UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE

MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA

Anlisis e
identificacin de lpidos
de la yema de huevo
/10/2016

Laboratorio de Bioqumica Celular y de Tejidos

EQUIPO 9
Bravo Ruiz Sharon Vernica
Galicia Galindo Miriam
Gonzlez Hernndez Adriana
Santiago Martnez Luis Fernando
Grupo 1452
Ciclo: 2017-1

Objetivos
o
o

Identificar los lpidos de la yema de huevo, por medio de la tcnica de

cromatografa en capa fina.
Cuantificar fosfatos de lpidos fosforilados.

Resultados
Curva estndar
*Tabla de datos para diseo de curva estndar
Tubo
Patrn
(mL)
Agua
destilada
(mL)
Reactivo
1 (mL)
Reactivo
2 (mL)

1
0.2

2
0.6

3
1

4
2

5
3

10

10

10

10

10

0.4

0.4

0.4

0.4

0.4

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

Clculos de concentraciones
0.4394 g de fosfato / 1000 mL = 0.0004394 g/mL
Dilucin 1:10 = 0.0004394/10mL
Solucin patrn 0.00004394 g/mL de fosfato magnsico

Cantidad de fsforo en muestra (fosfato magnsico KH2PO4):

K = 39.09 H= 2 P= 30.97

O= 64

P.M. = 136.06
136.06 g/mol KH2PO4 --- 30.92 g/mol P
0.00004394 g/mL KH2PO4 --- x

Px = 0.00001 g/mL

0.00001 g/mL (1000 mg/1) (1000g) = 10g/mL

Curva estndar
Muestra
Blanco
1
2
3
4
5

[ ] g= (mL patrn x
10g/mL)
0
2
6
10
20
30

Concentracin
del patrn

Absorba
ncia
0
0.054
0.065
0.105
0.16
0.255

10 g/mL

Lpidos en el huevo

0.26
f(x) = 0.01x + 0.02
R = 0.97

0.16

0.11

0.07
0.05

Se pesaron 0.01010 g de lpidos fosforilados en la balanza analtica. Al

colocar la muestra de lpidos fosforilados en el espectrofotmetro se
obtuvo una absorbancia de 0.049. Factor de dilucin: 50
Interpolacin de datos
Mx + b = 0.0077 x + 0.0192
X = y- b / m

[ ] = 0.049 0.0192 / 0.0077

[ ] = 3.8688 g (50 ) = 193.44g

193.44 g

1g
=0.01915 g ( 100 )=1.91
( 10100
g )

Anlisis de Resultados

Curva estndar; contenido de fosforo en fosfolpidos.

Los fosfolpidos se obtuvieron al agregar acetona a la solucin a partir de ese

momento se pudo comenzar el mtodo para cuantificar. La absorbancia
obtenida nos indica que tenemos 193.44 g en la muestra, que corresponde al
1.91 % de contenido de fosfolpidos en yema de huevo.
No se observ a los lpidos no fosforilados por una perdida durante la
eliminacin del disolvente, pero debi dar cero para la concentracin por
absorbancia.

Identificacin de lpidos en yema de huevo por CCF.

Imagen1.- Separacin de Fosfolpidos empleando Cromatografa en Capa Fina.

 Yodo:
Al revelar la placa cromatogrfica con
Yodo se puede identificar fosfolpidos con
insaturaciones (dobles enlaces).
Podemos deducir la presencia de lpidos
neutros, que es la marca superior
formando un arco, por debajo de esta
fofatidilenolamina
como
marcas
alargadas, el recorrido de muestra en el
centro que se ve ms tenue son lpidos
totales, deberan observarse 6 marcas
que
incluyan
fofatidilcolina,
fosfatidilserina,
esfingomielina
y
lisolecitina.

Imagen 2.- Placa Revelada con cristales

de Yodo. Lpidos Fosforilados a la izquierda/
Lpidos no fosforilados a la derecha.

 Ninhidrina.Imagen 3.- Placa Revelada con

ninhidrina. Lpidos Fosforilados a la
izquierda/ Lpidos no fosforilados a
la derecha.

1
1
1
La inhidrina revela lpidos que contengan el
grupo
amino,
ya
sea
1
o
2
:
Fosfatidiletanolamina,
3
Fosfaditilcolina,Fosfaditilcerina,
Esfingomielina y Lisolecitina. Las muestras
colocadas
revelan
la
presencia
de
Fosfatidiletanolamina
en
las
marcas
superiores ms marcadas (1). En la parte
2
inferior podra tratarse de la presencia de Esfingomielina pero la marca resulta
ser muy tenue (2) y no coincide con el patrn (Imagen1). Una marca superior
(3) cerca de la primera se muestra de un color ms tenue pero sin desaparecer
pudiendo indicar la existencia de fosfatidilcolina aunque se encuentra muy
cerca de la PE. La Lisolecitina y la fosfatidilserina no se identifican en la placa.
Bismuto.-

El reactivo de bismuto revela los lpidos

que
contienen
colina,
tales
como:
Fosfatidilcolina,
Esfingomielina
y
lisolecitina.
Esta placa presentaba una muy
3 mala
aplicacin de silice gel por lo que pudo
afectar su elucion ya que no pueden
observarse algunas muestras colocadas.
Dentro de lo que queda apreciable en
2
estaplaca
se
encuentran:
1)
Marca alargada, pronunciada, nivel
inferior. Segn el patrn (imagen 1) puede
marcar la existencia de esfingomielina.

