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INDICE

Contenido
1.

INTRODUCCIN............................................................................................. 1

2.

OBJETIVOS.................................................................................................... 1

3.

INVESTIGACIN............................................................................................. 1
3.1

MICROSCOPIO........................................................................................ 1

3.1.1

DEFINICIN....................................................................................... 1

3.1.2

QUIN LO INVENT?.......................................................................1

3.1.3

HISTORIA DEL MICROSCOPIO............................................................2

3.1.4

TIPOS DE MICROSCOPIOS................................................................3

3.2

MICROSCOPA......................................................................................... 4

3.2.1

TRANS-ILUMINACIN........................................................................5

3.2.2

EPI-ILUMINACIN.............................................................................. 6

3.2.3

TIPOS DE MICROSCOPA...................................................................7

3.3

CRISTALERA Y EQUIPO...........................................................................9

1. INTRODUCCIN

El microscopio es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados


pequeos para ser vistos con claridad por el ojo humano. Aunque el hombre tenga
el sentido de la vista, no pueden ver objetos correctamente demasiados pequeos
sin la ayuda de un microscopio. El microscopio que nosotros vamos a estudiar es
el llamado microscopio ptico o de luz, que se sirve de la luz visible para crear una
imagen aumentada del objeto mediante lentes.
La microscopa utiliza instrumentos especiales como la lupa y el microscopio,
que permiten magnificar el tamao de estructuras imperceptibles.

2. OBJETIVOS

3. INVESTIGACIN

3.1 MICROSCOPIO
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles
a al ojo humano. Esto se logra mediante un sistema ptico compuesto por lentes,
que forman y amplifican la imagen del objeto que se est observando.

3.1.1 DEFINICIN
Instrumento ptico que permite ver objetos aumentados.
Del griego micrs que quiere decir pequeo, y scopo
que significa mirar.

3.1.2 QUIN LO INVENT?

En general, suele atribuirse la invencin del microscopio simple a Anton Van


Leeuwenhoek (1632-1723), un comerciante holands sin apenas estudios, pero
como podemos leer al final de la pgina fue un proceso de mejora de lentes hasta
llegar al microscopio de Van Leeuwenhoek. Por ejemplo antes que Anton, ya
Zaccharias Janssen y su padre Hans pusieron varias lentes en un tubo y
descubrieron que al colocar un objeto en su extremo se vea mucho ms grande.
Realmente ellos fueron los que descubrieron el primer microscopio, aunque se le
atribuya a Anton.
Van Leeuwenhoeck construy muchos microscopios a lo largo de su vida,
que segn cuentan, no prest nunca a nadie. Son conocidos sus descubrimientos
pioneros sobre los protozoos, los glbulos rojos, el sistema de capilares y los
ciclos vitales de los insectos. Por todos estos descubrimientos se le llama: El
Padre del Microscopio.

3.1.3 HISTORIA DEL MICROSCOPIO


Durante el primer siglo (ao 100), el vidrio se haba inventado y los romanos se
miraban a travs del cristal. Experimentaron con diferentes formas de cristal, una
de ellas era ms fino por los bordes y ms grueso en el centro. Descubrieron que
si esta "lente" se colocaba sobre un objeto, el objeto se vea ms grande.
Alguien descubri tambin que se puede enfocar los rayos del sol con una de
estas lentes especiales y provocar un incendio. Estas primeras lentes fueron
llamados lupas o lentes de quemar. La palabra "lente", por cierto, deriva de la
palabra lentejas, porque se parecan a la forma de un grano de lenteja.
Estas lentes no se utilizaron mucho hasta el final del siglo XIII, cuando los
fabricantes de gafas estaban produciendo lentes para usarlas como gafas.
Los primeros microscopios sencillos, que eran realmente las gafas, slo
aumentaban 6 o 10 veces el tamao real. Una cosa que era muy comn e
interesante, era usarlas para mirar pulgas y otros insectos diminutos.

