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RESPUESTA FISIOLGICA DE PLANTAS DE RBANO (Raphanus sativus L.

)
SOMETIDAS A ESTRS HDRICO.
PHYSIOLOGICAL RESPONSE OF PLANTS RADISH (Raphanus sativus L.) UNDER
WATER STRESS.

CRISTIAN SANTIAGO CASTAEDA


PEDRO ALEJANDRO BAUTISTA

INTRODUCCIN
El agua se presenta como el principal recurso que limita la produccin de cultivos para el
futuro, se estima que aproximadamente el 70% del agua utilizada por el hombre es destinada
para la agricultura (IFPRI, 2005), el crecimiento de la poblacin y el mal manejo de prcticas
de cultivos restringen cada da mas las reservas de agua en el planeta. La disponibilidad de
agua es el factor que modula la supervivencia, crecimiento y distribucin de las plantas;
cuando se habla del estrs hdrico se incorporan variables como , la salinidad, temperaturas
extremas altas o bajas son factores, que impiden a los cultivos desarrollar su potencial
gentico (Zhu, 2002).
El componente dominante de los organismos es el agua, por esta razn interviene en la
regulacin de los procesos biolgicos y fisiolgicos (Steudle, 2000). Entre el 80% a 90% de
agua est comprendida la biomasa de tejidos vegetales, presente como componente del
protoplasma, en su accin de hidratacin asociada con iones, disolviendo sustancias orgnicas
y macromolculas, completando espacios entre estructuras del protoplasma y la pared celular
y finalmente, como agua intersticial, que interviene como medio de transporte entre los
espacios intercelulares y en los tejidos de conduccin del xilema y el floema (Rodrguez,
2006).
Las plantas presentan diferentes respuestas cuando se enfrentan a condiciones de estrs hdrico
donde se presentan diferentes manifestaciones fisiolgicas y bioqumicas como; reduccin de
expansin y rea foliar, aumento en la sntesis y concentracin de solutos compatibles
(prolina, glicina, betana, azcares solubles y aminocidos), cambios en la concentracin y
conformacin de lpidos y protenas de membrana, disminucin del potencial hdrico que
conduce a la perdida de agua en las hojas y por ende perdida de la turgencia celular (Olivares,
2005; Moreno, 2009).
El rbano (Raphanus sativus L.) es una planta de gran importancia por sus propiedades
farmacuticas y altos contenidos de vitaminas y minerales, presenta caractersticas especiales
germinacin (7 das) y un ciclo de vida corto (45 das a cosecha) (CHC, 2012). Esta especie es
originaria del sur de Asia, de raz gruesa y carnosa, de tamao y forma variable, piel de color
rojo, rosado, blanco u oscuro, segn la variedad; posee hojas basales, pecioladas, lmina
lobulada con uno a tres pares de segmentos laterales con bordes dentados (Criollo y Garca,
2009). En los ltimos aos se ha notado una variabilidad climtica donde se reduce la
disponibilidad del recurso hdrico para la produccin de cultivo de rbano ya que esta especie
no tolera periodos de limitacin hdrica prolongados.
Basado en estas consideraciones, el presente trabajo se plante con el objetivo de evaluar el
comportamiento fisiolgico de plantas de rbano (Raphanus sativus L.) sometidas a
condiciones de estrs hdrico.

MATERIALES Y MTODOS
El presente trabajo fue realizado en el laboratorio de Fisiologa Vegetal del programa de
Ingeniera Agronmica de la Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia sede Tunja.
Se utilizaron plantas de rbano (Raphanus sativus L.) las cuales se sometieron a condiciones
de estrs extrayndolas 24 horas antes del estudio del medio de crecimiento (Figura 1), se
realiz el anlisis de parmetros fisiolgicos (Contenido de clorofilas, conductancia
estomtica, Fluorescencia de la clorofila y tasa respiratoria).

