Portada: Vivienda ubicada en el valle de Ubaque-Fómeque, Cundinamarca

a una altura de 1850 metros sobre el nivel del mar. La región a una
distancia de 30 kilómetros de Bogotá, fue un área de alta infestación
domiciliar (mayor al 45%) durante la década de los años 90 antes
de que se adelantaran programas de control vectorial y por ende
de transmisión de Trypanosoma cruzi.
Los datos de serología positiva para T. cruzi en escolares de la
zona alcanzaron un promedio de 18%. Este rancho representa
una típica vivienda propicia para la infestación con triatominos,
construída en bahareque y techos de hojas de palma que ofrecen
refugio a los insectos transmisores de la enfermedad de Chagas.
Foto: Felipe Guhl, CIMPAT, Universidad de los Andes.

1
 Biomédica Instituto Nacional de Salud
Volumen 27, Suplemento No. 1, Enfermedad de Chagas - Bogotá, D.C., Colombia - Enero, 2007

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1
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2
 Contenido
Editorial
La enfermedad de Chagas en 1909 y en 2006
Álvaro Moncayo Medina ................................................... 5
Presentación de caso
Enfermedad de Chagas aguda en Colombia, una entidad
poco sospechada. Informe de 10 casos presentados en
el periodo 2002 a 2005
Rubén Santiago Nicholls, Zulma Milena Cucunubá,
Angélica Knudson, Astrid Carolina Flórez, Marleny Montilla,
Concepción Judith Puerta, Paula Ximena Pavía .............. 8
Artículos originales
Expresión de marcadores en células dendríticas de
pacientes chagásicos crónicos estimuladas con la
proteína KMP-11 y el péptido K1 de Trypanosoma cruzi
Sandra Paola Santander, Adriana Cuéllar,
María del Carmen Thomas, Fanny Guzmán,
Alberto Gómez, Manuel Carlos López,
Concepción Puerta .......................................................... 18
Estructura poblacional y variabilidad genética de
Rhodnius prolixus (Hemiptera: Reduviidae) procedente
de diferentes áreas geográficas de Colombia
Diana Carolina López, Carlos Jaramillo,
Felipe Guhl ....................................................................... 28
Lesión celular del miocardio y actividad de la ATPsintasa
mitocondrial en ratas infectadas con una cepa
colombiana de Trypanosoma cruzi
Dairo Alonso Rendón, Carlos M. Genes,
Omar Triana ..................................................................... 40
Análisis de polimorfismos en los genes tripanotión
reductasa y cruzipaína en cepas colombianas de
Trypanosoma cruzi
Winston Rojas, Maria Antonieta Caro,
Juan Guillermo Lopera, Omar Triana, Juan Carlos Dib,
Gabriel Bedoya ................................................................ 50
Caracterización biológica y genética de dos clones
pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi
de Colombia
Luz Adriana Botero, Ana María Mejía, Omar Triana ...... 64
Efecto tóxico de β-cipermetrina, deltametrina y fenitrotión
en cepas de Triatoma dimidiata (Latreille, 1811) y
Triatoma maculata (Erichson, 1848) (Hemiptera,
Reduviidae)
Marlene Reyes, Víctor Manuel Angulo, Claudia Magaly
Sandoval ........................................................................... 75
Comparación de una prueba de PCR basada en los genes
codificantes para la histona H2A/SIRE con pruebas
serológicas convencionales para el diagnóstico de la
enfermedad de Chagas crónica en pacientes colombianos
Juliana Gil, Paula Pavía, Marleny Montilla,
Astrid C. Flórez, Claudia Quintero, Marcela Mercado,
Miguel Vacca, Santiago Nicholls, Concepción Puerta .. 83
Variación del fenotipo antenal de poblaciones del
domicilio, peridomicilio y silvestre de Triatoma dimidiata
(Hemiptera: Reduviidae) en Santander, Colombia.
Corina María Arroyo, Lyda Esteban, Silvia Catalá,
Víctor Manuel Angulo ....................................................... 92
Comparación de los patrones de alimentación y
defecación de Rhodnius colombiensis y Rhodnius
prolixus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) en
condiciones de laboratorio
Andrea Arévalo, Julio César Carranza, Felipe Guhl,
Jairo A. Clavijo, Gustavo Adolfo Vallejo ........................ 101
Interacción tripanosoma-vector-vertebrado y su relación
con la sistemática y la epidemiología de la
tripanosomiasis americana
Gustavo Adolfo Vallejo,Felipe Guhl, Julio César Carranza,
Omar Triana, Gerardo Pérez, Paola Andrea Ortiz,
Dairo Humberto Marín, Lina Marcela Villa, Jazmín Suárez,
Isaura Pilar Sánchez, Ximena Pulido,
Ingrid Bibiana Rodríguez, Leyder Elena Lozano,
Daniel Alfonso Urrea, Fredy Arvey Rivera,
César Cuba-Cuba, Jairo Alfonso Clavijo ...................... 110
Comparación del ciclo de vida de Rhodnius colombiensis
Moreno, Jurberg & Galvão, 1999 y Rhodnius prolixus
Stal, 1872 (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) en
condiciones de laboratorio
Andrea Arévalo, Julio César Carranza, Felipe Guhl,
Jairo Alfonso Clavijo, Gustavo Adolfo Vallejo ............... 119
Comunicación breve
Seroprevalencia de la enfermedad de Chagas y factores
de riesgo asociados en una población de Morroa, Sucre.
Richard Hoyos, Lisandro Pacheco, Luz Adriana Agudelo,
German Zafra, Pedro Blanco, Omar Triana ................. 130
Patrones electroforéticos de hemoproteínas salivares
(nitroforinas) de Rhodnius colombiensis y Rhodnius
prolixus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae)
Andrea Arévalo, Julio César Carranza, Felipe Guhl,
Gustavo Adolfo Vallejo ................................................... 137
Revisión de tema
Actualización de la distribución geográfica y
ecoepidemiología de la fauna de triatominos (Reduviidae:
Triatominae) en Colombia
Felipe Guhl, Germán Aguilera, Néstor Pinto,
Daniela Vergara ............................................................. 143
Instrucciones para los autores
3
 Contents
Editorial
Chagas disease in 1909 and in 2006
Álvaro Moncayo Medina ................................................... 5
Case presentation
Acute Chagas disease in Colombia: a rarely suspected
disease. Report of 10 cases presented during the
2002-2005 period
Rubén Santiago Nicholls, Zulma Milena Cucunubá,
Angélica Knudson, Astrid Carolina Flórez, Marleny Montilla,
Concepción Judith Puerta, Paula Ximena Pavía .............. 8
Original articles
Expression of markers on dendritic cells from chronic
chagasic patients stimulated with the KMP1 protein and
the K1 peptide from Trypanosoma cruzi
Sandra Paola Santander, Adriana Cuéllar,
María del Carmen Thomas, Fanny Guzmán,
Alberto Gómez, Manuel Carlos López,
Concepción Puerta .......................................................... 18
Population structure and genetic variability of Rhodnius
prolixus (Hemiptera: Reduviidae) from different geographic
areas of Colombia
Diana Carolina López, Carlos Jaramillo, Felipe Guhl ..... 28
Myocardial cellular damage and the activity of the
mitochondrial ATPsynthase in rats infected with a
Colombian strain of Trypanosoma cruzi
Dairo Alonso Rendón, Carlos M. Genes,
Omar Triana ..................................................................... 40
Analysis of polymorphisms on trypanothione reductase
and cruzipain genes in Colombian strains of
Trypanosoma cruzi
Winston Rojas, Maria Antonieta Caro,
Juan Guillermo Lopera, Omar Triana, Juan Carlos Dib,
Gabriel Bedoya ................................................................ 50
Biological and genetic characterization of two Colombian
clones of Trypanosoma cruzi groups I and II
Luz Adriana Botero, Ana María Mejía, Omar Triana ...... 64
Toxic effect of β-cipermethrin, deltamethrin and
fenitrothion in colonies of Triatoma dimidiata (Latreille,
1811) and Triatoma maculata (Erichson, 1848)
(Hemiptera, Reduviidae)
Marlene Reyes, Víctor Manuel Angulo, Claudia Magaly
Sandoval ........................................................................... 75
Comparison of a PCR-based on the histone H2A/SIRE
genes with classical serological tests for the diagnosis of
chronic chagasic disease in Colombian patients
Juliana Gil, Paula Pavía, Marleny Montilla,
4
Astrid C. Flórez, Claudia Quintero, Marcela Mercado,
Miguel Vacca, Santiago Nicholls, Concepción Puerta .... 83
Antenal phenotype variation in sylvatic, peridomestic and
domestic populations of Triatoma dimidiata (Hemiptera:
Reduviidae) from Santander, Colombia
Corina María Arroyo, Lyda Esteban, Silvia Catalá,
Víctor Manuel Angulo ....................................................... 92
Comparison on the feeding and defecation patterns of
Rhodnius colombiensis and Rhodnius prolixus
(Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) under laboratory
conditions
Andrea Arévalo, Julio César Carranza, Felipe Guhl,
Jairo A. Clavijo, Gustavo Adolfo Vallejo ........................ 101
Trypanosoma rangeli parasite-vector-vertebrate interac-
tions and their relationship to the systematics and
epidemiology of American trypanosomiasis
Gustavo Adolfo Vallejo,Felipe Guhl, Julio César Carranza,
Omar Triana, Gerardo Pérez, Paola Andrea Ortiz,
Dairo Humberto Marín, Lina Marcela Villa, Jazmín Suárez,
Isaura Pilar Sánchez, Ximena Pulido,
Ingrid Bibiana Rodríguez, Leyder Elena Lozano,
Daniel Alfonso Urrea, Fredy Arvey Rivera,
César Cuba-Cuba, Jairo Alfonso Clavijo ...................... 110
Comparison of the cycle life of Rhodnius colombiensis
Moreno, Jurberg & Galvão, 1999 and R. prolixus Stal,
1872 (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) under
laboratory conditions
Andrea Arévalo, Julio César Carranza, Felipe Guhl,
Jairo Alfonso Clavijo, Gustavo Adolfo Vallejo ............... 119
Brief communication
Seroprevalence of Chagas disease and associated risk
factors in a population of Morroa, Sucre
Richard Hoyos, Lisandro Pacheco, Luz Adriana Agudelo,
German Zafra, Pedro Blanco, Omar Triana ................. 130
Electrophoretic patterns of salivary hemeproteins
(nitrophorines) of Rhodnius colombiensis and Rhodnius
prolixus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae)
Andrea Arévalo, Julio César Carranza,
Felipe Guhl, Gustavo Adolfo Vallejo .............................. 137
Topic review
Present geographical distribution and ecoepidemiology of
the triatomine fauna (Reduviidae: Triatominae) in Colombia
Felipe Guhl, Germán Aguilera, Néstor Pinto,
Daniela Vergara ............................................................. 143
Instructions for authors
 Biomédica Instituto Nacional de Salud
Volumen 27, Suplemento No. 1, Enfermedad de Chagas - Bogotá, D.C., Colombia - Enero, 2007

Editorial
La enfermedad de Chagas en 1909 y en 2006
Cuando Carlos Chagas fue comisionado por Oswaldo Cruz en 1907 para que viajara a Lassance en el
Estado de Minas Gerais a investigar y controlar una epidemia de paludismo, no podía imaginar que iba
a realizar un trabajo que lo inmortalizaría.
En efecto, al leer el informe científico de sus hallazgos, redactado magistralmente en un estilo claro y
elegante, el lector percibe que está ante las observaciones y las deducciones precisas de un grande de
la Medicina (1).
Chagas era en ese momento, a los 28 años, asistente de investigación en el Instituto Soroterápico de
Manguinhos dirigido por Oswaldo Cruz desde 1902, en donde estaba estudiando experimentalmente en
primates, un parásito flagelado al que inicialmente llamó Trypanosoma minasense, aislado de un insecto
reduvídeo proveniente del norte del Estado de Minas Gerias (2).
Cuando Chagas llegó a Lassance constató que estos mismos insectos habitaban en las hendiduras de
las paredes de barro de las habitaciones de los campesinos, a quienes picaban por las noches en la
cara y que, por ello, se conocían localmente como barbeiros.
Por otra parte, se enteró de que en esa área era frecuente una afección que aparecía en el hombre y
que atacaba principalmente a los niños. Consistía en un cuadro sintomático característico con episodios
febriles, anemia importante, esplenomegalia, edema palpebral y adenopatías ganglionares que, en la
gran mayoría de los casos, evolucionaba silenciosamente pero en una cierta proporción progresaba
hacia el desarrollo de lesiones cardíacas graves.
La descripción completa de este cuadro clínico la hace en una niña de dos años, Berenice, de cuya
sangre aisló los mismos tripanosomas que pudo inocular en los animales de laboratorio en los que,
posteriormente, describió las diferentes fases del ciclo evolutivo del parásito. Al describirlo en su
primera comunicación científica ya mencionada, lo denomina para siempre Trypanosoma cruzi, en
homenaje a su maestro.
Las alteraciones cardíacas, la forma más grave de las lesiones crónicas de esta enfermedad, ya las
había observado y las describe así:
“En la sintomatología verificada entonces, lo que más hondo me impresionó fue la frecuencia de las
alteraciones del ritmo cardíaco en extrasístoles en los habitantes de la región, especialmente en aquellos
de casas infestadas por el triatoma.”
El vínculo entre el agente causal, el insecto transmisor y el cuadro clínico estaba completo.
Estos notables descubrimientos los hizo Chagas en veinte meses, viviendo en un vagón del ferrocarril
central de Brasil donde había instalado su vivienda y su laboratorio de campo en Lassance.
A los 33 años, Carlos Chagas había completado sus descubrimientos y había publicado sus trabajos
científicos, por lo que entraría, con reconocimiento mundial, en la Historia de la Medicina.
En una secuencia que no tiene paralelo, Chagas descubre el agente etiológico, el insecto transmisor y
la enfermedad que lleva su nombre y la comunica en su artículo publicado en 1909 en el primer número
de las Memorias del Instituto Oswaldo Cruz.

- 5
Después de esta publicación y de las que siguieron, los homenajes y los reconocimientos mundiales se
suceden. Es nombrado director del Instituto de Manguinhos, director del Departamento Nacional de
Salud Pública y académico de la Academia Nacional de Medicina de Brasil y de otras Academias de
Medicina del continente, entre ellas la de Colombia, donde fue elegido en votación secreta y por
unanimidad como Miembro Correspondiente en la sesión del 27 de septiembre de 1918 (3).
En 1910, en la conferencia que presentó en la Academia Nacional de Medicina de Brasil, Carlos Chagas
dijo:
“Como veis, señores, el estudio de esta molestia presenta de curioso el hecho de que hemos partido
aquí del conocimiento previo del germen, de haberlo estudiado minuciosamente en su biología, para,
más tarde llegar, basado de alguna forma en esa misma biología, a demostrar que es el factor etiológico
de una especie mórbida humana. En el esclarecimiento etiológico de las otras especies mórbidas nada
de similar encontramos; en todas ellas, después de profundamente estudiada la molestia, en su
sintomatología, en sus condiciones epidemiológicas, se ha llegado a la verificación del agente
mórbido” (4).
Más adelante, previendo la necesidad y la factibilidad del control de la enfermedad con campañas de
salud pública, de fumigación y de mejoramiento de la vivienda rural, nos dice:
“¿Se podrá encontrar en la higiene pública medios eficaces de atenuación del mal? Creemos que sí, si
tal problema, seguramente problema de Estado y de humanidad, se convierte en preocupación de un
estadista científicamente bien orientado. En verdad, el hombre de Estado que haga de la campaña
contra ese mal un programa de administración y que obtenga éxito, habrá conquistado de mis
compatriotas, de las generaciones futuras de Minas, la mayor prenda de reconocimiento” (4).
Los notables adelantos en investigación sobre la enfermedad de Chagas deben acreditarse a los
investigadores de América Latina que han profundizado en el conocimiento de los componentes biológicos
y sociales de esta enfermedad.
Las publicaciones indexadas en bases de datos internacionales evidencian el alto nivel de los trabajos
científicos de los investigadores del continente.
Como ejemplo, analicemos los datos bibliométricos de la base de datos de la National Library of
Medicine de Washington, D.C. (www.nih.nlm.gov, 2005.). En 56 años, entre 1949 y 2005 se han publicado
8.976 artículos científicos sobre esta enfermedad que se reparten, según los temas, como aparece en
el siguiente cuadro:

Tema Artículos Años de la publicación

Trypanosoma cruzi, investigación básica 7.408 (83%) 1949-2005
Triatoma infestans, investigación básica 665 (7%) 1950-2004
Rhodnius prolixus, investigación básica 617 (7%) 1950-2004
Tratamiento de la enfermedad de Chagas 286 (3%) 1966-2005
Total 8.976 (100%) 1949-2005

El 97% del total de artículos indexados ha versado sobre temas de investigación básica sobre T. cruzi
y sobre dos de los más importantes de sus vectores, Triatoma infestans y Rhodnius prolixus. Es muy
contrastante esta proporción cuando se ve que solamente el 3% de los trabajos se refiere al tratamiento
y no se registran trabajos sobre el control de la enfermedad.

6
Sin embargo, los logros que se han obtenido para interrumpir la transmisión del parásito causante de la
enfermedad, T. cruzi, por medio de la eliminación del vector domiciliado, T. infestans, mediante programas
de fumigación con insecticidas de efecto residual, se deben a los compromisos políticos y financieros
de los gobiernos de los países endémicos, en particular, de los países que constituyen la Iniciativa del
Cono Sur, es decir, los ministerios de Salud de Brasil, Chile y Uruguay, donde la transmisión se ha
interrumpido.
El pasado 8 de julio de 2006 se celebró en el Ministerio de Salud de Brasil, en Brasilia, el acto de
declaración de la interrupción de la transmisión vectorial de la enfermedad de Chagas por T. infestans
en toda el área endémica de Brasil, certificada por una Comisión Internacional de Expertos convocada
por la Organización Panamericana de la Salud. Este es un triunfo de la salud pública brasilera y
continental, que honra al ministerio de Salud y a las instituciones de investigación biomédica de Brasil.
Por fortuna, este deseo de Carlos Chagas expresado –como vimos- en 1910 se ha cumplido en su país
y en otros del continente.
En Colombia, la investigación clínica y de laboratorio, particularmente en diagnóstico serológico,
bioquímica y caracterización del parásito y en estudios sobre genética de poblaciones vectoriales –
como lo demuestra este número de Biomédica–, han tenido importantes avances.
Sin embargo, no existe un programa de control vectorial a nivel nacional que marque las pautas de
acción, las implemente y las evalúe sistemáticamente. Creo que el gobierno nacional está en deuda
con las poblaciones de colombianos que están viviendo en zonas endémicas para controlar los vectores
y evitar la infección con el parásito causante de la enfermedad de Chagas.
Álvaro Moncayo Medina
Investigador asociado, CIMPAT, Universidad de los Andes, Bogotá, D. C., Colombia.
Académico, Academia Nacional de Medicina, Bogotá, D. C., Colombia.
Referencias
1. Chagas C. Nova tripanozomiase humana. Estudos sobre a morfolojía e o ciclo evolutivo de
Schizotrypanum cruzi n.gen., n.sp., ajente etiolójico de nova entidade morbida do homen. Mem Inst
Oswaldo Cruz 1909;1:159-218.
2. Brener Z. A descoberta: homenagem aos 80 anos da descoberta da doença de Chagas. Mem Inst
Oswaldo Cruz 1989;84(Suppl. II):1-6.
3. Academia Nacional de Medicina de Colombia. Libro de actas, 1914-1918. Bogotá: Archivos de la
Academia; 1919. p.156.
4. Chagas C. Nova entidade morbida do homem. Brazil Medico 1910;XXIV:443-7.

7
Nicholls
BiomédicaR.S., Z.M., Knudson A. et al
Cucunubá1):8-17
2007;27(supl. Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17

PRESENTACIÓN DE CASO

Enfermedad de Chagas aguda en Colombia, una entidad poco

sospechada. Informe de 10 casos presentados en el periodo
2002 a 2005
Rubén Santiago Nicholls 1, Zulma Milena Cucunubá 2, Angélica Knudson 1,
Astrid Carolina Flórez 1, Marleny Montilla 1, Concepción Judith Puerta 3, Paula Ximena Pavía 3

1
Grupo Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá, D.C., Colombia
2
Escuela de Medicina, Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Tunja, Boyacá, Colombia
2
Laboratorio Parasitología Molecular, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia

Introducción. Los casos de enfermedad de Chagas aguda informados en Colombia son

esporádicos.
Objetivo. Describir 10 casos notificados al Grupo de Parasitología del Instituto Nacional de
Salud entre 2002 y 2005.
Materiales y métodos. Utilizando información de historias clínicas, fichas epidemiológicas,
informes de resultados de exámenes de laboratorio y análisis de sangre, se tabularon variables
demográficas, hallazgos clínicos, paraclínicos y de laboratorio. Se realizaron extendidos de
sangre periférica, identificación serológica para IgG mediante inmunofluorescencia indirecta,
aislamiento en cultivo e inoculación en ratones, pruebas de reacción en cadena de la polimerasa
y análisis isoenzimático.
Resultados. El 100% de los casos procedían de zonas endémicas; tres se informaron en
Putumayo, dos en cada uno de los departamentos de Arauca, Casanare, Norte de Santander
y uno en Santander. La presunta vía de transmisión fue vectorial; en el 30% había convivencia
con el vector. El 70% fueron adultos entre los 18 y los 50 años y el 30% niños entre los seis
meses y los dos años. El síntoma predominante fue fiebre en el 90%. Los signos de puerta de
entrada fueron infrecuentes; solamente un paciente presentó un probable signo de Romaña.
Tres pacientes presentaron miocarditis, dos desarrollaron falla cardiaca, y uno taponamiento
cardíaco. La parasitemia fue evidente en nueve casos; las pruebas serológicas fueron reactivas
en cinco casos y también en cinco casos se logró aislamiento del parásito. El análisis
isoenzimático identificó Trypanosoma cruzi grupo I.
Conclusiones. La variabilidad clínica predominó. Ningún caso se sospechó clínicamente. Es
importante incluir esta enfermedad como diagnóstico diferencial del síndrome febril en regiones
endémicas debido a su buena respuesta al tratamiento etiológico el cual previene la fase
crónica.
Palabras clave: Colombia, enfermedad de Chagas, Trypanosoma cruzi , fase aguda,
miocarditis, serología, reacción en cadena de la polimerasa.
Acute Chagas disease in Colombia: a rarely suspected disease. Report of 10 cases
presented during the 2002-2005 period
Introduction. In Colombia, reported cases of acute Chagas disease are sporadic.
Objective. Ten cases were described that had been reported to the Parasitology Laboratory of
the Colombian National Health Institute between December 2002 and November 2005.
Materials and methods. Information from clinical records, epidemiological report forms,
laboratory and blood tests was collated. In addition the following data were compiled:
demographic variables, clinical findings, results of laboratory tests and other exams (such as
peripheral blood smears), IFAT for IgG antibodies, isolation in culture medium, inoculation in
mice, polymerase chain reaction tests and isoenzyme eletrophoresis.
Results. All the cases presented in known endemic areas for Chagas disease transmission in
Colombia. Three cases were from Putumayo Province, two each from the provinces of Arauca,

8
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17 Chagas agudo en Colombia 2002-2005

Casanare, Norte de Santander and one from Santander Province. The probable mode of
transmission was vector-borne. Seven cases presented in adults aged 18 to 50, three in children
aged 6 months to 2 years. Seven were male and three were female. The most frequent symptom
was fever in nine cases. Signs of portal of entry were rare; only one patient presented a possible
Romaña´s sign. Three patients presented myocarditis, two acute cardiac failure and one cardiac
tamponade. Parasitemia was evident in nine cases; five had positive IgG serological tests; five
cases were confirmed through parasite isolation; isoenzyme electrophoresis showed
Trypanosoma cruzi group I.
Conclusions. Clinical variability prevailed. In none of the cases was a clinical diagnosis
suspected. The diagnosis was made and confirmed through laboratory tests alone. The results
highlight the importance of including this disease in the differential diagnosis of febrile syndrome
in endemic regions due to its good response to etiological treatment and thereby preventing its
progression to the chronic phase.
Key words: Colombia, Chagas disease, Trypanosoma cruzi, acute phase, myocarditis, serology,
polymerase chain reaction.

La enfermedad de Chagas constituye un como cardiopatía o enfermedad digestiva, entre

importante problema de salud pública en Centro y
Sur América. Afecta aproximadamente a 20
millones de personas, y 100 millones se
encuentran en riesgo de infección. Cada año se
presentan aproximadamente 500.000 casos
nuevos de infección, de los cuales 300.000 son
niños (1). La enfermedad está directamente
relacionada con las dificultades socioeconómicas
de las comunidades, sus condiciones de vivienda,
el acceso a la educación y los movimientos
migratorios (2-7). En Colombia, se calcula que el
7% de la población está infectada y que el 23%
se encuentra en riesgo de contraer la infección (8).
Se ha descrito la presentación clínica en tres
fases. La primera, fase aguda, ocurre más o menos
dos a cuatro semanas después a la infección, es
sintomática sólo en 1% a 2% de los casos (1,4,9),
se caracteriza por alta parasitemia y en ausencia
de tratamiento, los síntomas persisten por dos a
cuatro meses (10). En la segunda, fase
indeterminada, disminuye la parasitemia y con ella
desaparecen las manifestaciones clínicas; ésta
se detecta por métodos serológicos (4,7).
Finalmente, la fase crónica puede manifestarse
al cabo de 10 o más años después de la infección
Correspondencia:
Rubén Santiago Nicholls, Grupo de Parasitología, Instituto
Nacional de Salud
Avenida Calle 26 No. 51-60, Bogotá, D.C., Colombia
Tel.: +571 2207700, ext. 423
rnichols@ins.gov.co
Recibido: 20/09/05; aceptado: 17/02/06
otras. Sin embargo, sólo de 20% a 40% de la
población infectada llega a esta fase; el resto
permanece asintomático y probablemente muera
por una causa ajena a la enfermedad de Chagas
(2,4,11).
La fase aguda clínicamente evidente se presenta
por lo general en niños menores de 10 años y en
formas benignas, con una tasa de mortalidad entre
2% y 8% (4,9). Sin embargo, el diagnóstico de
esta fase a cualquier edad se dificulta debido a la
heterogeneidad de los hallazgos clínicos, lo cual
sugiere que la mayoría de los casos agudos de
enfermedad de Chagas no son diagnosticados (9).
El último informe publicado sobre casos de
Chagas agudo en Colombia fue el de un brote en
1999 en Guamal, Magdalena, zona sin
antecedentes de transmisión de enfermedad de
Chagas, en donde se describieron 13 casos de
síndrome febril asociado a miocarditis aguda, cinco
de ellos fatales (12).
En el presente trabajo se describen las
características epidemiológicas y los hallazgos
clínicos y de laboratorio de diez casos de Chagas
agudo, que fueron notificados al Grupo de
Parasitología del Instituto Nacional de Salud (INS)
Colombia, durante el periodo comprendido entre
diciembre de 2002 y noviembre de 2005.
Materiales y Métodos
Se utilizó la información correspondiente a
historias clínicas, fichas epidemiológicas, informes

9
Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al
de resultados de laboratorios y análisis de sangre
de los diez pacientes, y se tabularon las variables
demográficas y epidemiológicas, y los principales
hallazgos clínicos, paraclínicos y de laboratorio.
Hubo limitantes metodológicas, pues los casos
se reportaron de distintas maneras y procedían
de diferentes fuentes, por lo que la información
suministrada no guardaba uniformidad. En los
casos en que se remitieron muestras de sangre
al Grupo de Parasitología del INS, se realizaron
extendidos de sangre periférica utilizando
coloraciones de Giemsa y gota gruesa, aislamiento
en cultivos con medio de NNN modificado y REI
modificado al 2% con suero bovino fetal y
antibiótico gentamicina 100 µg/ml (13), inoculación
en ratones Balb c (14), manteniendo durante un
mes en una sala de alta seguridad del bioterio del
Instituto Nacional de Salud, análisis electroforético
para identificación de zimodemas en acetato de
celulosa con las enzimas malato deshidrogenasa,
glucosa fosfato isomerasa, isocitrato deshidroge-
nasa y enzima málica (15), y reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) con los iniciadores
TcH2AF/R (16) y S35/S36 (17), el primero es una
secuencia que se mantiene a lo largo de todos
los tripanosomatidos, y el segundo es específico
de Trypanosoma cruzi. Los métodos serológicos
para identificación de anticuerpos IgG fueron el
ensayo inmuno-enzimático (Elisa) y la
inmunofluorescencia indirecta (IFI) (8), con puntos
de corte en 0,4 y 1:32, respectivamente. El
tratamiento, benzonidazol (Rochagán R), fue
suministrado por el INS a todos los pacientes.
Resultados
Todos los casos se presentaron en zonas
endémicas conocidas por su infestación con
triatominos; 30% de ello se informó en Putumayo,
dos en cada uno de los departamentos de Arauca,
Casanare y Norte de Santander, y uno en
Santander, todos en residentes en zonas rurales,
incluidos dos soldados en ejercicio. La presunta
vía de transmisión fue vectorial, pero sólo en el
30% de los casos los pacientes manifestaron
convivir con el vector.
Setenta por ciento de los pacientes era adulto,
con edades entre los 18 y los 50 años, y 30%
niños con edades entre los seis meses y los dos
10
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
años; la distribución por sexos correspondió a siete
casos en hombres y tres en mujeres.
El síntoma predominante en 90% de los casos
fue la fiebre. Otros síntomas importantes fueron
cefalea, astenia y adinamia en el 40%. Los signos
de puerta de entrada no fueron frecuentes, sólo
un paciente presentó posible signo de Romaña,
que no se pudo confirmar, y otro, un posible
chagoma. El 30% de los pacientes presentó
miocarditis y el 20% desarrolló falla cardiaca, uno
de ellos con taponamiento cardiaco que requirió
cirugía (ventana pericárdica) y manejo en cuidados
intensivos.
La parasitemia fue evidente con examen en fresco
en el 90% de los casos, en los cuales se
identificaron tripomastigotes circulantes; ésta fue
la principal herramienta diagnóstica. Las pruebas
serológicas anti - IgG fueron reactivas en el 50%
de los casos aún en la fase aguda. En el 50% se
logró aislamiento del parásito por medio de
inoculación en ratones, cultivo y confirmación del
parásito con PCR. El análisis isoenzimático
identificó T. cruzi grupo I. En ninguno de los casos
hubo sospecha clínica inicial de tripanosomiasis.
A continuación se presenta una breve descripción
de cada uno de los casos siguiendo el orden
cronológico de la notificación.
Caso 1
Niña de seis meses, natural y procedente de zona
rural del municipio de Puerto Guzmán, Putumayo,
llevada a consulta por una lesión supurante en
cuello presente desde el nacimiento, la cual no
cedió con antibióticos. En el examen físico se
encontró una lesión que sugería una fístula, según
lo referido en la historia clínica. Con este
diagnóstico se programó para cirugía. En
exámenes prequirúrgicos se reportó la presencia
de tripomastigotes de T. cruzi en extendido de
sangre periférica. Se prescribió tratamiento
etiológico con benzonidazol por 60 días. El
diagnóstico fue confirmado mediante aislamiento,
cultivo, isoenzimas, inoculación en ratón y PCR.
Caso 2
Mujer de 50 años, procedente de zona rural del
municipio de Saravena, Arauca. Presentó un
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
cuadro clínico de 15 días de evolución consistente
en fiebre, deposiciones diarréicas y, posterior-
mente, disnea, el cual la obligó a consultar en
varias ocasiones. La sintomatología, especial-
mente la disnea, empeoró, por lo cual consultó
nuevamente, encontrándose en el examen físico
signos claros de insuficiencia cardiaca. En la
radiografía de tórax se evidenció cardiomegalia y
derrame pleural, y el ecocardiograma reportó
taponamiento cardiaco. Se la programó para
cirugía, se le realizó ventana pericárdica, y en el
líquido pericárdico obtenido se encontraron
tripomastigotes de T. cruzi según lo reportado por
el Laboratorio Clínico del Hospital Erasmo Meoz.
Luego de un mes de hospitalización y tratamiento
médico en cuidados intensivos, la paciente
evolucionó hacia la mejoría y se inició tratamiento
etiológico con benzonidazol en dosis de 350 mg/
día por 60 días. Se logró aislamiento del parásito,
cultivo, e identificación por isoenzimas y PCR.
Caso 3
Hombre de 35 años, proveniente de zona rural del
municipio de Támara, Casanare. En la historia
clínica se registró un cuadro de doce días de
evolución, cuya única manifestación fue la fiebre,
y examen físico normal. Se realizó gota gruesa
encontrándose formas de T. cruzi, según el reporte
del Laboratorio Departamental de Salud Pública
de Casanare. En el mismo laboratorio se realizó
determinación de anticuerpos específicos tipo IgG
mediante Elisa e IFI con resultados positivos. Se
administró tratamiento etiológico con benzonidazol
a dosis de 300 mg/día por 60 días. El diagnóstico
fue confirmado por extendido de sangre periférica
e IFI reactivo 1:128, en el INS.
Caso 4
Hombre de 31 años, soldado, procedente del
municipio de Girón, Santander. Consultó en
repetidas ocasiones, por cuadro de astenia,
adinamia y fiebre esporádica. Luego de cuatro
meses de esta sintomatología y múltiples manejos
médicos, se realizó gota gruesa encontrándose
formas de T. cruzi según el reporte del Laboratorio
Clínico del Hospital San Juan de Dios de Girón,
confirmado por el Laboratorio Departamental de
Salud Pública de Santander. Según este último,
las pruebas serológicas IgG fueron negativas. No
Chagas agudo en Colombia 2002-2005
se envió suero para confirmación en el INS, como
tampoco información más detallada acerca de la
historia clínica. Se prescribió tratamiento con
benzonidazol a dosis de 300 mg/día por 60 días.
Caso 5
Hombre de 26 años, procedente de zona rural del
municipio de Tibú, Norte de Santander. Consultó
por cuadro de cinco días de fiebre, escalofríos,
dolores musculares, cefalea, artralgias, astenia y
adinamia. Se realizó estudio para hemoparásitos,
encontrándose ocasionales tripomastigotes,
según el reporte del Laboratorio Clínico del Hospital
Erasmo Meoz. El ecocardiograma mostró leve
derrame pericárdico y leve dilatación ventricular
izquierda. Además, se encontró franca leucopenia
(3.200 leucocitos/µl) y plaquetopenia (69.000
plaquetas/µl). Se administró tratamiento etiológico
con benzonidazol en dosis de 350 mg/día por 60
días. El diagnóstico se confirmó por lectura de
lámina de extendido de sangre periférica en el INS.
Caso 6
Hombre de 16 años, procedente de zona rural del
municipio El Peñón, Santander. Consultó por cuadro
de cinco días de evolución consistente en eritema
y edema palpebral izquierdo progresivo asociado
a secreción ocular purulenta. En el examen físico
se encontró edema palpebral y conjuntiva
izquierda hiperémica sin secreciones. Se hizo
diagnóstico de celulitis periorbitaria y se inició
manejo antibiótico ambulatorio. Un año después
consultó por cuadro de tres días consistente en
debilidad, fiebre subjetiva, disnea, cefalea,
malestar general y dolor faríngeo. En la ficha epide-
miológica se consignó signo de Romaña positivo
(probablemente en retrospectiva). Se realizaron
pruebas serológicas, reportadas como Elisa
positivo e IFI reactivo con título de 1:32, por parte
del Laboratorio Departamental de Salud Pública
de Santander. Se administró tratamiento etiológico
con benzonidazol a una dosis de 250 mg/día
durante 60 días. El diagnóstico fue confirmado
mediante serología por IFI reactiva 1:64 en el INS.
No se envió muestra de sangre para cultivo.
Caso 7
Soldado de 18 años, natural de Ibagué y
procedente de Putumayo. Consultó por cuadro de
11
Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al
ocho días consistente en mareo, fiebre
intermitente de predominio nocturno y cefalea fron-
tal intensa; además informó caída desde su propia
altura con pérdida de la conciencia. Se realizó
extendido de sangre periférica encontrándose dos
formas de tripomastigotes de T. cruzi, según el
Laboratorio del Establecimiento de Sanidad Militar
“Simona de Luz Duque de Alzate”. Se prescribió
tratamiento con benzonidazol por 60 días. El
diagnóstico se comprobó por medio de lectura de
lámina (Figura 1), aislamiento, cultivo, isoenzimas,
inoculación en ratón y PCR, a pesar de lo cual el
paciente presentó pruebas serológicas para
anticuerpos IgG persistentemente negativas (una
prueba Elisa a los 12 días de enfermedad en el
Laboratorio Departamental de Salud Pública y dos
pruebas IFI en el INS con intervalo de un mes
durante un periodo de dos meses).
Caso 8
Niño de dos años procedente del área rural de
Casanare. Fue llevado a consulta por presentar
fiebre de un mes de evolución y síntomas de
faringitis, por lo que recibió manejo antibiótico en
dos oportunidades. Sin presentar mejoría, consultó
nuevamente por persistencia de fiebre y aparición
de edemas. Le fue realizada radiografía de tórax
que evidenció cardiomegalia. El ecocardiograma
reportó miocardiopatía y derrame pericárdico y
pleural, por lo cual fue remitido a Bogotá donde
se inició manejo médico. Se realizó serología para
Chagas con resultado positivo, confirmado con
IFI reactivo 1:32, por el Laboratorio del Hospital
de La Misericordia. El paciente presentó evolución
favorable. Se administró tratamiento etiológico con
benzonidazol en dosis de 100 mg/día por 60 días.
El diagnóstico fue comprobado en el INS por medio
de aislamiento, cultivo, isoenzimas, inoculación
en ratón y PCR.
Caso 9
Mujer de 38 años, procedente de zona rural de
Durania, Norte de Santander. Consultó por cuadro
de 15 días consistente en fiebre, escalofrío,
osteomialgias y malestar general. Los paraclínicos
diagnosticaron infección de vías urinarias y se
inició manejo antibiótico. Sin presentar mejoría
consultó nuevamente; se diagnosticó enfermedad
pélvica inflamatoria, la cual se manejó con
12
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
Figura 1. Tripomastigote en sangre periférica de un paciente
con enfermedad de Chagas en fase aguda.
antibióticos. Sin embargo, la paciente persistió
sintomática con picos febriles repetidos; se realizó
estudio para hemoparásitos encontrándose
tripomastigotes de T. cruzi, según informe del
Laboratorio Clínico del Hospital Erazmo Meoz. Se
administró tratamiento etiológico con benzonidazol
en dosis de 300 mg/día por 60 días. El diagnóstico
fue confirmado en el INS por lámina de extendido
de sangre periférica, y serología reactiva por IFI
1:64. El cultivo fue negativo cuatro meses
después de tomado. Posteriormente, el
Laboratorio Departamental de Salud Pública de
Norte de Santander informó Western blot positivo
para VIH.
Caso 10
Niño de dos años y medio de edad, procedente
de zona rural del municipio de Puerto Leguízamo,
Putumayo. Fue llevado al Hospital de María
Angelines por presentar un cuadro de 15 días
consistente en fiebre alta e intermitente, astenia
y adinamia. El examen físico reveló fiebre,
adenopatías múltiples y leve hepatoesple-
nomegalia. Se realizó gota gruesa lográndose
identificar tripomastigotes de T. cruzi. La
radiografía de tórax y el electrocardiograma fueron
normales. El cuadro cedió rápidamente, se inició
tratamiento etiológico con benzonidazol en dosis
de 100 mg/día por 60 días. El diagnóstico fue
confirmado en el INS por lámina de extendido de
sangre periférica y cultivo positivo un mes depués
de tomado. La serología inicial con técnica de IFI
a los cinco días de sintomatología fue negativa,
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
pero una segunda, a las dos semanas, fue positiva
con resultado 1:64. En estudio de campo no se
identificaron vectores ni otros pacientes infectados
cuyas muestras fueron sometidas a extendido de
sangre periférica y serología. Se logró aislar en
cultivo hasta luego de seis meses. La PCR fue
reactiva.
Discusión
Hallazgos epidemiológicos y demográficos
En todos los casos descritos, el principal
antecedente epidemiológico fue la residencia en
una zona endémica para transmisión de T. cruzi
por triatominos (8). Se ha descrito que la mayoría
de pacientes con manifestaciones agudas de la
enfermedad de Chagas son niños (9) pero la
mayoría de los casos aquí descritos ocurrieron
en adultos, al igual que en otras series (18-20).
La vía de transmisión probablemente fue vectorial.
Solamente tres pacientes conocían los triatominos
y convivían con estos, pero únicamente se realizó
estudio de convivientes en uno de los casos y no
se hallaron otras personas afectadas. Debido a
esto, y a la actividad predominante en regiones
selváticas, es probable que la infección en los
soldados y en algunos pacientes se adquiriera a
través de vectores selváticos. No hubo nexo de
tipo espacial ni temporal entre los casos. Por
estudios previos sobre distribución geográfica de
triatominos en Colombia se sabe que en todos
los sitios de procedencia de los casos hay
presencia de triatominos (2,8).
Variabilidad clínica
La variabilidad en las manifestaciones clínicas y
los hallazgos paraclínicos fue predominante, tal
como lo describieron otros autores (18-20),
especialmente en un estudio realizado en
Venezuela entre los años 1988 y 1996, el cual
describió 59 casos de Chagas agudo con 19
patrones sintomáticos (18).
Los signos de puerta de entrada aparente más
frecuentemente reportados son el complejo
oftalmo-ganglionar o signo de Romaña (20,21) y
el chagoma de inoculación (4,9), pero en este
informe solo se describió un caso con un posible
signo de Romaña, probablemente como una
Chagas agudo en Colombia 2002-2005
interpretación en retrospectiva de la fase aguda
ocurrida un año atrás (caso siete). Adicionalmente,
en el caso uno, la fístula en el cuello pudo haber
tenido su origen en un chagoma. A pesar de que
en otras publicaciones se ha encontrado una
incidencia alta, en esta serie de diez casos, no
fue común encontrar los signos de puerta de
entrada (19,20).
La manifestación más frecuente es la fiebre (18)
presentándose en esta serie en el 90% de los
casos (Cuadro 1). Esta no tiene una característica
específica, puede ser intermitente ó incluso
manifestarse como síndrome febril prolongado sin
otra sintomatología (4). En cuanto a síntomas
neurológicos, en un caso se registró cefalea
intensa, asociada con caída desde su propia altura
y pérdida de conciencia, pero el paciente se
recuperó rápidamente. La meningoencefalitis
chagásica aguda es una manifestación
especialmente frecuente en lactantes (4, 22), pero
no se evidenció en ninguno de los dos niños de
esta serie.
La evolución de la enfermedad chagásica aguda
es generalmente benigna, a pesar de lo cual 20%
de los casos presentó manifestaciones graves de
compromiso cardiaco. En la Guyana Francesa,
se reportaron seis casos entre 1994 y 1999, todos
en adultos, con miocarditis aguda, pericarditis,
falla cardiaca grave, disfunción sistólica y derrame
pericárdico (19). En Brasil, de cuatro casos
reportados recientemente, tres pacientes
Cuadro 1. Distribución de signos y síntomas en los casos
de Chagas agudo 2002 a 2005.
Signos y síntomas Frecuencia
n/N
Fiebre 9/10
Astenia/adinamia 4/10
Cefalea 3/10
Cardiomegalia 3/10
Falla cardiaca 2/10
Edemas 2/10
Hepatomegalia 2/10
Signos entrada 2/10
Derrame pleural 2/10
Diarrea 2/10
Esplenomegalia 1/10
Adenopatías 1/10
13
Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al
presentaron franco taponamiento cardiaco, que
requirió tratamiento en unidad de cuidados
intensivos, y finalmente fallecieron (20). En la serie
que presentamos, el 30% de los pacientes
presentaron miocarditis chagásica aguda; dos de
ellos, un adulto y un niño, con manifestaciones
graves, a saber, falla cardiaca con cardiomegalia,
edemas, hepatomegalia y dificultad respiratoria.
En uno de estos casos se presentó taponamiento
cardiaco que requirió cirugía (ventana pericárdica)
y manejo en unidad de cuidado intensivo; el
electrocardiograma evidenció voltaje disminuido
y cambios de repolarización, tal como se ha
descrito en otros informes (9,19). El otro paciente
presentó cardiomegalia y derrame pericárdico leve
sin evidenciar manifestaciones clínicas. Así, a
pesar de no evidenciarse clínicamente, la
miocarditis puede presentarse con una frecuencia
importante, tal como se informó en el reporte
venezolano (18).
Las reactivaciones en el contexto del sida, se
acompañan de manifestaciones neurológicas en
75% a 90% de los casos, e incluso hacen parte
de las patologías definitorias del sida (23,24). Se
prevé que estas reactivaciones sean cada vez
más frecuentes por el aumento del sida en el
mundo. El caso nueve presentó prueba
confirmatoria para VIH, lo cual sugiere que podría
corresponder a una reactivación de una infección
latente por T. cruzi adquirida previamente. Sin
embargo, no presentó características clínicas
propias de una reactivación, por lo cual
concluimos que más probablemente corresponde
a una primoinfección.
Hallazgos paraclínicos
En este estudio sólo se logró obtener el
electrocardiograma en cinco casos; tres de ellos
fueron anormales; uno mostró bajo voltaje con
trastornos de repolarización, otro signos de
hipertrofia ventricular izquierda y el último inversión
de la onda T en V4 a V6 ,aunque se trataba de un
niño y este cambio no es necesariamente
patológico en ellos.
En el cuadro hemático se ha descrito la presencia
de trombocitopenia leve en los casos de Chagas
agudo (25). En este reporte, solo uno de los casos
14
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
presentó plaquetopenia y leucopenia importantes,
que corrigieron sin otras complicaciones.
Se ha propuesto la medición de algunos reactantes
de fase aguda, tales como la velocidad de
sedimentación globular y la proteína C reactiva,
como marcadores de enfermedad aguda, pero
hasta el momento no se ha encontrado una clara
correlación (26,27). Un estudio realizado en una
zona endémica de Bolivia encontró un importante
incremento de alfa-2-microglobulina en niños con
Chagas agudo (26, 28). En el actual informe, solo
tres casos de los diez descritos tenían medición
de reactantes de fase aguda, y presentaban
aumento en los valores de velocidad de
sedimentación globular y, en el caso de mayor
gravedad, de la proteína C reactiva.
Métodos diagnósticos
La parasitemia evidente es prácticamente
exclusiva de la fase aguda y confirma el
diagnóstico, incluso sin necesidad de otros
exámenes (29). Los métodos de concentración
como el Strout y el microhematocrito también se
han utilizado, este último especialmente en recién
nacidos para diagnóstico de Chagas congénito,
pues al parecer aumenta la sensibilidad en la
visualización del parásito (4,30, Luquetti A. El
diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Diagnóstico serológico, xenodiagnóstico,
hemocultivo, PCR y examen directo”. P 227-30.
En: Guhl F. Editor. Memorias. Primer Taller
Internacional sobre Control de la Enfermedad de
Chagas.Curso de Diagnóstico, Manejo y
Tratamiento de la Enfermedad de Chagas. Sexta
Reunión de la Iniciativa Andina para el Control de
la Enfermedad de Chagas. Bogotá D.C.: Ediciones
Uniandes; 2005). El hemocultivo y el xeno-
diagnóstico, se usan generalmente en el contexto
de investigaciones (18). La PCR ha mostrado alta
sensibilidad pero, por su naturaleza, suele estar
disponible sólo en los laboratorios de referencia
(31,32, Luquetti A. El diagnóstico de la
enfermedad de Chagas. Diagnóstico serológico,
xenodiagnóstico, hemocultivo, PCR y examen
directo”. P 227-30. En: Guhl F. Editor. Memorias.
Primer Taller Internacional sobre Control de la
Enfermedad de Chagas.Curso de Diagnóstico,
Manejo y Tratamiento de la Enfermedad de
Biomédica 2007;27(supl. 1):8-17
Chagas. Sexta Reunión de la Iniciativa Andina
para el Control de la Enfermedad de Chagas.
Bogotá D.C.: Ediciones Uniandes; 2005).
En el 80% de los casos se realizó el diagnóstico
por extendido de sangre periférica, observándose
tripomastigotes de T. cruzi; inclusive en uno de
ellos se llegó al diagnóstico por examen en fresco
de líquido pericárdico. Llama la atención que en
un caso se encontró parasitemia por gota gruesa
luego de cuatro meses de sintomatología. En el
laboratorio se logró aislar y comprobar la presencia
de la cepa de T. cruzi por medio de cultivo,
inoculación en ratón, isoenzimas y PCR en seis
casos.
Las pruebas serológicas son útiles especialmente
en las fases indeterminada y crónica, en las
cuales se requieren dos pruebas positivas
mediante técnicas de diferente principio para hacer
el diagnóstico (33,Luquetti A. El diagnóstico de la
enfermedad de Chagas. Diagnóstico serológico,
xenodiagnóstico, hemocultivo, PCR y examen
directo”. P 227-30. En: Guhl F. Editor. Memorias.
Primer Taller Internacional sobre Control de la
Enfermedad de Chagas.Curso de Diagnóstico,
Manejo y Tratamiento de la Enfermedad de
Chagas. Sexta Reunión de la Iniciativa Andina
para el Control de la Enfermedad de Chagas.
Bogotá D.C.: Ediciones Uniandes; 2005). Las más
frecuentemente utilizadas son Elisa, IFI y
hemaglutinación indirecta (8,33). La determinación
de IgM por IFI se ha utilizado para definir la fase
aguda de la enfermedad de Chagas; su nivel de-
tectable en sangre aparece a partir de los días 10
a 15 de sintomatología (4,30), con un pico entre
los días 17 a 45 (34). Sin embargo, se sabe que
la IgG detectada por IFI puede positivizarse desde
la fase aguda incluso en el primer mes, mientras
que por Elisa en general sólo se positivizan luego
de 30 días de sintomatología (4). Esto coincide
con los hallazgos en algunos de los casos
informados, pues se encontraron pruebas
positivas de IFI para IgG en cinco de los
pacientes. Este dato es de gran utilidad en nuestro
medio, pues generalmente los Laboratorios
Departamentales de Salud Pública cuentan con
la técnica de IFI para IgG más no para IgM. Como
hallazgo llamativo, y para el cual todavía no se
Chagas agudo en Colombia 2002-2005
tiene una explicación, vale señalar que uno de
los pacientes en quien se comprobó el diagnóstico
de Chagas agudo por medio de extendido de
sangre periférica, cultivo, isoenzimas y PCR,
paradójicamente nunca presentó pruebas
serológicas positivas aún con tres mediciones
realizadas con un mes de intervalo entre cada
una de ellas.
En los cinco casos en que se obtuvo cultivo del
parásito, su caracterización molecular mediante
PCR permitió confirmar los aislamientos como T.
cruzi y el análisis izoenzimático mostró que
correspondieron al grupo I, hallazgo esperado
puesto que este es el grupo predominante en
Colombia (15,34).
La enfermedad de Chagas aguda es un indicador
indirecto de la intensidad de transmisión en una
zona. Teniendo en cuenta que el pronóstico y la
respuesta al tratamiento mejoran con un
diagnóstico oportuno, la detección de casos
agudos es una estrategia para prevenir la fase
crónica. Por esto, es de vital importancia la
búsqueda de casos en todas sus presentaciones
tanto sintomáticas como asintomáticas. Por tal
razón, siempre debe realizarse una búsqueda
activa de casos de infección en los familiares o
convivientes con el caso índice.
Finalmente, es fundamental enfatizar en la calidad
de historias clínicas y las muestras que son
enviadas al INS para confirmación diagnóstica,
ya que esta es una fuente de información muy
importante que permite tomar decisiones en
cuanto al manejo y seguimiento clínico de los
pacientes, y constituye un elemento esencial para
la vigilancia en salud pública de este evento en
Colombia.
Adendo
En el período 1 de enero a 10 de octubre de 2006,
se informaron cinco casos de enfermedad de
Chagas aguda en los departamentos de Vaupés
(2), Casanare (2), y Putumayo. El primero fue una
niña de dos años procedente de Mitú, Vaupés,
quien presentó fiebre y signo de Romaña. El
segundo, un soldado de 25 años procedente
también de Mitú, quien presentó fiebre, astenia y
esplenomegalia. El tercero y cuarto casos se
15
Nicholls R.S., Cucunubá Z.M., Knudson A. et al
presentaron en dos hermanas de dos y cuatro años
procedentes de Paz de Ariporo, Casanare, ambas
presentaron mal estado nutricional, fiebre y
miocarditis con falla cardiaca grave. El quinto
caso en una niña de 13 años procedente de zona
rural del municipio Puerto Asís, Putumayo, quien
presentó fiebre asociada con anemia. Todos los
casos recibieron benzonidazol, evolucionando
satisfactoriamente. El diagnóstico se realizó en
todos los casos por visualización del parásito en
sangre y las pruebas serológicas para IgG fueron
positivas. Los estudios de PCR fueron positivos
para T. cruzi en los primeros cuatro casos. Hasta
el momento no se ha logrado aislar ninguna de
estas cepas. Se realizó estudio de campo en los
casos de los niños, encontrando vectores en los
hogares.
Conflicto de intereses
Los autores manifestamos expresamente que
durante la realización del presente trabajo no
existió conflicto de interés alguno que pudiera
afectar los resultados obtenidos.
Financiación
Este trabajo fue financiado por el Instituto Nacional
de Salud.
Referencias
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Research and Training in Tropical Disease, 1997.
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Santander
Biomédica S.P., Cuéllar A.,
2007;27(supl. Thomas M.del C. et al
1):18-27 Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27

ARTÍCULO ORIGINAL

Expresión de marcadores en células dendríticas de pacientes

chagásicos crónicos estimuladas con la proteína KMP-11 y el
péptido K1 de Trypanosoma cruzi
Sandra Paola Santander 1+, Adriana Cuéllar 2+, María del Carmen Thomas 3,
Fanny Guzmán 4, Alberto Gómez 5, Manuel Carlos López 3,
Concepción Puerta 1
1
Laboratorio de Parasitología Molecular, Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia
Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia.
2
Laboratorio de Inmunobiología y Biología Celular, Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias,
Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia.
3
Departamento de Biología Molecular, Instituto de Parasitología y Biomedicina López Neyra, CSIC, Granada,
España.
4
Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C., Colombia.
5
Instituto de Genética Humana, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C.,
Colombia.
+ Autores con participación equivalente en el trabajo.

Introducción. La proteína de membrana 11 de kinetoplástidos, KMP-11, de Trypanosoma

cruzi induce inmunidad humoral y celular en ratones capaz de conferir protección frente al reto
con el parásito.
Objetivo. Determinar la expresión de marcadores de maduración en las células dendríticas de
pacientes chagásicos crónicos e individuos sanos, estimuladas con la proteína KMP-11 y su
péptido amino terminal K1.
Materiales y métodos. Monocitos de siete pacientes chagásicos y siete individuos sanos
fueron diferenciados a células dendríticas y estimulados con la proteína KMP-11 y el péptido
K1, determinándose por citometría de flujo y tras 7 días de cultivo, la expresión de los marcadores
de superficie CD83, CD86 y HLA-DR y la producción de citocinas.
Resultados. La proteína KMP-11 y el péptido K1 no indujeron la expresión del marcador de
maduración CD83 en las células dendríticas de pacientes y controles. La exposición de células
dendríticas de pacientes chagásicos de forma simultánea al péptido K1 y LPS mostró una
disminución de la expresión de CD86 y CD83 con relación a la estimulación con LPS sólo, a
diferencia de las células de controles sanos. También se evidenció una disminución en la
producción de interleucina-12 en las células dendríticas de pacientes en relación a las de los
controles.
Conclusiones. La proteína KMP-11 no tiene un efecto significativo sobre la maduración de las
células dendríticas, pero su péptido K1 en presencia de LPS induce una disminución en la
expresión de CD86 y CD83 y en la producción de la interleucina-12 que podría modular la
respuesta inmune in vivo y en particular la estimulación de los linfocitos T.
Palabras clave: enfermedad de Chagas, interleucina-12, Trypanosoma cruzi
Expression of markers on dendritic cells from chronic chagasic patients stimulated with
the KMP-11 protein and the K1 peptide from Trypanosoma cruzi
Introduction. The kinetoplastid membrane protein 11, KMP-11, from Trypanosoma cruzi elicits
humoral and cellular immunity in mice that protects them from infection against further parasite
challenge.
Objective. To characterize the expression of surface markers on dendritic cells from chronic
chagasic patients and healthy individuals, in response to the KMP-11 protein from Trypanosoma
cruzi and its N-terminal peptide K1.

18
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27 Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos

Materials and methods. Monocyte-derived dendritic cells from seven chronic chagasic patients
and seven healthy individuals were stimulated with the KMP-11 protein and the K1 peptide.
Seven days after culturing, the CD83, CD86, and HLA-DR membrane expression as well as
the production of cytokines were evaluated by flow cytometry.
Results. Neither KMP-11 protein nor K1 peptide elicited the expression of the maturation
marker CD83 on dendritic cells of patients or healthy control individuals. Dendritic cells from
chronic chagasic patients exposed to K1 and LPS at the same time presented a significant
reduction in CD86 and CD83 membrane expression in contrast to the cells exposed to LPS
alone, whereas dendritic cells from healthy individuals did not show this behavior. The secretion
of interleukin-12 was decreased in the cultures of dendritic cells from chronic chagasic patients
but not from healthy controls.
Conclusions. KMP-11 protein does not affect the maturation of dendritic cells, but in the presence
of LPS the K1 peptide leads to a decreased expression of CD86 and CD83 as well as interleukin-
12 production, This phenomenon may be associated with an impaired T cell stimulation.
Key words: Chagas disease, Interleukin-12, Trypanosoma cruzi

Las células dendríticas estimulan linfocitos T
maduros que no han tenido contacto con el
antígeno gracias a la alta expresión de moléculas
del complejo mayor de histocompatibilidad,
moléculas coestimuladoras como CD80 y CD86
y moléculas de adhesión como ICAM-1 e ICAM-3
(1). En la periferia, las células dendríticas se
especializan para capturar antígenos por
endocitosis mediada por receptor o macro-
pinocitosis, y una vez activadas por antígenos,
migran a los órganos linfoides proximales (2).
Durante esta migración pierden capacidad
fagocítica y aumentan la expresión de las
moléculas relacionadas con la presentación
antigénica, proceso conocido como maduración.
Una vez en los órganos linfoides, las células
dendríticas maduras tienen un papel importante
en la instrucción de las células T para definir su
polarización hacia una respuesta Th1 o Th2 (3).
Trypanosoma cruzi es un parásito protozoo
hemoflagelado, agente causal de la enfermedad
de Chagas, entidad que afecta a 18 millones de
personas en 15 países endémicos, con una
incidencia anual de 200.000 nuevos casos (4).
En Colombia, se estima que hay cerca de 700.000
personas infectadas, un 23% de la población en
riesgo de contraer la enfermedad y entre 30 y 40
mil nuevos casos anuales (5).
La mayoría de humanos infectados por este
parásito sobreviven a la fase aguda inicial, pero
algunos desarrollan enfermedad crónica, lo cual
indica que la respuesta generada en estos
individuos no es capaz de controlar la infección,
permitiendo la supervivencia del parásito en los
tejidos y dando lugar al desarrollo de lesiones
focales inflamatorias, características de la fase
crónica de la enfermedad (6).
Varias líneas de evidencia sugieren que la función
de las células dendríticas es alterada por T. cruzi.
Es así como células dendríticas derivadas de
monocitos pueden ser infectadas por el parásito,
permitiendo su multiplicación intracelular con
consecuencias funcionales en células dendríticas
inmaduras y alteración de su maduración inducida
por el lipopolisacárido (LPS) (7). Estas alteraciones
funcionales incluyen disminución de la producción
de la interleucina-12 (IL-12), factor de necrosis
tumoral α (TNFα) y de la expresión de moléculas
de superficie tales como HLA-DR y CD40. También
se ha visto que células dendríticas infectadas con
T. cruzi tienen poca capacidad para presentar
péptidos antigénicos a células T CD8+ y, por lo
tanto, inducen bajos niveles de interferón gamma
(IFNγ), efecto probablemente relacionado con la
disminución en la expresión de moléculas de clase
I del sistema mayor de histocompatibilidad (8).

Correspondencia: Aunque diferentes antígenos del parásito han sido

Concepción Puerta caracterizados y examinados para estudiar su
Tel.:(+571) 3208320 ext 4024, Fax (571) 3208320, ext 4021 capacidad de estimulación de respuesta inmune,
cpuerta@javeriana.edu.co son pocos los que han demostrado capacidad para
Recibido: 19/08/05; aceptado: 27/12/05 inducir respuesta protectora (9-11). Así, la proteína

19
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al
11 de membrana de los cinetoplástidos, KMP-11,
fusionada a la proteína de choque térmico HSP70
del parásito, induce tanto inmunidad humoral como
celular en ratones y también es capaz de proteger
a los animales inmunizados frente a un posterior
reto con el parásito (9,12). Adicionalmente, el
péptido correspondiente a los aminoácidos 4 a 12
de la región N-terminal de la proteína KMP-11 de
T. cruzi, denominado K1, es un epítope inmuno-
dominante en la inducción de respuesta citotóxica
de células T CD8+ de ratones inmunizados con
la proteína de fusión KMP-11/HSP70 (9). Así
mismo, estudios recientes en pacientes
chagásicos demuestran que el péptido K1 no sólo
es reconocido y procesado de manera natural
durante la infección, sino que induce la producción
de IFNγ por parte de linfocitos T CD8+, los cuales
presentan, además, actividad citotóxica (13).
Teniendo en cuenta la importancia de las células
dendríticas en la inducción de respuesta inmune
y el papel de la proteína KMP-11 en la inducción
de inmunidad protectora en los modelos
estudiados, en el presente estudio se evaluó el
potencial para inducir la maduración in vitro de
células dendríticas derivadas de monocitos de
pacientes chagásicos crónicos por parte de la
proteína KMP-11 y el péptido K1 de T. cruzi.
Materiales y métodos
Población en estudio
Se seleccionaron siete pacientes con
cardiomiopatía chagásica crónica, con edades
comprendidas entre 35 y 85 años, que acudieron
a la consulta de Cardiología del Hospital San
Ignacio, Bogotá, Colombia. Dichos pacientes
presentaron historia clínica, exámenes de
diagnóstico clínico (electrocardiograma), prueba
tamiz (Chagatek®) y pruebas confirmatorias
(inmunofluorescencia indirecta y ELISA)
compatibles con la enfermedad. Con el fin de
comparar los resultados obtenidos, se incluyeron
siete individuos controles sanos del mismo grupo
de edad, que acudieron voluntariamente al
Hospital San Ignacio, cuyas pruebas serológicas
para T. cruzi fueron negativas y el examen clínico,
normal. El presente estudio fue evaluado y
aprobado por el Comité de Ética de la Facultad
de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana.
20
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
Síntesis del péptido K1 y obtención de la
proteína KMP-11
El péptido sintético K1 (TLEEFSAKL) de la
proteína KMP-114-12 (9) fue sintetizado en fase
sólida y purificado mediante cromatografía líquida
de alta presión (HPLC) (14). La proteína
recombinante KMP-11 se obtuvo de acuerdo con
lo reportado previamente (15). Brevemente, el
ADN correspondiente a la región codificante de la
proteína fue digerido con las enzimas MscI y RsaI,
subclonado en el vector de expresión pQE31 y
expresado en células de Escherichia coli.
Obtención de células dendríticas derivadas de
monocitos e inducción del proceso de
maduración
A partir de 40 ml de sangre anticoagulada con
heparina se obtuvieron células mononucleares de
sangre periférica (CMSP) por gradientes de
densidad con Ficoll-Hypaque (Sigma, St Louis,
MO). Los monocitos fueron separados con
anticuerpos monoclonales anti-CD14 (BD
Pharmingen) acoplados a perlas magnéticas
utilizando el sistema de MiniMaCs (Miltenyi
Biotech GMBH, Bergisch, Gladbach, Germany).
Las células obtenidas fueron lavadas en medio
base RPMI 1640 (Invitrogen, Life Tecnologies,
Carlsbad, CA) suplementado con 2% de suero fetal
bovino (SFB, Sigma, St Louis, MO). La viabilidad
y el número de las células se evaluaron por medio
de coloración con azul de tripán y conteo celular
en cámara de Newbauer, respectivamente. La
pureza de la población se evaluó por citometría
de flujo utilizando el anticuerpo anti-CD14.PE (BD
Pharmingen). Las células CD14+ así obtenidas
fueron diferenciadas a células dendríticas
inmaduras mediante incubación en medio RPMI
1640 completo (antibióticos, aminoácidos no
esenciales, piruvato de sodio y 10% de SFB) en
placas de 48 pozos a una densidad de 5x105 por
ml en presencia de 1.000 U/ml de IL-4 y 50 ng/ml
de GM-CSF (R&D system) durante 5 días de
cultivo, verificándose su morfología por microscopía
de luz. En el día 5 se adicionaron 6 µg/ml de KMP-
11 en presencia o ausencia de 10 µg/ml de
polimixina B durante 48 horas. Por otra parte, 10
µg/ml del péptido K1 fueron adicionados en
presencia o ausencia de 1 µg/ml de LPS durante
48 horas. Cada ensayo se realizó por duplicado.
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
Como control positivo de maduración se utilizó 1
µg/ml de LPS. Como control negativo, se cultivaron
las células dendríticas inmaduras sin estímulo de
maduración durante 7 días. La presencia de
marcadores de células dendríticas maduras se
evaluó por citometría de flujo (16). Todos los
reactivos fueron probados para la presencia de
LPS mediante la prueba de amebocitos de
Lymulus spp. (Bio Whittaker).
Determinación de marcadores celulares por
citometría de flujo
Los marcadores para células dendríticas se
evaluaron con anticuerpos anti CD14-APC, CD83-
FITC, CD86-PE y HLA-DR-PerCP (BD Biosciences).
La obtención de los datos se realizó usando un
citómetro de flujo FACSCalibur (BD Immunocyto-
metry Systems). Los análisis se realizaron con el
programa Cell Quest.
Determinación de la producción de citocinas
La cuantificación de citocinas en los sobrenadantes
de cultivo de las células dendríticas se realizó el
día 7 con un estuche comercial de Cytometric
Bead Array (CBA, BD Biosciences), en el cual se
utilizan perlas de diferentes intensidades de
fluorescencia en FL3, cubiertas con anticuerpos
de captura fluorescentes en FL2 para IL-8, IL-1β,
IL-6, IL-10, TNFα e IL- 12p70. El cálculo de la con-
centración se realizó utilizando patrones de las
diferentes citocinas en concentraciones conocidas.
La obtención de los datos se realizó usando un
citómetro de flujo FACSCalibur (BD Immunocy-
tometry Systems). Para la adquisición y análisis
de los datos, se utilizó el programa Cell Quest.
Análisis de los resultados
Los resultados se muestran como el promedio y
el error estándar de la media. Para establecer
diferencias significativas, se utilizó la prueba no
paramétrica U de Mann-Withney con un nivel de
significación de 0,05.
Resultados
El aislamiento de monocitos de sangre periférica
por selección positiva permitió obtener poblaciones
de células CD14+ con purezas mayores al 92%.
Con el fin de evaluar el efecto de la proteína KMP-
11 y el péptido K1 sobre la expresión de
Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
marcadores de células dendríticas de pacientes
con Chagas y controles sanos, se utilizaron
células dendríticas diferenciadas a partir de
monocitos de sangre periférica (células
dendríticas inmaduras), las cuales fueron
expuestas a la proteína KMP-11 en presencia o
ausencia de polimixina B o al péptido K1 en
presencia o ausencia de LPS. Aunque la prueba
para detección de LPS en todos los reactivos
utilizados fue negativa, se utilizó polimixina B en
los cultivos expuestos a la proteína KMP-11 como
inhibidor de la actividad de la endotoxina que
pudiera estar presente en niveles no detectables
por la prueba de amebocitos de Lymulus spp.,
con sensibilidad de 0,1 UE/ml.
En todos los casos, la adición de IL-4 y GM-CSF
a los monocitos de sangre periférica indujo la
pérdida en la expresión de la molécula CD14, lo
cual indica que los monocitos se diferenciaron a
células dendríticas (datos no mostrados). Estas
células expresaron CD86 y HLA-DR y la
exposición al estímulo de maduración (LPS) indujo
un aumento en su expresión, así como la expresión
del marcador de maduración CD83, sin diferencia
entre pacientes y controles sanos (figura 1).
Expresión de marcadores de células
dendríticas expuestas a la proteína KMP-11
La exposición de células dendríticas inmaduras
de pacientes a la proteína KMP-11 de T. cruzi
indujo una disminución no significativa del
marcador de coestimulación CD86 en comparación
con los controles sanos (figura 2A). En cuanto a
la expresión de HLA-DR, no se observaron
diferencias de expresión tras la adición de la
proteína KMP-11 en las células dendríticas
inmaduras procedentes de pacientes chagásicos
ni en las procedentes de controles sanos (figura
2A). La adición de polimixina B no originó
modificación alguna del patrón de expresión
observado. La adición de la proteína KMP-11 a
células dendríticas inmaduras no indujo la
expresión del marcador de maduración CD83.
Expresión de marcadores de células
dendríticas expuestas al péptido K1
Al igual que lo observado para la proteína KMP-
11, la adición del péptido K1 a células dendríticas
21
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27

Figura 1. Expresión de marcadores en células dendríticas de 7 pacientes chagásicos (gris) y 7 controles sanos (blanco)
expuestas a LPS. Células dendríticas inmaduras (CDi) fueron diferenciadas a partir de monocitos CD14+ en presencia de
IL-4 y GM-CSF durante cinco días de cultivo. Para la obtención de células dendríticas maduras (CDm), las CDi previamente
obtenidas fueron expuestas durante 48 h a LPS. Los datos se muestran como promedio del porcentaje de células que
expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas indican el error estándar de la media (ESM).
La significancia estadística de la diferencia de la expresión de los marcadores entre CDi y CDm fue de p = 0,007 para CD86
y CD83 en células de pacientes y controles, p = 0,02 para HLA-DR en las células de los pacientes y p = 0,007 en las de los
controles.

Figura 2. Expresión de marcadores en células dendríticas inmaduras de 7 pacientes chagásicos (gris) y 7 controles sanos
(blanco) estimuladas con la proteína KMP-11 (A) y el péptido K1 (B) el día 5 de cultivo durante 48 h. Los datos se muestran
como promedio del porcentaje de células que expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas
indican el error estándar de la media (ESM).

de pacientes chagásicos y controles sanos no
indujo la expresión del marcador de maduración
CD83. La adición del péptido K1 a células
dendríticas inmaduras indujo en las células de los
pacientes chagásicos un incremento estadística-
mente no significativo en la expresión de CD86 y
HLA-DR comparado con los niveles observados
en controles sanos (figura 2B).
Con el propósito de evaluar el efecto del péptido
K1 en la maduración de células dendríticas
inducida por la adición de LPS, se expusieron
células dendríticas inmaduras simultáneamente
al péptido K1 y a LPS en el día 5 de cultivo. Los
resultados obtenidos mostraron que la adición del
péptido K1 dio lugar a una disminución
estadísticamente significativa en la expresión de
las moléculas CD86 (p = 0,004) y CD83 (p = 0,003)
frente a la que mostraron las células dendríticas
incubadas únicamente con LPS (figuras 3A y 3B).
Sin embargo, los resultados obtenidos no
mostraron diferencias en la expresión de HLA-DR
en las células de pacientes o individuos sanos
incubadas con K1 y LPS con respecto a lo
observado en células dendríticas expuestas
únicamente a LPS (figura 3C).
Determinación de las citocinas secretadas por
las células dendríticas
Con el fin de evaluar la actividad funcional de las
células dendríticas frente a los diferentes
estímulos, se procedió a cuantificar la producción
de varias citocinas (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-
10 e IL-12) en el sobrenadante de los cultivos. Al

22
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
comparar las células dendríticas de pacientes y
controles en presencia de LPS con o sin el péptido
K1, no se observaron diferencias significativas
en la producción de citocinas. Sin embargo, los
resultados mostraron un descenso estadística-
mente significativo (p = 0,02) en la secreción de
IL-12 por parte de las células dendríticas de
pacientes chagásicos expuestas al péptido K1 y
LPS comparado con las células dendríticas de
controles sanos igualmente tratadas (figura 4A).
Además, se observó un aumento estadística-
mente no significativo en la secreción de IL-10
por parte de las mencionadas células dendríticas
de los pacientes chagásicos en comparación a
los niveles observados en las células de controles
sanos (figura 4B). No se observaron diferencias
en los niveles de las citocinas IL-1β, TNF-α, IL-6
e IL-8 de las células dendríticas de pacientes
chagásicos versus las de controles sanos
tratadas ambas con K1 y LPS (datos no
mostrados).
Discusión
Las células dendríticas regulan la respuesta
inmune local y sistémica mediante la expresión
Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
de moléculas en su superficie y de moléculas
secretadas que generan señales que influencian
el crecimiento, la muerte y la diferenciación de la
célula T (17,18). Las células dendríticas tienen la
capacidad de inducir la polarización de la
respuesta linfoide hacia Th1 o Th2, dependiendo
del patrón de moléculas que expresen o secreten.
Por ejemplo, la secreción de IL-12 por células
dendríticas induce la generación de células T de
tipo Th1 (19,20).
Además de su papel inductor de la respuesta
linfoide, recientemente han surgido algunas líneas
de evidencia que sugieren que las células
dendríticas pueden tener un papel regulador en la
inducción de tolerancia periférica. Es así como
se ha mostrado que células dendríticas en estado
inmaduro o semimaduro pueden inducir la
activación de células T reguladoras (21).
En el caso de la respuesta inmune a agentes
infecciosos es de particular interés el hecho de
que algunos patógenos pueden inducir la
generación de células dendríticas reguladoras que
inhiben la inducción de respuesta inmune efectiva,
lo cual se relaciona con estrategias de evasión
Figura 3. Expresión de marcadores en células dendríticas
maduras de 7 pacientes (gris) y 7 controles sanos (blanco)
estimuladas con LPS o el péptido K1 y LPS (K1+LPS) el día
5 de cultivo durante 48 h. Los datos se muestran como
promedio del porcentaje de células que expresan los distintos
marcadores analizados. Las barras sobre las columnas
indican el error estándar de la media (ESM). La significación
estadística de la diferencia de la expresión de los marcadores
entre células dendríticas de pacientes estimuladas con LPS
o K1+LPS fue de p = 0,004 para CD86 y p = 0,03 para CD83.
23
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27

Figura 4. Cuantificación de citocinas por citometría de flujo de células dendríticas de 7 pacientes (gris) y 7 controles sanos
(blanco) expuestas a LPS o al péptido K1 y LPS (K1+LPS) el día 5 de cultivo durante 48 h. Los datos se muestran como
promedio del porcentaje de células que expresan los distintos marcadores analizados. Las barras sobre las columnas
indican el error estándar de la media (ESM). La significación estadística de la diferencia de la producción de IL-12 e IL 10
entre las células dendríticas de pacientes y controles estimuladas con K1 y LPS fue de p = 0,02 y p>0,05, repectivamente.

de la respuesta inmune por estos agentes y explica
en parte la cronicidad de algunas enfermedades
infecciosas (22,23).
Los estudios sobre la interacción de las células
dendríticas y T. cruzi muestran que el parásito
puede infectar dichas células y multiplicarse en
su interior alterando el programa de maduración
de la célula dendrítica mediante la inhibición de la
producción de citocinas, disminución de moléculas
coestimuladoras (7), disminución de la expresión
de moléculas de clase I y, por lo tanto, alteración
de la capacidad para presentar péptidos
antigénicos a linfocitos T CD8+ (8). Algunas
moléculas, como los glicoinositolfosfolípidos
(GIPL), han sido relacionadas con esta
hiporreactividad inmune del parásito (24). Sin
embargo, otras moléculas como la proteína Tc52,
que es una oxidorreductasa necesaria para la
supervivencia y la virulencia del parásito, induce
maduración de células dendríticas derivadas de
monocitos y protege ratones in vivo frente a una
infección letal con T. cruzi (25), lo cual indica que
aunque la infección de la célula dendrítica por T.
cruzi altera su actividad en términos de
estimulación de células T, algunas moléculas
derivadas de éste podrían considerarse como
buenos candidatos para la generación de vacunas
específicas contra el parásito.
La proteína 11 de membrana de cinetoplástidos
(KMP-11) fue descrita en Leishmania donovani
asociada al lipofosfoglicano (LPG) (26), localizada
en el bolsillo flagelar y asociada al citoesqueleto;
esta proteína se considera una estructura crítica
para la movilidad del parásito y para su unión a la
célula hospedera (27,28). La presencia de la KMP-
11 ha sido demostrada en varias especies de
leishmanias y tripanosomas, y no ha sido descrita
en otros organismos diferentes a los cineto-
plástidos, lo cual respalda el concepto de un rol
específico en estos parásitos (28).
Con base en los estudios que demuestran la
importancia de la proteína KMP-11 y de su péptido
K1 en la respuesta inmune frente a la infección
(9,12,13,15), en este trabajo se evaluó la
expresión de marcadores de maduración en
células dendríticas derivadas de monocitos de
pacientes chagásicos crónicos e individuos sanos
estimuladas con la proteína KMP-11 y el péptido
K1 de T. cruzi. Vale la pena anotar que estudios
preliminares realizados por nuestro grupo indican
que el péptido K1 induce una respuesta inmune
humoral específica en pacientes infectados
independientemente de su tipo de HLA (29), a
pesar de haber sido reportado como un epítope
restringido al HLA-A*0201 en trabajos previos
(9,13).
Los resultados obtenidos en este estudio
muestran que si bien la proteína KMP-11 no induce
la maduración de células dendríticas, su péptido
amino terminal K1 en presencia de LPS se asocia
con una menor expresión de los marcadores CD83
y CD86 en las células dendríticas de los pacientes.
Por otra parte, la respuesta in vitro frente al péptido
K1 en presencia de LPS muestra niveles

24
Biomédica 2007;27(supl. 1):18-27
significativamente inferiores en la producción de
IL-12 por las células dendríticas de los pacientes.
Estos resultados sugieren que K1 en presencia
de LPS tiene un efecto en el programa de
maduración de las células dendríticas que es
característico de pacientes chagásicos, el cual
podría afectar la estimulación de los linfocitos T,
así como también interferir con la polarización
hacia una respuesta Th1, la cual se ha visto que
es crucial para el control de la infección por T.
cruzi, al menos en los modelos murinos (30-32).
Una posible explicación a esta disminución en la
expresión de marcadores de membrana podría
deberse a un efecto tóxico de la proteína o del
péptido sobre las células. Sin embargo, el hecho
de encontrar disminución en la expresión de las
moléculas mencionadas en las células de los
pacientes chagásicos y no en las de los controles
sanos parece indicar que éste no es el caso.
Además, el efecto de K1 y LPS se observa para
la expresión de CD86 y CD83, mientras que la
expresión de HLA-DR no se ve afectada.
Si bien el papel de antígenos específicos
parasitarios en la maduración de células
dendríticas murinas ha sido descrito previamente,
como es el caso de la proteína HSP70 de T. cruzi
(33), este es el primer reporte que involucra a un
péptido sintético derivado de una proteína del
parásito en esta modulación. El mecanismo
molecular mediante el cual K1 ejerce su acción
es desconocido; sin embargo, llama la atención
que otros péptidos derivados de patógenos tales
como el péptido sintético T20 del virus de
inmunodeficiencia adquirida 1 (HIV-1) y el péptido
Hp(2-20) de Helicobacter pylori inhiben la
producción de IL-12 por parte de monocitos
humanos (34,35). Se ha visto que estos péptidos
son agonistas de la familia de receptores FPR
(formyl peptide receptor) (36-38). Así mismo, el
péptido sintético WKYMVm, agonista de FPR y
FPRL2, inhibe tanto la maduración de células
dendríticas humanas como la producción de IL-
12 de las mismas (35). Adicionalmente, también
se ha encontrado que el LPS es capaz de
aumentar la expresión de FPR y FPRL1 en
macrófagos y neutrófilos de ratones (39). Por lo
tanto, es de especial interés investigar si K1 en
Maduración de células dendríticas de pacientes chagásicos
presencia de LPS, es capaz de interactuar con
estos receptores, desencadenando una
disminución en la producción de IL-12.
El hecho de que el efecto de K1 en presencia de
LPS sólo se observe en pacientes infectados y
no en individuos sanos llama la atención por
cuanto las células dendríticas hacen parte de la
respuesta inmune innata y sugiere que de alguna
manera el contacto previo con el parásito o algunas
de sus moléculas alteraría el programa de
maduración de tales células.
Por otra parte, es posible que la diferencia en el
comportamiento del péptido K1 en presencia de
LPS y de la proteína KMP-11 se deba
esencialmente a la diferencia estructural y
antigénica entre las dos moléculas, lo que
conllevaría a la activación de distintas vías de la
respuesta inmune.
Queda por determinar si el sistema de
estimulación descrito en este trabajo es reprodu-
cible en pacientes infectados asintomáticos para
poder llegar a conclusiones sobre el papel del
péptido K1 en la modulación de la respuesta
inmune específica in vivo.
Conflicto de intereses
Los autores manifestamos expresamente que
durante la realización del presente trabajo no
existió conflicto de interés alguno que pudiera
afectar los resultados obtenidos.
Agradecimientos
Los autores expresan su agradecimiento a Miguel
Vacca del Hospital Universitario San Ignacio,
PUJB, a Rubén Santiago Nicholls, a Marleny
Montilla y Astrid C. Flórez del Laboratorio de
Parasitología del Instituto Nacional de Salud y a
Marcela Mercado del Grupo de Enfermedades
Infecciosas, PUJB, por su colaboración en la
evaluación clínica de los pacientes y la realización
de las pruebas de laboratorio IFI, ELISA y
Chagatek®, respectivamente.
Financiación
Este estudio fue financiado por la Vicerrectoria
Académica de la Pontificia Universidad Javeriana.
Registro de proyecto 1767.
25
Santander S.P., Cuéllar A., Thomas M.del C. et al
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27
López D.C.,
Biomédica Jaramillo C.,
2007;27(supl. Guhl F.
1):28-39 Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39

ARTÍCULO ORIGINAL

Estructura poblacional y variabilidad genética de Rhodnius

prolixus (Hemiptera: Reduviidae) procedente de diferentes
áreas geográficas de Colombia
Diana Carolina López, Carlos Jaramillo, Felipe Guhl
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical (CIMPAT), Facultad de Ciencias,
Universidad de los Andes, Bogotá D.C., Colombia.

Introducción. Rhodnius prolixus es el vector más importante de la enfermedad de Chagas en

Colombia. La caracterización genética de esta especie resulta útil para comprender su potencial
de dispersión. La distribución del vector y la estructura genética de sus poblaciones, son
factores importantes para implementar de manera adecuada las estrategias de control y
vigilancia epidemiológica de la enfermedad de Chagas.
Objetivo. Establecer relaciones genéticas entre poblaciones de R. prolixus capturadas en
diferentes hábitat y áreas geográficas de Colombia, para dilucidar la estructura genética y
dispersión del vector en el territorio colombiano.
Materiales y métodos. Se analizaron tres poblaciones domiciliadas de R. prolixus provenientes
de Tolima, Cundinamarca y la Sierra Nevada de Santa Marta; y una población silvestre
procedente de Casanare. Se emplearon dos técnicas moleculares para evaluar la estructura
genética de las poblaciones: análisis del ITS-2 del ADN ribosomal por PCR/RFLP y RAPDs.
Resultados. R. prolixus presenta variabilidad genética moderada (Fst 0,057-0,15), entre las
poblaciones domiciliadas se encontraron tasas de migración (Nm>1) que revelan flujo genético.
Se encontró diferenciación genética de moderada-alta entre la población silvestre de Casanare
y las poblaciones domésticas del centro del país (Tolima y Cundinamarca).
Conclusión. Las poblaciones domiciliadas de R. prolixus son homogéneas debido a que
existe flujo genético entre éstas; lo cual es favorable para el control químico, mientras que la
población silvestre agrupa aparte de las domiciliadas. Se evidencia la necesidad de estudiar
la estructura genética de los focos silvestres, sus posibles rutas de dispersión y el riesgo
epidemiológico que representan.
Palabras clave: enfermedad de Chagas, vigilancia epidemiológica, control vectorial, Rhodnius,
ADN espaciador ribosomal, reacción en cadena de la polimerasa, polimorfismo de longitud
del fragmento de restricción, técnica del ADN polimorfo amplificado aleatorio.
Population structure and genetic variability of Rhodnius prolixus (Hemiptera: Reduviidae)
from different geographic areas of Colombia.
Introduction. Rhodnius prolixus is the most important vector of Chagas disease in Colombia.
Genetic characterization of this species is useful to understand its potential of dispersion. The
distribution of the vector and the genetic population structure are important factors for the
adequate implementation of control programs and epidemiological surveillance of Chagas
disease.
Objective. Genetic relationships were established for populations of R. prolixus collected from
several habitat types and representative geographic areas of Colombia. A second aim was to
assess its population genetic structure and dispersion across Colombia.
Materials and methods. Genetic comparisons were made from three domestic populations of
R. prolixus from (1) Tolima Province, (2) Cundinamarca Province and (3) the Sierra Nevada of
Santa Marta in northern Colombia, and (4) one sylvatic population from Casanare. Two molecular
techniques were used to evaluate the genetic structure of these populations—analysis of the
ITS-2 of ribosomal DNA by PCR/RFLP and RAPDs.

28
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia

Results. Rhodnius prolixus shows a moderate genetic variability (Fst 0.06–0.15). Among
domestic populations, the migration rates found were adequate (Nm>1) to maintain gene flow.
A moderate to large degree of genetic differentiation was observed between the sylvatic
population from Casanare and the domestic populations from the centre of the country (Tolima
and Cundinamarca).
Conclusion. The domestic populations of R. prolixus are homogeneous because genetic flow
exists between them, and this is favourable to chemical control, while the sylvatic population
clusters apart from the domestic populations. Hence the need to study the genetic structure of
the sylvatic foci, their possible dispersion routes and the epidemiological risk that they represents.
Key words. Chagas disease, epidemiologic surveillance, vector control, Rhodnius, DNA,
ribosomal spacer, polymerase chain reaction, polymorphism, restriction fragment length, random
amplified polymorphic DNA technique.

La enfermedad de Chagas, exclusiva del variedad Papúa, en plantaciones agroindustriales

continente americano, se extiende desde México
hasta Argentina y es considerada una de las
enfermedades parasitarias de mayor impacto so-
cial y económico (1). En Colombia constituye un
problema de salud pública importante; se estima
que la prevalencia de la infección en la población
es del 5% y que existen alrededor de 3,5 millones
de personas en riesgo de adquirir la enfermedad,
dependiendo de la distribución geográfica de los
insectos vectores (Hemiptera: Reduviidae)
capaces de transmitir el parásito Trypanosoma
cruzi (2).
El vector más importante de la enfermedad de
Chagas en Colombia, al igual que en Venezuela y
Centro América, es Rhodnius prolixus, debido a
su amplia distribución geográfica, sus hábitos
domiciliarios, su alta frecuencia de dispersión y
buena capacidad para infectarse y transmitir el
parásito.
Estudios recientes reportan la presencia de R.
prolixus silvestre en el departamento de Casanare
en plantaciones agroindustriales de palma africana
( Elaeis guineensis ) y palma nativa ( Attalea
butyracea), con índices de infestación del 46,6 y
100% e índices de infección de 41,17 y 67,18%,
respectivamente (Guhl et al., Primer reporte de
Rhodnius prolixus Stal, en Elaeis guineensis I,
Correspondencia:
Felipe Guhl, CIMPAT, Departamento de Ciencias Biológicas,
Universidad de los Andes, bloque A, oficina 201. A.A. 4976.
Carrera 1ª N° 18A -10, Bogotá, Colombia.
Tel/Fax: +57 1 3324540.
fguhl@uniandes.edu.co
Recibido: 16/12/05; aceptado: 14/03/06
de Villanueva, Casanare (Pinto et al.,
Comprobación del ciclo silvestre de Rhodnius
prolixus Stal en reductos de Attalea butyracea,
en el departamento del Casanare. En: Memorias
del XII Congreso Colombiano de Parasitología y
Medicina Tropical. Biomédica 2005;25(Suppl
I):158-9). Reportes anteriores describen
poblaciones silvestres de R. prolixus en 13
especies de palmas en Venezuela (3).
La caracterización genética del vector con base
en el análisis de especímenes domiciliados y
silvestres provenientes de diferentes áreas del
territorio colombiano resulta importante para
comprender su distribución geográfica, potencial
de dispersión y flujo genético, aspectos
importantes en la endemicidad de la enfermedad
de Chagas en las zonas donde se puede llevar a
cabo la transmisión vectorial de T. cruzi.
Diversas técnicas moleculares como la
amplificación aleatoria de ADN polimorfo (RAPD,
por sus siglas en inglés), la secuenciación de
genes mitocondriales, microsatélites, y el análisis
de genes y espaciadores ribosomales se han
utilizado ampliamente en el estudio de la
estructura genética de varias especies de
triatominos para resolver relaciones filogenéticas
y evolutivas entre especies, complejos de
especies e incluso para la caracterización de
poblaciones de una misma especie (4-7).
Algunas regiones del ADN ribosomal (rADN) han
demostrado ser importantes marcadores
moleculares en estudios sistemáticos y
filogenéticos de triatominos, debido a que
presentan secuencias microsatélites útiles para

29
López D.C., Jaramillo C., Guhl F.
la caracterización de poblaciones (8-10). El análisis
de estas regiones mediante la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) en búsqueda de polimor-
fismos de longitud y polimorfismos de fragmentos
de restricción (RFLP) ha probado que son
eficientes en la diferenciación de especies de
Anopheles sp y cepas de Angiostrongylus sp (11).
Los RAPDs se basan en la amplificación al azar
de segmentos de ADN en búsqueda de poli-
morfismos, para así determinar relaciones
genéticas entre individuos de una población o en-
tre diferentes poblaciones. Esta técnica se ha
utilizado para análisis de la estructura poblacional
de varias especies de triatominos como Triatoma
dimidiata, T. brasiliensis, R. prolixus, entre otras,
permitiendo estimar el flujo genético entre
poblaciones silvestres y domésticas de estos
vectores (12-14).
En este estudio se empleó la técnica RAPD y se
analizó el espaciador interno transcrito2 (ITS-2)
del rADN por PCR/RFLP con el propósito de
evaluar la variabilidad intra-específica de R.
prolixus a partir de cuatro poblaciones
colombianas y determinar posibles relaciones
genéticas entre ellas.
Figura 1. Ubicación geográfica de los sitios de captura de las poblaciones domiciliadas y silvestre de R. prolixus.
30
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Materiales y métodos
Insectos
Se analizaron en total 48 insectos adultos R.
prolixus, 12 por población (seis hembras y seis
machos). Las poblaciones domiciliadas fueron
capturadas en tres áreas geográficas endémicas
para la enfermedad de Chagas en Colombia: en
los municipios de Fomeque y Ubaque en
Cundinamarca, en el municipio de Coyaima,
Tolima, en el asentamiento indígena Kasakumake
en la Sierra Nevada de Santa Marta, y en Dibuya,
La Guajira; la población silvestre fue capturada
en dos lotes de cultivos agroindustriales de palma
de aceite (Elaeis guineensis) en el municipio de
Villanueva, Casanare (figura 1).
Adicionalmente, se incluyó un espécimen de R.
prolixus domiciliado de Maracaibo, Venezuela,
para compararlo con las poblaciones colombianas.
Como grupos de exclusión se usaron un ejemplar
de R. pallescens procedente de Vegachí,
Antioquia, uno de R. colombiensis procedente de
Totarco, Tolima, y un individuo T. dimidiata de
Soatá, Boyacá. Todos los insectos utilizados en
el estudio fueron clasificados siguiendo las claves
de Lent & Wygodzinsky (15).
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Extracción del ADN
El ADN se obtuvo a partir de las seis patas de
cada insecto, que fueron retiradas y conservadas
en alcohol en un tubo plástico de 1,5 ml. Las patas
se lavaron con hipoclorito 1:50 y etanol al 70%
para evitar la contaminación con ADN foráneo.
Se empleó el estuche de extracción AquaPure
Genomic de BIORAD®. El ADN fue almacenado
a -20°C.
Cuantificación del ADN
La concentración de ADN se determinó por
espectrofotometría (barrido de 234 a 320 nm). Se
cuantificó el ADN extraído (15 µg/ml en promedio)
y el ADN de los productos de PCR (329 µg/ml en
promedio) para los protocolos de restricción
enzimática.
Amplificación del ITS-2 por PCR
Se emplearon los iniciadores 5,8T (5-CTA AGC
GGT GGA TCA CTC GG-3) y 28 T (5-GCA CTA
TCA AGC AAC ACG ACT C-3) (10), que amplifican
un fragmento de 127 pb del gen 5,8S, el ITS-2
completo y un fragmento de 350 pb del gen 28S.
Se usó el estuche PCR Ready to go de
Pharmacia®; cada perla fue hidratada con 15,25
µl de agua destilada estéril, se adicionó 1 pmol
de cada iniciador y 3,75 µl de MgCl2 (10 mM), así
como 5 µl del ADN molde (15 ng/µl), para un volumen
final de 25 µl. En todas las reacciones se incluyó
un blanco de reacción sin ADN. El perfil térmico
usado fue el descrito por Jaramillo et al. (13). La
electroforesis se realizó en geles de agarosa al
1,5%; en cada pozo se sembraron 6 ml de muestra
previamente mezclada con 2 ml de buffer de carga.
Los geles se corrieron 100 minutos a 70 voltios y
luego fueron digitalizados en un documentador de
geles CHEMI-DOC SYSTEM y analizados con el
software Quantity One 1D de BIORAD®.
Análisis de restricción por PCR/RFLP
Para la elección de las enzimas se elaboró un
mapa de restricción del ITS-2 de R. prolixus con
el programa NEBcutter V2.0 de New England
Biolabs disponible en Internet a partir de
secuencias publicadas en Genbank (AJ286888,
AY345868). Se buscaron enzimas que tuvieran
uno o dos cortes sobre la secuencia y un sitio de
Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
reconocimiento de 4 a 6 nucleótidos. La digestión
de los productos de PCR se realizó por separado
con las enzimas Rsa I, Nhe I, Dde I y Hpy 188 I.
La enzima Rsa I tiene un sitio de corte sobre el
ITS-2 de R. prolixus en la secuencia de
reconocimiento GTνAC; la enzima Nhe I tiene un
sitio de corte sobre la secuencia G νCTAG ? C
del ITS-2 de R. prolixus; Dde I realiza dos cortes
en el fragmento del rADN amplificado, uno sobre
el gen 5,8S y el otro sobre el gen 28S de R.
prolixus , en la secuencia de reconocimiento
C?TNA?G; la enzima Hpy 188 I presenta dos
sitios de corte sobre el fragmento del rADN de R.
prolixus en la secuencia TC?N?GA. En las
restricciones se siguió el protocolo sugerido por
Promega®: en un tubo plástico estéril de 1,5 ml
se mezcló agua destilada estéril, 2 ml del buffer
de la enzima (10X) y 0,4 ml de BSA acetilada (5
mg/µl) (únicamente para las digestiones con Rsa
I y Nhe I); se adicionaron 3,5 µl ADN (0,3 µg/µl) y
cinco unidades de enzima (10 U/µl) para un
volumen final de 20 µl. La digestión se realizó a
37°C durante 3 a 4 horas. Los patrones de
restricción se visualizaron en geles de agarosa al
1,5 o 2%, dependiendo del tamaño de los
fragmentos obtenidos. El producto se mezcló con
4µl de buffer de carga 6X y se sembraron 10 µl en
cada pozo. La electroforesis, la digitalización de
los geles y el cálculo del peso de los fragmentos
se realizaron tal como se describió para los
productos de PCR. Como controles experimen-
tales, paralelos a los ensayos de restricción, se
usaron el ADN no digerido y la reacción de
restricción sin enzima.
RAPD
Se usó el estuche Ready To Go RAPD y los
iniciadores RTG 2 (5 -GTTTCGCTCC-3) ,3 (5 -
GTAGACCCGT-3) y 4 (5-AAGAGCCCGT-3) de
Pharmacia®; cada perla se hidrató con 19 µl de
agua destilada y se agregaron 5 µl de iniciador
(25 pmol) y posteriormente se adicionaron 4 µl
del ADN molde (15 ng/µl) para un volumen final
de reacción de 28 µl. Como control de
amplificación se utilizó ADN de E. coli BL21 y
como control negativo se realizó un blanco de
reacción sin ADN. El perfil térmico consistió en
un paso inicial de denaturación a 95°C por cinco
minutos, seguido de 44 ciclos: a 95°C por 1
31
López D.C., Jaramillo C., Guhl F.
minuto, a 36°C por 1 minuto y a 72°C por 2
minutos. Las reacciones se visualizaron en geles
de poliacrilamida al 6% con un tiempo de corrido
electroforético de 3 horas a 80 V. En cada pozo
se sembraron 7 ml del producto previamente
mezclado con 2 ml de buffer de carga. Los geles
fueron teñidos usando el estuche Silver Stain Plus
de Pharmacia®.
Análisis de datos RAPD
El análisis se realiza bajo tres supuestos: a) las
poblaciones están en equilibrio de Hardy -
Weinberg, o sea que se asume que no hay
presiones de selección que favorezcan a alguna
población; b) los marcadores RAPD segregan en
forma mendeliana con tasas constantes de
evolución y sustitución, y c) los alelos recesivos
son idénticos entre los individuos.
Se elaboró una matriz binaria con la información
genética obtenida de cada individuo bajo el criterio
de presencia [1] y ausencia [0] de bandas de
acuerdo con Welsh et al. (16). Teniendo en cuenta
que en los marcadores RAPDs el fenotipo
dominante de un locus se considera como la
presencia de una banda, y el fenotipo recesivo es
la ausencia de esa banda, los individuos se
comparan fenotípicamente en cada locus.
La matriz binaria se analizó con los programas
RAPDPLOT (17) y SYNTAX 2000 (18). En
RAPDPLOT se generó una matriz de distancias
a partir de la matriz binaria usando el índice de
similitud de Nei y Li (19), y en SYNTAX se empleó
el índice de disimilitud de Jaccard para datos
binarios; en los dos programas se generaron
dendrogramas con el algoritmo de agrupamiento
UPGMA (unweighted pair-group method using an
arithmetic average).
Se usó el programa RAPDDIST para calcular las
distancias genéticas de Nei (20) entre las
poblaciones y se realizó un análisis bootstrap de
1000 réplicas, método estadístico que se usa para
evaluar la confiabilidad de un árbol y permite
examinar qué tan frecuentemente se forma un
conglomerado particular; el árbol consenso
resultante se da por el número de veces que una
ramificación o nodo se presenta y esto es producto
de la proporción bootstrap. Los árboles fueron
32
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
generados con el programa NEIGHBOR de
PHYLIP 3.5C.
El estadístico F (Fst) y la tasa efectiva de
migración (Nm) entre poblaciones se estimaron
con RAPDFST mediante tres metodologías:
Wright (21), Weir & Cockerham (22) y Lynch &
Milligan (23). El Fst es la razón de la varianza
observada en la frecuencia de un alelo en un lo-
cus RAPD entre subpoblaciones y su máxima
varianza en la población total; el programa computa
los valores Fst para cada locus RAPD asumiendo
que las subpoblaciones están en equilibrio de
Hardy-Weinberg y la dominancia de cada loci.
Los valores Fst y Nm son estimaciones indirectas
del flujo genético y la migración entre poblaciones,
en las cuales se asume que no hay selección, ya
que ésta puede incrementar o disminuir el Fst, y
que no hay mutaciones si la tasa de mutación es
alta en relación a la tasa de migración, como
sucede con microsatélites o en ADN mitocondrial;
puede haber desviaciones en la estimación.
Resultados
Amplificación del ITS-2
Todos los R. prolixus presentaron una única banda
de 1.180 pb (figura 2A). Se analizaron también
ejemplares de R. colombiensis, R. pallescens y
T. dimidiata, usados como grupos de exclusión
en la técnica RAPD. R. colombiensis presentó
una banda de 1.175 pb, R. pallescens una de 709
pb y T. dimidiata una de 964 pb (figura 2B).
Restricción con Rsa I
Se encontró el mismo patrón de restricción en
todos los individuos de las poblaciones
estudiadas, y dos fragmentos, uno de 833 y otro
de 343 pb. El espécimen R. prolixus de Venezu-
ela mostró un patrón de restricción idéntico al de
las poblaciones colombianas (figura 3A). T. dimidiata
mostró un sitio de corte y generó dos fragmentos,
uno de 738 y otro de 239 pb; R. pallescens no fue
cortado por la enzima y R. colombiensis mostró
un patrón de restricción con un fragmento de 804
pb y otro de 362 pb (figura 3B).
Restricción con Nhe I
Todos los individuos R. prolixus analizados
mostraron el mismo patrón de restricción
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Figura 2. Amplificación del ITS-2 de R. prolixus (RP): A. 1. RP de Cundinamarca (CUN). 2. RP de Tolima (TOL). 3. RP de
Sierra Nevada de Santa Marta (SNSM). 4. RP de Casanare (CAS). 5-6. RP de Venezuela (VEN). 7. R. colombiensis. B. 1-
2. RP CAS. 3. T. dimidiata. 4. R. colombiensis. 5. R. pallescens. 6. RP CUN. MP: marcador de peso (100 pb); señalada
la banda de 500 pb. Geles de agarosa al 1,5%.
conformado por dos bandas de 1.030 y 153 pb
(figura 3C). También hay restricción en R.
colombiensis, generando dos fragmentos de 1.020
y 153 pb; R. pallescens presenta un sitio de
restricción para esta enzima generando fragmentos
de 647 pb y 71 pb. En T. dimidiata no hay
restricción (figura 3D).
Restricción con Dde I
Todos los R. prolixus evaluados presentaron dos
sitios de corte y el mismo patrón de restricción,
una banda de 751 pb, una de 212 pb y una de 150
pb (figura 3E). R. colombiensis presentó un patrón
igual al de R. prolixus con dos sitios de corte; T.
dimidiata presentó tres sitios de corte, originando
cuatro fragmentos de 334, 218, 178 y 93 pb; R.
pallescens mostró dos sitios de corte generando
tres fragmentos de 293, 238 y 178pb (figura 3F).
Restricción con Hpy 188 I
Esta enzima teóricamente origina un patrón de
restricción con tres fragmentos de aproximada-
mente 737, 323 y 120 pb; después de la digestión
se obtuvo un patrón homogéneo de cuatro bandas
en todas las poblaciones: 915, 735, 314 y 125 pb
(figura 3G); estos fragmentos podrían sugerir la
existencia de un sitio de corte adicional; sin em-
bargo, la suma de los tamaños de las bandas
sobrepasa el tamaño del producto sin digerir. R.
colombiensis no presentó la banda de 915 pb, pero
Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
sí tres bandas de 728, 320 y 136 pb. En T.
dimidiata se encontraron cuatro bandas producto
de la restricción: de 707, 534, 306 y 143 pb. R.
pallescens presentó tres bandas: de 430, 269 y
125 pb (figura 3H).
RAPD
Con los iniciadores RTG 2,3 y 4 se visualizaron
un total de 71 bandas o marcadores que
representan cada uno un locus RAPD (figura 4).
Los dendrogramas generados con los programas
SYNTAX y RAPDPLOT muestran una distribución
heterogénea de los individuos; no hay
agrupamientos definidos por lugar de origen,
aunque se observan conglomerados discretos en-
tre individuos de Cundinamarca y Tolima. Todos
los individuos R. prolixus del estudio se
encuentran por debajo de un valor de disimilitud
de Jaccard de 0,475 (en una escala de 0 a 1). R.
colombiensis es el grupo de exclusión mas
cercano a R. prolixus, seguido por R. pallescens
y T. dimidiata (figura 5).
En el análisis con RAPDDIST se generaron
árboles con diferentes grupos de exclusión que
muestran las relaciones genéticas entre las
poblaciones. Se realizó un análisis bootstrap”de
1.000 repeticiones para comprobar la consistencia
de los datos RAPD que soportan las relaciones
representadas por las ramas del árbol.
33
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39

Figura 3. Resultados de PCR/RFLP. A. Restricción con Rsa I, bandas de 833 y 343 pb obtenidas para R. prolixus: 1. Control
ADN sin digerir, 2. RP TOL, 3. RP SNSM, 4. RP CUN, 5. RP CAS, 6. RP VEN. B. Restricción con Rsa I: 1. T. dimidiata
digerido (bandas de 738 y 239 pb), 2. T. dimidiata control sin digerir, 3. RP VEN digerido (bandas de 833 y 343 pb), 4. RP VEN
control, 5. RP TOL (bandas de 833 y 343 pb), digerido, 6. RP TOL control, Geles de agarosa al 2%. C. Restricción con Nhe
I, bandas de 1030 y 153 pb obtenidas para R. prolixus: 1. RP CAS, 2. RP SNSM, 3. RP TOL, 4. RP CUN, 5 y 6. RP VEN
(duplicado), 7. R. colombiensis (bandas de 1020 y 153 pb). D. Restricción con Nhe I: 1. R. pallescens digerido (bandas de
647 pb y 71 pb), 2. R. pallescens control, 4. T. dimidiata digerido (no hay restricción), 5. T.dimidiata control. Geles de
agarosa al 1,5%. E. Restricción con Dde I, bandas de 751 pb, 212 pb y 150 pb, obtenidas para R. prolixus: 1-2. RP CAS, 3-
4. RP CUN, 5. RP TOL. F. Restricción con Dde I: 1. T. dimidiata digerido (bandas de 334, 218, 178 y 93 pb), 2. T. dimidiata
control, 3. R. pallescens digerido (bandas de 293, 238 y 178 pb), 4. R. pallescens control, 6. R. colombiensis digerido (751
pb, 212 pb y 150 pb), 7. R. colombiensis control. Geles de agarosa al 2%. G. Restricción con Hpy 188 I, bandas de 915, 735,
314 y 125 pb obtenidas para R. prolixus: 1. RP SNSM control, 2. RP SNSM digerido, 3. RP CUN control, 4. RP CUN digerido,
5. RP TOL control, 6. RP TOL digerido. H. Restricción con Hpy 188 I: 1. RP SNSM digerido, 2. R. colombiensis digerido
(bandas de 728, 320 y 136 pb), 3. R. colombiensis control, 4. T. dimidiata digerido (bandas de 707, 534, 306 y 143 pb), 5. T.
dimidiata control, 6. R. pallescens digerido (bandas de 430, 269 y 125 pb), 7. R. pallescens control. Geles de agarosa al 2%.
Para todos los geles MP: marcador de peso (100 pb).

34
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39 Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia

Se estimó el índice de fijación o estadístico F

Figura 4. Patrones de bandas RAPD. Productos de
amplificación de R. prolixus con el iniciador RTG 4. 1: control
(E.coli), 2 y 3: RP CAS, 4 y 5: RP SNSM, 6 y 7: RP CUN, 8
y 9: RP TOL. Gel de acrilamida al 6%; teñido con plata.
Las poblaciones de Tolima y Cundinamarca se
agrupan en un conglomerado con una distancia
genética de 0,03175, mientras que las poblaciones
de la Sierra Nevada y Casanare se encuentran
aparte, un poco más alejadas genéticamente de
las dos primeras, con distancias de 0,03605 y
0,03733, respectivamente, siendo la población de
Casanare la más alejada (figura 6).
R. prolixus de Venezuela se encontró separado
de las poblaciones de Colombia, con una distancia
genética de 0,12521. Para R. colombiensis, usado
como grupo de exclusión, se obtuvo una distancia
de 0,19167; R. pallescens mostró una distancia
de 0,22180 y T. dimidiata enraizó el árbol a una
distancia de 0,29351.
(Fst), que mide el grado de diferenciación genética
entre poblaciones y la tasa efectiva de migración
(Nm) entre todas las poblaciones en conjunto y
por pares. Los valores Fst obtenidos en todos los
casos indican una diferenciación genética
moderada (Fst 0,05 a 0,15) y una tasa de migración
(Nm>1), suficiente para mantener homogeneidad
genética entre las poblaciones (cuadro 1).
El valor Fst más alto se encontró entre las
poblaciones de Tolima y Casanare (Fst 0,150)
siguiendo la metodología de Weir & Cockerham,
que realiza una corrección en muestras de tamaño
pequeño, e indicando una diferenciación genética
grande; el siguiente valor Fst más alto se obtuvo
entre Cundinamarca y Casanare (Fst 0,102). Las
estimaciones del Fst y Nm concuerdan con lo
observado en el dendrograma de RAPDDIST, en
el que la población de Casanare proveniente de
un hábitat silvestre se diferencia de las otras
poblaciones.
Discusión
No se detectaron polimorfismos de longitud en la
región del ITS-2; la digestión del fragmento
amplificado con las enzimas Nhe I, Rsa I, Dde I y
Hpy I mostró patrones de restricción homogéneos,
indicando que los individuos evaluados no difieren
en ninguno de los sitios de clivaje de las enzimas,
y por lo tanto no se presentaron polimorfismos de
fragmentos de restricción; por ello no es posible,
usando estas enzimas, diferenciar a nivel
molecular las poblaciones de R. prolixus con estos
marcadores.

Cuadro 1. Valores Fst y Nm entre las poblaciones de R. prolixus.

Comparaciones
Metodología TP Cun/Tol Cun/Cas Cun/SNS Tol /Cas Cas/SNS Tol/SNS

Wrigth Fst 0,107 0,071 0,074 0,075 0,102 0,062 0,074

Nm 2,1 3,3 3,1 3,1 2,2 3,8 3,1
Weir & Cockerham Fst 0,097 0,085 0,102 0,094 0,150 0,070 0,085
Nm 2,3 2,7 2,2 2,4 1,4 3,3 2,7
Lynch & Milligan Fst 0,097 0,074 0,080 0,075 0,134 0,057 0,067
Nm 2,3 3,1 2,9 3,1 1,6 5,1 3,5

TP: entre las 4 poblaciones. Cun: Cundinamarca, Tol: Tolima, SNS: Sierra Nevada, Cas: Casanare.
Nm > 1 indica homogeneidad genética, Nm < 1 no es suficiente para mantener homogeneidad genética.
Valores Fst de 0,05 a 0,15 indican poca diferenciación genética, de 0,05 a 0,15, diferenciación genética moderada, de 0,15
a 0,25, diferenciación genética grande, > 0,25, diferenciación genética muy grande.

35
López D.C., Jaramillo C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39

Figura 5. Dendrograma generado con SYNTAX para R. prolixus usando el coeficiente de disimilitud de Jaccard y el
algoritmo UPGMA. En la parte inferior aparece el código de cada insecto y su lugar de origen (Cun: Cundinamarca, Tol:
Tolima, Cas: Casanare, SNSM: Sierra Nevada, Ven: Venezuela). Grupos de exclusión: R. colombiensis, R. pallescens y
T.dimidiata.

El patrón de restricción obtenido con la enzima resultados mediante la secuenciación de dichos

Hpy I presentó una banda adicional que no
desapareció ni modificando el tiempo de
incubación ni la cantidad de enzima, por lo que
puede tratarse de un genotipo heterocigoto, en el
que se presenta el sitio de restricción en algunas
de las cadenas y en otras no. El hecho de que el
patrón se haya presentado en todos los individuos
indicaría un alto porcentaje de heterocigocidad en
la población. Sería conveniente corroborar estos
fragmentos.
El marcador molecular ITS-2 presentó alta
homogeneidad intra-específica, lo que concuerda
con lo encontrado en otro estudio, en el cual
secuencias del ITS-2 de dos individuos R. prolixus
de Colombia fueron idénticas (Vergel C et al.
Marcadores especie-específicos para la
diferenciación entre Rhodnius prolixus y Rhodnius
colombiensis . En: Memorias Curso Taller

36
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Figura 6. Dendrograma generado con RAPDDIST para las
poblaciones de R. prolixus usando la distancia genética de
Nei y aplicando bootstrap de 1.000 repeticiones . Cun:
Cundinamarca, Tol: Tolima, Cas: Casanare, SNS: Sierra
Nevada, Ven: Venezuela. Grupo de exclusión: R.
colombiensis (Rco).
Internacional 2002: sistemas de información
geográfica, sensores remotos y genética
poblacional de vectores y parásitos aplicados al
control de la enfermedad de Chagas; 2002 Dic 2-
6; Universidad de los Andes, Bogotá. Colombia.
p. 45-64).
Algo similar fue reportado entre dos variedades
cromáticas de R. stali (8), por lo cual se sugiere
usar otros marcadores moleculares de evolución
más rápida como lo son algunos genes
mitocondriales.
Los dendrogramas obtenidos con RAPDDIST in-
dican que las poblaciones de Tolima y
Cundinamarca son las más cercanas genética-
mente, probablemente debido a la cercanía
geográfica, y un Fst de 0,071 muestra un flujo
genético de moderado a alto entre estas dos
poblaciones.
El conglomerado de Tolima y Cundinamarca se
agrupa con la población de la Sierra Nevada,
probablemente debido a un proceso de migración
pasiva entre las cordilleras central y oriental a lo
largo de todo el valle del Magdalena.
La región del Casanare se encuentra separada
por la Cordillera Oriental de las otras áreas de
estudio; esta barrera geográfica al parecer ha
conllevado a un aislamiento geográfico entre las
poblaciones del occidente y oriente del país, lo
cual concuerda con lo reportado en otro estudio
realizado con patrones de sensilla entre
poblaciones de R. prolixus de la zona andina y
los llanos orientales (Esteban L et al. Variación
Estructura poblacional de R. prolixus en Colombia
fenotípica antenal de poblaciones domésticas de
Rhodnius prolixus (Hemiptera:Reduviidae) de
Colombia. En: Resúmenes del XXXII Congreso
Sociedad Colombiana de Entomología; 2005 Jul
27-29; Ibagué. Colombia. p.110).
Las estimaciones del índice de fijación (Fst) y la
tasa efectiva de migración (Nm) indican que entre
las poblaciones Tolima-Casanare y Cundinamarca-
Casanare existe una diferenciación genética
moderada a grande. Sin embargo, a nivel general
se mantiene entre todas las poblaciones una
diferenciación genética moderada, debida a tasas
de migración de por lo menos un individuo por
generación. Este movimiento de insectos entre
poblaciones separadas por grandes distancias y
barreras geográficas puede ser resultado del
transporte pasivo asociado a migraciones rural-
urbanas (24), por lo tanto, las migraciones
humanas y barreras geográficas parecen haber
influido en la dinámica de dispersión de las
poblaciones de R. prolixus, creando una
diferenciación entre las poblaciones del oriente y
el occidente del país.
Los resultados obtenidos por la técnica de RAPD
para las poblaciones domiciliadas concuerdan con
lo reportado en estudios anteriores realizados por
morfometría y patrones isoenzimáticos, en los
cuales se demuestra que aunque R. prolixus
presenta baja variabilidad genética, se observan
algunas diferencias significativas entre
poblaciones locales y otras variantes geográficas
(25-28); otros estudios realizados por medio de
análisis de secuencias de ADN mitocondrial y
ADN nuclear reportan resultados similares a los
obtenidos por medio de las otras técnicas,
mostrando que R. prolixus es una especie muy
homogénea genéticamente (29-32); sin embargo
en ninguno de estos estudios se incluyen las
poblaciones silvestres colombianas recientemente
reportadas e incluidas en el presente estudio,
razón por la cual encontramos una variabilidad
genética moderada entre las poblaciones
silvestres y las domiciliadas.
Por otro lado, la población silvestre de Casanare
parecer ser la menos relacionada con las otras
poblaciones evaluadas y puede representar un
riesgo epidemiológico para esa área. Estas
37
López D.C., Jaramillo C., Guhl F.
poblaciones silvestres han mostrado ser un riesgo
inminente en la transmisión de la enfermedad. Se
ha reportado que el 3% de los niños infectados
se debe a los insectos que están llegando de las
palmas a las viviendas (Informe de la Secretaria
de Salud del Casanare. En: Memorias del Primer
Taller Internacional sobre Control de la Enfermedad
de Chagas; 2005 Mayo 2-6; Universidad de los
Andes. Bogotá, Colombia, p. 245-9).
Los hallazgos de R. prolixus en hábitats silvestres
en el departamento de Casanare sugieren que en
la región oriental del país el vector podría ser
autóctono, y que en las otras regiones fue
introducido, encontrándose estrictamente
domiciliado.
Es indispensable determinar la distribución y
variabilidad genética de las poblaciones que se
encuentran asociadas al domicilio y su relación
con las poblaciones silvestres, para establecer el
riesgo que éstas representan y poder así realizar
una adecuada vigilancia epidemiológica.
Los resultados presentados en este estudio
constituyen una primera aproximación a la
estructura genética poblacional de R. prolixus en
Colombia y muestra datos importantes acerca de
la dispersión en el país.
La variabilidad genética moderada detectada entre
las poblaciones domiciliadas es favorable para las
intervenciones de control químico y plantea que
la eliminación del vector domiciliado es viable en
Colombia a pesar de la existencia de focos
silvestres, como se demostró en Venezuela (32),
y como se ha observado en Centro América con
el vector doméstico (33).
Se puede concluir que las poblaciones domicilia-
das de R. prolixus son homogéneas debido a que
existe flujo genético entre ellas, mientras que la
población silvestre se encuentra separada de las
domiciliadas. Se evidencia la necesidad de
estudiar la estructura genética de los focos
silvestres, sus posibles rutas de dispersión y el
riesgo epidemiológico que representan.
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener conflicto de
intereses con respecto al estudio.
38
Biomédica 2007;27(supl. 1):28-39
Financiación
Este estudio se realizó con el apoyo financiero
del Fondo de Investigaciones y Posgrados de la
Facultad de Ciencias de la Universidad de los
Andes y el CDIA-Chagas Disease Intervention
Activities-EC Contract N° ICA4CT-2003-10049.
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39
Rendón D.A.,
Biomédica Genes C.M., Triana O.
2007;27(supl.1):40-9 Biomédica 2007;27(supl.1):40-9

ARTÍCULO ORIGINAL

Lesión celular del miocardio y actividad de la ATPsintasa

mitocondrial en ratas infectadas con una cepa colombiana
de Trypanosoma cruzi
Dairo Alonso Rendón 1, Carlos M. Genes 2, Omar Triana 2

1
Facultad de Ciencias, Laboratorio de Biofísica, Universidad Nacional de Colombia sede Medellín,
Medellín, Colombia.
2
Grupo de Chagas, Instituto de Biología, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.

Introducción. La enfermedad de Chagas es la principal causa de cardiomiopatía crónica en

regiones endémicas de Latinoamérica. Alteraciones en el metabolismo energético mitocondrial
cardiaco causadas por Trypanosoma cruzi pueden estar involucradas en el desarrollo de esta
cardiomiopatía.
Objetivo. En este trabajo se investigó la lesión celular del miocardio de ratas durante una
infección por la cepa colombiana Mg8 de Trypanosoma cruzi y la actividad de la ATPsintasa
mitocondrial para correlacionar el daño al miocardio con el metabolismo energético
mitocondrial.
Materiales y métodos. Se utilizaron grupos de cinco ratas, las cuales fueron infectadas con
tripomastigotes. El curso de la infección se evaluó a nivel parasitológico, histopatológico y
molecular. La actividad de la ATPsintasa mitocondrial del miocardio se evaluó tanto en las
ratas infectadas con parásitos como en ratas control no infectadas.
Resultados. Se determinaron los días 26 y 60 post-infección como el punto de máxima
parasitemia y como el punto de desaparición de los parásitos en sangre circulante,
respectivamente. Los resultados histopatológicos y moleculares muestran que la cepa Mg8
tiene tropismo por el tejido cardiaco y causa una considerable lesión celular del miocardio de
ratas tanto a 26 días (fase aguda) como a 60 días post-infección (fase crónica). A pesar de la
lesión observada, no se encontró diferencia estadísticamente significativa en la actividad de la
ATPsintasa de las ratas infectadas en estos días al comparar con sus respectivos controles.
Conclusión. Estos resultados sugieren que el metabolismo energético mitocondrial no está
alterado en la lesión celular del miocardio de las ratas, observada durante la infección con la
cepa colombiana Mg8 de T. cruzi.
Palabras clave: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, miocardiopatía chagásica,
metabolismo energético, mitocondria.
Myocardial cellular damage and the activity of the mitochondrial ATP synthase in rats
infected with a Colombian strain of Trypanosoma cruzi
Introduction. Chagas disease is the main cause of cardiomyopathy in endemic regions of Latin
America. Alterations in the cardiac mitochondrial energy metabolism caused by Trypanosoma
cruzi can be involved in the development of this cardiomyopathy during the course of Chagas
disease.
Objective. The cellular injury of the rat myocardium was investigated in rats infected with the
Colombian Mg8 strain of Trypanosoma cruzi. The activity of mitochondrial ATP synthase was
measured to determine the relationship heart damage with the energy metabolism.
Materials and methods. Two groups of five rats each were infected with tripomastigotes, with
1 group of 6 rats serving as controls. The course of infection was characterized by parasitological,
histopathological and molecular studies. The mitochondrial ATP synthase activity of the
myocardium was evaluated in all rats.
Results. Peak parasitaemia (day 26 post infection) and the time of parasite clearance from
circulating blood (day 60 post infection) were determined for acute and chronic phase models.

40
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas

The histopathological and molecular results showed that the Colombian Mg8 strain has tropism
to the cardiac tissue and causes considerable cellular injury of the myocardium in rats during
both phases. Despite the lesions observed in infected rats, no statistical difference in the
activity of the mitochondrial ATPsynthase was observed between them and the non-infected
rats.
Conclusion. Mitochondrial energy metabolism of the cardiomyocites does not appear to change
during cellular injury of rat myocardium associated with infection by the Colombian Mg8 T. cruzi
strain.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, Chagas cardiomyopathy, energy
metabolism, mitochondria.

Trypanosoma cruzi, agente causal de la
enfermedad de Chagas, afecta aproximadamente
a 17 millones de personas de diferentes regiones
de Centro y Suramérica, de las cuales probable-
mente entre el 20 y el 35% desarrolla la
enfermedad. En Colombia, la enfermedad de
Chagas se encuentra ampliamente distribuída en
las zonas rurales y se estima que el 5% de la
población asentada en las zonas endémicas está
infectada (1).
La cardiomiopatía es la afección más importante
secundaria a esta enfermedad, ya que puede
producir muerte súbita o discapacidad física, lo
que representa grandes costos socioculturales y
económicos. Para esclarecer la génesis de la
cardiomiopatía chagásica se ha prestado gran
atención a las alteraciones en el metabolismo
energético mitocondrial del miocardio (2,3). Las
mitocondrias se consideran uno de los organelos
más importantes de los cardiomiocitos, ya que
en condiciones fisiológicas generan más del 90%
de la energía necesaria para su funcionamiento
(4). Además, pueden ser blanco de múltiples
daños, producto de la respuesta inmunológica del
hospedero a la infección (5). La importancia de
las mitocondrias en el funcionamiento de las
células cardiacas también se manifiesta en el
hecho de que entre el 25 y 35% del volumen de
los cardiomiocitos está ocupado por ellas. Es así
como los eventos patofisiológicos que alteran la
Correspondencia:
Omar Triana Chávez, Calle 67 N. 53-108, Instituto de Biología,
Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia. Telefax:
2105622
otriana@matematicas.udea.edu.co
Recibido: 10/08/05; aceptado: 24/03/06
producción de energía por parte de las mito-
condrias (síntesis del ATP), pueden desembocar
en lesiones importantes del miocardio (6).
En la producción de energía en los cardiomiocitos
juega un gran papel la enzima ATPsintasa
mitocondrial, la cual cataliza la síntesis de ATP
utilizando la energía almacenada en el potencial
electroquímico de la membrana mitocondrial
interna. Por su importancia, esta enzima mito-
condrial se ha estudiado ampliamente en las
últimas tres décadas, tanto en condiciones
fisiológicas como patológicas (7-10). Uyemura et
al. (2) y Vyatkina et al. (3) mostraron una disfunción
en la síntesis de ATP por parte de la ATPsintasa
mitocondrial del miocardio durante la infección con
Trypanosoma cruzi utilizando mitocondrias
aisladas.
Considerando que las cepas colombianas de T.
cruzi tienen tropismo hacia el tejido cardiaco (11),
es importante evaluar la posible lesión celular del
miocardio durante una infección con estas cepas
y la asociación de tal lesión con el metabolismo
energético mitocondrial. En el presente trabajo
se determinó la lesión celular del miocardio de
ratas infectadas con una cepa colombiana de T.
cruzi y se evaluó la actividad de la ATPsintasa
mitocondrial en homogeneizados de este tejido.
Materiales y métodos
Animales de laboratorio e infección con el
parásito
Se inocularon subcutáneamente ratas hembras
de la cepa Wistar de aproximadamente 200
gramos con 2 x 105 tripomastigotes sanguíneos
obtenidos de ratones Balb/c previamente
irradiados con 450 rad de rayos gamma en un
volumen total de sangre de entre 50 y 100 µl.

41
Rendón D.A., Genes C.M., Triana O.
Para la infección se usó la cepa colombiana Mg8,
perteneciente al grupo I de Trypanosoma cruzi.
Esta cepa se aisló en el año 2003 a partir del
vector Triatoma dimidiata de origen silvestre
procedente del departamento del Magdalena, y
se mantuvo por repiques sucesivos cada siete
días en medio de cultivo líquido LIT a 28°C (12) y
por infección en ratones Balb/c. Los ensayos
realizados en este estudio se iniciaron en el mismo
año de aislamiento de la cepa, después de 18
pases por medio de cultivo y varios pases por
ratón.
Todos los animales se mantuvieron de acuerdo a
la reglamentación establecida por el Comité de
Ética para la Experimentación con Animales de
la Universidad de Antioquia.
Caracterización de la infección
Se utilizó un grupo de seis ratas para seguir el
curso de la infección y determinar la fase aguda
(máxima parasitemia en sangre circulante) y
crónica de la enfermedad (desaparición de la
parasitemia en sangre circulante). La evaluación
de los animales infectados se realizó día por
medio haciendo conteo de tripomastigotes
sanguíneos en placa en un microscopio óptico
con objetivo de 40X (13). Adicionalmente, se
inocularon dos grupos de cinco ratas cada uno
para determinar la actividad de la ATPsintasa
mitocondrial y se hizo evaluación por reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) en la fase aguda
y crónica de la enfermedad; así mismo, se inoculó
un grupo de dos animales, para realizar los
estudios histopatológicos tanto en la fase aguda
como crónica de la enfermedad. Cada grupo de
animales infectados tuvo un grupo control no
infectado de igual número de animales mantenido
en las mismas condiciones de laboratorio.
Lesión celular del miocardio
Para determinar la lesión celular del miocardio, a
dos grupos de animales infectados y a sus
respectivos controles se les extrajo el corazón a
26 y 60 dpi., e inmediatamente se fijó en formol al
10%. Los corazones se seccionaron en su totalidad
en cortes seriados transversales de 2 a 3 mm, y
se deshidrataron empleando una serie de
alcoholes de gradación ascendente (50, 70, 80 y
42
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
100%) y finalmente en xilol. Luego, los cortes se
incluyeron en parafina y se cortaron con el
micrótomo en secciones tisulares de tres a cinco
micrómetros de espesor. Las muestras se tiñeron
con hematoxilina-eosina para detectar la presencia
del parásito y el nivel de inflamación del tejido, y
con coloración de tricrómico para determinar el
grado de fibrosis del tejido cardiaco.
Extracción de ADN
El ADN se extrajo a partir de una preparación de
tejido cardiaco de animales infectados, utilizando
el método de Salting Out (14), y en algunos casos
el método de fenol-cloroformo (15). Las muestras
de ADN se disolvieron en 50 ml de agua destilada
desionizada estéril a 37°C por cinco minutos (16)
y se guardaron a -20°C.
Detección del parásito por PCR
Se utilizaron dos marcadores diferentes para
detectar la presencia del parásito en los tejidos
cardiacos a partir de una preparación de corazón
empleada en la determinación de la actividad de
la ATPsintasa mitocondrial: el ADN del
cinetoplasto (kDNA) y el espaciador intergénico
de los genes mini-exón. Para la amplificación de
la región variable del kDNA se utilizaron los
iniciadores S35 y S36, que amplifican un
fragmento de 330 pb (17). La mezcla de reacción
para PCR se llevó a cabo en un volumen final de
25 µl que contenían 2,5 µl de ADN molde a una
concentración de 50ng/µl, 2mM MgCl2, 2mM
dNTPs, 10 pmol/µl iniciadores, 0,05 unidades de
Taq ADN polimerasa (Fermentas), buffer 10X
(750mM Tris-HCl pH 8,8; 200mM (NH4)2SO4 y
0,1% Tween 20), y agua tridestilada estéril.
Los ciclos de la reacción se realizaron a una
temperatura inicial de 94°C por tres minutos,
seguida por 35 ciclos a 94°C por 45 segundos, a
63 °C por 45 segundos y a 72°C por 45 segundos,
y un último ciclo a 72°C por 10 minutos. El
espaciador intergénico de los genes mini-exón se
amplificó utilizando los iniciadores TC1, TC2 y
TCC, los cuales amplifican un fragmento de 300
pb para el grupo T. cruzi II y un fragmento de 350
pb para el grupo T. cruzi I (18). La PCR se realizó
en un volumen final de 25 µl que contenían 2,5 µl
de ADN molde a una concentración de 50ng/µl,
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas

1,5mM MgCl2,10 pmol de cada iniciador, 2mM

dNTPs, 0,025 unidades de Taq DNA polimerasa,
buffer 10X (750mM Tris-HCl (pH 8,8); 200mM
(NH4)2SO4 y 0,1% Tween 20), y agua tridestilada
estéril. Los ciclos de amplificación se realizaron
a una temperatura inicial de 94°C durante un
minuto, seguida de 27 ciclos a 94°C por 30
segundos, a 55°C por 30 segundos, a 72°C por
30 segundos y un ciclo final a 72°C por 10 minutos.
Los productos amplificados se detectaron en geles
de agarosa al 1,5% teñidos con bromuro de etidio
a 0,5 mg/µl y se visualizaron con luz ultravioleta
(15).
Actividad de la ATPsintasa mitocondrial Figura 1. Curva típica en la determinación de la actividad de
la ATPsintasa mitocondrial. En orden secuencial se
Los corazones de ratas sacrificadas por adicionaron en los puntos indicados en las flechas 3,5 ml
medio de incubación, homogeneizado de corazón (1 mg de
dislocación cervical se extrajeron rápidamente y
proteína total), 5mM glutamato-malato, 500 mM de ADP, 0,8
se pusieron en solución de preparación del tejido mg oligomicina/mg de proteína total de homogeneizado, y por
a un pH de 7,5 entre 0 y 2°C (0,17 M KCl, 10 mM último, dos adiciones consecutivas de 200nmol de KH2PO4
EDTA, 0,1% suero de albúmina bovina, 10 mM cada una. Los homogeneizados de tejido cardiaco se
incubaron durante 1 min y 30 segundos con 5mM de
Tris-HCl) durante dos a tres minutos. Los glutamato-malato antes de adicionar ADP. El KH2PO4 se
corazones se pasaron por una prensa manual y adiciona para calibrar la señal de registro.
con el tamizado se obtuvo un homogeneizado de
tejido cardiaco (3,5 ml solución/1g de tejido)
utilizando un equipo Potter-Elvehjem a una adiciones: (i) 500µM ADP; (ii) oligomicina, 0,8 µg/g
velocidad angular de 700 rev/min durante dos a de proteína, y (iii) 200 nmol de fosfato inorgánico
tres minutos y a una temperatura entre 0 y 2°C. (KH2PO4) para calibrar la señal (figura 1). El alcohol
Finalmente, el homogeneizado obtenido se que se adicionó con la oligomicina no superó el
0,1%. La actividad de la ATPsintasa es equivalente
conservó entre 0 y 2°C hasta iniciar las
a la velocidad de cambio de pH después de la
mediciones. La actividad de la ATPsintasa
adición de ADP calibrada con respecto al fosfato
mitocondrial se estimó por medio de un método
inorgánico y a la cantidad de proteína total
potenciométrico (19), y se calculó según la
adicionada con la suspensión de tejido cardiaco.
siguiente fórmula: actividad de la ATPsintasa
El principio de este método potenciométrico radica
mitocondrial = 2 m x 200 nmol Pi / M x ( h1 + h2 ),
en que la desaparición del fosfato inorgánico
donde h1 y h2 (en unidades de mV) son las alturas
(H2PO4-) del medio debido a la síntesis de ATP
de los saltos en la señal de registro después de
por la ATPsintasa mitocondrial está asociada al
adicionar dos veces consecutivamente 200 nmol
cambio en el pH (∆pH) causado por la disociación
de fosfato inorgánico, m (en unidades de mV/min)
del H 2PO4 en HPO4 2 - y H + (ATP 4 -↔ ADP 3 - +
es la pendiente de la señal de registro después
H2PO4 -; H2PO4 - ↔ HPO4 2 - + H+). La solución para
de adicionar ADP, M (en unidades de mg) es la
la determinación de la actividad de la ATPsintasa
cantidad de proteína total adicionada con la
mitocondrial fue de 250 mM sacarosa, 5 mM
suspensión de tejido cardiaco; y Pi es fosfato
KH2PO4, 2 mM tris-HCl, y 0,1 mM EDTA; pH 7,4
inorgánico (figura 1).
(HCl/KOH a 37°C). Las mediciones se realizaron
Brevemente, los homogeneizados de corazón de en recipientes de vidrio bajo agitación magnética.
rata (1 mg de proteína total de homogeneizado de El cambio en el pH se midió a 25°C utilizando un
tejido cardiaco) fueron incubadas durante un potenciómetro Corning modelo 12 de alta
minuto y 30 segundos con 5 mM de glutamato- sensibilidad y rapidez conectado a un computador
malato; después se realizaron las siguientes tres que visualiza la cinética del proceso. Las

43
Rendón D.A., Genes C.M., Triana O.
velocidades de síntesis del ATP se obtuvieron
en nmol Pi/mg de proteína/min. La cuantificación
de la proteína total en los homogeneizados de
corazón se realizó por el método de Biuret (20),
utilizando como patrón de calibración el suero de
albúmina bovina.
Análisis estadístico
Para el análisis de los valores obtenidos en la
actividad de la ATPsintasa mitocondrial se
compararon cada uno de los grupos infectados
con su respectivo control. Se utilizaron los
programas Graph Pad Prism versión 2,0 y JMP
versión 3.2.6. Se usó el t-test y se consideró p <
0,05 como criterio de grupos significativamente
diferentes. Los datos se presentaron como
promedios ± error estándar de la media (SEM).
Las mediciones se realizaron por triplicado para
cada animal sacrificado y luego se obtuvo el
promedio de estos datos.
Resultados
Caracterización de la infección
El desarrollo de la enfermedad en las ratas
infectadas con la cepa Mg8 estuvo marcado por
la aparición de parásitos en sangre a los 11 días
después de la infección (11 dpi). Se observó la
presencia de dos picos de alta parasitemia: el
primero en el día 26 (26 dpi), con
aproximadamente 9,1x105 tripomastigotes por
mililitro, y el segundo, en el día 40 pi, con
aproximadamente 6,5 x105 tripomastigotes por
Figura 2. Corte histológico de tejido cardiaco de ratas infectadas con la cepa Mg8.
A. Rata control no infectada: no hay presencia de infiltrado inflamatorio, fibrosis o miocitolisis. B. Miocitólisis (⇒
inflamatorio mononuclear observado en ratas a los 26 días pi (40X) ( ). C. Seudoquiste de T. cruzi observado 26 días pi
→ ). La tinción de los cortes fue realizada con hematoxilina-eosina.
(40X) (→
44
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
mililitro. La desaparición de la parasitemia fue
estimada para el día 60 pi (60 dpi), que se consideró
como el inicio de la fase crónica de la enfermedad
(datos no mostrados).
Lesión celular del miocardio
El análisis histopatológico se realizó en tejido
cardiaco de dos animales sacrificados a los 26 y
60 dpi y de sus respectivos controles. En los
animales control se observaron fibras ordenadas,
distribución normal del núcleo en el miocito y las
células intersticiales se mostraban histológica-
mente sanas (figura 2A). En los animales
sacrificados a los 26 dpi se observó miocarditis y
no se encontró fibrosis (figura 2B). Se observó un
importante infiltrado inflamatorio mononuclear,
confluente con escasos seudoquistes (uno en un
campo de alto poder) (figura 2C). En los animales
sacrificados a los 60 dpi se observó infiltrado
inflamatorio mononuclear a nivel intersticial
alrededor de las fibras cardiacas (figura 3A),
seudoquistes (tres en un campo de alto poder)
(figura 3B), miocarditis, miocitolisis focal y áreas
de fibrosis alrededor de algunas fibras cardiacas
degeneradas (figuras 3A y 3C).
Dos de las seis ratas empleadas para la
construcción de la curva de parasitemia murieron
en los días 28 y 30 posterios a la infección. En
estos animales se encontró un importante daño
tisular en el tejido cardiaco. En el animal muerto
a los 30 días pi se observaron abundantes fibras
miocárdicas parasitadas con formación de
⇒ ) e infiltrado
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas

→ ) e infiltrado
Figura 3. Corte de tejido cardiaco de rata infectada con la cepa Mg8 a los 60 días pi. A. Quiste de T. cruzi (→
inflamatorio mononuclear ( ) (10X). B. Nido de amastigotes (→→) (40X). C. Fibrosis (→
→ ) (40X). La tinción de los cortes
en las figuras 3A y 3B se realizó con hematoxilina-eosina. El corte de la figura 3C se tiñó con coloración de tricrómico.

seudoquistes intracelulares por la presencia de a los 26 pi no fue estadísticamente diferente a

formas amastigotas de T. cruzi, reacción inflamatoria aquella obtenida para su respectivo control (figura
focal consistente en cúmulos de mononucleares, 5A). De igual forma, cuando se compararon las
edema intersticial y fibrosis focal. En el animal velocidades de síntesis de ATP para esta enzima
muerto a los 28 días pi se encontró mayor reacción en los animales y en sus respectivos controles a
inflamatoria consistente en focos confluentes de
células mononucleares con algunos polimorfo-
nucleares neutrófilos alrededor de las fibras
cardíacas, miocitolisis y edema. Se identificaron
menos fibras cardiacas parasitadas, infiltrado
mononuclear en el epicardio y no se observó
fibrosis (datos no mostrados). En conclusión, los
resultados muestran una grave lesión celular del
miocardio en los corazones de estas ratas
muertas durante el establecimiento de la infección.
Análisis por PCR
En el corazón de todos los animales infectados
se observó la banda de 330 pb esperada para la
región variable del marcador k-DNA de T. cruzi
(figura 4A). De igual manera, se observó que todas
las muestras amplifican la banda de 350 pb para
el gen mini-exón, característica del grupo I de T.
cruzi (figura 4B).
Figura 4. Amplificación por PCR de la región variable del
Actividad de la ATPsintasa mitocondrial kDNA (A) y la región intergénica del gen mini-exón (B). Se
usó el ADN extraído de corazón de animales infectados a
La actividad de la ATPsintasa mitocondrial los días 26 y 60 después de la infección (pi). A. Carril 1:
durante la infección con T. cruzi se determinó en escalera de 100pb; carriles 2 a 6: muestras extraídas de
un grupo de cinco animales para el día 26 pi, que tejido cardiaco de ratas a los 60 días pi; carriles 7 a 11:
representa la fase aguda (figura 5A), y en otro muestras extraídas de tejido cardiaco de ratas a los 26 días
pi; carril 12: control positivo (ADN de cepa en cultivo); carril
grupo de cinco animales para el día 60 pi, que 13: control negativo. B. Carril 1: control negativo; carril 2:
representa el inicio de la fase crónica (figura 5B). escalera de 100pb; carril 3: control positivo (ADN de cepa
Cada grupo de animales infectados contaba con en cultivo); carril 4: control negativo (animal no infectado);
su respectivo grupo control (n = 5). La actividad carriles 5 a 9: muestras extraídas de tejido cardiaco de rata
a los 60 días pi.; carriles 10 a 14: muestras extraídas de
de la ATPsintasa mitocondrial durante la infección tejido cardiaco de rata a los 26 días pi. Gel de agarosa al
al miocardio por T. cruzi en animales observada 1,5% teñido con bromuro de etidio.

45
Rendón D.A., Genes C.M., Triana O.
Figura 5. Actividad de la ATPsintasa mitocondrial en tejido cardiaco de rata a los 26 días pi (A) y 60 días pi (B) con T. cruzi.
Los datos son los promedios de cinco mediciones independientes ± SEM (n = 5); p < 0,05 fue el criterio de diferencias
estadísticamente significativas. Cada medición independiente se realizó tres veces.
los 60 pi, no se evidenciaron diferencias
estadísticamente significativas en la actividad de
la ATPsintasa mitocondrial (figura 5B).
Discusión
La enfermedad de Chagas se presenta con una
gran variedad de manifestaciones clínicas y es la
mayor causa de miocarditis aguda y de
cardiomiopatía crónica en las regiones endémicas
de Latinoamérica (21,22). Considerando que las
cepas colombianas de T. cruzi muestran tropismo
hacia el tejido cardiaco (11), es importante
establecer si este tropismo está asociado con la
lesión celular del miocardio en el hospedero. Para
esto, la lesión celular del miocardio del hospedero
se estudió en ratas infectadas con la cepa
colombiana Mg8 de Trypanosoma cruzi aislada
del vector Triatoma dimidiata silvestre en el mismo
año de inicio de este estudio, lo que implica que
conserva sus características naturales de
virulencia y patogenicidad.
Los análisis histopatológicos (figuras 2 y 3)
revelaron la capacidad de la cepa colombiana Mg8
para producir lesiones celulares en el miocardio
del hospedero, características de la cardiomiopatía
chagásica (22-25), lo que muestra que se está
frente a una manifestación típica de la enfermedad
de Chagas. Así, la presencia continua del parásito
en las zonas de lesión del corazón puede ser
importante en el origen de la cardiomiopatía
chagásica (26).
Los resultados moleculares permiten asegurar que
todos los organismos infectados tenían en su
46
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
tejido cardiaco la presencia del parásito (ADN) o
restos de éste, lo que garantiza que en todos los
casos en que se evaluó la actividad de la
ATPsintasa mitocondrial del miocardio, el parásito
manifestó tropismo por el tejido cardiaco. Esto
es importante ya que los tejidos de los animales
infectados y usados para la determinación de la
actividad de la ATPsintasa mitocondrial del
miocardio no fueron sometidos a estudios
histopatológicos debido a que todo el corazón se
necesitó para preparar las suspensiones cardiacas.
Los resultados permiten concluir que la cepa Mg8
de Colombia produce importantes lesiones
celulares en el tejido cardiaco, activación de la
respuesta inmunológica a nivel de este órgano y
presencia de las formas replicativas de T. cruzi,
tanto a los 26 dpi como a los 60 dpi. Además, la
cepa Mg8 es una cepa virulenta y altamente
patogénica, hecho corroborado por la mortalidad
antes de los 20 dpi que presentaron los ratones
utilizados como fuente de tripomastigotes (50%
de mortalidad), y la presentada por las ratas
utilizadas en la determinación de la curva de
parasitemia (30% de mortalidad). Ello permite
concluir que esta cepa generó en los individuos
infectados un importante proceso degenerativo a
nivel celular en el miocardio del hospedero,
característico de la cardiopatía chagásica, lo que
implica la presencia del parásito o de su ADN en
el tejido cardiaco o en las células inflamatorias
como un factor que probablemente contribuye en
la producción de las lesiones y en la mortalidad
observada en los hospederos estudiados (26). Es
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9 Lesiones del miocardio durante la enfermedad de Chagas

importante destacar que se observaron adicionales de las mitocondrias en los estudios

considerables lesiones celulares del miocardio del del metabolismo energético mitocondrial durante
hospedero (figura 2) en un periodo relativamente diferentes lesiones celulares del miocardio es el
inicial en la curva de parasitemia (26 dpi de la uso de homogeneizados rápidamente preparados
fase aguda), lo que permite concluir que en este a partir del tejido cardiaco (35,36). En el presente
inicio de la infección ya hay una manifestación trabajo fue crucial buscar las condiciones
clara de lesiones del miocardio. experimentales que permitieran diferenciar, usando
homogeneizados de tejidos cardiacos infectados
Existen varias hipótesis sobre la patogénesis de
con parásitos, la actividad de la ATPsintasa
la cardiomiopatía chagásica, como la neurogénica,
mitocondrial tipo miocardio de la actividad de la
la autoimmunidad (27-30), los problemas en la
ATPsintasa mitocondrial tipo parásito. La clave
micro circulación del corazón (31,32) y las
que permitió usar homogeneizados de tejido
alteraciones en el metabolismo energético
cardiaco en el presente trabajo radica que en T.
mitocondrial del miocardio (2,3). Esta última
cruzi el complejo I de la cadena transportadora
adquiere gran interés en el estudio de todas las
de electrones no está funcionalmente presente
patologías cardiovasculares, ya que más del 90%
(37). De esta forma, si usamos como substrato
de la energía necesaria para el funcionamiento
de respiración glutamato/malato, que pone a
de los cardiomiocitos se produce en las
funcionar la cadena transportadora de electrones
mitocondrias. Por tal motivo era importante
a partir del complejo I, en presencia de ADP sólo
determinar si la lesión celular del miocardio
las mitocondrias que poseen este complejo
observada a los 26 y 60 dpi con la cepa colombiana
(mitocondrias del corazón) podrán sintetizar ATP.
Mg8 de T. cruzi compromete al metabolismo
Los resultados obtenidos (figura 5A y 5B) indican
energético mitocondrial del miocardio. En este
que durante el proceso de inicio de la enfermedad
proceso es crucial la actividad de la ATPsintasa
de Chagas no hay alteración en la actividad
mitocondrial, ya que esta enzima es en última
enzimática de la ATPsintasa mitocondrial ni en el
instancia la encargada de sintetizar el ATP
día 26 pi, fase aguda, ni en el día 60 pi, fase
mitocondrial necesario para el buen funcionamiento
crónica en comparación con los respectivos
de los cardiomiocitos. La actividad de la ATPsintasa
controles; esto quiere decir que por cada unidad
mitocondrial representa en esencia la cantidad de
(en nuestro caso 1 mg de proteína total de homo-
ATP sintetizado por las mitocondrias contenidas
geneizado de tejido cardiaco) de tejido cardiaco
en una unidad de tejido (en nuestro caso, 1 mg de
infectado con la cepa colombiana Mg8 no hay
proteína total del homogeneizado de tejido
déficit de cantidad de ATP mitocondrial (necesario
cardiaco) por unidad de tiempo. Por ello, la
para otras funciones celulares) por unidad de
actividad de la ATPsintasa mitocondrial es un
tiempo con respecto a los controles. Partiendo
criterio del funcionamiento del metabolismo
del hecho de que la actividad de la ATPsintasa
energético mitocondrial del miocardio. Lo más
mitocondrial es un criterio del metabolismo
usual es estudiar el metabolismo energético
energético mitocondrial, estos resultados (figura
mitocondrial del miocardio en mitocondrias
5A y 5B) permiten afirmar que el metabolismo
aisladas del tejido cardiaco o en partículas
energético mitocondrial no está comprometido
submitocondriales preparadas a partir de las
durante una infección con la cepa colombiana Mg8
mitocondrias aisladas. Sin embargo, se han
a los 26 y 60 días pi, a pesar de las considerables
reportado alteraciones estructurales y funcionales
lesiones celulares del miocardio observadas
adicionales en las mitocondrias cuando éstas se
(figuras 2 y 3).
aíslan de su ambiente natural (33). Dichas
alteraciones adicionales pueden ser más La no variación con respecto a cada control de la
marcadas cuando se usan tejidos isquémicos (34), actividad de la ATPsintasa mitocondrial observada
como es el caso del tejido del corazón durante la en homogeneizados de tejido cardiaco infectadas
infección con T. cruzi (28,29). Por lo tanto, lo más con la cepa colombiana Mg8 de T. cruzi no
conveniente para evitar estas posibles alteraciones significa que uno de los complejos mitocondriales,

47
Rendón D.A., Genes C.M., Triana O.
o la fina sincronización entre estos, no se vea
afectado negativamente durante la infección. Es
posible que la cantidad de ATP mitocondrial
producido por una sola mitocondria en la unidad
de tiempo disminuya con respecto a las muestras
no infectadas, pero que en un proceso de defensa
el tejido cardiaco genere más mitocondrias por
unidad de tejido infectado que su control para
compensar la caída en la síntesis de ATP
mitocondrial por una sola mitocondria. Este
aspecto, por ahora simplemente especulativo,
amerita futuras investigaciones.
Por último, es importante señalar que investigaciones
previas reportan alteraciones en la actividad de la
ATPsintasa mitocondrial durante una infección con
T. cruzi, y con base en esto se concluye que
durante la infección hay compromiso del meta-
bolismo energético mitocondrial (2,3). Es plausible
que estas alteraciones negativas en la actividad
de la ATPsintasa mitocondrial durante una
infección del miocardio con T. cruzi sean producto
de diferentes mecanismos de lesión celular del
miocardio dependientes del tipo de cepa, o de
alteraciones adicionales originadas durante la
manipulación de las muestras biológicas (33,34),
dado que los investigadores utilizaron mitocondrias
aisladas y partículas submitocondriales obtenidas
a partir de tejidos isquémicos, como es el caso
del tejido cardiaco durante una infección con T.
cruzi (28,29).
En conclusión, nuestros resultados sugieren que
el metabolismo energético mitocondrial no está
alterado en la lesión celular del miocardio de ratas
infectadas con una cepa colombiana de T. cruzi
perteneciente al grupo T. cruzi I. Es necesario
realizar futuras investigaciones con cepas
pertenecientes a los dos grupos de este parásito
para entender las manifestaciones clínicas de la
enfermedad de Chagas.
Agradecimientos
Al Laboratorio de Chagas de la Universidad de
Antioquia y al Laboratorio de Biofísica de la
Universidad Nacional de Colombia sede Medellín.
Conflicto de intereses
Los autores declaramos que no existe ningún
conflicto de intereses.
48
Biomédica 2007;27(supl.1):40-9
Financiación
Esta investigación fue financiada por el CODI,
proyecto CPT 0321 de la Universidad de Antioquia
y por el DIME, proyecto 030802601 de la
Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín.
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49
Rojas W., Caro
Biomédica M.A., Lopera
2007;27(supl. J.G. et al
1):50-63 Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63

ARTÍCULO ORIGINAL

Análisis de polimorfismos en los genes tripanotión reductasa y

cruzipaína en cepas colombianas de Trypanosoma cruzi
Winston Rojas 1, Maria Antonieta Caro 1, Juan Guillermo Lopera 1, Omar Triana 2,
Juan Carlos Dib 2, Gabriel Bedoya 1
1
Genética Molecular, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.
2
Grupo de Chagas, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.

Introducción. Los estudios genéticos en Trypanosoma cruzi han buscado establecer

asociaciones de variantes genéticas del parásito con manifestaciones clínicas de la enfermedad,
origen biológico y geográfico de los aislamientos; sin embargo, los resultados de asociación
con los marcadores comúnmente usados en estos estudios han generado mucha controversia,
principalmente en la asociación de grupos con características clínicas y epidemiológicas de la
enfermedad.
Objetivo. Se planteó determinar la variabilidad de genes que codifican para las proteínas
tripanotión reductasa y cruzipaína, involucradas en mecanismos de infección y supervivencia
del parásito en el hospedador mamífero, y probar la asociación de variantes génicas con
origen biológico y geográfico de cepas colombianas de T. cruzi.
Materiales y métodos. Se tipificaron por reacción en cadena de la polimerasa- polimorfismo
de longitud del fragmento de restricción seis SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) en
tripanotión reductasa y ocho SNPs en cruzipaína en 36 cepas colombianas de T. cruzi de
diferentes regiones y origen biológico.
Resultados. Con las enzimas Acy I y Hae III se determinaron tres genotipos para tripanotión
reductasa. Para cruzipaína se identificaron seis genotipos con las enzimas Rsa I, Ban I y Bsu
36I.
Conclusiones. Para tripanotión reductasa no fue posible establecer una asociación con el
origen biológico o geográfico; sin embargo los alelos producidos en las posiciones 102 y 210,
permitieron discriminar los grupos tradicionales I y II. Con los genotipos obtenidos para
cruzipaína se establecieron relaciones a estos grupos, origen biológico y geográfico. Los
resultados sugieren la utilidad de estos genes como marcadores moleculares para determinar
y diferenciar variedades genéticas en T. cruzi.
Palabras clave: Trypanosoma cruzi, genes protozoarios, polimorfismo, polimorfismo de longitud
del fragmento de restricción, Colombia.
Analysis of polymorphisms in the trypanothione reductase and cruzipain genes in
Colombian strains of Trypanosoma cruzi
Introduction. Genetic studies of Trypanosoma cruzi have tried to establish relations between
genetic variants and their biological characteristics, such as clinical manifestations, host or
geographic origin. However, much controversy exists on the associations between the commonly
used DNA markers with group, clinical characteristics and disease epidemiology.
Objective. In this study determined the variability of the genes that code for the proteins
trypanothione reductase and cruzipain, both involved in the infection and survival of the parasite
in the mammalian host, was studied and the association between genetic polymorphism and
biological and geographic sources in Colombian T. cruzi strains was examined.
Materials and methods. The genotypes for each of six SNPs (single nucleotide polymorphisms)
for trypanothione reductase and eight SNPs for cruzipain genes were identified by polymerase
chain reaction-restriction fragment length polymorphism.in 36 T. cruzi Colombian stocks from
several regions and biological origins.

50
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia

Results. Three genotypes were identified for trypanothione reductase with Acy I and Hae III
enzymes and six genotypes for cruzipain with the Rsa I, Ban I and Bsu 36I enzymes.
Conclusions. For trypanothione reductase ,an association was not established with biological
or geographical origin; however, alleles at positions 102 and 210 allowed discrimination with
groups I and II. For cruzipain, specific genotypes were associated with group, biological and
geographic origin. The usefulness of molecular markers on these genes was demonstrated
for the determination and differentiation of genetic varieties in T. cruzi.
Key words: Trypanosoma cruzi, genes, protozoan polymorphism, restriction fragment length
polymorphism; Colombia.

Trypanosoma cruzi, el flagelado que causa la
enfermedad de Chagas, realiza su ciclo de vida
entre reservorios mamíferos e insectos de la
familia Reduviidae. Para este protozoario se ha
propuesto un modo de reproducción predominante-
mente clonal (1), con lo cual se esperaría
encontrar una baja diversidad. Sin embargo, al
evaluar marcadores fenotípicos, morfológicos y
bioquímicos (2), muchos estudios muestran, por
el contrario, una alta heterogeneidad. Es razonable
pensar que esta diversidad pueda estar influyendo,
por lo menos en parte, en el rango variable de las
manifestaciones clínicas de la enfermedad (2).
Con este planteamiento se han emprendido
estudios que buscan asociaciones entre la
heterogeneidad genética del parásito y la
heterogeneidad clínica de la enfermedad (3-9).
Con el uso de marcadores de ADN anónimos
(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD) o
en los genes kADN, espaciadores intergénicos
del gen mini-exón, y en el ADN ribosomal se ha
logrado determinar grupos y subgrupos de T. cruzi
e incluso establecer un patrón regional en relación
con estas divisiones (10-15). Sin embargo, hasta
la fecha existe mucha controversia sobre las
reales asociaciones entre los grupos y las
características clínicas y epidemiológicas de la
enfermedad, puesto que ambos grupos se han
encontrado en todos los estados de transmisión,
en diversas fases de la enfermedad y en sus
diferentes rasgos fenotípicos (16). Es también
razonable pensar que, de existir una asociación,
Correspondencia:
Winston Rojas, Calle 62 # 52-59, Sede de Investigación
Universitaria (SIU), 4 piso- 430, Medellín, Colombia. Tel. (4)
2106464, fax: (4) 210 64 69.
winstonrojas@yahoo.com
Recibido: 20/12/05; aceptado: 07/04/06
sería útil estudiar los genes involucrados en
procesos como la infección de la célula hospedera,
la supervivencia y la progresión del ciclo de vida
del parásito, así como aquellos útiles en evadir la
respuesta inmune del hospedero, podrían ser un
blanco importante.
El genoma de T. cruzi consta de aproximada-
mente 22.570 genes, de los cuales casi el 50%
conforma grupos parálogos. Entre ellos se
encuentra la cruzipaína (Crp), que pertenece a una
familia de cisteín peptidasas compuesta por 20
miembros por genoma haploide (17). El porcentaje
restante corresponde a genes de copia única como
la tripanotión reductasa (TriR) (18).
Los tripanosomátidos carecen de la enzima
glutatión peroxidasa y para defenderse del estrés
oxidativo utilizan el tripanotión reducido en un
sistema propio de estos organismos (19). Esta
reducción es catalizada por la tripanotión
reductasa, una flavoproteína dependiente de
NADPH, la cual además participa en el
metabolismo y detoxificación de drogas y en la
reducción de precursores para la síntesis de ADN
(20,21). En Leishmania spp. este sistema está
involucrado en la supervivencia intracelular del
parásito (22). El gen que codifica para esta enzima
también ha demostrado ser útil en la determinación
de grupos dentro de T. cruzi, pues ha revelado la
existencia de cuatro grupos principales en lugar
de las dos divisiones ya conocidas (18).
La cruzipaína pertenece a la familia de las cisteín
proteinasas, y es codificada por un alto número
de genes organizados como grupos localizados
en diferentes cromosomas (23,24). Por tener un
elevado número de copias se ha encontrado una
variabilidad que va desde la ausencia de
diferencias entre las copias (25) hasta formas muy
divergentes, como es el caso de la cruzipaína 2

51
Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al
(26,27). El dominio C terminal de la cruzipaína es
responsable del carácter inmunodominante
antigénico de esta proteína en infecciones
humanas naturales (28), en las que la gran
mayoría de los anticuerpos detectados en el suero
de pacientes chagásicos crónicos está dirigida
contra este dominio (29). La cruzipaína y su
actividad como proteasa se ha implicado en
funciones tan importantes como la supervivencia
y la progresión en el ciclo de vida del parásito
(30,31), la penetración e invasión del tripomastigote
en la célula hospedadora (32-34), la protección
contra la respuesta inmune del hospedero (35) y
la diseminación del parásito (2).
El análisis de las secuencias disponibles en las
bases de datos para estos dos genes muestra un
nivel de polimorfismo que no se ha evaluado en
cepas de Colombia. Dada la importancia de estos
genes en el ciclo de vida del parásito se propuso
examinar la variabilidad genética de tripanotión
reductasa (TriR) y cruzipaína (Crp) en relación con
el origen geográfico y biológico en cepas de T.
cruzi de Colombia. Conociendo la variabilidad de
estos genes en cepas que circulan en nuestro
país, se podrá en el futuro proponer estudios de
asociación entre esta variabilidad y la
enfermedad.
Materiales y métodos
Se analizaron 36 cepas colombianas de T. cruzi
y 7 clones de la cepa Cas15, provenientes de
diferentes hospederos, vectores y regiones de
Colombia (cuadro 1). Se incluyeron las cepas de
referencia Tulahuen y CL clasificadas como T.
cruzi II. Todas las cepas y los clones provinieron
del banco de cepas del Laboratorio de Chagas de
la Universidad de Antioquia, donde son
mantenidas en medio de cultivo LIT suplementado
con suero bovino fetal a 27,5°C (36). El ADN del
parásito se obtuvo por el método salting out (37)
y su concentración se midió por densidad óptica
a 260 nm (38). El ADN se disolvió en 50 µl de H2O
dd y se almacenó a -20°C para su posterior
genotipificación.
El diseño experimental incluyo un análisis de las
secuencias disponibles en www.ncbi.nlm.nih.gov
y www.tigr.org. Para TriR se usaron 41 secuencias
de ADN (cuadro 2) y para Crp, 10 secuencias
52
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
(nueve de Crp1 y una de Crp2, cuadro 3), las
cuales fueron alineadas usando el algoritmo Clustal
W (39). Para Crp2 se cuenta con mayor número
de caracteres y por ello se usó como referencia
para el alineamiento. La identificación de sitios
polimórficos y su posible discriminación en
ensayos de reacción en cadena de la polimerasa-
polimorfismos de longitud de fragmentos de
restricción (polymerase chain reaction-restriction
fragment lenght polymorphisms, PCR-RFLP) se
realizó usando los programas pDRAW32
(www.acaclone.com), DAMBE (39) y DnaSP (40).
Con las secuencias disponibles se diseñaron los
cebadores para el fragmento de TriR (TriR directo:
5´AGTGTTACTTTCGAGAGCG3´; TriR inverso:
5´GTAGAAGTCGGATATTTTGG3´), los cuales
amplifican una región de 564 pb, correspondiente
a las posiciones 726 a 1.290 de la secuencia
AF359000, pero numeradas en el cuadro 2 como
posiciones 1 a 564 según el fragmento amplificado,
y para el fragmento del gen Crp (Crp directo:
5´GTTGAGTGCCAGTGGTTTC3´; Crp reverso:
5´TGGTCAGGAGACACTGACC3´), los cuales
producen un fragmento de 700 pb correspondiente
a las posiciones 1.346 a 2.046 de la secuencia
M90067 (cuadro 3).
Las reacciones de amplificación se realizaron en
un volumen de 25 µL (Tris-HCl 10mM, pH 8.0,
KCl 50mM, MgCL2 2.4 mM, dNTP 0.1mM, 0.1 µM
de cada cebador, 1 U Taq ADN polimerasa
Promega® y 50 ng de ADN molde). El perfil térmico
para ambos marcadores fue de un minuto de
desnaturalización a 94°C, un minuto de alinea-
miento a 54°C para Crp y 56°C para TriR y
extensión del cebador por un minuto a 72°C, para
un total de 35 ciclos para Crp y 30 ciclos para
TriR. Las reacciones de amplificación se
observaron en electroforesis en geles de agarosa
al 1,5% seguida de tinción con bromuro de etidio.
Los fragmentos amplificados incluyen regiones
polimórficas que pueden ser resueltas con las
enzimas mostradas en las cuadros 2 y 3. Para
cruzipaína, las enzimas Rsa I, Bsu 36I y Ban I
permiten la diferenciación de polimorfismos en
tercera posición, mientras que Dra III permite la
identificación de una transición A:G en la posición
457, la cual da lugar a un cambio de alanina por
serina. Ambas formas de la cruzipaína poseen
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia

Cuadro 1. Origen geográfico, biológico y clasificación previa de los aislamientos de Trypanosoma cruzi. ID se refiere al
código de identificación.

Cepa Origen geográfico Origen biológico ID internacional Grupo

AMP 07 Antioquia P. geniculatus IPANS/CO/1997/AMP07 I

AF 1 Antioquia P. geniculatus I-PANS/CO/93/Af1 IIb
Yg03 Antioquia P. geniculatus I-PANS/CO/97/YG 03 I
Cas 18 Casanare D. marsupialis M.DID/CO/02/CAS18 I
HA Casanare H. sapiens M-HUM/CO/97/HA I
Cas16 Casanare R. prolixus I.RHO/CO/00/CAS16 I
Cas 15 Casanare R. prolixus TPRX/CO/2000/CAS15 I
B138 Córdoba T. dimidiata I-TRI/CO/99B138 I
B114 Córdoba T. dimidiata I-TRI/CO/99/B114 I
B51 Córdoba R. pallescens TPAC/CO/1999/B51 I
Sb 1 Córdoba R. pallescens I-RHO/CO/98/Sb1 I
Ac17 Chocó R. pallescens I-RHO/CO/99/Ac17 I
Mag 11 Magdalena R. pallescens I:RHO/CO/03/MG11 I
Mag 1 Magdalena R. pallescens I.RHO/CO/01/MG1 I
Mag5 Magdalena E. cuspidatus TCUS/CO/2003/MG5 I
Mag 9 Magdalena T. dimidiata I.TRI/CO/03/MG9 I
Mag8 Magdalena T.dimidiata TDIM/CO/2003/MG8 I
Mag 10 Magdalena T.dimidiata TDIM/CO/2003/MG10 I
Putumayo4 Putumayo R. robustus I.RHO/CO/01/PUT-4 I
SN3 Sierra Nevada R. prolixus TPRX/CO/2003/SN3 I
SN 8 Sierra Nevada R. prolixus I.RHO/CO/03/SN-8 I
SN5 Sierra Nevada R. prolixus TPRX/CO/2003/SN5 I
SN6 Sierra Nevada R. prolixus TPRX/CO/2003/SN6 I
So 6 Sucre R. pallescens I.RHO/CO/94/SO6 I
OV 1 Sucre P. geniculatus I-PANS/CO/98/Ov1 I
G20 Sucre R. pallescens TPAC/CO/1997/G20 I
Gal 34 Sucre R. pallescens TPAC/CO/1991/Gal 34 I
W3534 Sucre H. sapiens M-HUM/CO/98/W3534 I
Gal 61 Sucre Ratón MMUS/CO/91/Gal61 I
Gal 52 Sucre D. marsupialis MDID/CO/1991/Gal 52 I
LB53 Sucre T. dimidiata TDIM/CO/1999/LB53 I
Ov17 Sucre P. geniculatus I.PANS/CO/98/OV17 I
So5 Sucre R. pallescens I.RHO/CO/94/SO5 I
So8 Sucre R. pallescens TPAC/CO/1995/So8 I
STP 2.2 Tolima R. prolixus I.RHO/CO/91/COY6 I
Coy8 Tolima D. marsupialis M.DID/CO/91/COY8 I
Tulahuen Chile T. infestans TINF/CH/1956/Tulahuen II
CL Brasil T. infestans TINF/BR/1963/CL II
Cas 15 cl 47 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 48 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 49 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 55 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 56 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 73 Casanare R. prolixus X I
Cas 15 cl 79 Casanare R. prolixus X I

los tres sitios de corte identificados para la enzima
Rsa I. Sin embargo, a diferencia de la Crp1, la
Crp2 carece de diana de corte en la posición 142
para la enzima Ban I (cuadro 3). Las enzimas Bsu
36I y Dra III carecen de sitios de corte en esta
isoforma (cuadro 3). Las enzimas utilizadas en el
análisis de RFLP de tripanotión reductasa - Acy
I, Hae III y Bsm AI - sólo identifican polimorfismos
en la tercera posición.
Para verificar la presencia de ambas formas de la
cruzipaina se usó la enzima Apa I según el
protocolo descrito por Lima et al, 1994 (26);
cruzipaína 2 cuenta con un sitio de corte en
la posición 298, distinguiendo el sitio variante

53
Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63

Cuadro 2. Posiciones evaluadas y enzimas que las reconocen en las secuencias disponibles en las bases de datos
públicas para el gen tripanotión reductasa.

59* 101 179 211 331 535

ID. Secuencia Grupo (HaeIII) † (Acy I/ 102) (Acy I) (HaeIII/ 210) (Bsm AI) (BsmAI/ 534)

TC10727 - G C A G A C
Z13958 I G C A G A C
AF358981 I G C A G A C
M38051 I G C A T A C
AF358975 I G C A G A C
AF358982 I G C A G A C
AF358987 I G C A G A C
AF358971 I G C A G A C
AF358973 I G C A G A C
AF358972, AF35976 I G C A G A C
AF358985,AF358984,
AF358983,AF358977, I G C A G A C
AF358979,AF358980
AF358978,AF358970, I G C A G A C
AF358969,AF358974
AF358989, AF358988 II G T A G A C
AF358986 II G C A G A A
M97953 II G C A G A C
AF359003,AF358997,
AF358994, AF358993, II G C A T A C
AF358992,AF359001,
AF358999,AF359005
AF359002,AF358996,
AF359000,AF358998, II G T A G A C
AF359004,AF358991
AF358990 II G T A G A C
AF358995 II G C A T A C

* Posición en la cual la enzima realiza el corte.

† Entre paréntesis se indica la enzima que realiza el corte y la posición del polimorfismo que identifica.

297 (cuadro 3) y generando fragmentos de 297 y Resultados

403 pb.
Los productos de amplificación se sometieron a
digestiones simples a un volumen final de 20 µl
con 1 U de enzima a 37°C por 16 horas. Una
alícuota de 12 µL se analizó en geles de agarosa
al 3% teñidos con bromuro de etidio. El resultado
de la digestión fue registrado en un analizador de
imágenes Gel Doc (BioRad, USA). Los patrones
de bandas obtenidos fueron analizados con el
software Imagej 1.33 (http://rsb.info.nih.gov/ij) y
Quantity One (BioRad, USA). Para cada cepa y
para cada gen se definieron los genotipos de
acuerdo con los patrones observados en los
electroferogramas.
Los productos de amplificación obtenidos en los
ensayos de PCR para TrR y Crp se muestran en
la figura 1. Algunos de los perfiles de las digestio-
nes simples se muestran en las figuras 2 a 6.
Los resultados de las digestiones se representan
como genotipos compuestos de las digestiones
simples. De seis sitios evaluados para TriR, sólo
dos mostraron polimorfismo. Sólo la combinación
de los genotipos obtenidos para las enzimas Hae
III y Acy I muestran patrones polimórficos,
denominados TriR 1, 2 y 3 (cuadro 4). El genotipo
TriR 3 puede definirse con certeza debido a que
el corte sólo se presenta ante la presencia de los
alelos C y G para los sitios Acy I-102 y Hae III-

54
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia

Cuadro 3. Posiciones evaluadas y enzimas que las reconocen en las secuencias disponibles en las bases de datos
públicas para el gen cruzipaína.

142* 151 222 226 257 299 430 461 613

Secuencia Grupo (BanI/ (RsaI) (DraIII/ (BanI/ (Bsu36I/ (ApaI/ (RsaI/ (DraIII/ (RsaI/
147)† 225) 231) 258) 297) 432) 462) 612)

M84342 II C T G C T T C G G
TC10685 I C T G C G T C G G
AF314930 II C T G C T T C G C
AF314929 II C T G C T T C G G
AY0317 II C T G C T T T G G
AF265227 I C T G T G T C T G
AF265226 I C T G C G T C G G
U41454 I C T G C G T C G G
AF004594 II C T T C T T C G G
M90067
(Cruzipaína2) I T T G C G G‡ C T G

* Posición en la cual la enzima realiza el corte.

† Entre paréntesis se indica la enzima que realiza el corte y la posición del polimorfismo que identifica.
‡ Sitio para distinguir las copias reportadas de cruzipaína.

210, respectivamente; este genotipo, presente en
35 de 38 cepas, se encuentra en las cepas
caracterizadas como T. cruzi I, en las cuales es
definido por la ausencia del alelo T en ambas
posiciones (cuadro 4). El genotipo TriR 1,
heterocigótico para ambas posiciones, se
Figura 1. Productos de amplificación obtenidos para
cruzipaína (izquierda) y tripanotión reductasa (derecha). Sólo
se muestra el producto para algunas cepas del grupo I
(Cas15) y grupo II (AF1, Tulahuen y CL). MP = marcador de
peso de 100 pb.
encontró en las dos cepas de referencia, de
acuerdo con lo reportado en las bases de datos
(cuadro 2, identificaciones de acceso: AF358997
y AF359002 para Tulahuen y AF358999 y
AF358998 para CL), mientras que el genotipo TriR
2 se encontró en la cepa AF1 proveniente de
Amalfi, Antioquia (cuadro 4). Para estos dos
genotipos se infiere el alelo T en ambas posiciones
debido a que es el polimorfismo alternativo
presente en las secuencias analizadas y a que
no se reporta otro sitio polimórfico alrededor de la
diana de reconocimiento de la enzima. La
distribución de estos genotipos no mostró ninguna
asociación con origen geográfico o biológico
(datos no mostrados).
En los ensayos de digestión para Crp, la enzima
Apa I permitió identificar la cruzipaína 2
diferenciada por el polimorfismo en la posición 297
(figura 3). La presencia de por lo menos dos copias
resulta en patrones de digestión complejos, en
los que es posible obtener más de dos alelos para
cada posición; para facilitar el análisis,
denominamos como genotipo “heterocigoto” a aquel
que poseía más de un alelo en un locus, lo cual
puede corresponder a diferencias entre copias de
Crp o a una condición heterocigótica en sentido
estricto.
Basados en las secuencias reportadas para Crp,
los sitios 150 a 153 representan una diana de

55
Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63

Figura 2. Patrones RFLP para TriR con la enzima Acy I (A) y Hae III (B) en algunas cepas de los grupos I (Mag1, HA y
Mag5) y grupo II (CL, Tulahuen y AF1). MP = Marcador de peso de 50 pb. Los tamaños de los fragmentos se muestran en
los electroferogramas (A y B) y en los mapa de restricción (C y D), para cada una de las enzimas y su diana de
reconocimiento (y= Purina; r=Pirimidina). Sólo los perfiles para las enzimas que produjeron patrones polimórficos entre
cepas son mostrados.

Cuadro 4. Genotipos compuestos Tripanotión reductasa.

Cepa Acy I Hae III Genotipo

102 210

TUL, CL C/T* G/T† TriR 1

AF1 C/C T/T TriR 2
HA, Cas18, Mag5, SN5, SN8, OV1, Cas16, Mag10, LB53,
Cas15, Amp07, Yg03, B138, B114, B51, Sb1, Ac17, Mag1,
Mag8, Mag9, Mag11, Putumayo4, SN3, SN6, So6, G20, Gal34 C/C G/G TriR 3
W3534, Gal61, Gal52, Ov17, So5, So8, STP2.2, Coy8,
Clones Cas 15

*C corte en la posición 101 con la enzima Acy I

†G corte en la posición 211 con la enzima Hae III

56
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
Figura 3. Digestión simple de cruzipaína con la enzima Apa
I en cepas del grupo I (Mag5) y del grupo II (Tulahuen) para
distinguir la presencia de más de una copia del gen usando
el protocolo descrito por Lima et al., 1994.
reconocimiento para la enzima Rsa I con corte en
la posición 151 (cuadro 3); estos sitios se reportan
monomórficos en todas las secuencias (datos no
mostrados), pero en algunas cepas analizadas en
este estudio dicha diana se perdió originando
genotipos heterocigotos; sus alelos se representan
como 1/0 debido a que no se puede comprobar
cuál es el sitio polimórfico dentro de la diana de
reconocimiento de la enzima (cuadro 5). Los alelos
Ban I-C y Rsa I-C en las posiciones 231 y 432,
respectivamente, se definen con certeza porque
la enzima sólo corta cuando éstos están
presentes. Los alelos Ban I-T, Bsu 36I-G y Rsa I-
T en las posiciones 231, 258 y 432 se infieren
debido a que es el polimorfismo alternativo
reportado en las secuencias analizadas y a que
no se reporta otro polimorfismo alrededor de la
diana de reconocimiento para cada enzima. Los
sitios evaluados con la enzima Dra III fueron
monomórficos y por esto no se consideran en los
genotipos compuestos.
A diferencia de TriR, y probablemente por la
presencia de más de una copia, para Crp se
obtuvieron seis genotipos compuestos represen-
tados como Crp 1 a Crp 6 (cuadro 5). El genotipo
Crp 5, homocigótico para todos los loci, agrupa
Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia
Figura 4. Patrones RFLP para Crp con la enzima Bsu 36I
en cepas del grupo I (Cas15) y II (Tulahuen). Los tamaños
de los fragmentos se muestran en el electroferograma (A) y
en el mapa de restricción (B).
26 cepas clasificadas como T. cruzi I (cuadro 5).
El genotipo Crp 1 se encontró en las cepas del
grupo T. cruzi II y es diferenciado por la presencia
del alelo T en la posición 258 (cuadro 5). Éste y el
genotipo Crp 3 son los más polimórficos; los
genotipos Crp 2, Crp 4 y Crp 6 mostraron
polimorfismo en la diana alrededor del sitio 151;
adicionalmente, Crp 2 varió en la posición 432, y
Crp 4 y Crp 6 variaron en la posición 231 (cuadro 5).
Para Crp fue posible establecer algunas asociacio-
nes entre los genotipos y el origen geográfico y
biológico de las cepas (cuadro 6). Cuando se
consideró el origen geográfico, la región del oriente
(departamento de Casanare) mostró ser más
diversa, con cuatro de los seis genotipos; dos de
ellos, Crp 3 y Crp 6, son específicos de esta región
y son diferenciados por el alelo T en el sitio 231.
El genotipo Crp 2 se encuentra en el noroccidente
(Sucre, Magdalena, Sierra Nevada) y oriente de
Colombia (Casanare); este genotipo también se
encontró en aislamientos de Rhodnius prolixus,
Pastrongylus geniculatus y Eratyrus cuspidatus;
entre los hospedadores mamíferos este genotipo
sólo se encontró en Didelphis marsupialis (cuadro
6). El genotipo Crp 4 tiene una distribución similar
al genotipo Crp 2, pero está ausente en la Sierra
57
Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63

Cuadro 5. Genotipos compuestos de cruzipaína.

Cepa Rsa I Ban I Bsu 36I Rsa I Genotipo

151 231* 258† 432‡

CL, Tulahuen, AF1 1/0§ C/C G/T C/T Crp 1

Cas18,Mag5, SN5,SN8,OV 1 1/0 C/C G/G C/T Crp 2
HA 1/0 C/T G/G C/T Crp 3
Cas16, Mag10,LB53 1/0 C/C G/G C/C Crp 4
Amp07, Yg03, B138, B114, B51, Sb1, Ac17, Mag1,
Mag8, Mag9, Mag11, Putumayo4, SN3, SN6, So6, 1/1 C/C G/G C/C Crp 5
G20, Gal34, W3534, Gal61, Gal52, Ov17, So5,
So8, STP2.2,Coy8,
Cas 15, Clones Cas 15 1/1 C/T G/G C/C Crp6
*
C corte en la posición 226
†G no corte en la posición 257
‡C corte en la posición 430
§1 = corte; 0 = no corte

Figura 6. Patrones RFLP para Crp con la enzima RsaI en

Figura 5. Patrones RFLP para Crp con la enzima Ban I en
cepas del grupo I (Cas15) y II (Tulahuen). Los tamaños de
los fragmentos se muestran en el electroferograma (A) y en
el mapa de restricción (B). La banda de 558 pb se explica
por la ausencia de corte en la posición 226 y la banda de 226
pb, por ausencia de corte en la posición 142.
cepas del grupo I (Cas15 y HA) y II (Tulahuen). Los tamaños
de los fragmentos se muestran en el electroferograma (A) y
en el mapa de restricción (B). La banda de 430 pb se explica
por la ausencia de corte en la posición 151; la banda de 462
pb, por la ausencia de corte en la posición 430; la banda de
613 pb, por la ausencia simultánea de corte en las posiciones
151 y 430.

58
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63 Tripanotión reductasa y cruzipaína en T. Cruzi de Colombia

Cuadro 6. Distribución de genotipos compuestos de acuerdo con el departamento o región de procedencia y con el
origen biológico de las cepas estudiadas.

Genotipo compuesto Departamento/Región Origen biológico

(No. de cepas) (No. de cepas)

Chile (1) T. infestans (1)

Crp 1 Brasil (1) T. infestans (1)
*1/0 C/C G/T C/T Antioquia (1) P. geniculatus (1)
Casanare (1) D. marsupialis (1)
Crp 2 Magdalena(1) E. cuspidatus (1)
1/0 C/C G/G C/T Sierra Nevada (2) R. prolixus (2)
Sucre (1) P. geniculatus (1)
Crp 3 Casanare (1) H. sapiens (1)
1/0 C/T G/G C/T
Crp 4 Casanare (1) R. prolixus (1)
1/0 C/C G/G C/C Magdalena (1) T. dimidiata (1)
Sucre (1) T. dimidiata (1)
Antioquia (2) P. geniculatus (2)
Córdoba (4) T. dimidiata (2)
R. pallescens (2)
Chocó (1) R. pallescens (1)
Crp 5 Magadalena (4) R. pallescens (2)
1/1 C/C G/G C/C T. dimidiata (2)
Sierra Nevada (2) R. prolixus (2)
Putumayo (1) R. robustus (1)
Sucre (9) R. pallescens (5)
P. geniculatus (1)
D. maruspialis (1)
H. sapiens (1)
Ratón (1)
Tolima (2) R. prolixus (1)
D. marsupialis (1)
Crp 6 Casanare (1) R. prolixus (1)
1/1 C/T G/G C/C

*1 = corte; 0 = no corte

Nevada de Santa Marta; este genotipo está
asociado a R. prolixus y Triatoma dimidiata,
principales vectores domiciliados.
El genotipo Crp 5 fue el más frecuente; se presentó
en todas las regiones del occidente de la cordillera
oriental, en la totalidad de los hospederos
mamíferos y en la mayoría de los insectos
vectores, a excepción de E. cuspidatus; es el
único genotipo encontrado en los 10 aislamientos
de Rhodnius pallescens. En R. prolixus se
encontró el mayor número de genotipos (Crp 2,
Crp 4, Crp 5 y Crp 6).
Discusión
La evaluación de TriR con las enzimas Acy I y
Hae III permitió distinguir cepas de los grupos
previamente descritos con otros marcadores
moleculares. Las cepas del grupo T. cruzi I
evaluadas en este estudio mostraron en las
posiciones 102 y 211 ausencia del alelo T (cuadro
4). Al considerar las secuencias reportadas, el
alelo T en la posición 102 está ausente de todas
las cepas del grupo I, como también en algunas
del grupo II; el alelo T en la posición 211 fue
consistente con las cepas del grupo T. cruzi II en
nuestros ensayos; sin embargo, los datos de
secuencias muestran que este alelo también
puede estar presente en cepas de T. cruzi I
(cuadro 2), por lo que no puede considerársele un
alelo específico de grupo.
El gen TriR es codificado por un locus único en
el genoma de T. cruzi (18) y la condición

59
Rojas W., Caro M.A., Lopera J.G. et al
heterocigótica observada en el genotipo
compuesto TriR 1 (C/T y G/T) podría reflejar
cualquiera de varias situaciones: una combinación
de clones en la cepa (41-43), o una heterocigosis
“real” causada por mutación o intercambio genético
dentro del grupo T. cruzi II (18,44-47). Si se
considera la naturaleza heterogénea de los
aislamientos originales de cepas de T. cruzi (42),
ello podría argumentarse a favor de la primera
situación. Sin embargo, no es posible descartar
que los genotipos heterocigotos encontrados
representen eventos antiguos de intercambio
génico (18,44-47), en particular en el sitio 210, el
cual puede ser producto de intercambio entre
genotipos homocigotos.
La evaluación del gen TriR en cepas de Colombia
mostró en nuestro análisis una baja diversidad de
genotipos. El cálculo del polimorfismo (θ) y
diversidad nucleotídica (π) a partir de las
secuencias reportadas para este gen fue de
0,0083+/-0,00186 y 0,011+/-0,00062, respectiva-
mente. Una relación de menor polimorfismo con
una mayor diversidad permite suponer que se trata
de un gen sujeto a selección, o que efectivamente
existe una estructura clonal en las cepas de
Colombia; sin embargo, esta afirmación requeriría
de confirmación, dado que los rangos de estos
valores se superponen. Esta afirmación puede
contradecirse si se considera que el polimorfismo
en dichas secuencias se localiza en terceras
posiciones del codón, dando lugar a cambios
neutros. La tripanotión reductasa cumple una
función en la detoxificación de productos
endógenos y exógenos en el ciclo de vida del
parásito y nuestros resultados no muestran una
asociación con origen biológico; ello sugiere que,
de estar sujeta a selección, su fuerza no ha
operado diferencialmente entre los distintos
orígenes biológicos y geográficos de donde
proceden las cepas. Por este bajo polimorfismo,
esta proteína podría constituirse en un blanco
adecuado para diseños terapéuticos (48,49).
La presencia de por lo menos dos formas de Crp
hace más complejo el análisis tanto de los
genotipos como de su asociación con orígenes
geográficos y biológicos. El mayor polimorfismo
de este gen (cuatro sitios polimórficos de ocho
sitios evaluados, excluido el sitio Apa I) dio lugar
60
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
a seis genotipos, en contraste con tres genotipos
para TriR, lo cual concuerda con la presencia de
más de una copia del gen. Desde este punto de
vista, muchas cepas (genotipo Crp 5) podrían
representar eventos de concertación génica (50-
52) en los que los loci de ambas copias son
homocigóticos; pero esto requiere asumir hipótesis
ad hoc de mutación para los mismos loci en otras
cepas (genotipos Crp 1 a 4).
Algunos estudios previos con cepas de Colombia
han podido establecer relaciones entre genotipos
de T. cruzi con ciclos de transmisión (53,54). En
este estudio no fue posible establecer relaciones
entre genotipos TriR y Crp y ciclos de transmisión,
debido a que no se evaluaron cepas aisladas de
vectores domiciliados; las cepas SN se obtuvieron
de R. prolixus al interior de las viviendas, pero su
ubicación dentro de un nicho selvático en la Sierra
Nevada de Santa Marta podría introducir errores
en dichas comparaciones. Sin embargo, se pudo
evaluar la relación entre genotipos y el origen
geográfico y biológico de las cepas, en particular
con las especies de vectores.
En cuanto a Crp , se puede concluir que el
departamento del Casanare es la región con más
diversidad de genotipos (cuadro 6). De acuerdo
con esto, en estudios previos (53,55) se determinó
que la región de los Llanos Orientales exhibió un
alto número de fenotipos isoenzimáticos. Dada la
alta prevalencia de la enfermedad en esta región
(IV Reunión de la Comisión Intergubernamental
de la Iniciativa Andina de Control de la
Transmisión Vectorial y Transfusional de Chagas.
Guayaquil, 2003;56,57), valdría la pena formular
hipótesis sobre la diversidad de T. cruzi en relación
con la eficacia biológica (58) y con la epidemiología
de la enfermedad.
En cuanto a las asociaciones con los vectores,
también se puede concluir que en R. pallescens,
el vector/hospedero de donde proviene el mayor
número de cepas en este estudio, se encontró
exclusivamente el genotipo compuesto Crp 5; vale
la pena evaluar también una hipótesis de
especificad parásito-vector ampliando los
marcadores en aislamientos de este vector. En
contraste, en las demás especies de vectores se
encontró más de un genotipo; en R. prolixus,
Biomédica 2007;27(supl. 1):50-63
principal vector de la enfermedad de Chagas en
el país, se encontró el mayor número de genotipos;
éste es un insecto ampliamente distribuido en
regiones distantes de Colombia; la importancia
de este aspecto también puede evaluarse en
relación con sus implicaciones por sus hábitos
antropofílicos y su domiciliación. Las cepas
provenientes de P. geniculatus, aunque con una
distribución más restringida, también mostraron
tres de seis genotipos; esta diferencia en la
diversidad genotípica entre especies podría reflejar
el efecto de filtros biológicos selectivamente
diferentes (59,60).
Usando marcadores de isoenzimas, RAPDs y
ADNr, se ha podido demostrar la mayor prevalencia
del grupo T. cruzi I en el país (53-55,61). Con dos
sistemas diferentes en genes codificadores de
proteínas también fue posible en este estudio
reproducir esta observación, agrupándose la
mayoría de cepas del grupo I dentro de los
genotipos TriR 3 y Crp 5; esta consistencia de
agrupación con diferentes sistemas refuerza así
la estructura clonal de las poblaciones de T. cruzi.
Los resultados de este estudio sugieren que estos
genes son útiles como posibles marcadores
moleculares para determinar y diferenciar
variedades genéticas en T. cruzi, y permiten
plantear la futura evaluación de la hipótesis sobre
la interacción parásito-hospedero.
Conflicto de intereses
Los autores declaramos que no existe ningún
conflicto de intereses.
Financiación
El estudio fue desarrollado como parte del
proyecto 1115-04-14387 financiado por
Conciencias.
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Botero L.A.,2007;27(supl.1):64-74
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ARTÍCULO ORIGINAL

Caracterización biológica y genética de dos clones

pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi
de Colombia
Luz Adriana Botero, Ana María Mejía, Omar Triana
Grupo de Chagas, Instituto de Biología, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.

Introducción. T. cruzi I y T. cruzi II son grupos genéticamente diferentes y se cree que dicha
variabilidad es determinante del tropismo tisular en el hospedero vertebrado y responsable de
las diversas manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas.
Objetivo. Caracterizar biológica y genéticamente dos clones colombianos de los grupos T.
cruzi I y II en el modelo murino.
Materiales y métodos. Las cepas CAS15 y AF1 pertenecientes a los grupos T. cruzi I y II
fueron clonadas en medio semisólido. Un clon de cada una de ellas y una mezcla de ambos se
utilizaron para infectar ratones, los cuales se sacrificaron a diferentes tiempos post-infección.
Para analizar la presencia del parásito en sangre y diferentes órganos, se utilizaron el
microhematocrito y la reacción en cadena de la polimerasa con los marcadores de la secuencia
satélite del ADN nuclear y con el espaciador intergénico del gen mini-exón.
Resultados. El clon T. cruzi I fue más infectivo, observándose un tropismo preferencial por
corazón, recto y músculo esquelético, mientras que el clon T. cruzi II presentó un tropismo
preferencial por bazo e hígado. Durante la infección con la mezcla de los clones, se observó
que el clon T. cruzi I predominó sobre el T. cruzi II tanto en sangre como en órganos.
Conclusiones. Los resultados confirman que las diferencias genéticas entre los grupos de T.
cruzi podrían estar determinando el tropismo tisular y de esta manera jugar un papel fundamental
en el entendimiento de las manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas en Colombia.
Palabras claves: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, variación (Genética), tropismo.
Biological and genetic characterization of two Colombian clones of Trypanosoma cruzi
groups I and II
Introduction. Genetic differences between T. cruzi I and T. cruzi II may determine differences in
their tissue tropism in the vertebrate host and may also be responsible for the differences in
clinical manifestations of Chagas disease.
Objective. Two Colombian clones of the T. cruzi groups I and II were characterized biologically
and genetically in a murine model.
Materials and methods. Strains Cas15 and AF1 belonging to the T. cruzi groups I and II were
cloned in semisolid medium. A clone of each strain and a mix of both were used to infect mice;
the mice were subsequently sacrificed at selected post-infection intervals. In order to identify
the parasite presence in blood and organs, two methods were used (a) microhematocrit and (b)
polymerase chain reaction with primers for satellite DNA and the intergenic region of mini-
exon.
Results. The T. cruzi I clone was more infectious, with a preferential tropism observed in heart,
rectum and skeletal muscle, whereas clone T. cruzi II exhibited a preferential tropism for spleen
and liver. During the infection with the clone mixture a predominance of the T. cruzi I clone over
clone II in blood as well as in organs was observed.
Conclusions. The results corroborate that the genetic differences between the T. cruzi groups
correlate with their tissue tropism, and can play an essential role in explaining the clinical
manifestations of Chagas disease observed in Colombia.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, variability (Genetics), tropism.

64
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
La enfermedad de Chagas, causada por el
parásito Trypanosoma cruzi , se encuentra
ampliamente distribuida en países de Centro y
Sur América, afectando aproximadamente a 20
millones de individuos (1). En Colombia, afecta a
cerca del 5% de la población y aproximadamente
el 11% está en riesgo de contraer la infección (2).
La enfermedad presenta un curso clínico variable
que inicia con una fase aguda asintomática,
caracterizada por alta parasitemia y detección de
T. cruzi prácticamente en todos los órganos del
hospedero (3). La enfermedad avanza a una fase
crónica, caracterizada por baja parasitemia y un
impredecible curso clínico que puede involucrar
problemas cardiacos o gastrointestinales (4). En
esta fase el parasitismo en tejidos es muy alto y
restringido a algunos órganos como corazón,
músculo esquelético, hígado, esófago, bazo y
recto (5,6). La habilidad del parásito para sobrevivir
a la fase aguda y avanzar hacia la fase crónica e
invadir determinados órganos depende tanto de
factores genéticos del parásito como del hospedero
(7-11). Por esto, diversas investigaciones han
estudiado la variabilidad genética del parásito y
su posible relación con las manifestaciones
clínicas de la enfermedad (7). En T. cruzi se han
utilizado diferentes marcadores bioquímicos y
moleculares para tratar de correlacionar la
diversidad genética del parásito con sus
características biológicas. El uso del espaciador
intergénico de los genes mini-exón genera dos
claras divisiones filogenéticas conocidas como
T. cruzi I y T. cruzi II (12), las cuales permiten
establecer algunas asociaciones importantes entre
la taxonomía y la biología del parásito, el
desarrollo de la enfermedad y diferentes
parámetros epidemiológicos, entre otros (13,14).
Tradicionalmente, el grupo T. cruzi I se ha
asociado al ciclo selvático de transmisión y se
dice que predomina en los países ubicados al norte
de la cuenca amazónica, entre ellos Colombia,
Correspondencia:
Omar Triana Chávez, Calle 62 N° 52-59, Sede de
Investigación Universitaria SIU, U de A, Medellín, Antioquia,
Colombia, teléfono 2106520, fax 2105622,
otriana@gmail.com
Recibido: 19/12/05; aceptado: 24/04/06
Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
mientras que el grupo T. cruzi II predomina en los
países del sur y se encuentra asociado a los
humanos y, por ende, al ciclo doméstico de
transmisión (15). Por otra parte, se ha visto que
áreas con gran morbilidad presentan la circulación
del grupo T. cruzi II, mientras que en donde circula
el grupo T. cruzi I es poco frecuente la enfermedad
(7). Sin embargo, estudios recientes muestran que
los dos grupos están circulando en ambos
ambientes (13-16); en Venezuela, por ejemplo, un
estudio realizado durante el año 2004 reveló un
mayor número de pacientes infectados con el
grupo T. cruzi I que presentaban la fase aguda de
la enfermedad con manifestaciones clínicas
similares a las observadas en pacientes
infectados con el grupo T. cruzi II (16). Así mismo,
en infecciones experimentales se ha encontrado
que el grupo al que pertenecen los parásitos
determina el tropismo a tejidos, la parasitemia y
la patogénesis de la enfermedad (1,7,17).
En Colombia también se ha reportado
recientemente la presencia simultánea de los dos
grupos filogenéticos en varias de las cepas
estudiadas, evidenciando una mezcla de ambos,
pero con predominio del grupo I en medios de
cultivo (18). Este resultado, junto con el hallazgo
de los dos grupos de T. cruzi en las heces de
vectores recolectados de poblaciones silvestres
del norte de Colombia (datos no publicados),
sugiere la posibilidad de que ambos grupos
circulan de manera simultánea en la naturaleza,
generando una epidemiología más compleja, pues
tanto vectores como hospederos podrían estar
infectados con los dos grupos y, en éstos últimos,
darse un tropismo diferencial a tejidos ocasionan-
do manifestaciones clínicas diversas (1,18,19).
Por lo anterior, y teniendo en cuenta que en Colombia
se ha reportado la presencia de los dos grupos
de T. cruzi, el objetivo del presente trabajo fue
caracterizar biológica y genéticamente dos clones
de T. cruzi aislados de cepas colombianas
pertenecientes a los grupos I y II. Para esto, se
evaluó el tropismo a órganos de ratones infectados
individualmente con cada uno de ellos y durante
una infección mixta con ambos clones. Este
aspecto es de gran importancia para entender
las manifestaciones clínicas y la epidemiología
de la enfermedad de Chagas en Colombia.
65
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O.
Materiales y métodos
Parásitos
Se utilizaron las cepas colombianas I.RHO/CO/
00/CAS-15.CAS (CAS15) y I·PANS/CO/93/AF-
1.ANT (AF1) caracterizadas genéticamente por
isoenzimas, por RAPD y con el marcador mini-
exón como T. cruzi I y T. cruzi IIb, respectivamente
(datos no publicados). La cepa CAS15 se aisló
en el año 2000 del vector Rhodnius prolixus
silvestre del departamento de Casanare y la cepa
AF1 del vector Panstrongylus geniculatus silvestre
del municipio de Amalfi, departamento de
Antioquia. Las cepas se han mantenido en el
laboratorio del Grupo de Chagas de la Universidad
de Antioquia por repiques cada siete días en medio
de cultivo LIT suplementado con suero bovino fetal
al 10% y a una temperatura de 28°C (20).
Clonación de las cepas
Los clones para cada una de las cepas fueron
obtenidos a partir de epimastigotes cultivados en
medio semisólido AGAR-LIT-BHI-sangre (21).
Para esto se mezclaron 50 ml de agar estéril con
pH 7,2, 100ml de LIT con suero bovino fetal al
10%, 100 ml de infusión de hígado y corazón (BHI)
estéril y 6,25 ml de sangre desfibrinada. A
continuación, se vertieron 25 ml de esta mezcla
en cajas de Petri de 95 mm de diámetro y, luego
de comprobar la esterilidad del medio, se
sembraron 20 células por caja. Posteriormente se
envolvieron las cajas en papel estéril y se
incubaron aproximadamente 30 días a 28°C hasta
observar el crecimiento de colonias puntiformes
transparentes. Se aislaron y cultivaron siete
clones para la cepa CAS15 y dos para la cepa
AF1 en medio LIT suplementado con suero bovino
fetal al 10%, según lo reportado previamente (22).
Extracción de ADN y caracterización genética
de los clones en cultivo
El ADN de las cepas parentales y de sus
respectivos clones se obtuvo por el método salting
out (23). Cada clon se caracterizó genéticamente
por la técnica de reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) con el espaciador intergénico
de los genes del mini-exón para evaluar si
efectivamente el grupo de T. cruzi encontrado
correspondía al de su cepa de origen, debido a
66
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
que se han encontrado en las cepas mezclas de
ambos grupos (18).
Para amplificar dicha región se utilizaron los
iniciadores TC1 (5´-GTGTCCGCCACCT-CCT-
TCGGGCC-3´), TC2 (5´-CCTGCAGGCACAC-
GTGTGTGTG-3´) y TCC (5´-CCCCCCTCCCAG-
GCCACACTG-3´), los cuales amplifican un
fragmento de 350 pb para el grupo T. cruzi I y un
fragmento de 300 pb para el grupo T. cruzi II (13).
La PCR se hizo en un volumen final de 25 µl que
contenían 2,5 µl de ADN molde, 50 mM KCl, 10mM
Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5mM MgCl2, 12,5
pmol de cada iniciador, 200mM dNTPs y 0,625
unidades de Taq ADN polimerasa. Los ciclos de
amplificación se realizaron a una temperatura
inicial de 94°C por 3 minutos, seguida de 27 ciclos
a 94°C por 30 segundos, 55°C por 30 segundos,
72°C por 30 segundos y un ciclo final de 72°C por
10 minutos.
Para determinar si los clones aislados eran
genéticamente diferentes se utilizó la técnica PCR
de baja astringencia con un único iniciador
específico (LSSP-PCR), que requiere un primer
paso de amplificación de la región variable del
ADN del cinetoplasto (kADN). Para amplificar dicha
región se utilizaron los iniciadores S35 (5´-
AAATAATGTACGGGGAGATGCATGA-3´) y S36
(5´-GGGTTCGATTGGGGTTGGTGT-3´), los
cuales amplifican un fragmento de 330 pb
correspondiente a la región variable de los
minicírculos (24). La PCR se llevó a cabo en un
volumen final de 50 µL de reacción que contenía
1 ml de ADN molde, 50 mM de KCl, 10 mM Tris-
HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM de MgCl2, 10 pmol
de cada iniciador, 200 mM de dNTPs y 2,5
unidades de Taq ADN polimerasa. Los ciclos de
amplificación se realizaron a una temperatura
inicial de 94°C por 3 minutos, seguida de 35 ciclos
de 94°C por 45 segundos, 63°C por 45 segundos
y 72°C por 45 segundos, y un ciclo final de 72°C
por 10 minutos.
La banda de 330 pb, obtenida del kADN, se purificó
a partir de geles de agarosa de bajo punto de fusión
al 1,5% y se diluyó 10 veces en agua bidestilada.
Se usó 1 µl de la dilución como molde para la
reacción de LSSP-PCR (24), la cual se llevó a
cabo en 25 µl de volumen final utilizando 50 mM
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
de KCl, 10 mM Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5
mM de MgCl2, 120 pmoles del iniciador S35, 200
mM de cada dNTP y 4 unidades de Taq
polimerasa. Los ciclos de amplificación se
realizaron a una temperatura inicial a 94°C por 3
minutos, seguida de 35 ciclos a 94°C por 45
segundos, 30°C por 45 segundos y 72°C por 45
segundos y un ciclo final a 72°C por 10 minutos
(5). Los productos amplificados se analizaron en
geles de poliacrilamida al 6% (25) teñidos con
nitrato de plata (1). Este procedimiento se realizó
por duplicado con el fin de evaluar la
reproducibilidad de la técnica.
Infección experimental de ratones
Tres grupos de dieciocho ratones machos suizos
de 20 días de nacidos fueron inoculados
intraperitonealmente con tripomastigotes
obtenidos de medio de cultivo de cada clon y con
una mezcla de ambos. El inoculo utilizado fue de
800.000 tripomastigotes de cada clon, tanto en
las infecciones individuales como en la mixta. Para
determinar la presencia de parásitos en sangre,
al séptimo día de infección se revisaron los
ratones por el método del microhematocrito y se
tomó una muestra de sangre de la cola de los
ratones infectados con la mezcla de los clones
en un trozo de tela para su posterior análisis por
PCR (26). Para determinar la presencia de los
clones en órganos, se sacrificaron grupos de tres
ratones de cada infección y se les extrajo
corazón, hígado, bazo, recto y músculo
esquelético tomado del fémur de cada ratón. Estos
procedimientos se repitieron cada siete días hasta
llegar al día 28 y luego se hicieron a los días 60 y
90 de la infección (pi). Como control negativo se
utilizó un ratón macho suizo no infectado al que
se le tomaron las mismas muestras. El sacrificio
de los ratones se llevó a cabo por el método de
inhalación de CO2, el cual fue aprobado por el
Comité de Bioética de la Universidad de Antioquia.
Extracción del ADN
La obtención del ADN de la tela impregnada con
sangre de los ratones se hizo por el método de
Chelex®, que consiste en adicionar a la sangre
una resina y someterla a altas temperaturas que
liberan el ADN en el sobrenadante (26). El ADN
de los órganos fue extraído por el método de fenol-
Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
cloroformo-alcohol isoamilico (25:24:1), previa
homogenización en solución de digestión (SDS
10%, NaCl 5 M, EDTA 0,5M, Tris-HCL 1M pH
7,5) y proteinasa K (100mg/ml), con posterior
precipitación con etanol (27).
Detección del parásito por PCR
Para determinar si el parásito se encontraba
presente en los diferentes órganos de los tres tipos
de infección se usó una secuencia satélite del
ADN nuclear de T. cruzi (Sat-ADN).
Para amplificar el Sat-ADN se utilizaron los
iniciadores TcZI (5´-CGAGCTCTTGCCCACACG
GGTGCT-3´) y TcZII (5´-CCTCCAAGCAGCGG
ATAGTTCAGG-3´), los cuales amplifican un
fragmento de 188 pb (28). La PCR se llevó a cabo
en un volumen final de 50 µL de reacción que
contenía 1 µl de ADN molde, 50 mM de KCl, 10
mM Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM de
MgCl2, 20 pmol de cada iniciador, 200 mM de
dNTPs, y 2,5 unidades de Taq ADN polimerasa.
Los ciclos de amplificación se realizaron a una
temperatura inicial de 94°C por 3 minutos, seguida
de 35 ciclos de 94°C por 45 segundos, 60°C por
1 minuto y 72°C por 1 minuto, y un ciclo final de
72°C por 10 minutos.
Además, para determinar el grupo filogenético
presente en las muestras de sangre y órganos de
la infección con la mezcla de los clones se utilizó
el marcador mini-exón mediante el procedimiento
descrito anteriormente.
Los productos amplificados fueron analizados en
geles de agarosa al 2%, teñidos con bromuro de
etidio y visualizados bajo un transiluminador UV
(29). Cada uno de estos ensayos se hizo por
duplicado.
Resultados
Aislamiento y caracterización genética de los
clones
Para la cepa CAS15 se aislaron 7 clones, los
cuales se denominaron como CAS15 cl1 hasta
CAS15 cl7. Todos los clones amplificaron la
banda de 350 pb para el marcador del gen mini-
exón, característica del grupo T. cruzi I (figura 1).
Para la cepa AF1 se aislaron dos clones a los
que se les denominó AF1 cl1 y AF1 cl2, los cuales
67
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O.
amplificaron la banda de 300 pb, característica
del grupo T. cruzi II (figura 1). El análisis de los
patrones electroforéticos con la técnica LSSP-PCR
indicó que los clones CAS15 cl1, CAS15 cl3,
CAS15 cl4, CAS15 cl5 y CAS15 cl6 presentaron
un patrón de bandas idéntico, mientras que los
clones CAS15 cl2 y CAS15 cl7 presentaron
perfiles únicos (figura 2). Debido al bajo número
de clones obtenidos para la cepa AF1 no se
realizó el análisis por LSSP-PCR. Para realizar la
caracte-rización biológica de los clones
pertenecientes a estos dos grupos de T. cruzi se
seleccionaron al azar los clones CAS15 cl3 y AF1
cl1.
Detección de parásitos en sangre por
microhematocrito
Durante la infección individual con el clon Cas15
cl3 se observó que los parásitos en sangre
comenzaron a aparecer al día 7 de la infección
(pi), con un 78% de muestras positivas, mientras
que para la infección con el clon AF1 cl1 los
parásitos en sangre empezaron a aparecer al día
14 pi, encontrándose sólo un 28% de muestras
Figura 1. Amplificación por PCR de la región intergénica del
gen mini-exón para los clones aislados de las cepas CAS15
y AF1. M: marcador de tamaño molecular, escalera de 100
pb. CN: control negativo. CAS15 y AF1: cepas parentales.
Carriles 1 a 7: clones 1 al 7 de la cepa CAS 15. Carriles 8 a
9: clones 1 y 2 de la cepa AF1.
Figura 2. LSSP-PCR de los siete clones aislados de la cepa
CAS15. M: marcador de tamaño molecular, escalera de 50
pb. Carriles 1 a 7: clones 1 al 7 de la cepa CAS 15.
* Diferencias en el perfil de bandas.
68
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
positivas. A los días 21, 28 y 60 pi, todas las
muestras analizadas para el clon CAS15 cl3
fueron positivas, mientras que para el clon AF1
cl1 se encontró al día 21 pi un 41% de muestras
positivas y a los días 28 y 60 pi un 100%. Para la
infección con la mezcla de los clones se encontró
que los parásitos aparecieron en sangre el mismo
día que el clon CAS15 cl3, presentando un 100%
de muestras positivas. Al día 90 pi se observó
ausencia de parásitos en todas las muestras
(cuadro 1).
Detección del parásito por PCR en sangre y
órganos de ratones
Las muestras de sangre positivas por PCR
amplificaron sólo la banda de 350 pb, indicando
la predominancia del grupo T. cruzi I (figura 3).
Con el marcador sat-ADN se observó que el
porcentaje de órganos parasitados disminuyó con
el transcurso de la infección, encontrándose a los
días 7, 14 y 21 pi un tropismo por casi todos los
órganos, tanto en infecciones individuales como
en la mixta, mientras que a partir del día 28 pi se
observó un histotropismo preferencial de cada
clon. En las infecciones individuales se encontró
la presencia del clon CAS15 cl3 en el 88,8% de
los corazones y en el 100% de los músculos
esqueléticos analizados, mientras que en recto,
hígado y bazo se observó el 66,6, 44,4 y 38,8%
de infección, respectivamente. Con el clon AF1
cl1 se observó un porcentaje de infección en bazo,
hígado, músculo esquelético y recto del 83,3,
61,1, 50 y 27,7%, respectivamente, mientras que
el corazón de estos ratones no presentó infección.
Con la infección mixta se encontró un porcentaje
de infección en corazón y músculo esquelético
del 100%, mientras que en recto, hígado y bazo
se encontró una infección del 94,4, 72,2 y 11,1%,
respectivamente (cuadro 2 y figuras 4a, 4b y 4c).
La caracterización molecular con el marcador mini-
exón de los parásitos presentes en órganos
durante la infección mixta reveló en todos los
órganos positivos un amplificado de 350 pb,
mostrando un 88,9% de corazones y un 66,7%
de músculos esqueléticos positivos, mientras que
el recto e hígado mostraron un porcentaje de
infección del 44,4 y 11,1%, respectivamente. Sin
embargo, las muestras de bazo positivas con
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74 Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II

Cuadro 1. Detección por microhematocrito del parásito en sangre de ratones infectados con los clones CAS15 cl3, AF1 cl1
y con la mezcla de ambos.

Ratones
Parásitos Día pi. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Clon 7 + + + + - + - + + - - + + + + + + +
CAS15 cl3 14 - - - - - - - - - - - - - - -
21 + + + + + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -
ClonAF1 cl1 7 - - - - - - - - - - - - - - - - - -
14 - - - - - - - + - + - + + - +
21 + - - - + - - + - + - +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -
Mezcla 7 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
14 - - - - - + - - + + - + + + -
21 + + + + + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
60 + + + + + +
90 - - -

+: Positivo; -: negativo. La región en blanco corresponde a ratones sacrificados el día indicado. pi: post-infección

diferencial por tejidos del hospedero durante la

Figura 3. Amplificación de la región intergénica del gen mini-
exón en el día 7 después de la infección en sangre de ratones
inoculados con la mezcla de los clones. M: marcador de
tamaño molecular, escalera de 100 pb. CN: control negativo.
CAS15: cepa parental. Carriles 1 a 8: sangre de ratones.
sat-ADN no amplificaron con el marcador mini-
exón, imposibilitando determinar el grupo
filogenético presente en dicho órgano (figura 5).
Discusión
La enfermedad de Chagas se considera un
problema de salud pública en muchos países por
la gran cantidad de personas afectadas y la
variedad de manifestaciones clínicas con que se
presenta. Muchos estudios han llevado a pensar
que dicha variación está ligada directamente al
genotipo de los parásitos circulantes, ya que
diferencias genéticas en las poblaciones del
parásito hacen que estos presenten un tropismo
fase crónica de la enfermedad (1).
Muchas de las cepas naturales de T. cruzi son
multiclonales y se encuentran compuestas de
poblaciones del parásito tanto del grupo T. cruzi I
como del grupo T. cruzi II. Sin embargo, este número
de clones puede cambiar drásticamente a medida
que trascurre el tiempo de infección, ya que en la
fase crónica de la enfermedad ciertos clones del
parásito son eliminados probablemente como
resultado de factores inmunológicos del hospedero
o debido a la capacidad de multiplicación o
requerimientos nutricionales de cada clon (30). En
el presente trabajo, mediante una infección mixta
de clones pertenecientes a los dos grupos de T.
cruzi, se simularon las condiciones de una infección
natural en el modelo murino, permitiendo entender
varios aspectos de la enfermedad, entre ellos, cuál
es el genotipo causante de un tropismo específico
y cuál de estos predomina en el hospedero
después de un largo periodo de infección.
La clonación de las cepas de T. cruzi ha permitido
establecer la homogeneidad o heterogeneidad
genética y el comportamiento biológico y

69
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O. Biomédica 2007;27(supl.1):64-74

Figura 4. Amplificación de la secuencia satélite del ADN nuclear de T. cruzi en órganos de ratones inoculados con los
clones CAS15 cl3 (a), AF1 cl1 (b), con la mezcla de ambos, y de ratón negativo no infectado (c). M: marcador de tamaño
molecular, escalera de 100 pb. CN: control negativo. CAS 15 y AF1: cepas parentales. Ratones 1 y 10: sacrificados a los
días 7 y 60 después de la infección, respectivamente. c: corazón. h: hígado. b: bazo. r: recto. m: músculo esquelético.

Cuadro 2. Detección del parásito por PCR en órganos de ratones infectados con los clones CAS15 cl3, AF1 cl1 (marcador
Sat-ADN) y con la mezcla de ambos.

Parásitos Día post-infección Corazón Hígado Bazo Recto Músculo esquelético

Clon CAS15.3 7 2 3 3 3 3
14 3 3 2 3 3
21 3 2 1 1 3
28 2 0 1 2 3
60 3 0 0 2 3
90 3 0 0 1 3
Clon AF1.1 7 0 3 3 3 0
14 0 0 1 2 1
21 0 2 2 0 2
28 0 2 3 0 2
60 0 2 3 0 2
90 0 2 3 0 2

Mezcla 7 3/3 3/1 1/0 2/2 3/1

14 3/2 3/1 1/0 3/2 3/1
21 3/2 3/0 0/0 3/1 3/1
28 3/3 2/0 0/0 3/1 3/3
60 3/3 1/0 0/0 3/1 3/3
90 3/3 1/0 0/0 3/1 3/3

Órganos de ratones inoculados con la mezcla que amplificaron por mini-exón la banda de 350 pb correspondiente al grupo
T. cruzi I. Número de ratones positivos con Sat-ADN/número de ratones positivos con mini-exón.

70
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
Figura 5. Amplificación de la región intergénica del gen mini-
exón en órganos de ratones inoculados con la mezcla de
los clones. M: marcador de tamaño molecular, escalera de
100 pb. CN: control negativo. AF1: cepa parental. Ratón
negativo: control no infectado con T. cruzi; ratones 7 y 10:
sacrificados a los días 28 y 60 después de la infección,
respectivamente. c: corazón. h: hígado. b: bazo. r: recto. m:
músculo esquelético.
bioquímico de las poblaciones del parásito que
las componen. Campos y Andrade (31) encontraron
que la cepa 21SF, aislada de un paciente en la
fase aguda de la enfermedad, presentó
homogeneidad en cuanto a parámetros biológicos
y bioquímicos entre los clones y subclones que
la componen, sugiriendo la presencia de un clon
principal representante del comportamiento
biológico de dicha cepa. Los resultados encon-
trados en este estudio, específicamente durante
la clonación de la cepa CAS15, nos permiten
sugerir que también se observa la predominancia
de un clon, ya que los perfiles de bandas obtenidos
con la LSSP-PCR son iguales para cinco de los
siete clones aislados. Por otra parte, se podría
pensar que muchos de los resultados encontrados
en este trabajo son consecuencia del clon
seleccionado, pues al ser uno de los
predominantes en la cepa CAS15 puede sobresalir
frente al clon de AF1 debido a una mayor
capacidad de replicación, favoreciendo su
presencia en el transcurso de la infección como
se observó en el presente estudio.
En cuanto a la cinética de aparición de los clones
en sangre de los ratones en los diferentes cortes
de tiempo pi, se encontró que los dos clones
presentaron diferentes tiempos de aparición. El
clon CAS15 cl3 apareció en sangre en el día 7 pi
y el clon AF1 cl1, en el día 14. Además, la cantidad
de muestras de sangre de ratones que fueron
positivas en todos los tiempos de infección fue
mayor para el clon CAS15 cl3 que para el AF1
cl1. Estos resultados evidencian la capacidad de
Caracterización de clones de Trypanosoma cruzi I y II
infección de cada clon, encontrándose un genotipo
más infectivo en el clon CAS15 cl3.
Reportes previos han encontrado en suero de
humanos provenientes de Argentina, Chile y Brasil
anticuerpos contra los dos grupos de T. cruzi (32),
indicando infección con ambos grupos. Los
resultados obtenidos en este estudio con el
marcador mini-exón nos permiten inferir que
probablemente haya en la sangre de los ratones
inoculados con la mezcla de los clones un
predominio del clon CAS15 cl3 con respecto al
clon AF1 cl1, ya que las pocas muestras que se
encontraron positivas amplificaron la banda de 350
pb. Sin embargo, podría pensarse también que
en sangre había muy pocos parásitos pertenecien-
tes a ambos clones, principalmente al clon AF1
cl1, y que éstos fueron escasamente detectados
por la PCR con dicho marcador. Por otra parte,
numerosos estudios han mostrado que durante la
fase crónica de la enfermedad los parásitos ya
han invadido y colonizado órganos y, por tanto,
no están circulando en sangre, lo que se verificó
en este estudio, pues se encontró una ausencia
total de parásitos en sangre a los tres meses
después de la infección, tanto en las infecciones
individuales como en la mixta.
Trabajos previos en ratones machos BALB/c han
demostrado que luego de tres meses de infección,
periodo correspondiente a la fase crónica de la
enfermedad en dicho modelo experimental,
diferentes clones de T. cruzi presentan distribu-
ciones titulares diferenciales (9). Así mismo, otros
autores han mostrado un tropismo preferencial de
la cepa CAS15 por corazón (18) y de la cepa AF1
por bazo e hígado (33). Nuestro estudio apoya
tales resultados, al ser el corazón uno de los
órganos que más se encontró parasitado con el
clon CAS15 cl3, y el hígado y el bazo con el clon
AF1 cl1 en la fase crónica de la infección. Esta
idea nos permite sugerir que la variabilidad genética
de los parásitos es uno de los factores
determinantes de la distribución diferencial en los
tejidos y, probablemente, de las manifestaciones
clínicas de la enfermedad de Chagas.
Por otro lado, se ha encontrado que tanto en Chile
como en otros países del Cono Sur, donde se
sabe que prevalece el grupo T. cruzi II, predominan
71
Botero L.A., Mejía A.M., Triana O.
las formas digestivas de la enfermedad (7),
mientras que en Colombia la manifestación clínica
más frecuente es la cardiaca. Nuestros resultados
aportan evidencia que confirma que la forma
cardiaca de la enfermedad en Colombia puede ser
causada por T. cruzi I, puesto que el clon AF1
cl1, representante de T. cruzi II en Colombia, no
invadió corazón, mientras que el clon del grupo I
se encontró en la mayoría de los corazones. Sin
embargo, es necesario que en futuros estudios
se evalúe el tropismo tisular de un mayor número
de clones pertenecientes a T. cruzi II para verificar
lo anterior.
Nuestros resultados concuerdan con lo planteado
por N. Añez y col (16), quienes encontraron que
la infección con T. cruzi I presenta parasitemias
mucho más altas que las causadas por T. cruzi II
y que, además, T. cruzi I genera en pacientes
durante la fase crónica un alto grado de daño en
miocardio y músculo esquelético (34). Por el
contrario, otros autores han encontrado que las
infecciones con T. cruzi II son bastante graves y
que comprometen algunos tejidos como recto y
esófago (1,16,31). Los resultados encontrados en
este estudio muestran que la parasitemia y el
tropismo por órganos de parásitos pertenecientes
al grupo T. cruzi II es menor que la de parásitos
del grupo T. cruzi I, con tropismo preferencial por
bazo e hígado. Consideramos que estas
diferencias pueden deberse al alto polimorfismo
encontrado en parásitos pertenecientes al grupo
T. cruzi II, ya que se ha comprobado que los
diferentes subgrupos en los que se encuentra
dividido difieren en su infectividad, virulencia y
patogenicidad. Como ejemplo está el clon CL-
Brener, perteneciente al grupo T. cruzi IIe, que
después de ser inoculado en ratas presentó una
alta tasa de mortalidad al sobrevivir a la fase
aguda de la infección (31).
Es importante destacar que diversos estudios han
reportado el músculo esquelético como uno de
los órganos que más se encuentra parasitado con
T. cruzi tanto en la fase aguda como en la fase
crónica de la enfermedad (35). Lo encontrado en
este estudio corrobora lo anterior, pues en las
infecciones individuales ambos clones se
encuentran parasitando dicho músculo. Además,
los resultados obtenidos en este órgano y en el
72
Biomédica 2007;27(supl.1):64-74
hígado fueron muy interesantes, ya que a pesar
de que el parasitismo en dichos órganos se
observó en las dos infecciones individuales,
durante la infección mixta sólo se encontró la
presencia del grupo T. cruzi I (clon CAS15 cl3).
Esto podría explicarse por diferencias entre los
dos clones en la cinética de la fase aguda, ya
que las respuestas inmunes estimuladas por una
población de T. cruzi podrían favorecer la invasión
y colonización tisular de la otra (16). Además,
como se ha informado anteriormente, algunos
clones pueden ser eliminados por su inhabilidad
para competir y propagarse en el hospedero, o
por la acción de sus mecanismos de defensa (36).
Se podría pensar también en la posibilidad de que
ambos grupos lleguen a infectar los órganos, pero
al igual que ocurre con las cepas, T. cruzi II no se
puede detectar por estar presente en menor
proporción. A pesar de que el mini-exón es un
buen marcador para diferenciar los dos grupos de
T. cruzi, los resultados obtenidos mostraron que
no fue muy sensible en la detección del parásito,
posiblemente por su bajo número de copias
comparado con el marcador sat-ADN.
Finalmente, nuestro trabajo aporta evidencia que
sugiere que en Colombia el grupo T. cruzi I es
más virulento que T. cruzi II y probablemente por
ello es que predomina en las infecciones. Además,
se comprueba que el polimorfismo genético de
las poblaciones de T. cruzi puede ejercer influencia
sobre el tropismo tisular y consecuentemente
sobre las manifestaciones clínicas de la
enfermedad. Estos aspectos son de gran
importancia para una mejor comprensión de la
epidemiología de la enfermedad de Chagas.
Agradecimientos
Luz Adriana Botero recibió apoyo del CODI–
Universidad de Antioquia a través del programa
de jóvenes investigadores.
Conflicto de intereses
Los autores declaramos que no existe ningún
conflicto de intereses.
Financiación
Este proyecto fue financiado por el programa de
sostenibilidad 2005–2006 del CODI, Universidad
de Antioquia.
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Biomédica 2007;27(supl.1):75-82 Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata

ARTÍCULO ORIGINAL

Efecto tóxico de β-cipermetrina, deltametrina y fenitrotión

en cepas de Triatoma dimidiata (Latreille, 1811) y Triatoma
maculata (Erichson, 1848) (Hemiptera, Reduviidae)
Marlene Reyes 1, Víctor Manuel Angulo 2, Claudia Magaly Sandoval 2

1
Escuela de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Industrial de Santander, Piedecuesta, Santander,
Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales de la Universidad Industrial de Santander,
CINTROP-UIS, Piedecuesta, Santander, Colombia.

Introducción. La evaluación de la susceptibilidad a insecticidas de las diferentes especies de

triatominos, involucrados en la transmisión de la enfermedad de Chagas de cada región, es
indispensable para el éxito de las campañas de control.
Objetivo. Determinar la línea base de susceptibilidad para los principios activos deltametrina,
β-cipermetrina y fenitrotión en ninfas de primer y quinto estadio de Triatoma dimidiata y en
ninfas de primer estadio de Triatoma maculata.
Materiales y métodos. Se utilizó el protocolo de evaluación de la actividad insecticida en
triatominos (técnica de aplicación tópica) para las especies en estudio.
Resultados. Los valores de DL50 en ninfas de primer estadio de T. maculata expresados en
nanogramos/insecto (ng/i) fueron de: 0,07, 0,05 y 4,12. Las DL99 fueron de: 1,08, 0,37 y 17,89
para deltametrina, β- cipermetrina y fenitrotión respectivamente. En T. dimidiata los valores de
DL 50 fueron de: 0,44, 0,46 y 16,45. Las DL99 obtenidas fueron de: 2,22, 1,97 y 36,07 ng/i para
deltametrina, β- cipermetrina y fenitrotión respectivamente. En ninfas de quinto estadio de T.
dimidiata las DL50 fueron de: 510,72, 1623,59 y 838,91. Las DL99 fueron de: 9607,50, 11717,91
y 1525 para deltametrina, β- cipermetrina y fenitrotión respectivamente.
Conclusión. En ninfas de primer estadio de T. dimidiata y T. maculata los insecticidas piretroides
fueron mas efectivos; en ninfas de quinto estadio de T. dimidiata la efectividad de los piretroides
y del organofosforado fue diferente con las DL50; las ninfas de este estadio requirieron dosis
altas comparadas con las utilizadas para otros triatominos, lo cual sugiere una baja
susceptibilidad. La DL99 para el organofosforado fue significativamente menor, lo que podría
indicar una mayor efectividad en campo. Es importante realizar estudios de efectos sinergistas
para mostrar el posible rol de mecanismos bioquímicos que determine su tolerancia a los
piretroides, esto representa un nuevo reto para las campañas de control en los países andinos
y centroamericanos donde esta especie es endémica.
Palabras clave: Triatominae, Triatoma, enfermedad de Chagas, insecticidas organofosforados,
piretroides.
Toxic effect of β -cipermethrin, deltamethrin and fenitrothion in colonies of Triatoma
dimidiata (Latreille, 1811) and Triatoma maculata (Erichson, 1848) (Hemiptera, Reduviidae)
Introduction. The susceptibility to insecticides of triatomine species must be evaluated because
of their involvement in the transmission of the Chagas disease. In each region with Chagas
endemicity, evaluation of insecticide response is necessary to predict the success of the control
campaigns.
Objective. The baseline susceptibility was determined for the active principles deltamethrin,
β-cypermethrin and fenitrothion in nymphs of first and fifth instar of Triatoma dimidiata and
nymphs of first instar of Triatoma maculata.
Materials and methods. The insecticide activity in triatomines was evaluated by the technique
of topical application.

