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La actividad antifngica de los aceites esenciales evaluada por dos

diferentes
ABSTRACTO
KI SUHR Y NIELSEN PV. 2003.
Objetivos: Estudiar cmo la actividad antifngica de los aceites esenciales
naturales depende del mtodo de ensayo utilizado.
Mtodos y Resultados: Los aceites de laurel, hojas de canela, clavo de olor,
hierba de limn, mostaza, naranja, salvia, tomillo y dos
aceites de romero se ensayaron mediante dos mtodos: (1) un medio de agar a
base de pan de centeno se complement con 100 y 250 ul aceite esencial y (2)
de centeno verdadero pan se expuso a 136 y 272 ll l
)1
aceite voltil en el aire. Rye deterioro pan
hongos se utilizaron para la prueba. Mtodo 1 demostr aceite de tomillo para
ser el mejor inhibidor de crecimiento global, seguido de clavo de olor
y canela. En los aceites contrario, naranja, salvia y romero tenido efectos muy
limitados. Mostaza y hierba de limn
eran los aceites ms eficaces por el mtodo voltil, y naranja, salvia y uno
romero mostraron algunos efectos. Petrleo
Las composiciones se analizaron mediante cromatografa de espectrografa de
masas de gas.
Conclusiones: efectos antimicticos de los aceites esenciales dependan de la
tcnica de aplicacin. fenlico ms grande
compuestos tales como timol y eugenol (tomillo, canela y clavo de olor)
tuvieron mejor efecto se aplica directamente al medio,
mientras que los compuestos ms pequeos tales como isotiocianato de alilo y
citral (mostaza y hierba de limn) eran ms eficientes
cuando se aade como voltiles.
Importancia e Impacto del Estudio: Este estudio demuestra que el mtodo
utilizado para la seleccin de aceites esenciales como
antimicrobianos potenciales deben corresponder con la aplicacin buscada.
Palabras clave: aceites esenciales, conservacin de alimentos, mostaza,
antimicrobianos naturales, tomillo.
INTRODUCCIN
Propiedades antimicrobianas de hierbas y especias han sido
la antigedad reconocidos y utilizados desde preservacin de los alimentos
cin y en medicina (Zaika 1988; Conner 1993). Cientfico
informes sobre agentes antimicrobianos naturales datan tambin para
respaldar
ms de un siglo, por ejemplo, Chamberlain inform en 1887 de la
la accin de vapores de aceites esenciales sobre las esporas de ntrax, citado
por

Maruzzella y Sicurella (1960). Un renovado inters en

natural preservation parece estar estimulada por presente
problemas de seguridad alimentaria, los problemas crecientes con microbiana
resistencia, y un aumento en la produccin de un mnimo de procesado
alimentos uni con green polticas de imagen de industrias alimentarias.
Numerosos estudios han documentado la antifngico
(Thompson 1989; Mishra y Dubey 1994; Cox et al.
1998; Ozcan 1998; Cosentino et al., 1999; Aligiannis et al.
2001; Elgayyar et al., 2001) y anti-bacteriana (Lachowicz
et al., 1998; Wan et al., 1998; Canillac y Mourey 2001)
efecto de aceites esenciales de plantas. Los exmenes de los indgenas
hierbas locales y el material vegetal tambin se ha informado de
en todo el mundo, como la India (Ahmad y Beg-2001),
Australia (Cox et al., 1998), Argentina (Penna et al., 2001)
y Finlandia (Rauha et al. 2000). Los experimentos de muestreo
13-52 con aceites esenciales y los principales componentes activos
contra cinco a 25 microorganismos (Conner y Beuchat
1984; Decanos y Ritchie, 1987; Smith-Palmer et al., 1998;
Hammer et al., 1999; Dorman y decanos 2000) tienen
informaron tomillo, clavo, canela, laurel, organo, ajo
y hierba de limn para ser algunos de los mejores de amplio espectro
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candidatos para la inhibicin de patgenos transmitidos por los alimentos y