Figura1. Plantas de rbano (Raphanus sativus L.). Castaeda, 2016

Se utiliz un diseo completamente al azar con dos tratamientos, donde el tratamiento uno
consista en plantas control y el tratamiento dos perteneca a plantas sometidas al dficit
hidrico, con cinco repeticiones, diez unidades experimentales cada una compuesta por una
planta.
La evaluacin de los parmetros fisiolgicos se realiz en el siguiente orden:
Contenido de Clorofila
Como se indica en la figura, 2 la medicin del contenido se clorofila se realiz a travs de
Clorofilmetro (Minolta Spad 502 plus), siguiendo el protocolo establecido por el fabricante,
se realiz una medicin por planta completando las cinco unidades experimentales. De esta
manera con el valor de cada medicin expresada en unidades Spad se genera un promedio de
clorofilas totales por UE.

Figura 2. Medicin de Clorofila a travs de clorofilmetro. Castaeda, 2016

Conductancia estomtica
Se realiz usando un Pormetro de hoja (Decagon Devices SC - 1), siguiendo las indicaciones
del fabricante se calibro el sensor con respecto a la atmsfera del lugar, se ubic el sensor
del equipo en las hojas 3, 4 y 5 (Figura 4), para un total de tres mediciones por planta, en
donde el equipo arroja el valor correspondiente a la conductancia estomtica, que revela la
facilidad con la cual se mueven los gases a travs de los estomas. Los valores obtenidos se
presentan en mmol m-2 s-1.

Figura 3-4. Uso del Pormetro, Medicin de conductancia estomtica. Castaeda, 2016.

Fluorescencia de la clorofila
El parmetro fisiolgico correspondiente a la eficiencia fotosinttica (Fv/Fm) expresada a
travs del Quenching fotoqumico y no fotoqumico se evalu mediante un fluorometro
(Junior-Pam, WALZ), siguiendo las instrucciones del fabricante, como se muestra en la figura
5, se cubren las hojas de la planta con papel aluminio, durante 60 minutos con el propsito de
inducir la reduccin de la actividad del FSII a valores cercanos a cero. Transcurrido el tiempo
se procedi a realizar las mediciones y con la ayuda de un plstico negro se conserv la
condicin de oscuridad de las hojas, finalmente se instala el sensor del equipo y se procede
con la medicin.

Figura 5-6. Medicin de la eficiencia fotosinttica (Fv/Fm) , mediante el fluorometro (Junior-Pam,

WALZ). Castaeda, 2016.


Tasa respiratoria
Finalmente se procedi con la medicin de la tasa respiratoria, con la utilizacin de plntulas
completas del material vegetal, se colocaron en cmaras hermticas de 2 litros (Figura 8), en la
cmara se sita un sensor infrarrojo de CO2, el cual se conecta a un sistema de interfase y
recoleccin de datos (Labquest 1). Se tomaron intervalos de 4 segundos entre puntos durante
2 minutos, se registran los valores de CO2, la tasa respiratoria se calcula con los valores de la
pendiente. Los valores se expresaron en mg CO2 Kg-1 h-1.

Figura 7-8. Medicin de tasa respiratoria. Castaeda, 2016.

Sistema de variables
Variables independientes

Tiempo de dficit hdrico

Variables dependientes

Contenido de clorofilas
Conductancia estomtica
Fluorescencia de la clorofila
Tasa respiratoria

Anlisis estadstico
El anlisis de datos se realiz con el paquete estadstico SAS V 9.2, donde se realizaron las
pruebas de normalidad y homogeneidad de varianzas para la Anova. Las diferencias
estadsticas de las medias se compararon por el mtodo de Tukey (P<0,05).
RESULTADOS Y DISCUSIN
Contenidos clorofilas
Con respecto al contenido de clorofilas Figura 9 se observan que existen diferencias
significativas segn la prueba de Tukey (P<0,05) entre los dos tratamientos, encontrndose el
valor ms alto en las plantas que fueron sometidas a la condicin de estrs, representada con
una media de 40,56 (Unidades Spad) representada por el numeral (2) y 32,86 U.E para las
plantas que se encontraban en condiciones normales (1). El rbano presenta caractersticas de
ser una especie susceptible al estrs hdrico por defecto, dentro de los principales efectos
causados por este tipo de estrs se encuentra la limitacin de la actividad fotosinttica,
reduccin en la absorcin de nutrientes por la reducida movilidad de iones en el suelo y toma
de agua por las races debido a una reduccin en la corriente transpiratoria va xilema, por
ende una reduccin en la sntesis de la actividad bioqumica. Ahmed y Suliman (2010).
Los resultados alcanzados difieren con respecto a investigaciones realizados por Alemn et al,
(2010), quienes encontraron un decrecimiento significativo en el contenido de clorofila a y b
en genotipos de frijol (Phaseolus vulgars L.) que fueron sometidos a condiciones de estrs
hdrico severo. Resultados similares fueron obtenidos por Khalafallah et al, (2008) en
experimentos realizados con variedades distintas de Vicia faba, en condiciones de estrs
hdrico, en donde concuerdan que los genotipos clasificados como tolerantes al estrs hdrico
manifiestan comportamientos homogneos con respecto a los contenidos de clorofila a y b. La
reduccin de clorofilas inducida por la sequa ha sido reportada en numerosos estudios y
constituye un mecanismo de defensa de la planta para reducir la presin del exceso de energa
sobre el fotosistemas II (Pompelli et al., 2010), para el presente caso el resultado difiere

posiblemente porque el tiempo de exposicin al estrs fue relativamente corto (24 hr) y
posiblemente la planta contaba contaba con reservas suficientes para suplir el metabolismo.

Figura 9. Contenido total de Clorofilas (Spad) en plantas de rbano, tratamiento control (1) y
sometidas a condiciones de estrs hdrico (2). Promedios seguidos de letras diferentes presentan
diferencias estadsticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p0,05). Barras de error indican el error
estndar.

Conductancia estomtica
A partir de los resultados obtenidos, se aprecia que existen diferencias significativas segn la
prueba de Tukey (P<0,05) entre los dos tratamientos (Figura 10) con un valor promedio de
186,66 mmol m-2 s-1 para las plantas que se encuentran en condiciones normales y 24,52 mmol
m-2 s-1 en plantas que fueron sometidas a condiciones de estrs. Lo que resulta en un efecto
directo de la condicin, con respecto al intercambio de gases con la atmsfera y que repercute
directamente sobre el proceso fotosinttico, por efecto de las limitaciones estomticas y
posiblemente no estomticas que aumentan con la sequa (Prez et al., 2010).
El cierre estomtico bajo condiciones de estrs hdrico al que estn sometidas las plantas, es
atribuido a la biosntesis y acumulacin de cido abscsico en el tejido foliar, esta hormona
actua como un sealizador primario lo que conlleva a una cascada de seales que induce el
cierre estomtico. Esta hormona es sintetizada en el citosol de las clulas de la raz y
conducido via apoplasto y el xilema (Zyalalov, 2004), conllevando a la baja disponibilidad de
CO2 y que si se suma a condiciones de alta luminosidad genera sobreexitacin del centro de
reaccin del fotosistema II (PSII) (Ahmed et al., 2009), llevando con esto la produccin de
especies reactivas de oxigeno (ROS) y sus implicaciones que estas traen.
Estudios realizados por Ferreyra, (2002) en duraznero, concuerdan con los resultados
obtenidos y demuestran como la conductancia estomtica disminuye directamente con la
reduccin del aporte de agua, de igual manera coincide por lo reportado por Gil et al, (2006)
que indican como la conductancia estomtica disminuye directamente con el potencial hdrico
de la hoja resultado de la condicin de estrs hdrico. El potencial hdrico de la hoja es el

factor fisiolgico interno ms importante que est involucrado con el control de la apertura
estomtica, ste induce respuestas hidropasivas e hidroactivas que actan en forma directa
sobre las clulas guardianes de los estomas.

Figura 10. Efecto de la condicin de estrs sobre la conductancia estomtica. Tratamiento


control (1), tratamiento de estrs (2). Promedios seguidos de letras diferentes presentan
diferencias estadsticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p0,05). Barras de error indican el
error estndar.