75
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82

Results. The values of the LD50 in nymphs of first instar for T. maculata, expressed in nanograms
per insect (ng/i), were 0.07, 0.05 and 4.12 for deltamethrin, β-cypermethrin and fenitrothion
respectively. The corresponding LD99 values were 1.08, 0.37 and 17.89 ng/i. In T. dimidiata,
the LD50 values were 0.44, 0.46 and 16.45 ng/i; the LD99 values were 2.22, 1.97 and 36.07
ng/i. In nymphs of fifth instar T. dimidiata, the LD50 values were 510.7, 1,623.6 and 838.9 ng/i;
the LD99 values were 9,607.5, 11,717.9 and 1,525.0 ng/i, respectively.
Conclusion. In first instar nymphs of T. dimidiata and T. maculata, the pyrethroid insecticides
were more effective; in fifth instar nymphs of T. dimidiata, the effectiveness of the pyrethroids
and the organophosphate differed in the LD50 comparison—the nymphs required much higher
doses compared with the other triatomines and suggested a low susceptibility. The LD99 for
the organophosphate (fenitrothion) was significantly lower and may indicate its greater
effectiveness in field. Studies of synergistic effects amonst insecticides are important to clarify
the role of biochemical mechanisms that determine tolerance to the pyrethroids. Insecticide
tolerance represents a new challenge for control campaigns in the Andean and Central American
countries where Chagas disease is endemic.
Key words: Triatominae, Triatoma, Chagas disease, insecticides, organophosphate, pyrethrins,

La enfermedad de Chagas afecta a una población
de 16 a 18 millones de personas, y más de 100
millones se encuentran en riesgo de infección en
21 países (1). En Latinoamérica las especies
domiciliadas más importantes implicadas en la
transmisión de Trypanosoma cruzi son Triatoma
infestans, en los países del Cono sur, Rhodnius
prolixus, en Centro América y el Norte de Sur
América, y Triatoma dimidiata, que se extiende a
lo largo de la costa Pacífica desde México hasta
el Ecuador y el norte de Perú (2-4). En Colombia,
durante los últimos 20 años, T. dimidiata ha
ocupado hábitats domiciliarios, peridomiciliarios,
silvestres y viviendas de buena construcción en
cabeceras municipales. Este fenómeno ha
ocurrido también en algunas ciudades de
Centroamérica (4-8).
Triatoma maculata se distribuye en la zona
nororiental de Sur América, colonizando
ambientes domésticos, peridomésticos, silvestres
y urbanos del país con altos niveles de infestación
(2,9) Mojíca MT, Cuervo LA, Ariza K, Chacón E,
Chacón R, Dib JC, et al. Distribución de Triatoma
maculata e infestación domiciliaria en Santa
Marta, Colombia. Biomédica 2003;23:96).
Correspondencia:
Marlene Reyes Jerez, Laboratorio de Entomología,
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales de
la Universidad Industrial de Santander, Km 2 vía El Refugio,
Piedecuesta, Santander, Colombia.
Tel: 6563971, fax: 6540177.
marejez1@hotmail.com
Recibido: 22/08/05; aceptado: 02/06/06
Las experiencias de control vectorial en América
Central, los países Andinos y del Cono Sur han
demostrado que una de las pocas alternativas
prácticas para controlar la enfermedad de Chagas
es a través del control de los triatominos
domiciliarios (10,11). En 1996 se creó en Colombia
el Programa Nacional de Control Vectorial de la
enfermedad de Chagas (12); en su marco se han
iniciado actividades de aspersión de insecticidas
piretroides y organofosforados y políticas de
mejoramiento de vivienda en Boyacá, Casanare,
Santander, Norte de Santander y Arauca (12,13).
Dichos departamentos forman parte de las zonas
catalogadas como de alto y mediano riesgo de
infección, donde el uso de la deltametrina se ha
hecho extensivo como medida de control (14).
Algunos países de Centroamérica han tenido éxito
utilizando piretroides en la eliminación de colonias
de T. dimidiata intradomiciliarias (15-7). Sin
embargo, las zonas infestadas con triatominos
de algunos países de Suramérica han mostrado
diferencias en la susceptibilidad y la resistencia
a insecticidas en poblaciones de T. infestans de
Brasil y Argentina, así como en una población de
R. prolixus en Carabobo, Venezuela (18-21). En
Colombia, estudios recientes muestran altos
niveles de infestación postratamiento; una de las
causas sugeridas por los investigadores es la
presencia de poblaciones de esta especie con
menor susceptibilidad al piretroide usado (5).
Teniendo en cuenta que en la actual situación
colombiana una de las estrategias que hacen parte

76
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
del control integrado de los triatominos es el uso
de sustancias químicas insecticidas, se hace
necesario evaluar el efecto triatomicida en el
laboratorio con el fin de monitorizar la
susceptibilidad y la resistencia de las poblaciones
blanco a los insecticidas en uso.
En el país son pocos los estudios sobre este tema
que se reportan en la literatura, y todos han estado
dirigidos a evaluar la susceptibilidad y resistencia
en R. prolixus (22,23).
Si el conocimiento de T. dimidiata en este aspecto
es escaso, también lo es en cuanto a la determi-
nación de factores que influyen en la respuesta a
los insecticidas como por ejemplo el estado
nutricional; las observaciones sobre la actividad
insecticida con β-cipermetrina aplicada por vía
tópica en ninfas de V estadio muestran diferencias
que indican una muy baja absorción insecticida
asociada con mecanismos de detoxificación
(datos no publicados, CINTROP-UIS).
En este estudio se propuso establecer la línea de
base de susceptibilidad en T. dimidiata y T.
maculata con dos piretroides y un organofosforado
como inicio de los estudios de monitorización de
la susceptibilidad y la resistencia a insecticidas
en poblaciones de campo, ante todo para orientar
las políticas de control en el país y, además, para
contribuir a la extensión de los protocolos de
evaluación de la actividad insecticida de los
triatominos en Latinoamérica.
Materiales y métodos
Material biológico
Se utilizaron cepas de T. dimidiata y T. maculata
provenientes de San Joaquín y San José de
Miranda, municipios del departamento de
Santander, áreas éstas sin tratamiento
sistemático de control estatal en el momento de
la recolección. La cría de las cepas se inició en
1998, manteniéndolas sin aporte de material
externo en condiciones ambientales constantes
de laboratorio a 25 ± 2°C, 70 a 80% de HR y
fotoperíodo de 12:12, y alimentándolas cada 15
días con sangre de gallina.
En los ensayos biológicos con insecticidas se
utilizaron ninfas de primer estadio de T. dimidiata
Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
y T. maculata; las ninfas I tenían entre 24 y 36
horas (24), con un peso entre 1,4±2,1mg y
0,6±1,1mg, respectivamente, y las ninfas de
quinto estadio de T. dimidiata tenían 10 a 12 días
de edad, no recibieron alimento y su peso era de
97± 30 mg (datos no publicados, CINTROP-UIS).
Insecticidas
Los insecticidas (grado técnico) utilizados en este
estudio fueron deltametrina al 99,1% (Agrevo S.A,
Argentina), β-cipermetrina al 99,4% (Chemotecnica
Sintyal, Argentina), y fenitrotión al 98,5% (Lab
Dr.Ehrenstorfer-Schafers,Germany). Las
diluciones seriales de insecticidas se prepararon
en acetona (JT Baker, México).
Ensayos biológicos
Evaluación del efecto insecticida. Las ninfas de
primer estadio de T. dimidiata y T. maculata y las
de quinto estadio de T. dimidiata se trataron con
aplicación tópica de principios activos (fenitrotión,
β-cipermetrina y deltametrina) diluidos y aplicados
con microjeringas Hamilton de 5 y 25 µl provistas
de descargador repetitivo. En la región dorsal del
abdomen de cada ninfa en estadios I y V se
aplicaron 0,1 y 0,5 µl de la solución, respectiva
mente. En los ensayos biológicos se seleccionaron
cuatro niveles de dosis que registraron entre 10 y
90% de mortalidad; se utilizaron 10 ninfas por
dosis con mínimo tres réplicas en diferentes días;
como grupo control se utilizaron 10 insectos en
cada réplica con igual volumen de acetona.
Después del tratamiento, los insectos se colocaron
en frascos plásticos y se mantuvieron en una
incubadora bajo condiciones ambientales
constantes a 25 ± 2°C, 70 a 80% de HR. La lectura
de mortalidad para el insecticida organofosforado
fenitrotión se realizó a las 48 horas y para los
piretroides β-cipermetrina y deltametrina a las 72
horas de aplicación del tratamiento.
Criterio de muerte. Se consideró muerto el insecto
que colocado sobre un papel de filtro no tuviera
actividad locomotora propia, ya fuera en forma
espontánea o al ser estimulado con un pincel o
una pinza según lo establecido por el protocolo
de evaluación de la actividad insecticida en
triatominos de la Organización Mundial de la
Salud (24).
77
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82

Análisis de datos respuesta de la cepa fue heterogénea para deltame-

Los valores obtenidos de la dosis-respuesta en los
ensayos biológicos fueron sometidos al análisis
EPA PROBIT versión 1.5 de 1999 para determinar
los valores estadísticos DL50 y DL 99. Se aplicó
una prueba de ji2 según el caso para comparar los
niveles de significación. El potencial insecticida
de la β-cipermetrina y el fenitrotión se calculó
tomando como referencia la deltametrina: DL50
de deltametrina/DL50 de β-cipermetrina o fenitrotión
x 100. Se utilizó la deltametrina como referencia
por su comprobado efecto triatomicida (25)
Resultados
Mediante un análisis estadístico de los valores
de DL50 por aplicación tópica de ambos piretroides
en ninfas de primer estadio de T. dimidiata, en el
cuadro 1 se indica que los parámetros DL50 de la
deltametrina y la β-cipermetrina son similares (p
= 0,82) y no presentan diferencias estadísticas.
Se evidenció una mayor toxicidad de la
deltametrina (p < 0,05) y la β-cipermetrina (p <
0,05) con diferencias significativas respecto al
fenitrotión. En este estadio, la DL99 también
mostró una mayor toxicidad de los piretroides
deltametrina y β-cipermetrina (p < 0,05), con
diferencias significativas respecto al
organofosforado fenitrotión.
Los valores de las pendientes de los insecticidas
deltametrina, β-cipermetrina y fenitrotión en ninfas
de primer estadio de T. dimidiata indican que la
trina (3,3) y β-cipermetrina (3,6), a diferencia de
la respuesta homogénea (6,8) del fenitrotión (p <
0,05) que sí presentó diferencias estadísticas.
Los valores obtenidos de DL50 en ninfas de primer
estadio de T. maculata (cuadro 1) muestran un
efecto tóxico similar de la β-cipermetrina y la
deltametrina (p = 0,34), sin presentar diferencias
significativas. Los valores de DL50 y DL99
obtenidos en ambos piretroides indican (p < 0,05)
que son significativamente menores (mayor
toxicidad) que los determinados en fenitrotión.
Los valores de las pendientes en ninfas de primer
estadio de T. maculata para deltametrina (1,9) y
β-cipermetrina (2,7) sugieren que la respuesta es
heterogénea para los insecticidas piretroides
comparados con el fenitrotión (3,6) (p < 0,05),
presentando diferencias significativas.
Los valores DL 50 y DL 99 por aplicación tópica
en ninfas de quinto estadio de T. dimidiata de los
tres insecticidas se muestran en el cuadro 1. Es
sorprendente la baja toxicidad de los insecticidas
estudiados en ninfas V de esta especie. En este
contexto de marcada tolerancia, y tomando como
parámetro la DL50, se observa que la deltametrina
y el fenitrotión son más activos que la β-cipermetrina
(p < 0,05) con diferencias significativas. Con el
parámetro estadístico DL99 encontramos mayor
efectividad del fenitrotión frente a los piretroides
(p < 0,05), siendo la diferencia significativa.

Cuadro 1. Nivel de susceptibilidad en ninfas de estadios I y V sin alimentar de Triatoma dimidiata y Triatoma maculata, cepa
referencial susceptible a la aplicación tópica de los principios activos deltametrina, β-cipermetrina y fenitrotión.

Especie Estadio Insecticida DL50 ng/i IC 95% DL99ng/i IC95% b±DE n

Triatoma dimidiata I deltametrina 0,44 0,38-0,51 2,22 1,69-3,75 3,3±0,4 240

I β-cipermetrina 0,46 0,39-0,52 1,97 1,42-3,44 3,6±0,8 250
I fenitrotión 16,45 15,22-17,64 36,07 31,24-44,86 6,8±0,5 200
V deltametrina 510,72 279,49-706,23 9607,50 3819,48-170498 1,8±0,4 180
V β-cipermetrina 1623,59 1322,36-1894,34 11717,91 6767,58-42048,42 2,7±0,5 200
V fenitrotión 838,91 791,36-887,51 1525 1277,69-2302,04 8,9±1,8 220
Triatoma maculata I deltametrina 0,07 0,05-0,09 1,08 0,46-7,67 1,9±0,5 102
I β-cipermetrina 0,05 0,05-0,07 0,37 0,21-1,45 2,7±0,4 151
I fenitrotión 4,12 3,56-4,78 17,89 11,89-41,64 3,6±0,7 150

DL50 = dosis que ocasiona el 50% de mortalidad de los insectos expuestos, expresada en nanogramos por insecto;
DL99 = dosis que ocasiona el 99% de la mortalidad de los insectos expuestos, expresada en nanogramos por insecto.
b = pendiente de la recta; DE = desviación estándar; n = número total de insectos.

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Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
En ninfas de quinto estadio de T. dimidiata, los
valores de las pendientes encontrados (cuadro 1)
muestran que la respuesta de la población fue
heterogénea para la deltametrina (1,8) y para la β-
cipermetrina (2,7). En cambio se observó una
respuesta homogénea (8,9) para el fenitrotión con
diferencias significativas (p < 0,05) respecto a los
piretroides.
La efectividad insecticida, medida por el potencial
insecticida, se muestra en el cuadro 2. En ninfas
de primer estadio de T. dimidiata, la toxicidad
intrínseca de la deltametrina fue similar a la de la
β-cipermetrina, pues sólo fue 1,02 veces más
efectiva, pero respecto al fenitrotión mostró una
efectividad 37,1 veces mayor. En ninfas de quinto
estadio, y en el marco de la acentuada tolerancia
observada a los insecticidas estudiados, la
toxicidad intrínseca de la deltametrina sólo fue
3,2 veces mayor que la de la β-cipermetrina y
1,6 veces mayor que la del fenitrotión. En ninfas
I de T. maculata, la β-cipermetrina presentó 1,2
veces más potencial insecticida que la
deltametrina; la deltametrina fue 63 veces más
efectiva que el fenitrotión.
Discusión
El análisis de los valores de DL50 obtenidos para
cada insecticida en ninfas de primer estadio de
T. dimidiata y T. maculata muestra claramente
Cuadro 2. Potencial insecticida por aplicación tópica de la β-cipermetrina y fenitrotión versus deltametrina en ninfas I de
Triatoma dimidiata y Triatoma maculata y ninfa V de Triatoma dimidiata.
Especie Insecticida
Triatoma dimidiata deltametrina
β-cipermetrina
fenitrotión
deltametrina
fenitrotión
β-cipermetrina
Triatoma maculata deltametrina
β-cipermetrina
fenitrotión
DL50 o CL 50 deltametrina
Potencial insecticida=
DL50 o CL50 β-cipermetrina o fenitrotión
DL: dosis letal
CL: concentración letal
Efecto tóxico de insecticidas en T. dimidiata y T. maculata
las diferencias de efectividad entre los insecticidas
piretroides y el organofosforado en estudio, lo que
se asemeja a lo reportado en ninfas I de T.
infestans susceptibles (deltametrina 0,13 ng/i; β-
cipermetrina 0,24 ng/i, y fenitrotión 21,6 ng/i) (20),
y concuerda con la reconocida acción triatomicida
de los piretroides (25). Todos los insecticidas
mostraron mayor toxicidad en ninfas de primer
estadio que en ninfas de quinto estadio; estas
diferencias de toxicidad pueden ser atribuidas a
diferencias en los procesos de toxicocinética en
cada uno de los estadios (26). Considerando las
dos especies y todos los insecticidas estudiados
en ninfas de primer estadio, T. maculata es más
susceptible que T. dimidiata en cuanto a los
parámetros de toxicidad expresados en peso de
ingrediente activo por insecticida con relación al
peso del insecto vivo; esta condición fue
observada por Oliveira Filho para R. prolixus al
compararlo con T. infestans y Panstrongylus
megistus (21).
Los resultados obtenidos en ninfas de quinto
estadio de T. dimidiata mostraron su sorprendente
tolerancia a los insecticidas estudiados,
particularmente a la deltametrina, aunque si bien
éste fue el insecticida más efectivo, las dosis
necesarias para causar volteo al 50% de los
insectos tratados fueron altas en comparación con
las requeridas en otras especies (27). En este
Estadio Potencial insecticida
I 100
I 98,31
I 2,69
V 100
V 60,87
V 31,45
I 100
I 122
I 1,57
X100
79
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M.
estudio se reportó una DL50 de 510 ng/i para esta
especie; con T. infestans se presentó una DL50
de 215 ng/i (25). Es posible plantearse la pregunta
sobre qué mecanismos enzimáticos con rol clave
en la detoxificación de insecticidas, particular-
mente de los piretroides, podrían tener una
actividad marcada en ninfas V de T. dimidiata
como para conferirles tolerancia frente a la acción
triatomicida.
Al comparar los valores estadísticos DL50 1623,59
ng/i en ninfas V de T. dimidiata sin alimentar con
los DL50 432,57 ng/i en ninfas V alimentadas se
observa una menor respuesta tóxica a la β-
cipermetrina en las ninfas de V estadio sin
alimentar que en las alimentadas, lo cual evidencia
mayor susceptibilidad de las ninfas V alimentadas
y sugiere una baja absorción de este insecticida
en ninfas sin alimentar. Este hallazgo es similar
a lo reportado en ninfas de segundo estadio de T.
infestans, en las cuales se encontró un importante
incremento en la penetración y mortalidad con DDT
en insectos tratados después de la alimentación
(28); estas diferencias de penetración en ninfas
sin alimentar sugieren baja absorción del
insecticida, lo que asociado a los caminos
metabólicos de desintoxicación ya establecidos,
podrían explicar la muy baja actividad del
insecticida.
Una población de insectos susceptible a
insecticidas presenta valores elevados de
pendiente (población homogénea), que van
disminuyendo cuando la respuesta se hace más
heterogénea (29). Esta homogeneidad de
respuesta de una población susceptible concuerda
con los resultados obtenidos para el fenitrotión
en ninfas de primer y quinto estadio de T.
dimidiata y ninfas de primer estadio de T.
maculata. Sin embargo, no concuerda con la
respuesta heterogénea detectada para los
insecticidas β-cipermetrina y deltametrina en las
dos especies. Probablemente esta heterogeneidad
de respuesta en las especies estudiadas podría
atribuirse al particular modo de acción de los
piretroides en triatominos, en los que el efecto
letal no tiene una muy clara manifestación y puede
superponerse con un volteo prolongado, tal como
se ha encontrado en R. prolixus (28). En T.
80
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
dimidiata y T. maculata la intoxicación producida
por piretroides se manifiesta por incoordinación,
parálisis del tercer par de patas y convulsiones.
Al analizar los resultados obtenidos a través del
cálculo del potencial insecticida en ninfas de
primer estadio de T. dimidiata y T. maculata, se
observa nuevamente una mayor efectividad
insecticida de los piretroides frente al organo-
fosforado. En las ninfas de quinto estadio de T.
dimidiata, la toxicidad intrínseca de la deltametrina
fue mayor comparada con la β-cipermetrina. Con
las DL50 se observaron diferencias entre los
piretroides y el fenitrotión; sin embargo, con la
DL99 se encontró una mayor efectividad del
organofosforado. Si bien este resultado hace
pensar en una mayor efectividad del fosforado en
condiciones de campo, es necesario plantear que
la tolerancia de las ninfas V de T. dimidiata a
piretroides y fenitrotión representa un problema
para las campañas de control de vectores de la
enfermedad de Chagas en los países andinos y
centroamericanos.
Recientemente, en Colombia se han reportado
altas prevalencias de infestación intradomiciliarias
y peridomiciliarias desde los primeros meses
postratamiento por parte de adultos y ninfas de
cuarto y quinto estadio de T. dimidiata, con un
aumento creciente del número de triatominos
capturados por mes de vigilancia en zonas
rociadas con deltametrina (5) (Turriago BC,
Pinto N, Guhl F. Evaluación de deltametrina K-
Othrine SC50 y K-Othrine WP 50 como alternativa
de control de Triatoma dimidiata. Biomédica
2005;25:195).
Nuevos estudios con sinergistas podrían
demostrar algún mecanismo que justifique esta
tolerancia, lo cual ayudaría a mejorar las
formulaciones de los insecticidas que se destinan
al control de T. dimidiata.
Este estudio contribuye a la extensión del
protocolo, evaluación de la actividad insecticida
de los triatominos en Latinoamérica y permite el
desarrollo de estudios en la siguiente etapa, es
decir, comparar la línea de base de susceptibilidad
con poblaciones de campo que hayan sido
sometidas a control con los insecticidas probados.
Biomédica 2007;27(supl.1):75-82
Todo esto en el marco de un seguimiento
entomológico de las acciones de control químico
en el país.
Agradecimientos
A Eduardo Zerba y al CIPEIN por su asesoría y
revisión de este manuscrito.
Conflicto de interés
No hay conflicto de intereses.
Financiación
Este estudio fue financiado por UNDP/ World
Bank/ WHO Special Programme for Research &
Training in Tropical Diseases (TDR), proyecto ID:
990163.
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81
Reyes M., Angulo V.M., Sandoval C.M. Biomédica 2007;27(supl.1):75-82

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82
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas

ARTÍCULO ORIGINAL

Comparación de una prueba de PCR basada en los genes

codificantes para la histona H2A/SIRE con pruebas serológicas
convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de
Chagas crónica en pacientes colombianos
Juliana Gil 1, Paula Pavía 1, Marleny Montilla 2, Astrid C. Florez 2, Claudia Quintero 3,
Marcela Mercado 1, Miguel Vacca 4, Santiago Nicholls 2, Concepción Puerta 1
1
Laboratorio de Parasitología Molecular, Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia
Universidad Javeriana, Bogotá D.C., Colombia.
2
Laboratorio de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia.
3
Unidad de Epidemiología, Departamento de Microbiología, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá D.C.,
Colombia.
4
Unidad de Cardiología, Hospital Universitario San Ignacio, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá D.C.,
Colombia.
Introducción. El diagnóstico de la enfermedad de Chagas en sus fases latente y crónica se
dificulta por la baja parasitemia, razón por la cual se recurre a métodos serológicos y
moleculares.
Objetivo. Comparar la prueba de reacción en cadena de la polimerasa basada en la
amplificación del elemento SIRE insertado en el gen que codifica para la histona H2A con las
pruebas serológicas convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en
pacientes colombianos.
Materiales y métodos. Se realizó un estudio de concordancia comparando la PCR TcH2AF/
R con las pruebas de inmunoensayo enzimático e inmunofluorescencia indirecta,
determinándose además la sensibilidad y especificidad de la prueba. Se clasificaron y
examinaron 156 individuos según los hallazgos clínicos y epidemiológicos y los resultados de
las pruebas serológicas. Adicionalmente, 97 de las 156 muestras fueron comparadas con la
PCR S35/S36.
Resultados. De 156 muestras, 89 (57%) fueron positivas por IFI y ELISA, y 84 (53,8%)
presentaron el perfil de amplificación correspondiente a la banda esperada de 234 pb,
obteniéndose una sensibilidad de 88% (I.C. 95%: 75% - 95%) y especificidad de 92,5% (I.C.
95%: 87,7% - 97,2%). El índice kappa, indicador de concordancia entre las pruebas serológicas
y TcH2AF/R fue de 0,8 (I.C. 95%: 73% - 86%), en tanto entre las PCR TcH2AF/R y S35/S36 fue
de 0,9 (I.C. 95%: 84% - 96%), interpretados como una concordancia buena y casi perfecta,
respectivamente.
Conclusiones. La PCR TcH2AF/R es una prueba diagnóstica promisoria complementaria a
las pruebas serológicas, para la detección de Trypanosoma cruzi.
Palabras clave: reacción en cadena de la polimerasa, histonas, miocardiopatía chagásica,
Trypanosoma cruzi.
Comparison of a PCR test based on the histone H2A/SIRE genes with classical serological
tests for the diagnosis of chronic Chagas disease in Colombian patients
Introduction. Diagnosis of Chagas disease in its latent and chronic phase is difficult because
of the low parasitemia levels. Therefore, serological and molecular techniques are necessary
to achieve an appropriate diagnosis.
Objective. The polymerase chain reaction based on the amplification of the SIRE element
inserted into H2A encoding genes was compared with classical serological tests for the diagnosis
of Chagas disease in Colombian patients.

83
Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91

Materials and methods. An agreement study was carried out by comparing the PCR with
ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay) and IFAT (indirect immunofluorescence) tests.
In addition, the PCR sensitivity and specificity were determined. A sample of 156 individuals
was tested with the H2A PCR primers after a Chagas disease classification based on clinical,
epidemiological and serological data associated with each patient. In addition, 97 out of 156
samples were also compared with the S35/S36 PCR primers.
Results. Eighty-nine of 156 samples (57%) were positive by both IFAT and ELISA and 84
(53.8%) presented the expected 234 bp amplification fragment. The sensitivity of the TcH2AF/
R PCR was 88% (95% C.I.: 75%--95%) and its specificity 92.5% (95% C.I.: 87.7%--97.2%). The
kappa index for concordance between serological tests and TcH2AF/R PCR was 0.8 (95% C.I.:
73%--86%), and between the TcH2AF/R and S35/S36 PCR primers was 0.9 (95% C.I.: 84%--
96%). These indices indicated a “good” and “almost perfect” agreement, respectively.
Conclusions. The TcH2AF/R PCR is a promising diagnostic tool for the detection of T. cruzi and
is suggested as a tool complementary to the classical serological tests.
Key words: polymerase chain reaction, histones, Chagas myocardiopathy, Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi es un parásito protozoo
hemoflagelado, agente causal de la enfermedad
de Chagas, entidad que afecta a 18 millones de
personas en 15 países endémicos, con una
incidencia anual de 200.000 nuevos casos (1).
En Colombia se estima que hay cerca de 700.000
personas infectadas con un 23% de la población
en riesgo de contraer la enfermedad y entre 30 y
40 mil nuevos casos anuales (2).
T. cruzi se distribuye ampliamente en Sur América,
presentando un amplio rango de vectores,
hospederos y reservorios, así como un amplio
pleomorfismo genético y biológico (3-6). En
Colombia se ha visto que aun cuando la mayoría
de las cepas del parásito pertenecen al grupo T.
cruzi I o zimodema Z1 (7-13, Dib J, Restrepo M,
Parra G, Tibayrenc M, Barnabe C, Triana O.
Definición de dos poblaciones de Trypanosoma
cruzi I en el norte de Colombia mediante análisis
de RAPD y el gen de la proteína flagelar.
Memorias XII Congreso Colombiano de
Parasitología y Medicina Tropical. Biomédica
2005;25:207-8.), éstas varían en sus caracterís-
ticas genéticas dependiendo especialmente de su
Correspondencia:
Concepción Puerta, Laboratorio de Parasitología Molecular,
Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias,
Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá
D.C., Colombia.
Teléfono:(+571) 3208320 ext. 4024, fax (571) 3208320 ext.
4021
cpuerta@javeriana.edu.co
Recibido: 15/02/06; aceptado: 09/06/06
ciclo de transmisión (7, Dib J, Restrepo M, Parra
G, Tibayrenc M, Barnabe C, Triana O. Definición
de dos poblaciones de Trypanosoma cruzi I en el
norte de Colombia mediante análisis de RAPD y
el gen de la proteína flagelar. Memorias XII
Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina
Tropical. Biomédica 2005;25:207-8.). Por otra
parte, T. cruzi presenta morfología similar y
reacción inmunológica cruzada con Trypanosoma
rangeli, parásito con el cual también comparte
zonas endémicas, vectores y reservorios (14,15).
Debido a lo anterior, se hace necesario el
desarrollo de pruebas específicas que disminuyan
o eliminen el riesgo de falsos negativos por
variabilidad intra-cepa y falsos positivos por la
presencia de T. rangeli.
Algunos estudios han demostrado la utilidad y el
alto potencial de la prueba de reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) para el diagnóstico de la
enfermedad de Chagas, tanto en su etapa aguda
como en la crónica (16,17). Una de las pruebas
más usadas es la PCR basada en los iniciadores
S35/S36, los cuales amplifican los minicírculos
del ADN del cinetoplasto (kADN) del parásito (18).
Sin embargo, estos iniciadores también amplifican
el kADN de T. rangeli, presentándose perfiles que
sólo pueden ser distinguidos en geles de
poliacrilamida y que, en caso de infecciones
mixtas por ambos tripanosomas, pueden
enmascarar la presencia de T. rangeli haciéndolo
pasar por T. cruzi (19). Además, recientemente
se ha visto que el kADN es capaz de integrarse
al ADN de la célula hospedera, de manera que

84
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
existe la posibilidad de amplificación de las
bandas esperadas en ausencia de infección (20).
Por estas razones se requiere explorar el uso de
otras pruebas para la identificación específica de
T. cruzi.
Teniendo en cuenta lo anterior, en este trabajo se
propuso la evaluación de la prueba de PCR
basada en la amplificación del gen que codifica
para la histona H2A en pacientes colombianos
para la detección de T. cruzi y su comparación
con los métodos serológicos convencionales de
inmunofluorescencia indirecta (IFI) e inmuno-
ensayo enzimático (Elisa) (21).
Materiales y métodos
Pacientes y grupos de estudio
En este estudio participaron 156 individuos entre
los 18 y 65 años, de quienes se obtuvo
consentimiento informado. Dichos individuos
fueron clasificados de acuerdo con el cuadro
clínico, las variables epidemiológicas y el resultado
de las pruebas serológicas IFI y Elisa (22) en 4
grupos: grupo control (A), conformado por 55
(35,3%) individuos sin riesgo epidemiológico,
examen físico y electrocardiograma normal y
resultados de IFI y Elisa negativos; grupo de
pacientes infectados sin cardiopatía (B),
conformado por 16 (10,2%) individuos
asintomáticos, con riesgo epidemiológico, examen
físico y electrocardiograma normales y pruebas
serológicas positivas; grupo de pacientes
infectados con cardiopatía (C), constituído por 73
(46,8%) individuos sintomáticos con riesgo
epidemiológico, examen físico y electrocardio-
grama anormales con síntomas cardiovasculares
clínicamente significativos y pruebas serológicas
positivas, y grupo control de individuos no
infectados con cardiopatía (D), conformado por
12 (7,7%) individuos con examen físico y
electrocardiograma anormales, con cardiopatía
dilatada de origen no chagásico y pruebas
serológicas negativas.
Este estudio corresponde a una investigación con
riesgo mínimo, de acuerdo con la resolución No.
08430 del Ministerio de Salud de Colombia, y fue
aprobado por el Comité de Investigación y Ética
de la Facultad de Ciencias y del Hospital
PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
Universitario San Ignacio de la Pontificia
Universidad Javeriana y del Instituto Nacional de
Salud.
Extracción de ADN a partir de sangre
A partir de una muestra de 5 ml de de sangre
anticoagulada con EDTA se realizó la extracción
de ADN utilizando una alícuota de 0,5 ml mediante
el estuche comercial “GFX™ Genomic Blood DNA
Purification Kit” (Amersham Pharmacia) y el
método fenol-cloroformo-alcohol isoamílico según
el protocolo descrito por Vallejo y colaboradores
(18), realizando el paso de extracción con fenol-
cloroformo-alcohol isoamílico tres veces. El ADN
obtenido fue resuspendido en 10 mM de Tris y 1
mM de EDTA, pH 8,0 (TE) estéril.
Extracción de ADN del parásito
Se trabajó con formas epimastigotas de las cepas
de T. cruzi, D.A. (MHOM/CO/01/DA) y Munantá
(IRHO/CO/98/MTA). El cultivo en masa de los
parásitos en fase logarítmica se centrifugó a 4.000
r.p.m. durante una hora. El precipitado obtenido
se lavó tres veces con 1 ml de solución salina
amortiguada con fosfatos (PBS); se centrifugó
nuevamente a 6.000 r.p.m. durante 10 min a 4°C
y se resuspendió en 1 ml de PBS y 100 µl de
NP40 al 10% en agua; se mezcló, centrifugó a
10.000 r.p.m. por 5 min y se resuspendió en 2 ml
de PBS y SDS al 10%. El ADN se extrajo según
el método de fenol-cloroformo-alcohol isoamílico,
seguido de precipitación con etanol. Finalmente,
se midió la concentración del ADN por
espectrofotometría a 260/280 nm y se evaluó en
geles de agarosa al 1% coloreados con bromuro
de etidio (23).
Pruebas de PCR
Para la reacción de PCR TcH2AF/R se utilizaron
los oligonucleótidos TcH2AF (5´- AGT GGC AGA
CTT TGG GGT C -3´) y TcH2AR (5´- GAG AGT
GAT GGG AGA GC -3´), los cuales anillan en el
elemento SIRE insertado en la región no
codificante de la unidad de 1,2 kb del gen de la
histona H2A de T. cruzi (24). La reacción de PCR
se llevó a cabo de acuerdo con lo descrito por
Pavia y colaboradores (21), utilizando el siguiente
programa en un termociclador PTC -100 MJ
Research®: denaturación inicial a 95°C por 5 min,
85
Gil J., Pavía P., Montilla M. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91

15 ciclos con el siguiente perfil: denaturación a
95°C por 30 segundos, anillaje y extensión a 72°C
por 30 segundos cada uno. Luego, se realizaron
30 ciclos con denaturación a 95°C por 30
segundos, anillaje a 65°C por 30 segundos y
extensión a 72°C por 30 segundos, seguidos de
la extensión final a 72°C por 5 min. Como blanco
de reacción se reemplazó el ADN de la muestra
por agua o por TE; como control negativo se utilizó
ADN humano y como positivo ADN de la cepa
Munantá (IRHO/CO/98/MTA) del parásito. Los
productos de amplificación fueron analizados
mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,5%
teñido con bromuro de etidio (23). La prueba de
PCR S35/S36 se realizó de acuerdo a lo descrito
por Vallejo y colaboradores (18). Con el fin de
eliminar la posibilidad de inhibición de la reacción
de PCR en las muestras negativas, éstas fueron
amplificadas nuevamente tras la adición de 50 ng
ADN de la cepa Munantá (IRHO/CO/98/MTA) del
parásito.
Determinación del poder de detección de la
PCR
Se determinó la cantidad mínima de parásitos a
detectar por ambas reacciones de PCR mezclando
cantidades en base 10 de formas epimastigotas
del parásito con sangre humana libre de infección,
seguida de la extracción de ADN y ensayos de
PCR. Ambos ensayos se realizaron tres veces
para asegurar la reproducibilidad de los resultados.
Análisis estadístico
Los datos fueron consignados en una base de
datos elaborada con el paquete estadístico EPI-
INFO 6.0. El análisis estadístico descriptivo de
las pruebas diagnósticas se realizó a través del
paquete estadístico Stata 6.0. Se analizaron las
características operativas de la prueba
(sensibilidad y especificidad) y se realizó el cálculo
del índice de concordancia kappa con sus
respectivos intervalos de confianza (25).
Resultados
Determinación de la capacidad de detección
de la prueba de PCR TcH2AF/R
Se observó el producto de amplificación esperado
de 234 pb con la PCR TcH2AF/R hasta con una
forma del parásito en ambas cepas a partir del
ADN extraído por el método de triple extracción
con fenol-cloroformo-alcohol isoamílico en tres
réplicas del experimento (figura 1). Igualmente,
con la PCR S35/S36 se pudo detectar hasta un
parásito utilizando el método de extracción de
triple fenol-cloroformo-alcohol isoamílico,
independientemente de la cepa empleada. No
obstante, con el estuche comercial disminuyó el
poder de detección de ambas pruebas de PCR de

Figura 1. Prueba de PCR basada en los iniciadores TcH2AF/R a partir de epimastigotes de la cepa Munanta de T. cruzi
mezclados con sangre humana libre de infección y extracción de ADN por el método triple fenol: cloroformo: alcohol
isoamílico. Gel de agarosa al 1,5%, teñido con bromuro de etidio: marcador de peso molecular 100 pb (Promega) (1); 10 2
parásitos (2); 102 parásitos diluidos 1/5 (3); 102 parásitos diluidos 1/10 (4); 101 parásitos (5); 101 parásitos diluidos 1/5 (6); 101
parásitos diluidos 1/10 (7); 100 parásitos (8); 100 parásitos diluidos 1/5 (9); 100 parásitos diluidos 1/10 (10); agua milli-Q como
blanco de reacción (11) y ADN de la cepa Munantá de T. cruzi como control positivo (12).

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Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91 PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas

1 a 100 parásitos en el caso de la cepa D.A. y de
1 a 10 parásitos en el caso de la PCR S35/S36
usando el ADN de la cepa Munantá como blanco
de amplificación.
Con el fin de corroborar los resultados anteriores,
se realizó una prueba piloto con 31 muestras de
pacientes chagásicos y 26 de individuos sanos,
en la cual se observó que de 57 muestras a las
cuales se les realizó la prueba de PCR TcH2AF/
R a partir del ADN extraído con ambos métodos
de extracción, 18 (31,5%) fueron positivas para
ambos métodos, dos (3,5%) fueron positivas
únicamente para el estuche comercial y 13 (22,8%)
para el de triple extracción con fenol-cloroformo-
alcohol isoamílico. Se obtuvo un índice de
concordancia kappa de 0,49 (IC 95%: 36 - 62%),
interpretado como una concordancia moderada
entre estos dos métodos de extracción. Con base
en estos resultados, se seleccionó el método de
triple extracción con fenol-cloroformo-alcohol
isoamílico para la extracción del ADN de las
muestras a analizar.
Comparación de la prueba de PCR TcH2AF/R
con las pruebas serológicas y la PCR S35/S36
Se realizó un estudio de concordancia en donde
se comparó la PCR TcH2AF/R con las pruebas
serológicas de IFI y Elisa, técnicas utilizadas en
el Instituto Nacional de Salud como referencia
para el diagnóstico y confirmación de la
enfermedad de Chagas, utilizando cepas nativas
colombianas (22). Ambas pruebas serológicas en
este estudio arrojaron resultados idénticos.
Del total de 156 muestras, 89 (57%) fueron
positivas por IFI y Elisa y 84 (53,8%) presentaron
el perfil de amplificación correspondiente a la
banda esperada de 234 pb, presentándose 79
muestras positivas por ambos métodos (figura 2).
Por su parte, de las 67 muestras negativas por
ambas pruebas serológicas, 62 de ellas también
fueron negativas por la prueba de PCR TcH2AF/
R (figura 2).
Se obtuvo una sensibilidad de 88% (IC 95%: 75 -
95%) y especificidad de 92,5% (IC 95%: 87,7 -
97,2%) al comparar la prueba de PCR TcH2AF/R
con las pruebas serológicas.
El índice de concordancia kappa entre la prueba
de PCR TcH2AF/R y ambas pruebas serológicas
fue de 0,8 (IC 95%: 73 - 86%), interpretado como
una buena concordancia.
El análisis del desempeño de la PCR TcH2AF/R
en cada grupo de estudio fue el siguiente: en el
grupo control de pacientes no infectados (A), de
un total de 55 muestras, cuatro (7,3%) fueron
positivas por PCR y 51 (92,7%) fueron negativas.
En el grupo de pacientes infectados asintomáticos
(B), de un total de 16 muestras, 15 (93,7%) fueron
positivas por la PCR TcH2AF/R. En el grupo de

Figura 2. Detección de T. cruzi en sangre total de pacientes colombianos mediante la PCR TcH2AF/R. Gel de agarosa al
1,5%, teñido con bromuro de etidio: marcador de peso molecular de 100 pb (Promega) (1); muestra 085, negativa (2); muestra
085 diluida 1/5 (3); muestra 085 diluida 1/10 (4); muestra 079, positiva (5); muestra 079 diluida 1/5, (6); muestra 079 diluida
1/10 (7); muestra 074, positiva (8); muestra 074 diluida 1/5 (9), muestra 074 diluida 1/10 (10); ADN de la cepa Munantá de T.
cruzi como control positivo (11); ADN humano como control negativo (12) y agua Milli-Q estéril como blanco de reacción (13).

87
Gil J., Pavía P., Montilla M. et al
pacientes sintomáticos (C), de un total de 73
muestras, 64 (87,6%) fueron positivas por PCR y
9 (12,3%) fueron negativas. En el grupo de
individuos control con cardiopatía (D), de un total
de 12 muestras, 11 (91,7%) fueron negativas por
la PCR TcH2AF/R y una fue positiva.
Considerando los individuos seropositivos (grupos
B y C) o seronegativos (grupos A y D), se tiene
que en los primeros la PCR TcH2AF/R detectó
como positivos al 88,7% (79 de 89), en tanto que
en los segundos, de 67 muestras, 5 (7,5%) de
ellas fueron positivas por la prueba de PCR.
Por otra parte, de las 156 muestras, 96 de ellas
también fueron analizadas mediante la PCR S35/
S36, encontrando un índice kappa de 0,9 (IC 95%:
84 -96%), interpretado como una concordancia
casi perfecta.
Discusión
El diagnóstico de la enfermedad de Chagas
depende de la etapa de la enfermedad en la que
se encuentre el paciente y se debe apoyar en la
información tanto epidemiológica como clínica
del paciente, así como en las pruebas de
laboratorio.
Mientras en la etapa aguda de la enfermedad el
diagnóstico no presenta problemas debido a la
elevada parasitemia, en las etapas indeterminada
y crónica, el diagnóstico es muy complejo y
requiere de varias pruebas de laboratorio para su
confirmación (1,17,22). Entre las pruebas de
laboratorio disponibles para el diagnóstico en las
etapas indeterminada y crónica de la enfermedad,
actualmente se encuentran las pruebas
serológicas y el diagnóstico molecular directo por
PCR. Mientras las primeras son pruebas indirectas
que se basan en la detección de anticuerpos contra
el parásito y dependen del estado inmunológico
del paciente, de los antígenos, de la fase de
desarrollo del parásito empleado en la prueba y
del tiempo transcurrido desde la infección, los
segundos se basan en la detección directa del
ADN del parásito y no dependen del estado
inmunológico del paciente ni del tiempo de
adquisición de la infección (16,26).
En este trabajo se comparó el desempeño de la
prueba de PCR TcH2AF/R para el diagnóstico de
88
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
pacientes chagásicos indeterminados y crónicos
con miras a su utilización como una prueba de
apoyo en el diagnóstico de esta enfermedad.
El poder de detección de la prueba TcH2AF/R,
evidenciada por la detección de hasta una forma
parasitaria en los ensayos de infección artificial,
se explica por la abundancia de los genes H2A
(24,27) y por que el elemento SIRE short
interspersed repetitive element, con 2.000 a 3.000
copias por genoma, se encuentra integrado en el
extremo 3’ no traducido (UTR) de los genes
codificantes para la histona H2A del parásito y
sus nucleótidos 16 a 248 (no. de acceso al
GenBank, AF098063) corresponden al fragmento
amplificado con los cebadores TcH2AF/R
(27,28).
Los resultados obtenidos en este trabajo se
apoyan en la especificidad de la prueba TcH2AF/
R reportada por Pavía y colaboradores, según la
cual los iniciadores TcH2AF/R amplifican
exclusivamente el ADN de cepas de T. cruzi
pertenecientes a los grupos I y II hasta ahora
descritos del parásito (29), en tanto que no
amplifican el ADN de otros tripanosomátidos que
circulan en Colombia, como T. rangeli tanto de
cepas KP 1(+) como KP 1(-), representantes de
los linajes de este parásito (30) ni de Leishmania
spp. y Crithidia spp., entre otros (21).
Es así como la PCR TcH2AF/R fue capaz de
detectar el 88% de los individuos serológicamente
positivos, porcentaje similar al 84,8% descrito por
Gutiérrez y colaboradores en un estudio llevado a
cabo en 79 individuos seropositivos en Santander
(Colombia) utilizando como blanco el ADN del
cinetoplasto del parásito (31). Resultados
similares de 83,5 y 90% de positividad fueron
reportados por Gomes y colaboradores en 79
pacientes seropositivos y por Britto y
colaboradores en 61 en Brasil (32,33). Porcentajes
superiores de positividad por PCR en pacientes
crónicos han sido descritos con un número menor
de pacientes (34) o sometiendo los productos de
amplificación a un paso posterior de hibridación
con un cebador interno dentro de la secuencia
amplificada (35).
En este estudio, el 12% de los individuos
seropositivos no fue detectado a pesar de que se
Biomédica 2007;27(supl. 1):83-91
descartó la presencia de inhibición de la PCR.
Estos resultados pueden deberse a alguna de las
siguientes razones o a una combinación de las
mismas: (i) niveles escasos de parasitemia, de
forma que en los 500 µl de la muestra no estuviera
presente ningún parásito (36); (ii) intermitencia en
la parasitemia (37), o (iii) presencia de falsos
positivos en las pruebas serológicas posiblemente
por reacción cruzada con otros tripanosomátidos
como Leishmania y T. rangeli (38).
En el caso de los cinco pacientes positivos por
PCR y negativos por serología, en primer lugar
llama la atención cómo estos pacientes fueron
positivos tanto por la prueba TcH2AF/R, que
amplifica blancos nucleares (21), como por la
prueba S35/S36, que amplifica blancos
mitocondriales (18), lo cual apoya la presencia de
infección. Se ha reportado que pacientes
chagásicos pueden presentar pruebas de
xenodiagnóstico positivas y serologías negativas
en algunos momentos de la enfermedad,
especialmente en individuos recién infectados o
con estado inmunológico comprometido (39),
situación que puede explicar la presencia de PCR
positiva en ausencia de anticuerpos IgG anti-
T.cruzi. Este hallazgo también fue observado en
el estudio reportado por Gutiérrez y colaboradores,
en el que uno de los 25 individuos serológicamente
negativos (4%) fue positivo por PCR (31); por
Salomone y colaboradores, quienes encontraron
que de 80 individuos seronegativos, 12 (15%)
tenían PCR positiva y tres de éstos presentaban
síntomas clínicos compatibles con la enfermedad
de Chagas (40); por Gomes y colaboradores,
quienes reportaron que 10 de 21 (47,6%) pacientes
con serología negativa presentaron PCR y ensayos
de lisis mediada por el complemento positivas (32),
y por Avila y colaboradores, quienes encontraron
PCR positiva en tres de cuatro pacientes
seronegativos (35).
Adicionalmente, analizando los posibles factores
de riesgo de contaminación durante el proceso
de manipulación, extracción y amplificación del
ADN, se tiene que cada uno de los pasos de las
pruebas de PCR (extracción del ADN, reacción
de pre-PCR, amplificación y electroforesis) se
realizó en áreas diferentes y separadas, utilizando
PCR TCH2AF/R vs. IFI y Elisa para diagnóstico de Chagas
material anti-aerosol, blancos de reacción y
controles negativos.
Es de especial interés el buen desempeño presen-
tado por la prueba de PCR TcH2AF/R en el grupo
de pacientes crónicos asintomáticos, en los cuales
no se dispone de la ayuda que brinda la sintomato-
logía para el diagnóstico basado en la tríada pruebas
de laboratorio, sintomatología y epidemiología. Así
mismo, en pacientes cardiópatas con síntomas
compatibles con la enfermedad de Chagas, la PCR
TcH2AF/R puede constituir una herramienta
valiosa para descartar la infección por T. cruzi.
Teniendo en cuenta los resultados de este trabajo
y las deficiencias de las pruebas serológicas
convencionales en cuanto a la posibilidad de
reacción cruzada con otros tripanosomátidos, lo
que da lugar a falsos positivos y también a falsos
negativos en casos de infección reciente o estado
inmunológico comprometido, la PCR TcH2AF/R
se perfila como una prueba diagnóstica promisoria
de apoyo para la detección de T. cruz i en
pacientes crónicos.
Con el fin de aumentar el poder de detección de
la prueba de PCR se proponen las siguientes estrate-
gias: (i) aumentar el volumen de sangre a analizar
a una alícuota de 0,7-1 ml; (ii) preservar la muestra
de sangre en clorhidrato de guanidina; (iii) tomar
muestras seriadas con intervalos mínimos de dos
a tres meses, e (iv) hibridar el producto de
amplificación obtenido con un iniciador interno.
A pesar de los resultados prometedores de las
pruebas de PCR, se requiere de un mayor número
de estudios sobre consistencia y conformidad con
la PCR TcH2AF/R y otras pruebas de PCR que
utilizan blancos diferentes de amplificación, para
postular su uso como patrón de oro en el
diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Adicionalmente, el requerimiento de equipo
especializado y elevado costo de las pruebas de
PCR hace difícil su uso común y de rutina,
característica primordial de todo patrón de oro.
No obstante, estudios paralelos del grupo de
investigación proponen el uso de un “constructo”
como patrón de oro, utilizando la PCR como
prueba diagnóstica, además de los hallazgos
clínicos y epidemiológicos (41).
89
Gil J., Pavía P., Montilla M. et al
Agradecimientos
Los autores expresan su agradecimiento a la
Unidad de Electrofisiología y Cardiología del
Hospital Universitario San Ignacio (HUSI), a la
Clínica Shaio y al Centro de Salud del municipio
de Santana, departamento de Boyacá.
Conflicto de intereses
Los autores manifestamos expresamente que
durante la realización del presente trabajo no
existió conflicto de intereses que pudiera afectar
los resultados obtenidos.
Financiación
Este estudio fue financiado por la Vicerrectoría
Académica de la Pontificia Universidad Javeriana.
Registro de proyecto 1702.
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ARTÍCULO ORIGINAL

Variación del fenotipo antenal de poblaciones del domicilio,

peridomicilio y silvestres de Triatoma dimidiata
(Hemiptera: Reduviidae) en Santander, Colombia
Corina María Arroyo 1, Lyda Esteban 1, Silvia Catalá 2, Víctor Manuel Angulo 1

1
Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales (CINTROP), Universidad Industrial de Santander,
Piedecuesta, Santander, Colombia.
2
Centro Regional de Investigaciones Científicas y Transferencia Tecnológica (CRILAR) Anillaco, La Rioja,
Argentina.
Introducción. Triatoma dimidiata es uno de los triatominos más ampliamente distribuidos en
Colombia, la caracterización fenotípica antenal de poblaciones de diferentes hábitats
proporcionaran conocimientos sobre su biología y comportamiento que podrán ser utilizados
en nuevas propuestas metodológicas para su control.
Objetivo. Estudiar el comportamiento de poblaciones de Triatoma dimidiata en diferentes
hábitats utilizando el fenotipo antenal.
Materiales y métodos. Se analizaron un mecanorreceptor y tres quimiorreceptores antenales
de 60 individuos de Triatoma dimidiata provenientes de diferentes hábitats en Santander
utilizando análisis univariados y multivariados.
Resultados. Los análisis multivariados diferenciaron significativamente las poblaciones de
las hembras, estas diferencias estuvieron asociadas a variaciones en el número de tricoides
de pared gruesa, con aumento de los tricoides de pared fina en hábitats cercanos al domicilio
humano. Los machos con mayor número de sensilla y de tricoides de pared fina, no se
diferenciaron, sin embargo tendencias similares fueron apreciadas. Se observó dimorfismo
sexual entre todas las poblaciones y fue menor en el del domicilio.
Conclusiones. El fenotipo de sensilla antenal fue útil en la diferenciación intraespecífica de
Triatoma dimidiata en diferentes hábitats. Las diferencias en hembras ponen de manifiesto
nuevos arreglos sensoriales para la explotación del hábitat a diferencia de los machos, que
por su mayor capacidad de dispersión, no se diferenciaron entre los ecotopos. La similitud
entre hembras de zona urbana, con hembras de peridomicilio rural permite proponer al fenotipo
antenal como un sencillo y eficiente indicador para la determinación del origen de triatominos
que intentan colonizar nuevos hábitats.
Palabras claves: Triatoma, Triatominae, hábitat, enfermedad de Chagas, Colombia.
Antennal phenotype variation in sylvatic, peridomestic and domestic populations of
Triatoma dimidiata (Hemiptera: Reduviidae) from Santander, Colombia.
Introduction. Triatoma dimidiata is one of the widely distributed triatomines in Colombia. The
phenotype of the antenna is a characteristic of populations that can differ among habitats and
can give information concerning its biology and behavior. This information in turn can be used
in the development of new methodological proposals for its control.
Objective. The behavior of populations of Triatoma dimidiate was studied in several different
habitats, using the antennal phenotype.
Materials and methods. A mechanoreceptor and three chemoreceptors were compared in the
antennae of 60 Triatoma dimidiata adults from several defined habitats in Santander, using
unvariate and multivariate analyses.
Results. The multivariate analysis differentiated the female populations significantly. These
differences were associated with variations in the number of thick-walled trichoids and with the
numerical increase of the thin walled trichoids in habitats close to human housing. The males,
with a larger number of sensilla and thin walled trichoids, were not differentiated significantly,
although, similar tendencies were observed. Sexual dimorphism was clear in these characters

92
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata

in the total population, but less pronounced in the domestic populations.

Conclusions. The antennal sensilla patterns were useful in the intraspecific differentiation of
Triatoma dimidiata in different habitats. The differences in the female population shed light on
new sensorial arrangements for the exploration of the habitat, in contrast with the male
populations that, because of their great capacity for dispersion, were not differentiated in the
distinct habitats. The differences in sensilla patterns between females from urban areas and
those from rural surroundings may be a simple and efficient marker of the origin of individual
Triatominae attempting to colonize new habitats.
Key words: Triatoma dimidiata, Triatominae, habitat, Chagas disease, Colombia.

La enfermedad de Chagas afecta a una población
de entre 16 y 18 millones de personas en 21 países
de América (1); su agente causal es Trypanosoma
cruzi , protozoo transmitido por insectos
hematófagos de las subfamilia Triatominae
(Hemiptera: Reduviidae) (2); las especies de mayor
importancia epidemiológica debido a su adaptación
en el ambiente domiciliario son Triatoma infestans,
Rhodnius prolixus y Triatoma dimidiata.
Esta última especie está distribuida en Centro
América y Colombia, en donde ocupa una gran
diversidad de hábitats: domicilio, peridomicilio y
silvestres en áreas rurales y urbanas (3-5). Por
otra parte, en regiones costeras de Ecuador y norte
de Perú se ha encontrado sólo en el domicilio
humano (6).
En Colombia ha aumentado su distribución de 4 a
13 departamentos en las últimas décadas (7), y
al igual que en Centro América, se ha detectado
en viviendas de zonas urbanas con buena
construcción. Esta distribución y su gran capacidad
para colonizar varios hábitats han favorecido las
reinfestaciones observadas después de la
aplicación de insecticidas piretroides (8-11)
(Turriago B, Pinto N, Ghul F. Evaluación de
deltametrina (K-Otrine SC 50® y K-Otrine WP 50®)
como alternativa de control de Triatoma dimidiata.
Biomédica 2005;25(Suppl.1): 195). Estas pobla-
ciones reinfestantes probablemente no fueron
alcanzadas por la acción insecticida y constituyen
poblaciones peridomiciliarias o silvestres que
incursionan en el domicilio humano; por ello, T.
Correspondencia:
Corina María Arroyo, CINTROP, Universidad Industrial de
Santander, Km 2 vía Guatiguará, Piedecuesta, Santander,
Colombia. Teléfono: (57) 76563971, fax (57)76540177.
corina_arroyo@yahoo.com
Recibido: 20/10/05; aceptado: 13/07/06
dimidiata se convierte en una especie cuya
erradicación no puede realizarse utilizando los
métodos disponibles (12, Schofield CJ. Evolución
y control del Triatoma dimidiata. Taller para el
establecimiento de pautas técnicas en el control
de Triatoma dimidiata. San Salvador; 2002. OPS/
HCD/HCT/214/02. p.12-8).
El estudio de la estructura poblacional y el uso de
marcadores fenéticos y genéticos de las
poblaciones de este vector es indispensable para
obtener información sobre su biología y
comportamiento y puede contribuir a una mejor
planificación de la acciones de control vectorial,
como se ha demostrado con esta especie y R.
prolixus (13,14). El análisis de la estructura
genética de T. dimidiata con RAPDS realizado en
Boavita, Colombia, sugiere una baja diferenciación
genética, indicando que las poblaciones extradomi-
ciliarias representan un riesgo epidemiológico en
la transmisión de la enfermedad de Chagas (15).
En triatominos, el fenotipo antenal refleja
modificaciones de los patrones ancestrales por
la adaptación a diferentes hábitats y hospederos
(16-18) y es útil en la diferenciación intra-
específica, Este estudio, primero en poblaciones
de T. dimidiata de Colombia, se realizó para
detectar variaciones en cuatro receptores
antenales en los diferentes hábitats conocidos
de una misma área geográfica y como contribu-
ción al conocimiento de la bioecología y
ecoepidemiología de esta especie, y como
orientación para metodologías de control vectorial
en la zona endémica.
Materiales y métodos
Área de estudio
El estudio se realizó en los años 2003 y 2004 en
áreas rurales de los municipios de Macaravita y

93
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M.
Capitanejo del departamento de Santander,
ubicados sobre la cordillera oriental colombiana.
El área está localizada entre los 1.090 y 2.500
msnm, 6°31’ a 6°27’ de latitud norte y 72°35’ a
72°42’ de longitud oeste, con temperaturas entre
12 y 25 °C, en la zona de influencia del Cañón del
Chicamocha y los ríos Nevado, Servitá y otras
corrientes menores. Las zonas de vida
predominante son bosque seco premontano y
bosque húmedo montano bajo con precipitación
promedio anual de 731-1058 mm (19). El paisaje
se caracteriza por el relieve montañoso quebrado
y escarpado, con parches de bosque secundario,
y por la presencia de formaciones rocosas de
piedra caliza y vegetación xerofítica hacia la parte
baja del cañón. Las actividades económicas de
mayor importancia son la agricultura y la
ganadería, principalmente cultivos de tabaco, la
cría de cabras y animales de pastoreo. La mayoría
de las viviendas en esta zona están construidas
con paredes y pisos en tierra o ladrillo, techos de
teja de barro sostenidos en entramado de caña-
barro, poca iluminación y presencia de animales
domésticos.
Búsqueda de los insectos
Se recolectaron en los dormitorios (D) y
peridomicilios (P) de las viviendas rurales y
biotopos silvestres (S) localizados hasta 400 mts
alrededor de las viviendas. Se consideró
peridomicilio (P) el área que circunda a la vivienda
humana y en el cual el hombre desarrolla sus
actividades domésticas y productivas. Se
tomaron muestras en corrales de animales, hornos
de barro y pequeñas construcciones abiertas de
bahareque y caña (caney) utilizadas para
almacenar tabaco, elementos de trabajo y como
lugares de reposo para gallinas, cabras y ganado
vacuno. Las capturas en el domicilio y
peridomicilio se hicieron a través de la búsqueda
activa hora/hombre y con material que la
comunidad envió al laboratorio de entomología.
Para la captura de los triatominos silvestres (S)
se utilizaron trampas diseñadas en el laboratorio
de entomología, (Angulo VM, datos sin publicar),
que se colocaron en cuevas por un periodo de 12
horas/noche. Los insectos recolectados fueron
almacenados en tarros plásticos y etiquetados con
datos de localidad, fecha y lugar de captura. Se
94
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
seleccionó un total de 60 individuos adultos de T.
dimidiata de ambos sexos con sus antenas
completas. En cada hábitat, se incluyeron 10
machos y 10 hembras en los análisis univariados
y multivariados. Adicionalmente, se analizaron
cuatro hembras capturadas en una vivienda urbana
(VU) del municipio de Macaravita.
Preparación de la antena para el estudio del
fenotipo antenal
Una antena por insecto se cortó a nivel del escapo
(segmento basal o primero) y se almacenó en
alcohol al 70%. Para su diafanización, la cutícula
se sumergió en hidróxido de sodio al 4% durante
6 horas a 60°C, se neutralizó con ácido acético al
5% por 2 minutos, y finalmente se montó en
lámina portaobjetos con glicerina al 87%.
Identificación y conteo de sensilias
El procedimiento se realizó en la cara ventral de
los tres segmentos distales de la antena, pedicelo
(P) y flagelos 1 y 2 (F1 y F2), utilizando un
microscopio (Nikon E400, 40X) conectado a la
cámara lúcida (Nikon y-IDT). Se analizaron tres
quimiorreceptores: tricoide de pared fina (TPF),
tricoide de pared gruesa (TPG) y basicónico (BA),
y un mecanorreceptor Bristles (BR) de acuerdo al
protocolo de Catalá et al. 1994 (20) y Catalá et al.
2005 (16).
Medición de los segmentos antenales y conteo
de sensilias
Se midió la longitud de cada uno de los segmentos
antenales y se contaron las sensilias que cubrían
estos segmentos. Las medidas se tomaron con
estereoscopio (Olympus SZ40, 2X) previamente
calibrado con micrómetro ocular de 1cm y 100
graduaciones.
Análisis estadístico
Se hizo análisis de correlación entre el número
de sensilias y la longitud total de la antena.
Mediante el test de Levene se determinó la
homogeneidad de las varianzas y posteriormente
se aplicó un ANOVA para la comparación entre
grupos y una prueba de t para la comparación
entre sexos, con previa transformación de los
datos en logaritmo natural. Se utilizaron pruebas
no paramétricas de Kruskall Wallis y U Mann
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100 Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata

Withney (21) cuando las variables mostraron
heterocedasticidad. Para reducir el error
experimental, se corrigió el valor de significación
usando el método secuencial de Bonferroni (21).
Se realizó un análisis discriminante para cada
sexo y segmento antenal usando el programa
Statistica versión 6. Este análisis se hizo con base
en el modelo discriminante forward stepwise, en
el cual todas las variables se incluyeron en el
modelo y en cada paso se eliminó la variable que
menos contribuyó a la predicción de los miembros
del grupo. La significación de las distancias de
Mahalanobis (d2) se demostró utilizando los
programas PADwin versión 65 (después de 1.000
permutaciones) y NTSYS versión 2.02.
Resultados
Características generales de la antena
Los promedios y la desviación estándar de la
longitud de cada segmento se muestran en el
cuadro 1.
Los machos presentaron antenas más largas y
con mayor cantidad de sensilias que las hembras,
con un promedio de 12,04 mm, 1170,77 y 11,85mm
922,07, respectivamente. Las hembras se diferen-
ciaron significativamente según la longitud de la
antena en cada hábitat (p = 0,0014). No se observó
correlación del número de quimiorreceptores con
la longitud total de la antena (n = 60, r = 0,05,
p = 0,701). El segmento más largo fue el pedicelo
y el mayor número de sensilias se presentó en el
flagelo en hembras y en el pedicelo en machos.
Dimorfismo sexual
Se encontró un significativo dimorfismo sexual
en patrón de sensilias antenales de T. dimidiata,
diferenciación que se debió a la variación del
número de TPF del pedicelo, el cual fue mayor en
los machos (p < 0,0317). El dimorfismo entre
hábitats varió según las distancias de Mahanalobis
así: domicilio (d2 = 24,56), silvestre (d2 = 73,62) y
peridomicilio (d2 = 361,06).
Comparación entre hábitats
Debido al dimorfismo sexual de T. dimidiata los
análisis se hicieron por separado para cada sexo.
Análisis univariado. El ANOVA entre las hembras
mostró diferencias significativas (p = 0,0046) en
los TPG del flagelo uno; en los machos no se
observaron variaciones signficativas en ningún
receptor (figura 1).
Análisis multivariado. Para resolver el problema
de multicolinealidad, las variables se agruparon
en 12 componentes principales obtenidos a partir
de una matriz de covarianza. Estas 12 nuevas
variables con independencia lineal se usaron en
el análisis discriminante. En hembras, el modelo
excluyó la variable PBR con un Partial λ = 0,946.
Las variables que contribuyeron significativamente
al análisis (Wilks λ = 0,006; F (22.34) = 3,432; p ‹ 0,006)
produjeron dos funciones discriminantes (FD1 =

Cuadro 1. Media y desviación estándar del número de sensilias y la longitud de cada segmento antenal de T. dimidiata.

Longitud Pedicelo Flagelo 1 Flagelo 2

Sensilias
Hábitat Sexo p f1 f2 pRB pTPF pTPG pBS f1RB f1TPF f1TPG f1BS f2RB f2TPF f2TPG f2BS totales

Domicilio 4,6 4,0 3,3 67,0 170,0 62,2 8,9 16,6 71,7 250,2 42,2 11,0 20,2 188,8 36,7 945,5
0,2 0,2 0,2 5,7 49,5 21,0 3,0 3,2 22,9 32,2 12,3 3,0 6,3 59,5 10,6 141,3
4,6 3,9 3,3 68,3 302,6 56,9 10,0 19,2 113,5 231,2 47,7 11,8 28,4 218,9 45,5 1154,0
0,3 0,3 0,2 12,0 78,0 12,5 2,2 4,5 24,1 38,5 13,8 2,9 5,7 30,1 11,4 171,3
Peridomicilio 4,4 3,8 3,2 71,2 146,7 47,6 8,3 19,1 57,5 262,3 34,2 11,8 20,0 227,0 42,2 947,9
0,2 0,2 0,3 8,3 27,9 14,0 2,4 3,1 11,5 30,7 9,6 2,1 5,8 22,7 13,5 56,5
4,6 3,9 3,4 65,5 363,0 69,5 8,9 17,3 104,7 231,4 39,3 11,7 28,9 213,8 42,0 1196,0
0,2 0,2 0,2 11,5 50,3 14,5 2,6 4,6 38,9 34,5 14,6 2,2 8,0 41,5 6,7 146,9
Silvestre 4,6 3,9 3,5 71,1 164,4 58,2 8,7 15,6 54,6 216,8 28,8 10,6 21,1 186,5 36,4 872,8
0,2 0,2 0,3 8,3 39,5 21,7 3,4 2,0 9,1 25,0 9,1 2,0 5,3 29,4 6,0 106,2
4,7 4,0 3,5 67,9 345,1 61,3 9,6 16,8 119,9 218,4 37,7 10,4 27,0 205,7 43,3 1163,1
0,2 0,2 0,4 9,5 63,8 26,0 2,5 3,9 40,5 57,3 12,7 3,0 9,9 38,0 11,4 125,9

95
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M. Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100

Figura 1. Análisis discriminante de hembras de T. dimidiata Figura 2. Análisis discriminante de hembras de T. dimidiata
recolectadas en D: domicilio, P: peridomicilio, S: silvestre incluidos individuos de vivienda urbana (VU). D: domicilio, P:
(cueva). DF1 y DF2, función discriminante 1 y 2, peridomicilio, S: silvestre (cueva). DF1 y DF2, función
respectivamente. discriminante 1 y 2, respectivamente.

0,0004; FD2 = 0,0137) con una asignación correcta contribuyeron significativamente en este análisis
al grupo de origen de 96,67%, indicando que los produjeron dos funciones discriminantes con 80%
caracteres estudiados fueron altamente de asignación a cada grupo (Wilks λ = 0,29521;
discriminantes entre las tres poblaciones. La F (6.50) = 7,0041; p ‹ 0,0000.), las cuales se
discriminación de las poblaciones se relacionó con relacionaron con las siguientes variables: F1BR,
las siguientes variables: PTPF + F1TPF (parcial PTPF, F2BA + F2TPG + F1TPG con un Partial
λ = 0,505), F1BA + F1BR (Partial λ = 0,684), λ = 0,599, 0,640 y 0,665, respectivamente, donde
F1TPG (Partial λ = 0,686), F2BA (Partial λ = F2BA + F2TPG + F1TPG se combinaron en una
0,651), PTPF (Partial λ = 0,666), F1BA (Partial λ función matemática (combinación lineal) (cuadro 2c).
= 0,689), F2BR (Partial λ = 0,718), PTPG (Partial El análisis multivariado entre los machos no
λ = 0,856), F1BR (Partial λ = 0870), PTPG + PBA diferenció significativamente las poblaciones; sin
+ F1BA (Partial λ = 0,874) (en orden decreciente embargo, se observó una tendencia similar a las
de Wilks λ ). Las distancias de Mahalanobis hembras (Wilks λ = 0,3511; F(16.42) = 1,8047; p ‹
diferenciaron significativamente cada uno de los 0,0636, figura 3).
hábitats (cuadro 2a), donde PTPF + F1TPF; F1BA
+ F1BR; PTPG + PBA + F1BA se combinaron Cuadro 2. Distancia de Mahalanobis (d2) y valores de
dentro de una función matemática. significación (p) obtenidos del análisis discriminante de
hembras de T. dimidiata en: a. las poblaciones de estudio,
Un nuevo análisis discriminante entre las hembras b. individuos de zona urbana y c. en el primer segmento
antenal.
se realizó incluyendo a los individuos de viviendas
urbanas (Wilks λ = 0,7493; F(30.62)= 2,9446; p ‹ a. d2 p
0,0002). El 85,29% de estos individuos fue peridomicilio-silvestre 16,21 0,0043
asignado correctamente a su grupo de origen y domicilio-peridomicilio 13,52 0,0105
agrupado en el peridomicilio (figura 2); además domicilio-silvestre 10,95 0,0269
se observó una leve asociación con el hábitat b. d2 p
silvestre (cuadro 2b). domicilio-VU 16,23 0,0336
silvestre-VU 13,96 0,0617
Al utilizar en los análisis multivariados solamente peridomicilio-VU 6,48 0,4596
las sensilias del flagelo 1 en hembras, las c. d2 p
distancias de Mahalanobis concordaron con las peridomicilio-silvestre 6,86 0,0002
obtenidas cuando se utilizaron todos los domicilio-silvestre 5,11 0,0013
domicilio-peridomicilio 3,63 0,0073
segmentos antenales. Las variables que

96
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
Figura 3. Análisis discriminante (no significativo) de machos
de T. dimidiata recolectados en D: domicilio, P: peridomicilio,
S: silvestre (cueva). DF1 y DF2, función discriminante 1 y 2,
respectivamente.
Discusión
T. dimidiata del área estudiada, al igual que las
poblaciones de Guatemala y de otras especies
de triatominos, presentó los tres tipos de quimio-
rreceptores en el pedicelo, lo que sugiere una
capacidad para la invasión y dispersión en
diferentes hábitats (17,22, Catalá S, Carbajal AL,
Torres M, Moreno M, Ordoñez R, Montaña MF, et
al. La antena de los Triatominae: características
ancestrales y marcadores funcionales. En: Guhl
F. editor. Proceedings of the Fourth International
Workshop on Population and Control of Triatominae.
Cartagena de Indias, 2000. p.125-32), lo cual
demuestra que el sistema sensorial de los
insectos ha evolucionado hacia numerosas
especializaciones que les permiten detectar
características del ambiente externo y monitorizar
constantemente el estado de interacción del
organismo.
T. dimidiata presentó mayor densidad de sensilias
en el pedicelo que en el flagelo uno, a diferencia
de otras especies de Triatoma (22,23), lo que
probablemente muestra una característica de la
especie.
Dimorfismo sexual
Las variaciones en el número de sensilias
antenales entre hembras y machos en insectos
podría ser una respuesta a la atracción del macho
por las feromonas de la hembra o por variaciones
Fenotipo antenal de Triatoma dimidiata
en el hábitat (24,25). El aumento significativo de
los tricoides de pared fina en las antenas de los
machos de T. dimidiata, observado también por
Catala et al. 2005 (16), podría estar asociado a la
captación de feromonas de hospederos
vertebrados y a la percepción de moléculas
relacionadas con el comportamiento sexual como
sucede en otras especies de triatominos (16-
18,26) (Esteban L, Sandoval CM, Angulo VM,
Catalá S. Estudio morfológico de los patrones
sensoriales en adultos y ninfas de Belminus herreri
(Reduviidae: Triatominae). Biomédica 2002;22
(Suppl. 1):113) y especies de Noctuidae ,
Acrididae y Dyctioptera (27,28). Adicionalmente,
el aumento de este receptor multiporoso ha sido
relacionado con la variabilidad intraespecífica y
el polimorfismo alar del género Mepraia (29).
Los estudios de Monroy et al. 2003 (30) y Tabaru
et al. 1996 (31) sugieren que los machos de T.
dimidiata tienen mayor probabilidad de
dispersión a través del vuelo que las hembras, lo
que les permite incursionar en diferentes hábitats
y al mismo tiempo incrementar su sistema de
reconocimiento sexual, facilitando el encuentro
entre adultos dispersos. En general, en los
triatominos los machos son más pequeños, y, en
consecuencia, menos pesados y más hábiles para
desplazarse a través del vuelo en búsqueda de
alimento. El aumento de estos receptores
relacionados con la capacidad de dispersión es
un factor clave en la invasión de nuevos
hábitats; quizás por esta razón no observamos
diferencias entre ecotopos en machos, a pesar
de que presentaron tendencias similares a las
hembras.
Los basicónicos también fueron abundantes,
especialmente en el flagelo uno, como se ha
observado en T. sordida (17); estos receptores
han sido implicados en la recepción de moléculas
NH 3 y ácidos grasos (32) como termo-
higrorreceptores y son similares a los receptores
“C” de Cimex lecticularius (22). En mosquitos de
la familia Psychodidae se ha observado función
olfatoria en el hallazgo del hospedero (33), y en
insectos como Locusta migratoria, Schistocerca
gregaria , Hylobus habiteis y Leptinotarsa
decemlineata este receptor es responsable del
dimorfismo sexual (27,34-37).
97
Arroyo C.M., Esteban L., Catalá S., Angulo V.M.
Entre ecotopos, el dimorfismo sexual fue menor
para la población del domicilio, seguida por la
silvestre. Los machos de estos hábitats presen-
taron menor cantidad de tricoides de pared fina
en el pedicelo, lo cual tiene relación con especies
adaptados a un rango limitado de hábitats como
T. infestans (18). La reducción del número de
receptores que intervienen en la reproducción
podría ser consecuencia de la domiciliación (38).
Por el contrario, en la población peridomiciliada,
el aumento de estos sensilias podría involucrar la
necesidad de detectar olores para identificar
nuevos hábitats y compañero sexual.
Variación entre hábitats
En los triatominos una serie de cambios
morfológicos y genéticos se han asociado a la
adaptación a hábitats domésticos, y se ha
señalado que la densidad de sensilias antenales
disminuye progresivamente en el pedicelo y sobre
el total de la antena en especies que viven en
“hábitats estables” como la vivienda humana (16-
18,22,23); sin embargo, este término puede usarse
de manera ambigua, puesto que, además de las
fluctuaciones ambientales, en un hábitat
intervienen la explotación de diferentes recursos
tróficos, espaciales y reproductivos, los cuales
podrían modificar en forma particular el fenotipo
de las sensilias antenales.
Las variaciones observadas en hembras se
asociaron con los TPG y BR; una reducción de
los primeros se observó a medida que disminuía
la amplitud del nicho y se incrementaba la
estabilidad del hábitat, lo que podría indicar una
reducción de la sensibilidad y superficie del área
para la captura de moléculas olorosas.
En el domicilio humano y en las cuevas las
variaciones climáticas son pocas, y la ausencia
de luz es característica, por lo que insectos que
ocupan estos hábitats podrían tener una selección
más acusada de sensilias olfatorias que de
mecanorreceptores y quimiorreceptores de
contacto.
En el peridomicilio, el incremento espacial del
hábitat podría generar un comportamiento
exploratorio con una selección menos
especializada de sus hospederos, lo que puede
98
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
asociarse, además, con la presencia de cabras y
animales de pastoreo en la región. Por otra parte,
el aumento de los BR en hembras del peridomicilio
podría relacionarse con la alta densidad de
insectos observada en campo, ya que estas
sensilias han mostrado ser susceptibles a la
densidad poblacional (23), perciben estímulos
mecánicos relacionados con el micro hábitat (18)
y se han asociado con la selección del hábitat
más que con la del huésped (20).
La asociación entre las hembras domiciliadas de
T. dimidiata de la zona urbana con el peridomicilio
rural podría explicarse por el transporte e
intercambio que hace el hombre de animales desde
una zona a otra en los días de mercado. Otros
estudios sugieren que insectos del peridomicilio
y silvestres de T. dimidiata vuelan estacional-
mente hacia las viviendas debido a cambios en
la disponibilidad de alimento (39).
Las poblaciones peridomiciliadas y silvestres de
T. dimidiata representan un riesgo epidemiológico
para la población humana debido a su dispersión
pasiva o activa hacia las viviendas rurales y
urbanas en esta zona del país. El control de estas
poblaciones es actualmente un reto para los
programas de control vectorial (12).
Finalmente, el fenotipo antenal de las sensilias
fue útil en la diferenciación intraespecífica de T.
dimidiata según el hábitat. El estudio de los nichos
dentro de los hábitats es escaso y su estructura,
junto con factores bióticos y abióticos, debe
estudiarse en profundidad para el conocimiento
de la relación del sistema sensorial y la explotación
del hábitat.
Las diferencias del fenotipo antenal observado en
hembras revelan una mayor plasticidad fenotípica
en la diferenciación y adaptación a diferentes
hábitats, como también se observó en estudios
de morfometría de la cabeza de T. dimidiata y T.
infestans (40,41). La rápida adaptación de las
hembras a las nuevas condiciones ecológicas
pone de manifiesto nuevos arreglos sensoriales
característicos de ese hábitat; por otra parte, la
ausencia de diferenciación en el fenotipo antenal
de machos podría ser un indicador de mayor
dispersión entre hábitats.
Biomédica 2007;27(supl. 1):92-100
La similitud entre las hembras de zona urbana y
las hembras de peridomicilio rural permite proponer
el fenotipo antenal como un sencillo y eficiente
indicador para el reconocimiento del origen de
triatominos que intentan colonizar nuevos hábitats.
Estas metodologías podrían utilizarse en los
programas de vigilancia entomológica.
Agradecimientos
A Jean Pierre Dujardin por su asesoría y
colaboración en el análisis de datos; a
COLCIENCIAS por el apoyo financiero; a las
comunidades de Macaravita y Capitanejo, y a los
técnicos de la Secretaria de Salud de Santander
por la colaboración en el trabajo de campo.
Conflicto de interés
Los autores declaramos que no existe ningún
conflicto de intereses en este trabajo.
Financiación
Financiado por Colciencias, proyectos códigos
1102-04-13009, 1102-04-13010 y 1102-04-13029.
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Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius

ARTÍCULO ORIGINAL

Comparación de los patrones de alimentación y defecación de

Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus (Hemiptera,
Reduviidae, Triatominae) en condiciones de laboratorio
Andrea Arévalo 1, Julio César Carranza 1, Felipe Guhl 2, Jairo A. Clavijo 3,
Gustavo Adolfo Vallejo 1
1
Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima,
Ibagué, Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical, Universidad de los Andes, Bogotá
D.C., Colombia.
3
Departamento de Matemáticas y Estadística, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima, Ibagué,
Colombia.

Introducción. Rhodnius colombiensis ocasionalmente ingresa a las viviendas humanas por lo

cual se ha sugerido que podría desempeñar un importante papel en la transmisión de la
tripanosomiasis americana.
Objetivo. Definir el desempeño de R. colombiensis como vector, comparando los patrones de
alimentación y defecación con los de R. prolixus, el principal vector domiciliado de Trypanosoma
cruzi en Colombia.
Materiales y métodos. Para cada estadio de R. colombiensis y R. prolixus se estudió el tiempo
promedio para iniciar la picada, el tiempo para alcanzar la repleción, el número de interrupciones
y defecaciones durante la comida, el tiempo transcurrido entre el fin de la alimentación y la
primera defecación, el número de defecaciones durante 10, 60 y 95 min después de la comida
y la cantidad de sangre ingerida.
Resultados. El tiempo promedio para iniciar la picada de las ninfas N5, machos y hembras
presentaron diferencias significativas entre las dos especies. El promedio de defecaciones
por insecto durante los 10 min después de la alimentación fue mayor para cada estadio de R.
prolixus y presentó diferencias significativas con R. colombiensis. Por otro lado, el peso
promedio de sangre ingerida por R. colombiensis y R. prolixus en cada estadio presentó
diferencias significativas en N1, N2, N5 y hembras.
Conclusión. R. colombiensis presenta menor número de defecaciones que R. prolixus durante
la comida. Un mayor porcentaje de R. prolixus defecan durante los 10, 60 y 95 min después de
la alimentación. Sin embargo, R. colombiensis permanece mayor tiempo asociado al hospedero
vertebrado, lo cual aumentaría la probabilidad de transmisión teniendo en cuenta el ingreso
ocasional de los adultos a las viviendas humanas y sus elevadas prevalencias con T. cruzi y T.
rangeli.
Palabras clave: Rhodnius/fisiología, defecación, crecimiento y desarrollo, Trypanosoma,
enfermedad de Chagas.
Comparison of feeding and defecation patterns of Rhodnius colombiensis and Rhodnius
prolixus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) under laboratory conditions.
Introduction. Rhodnius colombiensis occasionally comes into human dwellings and
consequently its role as an important potential vector in the transmission of American
trypanosomiasis has been suggested.
Objective. The potential role of R. colombiensis as vector was defined by comparing the feeding
and defecation patterns between R. colombiensis and R. prolixus, the main domiciliary vector
of Trypanosoma cruzi in Colombia.
Materials and methods. For each developmental stage of R. colombiensis and R. prolixus the
following data were collected: (1) time of feeding initiation, (2) the time for reaching the repletion,

101
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9

(3) the number of interruptions and defecations during the feeding, (4) the time between the
end of the feeding and the first defecation, (5) the number of defecations during 10, 60 and 95
minutes of observation after feeding, and (6) the quantity of blood ingested.
Results. The mean time of feeding initiation of the fifth instar nymphs, males and females,
showed significant differences between the two species. The average of insects that defecated
within 10 minutes after feeding was higher for each successive stage of R. prolixus and showed
significant differences with Rhodnius colombiensis . In contrast, the mean weight of blood
ingested by each stage of R. colombiensis and R. prolixus was significantly different between
the N1, N2, N5 and females of these species.
Conclusion. Rhodnius colombiensis produced fewer defecations than R. prolixus during feeding.
A higher percentage of R. prolixus defecated within 10, 60 and 95 minutes after feeding.
However, R. colombiensis remains a longer time in contact with the vertebrate host, thus raising
the probability of its role in transmission considering its occasional entry to human dwellings
and its higher prevalences of infection withT. cruzi and T. rangeli.
Key words: Rhodnius, physiology, defecation, growth and development, Trypanosoma, Chagas
disease.
El género Rhodnius incluye 16 especies, en gran importancia para comprender la dinámica de
algunas de las cuales se han descrito las transmisión de T. cruzi. Varios autores han demos-
características biológicas, bioquímicas y trado que algunas especies de triatominos no
moleculares (1). R. colombiensis es una especie defecan durante, ni tampoco inmediatamente
recientemente descrita, que con R. pallescens y después de la comida, mientras que otras especies
R. ecuadoriensis conforman el grupo “pallescens” son muy eficientes en la transmisión de T. cruzi
de la cordillera de los Andes en el noroeste de debido a las altas tasas de defecación durante el
América del Sur (2). Por otro lado, R. colombiensis alimento y durante los primeros minutos después
se ha encontrado asociada a las palmas de vino de la alimentación (4). Estas diferencias en los
(Attalea butyraceae) en la cuenca alta del valle patrones de alimentación y de defecación podrían
del río Magdalena en la región central de Colombia explicar, al menos en parte, las diferencias en las
(3), constituyendo un posible riesgo en la prevalencias de T. cruzi en humanos y en reservorios
transmisión de la enfermedad de Chagas, pues en diferentes regiones de América Latina.
esta especie ocasionalmente ingresa a las
viviendas, presentando elevadas prevalencias de Para contribuir al conocimiento de la biología y el
T. cruzi y T. rangeli (Vallejo GA, Lozano LE, papel de R. colombiensis en la transmisión de la
Carranza JC, Sánchez JL, Jaramillo JC, Guhl F, enfermedad de Chagas en la región central de
et al. Ecología de los triatominos no domiciliados Colombia, se estudió para cada estadio de
en Colombia con especial referencia a Rhodnius desarrollo el tiempo promedio para iniciar la picada,
colombiensis en el departamento del Tolima. En: el tiempo de alimentación hasta la repleción, el
Vallejo GA, Carranza JC y Jaramillo JC editores. número de interrupciones y defecaciones durante
Curso Taller Internacional: Biología, Epidemiología la comida, el intervalo entre el fin de la alimentación
y Control de la Tripanosomosis Americana y y la primera defecación, el número de defeca-
Leishmaniosis. Ibagué, Colombia 2000; p.1-134). ciones durante 10, 60 y 95 minutos de observación
después de la comida y la cantidad de sangre
Los estudios sobre el comportamiento de los ingerida. Con fines comparativos, estos mismos
triatominos durante la toma del alimento son de parámetros se estudiaron en los diferentes
estadios de desarrollo de R. prolixus, especie
Correspondencia:
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en domiciliada que se encuentra en simpatría con R.
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad colombiensis en la cuenca alta del río Magdalena.
del Tolima, A.A. 546, Ibagué, Colombia. Fax (+57-8)
2669176. Materiales y métodos
gvallejo@ut.edu.co R. colombiensis fueron capturados en palmas de
Recibido: 14/03/06; aceptado: 19/05/06 Attalea butyracea y R. prolixus domiciliados

102
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
fueron capturados en la vereda Totarco-Tamarindo
en el municipio de Coyaima, departamento del
Tolima (Colombia central). Las colonias de ambas
especies se mantuvieron a una temperatura de
28 ± 1°C, humedad relativa de 75 a 80% y
fotoperiodicidad de 12/12 horas en una incubadora
automática B.O.D. Lab-Line. Los insectos fueron
alimentados con sangre de gallina semanalmente.
Se compararon las variables sobre alimentación
y defecación de R. colombiernsis y R. prolixus en
tres etapas experimentales. En la primera etapa
se estudió el comportamiento de los insectos
durante el tiempo en que permanecieron tomando
el alimento sobre ratones ICR, para lo cual se
midió el tiempo promedio de picada, el tiempo
promedio para alcanzar la repleción, el promedio
de interrupciones por insecto y el promedio de
defecaciones durante la comida. En la segunda
etapa se estudiaron los patrones de defecación
después de la comida, calculándose el tiempo
promedio para defecar por primera vez después
de la comida y el promedio de defecaciones durante
10, 60 y 95 min. En la tercera etapa se calculó el
peso y volumen de sangre ingerida en promedio
por cada estadio de R. colombiensis y R. prolixus
y se estimó el número de veces que cada estadio
aumentó su peso después de la comida.
Patrones de alimentación y defecación
Para R. colombiensis se utilizaron 30 individuos
de cada estadio, incluidos machos y hembras,
para un total de 210 insectos. Para R. prolixus,
se utilizaron 203 insectos (30 N1; 30 N2; 30 N3;
30 N4; 30 N5; 30 machos y 23 hembras). Cada
individuo fue identificado con marcas de tinta
blanca en el dorso para facilitar la observación.
Grupos de tres a seis insectos fueron alimentados
hasta la repleción sobre ratones ICR sedados con
maleato de acepromacina e inmovilizados con una
malla de nylon. Cada ratón fue puesto en un
recipiente transparente y sujeto con cinta de
enmascarar para evitar movimientos bruscos. Los
insectos se dejaron en el contenedor entre 60 y
180 minutos en un cuarto ligeramente oscuro con
una temperatura promedio de 28°C y un mismo
observador los monitorizó continuamente sin
mover el recipiente durante el experimento. Los
tiempos para iniciar la picada y para alcanzar la
Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
repleción se cronometró, se calculó el promedio
de defecaciones durante la comida, así mismo,
se contaron las interrupciones y las defecaciones
durante y después de la comida.
Cantidad de sangre ingerida
En un experimento independiente se calculó la
cantidad de sangre ingerida, para lo cual se
utilizaron 210 R. colombiensis y 210 R. prolixus
(30 por cada estadio de desarrollo). Los insectos
fueron sometidos a 15 días de ayuno, pesados
antes y después de la alimentación en una balanza
analítica y alimentados con sangre de gallina.
Cada individuo se colocó en un vial previamente
marcado para llevar el correspondiente registro.
Análisis estadístico
Para cada variable se calcularon las medias con
los respectivos intervalos de 95% de confianza.
Se utilizó análisis multivariado de varianza
(MANOVA) para comparar los promedios de las
variables en cada estadio de desarrollo de las dos
especies. Para los patrones de alimentación, de
defecación y la cantidad de sangre ingerida de
las ninfas se usó un diseño factorial 5x2
balanceado con 30 réplicas. Para los patrones
de alimentación y defecación de los adultos, el
diseño factorial fue 2x2 desbalanceado. Para la
cantidad de sangre ingerida por los adultos se
utilizó un diseño factorial 2x2 balanceado. Para
las comparaciones se realizó la prueba de Duncan.
El software utilizado fue SAS versión 8.2.
Resultados
Patrones de alimentación y defecación durante
la comida
En el cuadro 1 se presentan los resultados del
comportamiento de R. colombiensis y R. prolixus
durante la comida. Se observó que los tiempos
promedios antes de iniciar la picada (tiempo de
ataque), no presentaron diferencias significativas
entre las dos especies cuando se compararon las
N1, N2, N3 y N4; sin embargo, el tiempo promedio
de ataque de N5, machos y hembras, en R.
colombiensis fue mayor que en R. prolixus, con
diferencias significativas entre las dos especies.
El tiempo promedio para alcanzar la repleción
fue mayor en N2 y N5 R. colombiensis, con
103
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. Biomédica 2007;27(supl.1):101-9

Cuadro 1. Comparación del tiempo para iniciar la comida (tiempo de ataque), tiempo de comida hasta repleción, interrupciones y defecaciones
durante la alimentación de Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus sobre ratón Mus musculus. El tiempo está expresado en minutos:segundos.

Tiempo de ataque Tiempo para comer hasta repleción Interrupciones por insecto Defecaciones durante la comida
Estadio (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%)

Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores Rhodnius Rhodnius Valores
colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p colombiensis prolixus p

N1 0:10,5 0:7 13:3 12:31,8 0,07 0,3

(0* - 0:27,7) (0:2,8 – 0:11,2) 0,6867 (10:6,3 – 15:59,7) (10:0,9 – 15:2,7) 0,7851 0 0,3 (0,02 – 0,6) 0,0324 (0 – 0,2) (0,03 – 0,5) 0,1169

N2 0:7,1 0:1,7 13:57 10:11,2 0,2

(0:0,5 – 0:13,7) (0:1,1 – 0:2,4) 0,1025 (10:39,4 – 17:14,5) (9:1,8 – 11: 20,5) 0,0315 0,3 (0* - 0,7) 0,3 (0,02 – 0,6) 0,9018 0 (0,04 – 0,4) 0,0139

N3 0:4,4 0:4,9 13: 56,4 14:51 0,4

(0:1,4 – 0:7,4) (0:1,8- 0:8,1) 0,8144 (11:31,6 – 16:21,2) (12:29 -17:13,3) 0,5854 0,2 (0* - 0,4) 0,8 (0,4 – 1,3) 0,0145 0 (0,2 – 0,6) 0,0006

N4 1:8,1 0:23 22:12 18:44,4 0,8

(0:25,2 – 1: 50,9) (0:4,1 – 0:41,9) 0,0538 (18:8- 26:16) (15:21- 22: 7,8) 0,1866 0,3 (0,05 - 0,5) 0,5 (0,2 – 0,9) 0,2148 0 (0,1 – 1,4) 0,0214

N5 3:33,4 1:39 30:48 23:13,3 0,4

(2:13,1- 4: 53,8) (0:35,1 – 2: 42,1) 0,0255 (25:35 – 36:1) (18:48,3 – 27:38,3) 0,0271 1,5 (0,4 - 2,6) 0,9 (0,4 – 1,5) 0,4045 0 (0,04 – 0,8) 0,0274

Hembras 1:56 0:14,9 20:21,3 19:13 0,3

(0:49,1 – 3:2,8) (0* - 0:38,6) 0,0118 (14:21,1 – 26:21,4) (13:20,1 – 25:5) 0,7847 1,5 (0,8 - 2,1) 1,5 (0,9 – 2,1) 0.9785 0 (0 – 0,8) 0,1034

Machos 1:48 0:8,2 19:23,1 13:36 0,03

(0:7,1- 3:29) (0:0,05 – 0:16,3) 0,0484 (13:30,3 – 25:16) (10:51- 16:21,2) 0,0736 1,1 (0,3 – 1,9) 0,7 (0,4 – 0,9) 0,3032 (0 – 0,1) 0 0,3215

diferencias significativas entre las dos especies durante los primeros 10 minutos fue mayor en
(cuadro 1). todos los estadios de R. prolixus, presentando
diferencias significativas con los estadios de R.
De acuerdo a las observaciones realizadas, la
colombiensis . Así mismo, el promedio de
mayoría de los estadios de desarrollo de R.
defecaciones acumuladas por insecto durante 60
colombiensis y R. prolixus interrumpieron la toma
minutos de observación fue mayor en R. prolixus,
del alimento; la única excepción fue N1 de R.
presentando diferencias significativas con las N1,
colombiensis, pues ningún insecto de este estadio
N3, N4, N5 y hembras de R. colombiensis. De
interrumpió su alimentación. El promedio de
igual manera, después de 95 minutos de
interrupciones por insecto entre R. colombiensis
observación, el promedio de defecaciones
y R. prolixus presentó diferencias significativas
acumuladas por insecto fue mayor en R. prolixus,
en N1 y N3.
presentando diferencias significativas con N1, N3,
Por otro lado, el promedio de defecaciones por N4, N5, hembras y machos de R. colombiensis
insecto durante la comida fue mayor en R. prolixus, (cuadro 2).
presentando diferencias significativas con los
Cantidad de sangre ingerida
mismos estadios de R. colombiensis; los N1, las
hembras y los machos no presentaron diferencias La comparación de la sangre ingerida por los
significativas al comparar el promedio de defeca- distintos estadios de R. colombiensis y de R.
ciones durante la comida en las dos especies. prolixus se muestra en el cuadro 3. El peso
promedio y el volumen promedio de sangre ingerida
Patrones de defecación después de la comida
presentó diferencias significativas entre N1, N2,
El cuadro 2 presenta los patrones de defecación N5 y hembras de las dos especies; las ninfas N3,
de R. colombiensis y R. prolixus después de la N4 y los machos no presentaron diferencias
toma del alimento. El tiempo promedio para significativas en el peso y volumen de sangre
defecar por primera vez después de la toma del ingerida. Con relación al número de veces que
alimento fue mayor en todos los estadios de R. cada estadio aumentó su peso inicial después de
colombiensis , presentando diferencias la comida, se observaron diferencias significativas
significativas con los estadios de R. prolixus. Por entre las N2, N5 y hembras; los demás estadios
otro lado, el promedio de defecaciones por insecto no presentaron diferencias significativas. Las N5

104
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9 Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius

Cuadro 2. Comparación del tiempo para defecar por primera vez después de la comida; defecaciones después de diez
minutos, una hora y noventa y cinco minutos entre Rhodnius colombiensis y R. prolixus. El tiempo está expresado en
minutos:segundos. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.

