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toluene sec (tamis moleculaire 4A et filtre) dans 88,0 ml de methanol sec (tamis
moleculaire 3A et filter). A jouter ensuite 2.2 ml d acide sulfurique 98% (d=1,84)
(attention aux risques de projections) . Conserver le reactif dans un flacon
hermetiquement bouche, a 4C et a lobscurite. utiliser un reactif frais (moins dune
semaine)
tube et le joint PTFE et rajouter du methanol sec. passer les tubes au vortex
pendant 10 sec . toutes les 30 minutes
5. Laisser refroidir les tubes pendant 5 min. pour chaque tube , purger le
distributeur et ajouter 5 ml d hexane (distributeur 5 ml), vortex pendant 10
sec. tube ouvert, et transfert direct dans un tube a centerifuger conique 34
mm (serie A). Ajouter a nouveau 5 ml d hexane , vortex pendant 5 sec, et
transfert dans le meme tube a centrifuge.
6. Purger le distributeur et ajouter 10 ml de NaCl 10% (distributeur 10 ml) au
contenu des tubes a centrifuge (agiter le flacon avant emploi) .boucher
fermemnt vortex pendant 55 sec . et laisser reposer jusqua ce que les deux
phases soient claires(15min. normalement).centrifuger 5 min -1000 g
(2300t/min.)a 10 c si necessaire
7. Transferer par aspiration la totalite des phases inferieures dans dautres tubes
a centrifuger coniques 34mm (serieB ). laisser les tubes serie A ouverts
8. Ajouter 2*5ml d hexane (distributeur 5 ml)au contenu des tubes a centrifuger
serie B pour recuperer le reste des EMAG presents dans la phase
inferieure. Boucher fermement vortex pendant 25 sec. et laisser
reposer jusqu a ce que les deux phases soient claires (10 min.
normalement). Centrifuge 5 min. 1000 g (2300 t/min.) a 10C si
necessaire.
9. Transferer par aspiration les phases inferieures continues dans les
tubes a centerifuger serie B dans une bouteille dont le contenu sera
jete. Prendre un minimum de phase superieure organique des tubes.
10.Transferer par aspiration les phases organiques des tubes a
centrifuge serie B aux tubes a centrifuge serie A correspondants.
11.Purger le distributeur et ajouter 10 ml de NaHCO3 1% (distributeur 10 ml) au
contenu des tubes a centrifuge serie A pour neutraliser l acidite residuelle .
Boucher, vortex pendant 5 sec .et laisser reposer jusqu a ce que les deux
phases soient claires (5 min normalement)
12.Transferer par aspiration les phases inferieures continues dans les
tubes
a centrifugeur serie A dans une bouteille dont le contenu sera jete.
Prendre um minimum de phase superieure organique des tubes.
13.Centrifuge 5 min.-1000 g (rayon de rotation 17 cm : 2300 t /min.) a
10C et aspirer leau residuelle et les residus presents au fond des
tubes dans une bouteille dont le contenu sera jete. Prendre un
minimum de phase superieure organique des tubes.
14.Transferer par aspiration les phases organiques restantes dans des
tubes 16*150 mm numerotes. Eviter d aspirer les residus restant au
fond des tubes. Boucher hermetiquement les tubes sans forcer, et
stocker au dessous de -20C
4% H2SO4 in methanol:Toluene 90: 10 (500 ml): for 100 ml: Add 9.8 ml of dry
toluene (molecular 4A and filter screens) to 88.0 ml of dry methanol (molecular 3A
and filter screens). A then add 2.2 ml sulphuric acid d 98% (d = 1, 84) (pay
attention to the risk of projections). Keep the reagent in a sealed bottle mouth, 4 c
and dark. use a fresh reagent (less dune week)
6 purge the Distributor and add 10 ml of 10% NaCl (dispenser 10 ml) to the
contents of the tubes a centrifugal (shake the bottle before use) .boucher
fermemnt vortex for 55 seconds. and let it sit until the two phases are
expected to be claires(15min._normalement).centrifuger 5 min - 1000 g
(2300 RPM) a 10 c if necessary
7 transfer by suction all the phases below in other tubes a centrifuge conical 34
mm (serieB). leave the open series A tubes
8 add 2 * 5 ml d hexane (distributor 5 ml) to the contents of the tubes a
centrifuge series B to retrieve the rest of present in the phase EMAG
inferior. Firmly plug vortex for 25 sec. and let stand until the two
phases are clear (10 min. normally). Centrifugal 5 min. 1000 g (2300
RPM) a 10 c if necessary.
9 transfer by suction phases continuous lower in a centerifuger series B
in a bottle gift tubes' content will be thrown. Take a minimum of
phase organic tube top.
10 transfer by suction organic phases of a centrifuge tubes tubes series
B has centrifugal series matching A.
11 purge the Distributor and add 10 ml of NaHCO3 1% (10 ml dispenser) content
tubes has centrifugal series A to neutralize l residual acidity. Boucher, vortex
for 5 seconds .and let stand until has the two phases are clear (normally 5
min)
12 transfer by suction phases continuous lower into the tubes
centrifuge series A in a bottle whose contents will be thrown. Take
minimum phase um organic top of the tubes.
13 centrifugal 5 min.-1000 g (17 cm: 2300 t/min. Turning RADIUS) a 10 c
and aspirate residual water and residue present at the bottom of the
tubes in a bottle whose contents will be thrown. Take a minimum of
phase organic tube top.
14 transfer by suction remaining organic phases in 16 * 150 mm
numbered tubes. Avoid d pick up remaining residue at the bottom of
the tubes. Boucher sealed tubes without force, and store below-20 c
4% H2SO4 in methanol: 90:10 Toluene (500 ml): 100 ml: Add 9.8 ml of dry toluene
(molecular sieves 4A and filter) in 88.0 ml of dry methanol (molecular sieve 3A and
filter). A jousting then 2.2 ml of 98% sulfuric acid (d = 1.84) (attention to the risk of
splashes). Keep the reagent in a bottle mouth tightly, 4C and the dark. use a fresh
reagent (less than a week)