MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA

Nutrimentos
1- Fuente de energa luz qumica.
2- Macronutrientes
H
K
O
Mg
C
Na
N
95%
Ca
S
Fe
P
3- Micronutrientes (elementos
traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
Vitaminas
Purinas y pirimidinas
Aminocidos.
Condiciones para el crecimiento
microbiano
Medios de cultivo
Nutrimentos
agua
fuente de energa
fuentes de C, N, otros elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento
temperatura
pH
luz
aireacin
actividad de agua
potencial redox
Factores de crecimiento
Microorganismos auto o
heterotrfos pueden requerir
pequeas cantidades de ciertos
compuestos orgnicos que no
pueden sintetizar y deben
incorporarse en los medios
* bases pricas y pirimdicas =
ADN, ARN
* aminocidos esenciales =
sntesis proteica
* vitaminas
= coenzimas

Clasificacin de los medios de

cultivo
Segn su naturaleza fsica
* lquidos
*
slidos - solidificante: agar-agar,
silico-gel

* semi-slidos
Segn su composicin
* definidos o sintticos: composicin
qumica conocida
no
definidos
o
complejos:
composicin qumica no
definida, enriquecidos con
peptonas, extracto de
carne, de levadura, de
suelo, sangre
Segn su uso en el laboratorio
* selectivos o inhibitorios: medios
que
contienen,
adems
de
los
nutrientes, ciertas sustancias que
inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos
permitiendo
el
crecimiento
de
otros
o
cuya
composicin permite el desarrollo de un
grupo determinado
* diferenciales: medios que contienen
indicadores
para
diferenciar
los
distintos tipos de microorganismos que
puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa,
indicador:rojo neutro

agar

sangre.

del agar. Tambin se llama siembra por

picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en
superficie (por estras o baado) o
incorporada (mezclando el inculo con
el agar semifundido)

Siembra
Aislar: Es separar un tipo de
microorganismo a partir de una
poblacin mixta. En habitats naturales,
raramente
encontramos
a
los
microorganismos en cultivo puro
Aislamiento
directo:se
logra
directamente a partir de una muestra
cuando el o los microorganismos estn
en una proporcin adecuada., se realiza
por estras (agotamiento) con o sin
dilucin previa de la muestra (suelo,
alimentos), en medio slido
Aislamiento
por
enriquecimiento:Cuando
el
microorganismo que se desea aislar e
identificar se encuentra en baja
proporcin en la muestra, se incluye
una primera etapa que consiste en
sembrar la muestra en medio lquido.
Luego de varios pasajes se aisla por el
mtodo de estras.
Cultivo en medio lquido

Habitualmente se realiza en
tubos
o
en
matraces.
El
crecimiento se puede manifestar
por
enturbiamiento,
por
formacin de velo o pelcula, o
por sedimento.
Cultivo en medio slido

Puede ser en tubos o placas

a) Tubos con agar inclinado. Para
sembrarlos, se mueve el asa o la punta
suavemente sobre la superficie del agar
con un movimiento en zigzag desde el
fondo hasta la parte superior, cuidando
de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran
introduciendo una punta en el centro

de

estra

Con un asa de siembra se toma

una muestra de la poblacin
mixta y a continuacin se hacen
estras sobre la superficie de un
medio slido preparado en una
placa Petr Conforme se van
haciendo estras en zigzag con
el asa, cada vez se van
depositando en la superficie del
medio menos microorganismos.
Vertido en placa

las
muestras
diluidas
se
mezclan con agar fundido y se

vierten
en
placa.
Algunas
colonias quedarn embebidas
en el agar y otras creceran en la
superficie.
Las
colonias
superficiales se extendern y
sern ms grandes.
Siembra en superficie
Aqu, las muestras diluidas se
siembran directamente en la
superficie de la placa de agar,
extendindolas con avuda de un
asa de Digralsky de cristal
estril.
La
suspensin
se
absorbe en el agar, dejando las
clulas microbianas sobre la
superficie.
Divisin celular binaria.

4- Fase de muerte
Crecimiento en un volumen fijo
de medio o cultivo cerrado
(batch)
Luego de la adicin de bacterias al
medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento
Fase lag - las clulas se adaptan al
nuevo ambiente, aun no se dividen
Fase exponencial (log) - velocidad
mxima
de
crecimiento
bajo
condiciones particulares, tiempo de
generacin mnimo
Fase
estacionaria
crecimiento
neto,
estadsticamente = 0

vc=0

sin

cuando:
vc=vm (vel.
crecimiento es igual a la de muerte)
Nutrimentos
limitantes,
pero
suficientes para mantener actividad
acumulacin
de
desechos, inhibicin
del crecimiento
Fase
de
muerte
velocidad
de
muerte
celular > velocidad de
divisin celular

FACTORES DEL AMBIENTE:

Fsicos: temperatura, gases,
pH, presin osmtica
Qumicos:
nutrimentos,
sustancias antimicrobianas
Biolgicos:
Otros
microorganismos, micro y

1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria

mesofauna,
vegetacin,
afectan las
actividades microbianas
Los distintos factores actan
simultneamente
y
resulta
difcil el anlisis integrado de
los efectos.

Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15oC

organismos
marinos,
algas:
Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene
alto % de cidos
grasos insaturados
Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos
- rango: 0-35C, ptimo 20-30oC
Pseudomonas - crecen en el refrigerador
Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
la mayora de los microorganismos (del
suelo, aguas, patgenos)
Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 5565oC
membrana contiene alto % de cidos grasos
saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de
compostaje
Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo >
90oC
Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
Clasificacin de los microorganismos segn
el efecto del oxgeno:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21% o
ms)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaeroflicos: lo requieren pero a
niveles menores que el
atmosfrico (5-10%)

Ej. Campilobacter jejuni

Anaerobios
facultativos: no requieren oxgeno, pero
el desarrollo es mejor con
oxgeno.
Ej. Levaduras, Escherichia
coli ,
Staphylococcus aureus
aerotolerantes: no son sensibles al
oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus
spp.
obligados: no toleran el oxgeno, muere
en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solucin, medida por el log 1/(H+)
Clasificacin de los microorganismos
segn su pH ptimo
Neutrfilo: pH ptimo 7 - Ej.: bacterias
patgenas
humanas.
Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de
las
archeobacterias
y
hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos