Proy NMX Aa 028 1 Scfi 08

SECRETARA DE
ECONOMA
PROYECTO DE NORMA MEXICANA

PROY-NMX-AA-028/1-SCFI-2008
ANLISIS DE AGUA.-DETERMINACIN DE DEMANDA
BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES (DBON) Y RESIDUALES TRATADAS.MTODO DE PRUEBA-(AMBAS PARTES DE ESTA NMX
CANCELAN LA NMX-AA-028-SCFI-2001)
WATER ANALISYS - DETERMINATION OF THE BIOCHEMICAL
OXYGEN DEMAND IN NATURAL, WASTEWATERS (DBON) AND
WASTEWATERS TREATED - TEST METHOD
PARTE 1
DILUCIN Y MTODO DE SIEMBRA MEDIANTE ADICIN
DE ALILTIOUREA
DILUTION AND SEEDING METHOD WITH ALLYLTHIOUREA
ADDITION
SECRETARA DE
ECONOMA
PREFACIO
En la elaboracin de la presente norma mexicana, participaron las siguientes
empresas e instituciones:
- ANLISIS DE AGUA, S.A. DE C.V.
- ARVA, LABORATORIO DE ANLISIS INDUSTRIALES, S.A. DE C.V.
- ATLATEC, S.A. DE C.V.
- CIATEC, A.C.
- CENTRO DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO TECNOLGICO EN
ELECTROQUMICA, S.C.
- COMISIN DEL AGUA DEL ESTADO DE MXICO
- COMISIN NACIONAL DEL AGUA.
- CONTROL QUMICO NOVAMANN INTERNACIONAL, S.A. DE C.V.
- ECCACIV, S. A. DE C. V.
- ENTIDAD MEXICANA DE ACREDITACIN, A.C.
- FASIQ INTERNACIONAL, S.A. DE C.V.
- GRUPO ECOTEC, S.A. DE C.V.
- HACH COMPANY
- INDEX-LAB, Q.F.B. MARTHA ELENA IZAGUIRRE VILLANUEVA
- INTEMA, S.A. DE C.V.
- INSTITUTO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE TAMAULIPAS, A.C.
Centro de Investigacin y Tecnologa en Saneamiento Ambiental (CITSA)
- INSTITUTO NACIONAL DE ECOLOGA
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CENICA
- INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
- INSTITUTO MEXICANO DEL PETRLEO
- INSTITUTO MEXICANO DE TECNOLOGA DEL AGUA
- LABORATORIO DE CALIDAD QUMICA VERACRUZANA, S.C.
- LABORATORIO DE QUMICA DEL MEDIO E INDUSTRIAL, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO IDECA, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO FERMI, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO QUMICO INDUSTRIAL.
- LABORATORIOS ABC QUMICA, INVESTIGACIN Y ANLISIS, S.A. DE C.V
- MERCURY LAB, S.A. DE C.V.
- MNICA OROZCO MRQUEZ
- PEKN ELMER DE MXICO, S.A.
- PEMEX PETROQUMICA COMPLEJO PETROQUMICO CANGREJERA
- PEMEX PETROQUMICA COMPLEJO PETROQUMICO MORELOS
- PEMEX PETROQUMICA COMPLEJO PETROQUMICO PAJARITOS
- PROTECCIN AMBIENTAL Y ECOLOGA, S.A. DE C.V.
- PROYECTOS Y ESTUDIOS SOBRE CONTAMINACIN INDUSTRIAL, S.A. DE
C.V.
- CSAR CLEMENTE ALVARADO GARCA / SERVICIOS AMBIENTALES
- SERVICIOS DE AGUA Y DRENAJE DE MONTERREY, S.A. DE C.V.
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- SERVICIOS DE INGENIERA Y CONSULTORA AMBIENTAL

- SISTEMA DE AGUAS DE LA CIUDAD DE MXICO DEL GOBIERNO DEL
DISTRITO FEDERAL
- UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA
- UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
Facultad de Qumica
Instituto de Biologa
Instituto de Ingeniera
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NDICE DEL CONTENIDO

Nmero del captulo
0 INTRODUCCIN
1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN
2 REFERENCIAS
3 DEFINICIONES
4 PRINCIPIO
5 REACTIVOS
6 EQUIPOS Y MATERIALES
7 ALMACENAJE DE LA MUESTRA
8 PROCEDIMIENTO
9 CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
10 CASOS ESPECIALES
11 REPORTE DE PRUEBAS
12 VIGENCIA
13 BIBLIOGRAFA
14 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES
APNDICES INFORMATIVOS
Anexo A
Anexo B
Anexo C
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5
5
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SECRETARA DE
ECONOMA
PROYECTO DE NORMA MEXICANA

ANLISIS DE AGUA.-DETERMINACIN DE DEMANDA
BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES (DBON) Y RESIDUALES TRATADAS.MTODO DE PRUEBA-(AMBAS PARTES DE ESTA NMX
CANCELAN LA NMX-AA-028-SCFI-2001)
WATER ANALISYS - DETERMINATION OF THE BIOCHEMICAL
OXYGEN DEMAND IN NATURAL, WASTEWATERS (DBON) AND
WASTEWATERS TREATED - TEST METHOD
PARTE 1
DILUCIN Y MTODO DE SIEMBRA MEDIANTE ADICIN
DE ALILTIOUREA
DILUTION AND SEEDING METHOD WITH ALLYLTHIOUREA
ADDITION
0
INTRODUCCIN
Los tiempos de incubacin especificados en esta norma mexicana son 5 das,

como en ISO 5815:1989 y segn lo aplicado en muchos pases europeos, o 7
das, segn lo aplicado en varios pases nrdicos durante muchos aos. La
incubacin de siete das da tpicamente resultados ms altos del DBO que el
tiempo de incubacin de 5 das.
Con un perodo de incubacin de 5 das, el trabajo del fin de semana puede ser
evitado solamente si las muestras se recogen mircoles, jueves o viernes. Con
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un perodo de incubacin de 7 das, las muestras recogidas en los primeros

