PRODUCCION DE

ANTIBIOTICOS

ANTIBIOTICO
Definicin: molculas con actividad antimicrobiana, incluyen
gran cantidad de compuestos pertenecientes a diferentes
familias qumicas.
Generalmente se aplica a frmacos usados en el tratamiento
de infecciones por bacterias, de ah que se les conozca como
antibacterianos.
Se utilizan en medicina humana, animal y horticultura.
Presentan toxicidad selectiva, siendo muy superior para los
organismos invasores que para los animales que
los hospedan

TIPOS DE ANTIBIOTICOS
1.- Betalactmicos. Poseen en su estructura el anillo betalactmico, compuesto por 3
tomos de carbono y 1 de nitrgeno. (penicilinas, cefalosporinas, etc)
2.- Macrlidos. Consiste en un anillo lactnico con azcares aminados, como la eritromicina
producido por Streptomyces erythreus.
3.- Aminoglicsidos. Consisten en azcares aminados y un anillo aminociclitol, como la
estreptomicina.
4.- Tetraciclinas. Que tienen en su estructura el grupo naftaleno (4 anillos), y son producidas
por el gnero Streptomyces.
5.- Polipeptdicos. Poseen una cadena de aminocidos algunas veces circular, como
bacitracina, producida Bacillus subtilis.
6.- Polienos. Compuestos que contienen tres o ms dobles enlaces, como; nistatina
(antifungico) y anfotericina B.
7.- Otros antibiticos. El Cloranfenicol posee una estructura simple (nitrobenceno). Lo
produce Streptomyces venezuelae aunque debido a su simplicidad resulta ms econmica
su sntesis qumica.

ANTIBIOTICOS: MECANISMO DE ACCIN

Capacidad de inhibir una reaccin bioqumica especfica y esencial,
para la clula procariota.
Para que haga efecto es necesario que llegue al foco infeccioso,
penetre en la clula bacteriana y alcance intracelularmente la
concentracin necesaria.

Una vez dentro de la clula, el antibitico puede ser:

bacteriosttico (macrlidos, tetraciclinas, cloranfenicol) si inhibe la
multiplicacin de forma reversible,
bactericida (betalactmicos, aminoglicsidos, polipeptdicos,
polienos) si tiene un efecto letal.
Pueden ejercer su accin en una de las siguientes formas:
1.- Inhibicin de la sntesis de la pared celular
2.- Alteracin de la membrana citoplasmtica
3.- Inhibicin de la sntesis proteica
4.- Bloqueo de la sntesis de los cidos nucleicos

1.- Inhibicin de la sntesis de la pared celular.

Los antibiticos -lactmicos son inhibidores especficos de la sntesis de
peptidoglicano, componente de la pared celular bacteriana.
Son anlogos estructurales de la D-alanil-D-alanina y por ello se considera
que estos frmacos se unen a las transpeptidasas a las que inactivan
irreversiblemente.
Las clulas en crecimiento, estn continuamente sintetizando nuevo
peptidoglicano y transportndolo al sitio adecuado en la pared celular.
Algunos antibiticos (Bacitracina, Betalactmicos) reaccionan con alguno
de los enzimas que se requieren para completar este proceso originando
que la clula desarrolle puntos frgiles en su pared celular.
Estos antibiticos son bactericidas ya que la clula debilitada est sujeta a
lisis.
La mayor parte de estos antibiticos son activos frente a clulas en
crecimiento.

2.- Alteracin sobre la membrana citoplasmtica

Modifican la permeabilidad, permiten la salida de iones K y
macromolculas como los cidos nucleicos y causan un efecto ltico.
Sin embargo, como la membrana celular en clulas microbianas y
animales tienen similitudes, la mayor parte de estos antibiticos son
txicos para los humanos.
Polimixinas: Interaccionan con los fosfolpidos de las membranas
bacteriana.
Polienos: (Nistatina, anfotericina B) son activos frente a hongos ya
que forman complejos con los esteroles de las membranas de las
clulas fngicas.

3.- Inhibicin de la sntesis proteica

Estos compuestos (estreptomicina, gentamicina, tetraciclinas,
cloranfenicol, eritromicina) reaccionan con el complejo ribosomamRNA.
Aunque las clulas animales tambin tienen ribosomas, son
diferentes en tamao y estructura de los ribosomas de los
procariotas (80S y 70S) por lo que estos antimicrobianos tienen una
accin selectiva frente a bacterias.

PENICILINA
Las penicilinas son del grupo de los -lactamicos.
Existe una gran diversidad de penicilinas. Algunos hongos del
gnero Penicillium sintetizan de forma natural penicilinas, como el primer tipo
aislado, la penicilina G.
La estructura bsica de las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA),
que consiste en un anillo tiazol con un anillo -lactmico condensado.
El 6-APA lleva una parte variable acilada en la posicin 6.

