Informe Cafeina Qaii

Determinacin de cafena en un
comprimido de Cafiaspirina
Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

Joaquina Cabral | Mariana Gonzlez | Leticia Romano
Tabla de contenidos:
1. Resumen.3
2. Objetivos.3
3. Introduccin3
3.1.
Cafena.3
3.2.
cido
acetilsaliclico4
4. Mtodos..
4.1.
Cromatografa de capa fina:
TLC
4.1.1. Aplicacin de la muestra y desarrollo de la placa
4.1.2. Ubicacin de los analitos en la placa
4.1.3. Relacin de frentes: Rf.
4.2.
Extraccin lquido-lquido..
4.2.1. Eleccin del disolvente
4.3.
Espectrometra UV..
4.3.1. Instrumentacin para espectrometra UV: Espectrofotmetro.
5. Materiales y Reactivos
5.1.
Materiales
5.1.1. Cromatografa de capa fina..
5.1.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV.
5.2.
Reactivos.
5.2.1. Cromatografa de capa fina...
5.2.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV..
6. Clculos previos..
6.1. Cromatografa de capa
fina
6.1.1. Calculo de masa de muestra conteniendo AAS 2% m/v....
6.2.
Extraccin lquido-lquido y espectrometra
UV..
6.2.1. Calculo de masa de muestra para solucin de 6 ppm de cafena
7. Procedimientos.
7.1.
Operaciones
preliminares..
7.2.
Cromatografa de capa
fina..
7.2.1. Preparacin de la muestra..
7.2.2. Preparacin de la placa cromatogrfica.
7.2.3. Aplicaciones de soluciones patrn y muestra
7.2.4. Desarrollo de placa
7.3.
Extraccin lquido-lquido y espectrometra
UV.
7.3.1. Preparacin de la solucin conteniendo muestra..
7.3.2. Extraccin lquido-lquido
7.3.3. Preparacin de las soluciones para la curva de calibracin..
7.3.3.1.
Preparacin de una solucin patrn madre (SPM) 1000
ppm de
cafena.
Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016
7.3.3.2.
Preparacin de una solucin patrn intermedio (SPI) 100
ppm de
cafena
7.3.3.3.
Preparacin de una solucin 2 ppm de
cafena.
7.3.3.4.
cafena.
7.3.3.5.
cafena.
7.3.3.6.
cafena
7.4.
Espectrometra UV.
8. Tratamiento de datos.
8.1.
Cromatografa de capa fina
8.2.
Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV...
9. Resultados.
9.1.
Cromatografa de capa fina.
9.2.
Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV
10. Discusin de resultados.
10.1. Cromatografa de capa fina
10.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV..
11. Conclusiones.
12. Bibliografa consultada.
13. Anexos..
13.1. Cromatografa de capa fina...
13.1.1. Preparacin de la solucin patrn de cafena 0,8% m/v.
13.1.2. Preparacin de la solucin patrn de AAS 2,0% m/v
13.1.3. Preparacin de la solucin patrn conjunto o estndar mixto
13.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV..
13.2.1. Preparacin de 100 mL de una solucin de NaOH 1,0 M..
13.2.2. Preparacin de una solucin patrn de cafena 6 ppm (Quality
Control)..
14. Planilla original de datos..
14.1.
1. Resumen:
La cafena, probablemente, sea una de las sustancias psicoactivas ms utilizadas en el
mundo, generando efectos en innumerables funciones fisiolgicas, incluyendo la
resistencia fsica, el humor, el sueo y el dolor. Adems de ser consumida en bebidas
(caf, refrescos y otras bebidas que contienen cafena), diversos medicamentos
analgsicos principalmente para la cefalea, contienen cafena asociada con el
paracetamol o con antinflamatorios no hormonales.
La Cafiaspirina es un analgsico indicado para el dolor de cabeza. Su frmula combina
la efectividad de la aspirina (cido acetilsaliclico) con la cafena, la cual acta como
agente potenciador del efecto analgsico.
De acuerdo a lo declarado por el fabricante, un comprimido de Cafiaspirina contiene
500 mg cido acetilsaliclico y 40 mg de cafena.
En primera instancia se realiz una determinacin cualitativa mediante la tcnica TLC:
cromatografa en capa fina, en donde se obtuvo un resultado presuntivo de la presencia
de cafena en la muestra.
Con este resultado, se continu con la determinacin cuantitativa de cafena en la
muestra. Primero se realiz una extraccin lquido-lquido para separar de la muestra
el analito de inters y luego, mediante espectrometra UV, se determin la concentracin
de cafena presente en la muestra.
Se obtuvo como resultado que el contenido de cafena es 33,2 4,0 mg por comprimido
de Cafiaspirina.
2. Objetivos:
2.1.
Determinacin cualitativa de cafena en un comprimido de Cafiaspirina

