UNIVERSIDAD AUTNOMA DE ZACATECAS

Francisco Garca Salinas

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS
PROGRAMA ACADMICO DE QFB
LABORATORIO DE GENTICA

7 A

PRCTICA IV
EXTRACCIN DE RNA Y ELECTROFORESIS DE
CIDOS NUCLEICOS

VIERNES 21 DE OCTUBRE DE 2012.

Palabras clave. RNA, Trizol, leucocitos, cidos nucleicos, electroforesis,

Introduccin
Al igual que el DNA, el ARN es un polmero compuesto por nucletidos unidos por un enlace
fosfodiester. Mientras que los nucletidos del DNA contienen azucares desoxirribosa, los
nucletidos del RNA poseen azucares ribosa. Con el grupo hidroxilo libre en el tomo de
carbono 2del azcar ribosa, el RNA se degrada con rapidez en condiciones alcalinas. El azcar
desoxirribosa del DNA carece de este grupo hidroxilo libre, razn por cual el DNA es una
molecula estable. La formacin de estructuras secundarias desempea un papel importante en la
funcin del RNA. La estructura secundaria est determinada por la secuencia de bases de la
cadena de nucletidos; as diferentes molculas de ARN pueden asumir estructuras distintas.
Dado que la estructura determina la funcin, las molculas de ARN tienen el potencial de una
enorme variacin de funciones.
Clase de
RNA

RNAr

Tipo
celular

Localizacin
de la funcin
en las clulas
eucariotas

Funcin

Bacterias y
eucariontes

Citoplasma

Componentes
estructurales
funcionales
ribosoma.

RNAm

Bacterias y
eucariontes

Ncleo
citoplasma

RNAt

Bacterias y
eucariontes

Citoplasma

Ayuda a incorporar
los aminocidos a
la
cadena
polipeptidica.

snRNA

Eucarionte
s

Ncleo

Procesamiento
pre-mRNA

del

snoRNA

Eucarionte
s

Ncleo

Procesamiento
ensamblaje
rRNA

y
del

scRNA

Eucarionte
s

Citoplasma

Variable

miRNA

Eucarionte
s

Citoplasma

Inhibe la traduccin
del mRNA.

siRNA

Eucarionte
s

Citoplasma

Desencadena
degradacin
de
otras molculas de
RNA.

y
del

Es portador del
cdigo
gentico
para las protenas.

La electroforesis es una tcnica bioqumica estndar para la separacin de molculas sobre la

base del tamao y la carga elctrica. Para separar las molculas de DNA se utiliza electroforesis
en gel. Se prepara un gel poroso, a menudo de agarosa que se funde en una solucin de buffer y
se vuelca en un molde de plstico. Cuando se enfra la agarosa se solidifica y forma un gel que
se asemeja a la gelatina firme. En uno de los extremos del gel se realiza indentaciones pequeas
denominadas pocillos con el objeto de contener las soluciones de fragmentos de DNA, y se
somete a una corriente elctrica que pasa a travs del gel. Dado que el grupo fosfato de cada
nucletido de DNA posee una carga negativa, los fragmentos de DNA migran hacia el extremo
positivo del gel. En esta migracin el gel acta como cedazo: cuando las molculas de DNA
migran hacia el polo positivo, se mueven a travs de los poros entre las partculas de gel. Los
fragmentos pequeos de DNA migran con ms rapidez que los grandes, y con el tiempo se
separan segn su tamao. La distancia que recorre cada fragmento depende de su tamao. En
otro pocillo se colocan fragmentos de DNA cuya longitud se conoce (marcador). Mediante la
comparacin de la distancia de migracin de los fragmentos marcadores se puede determinar el
tamao aproximado de los primeros. Despus de la electroforesis, los fragmentos de DNA son
demasiados pequeos para observarse; para ello se tie el gel con un colorante especfico para
cidos nucleicos, como el bromuro de etidio, que se introduce de modo firme (se intercala)
entre las bases de DNA. Cuando se expone a la luz UV el bromuro de etidio emite una
fluorescencia anaranjada brillante, (cada copia de cada fragmento de DNA aparece como una
banda anaranjada brillante).

Conclusin
Al trmino de la practica se llevo a cabo el protocolo tal como venia en el manual para
poder extraer RNA de clulas leucocitarias, pero para confirmar que en realidad se tena
RNA se corri la muestra en electroforesis en gel de agarosa, siendo que despus de que se
revelara pudimos comprobar que se logro extraer correctamente el RNA, esto se denoto al
observar dos bandas, una ms notoria la cual corresponde al RNAr 28S y otra ms tenue
que es el RNA 18S.
Referencias
Pierce BA. Gentica un enfoque conceptual. 3 edicin. pp. 346-348. Editorial medica
Panamericana, Mxico.