VALIDACIN DE MTODOS

ANALTICOS
alzaterosalba@yahoo.es

www.who.int/medicines/publications/pharmprep/en
1 de 83

Validacin
Objetivos
Introducir los conceptos de :
Desarrollo del protocolo
Calificacin de instrumento
Procedimiento analtico
Extensin de la validacin
Transferencia de mtodos
Validacin de ensayos qumicos, fsicos,
biolgicos y microbiolgicos
2 de 83

VALIDACION: Accin
documentada que
demuestra que un
procedimiento, proceso,
equipo, material, actividad
o sistema conduce
realmente a los resultados
previstos ANMAT
El objetivo de la
validacin de un
procedimiento analtico es
demostrar que es apto para
el propsito indicado.
ICH Guideline Q2A R1
Text on Validation
of
Analytical Procedures

Validacin
de un
mtodo
analtico
definicin
Es el proceso por el cual se
demuestra que los
procedimientos analticos
son aptos para el uso
indicado.

Es el proceso por el cual

se establece, mediante
estudios de laboratorio,
que las caractersticas de
desempeo del mtodo
cumplen con los
requisitos para las
aplicaciones analticas
previstas.
USP 32NF 27, Captulo General
<1225>
Validacin de mtodos
farmacopicos

FDA draft guidance

Analytical Procedures and
Methods Validation
3 de 83

Validacin de un mtodo
analtico
En un mtodo analtico
podemos identificar

Caractersticas
Analticas
tpicas en la
validacin

Componentes
de calidad de
datos
analticos

Componentes
del proceso

4 de 83

Caractersticas Analticas tpicas

en la validacin
Linealidad
Especificidad/
Selectividad

Sensibilidad

Precisin
Exactitud

Intercepto
Pendiente
Capacidad para discriminar
Detectar factores de degradacin

Limite de Deteccin
Lmite de cuantificacin
Repetitividad
Reproducibilidad
Robustez
Factor de recuperacin

5 de 83

Componentes de calidad de datos

analticos
Verificacin del CC (calibracin,
materiales de referencia)`

Pruebas de aptitud
del sistema

Calificacin de los
instrumentos analticos

Validacin de los
mtodos analticos

6 de 83

Componentes del Proceso de

validacin

Analista

equipo
instrumental

mtodo

7 de 83

Equipo instrumental
Calificacin
del DyD del
mtodo
(DQ)

Etapas de
calificacin

Calificacin
de
instalacin

DQ

(IQ)

(IQ)

Definir Disear

Ciclo de vida del

equipo/instrumento
Necesidad de
validacin

Calificacin
de
operacin
(OQ)

IQ/OQ

Instalar

Calificacin de
desempeo
(PQ)

PQ

(OQ/PV)

Preparar

Funciona
r

Instrumento

Mtodo
Soporte tcnico
Usuario del mtodo

Papel y
responsabilidad

Hacer

E
q
u
i
p
o

V
a
li
d
a
d
o

Validacin

Por qu es necesaria
la validacin analtica?

Generar confianza

Cul es el propsito
de la validacin
analtica?
Mtodos reproducibles,
y confiables
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Etapas de Validacin
Sitio del
Suplidor

Validacin
Estructural y
Software
ISO 9000

Sitio de Uso
Funcional

Cualificacin
IQ

OQ

PQ

Calibracin,
Mantenimiento
Pruebas de
Ejecutoria
OQ / PQ

DQ
Antes de Comprar

Sitio de Uso

Antes de Usar

Durante Uso

10 de 83

Cundo Validar ?
El mtodo analtico debe estar
normalizado
antes de iniciar el proceso
de validacin