En algn momento alrededor del ao 1590, dos fabricantes de gafas


holandeses, Zaccharias Janssen y su padre Hans comenzaron a experimentar con
estas lentes. Ellos pusieron varias lentes en un tubo e hicieron un descubrimiento
muy importante. El objeto cerca del extremo del tubo se vea muy ampliado,
mucho ms que lo que se poda ampliar con cualquier lupa. Acababan de inventar
el microscopio compuesto (que es un microscopio que utiliza dos o ms lentes).
Galileo oy de sus experimentos y comenz a experimentar por su cuenta.
Describi los principios de lentes y los rayos de luz y mejor tanto el microscopio
como el telescopio. Aadi un dispositivo de enfoque a su microscopio y, por
supuesto, pas a explorar los cielos con sus telescopios.
Anthony Leeuwenhoek de Holanda estaba muy interesado en las lentes
mientras trabajaba con lupas en una tienda de telas. Us la lupa para contar los
hilos en una tela. Fue tanto su inters que aprendi a hacer lentes. Mediante el
esmerilado y el pulido, fue capaz de hacer pequeas lentes con grandes
curvaturas. Estas lentes redondas producan una mayor ampliacin, y sus
microscopios fueron capaces de ampliar hasta 270 veces el tamao real.
Anthony Leeuwenhoek se involucr ms en la ciencia y con su nuevo
microscopio mejorado fue capaz de ver cosas que nadie haba visto antes. Vio
bacterias, levaduras, clulas sanguneas y pequeos animales que nadan
alrededor en una gota de agua. Por sus grandes contribuciones, descubrimientos
y trabajos de investigacin, Anthony Leeuwenhoek (1632-1723) desde entonces
ha sido llamado el "Padre del Microscopio".
Hoy en da los Microscopios nos permiten ver organismos enfermos y cmo
funcionan. Podemos estudiar la composicin de las rocas y los fluidos y por
ejemplo, podemos ver exactamente lo que hay en un vaso de agua potable.

3.1.4 TIPOS DE MICROSCOPIOS


i. Microscopios pticos: Estos son la mayora que se usan a nivel
particular o en las escuelas.

ii.
iii.

Microscopios Electrnicos: Utilizan los electrones.


Microscopios de Sonda de Barrido: utilizan campos electromagnticos o

iv.

diminutas sondas que miden fuerzas.


Microscopios Digitales: Son aquellos que se conectan al ordenador,
normalmente por medio de un puerto USB, y se pueden verlas imgenes
directamente por el ordenador. Estas imgenes se pueden convertir en
archivos

guardar en

nuestro

ordenador. Por

lo

dems,

el

v.

funcionamiento es igual que los dems.


Microscopio Simple: Es uno que utiliza slo una lente para ampliar,

vi.

como una lente de aumento.


Microscopio Compuesto: utiliza dos o ms lentes para ampliar la
muestra.

3.2 MICROSCOPA
Tcnica que permite observar objetos con un microscopio (simple o
compuesto) y obtener una imagen aumentada del mismo y para ello es necesario
tener en cuenta estos tres elementos:
El objeto a estudiar (preparado histolgico por ejemplo).
Una fuente de iluminacin.
Un sistema ptico.

Cuando se plantea el estudio de alguna clula, tejido u rgano, previamente se


debe definir cuales aspectos (morfolgicos, bioqumicos, fisiolgicos, genticos,
entre otros) se desean analizar, o si se desea observar clulas vivas o clulas
fijadas. En base a esto ltimo se definir y planificar la metodologa a seguir. Se
seleccionar la tcnica de visualizacin y el tipo de instrumento ptico para
obtener las imgenes. Las tcnicas de laboratorio para preparar la muestra y
obtener el preparado histolgico que ser observado, dependern en gran medida
del tipo de microscopio requerido para visualizarlo, segn los aspectos que han
sido definidos previamente.

De la misma manera que se ha razonado en relacin al preparado histolgico


(objeto), se debe analizar el papel que juega la luz o sistema de iluminacin
empleado. Se desea evidenciar y distinguir a mayor aumento los detalles del
objeto que se estudia. Generalmente se habla de la iluminacin, trmino
ampliamente utilizado, que en microscopa no siempre denota el empleo de un
rayo luminoso conformado por fotones, los cuales si pueden ser captados por la
retina del ojo.
Adems de la luz solar y la luz producida por bombillas incandescentes,
tambin se pueden emplear otros tipos de radiaciones electromagnticas, tales
como la luz ultravioleta, los rayos lser o un haz de electrones. Estos ltimos no
son captados por la retina pero si por una placa fotogrfica o una pantalla
fluorescente, siendo considerados como un tipo de iluminacin, que a pesar de
no estar constituida por fotones, tambin permite la formacin de una imagen que
muestra los detalles finos de un espcimen.
Para iluminar el objeto se pueden emplear dos mecanismos, ya sea que el rayo de
luz lo atraviese o que simplemente incida en cierto ngulo sobre el objeto. En el
primer caso se habla de trans-iluminacin y en el segundo caso de epiiluminacin.

3.2.1 TRANS-ILUMINACIN
La trans-iluminacin ha sido indudablemente el primer mtodo de
iluminacin en la larga historia de la microscopa. El rayo electromagntico (luz
visible por ejemplo) debe atravesar el objeto, en ste caso un corte histolgico
(fig.1). Como condiciones fundamentales para ser observados al microscopio
compuesto, los preparados biolgicos deben ser muy delgados y transparentes.
Deben ser rebanados con instrumentos especializados (micrtomos) que permiten
obtener cortes cuyo espesor debe estar en el orden de las micras. Rutinariamente
el espesor del corte puede oscilar en un rango que va de 1 a 5m, pero su grosor
depender del tipo de clulas y tejidos. Para el estudio de las neuronas se realizan

cortes ms gruesos (alrededor de 30 m), mientras que para el estudio de clulas


del rin, en ciertos casos son ideales los cortes de 4 m. Para la microscopa
electrnica se emplean cortes cuyo espesor est en el orden de los nanmetros
(cortes ultra finos) debido al bajo poder de penetracin de los electrones.
La transparencia es otra cualidad que debe tener el objeto (preparado
histolgico). Las clulas son incoloras por naturaleza, pero algunas poseen color
propio (pigmentos). Para mejorar la transparencia se emplean ciertas sustancias
qumicas (agente aclarador) como el xilol, entre otros. Ser transparente facilita en
gran medida el paso del rayo de luz. La estructura de las clulas y tejidos es muy
heterognea y crea diferentes densidades en los compartimientos intra y
extracelulares. Para mejorar la visualizacin de tales variaciones en la
concentracin de los constituyentes celulares, se pueden emplear colorantes u
otros reactivos qumicos que incrementen el contraste entre ellas y permitan su
identificacin. Esto no siempre es necesario, puesto es factible sin ningn tipo de
colorantes observar clulas con algunos microscopios especiales, cuyo sistema de
iluminacin crea contrastes muy evidentes, que de ordinario no se observan con el
microscopio compuesto clsico.
La trans-iluminacin permite obtener un campo de visin con una cantidad
de luz importante, resaltando la estructura observada sobre un fondo muy
iluminado. El microscopio compuesto clsico emplea este tipo de iluminacin y por
ello tambin se denomina de campo claro. La microscopa electrnica de
transmisin (14) y la mayora de microscopios especiales tambin se fundamentan
en este principio.

3.2.2 EPI-ILUMINACIN
Con esta tcnica de iluminacin el rayo de luz incide de manera oblicua
sobre la muestra (fig.1). La iluminacin puede abarcar simultneamente todo el
campo de visin o por el contrario, focalizarse en un punto determinado del objeto.
Las muestras pueden observarse sin necesidad de realizar cortes finos y en

muchos casos tampoco se emplean colorantes. La transparencia del objeto no es


imprescindible. Como efecto de la epi-iluminacin es posible obtener imgenes
tridimensionales, complementando de esta manera lo observado con la
microscopa por trans-iluminacin. Varios tipos de microscopios emplean este
mtodo y como ejemplo podemos citar microscopios binoculares estereoscpicos
para micro-disecciones, y los microscopios de epi-fluorescencia, el confocal y el
electrnico de barrido.

Figura 1. Comparacin de los mecanismos de iluminacin ms empleados en


microscopa. La flecha amarilla representa el haz de luz incidente sobre la
muestra, que en la trans-iluminacin atraviesa la misma; mientras que en la epiiluminacin el rayo incide de manera oblicua y en este caso son los rayos
reflejados los que se capturan para formar la imagen.

3.2.3 TIPOS DE MICROSCOPA


i.

Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a


observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y
revelan detalles que no aprecian de otra manera.

ii.

Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La


luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente

iii.

coloreados.
El microscopio en campo oscuro: utiliza una luz muy intensa en forma de
un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del
objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz
que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen
aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn
analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de
iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin

iv.

manchas, invisibles con iluminacin normal.


Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar
el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es
ideal para espcimenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio de
fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el
microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el
cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz
y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo
de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de
un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es
muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con

v.

frecuencia en biologa y medicina.


Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia
(DIC): Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas
aparecen como si la clula estuviera proyectando sombras hacia un lado.
Fue diseado para observar relieves de especimenes muy difciles de
manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilizacin in-vitro
actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar

vi.

contraste de fases.
Microscopa de fluorescencia: una sustancia natural en las clulas o un
colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz,
emitiendo parte de la energa absorbida como rayas luminosos: esto se

conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda


se observa como si viniera directamente del colorante.

3.3 CRISTALERA Y EQUIPO

INCISO

EQUIPO O
CRISTALERA

IMAGEN

DESCRIPCIN
Para ampliar la imagen del

Lupa

cuerpo

objeto

de

observacin.

Se

Bandeja

utilizan

para

colocar

sobre ellas todo el material


necesario a utilizar.

Alfileres

Sujetar

ciertos

objetos

materiales entre s.

Es una mquina-herramienta

Pinza

simple

cuyos

extremos

se

aproximan para sujetar algo.

Sirve para cortar diferentes tipos

Tijera

de materiales

f
g
h
i
j
k
l
m
n

Aguja

de

diseccin
Bistur
Lentes
Balanza
Probeta
Tubo de ensayo
Beacker
Gradilla
Mechero

o
p
q
r
s
t
u
v
w

Gotero
Pipeta
Microscopio
Porta objetos o
Lmina
Cubre objetos
Caja de Petri
Termmetro
Embudo
Regla

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