colocan entre objeto y proyector, logrando mayores
aumentos
VENTAJAS:

Permite altas resoluciones (10 a 15 A)

pueden producir de
20000 a 3000 aumentos directos; se les agrega el aumento de
la ampliacin fotogrfica puede llegar a aumentos de un milln
o ms. Permite conocer ultra estructura biolgica.
DESVENTAJAS:
-No observar clulas vivas, ya que deben estar deshidratadas.
-Cortes demasiados finos (200 a 1000 A) por el escaso poder
de penetracin
-Las estructuras no pueden ser coloreadas, se usa colorantes
electrnicos metales pesados como osmio ( + imp) plomo
uranio y lantano, que aumentan el contraste de estructuras.
2.MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO:
Permite apreciar imgenes tridimensionales de clulas y
tejidos, Se forma con un rayo fino de 100 A o menos. Los e
desplazan tocando punto por punto, los tocados emiten electrones
(secundarios) lo que son captados por detectores especiales que
generan corriente de e proporcionales a la intensidad de emisin
de electrones secundarios. Estas se transmiten a las placas
detectoras de un tubo de televisin en la pantalla aparece la
imagen de la superficie.
No es necesario cortes finos porque no tiene que atravesar
muestra
La resolucin es limitada 100 A max. Por su gran profundidad
permite imagenes con notable calidad tridimensional.
OTROS MEDIOS DE OBSERVACIN DIRECTA DE CLULAS Y
TEJIDOS
A EXTERIORIZACIN Y TRANSLUMINACIN DE ORGANOS
Algunos rganos pueden ser exteriorizado y estudiados in vivo
por transiluminacin y a travs del microscopio con un
aumento relativamente bajo. EJM: secrecin pancretica,
ovulacin
B.
LA
CMARA
B LA CMARA
TRANSPARENTE
TRANSPARENTE
Cmara anterior del ojo es una cmara transparente natural.
EJM: circulacin sangunea, trasplante vulo,endometrio
menstruacin-.
C CULTIVO DE CLULAS Y ORGANOS

Medula espinal en linfa coagulada- Tejido implantado en

coagulo sanguneo que contiene jugo de embrin como
estimulante a crecimiento.
El mtodo de cultivo de rganos aisla el rudimento
embrionario de un rgano para valorar su capacidad de
crecimiento y diferenciacin. Esto proporciona medios de
experimentacin con tejidos y clulas.
OTROS MEDIOS DE OBSERVACIN INDIRECTA DE CLULAS Y
TEJIDOS
A HISTOGRAFA: Fotografa de cortes histolgicos por medio
de rayos X, emitidos por una ampolla y aplicando directamente
el corte sobre el lado sencillo de una pelcula fotogrfica de
granos muy finos. Corte debe ser delgado y fijado. Los
negativos obtenidos despus de revelados y fijados - se secan
y montan en blsamo entre porta y cubreobjetos y se examinan
a microscopio. Se usa para estudio de distribucin celular o
tisular de los cuerpos de elevado peso atmico elevado del
organismo (hierro, yodo, etc.) o introducidos (bismuto,
antimonio, oro, etc. O imgenes obtenidas por impregnacin
con metales pesados (osmio, oro, uranio)
B HISTORRADIOAUTOGRAFA: Se basa en reactividad de
elementos (istopos radiactivos) introducidos es organismos
animales, son detectados en los cortes histolgicos por su
capacidad de impresionar la emulsin fotogrfica expuesta a su
accin durante un tiempo determinado. Las sustancias
marcadas (isotopos radiactivos) se incorporan en estructuras
con elemento inactivo correspondiente al istopo radioactivo,
localizndose en los lugares donde ellos se sintetizan o
renuevan, por lo que se puede seguir evolucin o metabolismo.
Para estudiar ADN (compuesto timidina timina- ) se usa
Timidina Tritiada. Ser revelado en ncleo y mitocondrias por la
radioactividad
adquirida.
Para estudiar ARN (uracilo-) se usa Hirudina Tritiada
C MICROINCINERACIN:
consiste en fijar los tejidos en
alcohol absoluto para conservar las sustancias minerales en su
posicin original, luego se incluye parafina y se obtiene cortes
delgados de 3 a 5 micras, extendindolas en alcohol tibio o

aceite de parafina y se recogen en lminas de vidrio duro y

poco fusible. Se introducen en horno de cuarzo fundido, 500 a
600 C durante 15 min. Se destruye materia orgnica y la
imagen queda fija en porta objeto. Ya cubierto con cubreobjeto,
se examina con luz incidente oblicua o en fondo oscuro mate; a
este mecanismo se le conoce ESPODOGRAMA.