PREINFORME MICROBIOLOGIA DE LABORATORIO

PRACTICA 1: NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

PRESENTADO POR:
YULI PAOLA CORTEZ
Cdigo: 1086981212

TUTOR DE LABORATORIO:
LUCILA RIASCOS FORERO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA. ESCUELA DE CIENCIAS

BSICAS, TECNOLOGA E INGENIERA (ECBT) QUMICA ORGNICA (CEAD) PASTO
NARIO. COLOMBIASESIN DE LABORATORIO 08 DE OCTUBRE DE 2016

INTRODUCCIN
Un laboratorio de microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde se puede habilitar,
manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena
tcnica asptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado. Cuando manejamos
cualquier tipo de muestra debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes
en el ambiente se introduzcan en ellos contaminndolos, o que los microorganismos de la muestra
nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones de estabilidad. En el laboratorio
de microbiologa encontraremos esta condiciones bien en campanas de seguridad biolgica o bien la
proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas. Aunque los microorganismos que se
manipulan no se han considerados patgenos todos los cultivos de todos los microorganismos deben
se manejados con precaucin por su potencial patogenicidad.

OBJETIVOS

Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.

Aprender y utilizar los mtodos de esterilizacin disponibles en el laboratorio.
Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de microbiologa.
Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes de laboratorio.

Que es bioseguridad?
Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las
personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos,

fsicos o qumicos, estas normas de bioseguridad estn destinadas a reducir el riesgo de transmisin de
microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infeccin en Servicios de Salud vinculadas a accidentes
por exposicin a sangre y fluidos corporales.
2. Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de
microbiologa?
Uso adecuado de materiales.
Uso de dotacin: bata, cofia y gafas.
No ingerir alimentos, bebidas,
No fumar en el rea de laboratorio.
Mantener el rea de trabajo organizada
PRACTICA No. 2 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS

Familiarizar al participante con los trminos de medios de cultivo.

Conocer cmo preparar y diferenciar los medios de cultivo.
Conocer las tcnicas de esterilizacin de los medios de cultivo.

Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican segn

su proporcin de Agar y segn su suministro de nutrientes?
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
Microorganismos es observar su crecimiento en sustanciasalimenticias artificiales preparadas en el la
boratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie
de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgenos adecuados, as
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los
lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin
de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Peptonas
Las caractersticas de una peptona dependen de la pureza y calidad del material proteico empleado y
del mtodo de hidrlisis. La hidrlisis cida y alcalina tienden a destruir el contenido de vitaminas de
la protena, y parte del contenido de aminocidos tambin pueden perderse. La hidrlisis enzimtica
tiende a preservar las vitaminas y a mantener intacto el contenido de aminocidos. Por Ej., la casena
pura no contiene hidratos de carbono y tiene gran contenido de triptfano y vitaminas. Una peptona
de casena preparada por hidrlisiscida no tiene triptfano ni carbohidratos y puede usarse como
ingrediente en medios para analizar el contenido vitamnico de sueros o de preparaciones
farmacuticas. Casi todos los extractos de levadura microbiolgicos son en realidad peptona de
levadura, debindose la digestin de las clulas de levaduras a sus propias enzimas autolticas.
INFUSIONES Y EXTRACTOS
Las infusiones y los extractos de carne y otros tejidos se usaron antes de conocrselas peptonas, hoy
se los sigue usando en menor medida.
Examen de peptonas, infusiones y extractos por su contenido microbiano
La excesiva contaminacin microbiana de peptona, infusiones y extractos u otros ingredientes los
hace poco seguros para propsitos cientficos, aunque generalmente favorecen el crecimiento de
otros microorganismos. Si se preparan estos materiales en un laboratorio siempre deben hacerse
las pruebas de contaminacin antes de usarlos. Esto se hace de la siguiente manera:
Los medios pueden ser: lquidos o agarizados.
Agentes solidificantes
El agar
Es un polmero de la galactosa que es esterificado con cido sulfrico y se extrae de ciertas algas
marinas rojas, las Rhodophyceae, debe estar limpio y libre de desechos. Se agrega a la solucin

acuosa del 1,5 al 2%.El medio agarizado comienza a fundir a los 100C, si bien se mantiene lquido
hasta los 45C, en donde se comienza a solidificar.
Ventajas
Prcticamente no es atacado o asimilado por los microorganismos, hay pocos
organismos que lo digieren.

Desventajas
No es til en medios cidos
La gelatina
Es poco usada ya que a temperaturas altas se disuelve y por otra parte numerosos microorganismos
lo digieren, se usa principalmente en microbiologa de suelos. La agarosa es un polisacrido neutro
que junto con la agaropectina es un producto de disociacin del agar. Se usa en pruebas de difusin
inmuno electrofortica, donde la claridad es especialmente importante.
Otros componentes Indicadores colorimtricos
Los indicadores pueden incluirse entre los medios. Los indicadores de pH ms
usadosson rojo fenol, azul bromotimol, prpura de bromocresol y rojo neutro. Estosindicadores se
usan para demostrar la produccin de cido por un hidrato de carbono con tenido en el medio. El
azul de metileno y la resazurina son los indicadores de Eh (carga inica) ms usados actualmente.
Algunos lotes de pH y Eh pueden ser txicos para algunos microorganismos y deben probarse antes
de usarlos.
Medios de cultivos ms usados en microbiologa industrial
Caldo nutriente
Es un medio emprico de uso general para el cultivo de la mayora de las bacterias. Los ingredientes
son:
0Peptona 10 gr.1
Extracto de levadura 10 gr.

2Cloruro de sodio 5 gr.

3Agua destilada 1000 ml
Se pesan los ingredientes y se calientan hasta que se disuelven. Una vez que se ha enfriado, se ajusta
el pH a 7-6. Se autoclava a 1 atmsfera durante 15 minutos para precipitar los fosfatos. Se filtra y se
reparte en tubos tapados con algodn o con tapones a rosca (en esta ltimo caso no se ajusta
completamente las tapas). Se esteriliza a 1 atmsfera durante 20 minutos. Ajustar las tapas a roscar
antes de retirar del autoclave.
Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio slido?
Los medios de cultivo que no se adquieren listos para su uso deben prepararse
en el laboratorio (siguiendo las indicaciones de los fabricantes en el caso de los
que parten
demedios comerciales deshidratados). Posteriormente se esterilizan, se revisan
y se conservan.
En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu?
Algunos medios de cultivo se esterilizan con autoclave, otros al bao Mara y otros mediante
filtracin por membrana. Todos ellos son procedimientos de esterilizacin. En todo caso las
indicaciones del fabricante te indicarn que procedimiento debes seguir encada uno de los medios
comerciales deshidratados.
Cuando peses medios de cultivo deshidratados, ten cuidado de no inhalar el polvo desprendido.
Algunos contienen sustancias txicas para las personas.
Los medios se preparan en frascos ISO de capacidad suficiente para facilitar la agitacin y la
completa disolucin de los distintos componentes. Pero tambin se pueden utilizar auto preparadores,
si el volumen de medio que se necesita es superior a 2L
Aade paulatinamente el agua necesaria, evitando formar una masa
compacta.Todos los medios deshidratados se preparan aadiendo agua desionizada odestilada de
calidad comprobada.
La solucin o la suspensin que se haga debe ser totalmente homognea. S i necesita calentarse,
hazlo lo mnimo posible. Es recomendable calentar el agua a50-65 C, antes de aadirla porque eso

favorece notablemente la disolucin.

Loscomponentes deben agitarse mientras se calientan, sobre todo los agares.
Esterilizacin
Algunos medios de cultivo se esterilizan con autoclave, otros al bao Mara y otros mediante
filtracin por membrana. Todos ellos son procedimientos de esterilizacin. En todo caso las
indicaciones del fabricante te indicarn que procedimiento debes seguir encada uno de los medios
comerciales deshidratados.
Revisin
Es importante comprobar que el medio que acabas de preparar se comporta correctamente. Las
pruebas que debes hacer para tener seguridad son:
1 Revisin macroscpica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo a su color, a su
opalescencia y transparencia, a la humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparicin de
precipitados.
2. Vigilancia de Ph: Porque la mayora de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro.
3. Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 C durante 72 horas una pequea
porcin, representativa del lote de medio preparado, para comprobar que all no crecen grmenes.