Fluorescencia de la clorofila
Teniendo en cuenta las mediciones realizadas a travs del fluorometro, donde arrojo tres datos
claves (eficiencia fotosinttica, Quenching fotoqumico y Quenching no fotoqumico) para el
anlisis del comportamiento del proceso fotosinttico en relacin a la condiciones de estrs
generado por dficit hdrico, Maxwell y Johnson, (2000) mencionan como a travs de la
medicin de la fluorescencia de la clorofila se obtiene informacin de la eficiencia
fotoqumica y la disipacin trmica de la energa absorbida.
De acuerdo con los datos obtenidos con respecto a la eficiencia fotosinttica (Fv/Fm), se
infiere que no existen diferencias significativas encontrndose valores de 0,70 y 0,72 para el
tratamiento control y plantas sometidas a estrs hdrico respectivamente. Teniendo en cuenta
que las plantas de los dos tratamientos presentan valores inferiores a 0,8 siendo este el mximo
valor de la eficiencia fotosinttica (Magnusson, 1997), se deduce que por las condiciones de
baja luminosidad en la que se encuentra el laboratorio donde se desarroll la investigacin y la
falta de agua en las hojas generada del estrs hdrico en los dos tratamientos presentaron baja
eficiencia fotosinttica. Estudios realizados por (Prez et al., 2007) concuerdan y recalcan una
tendencia general de Fv/Fm al aumentar a medida que aument la concentracin de la
radiacin.

Del mismo modo Lichtenthaler y Burkart (1999), indican que la disminucin de la Eficiencia
fotosinttica (Fv/Fm) en funcin de la radiacin, se toma usualmente como indicador de
alteracin en el aparato fotosinttico, a nivel de su conversin cuntica y transporte de
electrones y es tomada constantemente como un indicador de alteracin en el procesos
fotosinttico, a nivel de su conversin cuntica y transporte de electrones. Esta disminucin en
los valores de Fv/Fm se debe probablemente a procesos de proteccin de disipacin calorfica
(Porter, 2000).
Con relacin al Quenching fotoqumico (QF), trmino que hace referencia a la energa
lumnica utilizada directamente en el proceso fotosinttico, con valores de 0,628 y 0,696 en
plantas control y sometidas a la condicin de estrs hdrico respectivamente. Los resultados
indican una clara disminucin en el proceso fotosinttico, debido a la baja disponibilidad de
agua en las hojas provocando el fenmeno de fotoinhibicin (Strasser et al., 2000) y en donde
los procesos fotosintticos se ven limitados por causas no estomticas debido al dficit hdrico
y a la falta de radiacin.
A medida de que se prolongue el tiempo de exposicin al estrs, el potencial hdrico decrece
se produce el cierre estomtico y directamente la tasa fotosinttica disminuye, la reduccin de
la eficiencia fotoqumica del PSII indica que hasta ese valor de estrs la reduccin de la
fotosntesis puede ser debida principalmente a una limitacin estomtica producida por la
disminucin en la difusin del CO2 (Vilagrosa, 2002). Estudios realizados por Navarro,
(2004), coinciden con los resultados encontrados en el presente estudio, donde plantas de pino
(Pinus halepensis mill) sometidas a condiciones de estrs hdrico, presentan condiciones
similares respecto disminucin de la eficacia fotosinttica, generada por la disminucin de
CO2 causada del cierre estomtico provocado por la condicin de estrs.
Finalmente como resultado del proceso de medicin as travs del fluorometro, el Quenching
no fotoqumico (QNF) que indica la disipacin de la energa de la excitacin como calor,
como mecanismo que utiliza la planta para evitar el dao en el PSII al exceso de luz. En donde
los dos tratamientos no presentan diferencias significativas oscilando sus valores entre 0,255 y
0,246 para el tratamiento control y el tratamiento de estrs respectivamente. Donde se acopla
claramente con lo encontrado respecto a la reduccin del Quenching fotoqumico, como
respuesta fisiolgica al estrs hdrico, la planta pierde turgor y ajuste osmtico, se reduce el
potencial hdrico en sus hojas, disminuye la conductancia estomatal a CO 2 generando la
reduccin de la concentracin interna de CO2, reduccin de la fotosntesis neta y la eficiencia
fotoqumica (Ghobadi et al., 2013). De igual forma, Jimnez et al., (2015), reportan estudios
realizados en plantas de girasol que fueron sometidas a estrs hdrico por sequa y a una
radiacin de 750 mol m-2 s-1 presentaron un aumento en la disipacin de energa en forma de
calor (NPQ), se disminuy la eficiencia mxima real del PSII.