cinco das laborables pueden ser analizadas sin la implicacin del trabajo del fin
de semana. Por esta razn, un perodo de incubacin de siete das se puede
considerar ms conveniente que la incubacin de cinco das convencional.
Un nuevo perodo modificado de incubacin de siete das se describe en el
anexo A. Las primeras investigaciones indican que los resultados del DBO
obtenidos por este mtodo modificado son idnticos a los resultados obtenidos
por el mtodo de cinco das descrito en el texto principal de esta norma
mexicana. Se espera que ms datos comparativos sobre estos dos mtodos de
incubacin sern obtenidos durante los siguientes aos, a fin de que la
modificacin del mtodo de incubacin de 7 das pueda ser incluido
completamente en el momento de la revisin de esta norma mexicana.
Para la determinacin de DBOn de las muestras de agua, el mtodo
respiromtrico descrito en ISO 9408 tambin puede ser utilizado.
En esta norma mexicana el lmite de deteccin (cuantificacin), LD, se define
como:
LD = t0,95 ( f )2s B 1 +
1
n
(1)
Donde
SB Son las series dentro de la desviacin estndar
t 0,95( f ) es el valor en tablas t de Student;
f es el grado de libertad para la determinacin de SB
n es el nmero de anlisis para la determinacin del blanco en una serie
analtica.
SB se calcula de determinaciones de muestras con un contenido de DBO cerca
del LD estimado.
En los casos en que el mtodo analtico no requiera ninguna correccin en
blanco el trmino:
1+
se omite.
1
n
(2)
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Calidad del agua - determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno

despus de los n das (DBOn)
ADVERTENCIA - Las personas que utilizan esta norma mexicana deben estar
familiarizados con la prctica normal de laboratorio. Esta parte de la norma no
pretende abordar todos los problemas de seguridad, si los hubiere,
relacionados con su uso. Es responsabilidad del usuario establecer prcticas de
seguridad y salud y garantizar el cumplimiento de cualquier condicin
reguladora nacional.
La norma mexicana NMX-AA-028-SCFI-2008 est formada por dos partes.
1
OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN
Esta norma mexicana especfica una determinacin de la demanda bioqumica

de oxgeno de aguas por dilucin y siembra con supresin de la nitrificacin.
Esta norma mexicana es aplicable a todas las aguas que tengan demanda
bioqumica de oxgeno superior o igual a 3 mg/L de oxgeno (el lmite de
deteccin) y no excedan a 6 000 mg/L de oxgeno. Para demandas bioqumicas
de oxgeno mayores que 6 000 mg/L, el mtodo sigue siendo aplicable, pero
los errores causados por la diluciones necesarias, pueden influir en la calidad
analtica del mtodo de prueba y los resultados se deben interpretar con
cautela.
Los resultados son el producto de una combinacin de reacciones bioqumicas
y qumicas. No tienen el carcter riguroso e inequvoco de sos que resultan
de, por ejemplo, un solo y bien definido, proceso qumico. Sin embargo,
proporcionan una estimacin de la calidad del agua.
La prueba puede ser influenciada por la presencia de diversas sustancias. Los
que son txicos para los microorganismos, por ejemplo, bactericidas, metales
txicos o libres de cloro, inhiben la oxidacin bioqumica. La presencia de algas
o microorganismos de la nitrificacin puede producir resultados artificiales altos
(falsos positivos).
El Anexo A describe perodos de incubacin alternativos.
El Anexo B describe multipruebas, que se pueden utilizar para obtener una
mayor repetibilidad y reproducibilidad o para demostrar la presencia de
sustancias txicas para los microorganismos.
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El Anexo C proporciona datos de exactitud y repetibilidad y reproducibilidad.

2
REFERENCIAS
Para la correcta aplicacin de la presente norma mexicana, se deben consultar

las siguientes normas vigentes:
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use Specification and test
methods , o la NMX que la adopte.
ISO 5813:1983, Water quality Determination of dissolved oxygen
Iodometric method, o la NMX que la adopte.
ISO 5814:1990, Water quality Determination of dissolved oxygen
Electrochemical probe method, o la NMX que la adopte.
ISO 6060:1989, Water quality Determination of chemical oxygen demand, o
la NMX que la adopte.
ISO 8245:1999, Water quality Guidelines for the determination of total
organic carbon (TOC) and dissolved organic carbon (DOC) , o la NMX que la
adopte.
ISO 8467:1993, Water quality Determination of permanganate index, o la
NMX que la adopte.
NMX-AA-012-SCFI-2001. Anlisis de agua-Determinacin de oxgeno disuelto
en aguas naturales, residuales y tratadas-Mtodo de prueba, o la NMX que la
adopte.
NMX-AA-100-1987. Calidad del Agua-Determinacin del cloro total- Mtodo
iodomtrico, o la NMX que la adopte.
3
DEFINICIONES
Para los propsitos de este documento, aplican los siguientes trminos y

definiciones.
3.1 Demanda bioqumica de oxgeno despus de n das DBOn
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Concentracin total de oxgeno disuelto consumido bajo condiciones especficas

por la oxidacin bioqumica de materia orgnica y/o inorgnica en agua, donde
n es el tiempo de incubacin igual a 5 das a 7 das.
Nota 1. Adaptado de ISO 6107-2.
Nota 2. Para los propsitos de esta norma mexicana, "oxidacin bioqumica"
se entender por "oxidacin biolgica".
4
PRINCIPIO
Es absolutamente esencial que los ensayos realizados de acuerdo con esta

norma mexicana sean realizadas por personal debidamente calificado.
La muestra de agua que se analizar es pretratada y se diluye con cantidades
variables de una dilucin de agua rica en oxgeno disuelto y que contenga una
semilla de microorganismos aerobios (inculo), con la supresin de la
nitrificacin.
La muestra se incuba a 20 2 C durante un perodo definido, 5 das o 7 das,
en la obscuridad, en una botella totalmente llena y tapada. La concentracin de
oxgeno disuelto se determina antes y despus de la incubacin, y se calcula la
masa del oxgeno consumido por litro de la muestra.
5
REACTIVOS
Utilizar exclusivamente reactivos de calidad analtica reconocida.

5.1
Agua, agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

a) Resistividad, megahom-cm a 25 C: 0,2 min;
b) Conductividad, S/cm a 25 C: 5,0 max., y
c) pH: 5,0 a 8,0.
El agua no deber contener ms de 0,01 mg/l de cobre, ni de cloro o

cloraminas.
5.2
Si la muestra no contiene suficientes microorganismos adaptados;
El agua de dilucin se obtendr de una de las siguientes maneras:

a) Aguas residuales urbanas de mximo de 300 mg/l de DQO (demanda
qumica de oxgeno medido de acuerdo con NMX-AA-030-SCFI-2008,
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b)
c)
d)
e)
parte 1 y 2), o COT 100 mg/l (carbono orgnico total, medido de

conformidad con la norma ISO 8245), colectados de la red principal de
alcantarillado o de un alcantarillado de una zona residencial libre de
contaminacin industrial importante. Decantar o filtrar el agua a travs
de un filtro grueso
Ro o lago de agua que contiene las aguas residuales urbanas;
Efluente ubicado en una planta de tratamiento de aguas residuales;
Agua tomada aguas abajo de la descarga del agua que se analizar o
agua conteniendo microorganismos adaptados al agua que se analizar
y cultivada en el laboratorio (en el caso de los efluentes industriales que
contienen las sustancias que se degradan con dificultad);
Material de siembra (inculo) disponible comercialmente.
5.3 Disoluciones de sal, almacenados en botellas de vidrio de (0 a 4) C en la

oscuridad
Las siguientes disoluciones son estables durante 6 meses. Sern descartadas
en la primera seal de precipitacin o crecimiento biolgico.
5.3.1
Disolucin amortiguadora de fosfato, pH 7,2
Disolver 8,5 g de fosfato monobsico de potasio (KH2 PO4), 21,75 g de fosfato

dibsico de potasio (K2HPO4), 33,4 g de fosfato dibsico de sodio
heptahidratado (Na2HPO4 7H2O) y 1,7 g de cloruro de amonio (NH4Cl) en 500
ml de agua. Diluir a 1 000 ml y mezclar.
El pH de esta disolucin amortiguadora debe ser 7,2 sin el ajuste adicional.
5.3.2
Disolucin de sulfato de magnesio
Disuelva 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4 7H2O) en

agua. Diluir en 1 000 ml y mezclar.
5.3.3
Disolucin de Cloruro de calcio
Disolver 27,5 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) o equivalente (por

ejemplo, si se usa cloruro de calcio hidratado: 36,4 g CaCl2 2H2O) en agua.
Diluir en 1 000 ml y mezclar.
5.3.4
Disolucin de cloruro frrico (III)
Disuelva 0,25 g de cloruro frrico (III) (FeCl3 6H2O) en agua. Diluir en 1 000
ml y mezclar.
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5.4
Agua de dilucin
Aadir a unos 500 ml de agua, 1 ml de cada una de las disoluciones de sal

(5.3.1, 5.3.2, 5.3.3 y 5.3.4). Diluir a 1000 ml y mezclar. Llevar la disolucin
as obtenida, a una temperatura de 20 C 2 C y mantener a esta
temperatura; aerear por lo menos 1 h utilizando un equipo adecuado. Tome
todas las precauciones para no contaminarla (6,8), en particular, por la adicin
de materia orgnica, metales, oxidantes o la reduccin de las sustancias, a fin
de garantizar que la concentracin de oxgeno disuelto es por lo menos 8 mg/l.
El agua no ser sobresaturada con oxgeno: dejar reposar 1 hora en un
contenedor destapado antes de su uso. Utilice esta disolucin dentro de las 24
h de la preparacin y deseche cualquier disolucin restante, a menos que la
experiencia del laboratorio y/o los valores del control demuestren que el agua
es aceptable por un plazo ms largo.
5.5
Agua de dilucin inoculada (inoculada)
Agregue, dependiendo de su fuente, de 5 ml a 20 ml del agua inoculada

(inoculada) (5.2) por litro del agua de dilucin (5.4). Almacene el agua de
dilucin obtenida en aproximadamente 20 C 2 C. Preparar inmediatamente
antes de su uso y desechar cualquier resto de disolucin al final de la jornada
de trabajo, a menos que la experiencia del laboratorio y/o los valores del
control (8.5) demuestren que el agua inoculada de dilucin es aceptable por un
plazo ms largo.
La concentracin total de oxgeno consumido durante n das, a 20 2 C por
el agua de dilucin, que es el valor blanco (8.3), no exceder 1,5 mg/l.
5.6 Disolucin de cido clorhdrico (HCl) o cido sulfrico (H2SO4), c(H2SO4)
0,25 mol/L, c(HCl) 0,50 mol/l, o como sea apropiado.
5.7 Disolucin de hidrxido de sodio (NaOH) 20 g/l o como sea apropiado.
5.8 Disolucin de sulfito de sodio (Na2SO3) 50 g/l o como sea
apropiado.
5.9 Disolucin de control de glucosa-cido glutmico.
Secar D-glucosa (C6H12O6) y L-cido glutmico (C5H9NO4) a (105 5) C
durante 1 h. Pesar (150 1) mg de cada uno, disolver en agua, diluir a 1000
ml y mezclar. La demanda terica de oxgeno de esta disolucin es 307 mg/l
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de oxgeno [la DBO5 emprica es (210 20) mg/l de oxgeno y la DBO7 es (225
20) mg/l de oxgeno].
Preparar la disolucin inmediatamente antes de su uso y desechar cualquier
resto de disolucin al final de la jornada de trabajo. La disolucin tambin
puede ser congelada en pequeas cantidades. La disolucin descongelada se
utilizar inmediatamente despus de la descongelacin.
5.10
Disolucin de aliltiourea (ATU), = 1,0 g/l
Disolver 200 mg de aliltiourea (C4H8N2S) en agua, diluir a 200 ml y mezclar.

Guarde la disolucin a 4 C. La disolucin es estable durante al menos dos
semanas. Este compuesto es txico y por lo tanto debe manejarse con
cuidado.
6
EQUIPOS Y MATERIALES
La cristalera usada ser limpia, es decir libre de compuestos txicos o

biodegradables fijados por adsorcin, y ser protegida contra la contaminacin.
6.1
Botellas de incubacin
Botellas de DBO, con tapones, preferiblemente de la capacidad de 250 ml a

300 ml o 100 ml a 125 ml y, preferentemente, con los hombros rectos, o
cualquier botella equivalente.
Es importante que las botellas estn limpias antes de su uso. Si se utiliza el
mtodo iodomtrico para la determinacin de oxgeno disuelto, normalmente
es suficiente enjuagar el frasco varias veces con agua del grifo, a continuacin,
agua desionizada. Si se utiliza el mtodo de electrodos, se requiere, un
procedimiento de limpieza ms riguroso, por ejemplo, el siguiente. Aadir a la
botella vaca 5 ml a 10 ml de una disolucin de lavado (por ejemplo, 2,5 g de
yodo ms 12,5 g de yoduro potsico por litro del 1% (fraccin en volumen)
de cido sulfrico, agitando bien para cubrir las paredes de la botella). Deje
reposar durante 15 minutos, vierta la disolucin y enjuague con agua
desionizada y, por ltimo, agua. Puede utilizarse cualquier otro mtodo que
garantice su limpieza.
6.2
Recipiente, de vidrio o plstico con agua de dilucin
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ECONOMA
Debern tomarse medidas para garantizar que el recipiente se mantiene limpio

y libre de crecimiento de microorganismos. Compruebe que los recipientes de
plstico no causan valores de blanco elevados (8,3).
6.3
Incubadora capaz de mantenerse a (20 2) C.
6.4
Equipo para la determinacin de concentracin de oxgeno disuelto.
6.5 Medios de refrigeracin de 0 C a 4 C, para el transporte y el

almacenamiento de la muestra
6.6 Recipiente de dilucin, un frasco de vidrio con tapn de una capacidad que
depende del volumen de la muestra diluida utilizada, con graduaciones de
entre 2,5 ml y 10 ml, o cualquier recipiente apropiado para la dilucin.
6.7 Equipo de aereacin, por ejemplo, botella de aire comprimido o un
compresor.
La calidad del aire ser tal que la aereacin no dar lugar a cualquier tipo de
contaminacin, especialmente mediante la adicin de materia orgnica,
oxidacin de los materiales de reduccin, o metales. Si se sospecha la
contaminacin, el aire ser filtrado y lavado.
7
ALMACENAJE DE LA MUESTRA
Almacene la muestra de (0 a 4) C en una botella llena y tapada

hermticamente inmediatamente despus de la coleccin de la muestra y
hasta que se realice el anlisis. Comience la determinacin del DBOn tan
pronto como sea posible y dentro de 24 h de la terminacin de la coleccin de
la muestra. En relacin con la congelacin de muestras, vea los casos
especiales en el numeral 10.
Asegrese de que las botellas de la muestra no den lugar a valores de blanco
elevados.
8
PROCEDIMIENTO
8.1 Pretratamiento
8.1.1 Neutralizacin de la muestra
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SECRETARA DE
ECONOMA
Si el pH de la muestra despus de la dilucin no est entre 6 y 8, neutralizarlo,

despus de haber realizado la predilucin necesaria y despus de haber
determinado, por una prueba separada, el volumen de disolucin de cido
clorhdrico (5.6) o de disolucin de hidrxido sdico (5.7) necesario para ser
aadido. No haga caso de cualquier precipitado que se forme.
8.1.2
Presencia de cloro libre y/o combinado
Quite cualquier cloro libre y combinado de la muestra mediante la adicin del

volumen necesario de disolucin de sulfito de sodio (5.8). Tenga cuidado de
evitar la adicin en exceso.
8.1.3
Homogenizacin
La homogenizacin con un mezclador del laboratorio no se recomienda, pero se

considera su uso al probar una muestra que contiene partculas grandes y que
requiere un factor de dilucin alto.
Cuando las muestras se han congelado (vase numeral 10), homogenizar
despus de la descongelacin de las muestras.
8.1.4
Presencia de algas
Considere filtrar las muestras que contienen algas para evitar producir
resultados inusualmente altos, mediante un filtro de tamao de poro
apropiado. La filtracin puede cambiar resultados del DBO radicalmente y slo
se realizar si se considera necesaria en la evaluacin de la calidad del agua. Si
la filtracin fue realizada, el tamao del poro del filtro ser registrado en el
informe de la prueba.
Tabla 1 Diluciones tpicas para la determinacin de DBOn
DBOn Esperado
mg/L de oxgeno
3a6
4 a 12
10 a 30
20 a 60
40 a 120
100 a 300
200 a 600
400 a 1200
1000 a 3000
Factor de dilucina
Entre 1,1 y 2
2
5
10
20
50
100
200
500
Ejemplos de aguasb
R
R, E
R, E
E
S
S, C
S, C
L, C
L
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SECRETARA DE
ECONOMA
2000 a 6000
1000
L
Volumen de la muestra diluida / volumen de la porcin de prueba.
b
R:Agua de ro;
E: agua residual municipal Biolgicamente purificada;
S: agua residual municipal clarificada o efluente industrial ligeramente contaminado;
C: agua residual municipal cruda;
L: efluente industrial muy contaminado.
a
8.2
Preparacin de las disoluciones de prueba
Llevar la muestra (o la muestra pretratada) a una temperatura de (20 2) C

y si es necesario (dependiendo del origen de la muestra) agitar en un
recipiente medio lleno para eliminar cualquier sobresaturacin posible con
oxgeno.
Coloque un volumen conocido de la muestra (o muestra pretratada), la porcin
de ensayo, en el recipiente de dilucin (6.6), agregue 2 ml de disolucin de
aliltiourea (5.10) por litro de muestra diluida y llenar hasta la marca con agua
de dilucin inoculada (5.5). Si el factor de dilucin que debe utilizarse es
superior a 100, llevar a cabo diluciones seriadas en dos o ms pasos.
Mezclar suavemente para evitar el atrapamiento de burbujas de aire.
El consumo de oxgeno debe ser de al menos 2 mg/l y la concentracin de
oxgeno despus de la incubacin por lo menos 2 mg/l del grado de dilucin
debe ser tal que, despus de la incubacin, la concentracin del oxgeno
disuelto residual estar entre un tercio y dos tercios de la concentracin inicial.
Debido a la dificultad de seleccionar el grado de dilucin correcto, se
recomiendan diferentes diluciones, variando segn el factor de la dilucin y
abarcando la dilucin que corresponde al DBOn previsto (ver tabla 1).
Determinaciones del carbono orgnico total (COT), el ndice de permanganato,
o la demanda qumica de oxgeno (DQO) puede dar informacin til a este
respecto.
La tabla 2 presenta intervalos tpicos para R, relacin de DBOn con COT, ndice
de permanganato o DQO, dependiendo del tipo de muestra.
Tabla 2 Valores tpicos de la relacin R
carbono orgnico
ndice de
demanda qumica
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SECRETARA DE
ECONOMA
Agua residual no
tratada
Agua
residual
tratada
biolgicamente
total
DBO/COT
permanganato
de oxgeno
1,2 a 2,8
1,2 a 1,5
0,35 a 0,65
0,3 a 1,0
0,5 a 1,2
0,20 a 0,35
Un adecuado valor de R debe ser seleccionado de la tabla 2, para calcular el

valor esperado DBOn:
DBOn = R y
donde y es la demanda qumica de oxgeno, ndice de permanganato o el valor
de COT.
Se debe tener cuidado de que las muestras sean representativas.
Si se sospecha de la presencia de sustancias txicas para los microorganismos,
se deben hacer varias diluciones de la muestra. Si el resultado de DBO
depende de la dilucin, los resultados slo pueden presentarse si no hay
dependencia de la dilucin. Multipruebas (ver Anexo B) pueden aplicarse en
esta situacin.
NOTA 1. En algunas muestras puede presentarse inhibicin por cloro incluso
despus de la supuesta eliminacin, debido a productos del cloro que no son
eliminados.
NOTA 2. La desnitrificacin no es factible en todos los casos. Un incremento
significativo de la adicin de ATU por encima de 2 mg/l puede afectar a la
valoracin Winkler.
8.3
Prueba de blanco
Llevar a cabo un ensayo en blanco en paralelo con la determinacin, usando el

agua de dilucin inoculada (5,5) incluyendo 2 mg de disolucin de ATU (5.10)
por litro.
8.4
Procedimiento
8.4.1
Medicin del oxgeno disuelto usando el mtodo yodomtrico.
13/24
SECRETARA DE
ECONOMA
Usando cada dilucin (8.2), llene dos botellas de incubacin (6.1), permitiendo
que desborden levemente. Durante el llenado, se tomarn precauciones para
evitar el cambio del contenido de oxgeno del medio.
Permitir que cualquier burbuja de aire adherida a las paredes se escape. Tapar
las botellas, teniendo cuidado para evitar la captura de burbujas de aire.
Dividir las botellas en dos series, cada botella con una dilucin y por lo menos
una botella de disolucin de blanco.
Ponga la primera serie de botellas con las disoluciones de prueba diluida (8.2)
en la incubadora (6.4) y dejar en la oscuridad por n das 4h.
En la segunda serie de botellas con las disoluciones diluidas de la prueba, mida
la concentracin de oxgeno disuelto en el tiempo cero, usando el mtodo de la
adicin de azida.
Despus de la incubacin, determine la concentracin de oxgeno disuelto en
cada una de las botellas.
8.4.2
Medicin de oxgeno disuelto utilizando la sonda electroqumica.
Usando cada dilucin (8.2), llenar las botellas de incubacin (6.2), permitiendo
que desborden levemente. Se tomarn precauciones para evitar el cambio del
contenido de oxgeno del medio.
Permitir que cualquier burbuja de aire adherida a las paredes se escape.
Mida la concentracin de oxgeno disuelto en cada una de las botellas en el
tiempo cero.
Tapar las botellas, teniendo cuidado para evitar la captura de burbujas de aire.
Poner las botellas con las disoluciones de prueba diluida (8.2) en la incubadora
(6.3) y dejar en la oscuridad por n das 4h.
Despus de la incubacin, determine la concentracin de oxgeno disuelto en
cada uno de las botellas.
8.5 Anlisis del control
Para comprobar el agua de dilucin inoculada, el agua inoculada y la tcnica
del analista, realizar un control por cada lote de muestras poniendo 20 ml de la
disolucin de control glucosa- cido glutmico (5.9) en el recipiente de
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ECONOMA
dilucin, agregando 2 ml de la disolucin de ATU (5.10) seguidos por la

dilucin a 1 000 ml con el agua inoculada de dilucin (5.5) y proceder segn lo
descrito en 8.4.
El DBOn obtenido debe estar dentro del intervalo (210 40) mg/l de oxgeno
para el DBO5 y dentro del intervalo (225 40) mg/l de oxgeno para el DBO7,
correspondiendo al intervalo del valor medio 2 del valor medio que
determina la desviacin estndar de los datos de interlaboratorios (ver clusula
10). Los lmites de control exactos para cada laboratorio sern establecidos
realizando un mnimo de 25 determinaciones durante varias semanas. La
media y la desviacin estndar pueden ser utilizadas para el clculo de lmites
de control para controles de calidad. Si no es as, comprobar el agua inoculada
y, en caso necesario, la tcnica del analista
La prueba en blanco (8.3) no exceder 1,5 mg/l de oxgeno; si es as
compruebe las fuentes posibles de contaminacin.
9
9.1
CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

Medicin del consumo de oxgeno vlido durante la prueba
DBOn se calcula para las disoluciones de prueba, cuando se cumpla la

condicin siguiente:
Donde:
1 es la concentracin de oxgeno disuelto de una de las disoluciones de la

prueba en el tiempo cero, en miligramos por litro;
2 es la concentracin de oxgeno disuelto de esta misma disolucin de la

prueba despus de n das, en miligramos por litro.
9.2
Clculo de la demanda bioqumica de oxgeno despus de n das (DBOn)
Calculo de la demanda bioqumica de oxgeno (DBOn), expresada en

miligramos por litro de oxgeno, usando la ecuacin:
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ECONOMA
Donde:
1 y 2 ver 9.1.
3 es la concentracin de oxgeno disuelto de la disolucin de blanco en el
tiempo cero, en miligramos por litro.
4 es la concentracin de oxgeno disuelto de la disolucin de blanco despus

de n das, en miligramos por litro.
Vsam es el volumen de muestra utilizada para la preparacin de la disolucin de

ensayo en cuestin, en mililitros;
Vt es el volumen total, en mililitros, de esta disolucin de ensayo.
Si varias diluciones caen dentro del intervalo requerido, calcular la media de
los resultados obtenidos para estas diluciones.
Los resultados se expresarn en miligramos de oxgeno por litro y siempre en
nmeros enteros. Resultados de menos de 10 mg/l de oxgeno se informaran
al valor ms cercano en mg/l. Resultados entre 10 mg/l de oxgeno y 1000
mg/l de oxgeno se informaran con dos cifras significativas.
Resultados por encima de 1000 mg/l debern ser comunicados a tres cifras
significativas, por ejemplo, 1240 mg/l de oxgeno.
Los resultados de los ensayos interlaboratorios sobre la exactitud
repetibilidad y reproducibilidad de los resultados se indican en el Anexo C.
10
CASOS ESPECIALES
Si el tiempo transcurrido entre la toma de muestras y el inicio del anlisis no

puede limitarse a menos de 24 h, debido al tiempo de transporte, como
resultado de circunstancias geogrficas, se permite la congelacin de las
muestras. Muestras congeladas sern homogeneizadas despus de la
descongelacin, y el agua de inculo se utilizar en todos los casos. Se
recomienda que, siempre que sea posible, las instalaciones de laboratorio se
encuentren en donde se pueda limitar el tiempo de transporte.
11 REPORTE DE PRUEBAS
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ECONOMA
El reporte de pruebas incluir la siguiente informacin:

a)
b)
c)
d)
Referencia a esta norma mexicana

especificacin que la prueba fue realizada con la desnitrificacin;
el nmero de das de incubacin (n);
el resultado, en miligramos por litro de oxgeno (reportado como se
describe en el numeral 9.2);
e) para los resultados debajo del intervalo de trabajo, una documentacin
para un adecuado lmite de deteccin;
f) cualquier detalle especial que se pudo haber observado durante la
prueba;
g) los detalles de cualquier operacin no especificada en esta norma
mexicana, o considerada como opcional, por ejemplo la filtracin
(8.1.4), la congelacin y la homogeneizacin (ver clusula 10),
incubacin alternativa (DBO2+5) (ver Anexo A), y multipruebas (ver
Anexo B)
12 VIGENCIA
La presente Norma Mexicana entrar en vigor 60 das naturales despus de la
publicacin de la declaratoria de vigencia en el Diario Oficial de la
Federacin.
13 BIBLIOGRAFA
13.1 ISO 5815-1: 2003.- Water quality Determination of biochemical
oxygen demand after n days (DBOn) Part 1: Dilution and seeding method
with allylthiourea addition
13.2 ISO 6107-2:1997, Water quality Vocabulary Part 2
13.3 ISO 7393-1:1985, Water quality Determination of free chlorine and
total chlorine Part 1: Titrimetric method using N,N-diethyl-1,4phenylenediamine
13.4 ISO 7393-2:1985, Water quality Determination of free chlorine and
total chlorine Part 2: Colorimetric method using N,N-diethyl-1,4phenylenediamine, for routine control purposes
13.5 ISO 9408:1999, Water quality Evaluation of ultimate aerobic
biodegradability of organic compounds
in aqueous medium by determination of oxygen demand in a closed
respirometer
17/24
SECRETARA DE
ECONOMA
13.6 R.G. TYERS and R. SHAW, J. IWEM, 3, 1989, pp. 366-374

14 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES
Esta norma mexicana coincide totalmente con la norma internacional ISO
5815-1: 2003.- Water quality Determination of biochemical oxygen demand
after n days (DBOn) Part 1: Dilution and seeding method with allylthiourea
addition.
Mxico D. F., a
DR. FRANCISCO RAMOS GMEZ

DIRECTOR GENERAL DE NORMAS
APNDICES INFORMATIVOS
Anexo A
Mtodos alternativos de incubacin (informativo)
El ndice de oxidacin de carbono durante la primera etapa de la prueba de
DBO se expresa por la ley de Phelps:
Donde:
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L es el ltimo DBO en tiempo infinito, en miligramos por litro de oxgeno;

X es el DBO en tiempo t, en miligramos por litro de oxgeno;
t es el tiempo en das;
k es la constante de proporcin, expresada como el reciproco del da.
Para un determinado tipo de materia orgnica y de semilla microbiana
(inculo), el efecto de la temperatura sobre la constante de proporcin k y
sobre el valor de L se pueden predecir para una primera aproximacin. Esto
puede ser til cuando se considera el uso de la prueba de DBO en los climas
calurosos, o en los estudios de ros largos que atraviesan un nmero de
regiones climticas. Es esencial que esas relaciones sean, sin embargo,
utilizadas con precaucin.
El resultado normal del DBO se obtiene despus de una incubacin de cinco
das o de siete das a (20 2) C.
Se han obtenido resultados por incubacin durante 2 das de (0a 4) C
seguido por 5 das a (20 2) C, de una DBO2+5. Se ha observado [3] que no
hay diferencia significativa entre una muestra de dilucin DBO5 y DBO2+5.
Esta tambin fue investigada en una comparacin interlaboratorios europea
realizada en 1992 con 95 participantes de 11 pases. La correlacin entre las
determinaciones DBO5 y DBO7 y las determinaciones DBO5 y DBO2+5 fueron
medidas. Los resultados de estos ltimos se presentan en la tabla A.1.
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Tabla A.1 Comparacin interlaboratorios de DBO5 y DBO

Tipo de muestra
DBO5
Valor
de
mediana mg/l
oxgeno
Valor
de
DBO2+5
mediana mg/l
oxgeno
Diferencia
significativa
DBO5a
Nmero
laboratorios
a
nivel de significancia =
Glucosa/disolu
cin
cido
glutmico
Agua residual
tratada
mecnicamente
2+5
Agua residual
tratada
biolgicamente
la
de
203
184
58
46
18,2
17,2
la
de
201
180
58
46
18,1
17,2
de
No
No
No
No
No
No
de
91
85
89
86
89
87
0,05
En la prctica no hay diferencia entre los resultados de DBO5 y DBO
2+5.
Al determinar DBO2+5, agregar 8.4.1 con la modificacin del prrafo 4 de la

manera siguiente:
"Poner la primera serie de botellas con las disoluciones diluidas de la prueba
(8.2) en la oscuridad a (0 a 4) C durante 2 das 2 h) y, a continuacin,
ponerlos en la incubadora (6.4) y dejar en la oscuridad con la temperatura de
la dilucin equilibrada a (20 2) C durante 5 das 4 h)".
y agregue el numeral 8.4.2 con la alteracin del prrafo 5 como sigue:
Poner las botellas con las disoluciones diluidas de la prueba (8.2) en la
oscuridad a (0 a 4) C para 2.d 4 h) y a continuacin pngalas en la
incubadora (6.4) y djelas en la oscuridad con la temperatura de las diluciones
equilibrada en (20 2) C por 5 d 4 h).
Cuando las determinaciones DBO5 son substituidas por las determinaciones
DBO2+5, es necesario que el laboratorio verifique que su procedimiento para las
determinaciones DBO2+5 de resultados equivalentes a las determinaciones
DBO5.
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SECRETARA DE
ECONOMA
Anexo B
Multiprueba (informativo)
Multiprueba es el anlisis de una muestra en dos o ms diluciones diferentes.
Este procedimiento se puede utilizar si se desea una mayor repetibilidad y
reproducibilidad, o si hay sospechas de la presencia de sustancias txicas para
los microorganismos.
La muestra se analiza como en 8.4, con la excepcin de que una botella extra
se llena para cada una de las muestras de dilucin, y que dos botellas de DBO
se incuban.
El consumo de oxgeno durante la incubacin se determina para cada botella
de DBO y se traza contra el volumen de la muestra en cada dilucin.
El consumo de oxgeno de la prueba en blanco se representa como el valor de
volumen cero.
Si el consumo de oxgeno en contra del volumen de la muestra es lineal, el
DBOn no contiene componentes que inhiben a los microorganismos.
Si el consumo de oxgeno en contra del volumen de la muestra es lineal slo
para concentraciones bajas de la muestra, slo las diluciones de la muestra en
el rango lineal se pueden utilizar para determinar DBOn
El DBOn se calcula como en la clusula 9, y es el valor medio de todas las
determinaciones en el rango lineal.
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Anexo C
Exactitud y repetibilidad y reproducibilidad (informativo)
La exactitud y la desviacin estndar de repetibilidad y reproducibilidad del anlisis de la DBOn se determinaron por
una comparacin interlaboratorios en 1992. En este ejercicio, tres pares de muestras fueron analizadas por 95
laboratorios en 11 pases. Los resultados se muestran en el cuadro C.1.
Tabla C.1 Resultados de la comparacin de interlaboratorios
Mediana
mg/l de
oxgeno
Reproducibilid
ad
Desviacin
estndar
mg/l de
oxgeno
203
22
184
19
58,3
7,7
46,0
5,0
18,2
4,5
17,2
3,7
Calculado
Valor/difer
encia
mg/l de
oxgeno
Muestra
DBO5
Glucosa/disolucin A
cido glutmico
Glucosa/disolucin B
cido glutmico
Agua residual tratada
mecnicamente
mecnicamente
biolgicamente
biolgicamente
199
19
180
Promedio de
diferencias
mg/l de
oxgeno
Repetibili
dad
Desviaci
n
estndar
de
diferenci
a
mg/l de
oxgeno
18
11
Nmer
o de
resulta
dos
Aislad
os
91
95
95
22/24
SECRETARA DE
ECONOMA
DBO2
a
+5
DBO7
Glucosa/disolucin A
cido glutmico
Glucosa/disolucin B
cido glutmico
mecnicamente
mecnicamente
biolgicamente
biologicamente
Glucosa/disolucin A
cido glutmico
Glucosa/disolucin B
cido glutmico
mecnicamente
mecnicamente
biolgicamente
biologicamente
201
24
180
24
58,0
8,9
45,5
6,0
18,1
4,9
17,2
4,2
210
22
190
19
64,4
8,6
51,6
6,7
19,3
5,0
17,8
4,3
199
19
180
199
19
180
-17
19
11
13
88
90
91
88
91
92
Ver anexo A
Es posible establecer factores de conversin entre datos de DBO5 y DBO7 dentro de un mismo tipo de agua. El valor
de los factores de conversin pueden ser obtenidos a partir de anlisis paralelos de DBO5 y las mediciones de DBO7
de las mismas muestras. Si un factor no est disponible la correlacin entre DBO5 y DBO7 se puede estimar a partir
de los resultados de la mencionada comparacin interlaboratorios Europea. Los resultados se muestran en el cuadro
C.2.
La repetibilidad y reproducibilidad del anlisis de DBOn se puede mejorar, si es necesario, por multipruebas (vase
el Anexo B).
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SECRETARA DE
ECONOMA
Tabla C.2 Comparacin interlaboratorios de DBO5 y DBO7