PENICILINA

Debido a la aparicin de resistencias, se han desarrollado otras

familias siguiendo bsicamente dos estrategias:
la adicin de precursores para la cadena lateral en el medio de
cultivo del hongo productor, lo que se traduce en la produccin
de penicilinas biosintticas;
la modificacin qumica de la penicilina obtenida por
la fermentacin biotecnolgica, da lugar a las penicilinas
semisintticas.

PENICILINAS: Antibiticos -lactmicos

Penicilinas Naturales:

Actividad antibacteriana

Mayormente Gram (+)

Mayormente Gram (+)

Formas de administracin

IM, IV

oral

Estabilidad frente a -lactamasas

baja

baja

Estabilidad medio cido

mala

buena

Son lbiles en medio cido y

pueden ser inactivadas por hidrlisis
del anillo -lactmico con
penicilinasas.

PENICILINA

Debido a su baja toxicidad pueden

ser utilizadas grandes dosis de
penicilina, solamente un pequeo
porcentaje de pacientes desarrollan
alergia (0,5-2%).

Las penicilinas naturales son

efectivas contra numerosas
bacterias Gram +.
Algunas penicilinas son menos
efectivas frente a Bacterias Gram debido a que la membrana externa
bloquea su paso al interior, aunque
las penicilinas sintticas y
cefalosporinas tienen efecto
tambin frente a Bacterias G -.

Amoxicilina. Se trata de una amino

penicilina. Acta contra un amplio
espectro de bacterias, tanto Gram
positivos como Gram-negativos.
Por esto se emplea a menudo como
primer frmaco en infecciones de
diferente gravedad, tanto
en medicina humana como tambin
en veterinaria.

PENICILINA : PROCESO PRODUCTIVO

Si la fermentacin de penicilina se lleva a cabo sin adicin de
precursores de la cadena lateral se producen las penicilinas naturales.
De estas slo es til teraputicamente la bencilpenicilina (Penicilina
G); los otros compuestos deben ser eliminados durante la etapa de
recuperacin del producto.

La fermentacin puede ser controlada mejor aadiendo un

precursor de la cadena lateral, de forma que solamente se produzca
una penicilina deseada.
Utilizando el cido fenoxiactico, como precursor de la cadena
lateral, se consigui la obtencin de penicilina V
(fenoximetilpenicilina), que es particularmente estable en medio
cido y que puede, por tanto, suministrarse por va oral al contrario
de lo que ocurre con la penicilina G ya que debido a su sensibilidad a
los cidos no se puede administrar oralmente puesto que es
hidrolizada en el estmago.

Antibiticos
-lactmicos
PENICILINAS: Antibiticos
-lactmicos
Penicilinas semisintticas:

Sntesis de Penicilinas modificadas:

Penicilinas Semisintticas
Penicilinas resistentes a -lactamasas:

Los grupos metoxi evitan que la -lactamasa ataque el

carbonilo -lactmico

Meticilina:

Baja estabilidad en medio cido

Actividad principalmente Gram (+)

Penicilinas Semisintticas
Penicilinas de espectro extendido (aminopenicilinas)

Mayor espectro de actividad antibitica [Gram (+) y Gram (-)]

Buena estabilidad en medio cido

Sensibles a -lactamasas
Va de administracin: IM-IV/oral

Penicilinas Semisintticas
Penicilinas de espectro extendido (aminopenicilinas)

Mayor espectro de actividad antibitica [Gram (+) y Gram (-)]

Buena estabilidad en medio cido
Sensibles a -lactamasas
Va de administracin: IM-IV/oral

Penicilinas naturales, semisintticas y sintticas

Actualmente la produccin de penicilina utilizan cepas de P. chrysogenum es de 10-20 g/l.

El P. chrysogenum es un honggo filamentoso ampliamente usado en la produccin de
penicilinas y cefalosporinas a nivel industrial.
El gran avance en la produccin de penicilina se logro gracias a los mtodos de mutacin y
seleccin de cepas de P. chrysogenum productoras de penicilina, as como al desarrollo de
medios de cultivo especficos y al avance en las tecnologas de fermentacin.

BIOSINTESIS DE PENICILINA
La biosntesis se produce por medio de un
dipptido compuesto de cido L-aaminoadpico (L-a-AAA) y L-cistena.
Luego se une la L-valina mediante una
reaccin de epimerizacin, dando lugar a la
formacin del tripptido d-(L-aaminoadipil)-L-cisteinil-D-valina.
El primer producto de la ciclacin del
tripptido que puede ser aislado es la
isopenicilina N, pero no se conocen las
reacciones bioqumicas que conducen a
este intermediario.
La bencilpenicilina se produce en el
intercambio de L-a-AAA (L-a-aminoadpico)
con cido fenilactico activado.
El 6-APA, que no es un producto
intermediario de biosntesis, se excreta en
ausencia de un precursor de la cadena
lateral.

MECANISMOS REGULADORES EN LA BIOSNTESIS DE LA PENICILINA

El aminocido lisina es sintetizado a partir de la va que origina el

cido L-a-aminoadpico de forma que la penicilina y la lisina
comparten una ruta biosinttica ramificada comn.
La lisina inhibe la sntesis de penicilina debido a que inhibe por
retroalimentacin a la homocitrato sintasa, un enzima implicado en
la sntesis de L-a-AAA. Si el L-a-AAA es deficiente, no puede
sintetizarse penicilina.

La retro regulacin por lisina no parece ser una etapa limitante en la

biosntesis de penicilina.
La biosntesis de penicilina se ve afectada por la concentracin de
fosfato y tambin muestra una clara represin catablica,
particularmente por glucosa.

Ningn microorganismo es capaz de llevar a

cabo todas las reacciones del esquema, pero si
pueden realizar las reacciones hasta la
produccin de penicilina N.
La va metablica se divide en dos ramas,
la rama izquierda es comn en P chrysogenum
y otros hongos filamentosos que producen
penicilinas hidrofobicas, como la penicilina
benzoica o penicilina G.
la rama derecha es propia de microorganismos
productores de antibioticos B-lactamicos
hidrofilicos, como la pencilina N y las
cefalosporinas (Ontiveros, 1996)
El uso de glucosa y otros azucares, como
sustrato disminuye la biosntesis de penicilina,
por que reprimen la formacin de las enzimas
ACV sintetasa y la isopeniclina N sintetaza, no
sucede lo mismo con la lactosa. Por esta razn
se usa industrialmente como sustrato la lactosa
o mezclas glucosa-lactosa con concentraciones
de glucosa que no repriman la produccin de
penicilina

REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES.
Fuente de carbono.

La fuente de carbono empleada industrialmente es la lactosa, y en la etapa final

se adiciona con glucosa o sacarosa, para inducir la B-galactosidasa

Fuente de nitrgeno.

Hasta la dcada del 70 se us "corn-steep liquor, hoy se prefiere el uso de; la

harina de semilla de algodn, extractos y peptonas, y la harina de soja.
El suministro de amonio y azufre se hace como (NH4)2.SO4, a niveles de 20 mM.
El requerimiento de grandes cantidades de NH4+ puede deberse a su necesidad en
la sntesis de glutamato, requerido para producir valina y cistena.
El fsforo se adiciona como sales de fosfato a niveles entre 250 y 500 mg/L.

Precursores.

Par obtener un determinado tipo de penicilina, se debe alimentar, una precursor.

El requerimiento de fenilacetato sdico, es 0.47 g/L para penicilina G, y de
fenoxiacetato de sodio, 0.50 g/L para penicilina V.

CARACTERSTICAS DEL PROCESO

La produccin de penicilina G o V, se hace por cultivo
aerobio en medios lquidos
Reactores de 40,000 y 500,000 L, empleando una
relacin de 0,5 - 1,0 volmenes de aire/volumen de
lquido-min .
En el proceso, la mayora de la masa celular es
obtenida durante las primeras 40 horas, luego el
crecimiento contina con valores mnimos de P, hasta
unas 200 horas.
Los agitadores utilizados son en general de tipo
turbina, y durante el proceso se controla la temperatura,
caudal de aire, velocidad de agitacin, pH y velocidad
de agregado de nutrientes.
Es posible influir sobre la eficiencia del proceso, por
alteracin del genotipo.
Se han seleccionado cepas de P. chrysogenum, que
dan menor viscosidad en los caldos, incrementando la
transferencia de oxgeno.
El empleo de tcnicas de mejoramiento gentico
posibilit el aumento de rendimientos y la obtencin de
nuevas cepas que no producen pigmentos, lo cual
facilita la purificacin.

PURIFICACION DE LA PENICILINA
Extraccin.
La extraccin con solventes es la base para la separacin y purificacin
de la penicilina.
El primer paso es separar el micelio del medio de cultivo, con un filtro
rotatorio a vaco.

El filtrado rico en penicilina se enva a un intercambiador de calor a 0 - 4

C, para detener la degradacin enzimtica y qumica durante la posterior
extraccin.
La extraccin de penicilina se puede realizar en una o ms etapas
sucesivas, con una acidificacin del caldo filtrado con H2SO4 o H3PO4 al
10% P/V y con el agregado de un agente surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en
el solvente), realizndose luego la concentracin en extractores
centrfugos.
El solvente conteniendo penicilina se puede tratar con carbn para
separar pigmentos y otras impurezas.

PURIFICACION DE LA PENICILINA
Cristalizacin y secado.
En caso de hacerse la cristalizacin a partir de un solvente
se requiere exceso de Na+ o K+, y los cristales formados se
recuperan en un filtro rotatorio a vaco.
Estos cristales son lavados y pre secados con un solvente
voltil que tambin separa impurezas coloreadas.
El secado definitivo se puede realizar con aire caliente, vaco
o calor radiante.
La penicilina cristalina G o V as obtenida, puede ser
convertida a 6-APA (cido 6-aminopenicilnico) para obtener
nuevas penicilinas semisintticas

PRODUCCIN DE PENICILINA