los organismos de descomposicin. Sin embargo, las comparaciones de
estudios que
diferentes metodologas han utilizado son difciles, especialmente
con respecto a las concentraciones inhibitorias mnimas (MIC), y el
la necesidad de procedimientos uniformes y fiables cuando la prueba
la actividad se ha enfatizado (Davidson y Parish 1989;
Smith y Navilliat 1997; Mann y Markham 1998). los
ampliamente utilizado es el mtodo de difusin (de discos, gotas,
pozos o double plate) (Zaika 1988; Sivropoulou et al., 1996;
Mangena y Muyima 1999) o agar y dilucin en caldo
(mezclando el agente en el medio de crecimiento) (Paster et al., 1990;
Cosentino et al., 1999; Ozcan y Boyraz 2000). Lamentadamente, los resultados obtenidos por los diferentes mtodos utilizando el
aceites mismos no siempre se comparan (Hili et al., 1997). Solubilidad
y velocidades de difusin de los compuestos de petrleo en el agar acuosa
los medios de comunicacin son de suma importancia, y pueden conducir a
malas interpretaciones en las pruebas de difusin. Los agentes emulsionantes
Se agregan a menudo (Tween-20 o Tween-80) para asegurar uniforme
mezclando en las pruebas de dilucin (Smith y Navilliat 1997), pero
emulsionantes y disolventes se ha demostrado que disminuir el
actividad (Remmal et al 1993;. Hili et al 1997;. Mann y

Markham 1998). Una solucin de agar 02% tiene posteriormente

ha recomendado como el detergente menos perturbadora (Remmal et al. 1993).
Un tercer mtodo para el ensayo de aceites esenciales es el microatMtodo mosphere (Maruzzella y Sicurella 1960) o OCUP
METHODO (Zaika 1988) y la fumigacin (Paster et al., 1995;
Arras y Usai 2001). Este mtodo trae los vapores de
aceites esenciales en contacto con medios de cultivo y micro
organismos. Por lo tanto, el problema de la mezcla inadecuada es
burlado, y en lugar de distribucin en la fase de aire de
los compuestos activos es importante. La evaporacin en el interior de Petri
placas (aproximadamente 8 mm de distancia entre la superficie de agar y
aceite) puede
generar zonas de inhibicin (Maruzzella y Sicurella 1960),
lo que indica un gradiente y la distribucin de fase de aire no uniforme
de compuestos de vapor. La concentracin de los compuestos en
el espacio de la cabeza tambin se ha informado que ser diferente de
la composicin del aceite lquido, lo que refleja las diferencias en
la volatilidad de los compuestos (Benjilali et al. 1984). Por lo tanto, la
dinmica del sistema voltil son muy importantes y
resultados contradictorios entre los mtodos de difusin y voltiles o
puede esperarse que los mtodos de dilucin.
Para hacer las evaluaciones ms apropiadas de potencial
antimicrobianos, la aplicacin futura se debe considerar
la hora de elegir un mtodo de cribado. Para envases activos
(Nielsen y Ros 2000) y la fumigacin de los cultivos de almacenamiento de
este
sera un mtodo de cribado voltil, mientras que los sustitutos
de conservantes sintticos como sorbatos, propionatos y
benzoatos deben analizarse por mtodos de dilucin.
Composicin de los medios de comunicacin, tiempo de exposicin y
ambiental
factores (temperatura, pH, una
W
) Son importantes para todas las pruebas
mtodos. La falta de congruencia entre los ensayos de los medios de agar
y los estudios reales de los alimentos (Arras y Usai 2001; Ultee y Smid
2001) hace hincapi en el papel que el contenido de grasa y protena de la
Comida para jugar en la solubilidad y qumicas reacciones con el activo
compuesto (Juven et al 1994;. Smith-Palmer et al., 2001),
y alienta el uso de anlogos de productos alimenticios en lugar de
medios estndar de laboratorio. Este estudio se realiz en un
sistema modelo para el pan, porque el pan es un alimento bsico
en todo el mundo que estropea rpidamente cuando no se conserva. En
Dinamarca,

pan de centeno es un tipo de pan muy importante. Los principales spoilers

de pan de centeno son Penicillium roqueforti, P. corylophilum y
Eurotium ssp. (Lund et al. 1996). Tambin levaduras por ejemplo Endomyces
fibuliger (Legan y Voysey 1991) y Aspergillus flavus son
comnmente encontrado.
MATERIALES Y MTODOS
El hongos
Para la inoculacin, P. roqueforti (IBT 21319), P. corylophilum
(IBT 6978), Euro. repens (IBT 18000), A. flavus (IBT 21323)
y Endo. fibuliger
1
(IBT 605) se obtuvieron de la cultura
coleccin de Biocentrum-DTU, Kgs. Lyngby, Dinamarca.
Todo se origin a partir de la descomposicin de pan de centeno y otra
panadera
productos.
Los hongos se transfirieron a medio fresco y se incuexpectacin durante 7 das, repetida dos veces, inmediatamente antes de la
experimentar. Czapeck autolisado de levadura extracto de agar fue
utilizado para P. roqueforti, P. corylophilum y A. flavus,
Dicloran agar glicerol 18% para el Euro. repens y levadura
agar malta para Endo. fibuliger (Samson et al. 2000). Todas
productos qumicos utilizados fueron de Difco Laboratories (Detroit,
MI, EE.UU.).
Las suspensiones de 10
6
esporas o clulas de levadura por mililitro eran
hecho en agua que contiene 05% de Tween-80 y 05% de agar para
inoculacin de medios de comunicacin y el pan de centeno.
Los medios de pan de centeno
El dos por ciento (w / v) de pan de centeno granulado (Q-Brod, Smrum,
Dinamarca), 1% KH
2
correos
4
, 03% (NH
4
)
2
ASI QUE
4
, 01% (v / v)
solucin de metales traza (de acuerdo con Samson et al., 2000), un 1%
solucin mineral (Samson et al. 2000), 212% (w / v) de glicerol
(JT Baker, Deventer, Holanda) y 2% (w / v) de agar (Bie y

Berntsen AS, Rdovre, Dinamarca) se aadieron a duplicar

agua destilada. Todos los productos qumicos utilizados fueron de Merck,
Darmstadt, Alemania, a menos que se indique lo contrario en el texto. los
pH se ajust a 6 y 45 con HCl y NaOH. Esencial
aceites se diluyeron en 96% de etanol, se filtr (022 lm), y
alcuotas se aadieron a la autoclave y enfriado (aproximadamente 50 C)
medio en concentraciones finales de 100 o 250 ll l
)1
medio.
Las soluciones madre de los aceites esenciales en etanol se hicieron en
10 y 25 ll l
)1
, Y por lo tanto se diluye posteriormente 100plegar tras la mezcla con el medio. una final
W
de los medios de comunicacin
fue 095.
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Los extractos de laurel, hojas de canela, clavo de olor, hierba de limn, mustard, se utilizaron naranja, salvia, tomillo y romero. Todas
extractos eran de Copeland y Sons Ltd, Londres, Reino Unido,
a excepcin de mostaza, que fue a partir de extracto Mex, San Luis
Potos, Mxico, y uno de los dos extractos de romero,
romero 2, de Danisco Cultor, Grindsted, Dinamarca.
Inoculacin e incubacin
Cada hongo se inocul en tres puntos de la espora
suspensiones en tres placas de cada aceite y pH. Las placas se
empacado en bolsas de polietileno (LR Plast, Glostrup, Dinamarca)
para mantener la actividad de agua, y se incubaron en la oscuridad a
25 C. Dimetro de las colonias se midi despus de 2, 4, 7 y
14 dias.
El sistema voltil
Rebanadas de pan de centeno oscuro (Mollens Brod, Elsinor, Dinamarca)
se perforaron con un molde circular de 49 mm interiores
dimetro. Cada pieza cortada (811 073 g) se coloc en un 40mm vidrio de reloj, lado convexo hacia abajo, dentro de un frasco de vidrio de
220 ml
(Gratwohl, Glostrup, Dinamarca). El aceite esencial se aadi en
la parte inferior de la jarra, que no tiene contacto directo con el

pan de molde. Despus de aplicar el aceite del frasco estaba cerrado

hermtico.
Las dosis de aceite eran 30 ll, equivalente a 136 l ll
)1
aire, y
60 ll, equivalente a 272 l ll
)1
de aire de cada uno, a excepcin de mostaza
aceite, que se aadi en 025 ll (aproximadamente 1 l ll
)1
aire) y 050 ll
(Aproximadamente 2 l ll
)1
dosis) de aire.
Inoculacin e incubacin
Cada trozo de pan se inocul con 10 ll de 10
6
esporas
por mililitro o clulas por mililitro. Las pruebas se realizan en
por triplicado y se incubaron en la oscuridad a 25 C.
Crecimiento o ausencia de crecimiento se control visualmente la
segundo y cuarto da despus de la inoculacin. dimetro de las colonias
se midi en el sptimo da, y si no hay crecimiento tuvo
producido, en el da 14.
El anlisis por GC-MS de los aceites esenciales
Los componentes de los aceites se separaron en un gas cromatogrfico
grfico (Hewlett-Parckard 5890 Series II
2
, Birkerod, Dinamarca
marca) equipado con una columna DB 1701 baja polar (J & W
Cientfica, Folsom, CA, EE.UU.
3
) 30 m de largo, 025 mm interno
de dimetro y un espesor de fase 1 lm. Caudal de la columna
fue 11 ml min
)1
He a 35 C. Cinco microlitros de 01%
aceite diluido en dichlormethan (Lab-Scan, Dubln, Irlanda)
se inyect y la temperatura se mantuvo a 35 C durante 1 min
despus de la inyeccin, seguido por un aumento a 175 C por
4 C min
)1
, Y luego a 260 C por 10 min C
)1
, que era