Tasa respiratoria
Se presentaron diferencias significativas segn la prueba de Tukey (P<0,05) entre los
tratamientos con respecto a la tasa respiratoria. En la figura 12 se observa que los valores
oscilaron entre 46,12 y 56,85 mg.CO2 Kg-1 h-1, donde las plantas que fueron sometidas a la
condicin de estrs presentaron un mayor aumento (2), con respecto a las plantas que se
encontraban en condiciones normales (1). El proceso por el cual los compuestos altamente
energticos (ATP) y poder reductor (NADH) se forman a partir de carbohidratos y otros
sustratos, es conocido como respiracin (Galho et al., 2007). De este modo, la respiracin es
acoplada a la sntesis de tejidos nuevos (respiracin de crecimiento) y al mantenimiento
estructural (respiracin de mantenimiento) por medio de ATP y NADH, necesario para el
crecimiento vegetal (Balaguera, 2011).
Esto indica que las plantas que se encontraban en estrs aumentaron su proceso de respiracin
como consecuencia de la alteracin fisiolgica producida por la baja disponibilidad de CO 2,
causado por el cierre estomtico y derivado en la reduccin de la tasa fotosinttica.

Figura 12. Efecto de la condicin de estrs sobre la tasa respiratoria en plantas de rbano.
Promedios seguidos de letras diferentes presentan diferencias estadsticas de acuerdo con la
prueba de Tukey (P0,05). Barras de error indican el error estndar.
Bajo condiciones de estrs la planta cambia su crecimiento y desarrollo, de esta manera pasa a
un estado de tolerancia para afrontar dicho cambio, una de las primeras estrategias que utiliza
la planta es cerrar estomas, todo esto mediado por cascadas de seales donde los mensajeros
primarios y secundarios sealizan para este proceso resaltando el ABA y el Ca como
mensajero secundario (Moreno LP, 2009), al reducirse significativamente el proceso

fotosinttico causado por el desacople de la fase de fijacin de CO 2 y la fase foto, la planta


comienza a utilizar sus reservas energticas con el fin de sintetizar sustancias que se
incorporen al metabolismo principalmente compuestos del metabolismo secundario como
SOD, CAT, APX compuestos que contribuyen a eliminar las ROS como lo reporta Marn et
al ., (2012) donde se producen naturalmente en el estado de estrs, sin embargo a aparte de
este tipo de enzimas, se generan compuestos los cuales contribuyen a osmoregular la planta y
actan como osmolitos compatibles para el caso de la prolina y otros compuestos como
algunos carbohidratos y otros como el ion K+ que inducen una reduccin del potencial hdrico
del agua para aumentar la capacidad de absorcin de agua.
Investigaciones realizadas por Escalona et al., (2010) en cultivo de vid encontraron de igual
manera un reajuste metablico en la planta donde el flujo de carbono en la planta se desva
para generar osmoprotectantes , Hay que resaltar que todo este tipo de procesos requieren ATP
para entrar en funcionamiento y la respiracin provee una fuente constante de este tipo de
compuestos energticos, sin embargo factores relacionados con el crecimiento se ven
seriamente afectados el aumento del consumo de energia por la va respiratoria.

CONCLUSIONES
LITERATURA CITADA
http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/agrocol/article/view/11131/37762
http://www.sech.info/ACTAS/Acta%20n%C2%BA%2060.%20XIII%20Congreso
%20Nacional%20de%20Ciencias%20Hort%C3%ADcolas/Viticultura/Efecto%20del
%20estr%C3%A9s%20h%C3%ADdrico%20y%20del%20genotipo%20en%20el
%20balance%20de%20carbono%20en%20vid.pdf