11 de 83

Etapas para desarrollar

un mtodo analtico
1

Bsqueda
Bibliogrfica

Definir las
condiciones

Estandarizar
el mtodo

Oficiales
Publicaciones

Equipo
Reactivos
Muestreo

Encontrar
condiciones
ptimas
Practicidad
Idoneidad

4
12 de 83

Validacin de mtodos
analticos
Instrumentos
calificados

Analistas
calificados

Mtodos
Documentados

Integridad de
la muestra

Patrones de
referencia
confiables

Plan maestro
de validacin
13 de 83

Plan maestro de validacin debe

incluir:
D
O
C
U
M
E
N
T
A
C
I

Proveedores

Calibracin
Calificacin

Mantenimiento

Buenas Prcticas de
Laboratorio
Auditorias
internas

Acciones
Correctivas y
preventivas

Monitoreo

Fisicoqumico

Microbiolgico
14 de 83

Validacin de mtodos
analticos
Protocolo de validacin para mtodo
analtico debe especificar:

El propsito y el alcance
Responsabilidades y competencias del
equipo de trabajo
Mtodo de ensayo normalizado y
documentado (los pasos del mtodo no
pueden ser modificados durante la
validacin)

15 de 83

Protocolos de validacin

Lista de materiales y equipos

Las caractersticas de desempeo que se

evaluarn (especificidad, linealidad, etc)

y el Procedimiento para evaluarlas.
experimentos para cada parmetro)
Anlisis estadstico o frmulas
Criterio de aceptacin para cada parmetro
de desempeo (los criterios de aceptacin
no pueden ser cambiados para ajustarse a
los datos)
16 de 83

Validacin de mtodos
analticos
Calificacin del instrumento

Marca, modelo y manual del fabricante

Modificaciones

Calificacin de la instalacin y de la
operacin

Programas de calibracin

Cronogramas de mantenimiento

17 de 83

Diferentes clases de ensayos

analticos

Clase A: Para establecer identidad

Clase B: Para detectar y cuantificar

impurezas

Clase C: Para determinar

cuantitativamente la concentracin

Clase D: Para evaluar las

caractersticas, disolucin,
uniformidad de contenido
Clasificacin OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validacin de
mtodos analticos, anexo 4 informe 40/2006)

18 de 83

Parmetros requeridos para la

Validacin OMS
C
A
B
B
Caracterstica
Cuantitativas
lmite
Identificacin
lmite
cuantitativa

cualitativa

producto
terminado

D
caractersticas

Exactitud

X*

Precisin

Robustez

Linealidad e intervalo

Especificidad selectividad X

Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin

X
X

* Se puede permitir un grado de desviacin

Categoras A,B,C,D segn OMS, La USP las clasifica como categora I, II, III, IV
19 de 83

TABLA ICH Q2A

Test de impurezas

Tipo de procedimiento
analtico
Caractersticas

Identificacin

Exactitud

Repetitividad
Precisin
intermedia

+
+

+
+

Especificidad (2)

Lmite de deteccin

- (3)

Linealidad

Rango

Cuantitativo

Test Lmite

Ensayo
Medida disolucin
Contenido/
potencia

Precisin

Lmite de
cuantificacin

(1)

Significa no se evala normalmente

(1)

(1)

+ se evala normalmente

Si se hace reproducibilidad, no es necesario precisin intermedia (2) La especificidad de un procedimiento

analtico puede ser compensada con soporte de otros POES analticos (3) Puede ser necesario en algunos
casos

20 de 83

Parmetros requeridos para la Validacin

USP 34
Caractersticas de
Desempeo analtico

Categora I
de
valoracin
Prod.Termi.
Graneles,
conservante

Categora II de valoracin
Prueba de
lmite
Cuantitativa
(impurezas en
frmacos)

Prueba de lmite
Cualitativa
(metales pesados,
etc.)

Categora III de
valoracin
(caractersticas
de desempeo,
disolucin)

Categora IV
de valoracin
(pruebas de
identificacin)

Exactitud

SI

SI

NO

Precisin

SI

SI

NO

SI

NO

Especificidad

SI

SI

SI

SI

Lmite de deteccin

NO

NO

SI

NO

Lmite de
cuantificacin

NO

SI

NO

NO

Linealidad

SI

SI

NO

NO

NO

Intervalo

SI

SI

* Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza de la prueba especfica

21 de 83

Extensin de la validacin

Mtodos nuevos requieren validacin

completa
Mtodos de Farmacopea o referencias
oficiales, requieren validacin parcial
(o verificacin)
Cambios significativos implican
revalidacin parcial
cambios de equipo
cambios de frmula
cambios de proveedores de
reactivos crticos