celebrada durante 5 min. Los espectros de masas de los compuestos se

obtenido (Hewlett-Packard, 5972 series), y la subsiguiente
identificaciones compuestos se basaron en la comparacin con
base de datos de la biblioteca (NBS 75K, Hewlett Packard). Todos los aceites
eran
examinado por triplicado.
Anlisis de los datos
Parcial de mnimos cuadrados de regresin se utiliz el anlisis (PLS-R)
para el modelado descriptivo de los datos en los datos multivariante
programa de software de anlisis de Simca-P (versin 90; Umetrics
AB, Umea, Suecia). Los datos de crecimiento de ambos experimentos
se cuantificaron como el porcentaje de crecimiento en comparacin con
tratamiento de control sin aceite, usando la ecuacin de inhibicin%
tion100) (T / C 100), donde T es dimetro de las colonias despus de
tratamiento con aceite y C es el control, con etanol aadido a
los medios de comunicacin o nada de aceite en el sistema de prueba voltil.
Las barras de error en los grficos representan la
Dakota del Sur
de triplicados muestras.
RESULTADOS
El efecto inhibitorio de los aceites esenciales aadi al centeno
medios de pan
Una visin global de la inhibicin del crecimiento en los das 4, 7
y 14 del experimento de los medios de comunicacin fue modelado con PLSR. La Figura 1 muestra las correlaciones entre los aceites, la dosificacin, pH,
y la inhibicin de los hongos. Los dos componentes principales
(PC) del modelo explic 69% de la variacin de la
datos. Seleccionados los datos en bruto a partir de este anlisis se presentan en
la
Higo. 2.
Los primeros modelos de PC principalmente una medida de la inhibicin, es
decir,
factores y aceites esenciales colocados ms hacia la derecha tenan el
fuerte efecto inhibidor. Tomillo, clavo, canela, mustard y hierba de limn eran inhibitorios claramente hacia la
hongos (y todos positivos en el PC1). En general, la diferencia de pH
de 45 a 60 no afect significativamente la inhibicin, como el
factor de pH se encuentra cerca de Origo en el modelo. Concentracin
del petrleo fue el factor ms importante, una correlacin positiva
con la inhibicin del crecimiento de hongos en la primera PC. Obviamente,
dosis ms altas (250 ll l
)1
vs 100 ll l
)1
medio) dio mejor

inhibicin. El aceite de naranja, salvia y los dos aceites de romero eran

inhibidores pobres, correlacionados negativamente con la inhibicin de la
hongos. La inhibicin mxima del crecimiento obtenido durante los das 4-7
para estos aceites fue slo 15% para la naranja, <30% de la salvia y el
de romero 1 y <40% de romero 2, y inhibitoria
efectos se perdieron despus del sptimo da. El efecto de la baha era
Tambin insignificante, pero relativamente ms fuerte que el de naranja, salvia
y
la Rosemarys: inhibicin del crecimiento entre 5 y 15% era
registrada despus de 14 das para P. roqueforti, P. corylophilum,
A. flavus y Endo. fibuliger (predominantemente a pH 6).
Los modelos PC2 diferencias en el efecto inhibitorio y
divide los aceites inhibidores en dos grupos: (A) tomillo, clavo
y la canela y (B) de hierba de limn y mostaza. En general,
Los mtodos de conservacin antifngicos naturales
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las respuestas (inhibicin de hongos) se movieron en la direccin de