1 con Bismuto.
Imagen 4.- Placa Revelada
Lpidos Fosforilados a la izquierda/ Lpidos
no fosforilados a la derecha.
2)Aunque se encuentra casi en la orilla se alcanza a percibir una marca definida y de
tono un poco intenso y aun nivel que, comparando con el estandar, puede indentificar
la existencia de Fosfatidilcolina.
3) Esta marca aunque definida y de color intenso se encuentra muy alta por lo que
podria identificar Fosfatidiletanolamina que no concuerda con el revelador de la placa.
La distancia recorrida se pudeo ver afectada por errores en la tcnica del revelado.
La Lisolecitina no se alcanza a observar en esta placa cromatografca.

 Molibdato de Sodio.
El Bismuto funciona como revelador
para lpidos en general por lo que en
esta placa deberian presentarse
todas las marcas que nos muestra el
ejemplo en la4imagen 1.

Sin embargo el revelado y la elusion

se vieron afectados1 por diversos
factores lo que no permite
que se
2
aprecie correctamente, en algunas
hizo falta ponermayor cantidad de
muestra por lo que no se observa
nada y se notan los espacios vacios.
1)La marca se observa gruesa y muy
marcada a pesar de no encontrarse al
Imagen 5.- Placa Revelada con Molibdato de
Sodio. Lpidos Fosforilados a la izquierda/
Lpidos no fosforilados a la derecha.
nivel que puede comprararse en el ejemplo (imagen 1) podria esta marcar la presencia
de Fosfatinositol. No cumple del todo paraser esta ya que es una marca muy gruesa.
2)Se observa una marca de un azul muy tenue pero apreciable, mspequea que
laanterior en un nivel iferior. Pudiendo marcar esta la existencia de Fosfatidinositol por
el nivel con respecto a la marca superior. Aunque es un poco gruesa para cumplir con
el ejemplo de la imagen 1.
3) Tomando en cuenta el grosor y la altura a la que se encuentra marca esta, la
existencia de fosfatidiletanolamina. A pesar de encontrarse a n nivel aceptable para
tratarse de esta es un poco ms delgada que el ejemlo de la imagen 1.
4) Se tratade los fosfolipidos totales por lo que se encuentra un poco ms arriba que
los dems.

Conclusiones

Curva estndar; contenido de fosforo en fosfolpidos.

Al realizar la cuantificacin de fosfolpidos en una muestra de 0.0101g,

obtenida de una yema de huevo, se obtuvo un resultado del 1.91% de
contenido. Este contenido representa la lecitina en general; al ser este
fosfolpido el que se encuentra en mayor proporcin en los lpidos totales se
emplea
como
referencia.1
El resultado es muy cercano al valor terico de contenido en un huevo
estndar, 3%. La diferencia en el resultado pudo deberse a la concentracin de
la muestra en la solucin, lo cual pudo observarse cuando al agregar los
reactivos 1 y 2 se present una coloracin azul muy tenue.

Pudo afectar tambin una incorrecta extraccin durante el desarrollo. Debido a

un error en el manejo del material se perdi la solucin que contena los
fosfolpidos no fosforilados por lo que no se pudo comprobar esto ltimo.

CCF

-La forma en como corrieron las muestras pudo verse afectada por la cantidad
de muestra colocada; al no ser suficiente la muestra no resulto como se
esperaba.
-La tcnica del revelado se llev a cabo de forma incorrecta.
-La incorrecta aplicacin de la slice pudo afectar el proceso de recorrido de la
muestra,
ya
que
las
placas
presentaban
grietas
y
grumos.

Bibliografa
1) Aguilar-santelisesL, Cororna-Ortega MT, Graca del Valle A, RangelCorona R, Cruz Milln M. Antologa para los laboratorios de bioqumica
celular y de los tejidos I y Laboratorio Integral de Bioliga I. 2 ed.
Mxico: FES Zaragoza, UNAM, 2007.
2) Lehninger Albert L. Bioqumica, las bases moleculares de la estructura y
funcin celular. Barcelona, 1982. Editorial Omega, S. A. 2 Ed.
3) Murray KR, Granner DK ,Mayes PA,Rodwell VW.Bioquimica de Harper.16
Ed. Mexico: IPN/Editorial el Manual Moderno;2004.