22 de 83

Transferencia de mtodos
analticos

Protocolo y procedimiento del mtodo de

transferencia
precisin

exactitud
Robustez

Mtodo cientfico escrito y aprobado

Verificacin de la competencia
Aceptacin formal por el nuevo
laboratorio

23 de 83

Caractersticas generales de
desempeo
Especificidad

(USP 34 ) Selectividad (ICHQ 2A)

Linealidad
Intervalo
Lmites de deteccin

Lmites de cuantificacin

Exactitud
Precisin

Reproducibilidad
Tolerancia, fortaleza
o resistencia. USP 34

Robustez
Aptitud del sistema

24 de 83

ESPECIFICIDAD y SELECTIVIDAD
ICH Q2A y USP 34 (United States Pharmacopeia):
La capacidad de evaluar en forma inequvoca al
analito en presencia de los componentes cuya
presencia cabra esperar, tales como impurezas,
productos de degradacin y componentes de la
matriz. La falta de especificidad de un
procedimiento analtico individual puede
compensarse mediante otros procedimientos
analticos de apoyo.

La IUPAC, AOAC prefieren el trmino

selectividad
25 de 83

Especificidad y Selectividad

Se utiliza en :
Identificacin: garantizar la identidad del analito
Pruebas de pureza: declaracin exacta del
contenido de impurezas de un analito
(sustancias relacionadas, metales pesados,
disolventes residuales, etc.)
Valoracin: un resultado exacto que permite la
declaracin exacta del contenido o potencia del
analito en la muestra
En anlisis cualitativos: Debe tener la capacidad
de distinguir compuestos de estructura
estrechamente relacionada (productos de
degradacin)
USP
32
26 de 83

caso 1 Productos relacionados

Especificidad

(USP 32 ) Selectividad (ICH)

Muestra del
frmaco XX

Enantimero
estndar

27 de 83

caso 1 Productos de degradacin

Especificidad

Selectividad

(USP 34)

(ICH)

Muestra del
frmaco XX bajo
condiciones
forzadas

28 de 83

En un procedimiento analtico para

impurezas, la especificidad se puede
establecer:

Si se dispone de impurezas la especificidad puede

establecerse por adicin.
Se agregan cantidades conocidas (del frmaco o
producto farmacutico) con niveles adecuados de
impurezas y/o excipientes

Comparacin con muestras sin agregado de cantidades

conocidas
El resultado de la valoracin no se ve afectado por la
presencia de estos materiales: un resultado exacto que
permite la declaracin exacta del contenido o la potencia
del analito en una muestra
(Mtodo compendial 1225 USP 32)

29 de 83

Especificidad

Pruebas de valoracin y de
impurezas

Si no se dispone de impurezas o de los

productos de degradacin puede demostrarse
la especificidad:
Comparando los resultados de las pruebas de
muestras que contengan impurezas o
productos de degradacin con los de un
segundo procedimiento bien caracterizado.
(Mtodo compendial 1225 USP 34)

Degradaciones forzadas relevantes

30 de 83

Condiciones Forzadas Relevantes

caso 2

Producto

farmacutico

calor
luz

humedad

(85%)
Hidrlisis cida y alcalina
Oxidacin
En algunos casos, pueden ser vlidas otras
condiciones
El tiempo de exposicin, la temperatura y
la concentracin pueden ajustarse para
obtener una degradacin adecuada de la
muestra.
Mtodo compendial 1225 USP 34
31 de 83

caso 2 Cromatograma del diluyente

No se observan picos en los tiempos de
retencin del componente principal y las
impurezas.

32 de 83

caso 2 Cromatograma de la solucin

estndar
Las impurezas conocidas deben estar separadas
entre s y del pico principal (Resolucin 1,5)

33 de 83

caso 2
Cromatograma de la muestra NO sometida a
condiciones forzadas de degradacin

34 de 83

caso 2
Cromatograma de la muestra sometida a
condiciones forzadas: los productos de degradacin
estn separados del pico principal, R 1,5

35 de 83

Caractersticas Analticas
tpicas en la validacin

Linealidad
Especificidad/Selectividad
Sensibilidad

Limite de Deteccin
Lmite de cuantificacin

Precisin
Exactitud

36 de 83

LdeD, LdeC y RSR

Lmite de Cuantificacin

Lmite de Deteccin

Relacin de Seal a Ruido

37 de 83

LMITE DE DETECCIN

USP 34 <1225>: la menor cantidad de analito que

puede detectarse en una muestra, aunque no
necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones
del experimento indicadas. As, las pruebas de lmite
confirman simplemente que la cantidad de analito se
encuentra por encima o por debajo de un cierto
nivel.
La ICH cuando hay ruido de fondo recomienda que el clculo
del LD puede realizarse con un valor con el cual la relacin
entre seal y ruido (S/R) es 2:1 3:1.

El LD es una caracterstica de las pruebas lmite

38 de 83

Determinacin del LD:

No instrumental
Mtodos no instrumentales:
anlisis de muestras con
concentraciones conocidas de
analitos para establecer la
concentracin mnima a la cual el
analito puede detectarse de
manera confiable.
Ejemplos: TLC, valoraciones
volumtricas, comparaciones de
colores

39 de 83

Determinacin del LD:

instrumental

Mtodos instrumentales:

igual que para los mtodos no instrumentales

anlisis de muestras con concentraciones conocidas de
analitos para establecer la concentracin mnima a la cual el
analito puede detectarse en forma confiable.
Cuando hay ruido de fondo la ICH sugiere una relacin seal ruido aceptable
de 2:1 3:1

40 de 83

Estimacin del LD (ICH)

Otro enfoque sugiere la determinacin de la pendiente de la curva de
calibracin y la desviacin estndar de las respuestas.

LD = 3,3 /m
donde: = desviacin estndar (ruido) de la
respuesta
m = pendiente de la curva de calibracin
para linealidad
El LD puede basarse en cualquiera de los
siguientes:
- del blanco
- del punto de linealidad de nivel ms bajo
- el grfico de calibracin (regresin)

41 de 83

Ejemplos de pruebas de
lmites (validacin del LD)
Pruebas de comparacin del color
(metales pesados <231>)
Mtodos TLC (impurezas comunes
<466>)
Mtodos de precipitacin (prueba de
plomo en la monografa sobre xido
de zinc)

42 de 83

Relacin entre seal y ruido

Pico B
LdC

Pico A
LdD
Lnea basal

ruido

Cromatograma que muestra el ruido de lnea base

43 de 83

Desviacin estndar del blanco

Ejemplo: Integracin de un pico cromatogrfico
Inyeccin
estndar

Inyeccin
blanco

44 de 83

LMITE DE CUANTIFICACIN

La menor cantidad de analito en una

muestra que puede determinarse con
precisin y exactitud aceptables bajo las
condiciones del experimento
establecidas. USP 34 <1225>
En esencia, idntico a ICH Q2A
Lmite de cuantificacin (LC) = lmite de
cuantificacin (LOQ)

45 de 83

Determinacin/Validacin
del LC

No instrumental:
a partir del anlisis de muestras con un
nivel adecuado mnimo de analito
cuantificado con exactitud y precisin
aceptables.
Instrumental:
igual que para los mtodos no
instrumentales, ms el hecho de que el
clculo del LC puede realizarse con un
valor con el cual la relacin entre seal y
ruido es 10:1. USP 34 (1225)
46 de 83

Ejemplos de valoraciones
cuantitativas (validacin del LC)

Mtodos de valoracin volumtrica

(agua <921>)
Mtodos HPLC/GC (pureza
cromatogrfica)
Mtodos gravimtricos (prdida por
secado <731>)

47 de 83

Caractersticas Analticas
tpicas en la validacin

Linealidad
Especificidad/Selectividad
Sensibilidad

Limite de Deteccin
Lmite de cuantificacin

Precisin
Exactitud

48 de 83

INTERVALO

El intervalo de un mtodo analtico es la

amplitud entre los niveles superior e inferior
del analito (incluidos estos niveles) que se
demostr que se determin con un nivel
adecuado de precisin, exactitud y
linealidad, utilizando el mtodo segn se
describe en el protocolo.
USP 34

49 de 83

LINEALIDAD

La linealidad de un mtodo analtico es su

capacidad para obtener resultados de
prueba que sean proporcionales ya sea
directamente, o por medio de una
transformacin matemtica bien definida, a
la concentracin de analito en muestras en
un intervalo dado.
USP 34

50 de 83

Evaluacin de linealidad

Debe utilizarse un mnimo de 5

puntos de datos para una
evaluacin adecuada

Inspeccin visual del grfico y

mtodo estadstico (lnea de
regresin, mnimos cuadrados)

51 de 83

Consideraciones de linealidad e
intervalo para el protocolo de
validacin

Los criterios de aceptacin deben equilibrar el rigor

cientfico con las limitaciones prcticas
Linealidad:
Valor r2 mnimo: 0,99 hasta 0,9999 fsico-qumicos
Para los microbiolgicos puede ser > 0,9
Interseccin-y: estadsticamente no significativa,
dentro del n % de la respuesta de la solucin estndar
Apto para la valoracin mediante un estndar de un
solo punto
Intervalo: necesario para resultados exactos y precisos

52 de 83

Linealidad e intervalo
Linealidad

Tabla de valores
(x,y)

Analito calculado en mg/ml

de un analito en un material

Material de
referencia
mg/ml

0.040

Material de
referencia
mg/ml

0.035

0.030

0.0100

0.0101

0.025

0.0150

0,0155

0.020

0.0200

0,0207

0.01
0.015

0.0250

0.0256

0.010

0.0300

0.0298

0.0400

0.0401

0.015

0.02

0.025

0.03

0.035

0.04

Material de referencia mg/ml

53 de 83

Anlisis de regresin
Interseccin-y, pendiente y residuales

y
Respuesta

y/x = pendiente

y = residual

Interseccin0

0,05

0,1

0,15

0,2

Concentracin

54 de 83

Clculo del punto dudoso en la

curva analtica ICH Q2A
Puede verificarse si, algn punto de concentracin
desva la linealidad de la curva, por medio del clculo de
residuos entre los valores medidos y los valores
calculados a partir de la ecuacin de la curva. Calcular
un punto dudosa de una curva analtica por el valor de t.

tcalculado= residuo
sr/n

Donde:

residuo =|xmedido - xcalculado|

sr=desviacin estndar de residuos

Sr= (xmedido xcalculado)2

n2

Caractersticas de los
procedimientos analticos

Exactitud

Precisin

Repetibilidad

Reproducibilidad

Precisin intermedia
56 de 83

Precisin comparada
con exactitud

La exactitud se expresa como %

de recuperacin

La precisin se expresa como

Desviacin Estndar Relativa (RSD)

57 de 83

Relacin entre
exactitud y precisin

inexacto e
impreciso

Exacto y preciso
preciso
pero
inexacto

Exacto pero
impreciso
58 de 83

Caractersticas Analticas
tpicas en la validacin

Linealidad
Especificidad/Selectividad
Sensibilidad

Limite de Deteccin
Lmite de cuantificacin

Precisin
Exactitud

59 de 83

Exactitud
Calculado como el porcentaje de
analito recuperado o
por la diferencia entre el valor
obtenido y el valor real
evaluado estadsticamente

60 de 83

Exactitud
1
Prueba de un
Estndar de
Referencia

5 maneras
de
determinar
la
exactitud

3 Adicin de
estndar (muestra
con cantidad
agregada de St.
conocida)

2 Mezcla con
excipientes
(placebo con una
cantidad agregada
conocida)
4
Se deduce a partir
de los datos de
especificidad y
linealidad.

