PROCESAMIENTO

CITOLGICO Y TISULAR
Introduccin al microscopio

El microscopio ptico:
fundamentos y tipos
Del griego mikrs (pequeo) y skopin (observar).
Permite ver objetos por debajo del lmite de resolucin del ojo
humano (alrededor de 100 a 200 m (0,1 a 0,2 mm).
En la mayora de los casos la observacin microscpica se realiza
sobre clulas muertas procesadas para eliminar el agua, preservar
lo mejor posible su estructura, dar contraste a sus distintos
componentes y obtener una seccin lo suficientemente delgada
para que la luz o los electrones la atraviesen. En determinadas
circunstancias, sin embargo, tambin pueden observarse clulas U1
vivas.
Las clulas eucariotas tienen un tamao que oscila entre 10 y 30
m de dimetro, mientras que las procariotas y los componentes
celulares son an menores.
Su visualizacin slo es posible utilizando diferentes tipos de
microscopios que, por efecto de sus lentes combinadas, poseen
mayor lmite de resolucin (hasta 0,2 m en el MO o unos pocos nm
en el caso del MET microscopio electrnico de transmisin -).

Diapositiva 2
U1

Usuario; 20/09/2016

Microscopio simple (lupa o

microscopio estereoscpico)
Consta de una sola lente o sistema de
lentes convergentes biconvenxas (parte
ptica) sostenidas por un soporte con
tornillos de enfoque (parte mecnica).
La distancia focal vara entre 5 y 10 cm.
Proporciona una imagen virtual, derecha,
aumentada entre 2 y 20-30 veces.
Los estereomicroscopios modernos
cuentan con mayor distancia til de trabajo,
tienen sistemas de iluminacin
direccionable, de luz polarizada, de campo
oscuro y es posible adaptar cmara
fotogrfica y vdeo.
Las lupas se utilizan como auxiliares en la
observacin o diseccin de piezas
anatmicas pequeas.

Microscopio ptico compuesto

(convencional)
Tambin llamado microscopio de campo claro o fotnico, ya que se
utiliza un haz de luz comn (luz blanca) que atraviesa la muestra e
ilumina el campo de observacin.
La muestra debe ser lo suficientemente fina como para que la luz
pueda atravesarla.
Los detalles se visualizan debido a las diferencias de absorcin de
la luz en las distintas partes del material biolgico.
Este microscopio se suele utilizar para observar preparaciones
histolgicas coloreadas.
Se obtiene una imagen fina, virtual, invertida y aumentada de los
objetos observados.
El MO cuenta con tres sistemas de lentes:
El condensador, que enfoca los rayos de luz sobre la muestra;
Los objetivos, que magnifican la imagen;
Y los oculares, que agregan una mayor magnificacin y permiten la
visualizacin directa del preparado.

MO. Parte mecnica

Pie. Debe ser slido y amplio.

Columna. Sostiene el tubo y la platina.
Tubo. Lleva los oculares y objetivos.
Puede ser monocular, binocular o
trinocular. Los objetivos estn enroscados
en un sistema de revlver que permite
colocar uno u otro en el eje ptico.
Platina. Superficie horizontal donde se
coloca el preparado sujeto con pinzas.
Generalmente permite el desplazamiento
del preparado a derecha e izquierda o de
atrs a delante. Un orificio en la parte
central de la platina permite el paso de la
luz que atraviesa la muestra.
Los tornillos de enfoque. Permiten
regular la distancia entre el preparado y
los objetivos con el fin de obtener una
imagen ntida de la muestra.
Generalmente hay un tornillo
macromtrico y uno micromtrico.
Debajo de la platina hay soportes para el
condensador, el diafragma y los filtros.

MO. Parte ptica

Objetivos. En el revlver de un MO hay generalmente objetivos de

diferentes aumentos: uno llamado lupa, o de campo (3,5x, 4x 5x); otro de
10x y/o de 25x, uno de 40 45x; y, con frecuencia, uno de inmersin de
100x. El objetivo de inmersin se utiliza frecuentemente para exmenes
citolgicos.
Oculares. Son las lentes que recogen la imagen dada por el objetivo.
Tienen grabado el aumento que proporcionan. El aumento final se calcula
multiplicando la magnificacin del objetivo por la del ocular.
Condensador. Concentra los rayos luminosos y los proyecta sobre el
preparado a travs del orificio de la platina. Para observaciones con
objetivos de gran aumento se requiere que el condensador est cerca de la
platina; por el contrario, para trabajar con bajo aumento conviene bajar el
condensador para obtener una iluminacin ms pareja en todo el campo
observado.
Diafragma del condensador. Grada la cantidad de rayos luminosos que
llegan al objeto. Para preparaciones sin teir o con poco contraste es
conveniente cerrar el paso de la luz un poco ms de lo habitual para
aumentar el contraste.
Sistema de iluminacin. Consta de luz, espejo, filtros y diafragma.
Filtros. Se colocan en aros portafiltros situados debajo del condensador.

Microscopios especiales

Microscopio de campo oscuro. Generalmente utilizado para observacin de clulas vivas y

mviles, como bacterias y espermatozoides.
Microscopio de contraste de fases. Permite observar clulas y tejidos sin colorear y es
especialmente til para la observacin de clulas vivas.
Microscopio de interferencia. Es una modificacin del anterior y es muy utilizado en
cultivos celulares.
Microscopio de polarizacin. Usa luz polarizada (luz que vibra en un solo plano). Permite
estudiar tejidos duros (hueso, diente), estructuras que tengan simetra lineal (tejido
muscular), y la presencia o deposicin de colgeno.
Microscopio invertido. Tiene el revlver portaobjetivos situado debajo de la platina y el
sistema de iluminacin por encima de la misma. Esto permite contar con una mayor distancia
de trabajo y poder observar clulas creciendo en medios de cultivo de varios mm de espesor.
Microscopio de fluorescencia. Permite detectar molculas que fluorescen, que absorben
determinada longitud de onda y reemiten luz de una longitud de onda mayor. Las estructuras
fluorescentes aparecen luminosas y brillantes, resaltando sobre fondo oscuro.
Microscopio de luz ultravioleta. Usa exclusivamente esta luz para atravesar la muestra. Es
particularmente til para detectar la presencia de distintos tipos de molculas (cidos
nucleicos) en las clulas. La visualizacin slo puede realizarse con fotografas.
Microscopio lser confocal. Permite obtener imgenes de excelente definicin y de una
resolucin un 30% superior a la de un MO comn. Combina partes de un MO al que se
adapta un equipo fluorescente, con un sistema de barrido en el que se emplea un rayo lser.
Pueden lograrse imgenes de la muestra a diferentes profundidades, como si se observara
capa por capa, pudiendo reconstruir una imagen tridimensional completa de la clula
estudiada.

Polarizacin
Campo oscuro

Contraste de fases

Lser confocal
Polarizacin

El microscopio electrnico:
fundamentos y tipos
Utiliza electrones en lugar de fotones o luz
visible para formar imgenes de objetos
diminutos. Los microscopios electrnicos
permiten alcanzar amplificaciones mayores que
los mejores microscopios pticos, debido a que
la longitud de onda de los electrones es
bastante menor que la de los fotones "visibles".
Existen dos tipos principales: el de transmisin o
TEM (Transmission electron microscope),
desarrollado en primer lugar, y el de barrido o
SEM (Scanning electron microscope).

TEM
El microscopio electrnico
de transmisin emite un haz
de electrones dirigido hacia
el objeto cuya imagen se
desea aumentar. Una parte
de los electrones rebotan o
son absorbidos por el objeto
y otros lo atraviesan
formando una imagen
aumentada de la muestra.
Para utilizar un TEM debe
cortarse la muestra en capas
finas, generalmente no
mayores de unos 5000 (10
ngstrom= 1nm), o sea, 0,5
m. Los microscopios
electrnicos de transmisin
pueden aumentar la imagen
de un objeto hasta un milln
de veces.

SEM

En el microscopio electrnico de barrido la

muestra es recubierta con una capa de metal
delgado, generalmente oro depositado
mediante la tcnica del sombreado, y es
barrida con electrones enviados desde un
can. El haz de electrones no est fijo, sino
que se mueve y rastrea continuamente la
superficie de la muestra. Un detector mide la
cantidad de electrones enviados que arroja la
intensidad de la zona de muestra, siendo
capaz de mostrar figuras en tres dimensiones,
proyectados en una imagen de TV. Su
resolucin est entre 3 y 20 nm, dependiendo
del microscopio. Permite obtener imgenes de
gran resolucin en materiales ptreos,
metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por
un haz de electrones, las lentes por
electroimanes y las muestras se hacen
conductoras metalizando su superficie.
Se suele emplear para la observacin
tridimensional de estructuras completas,
pequeos organismos o partes de rganos
(cristalino), pequeas estructuras (esporas,
polen), clulas completas (eritrocitos), as
como orgnulos en clulas fraccionadas.

Comparacin de la formacin de la imagen en un microscopio de transmisin

ptica, un microscopio electrnico de transmisin (TEM), un microscopio
electrnico de barrido (SEM) y un tubo de rayos catdicos (CRT) de pantalla de TV