PC2 con un mayor tiempo de incubacin, del grupo B hacia
A. As tomillo, clavo y canela (A) exhibi una
efecto inhibidor ms fuerte a largo plazo, mientras que limoncillo
y mostaza (B) fueron los ms efectivos inicialmente, pero perder el efecto
con el tiempo relativamente ms rpido que los aceites del grupo A. Sin
embargo,
las diferencias entre las especies de hongos son notables (Figuras 1 y
2). Euro. repens, A. flavus y P. roqueforti obtuvo el
ms altos valores positivos (> 02) en PC2, correspondientes a
mayor prdida del efecto inhibitorio de la mostaza y la hierba de limn
con el tiempo por estos hongos que P. corylophilum y Endo.
fibuliger que mantuvo por debajo de los valores 02 en PC2. As,
mostaza y hierba de limn mostraron una inhibicin ms sostenida
cin de P. corylophilum y Endo. fibuliger en comparacin
con los otros hongos.
El efecto inhibitorio de los aceites esenciales voltiles aade como
al pan de centeno
Aceite de mostaza voltil inhibe el crecimiento de todos los hongos
completamente
(Fig. 3). Hierba de limn era casi tan eficiente, pero a baja
crecimiento concentracin de P. roqueforti y Endo. fibuliger
ocurrido en el da 14. Los dos aceites de romero mostraron diferentes
propiedades inhibidoras por este mtodo. Romero 1 era
efectiva, mientras que el romero 2 no tuvo ningn efecto inhibidor.

La levadura Endo. fibuliger y los dos Penicillia fueron el

hongos ms resistentes. Slo mostaza y hierba de limn eran
capaz de inhibir el crecimiento de estos hongos para todo el perodo.
El aceite de naranja, salvia, tomillo, laurel y romero 1 fueron tambin
considerablemente inhibidor durante los primeros 7 das, en lugar de
canela, clavo de olor y romero 2 (Fig. 3). El aceite de naranja no lo hizo
inhibir significativamente la levadura en el da 7, pero SIN HORA antes
el crecimiento fue observed se increment desde el da 2 para el
control al da 7 de naranja (Tabla 1).
Repens y A. Eurotium flavus fueron los ms sensibles de
los hongos probados, y romero 2 fue el nico aceite sin
claro efecto (Fig. 3).
El pan de centeno era un excelente sustrato para los spoilers importantes
P. roqueforti y Endo. fibuliger. El crecimiento fue visible 2 das
despus de la inoculacin. En oposicin a esto A. flavus creci lentamente en
pan de centeno, y particularmente pobre en pan tratado con
los vapores de aceites esenciales (Tabla 1).
Comparacin de los mtodos
Con el fin de comparar los mtodos de aplicacin, el crecimiento
la inhibicin en el da sptimo de los dos mtodos fue
modelada por PLS-R (Fig. 4). El anlisis divide los aceites
en tres grupos: (a) el total de mejores inhibidores de ambas
- Mtodos de mostaza, hierba de limn y tomillo, inhibidores (B)
despus de la adicin directa a los medios de comunicacin - tomillo, clavo y
canela
y (c) inhibidores sobre vaporosa contacto - naranja,
1 romero y salvia.
El efecto de la mayor dosificacin fue ms importante para la
experimento medios de comunicacin.
Composicin de aceites esenciales
Un resumen de los principales compuestos de los aceites esenciales
identificados por GC-MS se enumeran en la Tabla 2. Todos los principales
compuestos de los aceites fueron monoterpenos, excepto alilo
isotiocianato de aceite de mostaza. Las composiciones de clavo de olor y
aceite de hoja de canela fueron muy similares con un alto contenido de
eugenol, 85 y 72%, respectivamente. Eugenol tambin compone
la mayor parte de aceite de laurel (32%). No fue posible detectar
cualquiera de los compuestos voltiles de romero 2 por la GC
la metodologa utilizada; slo el compuesto portador, propileno
glicol, fue identificado.
-0 4
-0 2
00
02
04

06
08
-0 6
-0 4
00
02
0,4
La hierba de limn
naranja
Canela
Mostaza
Baha
Sabio
romero 1
romero 2
pH
P.roq _4
P.roq _7
E.rep _4
_4 E.fib
Componente principal 1 (59 9%)
tomillo
_14 P.roq
P.cor _4
P.cor _7
P.cor _14
E.rep _7
E.rep _14
A.fla _7
A.fla _14
_7 E.fib
E.fib _14
A.fla _4
Clavo
la
B
Hora
-0 2
Conc.
la
B
Hora
la
B
Hora