Comparacin con
un mtodo
reconocido como
exacto (mtodo de
referencia)
61 de 83

Caractersticas Analticas
tpicas en la validacin

Linealidad
Especificidad/Selectividad
Sensibilidad

Limite de Deteccin
Lmite de cuantificacin

Precisin
Exactitud

62 de 83

PRECISIN

El grado de coincidencia entre los

resultados de las muestras
individuales de una muestra
homognea

La precisin debe evaluarse a travs

del intervalo de cuantificacin
especificado en el mtodo
63 de 83

Precisin

Determinacin:
Valoracin de las muestras individuales de
una preparacin homognea
Calcular la desviacin estndar o la
desviacin estndar relativa

La precisin del mtodo debe incluir todas las

fuentes de variacin desde la preparacin de la
muestra hasta el redondeo del resultado final de
la prueba

64 de 83

Niveles de precisin ICH-USP-OMS y

otras farmacopeas

Repetibilidad: coincidencia dentro de un

periodo corto para el mismo analista con la
misma instrumentacin
Precisin intermedia: coincidencia en los
resultados del mismo laboratorio, pero en das
distintos, puede ser un analista y un mismo
equipo, o con analistas y equipo diferentes
(segn corresponda)
Reproducibilidad: coincidencia en los
resultados entre laboratorios (como en un
estudio colaborativo).
65 de 83

Precisin

Repetibilidad (6 inyecciones repetidas)

Lmite de valoracin (%)

99,0 101,0
98,5 101,5
98,0 102,0
95,0 105,0
90,0 110,0
Impurezas
- dependiendo del nivel

DER = Desviacin estndar Relativa (RSD)

% RSD mxima
0,37 1
0,55 1
0,73 1
1,9 2
3,9 2
5 a 25 2

1 Pharmaeuropa,

11(4), 571-577
2 Pharm. Technol., 6(9), 120-137
66 de 83

Precisin

Precisin intermedia:
La FDA recomienda un mnimo de 2 das distintos con
analistas diferentes.
FDA (CDER), Gua del revisor: Validacin de
mtodos cromatogrficos, nov. 1994
Criterios de aceptacin:
Realizar la prueba-F, los resultados intra
laboratorios no deben ser estadsticamente
distintos.
Tpicamente, alrededor de 2 veces la s o el CV% de
la repetibilidad
Sin embargo, una diferencia estadstica puede no
ser significativa (consideracin prctica).
Necesidad de evaluar la aptitud para la indicacin
de los mtodos
67 de 83

Determinacin de la precisin
intermedia ICH Q2A
Los resultados obtenidos en das alternos por un mismo analista, usando una
misma metodologa, deber se el mismo, puede comprobarse por el test t, donde
la hiptesis a ser afirmada es que el resultado obtenido en diferentes das es
significativamente igual

Hiptesis a
ser probada

El valor crtico
(t tab) varia en
funcin de
grados de
libertad () y
el nivel de
confianza,
(95% usual)

Ho: 1= 2

T= ( xmed)n/S
donde:

=n 1
Si

test: t

: =valor

de referencia,
xmed=valor medio de resultados
n=nmero de resultados
S=desviacin estndar

ttab>tcalcHo
se acepta

ttabtcalcHo
se rechaza
68 de 83

ROBUSTEZ

La USP 34 la define como una medida de la

capacidad del mtodo analtico, y demuestra
que no resulta afectado por pequeas pero
deliberadas variaciones en los parmetros
del mtodo y proporciona una indicacin de
su confiabilidad durante su uso normal.

TRANSFRENCIA DE MTODOS

69 de 83

TOLERANCIA, FORTALEZA
La tolerancia es el grado de REPRODUCIBILIDAD
del mtodo analtico, en diversas condiciones:

Variabilidad causada por :

Variaciones

de da a da
De analista a analista
De laboratorio a laboratorio
De instrumento a instrumento
De columna cromatogrfica a columna
cromatogrfica
De estuche de reactivos a estuche de reactivos
Inestabilidad de los reactivos analticos
ICH PRECISIN INTERMEDIA
70 de 83

71 de 83

APTITUD DEL SISTEMA

Si las mediciones son susceptibles a variaciones

en condiciones analticas, stas deben controlarse
adecuadamente o incluirse en el mtodo una
declaracin preventiva.
Las pruebas de aptitud del sistema se basan en
el concepto que el equipo, el sistema electrnico,
las operaciones analticas y las muestras a
analizar constituyen un sistema integral que
puede evaluarse como tal.
Las

inyecciones repetidas de una preparacin

estndar empleada en la valoracin u otra solucin
estndar se comparan para determinar si cumplen
con los requisitos de precisin.

USP 34 (621)
72 de 83

APTITUD DEL SISTEMA

Resolucin R cuando se tiene mas de un analito

R = (N) ( - 1 / ) (k / k +1)
Eficiencia

Capacidad

Selectividad

USP 32 (621)
73 de 83

APTITUD DEL SISTEMA

A menos que se especifique algo diferente en la

monografa individual, se emplean los datos de cinco
inyecciones repetidas del analito para calcular la
desviacin estndar relativa s, si el requisito es 2% o
menos.
Se emplean los datos de seis inyecciones repetidas si el
requisito de s es ms de 2%.
Las inyecciones repetidas de una preparacin estndar
empleada en la valoracin u otra solucin estndar se
comparan para determinar si cumplen con los requisitos
de precisin.
USP 32 (621)

74 de 83

APTITUD DEL SISTEMA

El factor de asimetra T, es una medida de la asimetra

del pico, es la unidad para los picos perfectamente
simtricos y su valor aumenta a medida que la asimetra
es ms pronunciada. En algunos casos, pueden
observarse valores menores a la unidad A medida que la
asimetra del pico aumenta, la integracin y por lo tanto
la precisin se tornan menos confiables.
Estas

pruebas se realizan
mediante la recoleccin de
datos de inyecciones
repetidas del estndar u otras
soluciones, segn se
especifique en al monografa
individual
USP 34 (621)
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APTITUD DEL SISTEMA

Aunque una monografa especifique los parmetros definitivos

que se deben utilizar, esto no impide utilizar otras condiciones
operativas adecuadas y puede ser necesario realizar ajustes en
las condiciones operativas, para cumplir con los requisitos de
aptitud del sistema.
A menos que se especifique algo diferente en la monografa,
los parmetros de aptitud del sistema se determinan a partir
del pico del analito.

USP 34 (621)
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APTITUD DEL SISTEMA

Se permite ajustes slo cuando se encuentran disponibles

estndares adecuados, (incluyendo los de referencia), de
todos los componentes usados en la prueba de aptitud del
sistema y slo cuando estos estndares sean los usados para
demostrar que los ajustes han mejorado la calidad de la
cromatografa en cuanto a los requisitos de cumplimiento de
aptitud del sistema .

Mltiples ajustes pueden tener un efecto acumulativo en el

desempeo del sistema y deben considerarse antes de
implementarlos.

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APTITUD DEL SISTEMA

Se puede considerar cada una de las siguientes variaciones
mximas, a menos que la monografa indique algo diferente.

pH de la fase mvil 0,2 unidades

Concentracin de la solucin amortiguadoras : se permite
10% siempre y cuando conserve la variacin de pH
Relacin de los componentes de la fase mvil: c10% absoluto y
30% relativo
Longitud de onda del UV-visible: Error permitido mximo del
detector 3 nm
Longitud de la columna de CG puede ajustarse hasta el 70%
Dimetro interno CG, HPLC 25%
Longitud de la columna de HPLC 50%
USP 34 (621)

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APTITUD DEL SISTEMA

HPLC tamao de partcula puede reducirse hasta 50%

CG Tamao de la partcula conserva el cociente de intervalo
entre la ms grande y la ms pequea
Velocidad de flujo puede ajustarse hasta 50%
Volumen de inyeccin reducirse hasta los LD , LC y precisin
aceptados
Temperatura de la columna puede ajustarse hasta 10%
Temperatura de horno puede ajustarse hasta 10%
Programa de Temperatura horno CG hasta 20%
A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA los parmetros
de aptitud del sistema se determinan a partir del pico del
analito.
USP 34 (621)

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APTITUD DEL SISTEMA

Los tiempos de retencin relativos son slo informativos,

facilitan la identificacin de los picos.
Para determinar la eficacia del sistema operativo final, se lo
debe someter a una prueba de aptitud.
Las inyecciones repetidas de la preparacin estndar
requeridas para demostrar que la precisin del sistema es
adecuada , pueden realizarse antes de inyectar las muestras
o intercalarse entre las inyecciones de las muestras.
Se debe demostrar la aptitud del sistema durante toda la
corrida mediante inyecciones de una preparacin control
adecuada a intervalos apropiados, incluso al final del
anlisis.
USP 34 (621)

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APTITUD DEL SISTEMA

La preparacin control puede ser una preparacin estndar o

una solucin que contenga una cantidad conocida, y
cualquier otro material adicional til para el control del
sistema analtico. Como por ejemplo impurezas o
excipientes.
Siempre que haya un cambio significativo en el equipo o en
un reactivo crtico, la prueba de aptitud debe realizarse antes
de inyectar las muestras,
Ningn anlisis de muestras es aceptable a menos que
cumpla los requisitos de aptitud del sistema. Los anlisis de
muestras obtenidos cuando el sistema no cumple con la
condicin de aptitud es inaceptable.
USP 34 (621)

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Verificacin de procedimientos
farmacopicos
Los usuarios de los procedimientos analticos
farmacopicos no necesitan validar estos
procedimientos cuando los usan por primera
vez, aun cuando debe establecer evidencias
documentadas de aptitud en las condiciones
reales, FDA estableci este requisito en el
punto 21 CFR 211.194 a 2 . Se verificar la
aptitud de todos los mtodos de prueba
usados bajo las condiciones reales de uso .
No incluye los microbiolgicos
USP 34 (621)
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Verificacin de procedimientos
farmacopicos
EL PROCESO DE VERIFICACION, da confianza en
que los procedimientos se llevan a cabo con la
aptitud requerida

Si la verificacin no es exitosa y la consulta y

asistencia del personal USP, no logra solucionar el
problema, se puede concluir que el procedimiento
posiblemente, no es apto para usar en el artculo que
se est evaluando en el laboratorio y entonces se
hace necesario validar el mtodo analtico.
USP 32 (1226)
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Verificacin de procedimientos
farmacopicos
REQUISITOS DE LA VERIFICACION

Evaluar la complejidad del procedimiento y del

material sometido a anlisis. Se usan algunas de las
caractersticas del desempeo analtico, las que se
consideren adecuadas, la extensin depende de la
formacin y competencia del analista, el tipo de
procedimiento, el equipo e instrumentos asociados,
los pasos especficos del procedimiento y el artculo,
por ejemplo exactitud por las diferentes matrices. LD
y LC
USP 34 (1226)
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REPORTE DE VALIDACIN
1

Objetivo y alcance
3

Detalles del analito,

reactivos, estndares de
referencia y control y
estabilidad de las
muestras preparadas

Tipo de analito y la matriz sobre la que se

hizo la validacin,
4

Procedimiento para
la verificacin de la
calidad de los
estndares y
reactivos qumicos
usados

Condiciones de
seguridad

Parmetros del
mtodo

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Reporte de Validacin
7

Parmetros crticos establecidos a travs

del test de robustez
8

Listado de equipos,
funcionamiento,
condiciones de
desempeo. IQ,OQ,PQ

10

Tratamiento
estadstico y
clculos
realizados

11

Procedimientos
de control
rutinario

Detalle de las
condiciones y cmo fue
realizado el proceso,
incluyendo la
preparacin de la
muestra
12

test de
aceptacin de
las variables

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Reporte de Validacin
Registros como
cromatogramas,
espectros y curvas de
calibracin

14

13

15

Criterios para
revalidacin

Resultados de la
incertidumbre de la
medicin

16

Persona que
desarroll y valid el
mtodo inicialmente

17

Resumen y conclusiones

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