mediante la tcnica TLC: cromatografa en capa fina.
2.2.
Determinacin cuantitativa de cafena en un comprimido de Cafiaspirina
mediante espectrometra UV y separando, previamente, el analito de inters
mediante una extraccin lquido-lquido.
3. Introduccin:
3.1. Cafena:
La frmula qumica de la cafena es C8H10N4O2, con una masa molecular de 194,19
g/mol. Es una molcula qumica aquiral, y por lo tanto, no tiene enantimeros ni tiene
estereoismeros. Presenta la siguiente estructura molecular:
La cafena es un alcaloide que est presente en ms de 60 especies de plantas y,

tambin, puede producirse sintticamente en el laboratorio. Su estructura molecular
pertenece a un grupo de xantinas trimetiladas con sus compuestos ntimamente
relacionados: teobromina (presente en el cacao) y la teofilina (presente en el t).
Qumicamente, esos alcaloides se parecen a las purinas, xantinas y al cido rico, que
son compuestos metablicamente importantes.
Las fuentes alimenticias ms comunes de la cafena son el caf, el t, el chocolate y las
bebidas derivadas de la cola. La cantidad de cafena presente en esas bebidas vara de
acuerdo con la especie de la planta, el tipo de grano de caf, cacao u hoja de t, la
ubicacin geogrfica, el clima, las prcticas culturales y el tamao de la porcin
consumida. La cantidad de cafena presente en una taza de caf vara entre 47 y 134 mg.
El caf es una de las principales fuentes de cafena y contiene centenares de compuestos
qumicos que pueden causar o potenciar los efectos atribuidos equivocadamente a la
cafena.
Adems de las fuentes alimenticias, existen numerosas medicaciones que contienen
cafena y que se venden muchas veces sin receta mdica, tal es el caso de la Cafiaspirina
(muestra a analizar en esta prctica).
3.2.
cido acetilsaliclico:
El cido acetilsaliclico (C9H8O4), fue descubierto, en la antigedad, en el extracto de la

corteza de la planta sauce. sta contiene como principio activo la salicina, la cual sirve
para sintetizar el cido saliclico; cido del cual mediante el proceso de acetilacin se
logra obtener el cido acetilsaliclico.
El cido acetilsaliclico es un cido de cualidades teraputicas dado que acta,

principalmente, como analgsico (alivia el dolor), antinflamatorio y antipirtico
(disminuye la fiebre). Es utilizado en casos de: dolor somtico, sndrome febril, fiebre
reumtica y artritis reumatoidea, profilaxis y tratamiento de trombosis arterial y
coronaria, siendo tambin utilizado como anti agregante plaquetario.
4. Mtodos:
4.1.
Cromatografa de capa fina: TLC
La cromatografa de capa fina (TLC) es un mtodo muy utilizado como gua del
desarrollo de las condiciones ptimas para cromatografa de lquidos en columna y para
controles de pureza de productos en la industria farmacutica.
El proceso al cual se dedica este desarrollo en TLC es el fenmeno de adsorcin, ste es
un proceso fsico o qumico por el cual una especie qumica es retenida en puntos
activos de la superficie de un material. No obstante, la TLC tambin se da por
fenmenos de absorcin en la que tanto la fase mvil como la estacionaria son lquidas.
El mtodo consiste en la separacin de compuestos por migracin diferencial en la que
la fase mvil arrastra las sustancias con las que tiene mayor afinidad y las menos afines
quedan retenidas en la fase estacionaria resultando una separacin, la fase mvil se
desplaza a travs de ella por capilaridad o efecto de la gravedad.
La fase estacionaria se fija a un soporte de vidrio o plstico que se recubren con una
capa delgada y adherente de partculas finamente divididas, los adsorbentes ms
utilizados en TLC son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3).
4.1.1. Aplicacin de la muestra y desarrollo de la placa:
Previamente a la aplicacin de la muestra, las placas de TLC deben ser activadas, lo que
significa que toda el agua que contengan tiene que eliminarse por secado en estufa para
prevenir que se den fenmenos de absorcin.
La aplicacin de la muestra puede ser el punto ms crtico de la TLC cuando se trabaja
cuantitativamente, puede realizarse de forma manual con un capilar o una jeringa
haciendo contacto con la placa cromatogrfca. Tambin existen aplicadores mecnicos
que mejoran la precisin y exactitud de la aplicacin de la muestra.
Para disoluciones diluidas se realizan tres o cuatro aplicaciones superpuestas secando la
zona entre aplicacin y aplicacin.
Se realiza un ltimo secado para evaporar todo el solvente en el que estaba disuelta la
muestra y se comienza el desarrollo de la placa, en este proceso la cmara
cromatogrfica tiene que estar saturada con los vapores de la fase mvil, uno de los
extremos de la placa se introduce en el eluyente de la cmara evitando el contacto
directo de este con la muestra.
El eluyente se desplaza por la placa por capilaridad o gravedad, a medida que esto
sucede pasa por el punto de aplicacin de la muestra, la disuelve y la arrastra por la
placa distribuyndose entre el disolvente que se desplaza y la fase estacionaria.
Existen diversos tipos de desarrollos, simples (descendentes. ascendentes, circular,
horizontal) y mltiples (comn, bidimensional. continuo).
Luego de que el disolvente alcanza aproximadamente las dos terceras partes de la
longitud de la placa, se retira de la cmara y se seca para evaporar todo el disolvente.
4.1.2. Ubicacin de los analitos en la placa:
El revelado de los analitos puede darse por mtodos qumicos o mtodos fsicos pticos,
destructivos y no destructivos.
Para mezclas de sustancias orgnicas comnmente la placa se nebuliza una disolucin
de yodo (mtodo qumico) o de cido sulfrico (mtodo destructivo) ya que ambos
reaccionan con los compuestos orgnicos para dar productos oscuros.
Un mtodo fsico no destructivo se basa en la incorporacin de un material fluorescente
a la fase estacionaria, una vez realizado el desarrollo de la placa, sta es revelada bajo
una luz ultravioleta. Los componentes de la muestra amortiguan la fluorescencia de
modo tal que la placa exhibe fluorescencia excepto los lugares donde se encuentran los
componentes de la muestra.
4.1.3. Relacin de frentes: Rf
La relacin de frentes, Rf, se utiliza para poder medir el desplazamiento alcanzado por
cada componente de una mezcla y se define como el cociente entre la distancia lineal
recorrida por el soluto y la distancia lineal recorrida por el solvente.
Por tratarse de un cociente, nos permite medir el desplazamiento de cada sustancia
presente en una mezcla independientemente del tiempo y de las dimensiones de la placa.
El valor de Rf se encuentra comprendido entre 0 y 1. A menor valor de Rf la sustancia
queda ms retenida o tiene ms afinidad por la fase estacionaria. Por el contrario, a
mayor valor de Rf la sustancia no es retenida por la fase estacionaria, dado que tiene
mayor afinidad por la fase mvil y es arrastrada por la misma.
En el anlisis cualitativo, por lo general, los datos de un solo cromatograma no
proporcionan informacin suficiente para poder identificar las distintas especies
presentes en una mezcla debido a la variabilidad de los valores de Rf con el tamao de
la muestra, la placa de capa fina y las condiciones existentes durante el desarrollo.
Adems siempre existe la posibilidad de que dos solutos bastante diferentes puedan
presentar valores de Rf idnticos o casi idnticos en unas condiciones determinadas.
4.2.
Extraccin lquido-lquido:
Una extraccin es el proceso de transferencia de uno o ms solutos de una fase a otra,

este pasaje puede darse por fenmenos de difusin y transporte. Dicho proceso se da por
diferencia de solubilidad entre dos lquidos inmiscibles.
La extraccin lquido-lquido es una tcnica separativa utilizada con diversos fines. Los
objetivos ms comunes son aislar un analito, concentrarlo, o separarlo de especies
interferentes en un posterior anlisis. Tambin es una tcnica muy utilizada para llevar a
cabo la extraccin de compuestos orgnicos que se encuentran en fuentes naturales,
como por ejemplo, la cafena.
La tcnica se basa en un reparto del compuesto deseado y de las interferencias, entre el
medio orgnico y el medio acuoso. Se define el coeficiente o constante de reparto (K)
como la solubilidad del compuesto en el medio orgnico dividido por su solubilidad en
el medio acuoso. Para que el proceso de extraccin sea efectivo es importante que la
constante de reparto tenga un valor elevado, de modo que se asegura una mayor
extraccin del compuesto deseado en el medio orgnico. Adems, generalmente, no se
realiza una nica extraccin con todo el volumen de disolvente orgnico, sino que se
realizan varias extracciones con la parte proporcional del disolvente orgnico, ya que as
se optimiza la extraccin del compuesto deseado. Es fcilmente demostrable que es
mucho ms eficiente efectuar varias extracciones con volmenes pequeos que una sola
extraccin con un volumen grande.
Esta operacin se suele realizar entre una disolucin acuosa (fase acuosa) y otro
disolvente inmiscible con el agua (fase orgnica) con la ayuda de un embudo o bola de
decantacin. La posicin relativa de ambas fases (arriba o abajo) depende de la relacin
de densidades.
4.2.1.
Eleccin del disolvente:
La cafena es bastante ms soluble en un disolvente orgnico que en agua; as que

agitando el filtrado en contacto con un cierto volumen de disolvente en la bola de
decantacin, la cafena pasa mayoritariamente a la fase orgnica.
La eleccin del disolvente se realiza teniendo en cuenta la solubilidad en el mismo de la
sustancia a extraer y la facilidad con que puede separarse sta del disolvente.
En la prctica se utiliz cloroformo por la gran solubilidad en el mismo de la mayor
parte de los compuestos orgnicos y por su bajo punto de ebullicin (62C). Sin
embargo, su gran volatilidad y su fcil inflamabilidad exigen manejarlo con la mxima
precaucin.
Dado que el disolvente orgnico elegido (cloroformo) es ms denso que el agua,
formar la capa inferior, que se podr recoger de forma separada simplemente abriendo
la llave de la bola de decantacin.
4.3.
Espectrometra UV
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la

deteccin especfica de molculas.
Para que la radiacin electromagntica incidente, interaccione con la materia tiene que
tener una del mismo tamao o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por
ello que la radiacin de la regin del ultravioleta (entre 1 y 400 nm, aproximadamente)
nos permite obtener informacin de las transiciones electrnicas de las molculas.
La espectrometra UV visible se basa en el anlisis de la cantidad de radiacin
electromagntica (en el rango de longitudes de onda del ultravioleta y visible) que
puede absorber o transmitir una muestra en funcin de la cantidad de sustancia presente.
4.3.1.
Instrumentacin para espectrometra UV: Espectrofotmetro
Un espectrofotmetro consta de las siguientes unidades bsicas:

La lmpara que emite la radiacin electromagntica. Los espectrofotmetros de
absorcin UV-Visible suelen estar equipados con dos tipos de lmparas: las
halgenas que emiten luz visible en la zona del espectro visible (700-350 nm) y
las de deuterio que emiten radiacin ultravioleta y cubren el espectro UVprximo (350-250 nm).
Las lentes pticas que concentran el haz de luz luminoso y lo enfocan sobre el
monocromador.
El monocromador, unidad que permite obtener luz monocromtica o radiacin
formada por una sola longitud de onda.
El sistema de cubetas o clulas, donde situamos la solucin de muestra a

analizar y se caracteriza por su longitud de paso.
En el detector la luz no absorbida (trasmitida) por la muestra contina su camino
hacia el fotomultiplicador y por mediacin del sistema de fotodiodos esta seal
ptica es transformada en elctrica, para finalmente, ser ampliada y registrada o
digitalizada.
5. Materiales y reactivos:
5.1.
Materiales:
5.1.1. Cromatografa de capa fina:
Placa cromatogrfica con revelador UV254nm
Lmpara UV
Secador
Estufa
Cmara cromatogrfica
Capilar
Regla y tijera
Matraces de 10 mL
Pinza
5.1.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:
Balanza Analtica (BA-TQ-02), marca Mettler Toledo
Mortero y maso
Matraz Erlenmeyer de 250 mL
Matraces aforados de 100 mL y 250 mL
Embudo
Filtro de papel
Bola de decantacin
Pipeta aforada de 5 mL y 1 mL
Pipeta graduada de 10 ml
Micropipeta 100-1000 L, marca Thermo Scientific
Pipeta Pasteur
Espectrofotmetro
5.2.
Reactivos:
5.2.1. Cromatografa de capa fina:
Muestra: Cafiaspirina, laboratorio Bayer. (Sin especificacin
de lote)
Fase mvil: Dietil ter: Acetato de etilo 1:1 (Sin datos)
Cafena patrn (C8H10N4O2) L. 1295 FLUKA
cido acetilsaliclico patrn (Sin especificacin de lote)
Etanol 95% (Sin especificacin de lote)
5.2.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:
Muestra: Cafiaspirina, laboratorio Bayer. (Sin especificacin

de lote)
Cafena (C8H10N4O2) L. 1295 FLUKA
Hidrxido de sodio, L. 13362010, Biopack
Cloroformo, L. K44873745, Merck
Agua destilada
6. Clculos previos:
6.1.

6.1.1. Calculo de masa de muestra conteniendo AAS 2% m/v
masa comprimido promedio= 0,64166 g
masa AAS =
2,0 g AAS 10 mL etanol

=0,2 g AAS 200 mg AAS
100 mL etanol
masa muestra=
6.2.
200 mg AAS 0,64166 g muestra

=0,256664 g muestra
500 mg AAS
Extraccin lquido-lquido y Espectrometra UV:

6.2.1. Calculo de masa de muestra para una solucin de 6 ppm de
cafena:
7. Procedimientos:
7.1.
Operaciones preliminares:
Masar en balanza analtica los diez comprimidos de
cafiaspirina correspondientes a un blster de muestra y
calcular la masa promedio de cada comprimido.
Moler el contenido de todo el blster en un mortero de
mrmol utilizando un maso.
Homogeneizar la muestra.
Realizar un cuarteo, tomar los cuartos opuestos.
Repetir dos veces la operacin anterior.
Almacenar en un frasco para su posterior utilizacin.
7.2.
7.2.1. Preparacin de la muestra

Masar en balanza analtica 0,25 g de muestra de forma
aproximada.
Llevar a matraz de 10 ml y completar hasta el aforo con
etanol 95%
7.2.2. Preparacin de la placa cromatogrfica
Activar la placa cromatogrfica con revelador UV.

De la placa cromatogrfica con revelador UV cortar un
rectngulo de 10 cm de largo y 6 cm de ancho.
Marcar una lnea de base a lo ancho a 1 cm de distancia del
lmite inferior de la placa.
En la lnea base marcar los puntos de cada aplicacin (Patrn
AAS, Patrn cafena, Muestra, Patrn conjunto) dejando entre
punto y punto una distancia de 1 cm y 0,5 cm desde los
costados de la placa.
7.2.3. Aplicacin de soluciones patrn y muestra

Sobre la lnea de base hacer contacto con un capilar en la
marca correspondiente con la solucin correspondiente.
Realizar tres o cuatro aplicaciones superpuestas secando la
zona entre aplicacin y aplicacin
Realizar un secado final durante 20 minutos con secador.
7.2.4. Desarrollo de la placa
Colocar en la cmara cromatogrfica un volumen suficiente
de fase mvil para que se sature de vapores y para la elucin.
Introducir cuidadosamente con pinza la placa en la cmara
cromatogrfica evitando el contacto directo entre la fase
mvil y los puntos marcados en la placa.
Luego de que la fase mvil ha pasado a travs de las dos
terceras partes aproximadamente de la longitud de la placa,
retirar con pinza y se seca con secador.
Llevar la placa seca bajo una lmpara UV.
7.3.
Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:

7.3.1. Preparacin de la solucin conteniendo muestra:
Masar en balanza analtica 0,48 g de muestra de forma
aproximada.
Colocar dicha masa en un vaso de Bohemia, agregar
aproximadamente 150 mL de agua destilada y agitar durante
30 minutos.
Transferir a un matraz aforado de 250 mL.
Realizar una toma de 5 mL con pipeta aforada y filtrar.
7.3.2. Extraccin lquido-lquido:
10
Se coloca la bola de decantacin sobre un aro de hierro

situado en soporte, en el que se colocan unos trocitos de goma
para evitar posibles roturas.
Pasar la solucin filtrada a la bola de decantacin.
Agregar 10 mL de solucin de hidrxido de sodio 1 M y 15
mL de cloroformo.
Cerrar la bola de decantacin con su tapn y tomarlo con
ambas manos, sujetando con una la llave y con otra el tapn.
Se invierte, sujetndolo siempre de la misma manera, y agitar
suavemente, tal como se indica en la figura 1. Es importante
tener en cuenta que, al mezclarse los dos disolventes, la
presin de vapor de uno y de otro (presin de vapor parcial) se
suman y dan lugar a una presin de vapor total de la mezcla.
Esto ocasiona que se produzca en el interior del embudo una
sobrepresin. Para disminuirla, inmediatamente despus de
agitar (invertido el embudo) se debe abrir la llave para que los
gases acumulados se vayan, luego se cierra la llave. Repetir
dicho proceso varias veces hasta que no haya ms salida de
gases.
Despus se deja reposar sobre el aro y se espera a que las dos
capas se separen visiblemente. Cuando las dos capas se han
separado, se quita el tapn, se deja caer la capa inferior a
travs de la llave abierta y se recoge en un matraz aforado de
100 mL.
Realizar 5 extracciones de 15 mL, cada una en un matraz
aforado de 100 mL.
Enrasar las soluciones extradas con cloroformo.
Figura 1
7.3.3. Preparacin de las soluciones para la curva de calibracin:

7.3.3.1.
Preparacin de una solucin patrn madre (SPM)

1000 ppm de cafena:
Masar exactamente 0,100 g de cafena en balanza
analtica.
11
Transferir dicha masa a un matraz aforado de 100 mL, con

ayuda de un embudo, agregar cloroformo al matraz a
travs del embudo asegurndose de arrastrar los restos de
reactivo que pueden haber quedado adheridos en las
paredes del mismo.
Continuar agregando cloroformo, agitando en crculos
luego de cada agregado, hasta que todo el reactivo se halla
disuelto, verificando que el nivel del lquido no supere la
mitad de la altura de la parte ancha.
Quitar en embudo, asegurndose que la disolucin sea
completa.
Continuar llenando el matraz hasta, aproximadamente, un
centmetro por debajo del aforo.
Enrasar con la ayuda de una pipeta Pasteur, agregando
cloroformo gota a gota hasta que la parte inferior del
menisco quede tangente a la lnea del aforo.
Homogeneizar la solucin, colocando un tapn en el
matraz e invirtindolo tres veces.
7.3.3.2.
Preparacin de una solucin patrn intermedio (SPI)

100 ppm de cafena:
Realizar una toma de 1 mL de la SPM con pipeta aforada.
Transferir dicho volumen a un matraz aforado de 10 mL.
Agregar cloroformo hasta, aproximadamente, un
Enrasar la solucin con ayuda de una pipeta Pasteur,
agregando cloroformo gota a gota hasta que la parte
inferior del menisco quede tangente a la lnea del aforo.
7.3.3.3.
7.3.3.4.
Preparacin de una solucin 2 ppm de cafena:

Realizar una toma de 0,2 mL de la SPI con micropipeta.

12
Agregar
cloroformo hasta, aproximadamente, un

7.3.3.5.
7.3.3.6.

Realizar una toma de 1 mL de la SPI con pipeta aforada.
7.3.4. Espectrometra UV:
13
Medir la absorbancia de cada una de las soluciones patrn de

cafena preparadas a la longitud de onda seleccionada (254
nm).
Realizar las medidas por duplicado.
Graficar la absorbancia medida en funcin de la
concentracin.
Medir la absorbancia de las muestras obtenidas en la
extraccin lquido-lquido.
Realizar las medidas por duplicado.
Determinar la concentracin de la muestra interpolando en la
curva de calibracin obtenida.
8. Tratamiento de datos:
8.1.
Anlisis cualitativo:
Relacin de frentes:
Rf =
x
y
X: Distancia lineal recorrida por el soluto desde la lnea de base hasta el frente del
disolvente
Y: Distancia lineal recorrida por el disolvente (fase mvil) a partir de la lnea de base
Orden de siembra en placa TLC:

1)
2)
3)
4)
AAS
Cafena
Muestra
Patrn conjunto
Distancia lineal recorrida por la fase mvil (Y): 7,8 cm
14
Solucin
Patrn AAS
Patrn cafena
Muestra
Patrn conjunto
Distancia lineal
recorrida por el soluto
(X)
6,0 cm
0,4 cm
5,5 cm
5,7 cm
Relacin de frentes
Rf= X/Y
0,77
0,05
0,70
0,73
8.2.
masa promedio por comprimido = 6,4166 g / 10 comprimidos = 0,64166 g/comprimido
Muestra:
i.
m1 = 0,4861 g
ii.
m2 = 0,4818 g
Concentracin (ppm)
2
4
6
10
Absorbancia
0,083
0,083
0,253
0,251
0,327
0,324
0,568
0,567
Absorbancia promedio
0,0830
0,2520
0,3255
0,5675
Curva de calibracin:
15
0.6
f(x) = 0.06x - 0.01
R = 0.99
0.5
0.4
Absorbancia 0.3
0.2
0.1
0
10
11
Concentracin (ppm)
Absorbancia
0,273
0,275
0,282
0,283
0,363
0,361
m1
m2
Quality control
Cafena(
0,2740
0,2825
0,3620
|promedio|+0.0148
mg
)=
L
0.0585
m1
m2
Quality control
0,2740
0,2825
0,3620
[Cafena] mg/L diluido

4.9367521368
5.0820512821
6.441025641
Figura 2. Diluciones efectuadas
Deshaciendo la dilucin:
16
1.
C 1. V 1=C 2.V 2
mg
100.00 mL
L
= C2
5.00 mL
4.9367521368
C 2=98.73504273
mg
L
98.73504273 mg _____ 1L
X ____0.250L
X= 24.683760684 mg
24.683760684 mg _______04861 g muestra
X _______0.64166 g (comprimido)
X= 32.5829703363
2.
mg Cafeina
comprimido
C 1. V 1=C 2.V 2
mg
100.00 mL
L
= C2
5.00 mL
5.0820512821
C 2=101.65025642
mg
L
101.65025642 mg _____ 1L
X ____0.250L
X= 25.412564105 mg
25.412564105 mg _______0,4818 g muestra
X _______0.64166 g (comprimido)
X= 33.8443874712
3.
17
mg Cafeina
comprimido
C 1. V 1=C 2.V 2
mg
100.00 mL
L
= C2
5.00 mL
6.441025641
C 2=128.8251282
mg
L
128.8251282 mg _____ 1L
X ____0.250L
X= 32.20628205 mg cafena
32.20628205 mg Cafena _______0,3620 g de patrn de
cafena
[Cafena] mg/L diluido

m1
m2
4.9367521368
5.0820512821
[Cafena] muestra
mg
24.683760684
25.412564105
mg cafena /
comprimido
32.5829703363
33.8443874712
Clculo de intervalo de confianza (95%)

t n1 s
n
= IC
6.314 x 0,89195661
2
= IC
IC = 3.9822938949
Recuperacin=
Recuperacin=
[ Muestra ]
[ Quality Control ]
. 100
25,04816236
. 100=77,8
32.20628205
Masa promedio muestras de cafena=25,04816236*
18
* Se utiliza la masa promedio de muestra de la solucin de concentracin 6 ppm de

cafena, misma concentracin que la solucin Quality Control. No se utiliza la masa
promedio de cafena por comprimido, ya que no sera comparable con la concentracin
de la solucin Quality Control.
9. Resultados:
9.1.
Se puede afirmar de manera presuntiva la presencia de cafena y cido acetilsaliclico en

la muestra.
9.2.

mg Cafena
[Cafena] = (33.2 4.0) comprimido
10. Discusin de resultados:

10.1. Cromatografa de capa fina:
En la cromatografa de capa fina se observ la separacin de los analitos en la muestra y
se pudo comparar visualmente que la altura de los analitos era similar al de los patrones.
Igualmente se calcul la relacin de frentes (Rf). Con el clculo de los Rf se obtiene un
anlisis cualitativo de la muestra donde presuntivamente se afirma la presencia de cido
acetilsaliclico y cafena ya que los valores de la relacin de frentes entre patrones y
componentes de la muestra son muy similares, se informa un resultado presuntivo
porque no es condicin suficiente para afirmarlo, dado que el valor de Rf varia frente a
distintas condiciones como pueden ser: el tamao de la muestras, las condiciones de
desarrollo, el grado de saturacin de vapores de la fase mvil en la cmara
cromatogrfica, entre otros.
Por dicho motivo es que posteriormente se deben realizar otras determinaciones, en este
caso y dado el resultado en TLC continuamos con la determinacin mediante otros
mtodos (extraccin L-L con espectrometra UV y cromatografa lquida de alta presin:
HPLC).
10.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:
19
La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente

proporcional a la concentracin de la solucin. Por lo tanto, la espectrometra UV/VIS
puede usarse para determinar la concentracin de una solucin.
El porcentaje de recuperacin indica la eficiencia del mtodo de extraccin lquidolquido al cual fue sometida la muestra. El resultado obtenido para dicho porcentaje fue
de 77,8%. Que la eficiencia del mtodo no haya sido mayor puede deberse a errores de
manipulacin de los distintos operadores, errores visuales para efectuar la extraccin de
la fase orgnica y tambin puede deberse a impurezas contenidas en la muestra.
Se prepar una solucin control (Quality control) realizada con un patrn de cafena el
cual recibi el mismo tratamiento que la muestra, cuya funcin es proporcionar un valor
terico frente al cual comparar el resultado obtenido de la muestra, y as determinar el
porcentaje de recuperacin del analito de inters.
11. Conclusiones:
Se logr determinar el contenido de cafena en un comprimido de Cafiaspirina mediante
los mtodos de cromatografa en capa fina, extraccin L-L y espectrometra UV.
12. Bibliografa consultada:

http://www.cafiaspirina.com.ar/cafiaspirina.php
http://profe-farmacognosia.blogspot.com.uy/2009/05/cromatografia-rf-relacionde-frentes.html
13. Anexos:
13.1. Cromatografa de capa fina:
13.1.1. Preparacin de la solucin patrn de cafena 0,8% m/v:
13.1.2. Preparacin de la solucin patrn de cido acetilsaliclico 2,0% m/v:
13.1.3. Preparacin de la solucin patrn conjunto o estndar mixto:
13.2. Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:

13.2.1. Preparacin de 100 mL de una solucin de hidrxido de sodio 1,0 M:
Masar 4 g de hidrxido de sodio en balanza auxiliar.
Transferir dicha masa a un matraz Erlenmeyer de 250 mL.
20
Agregar 100 mL de agua destilada, agitando en crculos hasta

que se disuelva totalmente el reactivo.
13.2.2. Preparacin de una solucin patrn de cafena 6 ppm (Quality

Control):
14.
21
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Cromatografa de capa fina:

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7.2.1. Preparacin de la muestra

Activar la placa cromatogrfica con revelador UV.

7.2.3. Aplicacin de soluciones patrn y muestra

Extraccin lquido-lquido y espectrometra UV:

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Se coloca la bola de decantacin sobre un aro de hierro

7.3.3. Preparacin de las soluciones para la curva de calibracin:

Preparacin de una solucin patrn madre (SPM)

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Transferir dicha masa a un matraz aforado de 100 mL, con

Preparacin de una solucin patrn intermedio (SPI)

Preparacin de una solucin 2 ppm de cafena:

Realizar una toma de 0,4 mL de la SPI con micropipeta.

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cloroformo hasta, aproximadamente, un

Preparacin de una solucin 6 ppm de cafena:

7.3.4. Espectrometra UV:

Medir la absorbancia de cada una de las soluciones patrn de

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Cromatografa de capa fina:

Orden de siembra en placa TLC:

Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

[Cafena] mg/L diluido

Figura 2. Diluciones efectuadas

Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

[Cafena] mg/L diluido

Clculo de intervalo de confianza (95%)

Masa promedio muestras de cafena=25,04816236*

Determinacin de Cafena | Qumica Analtica II | Tecnlogo Qumico | 2016

* Se utiliza la masa promedio de muestra de la solucin de concentracin 6 ppm de