la
B
Hora
Componente principal 2 (8

6%)
Higo. 1 parcial regresin de mnimos cuadrados
(PLS-R) modelo de inhibicin del crecimiento fngico
medido da 4, 7 y 14 en el pan de centeno
medio suplementado con aceites esenciales.
La varianza explicada para cada componente es
dado entre parntesis, y la independiente
las variables se muestran en negrita. Conc., Concentracin de aceites; A.fla, Aspergillus flavus; E.fib,
Endomyces fibuliger; Repens E.rep, Eurotium;
P.cor, Penicillium corylophilum; P.roq,
P. roqueforti; 4, el da 4; 7, el da 7; 14, da 14
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DISCUSIN
La composicin de los aceites esenciales vara significativamente
debido a las diferentes especies y quimiotipo (mantecoso
et al 1974.; Tucker y Maciarello 1986; Knobloch et al.
1989; Tantaoui-Elaraki et al., 1993), la procedencia geogrfica
(Chalchat et al 1993;. Perry et al., 1999), estacin (Senatore
1996; Pal-Paul et al., 2001; Santos-Gomes y FernandesFerreira 2001) y el procedimiento de extraccin (Schaneberg y
Khan 2002). En este estudio se utiliz una timol quimiotipo de
aceite de tomillo (Cosentino et al 1999;. Echeverrigaray et al.
2001) y un tipo espaol de romero (Chalchat et al.
1993). Las composiciones de los otros aceites eran tambin
similitud con los informes anteriores (Buttery et al 1974;. Perry
et al., 1999; Jirovetz et al., 2000; Schaneberg y Khan
2002).
Tomillo, clavo y canela result ser el mejor en general
inhibidores de largo plazo tras la adicin directa a los medios de
comunicacin (Fig. 1).
El timol, el compuesto principal en el tomillo (Tabla 2), y
eugenol, en la canela y clavo de olor, son a la vez fenlico
100
20

40
60
80
100
% de inhibicin
P. roqueforti
100
20
40
60
80
P. corylophilum
100
20
40
60
80
E. repens
100
20
40
60
80
A. flavus
tomillo
Clavo
Canela
Mostaza
La hierba de limn
Baha
naranja
Sabio
Romero 1Rosemary 2
0
20
40
60
80
E. fibuliger
Higo. 2 La inhibicin del crecimiento de hongos en centeno
medio pan, pH 4,5, suplementado con
250 ll l
)1
aceites esenciales. Da: 7 (j), 14 ()
Los mtodos de conservacin antifngicos naturales

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compuestos. Aceite de laurel tambin contena eugenol (32%), pero no

en niveles comparables con el clavo (85%) y canela (72%).
El efecto inhibidor de la baha era mucho ms dbil en consecuencia
de clavo y canela, pero sin embargo cerca de la
B-grupo de los inhibidores de los medios de comunicacin en el anlisis PLSR, Fig. 4.
Varios autores han reportado una alta actividad antimicrobiana in
0
20
40
60
80
100
0
20
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-20
0
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0
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100
-20
% de inhibicin

P. roqueforti
P. corylophilum
E. repens
A. flavus
E. fibuliger
tomillo
Clavo
Canela
Mostaza
La hierba de limn
Baha
naranja
Sabio
Romero 1Rosemary 2
Higo. 3 La inhibicin del crecimiento de hongos en centeno
pan con aceites esenciales voltiles aade como en
un sistema hermtico. 270 ll 1
)1
petrleo en fase de aire:
(j) Da 7, (j) Da 14, 135 ll 1
)1
aceite en el aire
fase :() Da 7, (h) Da 14 (aceite de mostaza
de dosificacin fue de 2 ll
)1
y 1 ll
)1
, Respectivamente)
Se observ la Tabla 1 Nmero de das antes de moho visible en el pan de
centeno tratado con vapores de aceites esenciales. Mu, la mostaza; Lg, hierba
de limn;
O, naranja; Th, tomillo; Ci, hojas de canela; Cl, clavo de olor; Sa, salvia; SR1,
tipo1 romero; Ro2, tipo2 romero; Bay, aceite de laurel; una, 135 ll l
)1
aire; b, 270 ll l
)1
aire; ng, no hay crecimiento
hongos
Control de Mu
a, b
lg
un
lg
segundo
O

un
O
segundo
Th
un
Th
segundo
Ci
a, b
cl
un
cl
segundo
sa
un
sa
segundo
SR1
un
SR1
segundo
Ro2
a, b
Baha
un
Baha
segundo
Penicillium roqueforti
2
ng
14
ng
2
4
2
2
2
2
2
2
4
2
4
2
2

2
Endomyces fibuliger
2
ng
14
ng
7
7
2
4
2
2
2
4
7
4
4
2
2
2
Corylophilum Penicillium 4
ng
ng
ng
7
14
4
4
4
4
4
4
14
4
7
4
4
4
Aspergillus flavus
4
ng
ng
ng
ng
ng

7
ng
7
7
14
14
ng
7
7
4
7
7
repens Eurotium
4
ng
ng
ng
14
ng
ng
ng
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14
ng
14
ng
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KI SUHR y PV NIELSEN
2003 La Sociedad para la Microbiologa Aplicada, Journal of Applied
Microbiology, 94, 665-674
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compuestos fenlicos (estructurados Sivropoulou et al., 1996;

Cosentino et al., 1999; Dorman y decanos 2000), seguido
por aldehdos, cetonas, alcoholes y otros hidrocarburos
(Shelef 1984; Ozcan y Boyraz 2000). tales declaraciones
se han basado en ensayos de difusin en agar utilizando o dilucin
mtodos, y son por consiguiente, de acuerdo con los resultados
de nuestro experimento medios de comunicacin.
Un mayor efecto inhibitorio de aceite de romero a pH ms bajo

(45-7) hacia Staphylococcus aureus se ha informado (del

Campo et al. 2000), aunque el efecto del pH desapareci
cuando un
W
se redujo en un 30 gl
)1
NaCl en el comunicado
experimentar. Dado que los compuestos antimicrobianos de esenaceites ciales se cree que ejercen su efecto por la obstaculizacin del
membrana plasmtica (Helander et al 1998;. Brul y Coote
1999; Cox et al. 2000), la carga elctrica y la polaridad debe ser
factores importantes para la actividad. En teora, el cambio de pH de la
sustrato puede influir en esto. Pero el cambio de pH de
45 a 6 en los medios de pan de centeno no tena un efecto significativo
sobre la actividad en nuestro trabajo.
Romero 2 era un producto antioxidante natural y
contenida propilenglicol como un portador del activo
compuestos, que presumiblemente eran ms grandes y menos voltiles
compuestos tales como flavonoides y diterpenoides. romero 2
se puede esperar a ser activos por adicin directa. Sin embargo,
ninguno de los dos tipos de aceites de romero mostr considerable
efectuar en los medios de comunicacin a las concentraciones ensayadas. Slo
una
efecto de corta duracin limitada se registr, y el ms alto
efecto de stos era el romero 2 hacia A. flavus (Fig. 2).
El isotiocianato de alilo (AITC) es una baja volatilidad molecular de
aceite de mostaza, con un alto potencial antimicrobiano (Lin et al.
2000). Fue fungicida a todos los hongos en 1 l ll
)1
aire en el
sistema voltil y hermtico (Fig. 3). Sin embargo, cuando se aade
a los medios de agar a 250 ll l
)1
medio el aceite de mostaza no era
capaz de mantener su efecto inhibidor durante 2 semanas (Fig. 2).
La razn por la cual el efecto inhibidor de la AITC se perdi despus
la primera semana podra ser la evaporacin de la placa de Petri y
Bolsas de PE, o la descomposicin tras la reaccin con las sustancias en
el medio. Eurotium repens y A. flavus fueron los ms
hongos resistentes hacia AITC en los medios de
comunicacin. Como es Aspergillus
la forma imperfecta (asexual) de Eurotium alguna mutua
propiedades de conidospore y micelio estructura o
capacidad metablica podra ser la razn de sus similares
resistencia. Grandes diferencias en el efecto de la mostaza / AITC

Tambin se ha informado de otros, por ejemplo, que van desde el MIC

0016 a 600 ppm fueron encontrados por Delaquis y Mazza (1995)
de los propios y los estudios de los dems, lo que confirma nuestra
resultados de la metodologa gran impacto tiene en los resultados.
Ismeros son citral (no aromtico) monoterpenos aldehdo
y los principales componentes del aceite de hierba de limn. Este aceite
tambin
mostr un efecto mucho ms fuerte en forma voltil. Sin embargo,
la levadura Endo. fibuliger era diferente de los moldes en la
experimento medios por ser ms inhibida por lemongrass de
todos los aceites probados.
Al igual que el aceite de mostaza y hierba de limn, aceite de naranja, mostr
notable diferencia en la actividad entre el ensayo de dos
mtodos. El aceite de naranja contena principalmente el nente voltil
nente
D
limoneno. Ninguna actividad se registr en los medios de comunicacin, pero
en el sistema de los dos voltil Penicillia, A. flavus y el euro.
repens, fueron inhibidas.
Salvia y rosemary1 tenan muchos compuestos importantes en
comn (a-pineno, eucaliptol, alcanfor y limoneno;
Tabla 2), y sus propiedades inhibidoras tambin fueron similares en
ambos mtodos. Un efecto inhibidor era deficiente en
Adems de medio, pero el efecto en forma de vapor fue
considerable (Fig. 3 - P. corylophilum, A. flavus y el euro.
repens).
-0 4
-0 2
00
02
06
08
10
-0 4
-0 2
00
02
04
06
08
naranja
tomillo
Canela
Mostaza
Baha

Sabio
romero 1
P.roq
P.cor
E.rep
A.fla
E.fib
P.roq -V
P.cor -V
E.rep -V
A.fla -V
E.fib- V
co director
metro
Ponent
2
(27

9%)
Componente principal 1 (38% 1)
B
la
C
Clavo
La hierba de limn
romero 2
Conc.
B
la
C
B
la
C
04
B
la
C
Higo. 4 regresin de mnimos cuadrados parciales
(PLS-R) modelo comparando el ensayo de dos
mtodos de la medicin de hongos
inhibicin del crecimiento por los 10 aceites a da siete
8
.

La varianza explicada para cada componente es

dado entre parntesis, y la independiente
las variables se muestran en negrita escritura. A.fla,
Aspergillus flavus; E. fib, Endomyces fibuliger;
E. representante, Eurotium repens; P. cor, Penicillium
corylophilum; P. roq, P. roqueforti. El sufijo:
) V, sistema de voltiles
Los mtodos de conservacin antifngicos naturales
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Microbiology, 94, 665-674
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No haba ninguna seal visible de inhibidor de gradientes edificio

en el pan, en comparacin con la inhibicin informado
zonas de mtodos de micro-atmsfera en placas de Petri. los
mayor distancia de pan para la eliminacin de aceite, y la pequea
cantidades de aceites usados, lo que asegur que los aceites se evaporan
completamente dentro del sistema hermtico, puede ser la razn de
esta.
Benjilali et al. (1984) inform que el anlisis del espacio de cabeza
por encima de los aceites esenciales dieron una mayor concentracin de la
compuestos ms ligeros (por ejemplo, un-pineno, canfeno) en comparacin
con los ms pesados (compuestos fenlicos), por ejemplo de lo que era
encontrado en el anlisis del aceite lquido. Las diferencias en la especfica
volatilidad del compuesto activo puede explicar la mejor
efecto de mostaza, hierba de limn, salvia, romero 1 y naranja
observado en el sistema voltil en comparacin con los medios de
este estudio. Sin embargo, la composicin de los medios de comunicacin /
pan
no era idntico en los dos sistemas, aunque el pH y una
W
era algo comparable (medios de baja el pH). El contenido de
agua fue menor en el pan que los medios de agar, y el
pan de masa fermentada de centeno fermentado era una ms compleja
medio de los medios de pan de centeno 2%. hongos Aspergillus flavus
y el euro. repens mostraron, en particular, el crecimiento ms pobre en
pan que en medio.
A pesar de las diferencias en los medios de comunicacin entre los dos
mtodos, nuestros resultados mostraron que ms pequeo y no fenlico
compuestos voltiles, tales como AITC, citral y limoneno,
fueron los ms eficaces cuando se aplican a travs de la fase de aire. leos
compuesto de los compuestos fenlicos de mayor tamao, tales como timol
y el eugenol, tena el mejor uso como aditivos directos. timol,
de tomillo, es una molcula ms pequea y ms voltil que el

eugenol del clavo y canela contiene ter. tomillo

Tambin fue en general ms eficaz que el clavo y canela en
el experimento voltil (Fig. 4). Los hallazgos de Inouye et al.
(2002)
4
apoyar a nuestros resultados, ya que informaron que limoncillo
fue absorbido por el micelio del molde y medios de comunicacin de mayor
asciende en comparacin con tomillo y aceite de corteza de canela, cuando
stos se aplicaron como vapores.
Muy a menudo los aceites esenciales son examinados para detectar
antimicrobiano
efecto de la adicin directa y la difusin en medios de comunicacin. Nuestro
trabajo
ha demostrado que los mtodos de deteccin deben reflejar el futuro
solicitud. As, un mtodo de cribado debe ser voltil
empleado para la fumigacin o con fines de envasado activo.
EXPRESIONES DE GRATITUD
El apoyo financiero de la UE, Feria PL98-4075, es agradecido
admitido. Anne Winter Hinsby y Jeorgos Trihaas son
reconocido por su excelente asistencia tcnica.
Referencias
Ahmad, I. y de Beg, AZ (2001) Antimicrobial y fitoqumico
45 estudios sobre plantas medicinales indias contra resistente a mltiples
frmacos
patgenos humanos. Diario de Etnofarmacologa 74, 113-123.
A