Tipo de muestra
Glucosa/disolucin B
cido glutmico
Agua
residual
Mecnicamente
tratada
Agua
residual
biolgicamente
tratada
DBO5
mg/L
oxgeno
de
DBO7
mg/L
oxgeno
de
Diferencia
significante
Nmero
de
laboratorios
DBO7/DBO5
A
B
203
184
210
190
Si
Si
90
87
1,04
1,03
C
D
58
46
64
52
Si
Si
88
88
1,10
1,12
E
F
18,2
17,2
19,3
17,8
Si
Si
87
89
1,06
1,03
nivel de significancia = 0,05

Proy NMX Aa 028 1 Scfi 08

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SECRETARA DE

PROYECTO DE NORMA MEXICANA

- SERVICIOS DE INGENIERA Y CONSULTORA AMBIENTAL

NDICE DEL CONTENIDO

PROYECTO DE NORMA MEXICANA

Los tiempos de incubacin especificados en esta norma mexicana son 5 das,

un perodo de incubacin de 7 das, las muestras recogidas en los primeros

Calidad del agua - determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno

OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta norma mexicana especfica una determinacin de la demanda bioqumica

El Anexo C proporciona datos de exactitud y repetibilidad y reproducibilidad.

Para la correcta aplicacin de la presente norma mexicana, se deben consultar

Para los propsitos de este documento, aplican los siguientes trminos y

Concentracin total de oxgeno disuelto consumido bajo condiciones especficas

Es absolutamente esencial que los ensayos realizados de acuerdo con esta

Utilizar exclusivamente reactivos de calidad analtica reconocida.

Agua, agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

El agua no deber contener ms de 0,01 mg/l de cobre, ni de cloro o

Si la muestra no contiene suficientes microorganismos adaptados;

El agua de dilucin se obtendr de una de las siguientes maneras:

parte 1 y 2), o COT 100 mg/l (carbono orgnico total, medido de

5.3 Disoluciones de sal, almacenados en botellas de vidrio de (0 a 4) C en la

Disolucin amortiguadora de fosfato, pH 7,2

Disolver 8,5 g de fosfato monobsico de potasio (KH2 PO4), 21,75 g de fosfato

Disolucin de sulfato de magnesio

Disuelva 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4 7H2O) en

Disolucin de Cloruro de calcio

Disolver 27,5 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) o equivalente (por

Disolucin de cloruro frrico (III)

Aadir a unos 500 ml de agua, 1 ml de cada una de las disoluciones de sal

Agua de dilucin inoculada (inoculada)

Agregue, dependiendo de su fuente, de 5 ml a 20 ml del agua inoculada

Disolucin de aliltiourea (ATU), = 1,0 g/l

Disolver 200 mg de aliltiourea (C4H8N2S) en agua, diluir a 200 ml y mezclar.

La cristalera usada ser limpia, es decir libre de compuestos txicos o

Botellas de DBO, con tapones, preferiblemente de la capacidad de 250 ml a

Recipiente, de vidrio o plstico con agua de dilucin

Debern tomarse medidas para garantizar que el recipiente se mantiene limpio

Incubadora capaz de mantenerse a (20 2) C.

Equipo para la determinacin de concentracin de oxgeno disuelto.

6.5 Medios de refrigeracin de 0 C a 4 C, para el transporte y el

Almacene la muestra de (0 a 4) C en una botella llena y tapada

Si el pH de la muestra despus de la dilucin no est entre 6 y 8, neutralizarlo,

Presencia de cloro libre y/o combinado

Quite cualquier cloro libre y combinado de la muestra mediante la adicin del

La homogenizacin con un mezclador del laboratorio no se recomienda, pero se

Preparacin de las disoluciones de prueba

Llevar la muestra (o la muestra pretratada) a una temperatura de (20 2) C

Un adecuado valor de R debe ser seleccionado de la tabla 2, para calcular el

Llevar a cabo un ensayo en blanco en paralelo con la determinacin, usando el

Medicin del oxgeno disuelto usando el mtodo yodomtrico.

Medicin de oxgeno disuelto utilizando la sonda electroqumica.

dilucin, agregando 2 ml de la disolucin de ATU (5.10) seguidos por la

CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

DBOn se calcula para las disoluciones de prueba, cuando se cumpla la

1 es la concentracin de oxgeno disuelto de una de las disoluciones de la

2 es la concentracin de oxgeno disuelto de esta misma disolucin de la

Clculo de la demanda bioqumica de oxgeno despus de n das (DBOn)

Calculo de la demanda bioqumica de oxgeno (DBOn), expresada en

4 es la concentracin de oxgeno disuelto de la disolucin de blanco despus

Vsam es el volumen de muestra utilizada para la preparacin de la disolucin de

Si el tiempo transcurrido entre la toma de muestras y el inicio del anlisis no

El reporte de pruebas incluir la siguiente informacin: