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Le mandat de rfrence pour les pesticides dans les DAOA sapplique aux familles de
pesticides et aux matrices alimentaires suivantes :
Familles de pesticides
et contaminants
Organochlors
Organophosphors
Pyrthrinodes
Carbamates
Nonicotinodes
Acaricides (benzilate, pyrthrinode,
organophosphors)
Matrices
Animale et dorigine animale, sauf produits de la
ruche
Animale et dorigine animale, sauf produits de la
ruche
Animale et dorigine animale, sauf produits de la
ruche
Animale et dorigine animale, sauf produits de la
ruche
Pollen
Miel
Ces analyses sont ralises dans le cadre des contrles prvus par lannexe I de la
Directive 96/23/CE du Conseil, du 29 avril 1996, relative aux mesures de contrle
mettre en uvre { l'gard de certaines substances et de leurs rsidus dans les animaux
vivants et leurs produits (groupe B 2c et B 3a et b) et du Rglement 396/2005 du 23
fvrier 2005 concernant les limites maximales applicables aux rsidus de pesticides
prsents dans ou sur les denres alimentaires et les aliments pour animaux d'origine
vgtale et animale.
Ressources humaines
Anses - Maisons-Alfort
30%
(Frdric HOMMET, responsable du
LNR)
2 IR2
50%
(Franois BORDET, responsableadjoint du LNR)
1 IE 2
30%
1 AI
60%
1 TR
1 CDI cat 2
80%
80%
1 CDD cat 3
1 AJT
30%
(Anne-Claire MARTEL,
responsable du LNR
associ)
10%
(Sarah ZEGGANE,
responsable-adjoint du LNR
associ)
40%
40%
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En matire de locaux, les activits de rfrence sont conduites sur les sites du
Laboratoire de scurit des aliments de Maisons Alfort et du Laboratoire de Sophia
Antipolis :
Le LNR (unit POP) occupe une partie dun demi-tage de laboratoire du
btiment Pagot sur le site de Maisons Alfort. Le laboratoire a t entirement
ramnag en 2009 afin de rpondre aux exigences dhygine et scurit du
travail en laboratoire et dorganisation lies { la ralisation danalyse de
pesticides sous couvert de laccrditation COFRAC. Le laboratoire est organis en
plusieurs zones assurant notamment labsence de contamination croise des
chantillons et une conduite optimise des analyses. On retrouve une salle de
rception et de stockage des chantillons et des extraits, une salle de prparation
(extraction, purification) quipe de 7 sorbonnes, une salle de chromatographie
en phase gazeuse, trois salles de chromatographie en phase liquide, une salle
ddie exclusivement au retraitement des donnes, une salle de prparation
dtalons spare physiquement du reste du laboratoire. Deux bureaux sont
situs au rez-de-chausse de ce btiment.
Le laboratoire de Sophia Antipolis est un btiment de deux tages. Les
laboratoires sont situs au rez-de-chausse. Pour les activits danalyses des
contaminants chimiques au sein de l'Unit de Pathologie de l'Abeille (PA), le
laboratoire dispose de 6 sorbonnes et est divis en diffrentes zones
indpendantes : une pour la prparation des talons et une autre pour la
prparation des chantillons. De mme, pour les dosages des rsidus, une zone
est ddie aux analyses ralises en chromatographie en phase gazeuse et une
autre aux analyses employant la chromatographie en phase liquide.
Le laboratoire de Sophia Antipolis dispose galement :
- d'une salle spcifique, ddie { la rception, lenregistrement, le stockage et
la gestion des chantillons reus pour analyse,
- de 3 ruchers permettant de produire des matriaux de rfrence et de
conduire des exprimentations sur colonies. Ces ruchers sont rpartis sur
des sites distincts et ils rpondent diffrents critres de qualit, vitant
notamment la contamination des lots par la drive naturelle des abeilles,
- d'un local apicole permettant dentreposer le matriel destin aux activits
lies aux ruchers et deffectuer les oprations dentretien.
Les quipements remarquables utiliss pour les activits de rfrence sont lists ciaprs:
Lunit POP utilise les quipements suivants :
- 1 GC-ECD
- 1 GC-NPD
- 2 GC-MS/MS
- 5 LC-MS/MS basse rsolution dont 1 partags avec lunit de
caractrisation des toxines, certains de ces quipements sont plus ddis
lanalyse des petites molcules comme les pesticides (API 5500 et APPI
5500QTRAP).
- 1 LC(2D)-MS/MS Q-TOF haute rsolution (API 5600)
Rapport annuel dactivit des LNR
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Les mthodes pour les analyses officielles sont des mthodes internes
valides :
Pour les rsidus de pesticides organochlors, les pyrthrinodes (Anses Maisons
Alfort POP 01 et POP 10) et les pesticides organophosphors (Anses Maisons
Alfort POP 02 et POP 11), les mthodes reposent sur une extraction de la matire
grasse par des techniques variables selon les matrices (sparation de phase,
colonne dextraction, ). La graisse est extraite par cryognie dans un mlange
actonitrile/dichloromthane et par centrifugation. Lextrait est ensuite purifi
sur une cartouche en phase solide (SPE). Les pesticides organochlors et les
pyrthrinodes moins polaires que les pesticides organophosphors sont purifis
sur colonne SPE C18 puis SPE Florisil, tandis que les pesticides
organophosphors le sont uniquement sur SPE C18. Les extraits sont analyss
par chromatographie. La sparation des pesticides est ralise grce la
chromatographie en phase gazeuse pour les molcules les moins polaires et les
plus volatiles, tandis que les pesticides polaires sont prfrentiellement spars
par chromatographie en phase liquide. Les pesticides organochlors peuvent tre
analyss par un dtecteur spcifique (GC-ECD) ou par spectromtrie de masse en
tandem (GC-MS/MS). Les pesticides organophosphors peuvent tre analyss par
un dtecteur spcifique (GC-NPD) ou par spectromtrie de masse en tandem (GCMS/MS et/ou LC-MS/MS).
La mthode danalyse des acaricides dans le miel est une mthode interne (ANAI1.MOA.08) applique dans le cadre du PS/PC miel (Note de Service de la DGAl du
13 dcembre 2010 - DGAL/SDSPA/SDQA/N2010-8342) et sur les chantillons
envoys par les postes dinspection frontaliers (PIF). Elle consiste en une
homognisation avec un mlange hexane/propanol-2 puis une sparation
liquide/liquide avec de leau distille basifie. Aprs vaporation { sec {
lvaporateur rotatif, lextrait est analys selon les molcules { quantifier, en GCECD et en GC-NPD sur colonne type DB-5 et DB-XLB respectivement. Dans le cas
dchantillons non conformes (> LMR), lanalyse en GC-MS est mise en uvre.
Pour lanalyse des rsidus de carbamates dans les produits carns, la mthode
(Anses Maisons Alfort POP 03) comprend lextraction de la matire organique {
lactate dthyle, puis lextraction des pesticides { laide de techniques de
purification sur diffrents adsorbants. La technique de purification applicable
pour les diffrentes matrices carnes est une chromatographie dadsorption
utilisant une phase apolaire Oasis en vrac et une phase polaire Florisil .
Lanalyse est ralise en chromatographie en phase liquide (LC-MS/MS).
Lanalyse des nonicotinodes dans le pollen (ANA-I1.MOA.06) consiste en une
homognisation dans lactonitrile et une sparation liquide/liquide avec
lhexane. Aprs vaporation sous flux gazeux, lextrait est purifi sur cartouche
SPE Bond Elut Plexa pour le pain dabeilles et florisil pour le pollen et les abeilles.
Aprs vaporation sous flux gazeux, lextrait est analys en LC-MS/MS sur
colonne type PFP.
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Lextrait repris dans de lhexane est purifi sur cartouche SPE. Une partie de
lluat repris dans le mthanol est analyse en chromatographie liquide (LCMS/MS), lautre partie est analyse en chromatographie gazeuse (GC-NPD).
1.3 Validation de mthodes danalyse
INDICATEUR COP n13 :
Pour lanne N,
Le LNR a entrepris le transfert des deux principales mthodes de rfrence vers
des mthodes utilisant la spectromtrie de masse comme dtecteur (GC-MS/MS
et LC-MS/MS). Ce travail a pour objectif daugmenter la spcificit des mthodes
afin de diminuer le nombre de faux positifs et de faux ngatifs lors des analyses
de contrles officiels et dlargir le domaine dapplication des mthodes. Les
mthodes dveloppes sont les mthodes Anses Maisons Alfort POP 10 et POP 11
pour le dosage des pesticides organochlors, des pyrthrinodes et des pesticides
organophosphors. La mthode POP 10 a t accrdite par le COFRAC en porte
flexible.
Afin de rpondre aux exigences du LRUE et de la DG SANCO sur les contrles
communautaires, le LNR a dbut lextension du nombre de molcules
analysables par les mthodes officielles. En 2011, les mthodes concernes sont
les mthodes Anses Maisons Alfort POP 01 et POP 02 pour plus de 15 molcules
(voir tableau 1 ci-dessous). Ce travail est ralis selon les exigences du document
Sanco 10684/2009.
Tableau 1 : Molcules ajoutes dans les mthodes internes Anses POP 01 et POP
02
POP 01
4-4 metoxychlor
Heptachlore epoxy trans
Quintozene
Tecnazene
Pendimethaline
POP 02
Azinphos thyl
Metacrifos
Profenophos
Pyrazophos
Fenthion
Fenthion sulfone
Fenthion sulfoxyde
Fenthion oxon
Fenthion oxon sulfone
Fenthion oxon sulfoxyde
Parathion thyl
Parathion mthyl
Paraoxon mthyl
Dichlorvos
Disulfoton
Disulfoton sulfone
Disulfoton sulfoxyde
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2
2
1
Analyte
Bixafen
Carbendazim (Carbendazim)
Prochloraz
Chlorpropham
Epoxiconazole
Prothioconazole-desthio
Famoxadone
tau-Fluvalinate
Fenpropimorph
Tetraconazole
Thiacloprid
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Matrices
Animale et dorigine animale, sauf produits de la
ruche
Vgtale et dorigine vgtale, sauf produits de la
ruche
Chlordcone
Chlordcone
2
10
25
poulet
graisse bovine
74
poisson
lait
miel
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Activit danimation
7.1
Organisation dEILA
Le LNR organise des EILA rgulirement. Lorsquun laboratoire agr obtient des
rsultats non satisfaisants { un EILA, le LNR participe { lidentification avec le
laboratoire des causes de ces rsultats non satisfaisants et apporte son expertise sur
les mesures correctives mettre en place. Le laboratoire organise des EILA dans le
cadre de la norme NF EN ISO/CEI 17043, le systme a dj{ fait lobjet dun audit
interne (INDICATEUR COP n15).
INDICATEUR n14 :
EILA organiss dans lanne N :
o Synthse des rsultats des laboratoires franais ayant particips { lEUPT AO
06 concernant les rsidus de pesticides organochlors, organophosphors et
pyrthrinodes dans la chair de poulet par les mthodes CEN POP 01 et 02.
Cet essai a ncessit de la part du LNR lorganisation dun EILA spcifique sur
la dtermination de la matire grasse (voir ci-dessous). Les rponses des
laboratoires { cet essai et aux fiches dcart permettent de dclarer les 14
laboratoires du rseau aptes { raliser lanalyse de ces pesticides.
o Taux de Matire Grasse dans le poulet selon la norme NF EN 1528. Cet EILA a
t ralis spcifiquement sur une mthode de dtermination de la matire
grasse prsente dans les matrices animales faisant lobjet de recherche de
rsidus de pesticides. En effet, dans le contexte rglementaire du Rglement
396/2005, la teneur en matire grasse peut tre dterminante pour
lexpression de la teneur en pesticides dans lchantillon. Les 12 laboratoires
participants ont rendus des rsultats acceptables (2 laboratoires ont
abandonn leur agrment).
EILA pour lanne N+1 :
o Le LNR a programm dorganiser 2 EILA sur les mthodes Anses Maisons
Alfort POP 10 et POP 11 afin dvaluer laptitude du rseau de laboratoires
officiels pratiquer ces mthodes sur les matrices du plan de contrle
pluriannuel communautaire.
o Le LNR ralisera le traitement des rsultats des laboratoires Franais dans le
cadre de lEUPT AO 07.
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de transmettre une information en relation avec les mthodes comme des prcisions sur
la prparation des chantillons (ex : produit de la mer), ou sur la dfinition des rsidus.
Aprs chaque EILA ou EUPT, le LNR labore un rapport de synthse prsentant
lensemble des rsultats des participants ainsi que le traitement statistique ralis et
expliquant les ventuels rsultats non satisfaisants observs. Ce rapport est transmis
tous les participants ainsi qu{ la DGAl (2 rapports en 2011).
7.3 Enseignement, organisation dateliers, accueil de stagiaires (nombre de
stagiaires
Enfin, tous les deux ans, une runion est organise par le LNR avec les 14 laboratoires
du rseau afin de faire le bilan sur les diffrents changes entre le LNR et les
laboratoires, prsenter les volutions rglementaires, faire le bilan des EILA et des EUPT
ayant eu lieu et venir, prsenter le programme de dveloppement analytique du LNR.
Au cours de ces journes, auxquelles participe la DGAl, des intervenants de la DGCCRF
ou des diffrentes entits de lANSES (ex : DER et DPR) sont invits selon les points
abords au cours de ces journes.
Pour 2012, Les 4 LNR Franais ont prvus dorganiser un atelier commun afin de
partager les expriences de manire transversale sur les mandats de pesticides. Cette
runion est programme en juin 2012.
Les rencontres annuelles de lassociation des Experts Chimistes des Laboratoires
Dpartementaux et Publics d'Analyses (AECLDPA) constituent galement un lieu
dchange privilgi, auquel le LNR participe activement (dernire runion le
30/03/2011 Quimper).
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I - Orientations futures
Le LNR a tablit le programme de travail pour 2012. Les actions sont reportes ci-aprs :
Organiser un atelier LNR DAOA Mthodes Anses Maisons Alfort POP10
et POP11 : 1 mars 2012
Organiser un atelier des 4 LNR Franais : 5 et 6 juin 2012
Organiser 2 EILA :
Mthode Anses Maisons Alfort POP 10 et POP 11 sur Graisse
animale (en cours)
Mthode Anses Maisons Alfort POP 10 et POP11 sur lait et viande
de porc (2me semestre)
Organiser 1 formation (2me semestre)
Mettre en place un groupe de travail pour le traitement des difficults
techniques
Mise en place de nouvelles mthodes
molcules volontaires EUPT OA07
Extension des mthodes en fonction du rglement europen de
contrle pluriannuel.
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