Tiempo para defecar por primera vez Defecaciones por insecto durante Defecaciones por insecto durante Defecaciones por insecto durante
después de la comida. los primeros 10 minutos la primera hora durante los 95 minutos
(intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%) (intervalo de confianza del 95%)

Estadio Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius

colombiensis prolixus Valores p colombiensis prolixus Valores p colombiensis prolixus Valores p colombiensis prolixus Valores p

N1 38:12,6 11:10,8 0,07 0,8 2,3 3,7 3,7 5,5

(29:23 – 47:2,6) (7:4,2 – 15:17,4) 0,0001 (0 – 0,2) (0,5 – 1,0) 0,0001 (1,6 – 2,9) (2,8 – 4,4) 0,0109 (2,8-4,5) (4,6-6,5) 0,0044

N2 30:32,4 11:37,2 0,07 0,9 2,3 3,2 4,2 4,8

(23:0,8 – 38:3,9) (5:54,9 – 17:19,5) 0,0001 (0 – 0,2) (0,6 – 1,1) 0,0001 (1,8 – 2,9) (2,3 – 4) 0,0897 (3,4-5,1) (3,7-5,8) 0,4329

N3 33:48 11:46 0,1 0,9 1 2,1 3,8 3,8 5,7

(26:16,5 – 41:20) (6:22,9 – 17:8,3) 0,0001 (0 – 0,2) (0,2 – 0,6) 0.0001 (1,5 – 2,6) (3,6 – 4,5) 0,0001 (3,1-4,4) (4,9-6,6) 0,0004

N4 54:46 9:54,8 0,03 0,8 1 3,0 2,1 4,1

(43:13,4 – 66:18,2) (3:7 – 16:42,5) 0.0001 (0 – 0,1) (0,6 – 1,1) 0,0001 0,6 – 1,4) (2,4 – 3,5) 0,0001 (1,4-2,7) (3,4-4,8) 0,0001

N5 53:43,5 12:3,6 0,07 0,8 0,7 4,6 1,7 6,4

(42:0,7 – 65:26,2) (4:58,6 – 19:8,7) 0.0001 (0 – 0,2) (0,5 – 1,1) 0,0001 (0,4 – 1) (3,6 – 5,7) 0,0001 (1,2-2,2) (5,0-7,7) 0,0001

Hembras 58:27,1 22:22 0,07 0,9 0,7 3,7 1,5 5,5

(48:22,1 – 68:32) (7:7 – 37:37) 0,0001 (0 – 0,2) (0,6 – 1,2) 0.0001 (0,3 – 0,9) (2,5 – 5) 0,0001 (1,0-2,0) (3,9-7,0) 0,0001

Machos 68:28,2 47:34 0,03 0,4 0,7 1,5 1,3 2,6

(57:24,4 – 79:32) (33:32 – 61:35) 0,0199 (0 – 0,1) (0,1 – 0,6) 0,0108 (0,3 – 1,1) (0,8 – 2,1) 0,0501 (0,7-1,9) (1,7-3,5) 0,0240

Cuadro 3. Comparación de la cantidad de sangre ingerida por cada estadio de desarrollo de Rhodnius colombiensis y
Rhodnius prolixus. El nivel de significación es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.

Estadios Promedio de sangre ingerida (mg) Volumen de sangre ingerida (µl) Número de veces que aumenta su
Variables (Intervalo de confianza del 95%) (Intervalo de confianza del 95%) peso inicial después de la comida
(Intervalo de confianza del 95%

Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius Rhodnius

colombiensis prolixus Valores p colombiensis prolixus Valores p colombiensis prolixus Valores p

N1 3,3 2,9 3,1 2,8 7,7 7,7

(3,0 - 3,5) (2,9 - 3,1) 0,0339 (2,8 – 3,3) (2,7 – 2,9) 0,0338 (6,6 – 8,7) (6,9 – 8,4) 0,9842

N2 9,4 10,6 8,7 10,1 7 8,9

(8,6 - 10,2) (9,7 - 11,5) 0,0445 (7,7 – 9,6) (9,3 – 11) 0,0205 (6,4 – 7,7) (8,0 – 9,7) 0.0009

N3 27,8 30,1 26,7 28,9 8,8 8,4

(24,8 - 30,8) (27,3 - 32,9) 0,2425 (23,8 – 29,5) (26,3 – 31,6) 0,2387 (7,8 – 9,7) (7,7 – 9,0) 0,4424

N4 74,3 77,6 71,5 74,6 8,5 8,2

(64,4 - 84,2) (70,8 - 84,4) 0,5789 (62 - 81) (68,1 – 81,2) 0,58 (7,4 – 9,6) (7,3 – 9,0) 0,6386
N5 237,9 207 228,9 199,2 8,6 7,4
(215,7 - 260,2) (188,4 - 225,6) 0,0332 (207,6 – 250,4)(181,3 – 217,1) 0,0332 (7,6 - 9,6) (6,7 – 8,1) 0,0444

Hembras 99,6 122,8 95,8 118,2 2,2 2,9

(82,6 - 116,6) (110,4 - 135,2) 0,0281 (79,4 – 112,2) (106,2 – 130,1) 0,0280 (1,9 – 2,6) (2,6 – 3,2) 0,0054

Machos 65,4 69,4 62,9 66,7 2 2,2

(57,6 - 73,3) (60 - 78,7) 0,5137 (55,4 – 70,5) (57,7 – 75,7) 0,5147 (1,9 – 2,2) (2 – 2,5) 0,1249

de las dos especies fueron los estadios con mayor Discusión

avidez por el alimento, pues ingirieron entre dos y
Patrones de alimentación y defecación durante
tres veces más sangre que el promedio de los
la comida
adultos. En los adultos de ambas especies, los
machos ingirieron menos sangre que las hembras La comparación entre R. colombiensis y R.
(cuadro 3). prolixus mostró evidentes diferencias en los

105
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F.
patrones de alimentación y defecación entre las
dos especies y entre los diferentes estadios dentro
de cada especie. Una interesante observación fue
que las ninfas N1, N2, N3 y N4 de R. colombiensis
y R. prolixus no presentaron diferencias
significativas en el tiempo promedio para iniciar
la picada sobre ratones ICR, mostrando el mismo
grado de avidez por la toma del alimento en las
condiciones experimentales utilizadas. Por otro
lado, las N5, los machos y las hembras de R.
prolixus iniciaron más rápido la toma del alimento
que los mismos estadios de R. colombiensis
(cuadro 1). Aunque los adultos de R. colombiensis
son más tímidos para la toma del alimento,
ingresan a las viviendas atraídos por la luz o por
diferentes fuentes de alimento. La frecuencia con
que los adultos de R. colombiensis ingresan a las
viviendas fue confirmada en la encuesta
entomológica realizada en el departamento del
Tolima en el año 2000, en la cual se capturaron
adultos de R. colombiensis en el interior de las
viviendas de los municipios de Alvarado, Carmen
de Apicalá, Coyaima, Coello, Guamo, Ibagué,
Icononzo, Lérida, Libano, Ortega, Prado,
Purificación, Santa Isabel y San Luis, los cuales
constituían el 33% de los municipios encuestados
(Guhl F et al. Implementación de la Etapa III del
Programa Nacional de Prevención y Control de la
Enfermedad de Chagas y la Cardiopatía Infantil.
Región Centro Oriental: Departamento del Tolima.
Informe Final. Universidad de los Andes). Previas
observaciones en el municipio de Coyaima,
Tolima, mostraron que en R. colombiensis adultos
capturados en el interior de las viviendas y en
adultos capturados en las palmas aledañas a las
viviendas, la infección por T. cruzi alcanzó una
prevalencia del 98% (datos no publicados). Por
otro lado, el examen de 396 R. prolixus
domiciliados en la misma área geográfica mostró
una prevalencia general del 3,03% de T. cruzi (5).
De conformidad con lo anterior se podría esperar
que cualquier adulto de R. colombiensis que logre
picar y defecar sobre un vertebrado del domicilio
humano presentaría mayor probabilidad para la
transmisión de T. cruzi que las ninfas y los adultos
de R. prolixus domiciliados en esta región.
La comparación de los datos obtenidos en el
presente estudio con datos de otros autores es
106
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
difícil debido a las diferencias en variables
experimentales como la temperatura ambiente,
humedad relativa y fuente de alimento, o al uso
de pequeños números de insectos, entre otras.
Adicionalmente, existen variaciones inter e
intraespecíficas en el comportamiento de
triatominos como Triatoma dimidiata, en la que
se observó que las ninfas de primer estadio son
más tímidas para iniciar la picada que los
restantes estadios (4). Por otro lado, Rocha da
Silva D. et al mostraron que los adultos de R.
pictipes presentan mayor timidez y que, por lo
tanto, en ellos transcurre mayor tiempo entre el
ofrecimiento de la comida y la picada (6).
Igualmente se observó en los adultos de T.
brasilensis un mayor tiempo entre el ofrecimiento
de la comida y la picada que en los demás estados
ninfales; en T. pseudomaculata las N4 fueron más
tímidas para la toma del alimento que los demás
estadios ninfales (7). Una posible causa de esta
variabilidad en el comportamiento de los
triatominos con relación al tiempo transcurrido
entre el ofrecimiento de la comida y la picada
podría ser la fuente de alimento, como fue sugerido
por Martínez-Ibarra et al., quienes observaron que
cuando Meccus picturatus es alimentado sobre
gallinas, los adultos son más tímidos para iniciar
la picada que los restantes estadios ninfales, pero
cuando esta misma especie es alimentada sobre
conejos, las N4 son las más tímidas (8).
El tiempo desde la picada hasta la repleción total
del insecto fue mayor en R. colombiensis, que
presentó diferencias significativas con las N2 y
N5 de R. prolixus; en los demás estadios de
desarrollo no se presentaron diferencias
significativas. En el presente trabajo se destaca
el hecho de que las N5 de R. colombiensis y de
R. prolixus presentaron el mayor tiempo para
obtener la repleción; otros autores también han
reportado que las N5 de diferentes especies gastan
mayor tiempo para la repleción, como fue
observado en N5 de T. dimidata y R. prolixus (4),
N5 de T. brasiliensis y T. seudomaculata (7) y N5
de M. picturatus (8). Una explicación a este
especial comportamiento de las N5 estaría
relacionada con que precisamente las N5 son los
estadios que mayor cantidad de sangre ingieren
con relación a todos los demás estadios de
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
desarrollo, lo que a su vez demanda mayor tiempo
para alcanzar la repleción, pues las N5 requieren
una suficiente cantidad de alimento para la
adquisición de nuevas estructuras anatómicas
durante la muda al estado adulto. Los tiempos
para alcanzar la repleción disminuyeron en los
adultos de ambos sexos de R. colombiensis y R.
prolixus; de igual manera, se observó disminución
en los adultos de T. dimidiata, T. infestans y R.
prolixus (4), T. brasiliensis y T. pseudomaculata (7).
Trabajos previos también mostraron una extensa
variación, puesto que el tiempo hasta la repleción
se ve afectado por el tipo de alimento y por el
tamaño de la especie del insecto, entre otras
variables. En este orden de ideas, Zeledón et al.
(4) mostraron que los promedios generales del
tiempo para alcanzar la repleción son mayores
en T. dimidiata y T. infestans que en R. prolixus.
Algunos autores plantean una relación directa
entre los patrones de defecación antes de finalizar
la comida y las frecuentes interrupciones durante
ésta, como sucede con T. dimidiata (4). Por otro
lado, se pueden presentar variaciones en las
interrupciones durante el proceso de alimentación,
incluso entre las mismas especies, posiblemente
por el origen de la cepa o por la temperatura bajo
la cual se realizan las observaciones (4,9). Para
explicar la razón de las interrupciones se han
observado las señales eléctricas de la bomba
cibarial de varias especies de Rhodnius cuando
ésta se contrae para succionar la sangre. Se
concluyó que las interrupciones probablemente se
deben al hallazgo de otro vaso sanguíneo por parte
del vector, ya que en muchas ocasiones el proceso
de alimentación fue interrumpido aun sin retirar el
rostro del huésped, lo cual se verificó por señales
eléctricas irregulares en la bomba cibarial (Viana
Sant’ Anna MR, Diotaiuti L, Figueiredo Gontijo A,
Figueiredo Gontijo N, Pereira MH. Feeding
behaviour of morphologically similar Rhodnius
species (Hemiptera: Reduviidae): influence of
mechanical characteristics and salivary function.
En: Guhl F, Schofield CJ, editors. Cuarto Taller
Internacional sobre Genética Poblacional y Control
de Triatominos (ECLAT 4). Punta Iguana,
Cartagena, Colombia, 2002. p. 139-50).
Los únicos estadios de R. colombiensis que
defecaron durante la comida fueron las N1 y los
Patrones de alimentación y defecación de Rhodnius
machos. Así mismo, el mayor promedio de
interrupciones durante la comida lo exhibieron las
N5 y las hembras, pero en estos estadios no se
llevó a cabo ninguna defecación durante la toma
del alimento (cuadro 1). El patrón descrito mostró
que no existe una relación directa entre el número
de interrupciones y el número de defecaciones
durante la comida en R. colombiensis, es decir
que existieron individuos que defecaron durante
la alimentación sin interrumpir tal proceso, o que
lo interrumpieron sin efectuar ninguna defecación
durante éste. En R. prolixus se observó que el
promedio de defecaciones durante la toma del
alimento fue mayor y presentó diferencias
significativas con N2, N3, N4 y N5 de R.
cololombiensis . Por otro lado, en todos los
estadios de R. prolixus se presentaron
interrupciones durante la comida, indicando una
posible relación entre las interrupciones y las
defecaciones durante la comida. Esta diferencia
entre R. prolixus y R. colombiensis en relación
con el número de defecaciones durante la toma
del alimento indica que durante la toma del
alimento R. prolixus tiene mayor probabilidad de
transmisión de T. cruzi que R. colombiensis.
Patrones de defecación después de la comida
Como se observó en el cuadro 2, el promedio de
defecaciones por insecto durante los primeros 10,
60 y 95 minutos después de la comida fue mayor
en R. prolixus y presentó diferencias significativas
con R. colombiensis. Por otro lado, al igual que
en otros estudios, se observó que los patrones
más bajos de defecación los presentaron los
machos en las dos especies estudiadas (4,10-12).
Sin embargo, el comportamiento de las dos
especies después de la toma del alimento puede
afectar la eficiencia de la transmisión de T. cruzi.
Se observó que independientemente del estadio,
cuando R. prolixus finaliza la toma del alimento
huye velozmente, pues está adaptado para
refugiarse en grietas o en estructuras anexas al
domicilio, de manera que las defecaciones
después de la toma del alimento son depositadas
lejos del huésped vertebrado, principalmente en
paredes y techos de palma. Por el contrario,
cuando R. colombiensis finaliza la toma del
alimento, permanece junto al huésped. Este
107
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F.
comportamiento podría explicarse porque en
condiciones naturales vive estrechamente
asociado a nidos de Didelphis marsupialis, en
espacios muy reducidos conformados por las
brácteas de las palmas de vino A. butyraceae, y
permanece y defeca muy cerca o sobre el huésped
vertebrado. De esta manera, R. colombiensis
compensaría la falta de defecación durante el
alimento, asegurando una eficiente transmisión
para D. marsupialis, en la que se han observado
prevalencias del 89% de T. cruzi en individuos
capturados en Coyaima (Tolima) (datos no
publicados).
Como se mencionó anteriormente, el promedio de
defecaciones durante la toma del alimento
promueve la transmisión de T. cruzi directamente
sobre el vertebrado por parte de R. prolixus, pero
en menor grado por R. colombiensis. Sin embargo,
aunque el promedio de defecaciones después de
10, 60 y 95 minutos es mayor en R. prolixus que
en R. colombiensis, las diferencias en el compor-
tamiento entre las dos especies podrían afectar
la eficiencia de la transmisión, pues como se
mencionó, R. prolixus huye del huésped y R.
colombiensis permanece cerca de él, de manera
que después de la toma del alimento compensaría
su eficiencia para la transmisión del parásito.
Aunque no existen datos sobre la relación de R.
colombiensis y los vertebrados domésticos,
asumimos que cuando adultos de R. colombiensis
ingresan esporádicamente al interior de las
viviendas humanas, podrían permanecer cerca de
los vertebrados, aumentando así la probabilidad
de transmisión de T. cruzi.
Cantidad de sangre ingerida
La cantidad y calidad del alimento ingerido es
importante en el desarrollo de los triatominos
debido a que el número de huevos producidos por
las hembras está directamente relacionado con
la cantidad de sangre ingerida (13-16). El peso
promedio de la cantidad de sangre ingerida varía
de una especie a otra, llegando a ser diferente en
muchos casos dentro de la misma especie,
inclusive cuando se utiliza la misma fuente de
alimento (13). Las N5 necesitan obtener suficientes
reservas energéticas para efectuar la última muda
hacia el estadio adulto; por tal razón, los promedios
108
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
de la cantidad de sangre ingerida llegaron a
duplicar la cantidad ingerida por las hembras y a
triplicar la ingerida por los machos.
La cantidad de sangre que ingiere R. colombiensis
es similar a la que ingieren otras especies
selváticas como R. pictipes alimentado
artificialmente y sobre ratón (13) y R. brethesi (17).
Cuando se comparan los patrones de alimentación
y defecación de R. colombiensis con los de R.
prolixus, se observa que esta última especie
presenta un comportamiento que favorece la
transmisión de T. cruzi, por cuanto R. prolixus
presenta mayor número de defecaciones durante
la comida y un mayor porcentaje de insectos que
defecan durante los primeros 10, 60 y 95 minutos
después la alimentación. Aunque R. colombiensis
presenta menor número de defecaciones que R.
prolixus, es necesario tener en cuenta que R.
colombiensis permanece mayor tiempo cerca del
hospedero vertebrado, aumentando así la
probabilidad de transmitir T. cruzi al vertebrado.
De las 15 especies de Rhodnius descritas, tres
de ellas se encuentran comúnmente en ambientes
domésticos (R. prolixus , R. pallescens y R.
ecuadoriensis); las demás especies se registran
principalmente en ambientes arbóreos como las
brácteas de las palmas y las bromelias. Sin
embargo, desde hace varias décadas, en varios
países de América Latina se ha señalado el
comportamiento de varias especies de Rhodnius
que ingresan a las viviendas con frecuencias
progresivas, entre las que se destacan R.
neglectus, R. pictipes y R. nasutus (18). Más
recientemente se presentaron evidencias sobre
el papel putativo de R. robustus como vector
extradomiciliario de la enfermedad de Chagas en
el occidente de Venezuela, pues esta especie es
atraída por la luz artificial, y la transmisión de T.
cruzi podría ocurrir cuando se alimenta sobre las
personas de las viviendas (19).
Hasta el momento no se conoce el papel de R.
colombiensis en la transmisión de T. cruzi en áreas
en donde esta especie existe en cercanías al
peridomicilio humano. Se ha comprobado que los
adultos R. colombiensis invaden con frecuencia
el domicilio humano, presentando elevadas
prevalencias de T. cruzi, lo que aumentaría la
Biomédica 2007;27(supl.1):101-9
probabilidad de transmisión al hombre y a los
animales domésticos. De conformidad con lo
anterior, es de gran importancia estudiar el posible
papel de R. colombiensis en la transmisión de T.
cruzi, especialmente en aquellas áreas en donde
R. prolixus se ha controlado.
Conflicto de intereses
Los autores del presente artículo declaramos que
no teníamos conflictos de intereses de orden
académico, institucional u operacional en el
momento de realización de la investigación.
Financiación
Este trabajo recibió financiación del Instituto
Colombiano "Francisco José de Caldas"
(Colciencias), proyecto 105-05-279-99, y del Fondo
de Investigaciones de la Universidad del Tolima.
También recibió apoyo internacional de la red
ECLAT (European Community–Latin-American
Network for Research on the Biology and Control
of Triatominae).
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109
Vallejo G.A.,
Biomédica Guhl F., Carranza
2007;27(Supl. J.C. et al
1):110-8 Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8

ARTÍCULO ORIGINAL

Interacción tripanosoma-vector-vertebrado y su relación con la

sistemática y la epidemiología de la tripanosomiasis americana
Gustavo Adolfo Vallejo 1, Felipe Guhl 2, Julio César Carranza 1, Omar Triana 3, Gerardo Pérez 4,
Paola Andrea Ortiz 1, Dairo Humberto Marín 1, Lina Marcela Villa 1, Jazmín Suárez 1,
Isaura Pilar Sánchez 1, Ximena Pulido 1, Ingrid Bibiana Rodríguez 1, Leyder Elena Lozano 1,
Daniel Alfonso Urrea 1, Fredy Arvey Rivera 1, César Cuba-Cuba 5, Jairo Alfonso Clavijo 6
1
Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima,
Ibagué, Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical (CIMPAT), Universidad de los
Andes, Bogotá D.C., Colombia.
3
Laboratorio de Chagas, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de
Antioquia, Medellín, Colombia.
4
Grupo de Investigación en Química de Proteínas, Departamento de Química, Universidad Nacional de
Colombia, Bogotá D.C., Colombia.
5
Unidade de Parasitologia Médica e Biología de Vetores, Facultade de Medicina, Universidade de Brasilia,
Brasilia, DF, Brasil.
6
Departamento de Matemáticas y Estadística, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima, Ibagué,
Colombia.

Introducción. Trypanosoma rangeli es la segunda especie de tripanosoma que infecta al

hombre en América Latina. Se ha observado variabilidad en las características biológicas,
bioquímicas y moleculares en diferentes aislamientos de este parásito.
Objetivo. Estudiar las características morfológicas y moleculares de cepas de T. rangeli aisladas
de diferentes especies de Rhodnius e inoculadas en diferentes especies de vertebrados.
Materiales y métodos. Se utilizaron 19 cepas de T. rangeli aisladas de R. prolixus, R. pallescens
y R. colombiensis en Colombia, R. ecuadoriensis en Perú y R. pallescens en Panamá. Se
evaluó el polimorfismo de los tripomastigotes sanguíneos en ratones ICR y se estudió el
pleomorfismo de la cepa P53 de T. rangeli KP1(-) inoculada en ratón, marsupial y canino. Se
efectuó análisis de ADN polimorfo amplificado aleatorio en 12 cepas aisladas de cuatro
especies de Rhodnius.
Resultados. Se observaron tres grupos discretos en la longitud total de los tripomastigotes
sanguíneos y la cepa P53 presentó diferencias significativas en el tamaño de los tripomastigotes
sanguíneos en ratón, marsupial y canino. El análisis de ADN polimorfo amplificado aleatorio
mostró segregación de las cepas en dos ramas correspondientes a las cepas de T. rangeli
KP1(+) y T. rangeli KP1(-). De otra parte todos las cepas de T. rangeli KP1(-) se agruparon de
acuerdo con las especies de Rhodnius de las cuales fueron aisladas.
Conclusión. Este es el primer estudio que revela una estrecha asociación entre cepas de T.
rangeli y las especies de Rhodnius, confirmando que cada especie de Rhodnius transmite al
hospedero vertebrado poblaciones del parásito con claras diferencias fenotípicas y genotípicas,
lo cual soporta la evolución clonal de estas poblaciones.
Palabras clave: Trypanosoma, Rhodnius, tripanosomiasis/epidemiología, técnica del ADN
polimorfo amplificado aleatorio (RAPD), enfermedad de Chagas.
Trypanosoma rangeli parasite-vector-vertebrate interactions and their relationship to the
systematics and epidemiology of American trypanosomiasis
Introduction. Trypanosoma rangeli is a species of trypanosome second to T. cruzi, that is
infective to humans in Latin America. Variability in the biological, biochemical and molecular
characteristics between different isolates isolates of this parasite have been recorded.
Objective. Morphological and molecular characteristics were recorded from strains of T. rangeli

110
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8 Interacción tripanosoma-vector-vertebrado

that were isolated from different species of Rhodnius and maintained in different vertebrate
species.
Materials and methods. Nineteen strains of T. rangeli were isolated from R. prolixus, R.
pallescens and R. colombiensis in Colombia, R. ecuadoriensis in Peru and R. pallescens in
Panama. Polymorphism of blood trypomastigotes in ICR mice was evaluated and pleomorphism
of P53 strain of T. rangeli KP1(-) inoculated in mouse, marsupial and canine was studied.
RAPD analysis (randomly amplified polymorphic DNA analysis) of 12 strains isolated from four
species of Rhodnius was performed.
Result. Based on the total length of blood trypomastigotes, three discrete groups were observed.
The P53 strain showed significant differences in the size of blood trypomastigotes in mouse,
marsupial and canine. RAPD analysis showed that the strains segregated into two branches
corresponding to strains of T. rangeli KP1(+) and T. rangeli KP1(-). All strains of T. rangeli KP1
(-) clustered according to the species of Rhodnius from which they were isolated .
Conclusion. These data reveal, for the first time, a close association amongst T. rangeli strains
and Rhodnius species, confirming that each species of Rhodnius transmits to vertebrate hosts
a parasite population with clear phenotypic and genotypic differences. This is further evidence
that supports the concept of clonal evolution of these parasites.
Key words: Trypanosoma , Rhodnius , trypanosomiasis/epidemiology, random amplified
polymorphic DNA technique, Chagas disease.

Trypanosoma rangeli es un interesante parásito dos especies (10) o en el diagnóstico serológico

no patógeno para el hombre, que exhibe
particulares características biológicas, entre las
cuales se destacan la patogenicidad del parásito
para el vector (1-3), la susceptibilidad de las
especies de Rhodnius a cepas de T. rangeli del
mismo origen geográfico (4,5), la reacción
serológica cruzada de T. rangeli con T. cruzi (6,7)
y la resistencia de los flagelados a la lisis mediada
por el complemento (8), entre otras. Por ello, du-
rante las últimas décadas, T. rangeli ha sido objeto
de estudio por parte de varios grupos de
investigación que han encontrado en este parásito
un importante modelo para conocer los procesos
coevolutivos entre parásito-vector y para estudiar
la dinámica de la transmisión de subpoblaciones
de T. rangeli al hospedero vertebrado (9). De otra
parte, existe interés en desarrollar métodos para
diferenciar T. cruzi de T. rangeli, debido a que en
la mayoría de los países de América Latina estas
dos especies se encuentran infectando los
mismos vertebrados y vectores, generando
dificultades en el diagnóstico morfológico de las
Correspondencia:
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad
del Tolima, Ibagué, Tolima, Colombia. A.A. No. 546. Telfax
+(57) 8 2669176.
gvallejo@ut.edu.co
Recibido: 23/06/06; aceptado: 14/07/06
de la infección en los vertebrados (6,7,11).
La variabilidad de las poblaciones de T. rangeli
se ha demostrado en las últimas décadas mediante
estudios de minisatélites de ADN, los cuales
mostraron diferencias genéticas entre las cepas
de Santa Catarina y las aisladas en Honduras,
Colombia y Venezuela (12). El análisis de polimor-
fismos del ADN mitocondrial mostró que el
minicírculo de kDNA denominado KP1 se encontró
asociado con las cepas de T. rangeli aisladas en
Colombia, Honduras y Venezuela, pero no en las
cepas aisladas en Santa Catarina al sureste de
Brasil (13). Una divergencia genética similar entre
estos dos grupos se demostró usando
electroforesis de isoenzimas y AP-PCR (14). Una
conclusión similar se obtuvo con el análisis del
cariotipo molecular de varias cepas de T. rangeli,
revelando la existencia de polimorfismo
cromosómico (15).
Utilizando amplificación del kDNA, en Colombia
y en otros países de América Latina se han detec-
tado dos grupos de T. rangeli molecularmente
diferentes. Un grupo de cepas aisladas de Rhodnius
prolixus presentan tres clases de minicírculos de
kDNA denominados KP1, KP2 y KP3 (T. rangeli
KP1+), mientras que las cepas aisladas de R.
colombiensis presentan solamente dos clases deno-
minadas KP2 y KP3 (T. rangeli KP1-) (9,16-18).

111
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al
Recientemente se caracterizaron 18 cepas de T.
rangeli aisladas de glándulas salivares de R.
colombiensis, R. pallescens y R. prolixus (18)
utilizando dos marcadores independientes: kDNA
(17) y el espaciador intergénico del gen mini-exón
(19). Los autores observaron que el producto de
380 pb de amplificación del mini-exón siempre se
presentó asociado con los productos obtenidos
de los minicírculos KP2 Y KP3 de kDNA y el
producto de 340 pb del mini-exón siempre se
presentó asociado con los productos de los
minicírculos KP1, KP2 Y KP3. Existen dos
hipótesis alternativas sobre el origen de los dos
grupos de T. rangeli; por un lado podría tratarse
de grupos con evolución clonal, en la cual la
reproducción sexual sería rara o inexistente, o se
trataría de un proceso de especiación críptica.
Se encontró asociación coevolutiva entre las
cepas de T. rangeli KP1(-), las cuales circulan en
la cordillera de los Andes en los vectores del grupo
“pallescens”, representados por R. pallescens, R.
colombiensis y R. ecuadoriensis, y las cepas de
T. rangeli KP1(+), las cuales circulan al oriente
de la cordillera de los Andes en los vectores del
grupo “prolixus”, representados por R. prolixus y
R. neglectus (9).
Nuestro interés fue conocer el grado de
divergencia genética existente entre los grupos
de T. rangeli KP1(+) y T. rangeli KP1(-). Por
esta razón, en el presente trabajo se analizaron
las características morfológicas de los tripo-
mastigotes sanguíneos y las características
genéticas mediante análisis de RAPD en cepas
de T. rangeli aisladas de R. pallescens, R.
colombiensis, R. ecudoriensis y R. prolixus para
verificar si los polimorfismos observados en las
poblaciones de este parásito están asociados con
los vectores que las transmiten, de manera que
estos actuarían como filtros biológicos
seleccionando las diferentes poblaciones del
parásito.
Materiales y métodos
Aislamiento y cultivo de los parásitos
Se utilizaron 19 cepas de T. rangeli. Las cepas
Perú 1, Perú 1A y Perú 2A se aislaron de las
glándulas salivares naturalmente infectadas de R.
112
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
ecuadoriensis domiciliado en el departamento de
la Libertad en el norte del Perú; las cepas P53,
Trs, Rcol, 2715 y 044 se aislaron de R.
colombiensis silvestre en el departamento del
Tolima, región central de Colombia; las cepas Gal
47, Gal 57, SO28, SO48 se aislaron de R.
pallescens silvestre en el departamento de Sucre,
norte de Colombia; la cepa 0401 se aisló de R.
pallescens silvestre en el departamento del
Tolima, Colombia; la cepa GMLLC se aisló de R.
pallescens en Panamá; las cepas 444, 1545, 3123
se aislaron de R. prolixus domiciliado en el
departamento de Boyacá, Colombia, y las cepas
P19 y Choachí se aislaron de R. prolixus
domiciliado en los departamentos de Norte de
Santander y Cundinamarca, Colombia. Los
tripomastigotes metacíclicos de las glándulas
salivares de cada vector se inocularon intraperito-
nealmente en ratones ICR. Se efectuaron
hemocultivos a partir de los ratones positivos en
el quinto día posinoculación y las cepas aisladas
se mantuvieron a 28°C mediante pasajes
semanales en medio NNN con LIT suplementado
con 10% de suero fetal bovino inactivado. Todas
las cepas aisladas de R. ecuadoriensis , R.
colombiensis y R. pallescens se caracterizaron
como T. rangeli KP1(-), y las cepas aisladas de
R. prolixus como T. rangeli KP1(+) mediante la
amplificación de kDNA y del espaciador intergénico
del gen min-iexón (17,19).
Estudio morfológico de los tripomastigotes
sanguíneos en ratones ICR
Grupos de tres ratones ICR machos de ±20
gramos se inocularon con 5x106 epimastigotes de
las cepas de cultivo de T. rangeli KP1(-). Otros
grupos de tres ratones ICR machos se inocularon
con 400.000 tripomastigotes metacíclicos de cada
cepa de T. rangeli KP1(+). Los ratones se
examinaron a partir del tercer día de inoculación,
se observó la parasitemia y se dibujaron en
cámara lúcida 30 formas sanguíneas circulantes
de cada una de las cepas en el quinto día
posinoculación. En cada una de las formas
dibujadas se midió la longitud total, la longitud del
flagelo, las distancias del núcleo al extremo pos-
terior y al extremo anterior, los índices nucleares
y los índices del cinetoplasto (20,21). Se realizaron
estimaciones de las medias de la longitud total
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
de los tripomastigotes sanguíneos de las cepas
de T. rangeli en el quinto día posinfección con los
respectivos intervalos de 95% de confianza y se
efectuó análisis multivariado de varianza (MANOVA)
utilizando el programa STATISTICA V4.5.
Estudio morfológico de Trypanosoma rangeli
en diferentes hospederos vertebrados
Para evaluar pleomorfismos de las formas
sanguíneas se seleccionó la cepa P53 de T.
rangeli KP1(-) para infectar dos individuos de Mus
musculus, Didelphis marsupialis y Canis
familiaris, a los que se les inocularon formas de
cultivo que contenían 2x106 parásitos por gramo
de peso corporal. Los tripomastigotes sanguíneos
se aislaron de la sangre de cada uno de los
mamíferos, concentrándolos por centrifugación en
tubo capilar, extendiéndolos y coloreándolos con
Giemsa. Se dibujaron 30 tripomastigotes
sanguíneos circulantes en ratón, canino y didélfido
durante el tercer día posinoculación. A cada una
de las formas dibujadas se les efectuó la toma de
las medidas morfométricas y se realizaron
estimaciones de las medias de la longitud total
de los tripomastigotes sanguíneos de la cepa P53
de T. rangeli en el tercer día posinfección en cada
uno de los mamíferos utilizados con los respec-
tivos intervalos de 95% de confianza; se efectuó
análisis multivariado de varianza (MANOVA)
utilizando el programa STATISTICA V4.5.
Purificación de ADN y obtención de RAPD
El ADN genómico se extrajo de los cultivos de
parásitos mediante el método de fenol-cloroformo
seguido de precipitación con etanol y acetato de
sodio. La concentración del ADN se determinó
por electroforesis mediante comparación con
patrones de concentración conocidos. Para la
obtención del ADN polimorfo amplificado aleatorio
(RAPD) se ensayaron 12 iniciadores a partir de
los cuales se seleccionaron OPBG-02 (5´-
GGAAAGCCCA-3´) y OPBG-013 (5´-GGTTGGGC
CA-3´) (Operon Technologies, Inc.), los que
permitieron obtener los patrones más discrimi-
nantes para analizar todas las cepas. Para las
amplificaciones se utilizó un volumen final de
reacción de 20 µl que contenía 2 ml de buffer de
Taq Polimerasa 10X (INVITROGEN), una mezcla
Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
de dNTPs 200 mM dNTPs, MgCl2 3,5 mM,, KCL
25 mM y 25 mM del iniciador ,1 unidad de Taq
DNA polimerasa (INVITROGEN) y 10 ng de ADN.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se
corrió en una termociclador M.J. Research PTC-
150-16 y se sometió a 35 ciclos de amplificación.
Los perfiles de temperatura para denaturación del
ADN, hibridación y extensión del iniciador fueron
95°C por un minuto (con un tiempo inicial de 5
min), 30°C por un minuto y 72°C por un minuto,
respectivamente, y una extensión final de 5
minutos. Los productos amplificados fueron
separados en geles de poliacrilamida al 6% y
coloreados con nitrato de plata (22). Los perfiles
de RAPD se usaron para la construcción de una
matriz binaria de acuerdo con la presencia (1) o
ausencia (0) de las bandas. El análisis se efectuó
con el programa RAPDPLOT versión 3.0 y se
calculó la matriz de distancias a partir del índice
de bandas compartidas (1-MATCH). El índice de
bandas compartidas (M) se calculó usando la for-
mula: M = NAB/NT, donde NAB es el número to-
tal de apareamientos entre los individuos A y B y
NT es el número total de loci registrados (23).
Con base en los resultados de los perfiles de RAPD
se construyó un dendrograma por el método
UPGMA (Unweighted Pair-Group Method with
Arithmetic Means) utilizando un bootstrap con 100
pseudoréplicas. Las distancias entre los grupos
de parásitos se obtuvieron con el programa
RAPDIST, con el cual se compararon las
distancias genéticas de Nei (24), y se comprobó
la consistencia de los datos de RAPD que
soportan las ramas del dendrograma usando
análisis de bootstrap con 100 pseudoréplicas.
Resultados
Morfología de los tripomastigotes sanguíneos
en ratones ICR
Los resultados del estudio morfológico de 10 cepas
de los tripomastigotes sanguíneos de T. rangeli
en la sangre de ratones infectados experimental-
mente mostró un elevado grado de polimorfismo
de los parásitos en el quinto día de infección. Se
observaron promedios en las longitudes totales
de los tripomastigotes desde 32 hasta 39 µm
mostrando diferencias significativas entre las
diferentes cepas analizadas (figura 1).
113
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al
Morfología de Trypanosoma rangeli en
diferentes hospederos vertebrados
Se observó que la cepa P53 de T. rangeli
presentó diferencias estadísticamente signi-
ficativas entre las tres especies de mamíferos.
Los tripomastigotes sanguíneos fueron más
cortos en ratón que en sangre de Didelphis y aun
más cortos que los observados en sangre de perro
(figura 2).
Figura 1. Comparación de las medias de la longitud total de
30 tripomastigotes sanguíneos de cada una de cuatro cepas
estudiadas en ratones ICR en el quinto día posinoculación.
Se compararon las cepas Gal 57, aislada de R. pallescens,
P53, aislada de R. colombiensis, Perú 1, aislada de R.
ecuadoriensis, y P19, aislada de R. prolixus.
114
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
Obtención y análisis de RAPD
La figura 3 muestra uno de los geles de
poliacrilamida al 6% con los productos
amplificados y coloreados con nitrato de plata.
Con base en los resultados de los perfiles de RAPD
se construyó un dendrograma por el método
UPGMA (Unweighted Pair-Group Method with
Arithmetic Means) utilizando un bootstrap con 100
pseudoréplicas (figura 4). De acuerdo con el
Figura 2. Comparación de las medias de la longitud total de
30 tripomastigotes snaguíneos de la cepa de T. rangeli P53
detectada en el tercer día posinoculación en ratón, zarigüeya
y perro.
Figura 3. Perfiles de RAPD obtenidos a
partir de 12 cepas de T. rangeli con el primer
OPBG13. M corresponde al marcador de
peso molecular. Las canaletas 1, 2 y 3
corresponden a las cepas de T. rangeli
444, 1545, 3123, respectivamente, aisladas
de R. prolixus. Las canaletas 4, 5 y 6,
corresponden a las cepas de T. rangeli
Gal47, SO28 y SO48, respectivamente,
aisladas de R. pallescens. Las canaletas
7, 8 y 9 corresponden a las cepas de T.
rangeli Perú1, Perú1A y Perú2A,
respectivamente, aisladas de R.
ecuadoriensis. Las canaletas 10, 11 y 12
corresponden a las cepas de T. rangeli
P53, TrS y Rcol, respectivamente, aisladas
de R. colombiensis . La canaleta 13
corresponde a una cepa de T. cruzi I y la
canaleta 14 corresponde a una cepa de T.
cruzi II.
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
dendrograma, las doce cepas de T. rangeli se
agruparon en dos ramas. Las cepas 3123, 444, y
1545 aisladas de R. prolixus, caracterizadas como
T. rangeli KP1(+), formaron una rama y las otras
nueve cepas aisladas de las glándulas salivares
del grupo “pallescens”, conformado por R.
pallescens (SO28, Gal 47, SO48), R.
colombiensis (Rcol, P53, Trs) y R. ecuadoriensis
(Perú 2A, Perú 1A, Perú 1), caracterizadas como
T. rangeli KP1(-), formaron una segunda rama con
tres subramas que correspondieron exactamente
a cada una a las cepas aisladas de R. pallescens,
R. colombiensis y R. ecuadoriensis. La figura 5
muestra las distancias de Nei entre los grupos de
parásitos obtenidas con el programa RAPDIST.
Discusión
La interacción entre las subpoblaciones de
tripanosomas con diferentes especies de
triatominos, así como los mecanismos que
regulan la transmisión, son importantes elementos
para la documentación de la epidemiología de la
tripanosomiasis americana. A partir de este
enfoque será posible establecer cuáles
subpoblaciones de tripanosomas son transmitidas
por los vectores en una determinada área
geográfica. De otra parte será igualmente posible
conocer si existen diferencias en la susceptibilidad
a la infección de los hospederos vertebrados.
Adicionalmente, los estudios de la interacción
tripanosoma-triatomino permitirán identificar
procesos coevolutivos para fortalecer las hipótesis
Figura 4. Fenograma generado por UPGMA basado en los
perfiles de RAPD de 12 cepas de Trypanosoma rangeli
aisladas de Rhodnius prolixus (Rpro), R. pallescens (Rpall),
R. colombiensis (Rcol) y R. ecuadoriensis (Recu) . Los
números de la escala horizontal fueron derivados de la
distancia calculada con el programa RAPDPLOT.
Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
Figura 5. Dendrograma generado por RAPDDIST que
muestra las distancias genéticas de Nei entre las cepas de
T. rangeli aisladas de R. prolixus, R. pallescens, R.
colombiensis y R. ecuadoriensis usando el algoritmo UPGMA
y bootstrap de 100 seudoréplicas.
acerca de la filogenia y dispersión de los parásitos
y de los vectores, contribuyendo así a aclarar la
posición taxonómica de las especies semejantes
a T. cruzi o a T. rangeli en América.
Se ha demostrado que las cepas de T. rangeli
aisladas de las especies de Rhodnius del grupo
«pallescens» (R. pallescens, R. colombiensis y
R. ecuadoriensis) denominadas (KP1-) son
genéticamente divergentes de las cepas aisladas
del grupo «prolixus» (prolixus, neglectus)
denominadas (KP1+) (9,17,18), lo que indica una
posible asociación evolutiva entre las
subpoblaciones de T. rangeli y los grupos de
especies de Rhodnius.
La relación entre la diversidad genética del
parásito y su transmisibilidad vectorial no está
completamente entendida, pues se ha mostrado
que las poblaciones de T. cruzi y T. rangeli
difieren en su habilidad para sobrevivir,
multiplicarse y diferenciarse en el insecto vector.
También se ha mostrado que en una misma área
geográfica existen diferencias significativas en-
tre la proporción de genotipos de T. cruzi y T.
rangeli detectados en los vectores y en los
mamíferos. Estas diferencias podrían explicarse
por la transmisión selectiva de algunos genotipos
por parte de los vectores locales, que actuarían
como filtros biológicos del parásito. Se ha
demostrado que en Colombia R. colombiensis
115
Vallejo G.A., Guhl F., Carranza J.C. et al
puede infectarse con T. rangeli KP1(-) y KP1(+),
pero sólo transmite a KP1(-) a través de la picadura
y que R. prolixus se infecta con T. rangeli KP1(-)
y KP1(+), pero solo transmite por picadura a la
subpoblación KP1(+) (17,18). Estos resultados
demuestran que R. prolixus es susceptible a la
infección de T. rangeli KP1(+), pero presenta una
respuesta refractaria a la invasión de cepas de T.
rangeli KP1(-) aisladas de R. pallescens, R.
colombiensis y R. ecuadoriensis. El compor-
tamiento diferencial en la transmisión de estas
dos subpoblaciones se relaciona con la activación
de la respuesta inmune del vector, en la que
factores intrínsecos como la producción de
hemocitos, nódulos y factores tripanolíticos limitan
la infección parasitaria (25). Recientemente se
detectó en la hemolinfa de R. prolixus un factor
tripanolítico contra las cepas de T. rangeli KP1(-)
que corresponde a una proteína termolábil, la cual
sería un factor inmunológico para que R. prolixus
actúe como filtro biológico de subpoblaciones de
T. rangeli KP1(-) (datos no publicados).
En el presente trabajo se detectó un elevado
polimorfismo de los tripomastigotes sanguíneos
medidos en el quinto día posinoculación. El
tamaño promedio de las cepas varió entre 32 y
39 µm, mostrando en general la existencia de
grupos discretos (figura 1). Es interesante el hecho
de que tres cepas aisladas de R. pallescens
mostraron siempre tamaños promedios muy
cercanos a los 40 µm (datos no mostrados),
mientras que las cepas asiladas de R.
colombiensis, R. ecuadoriensis y R. prolixus
mostraron tamaños variables entre 32 y 39 µm.
Esta observación sugiere la existencia de por lo
menos dos grupos morfológicos de T. rangeli. Por
otro lado, estos polimorfismos podrían ser el
resultado de la transmisión selectiva de
subpoblaciones del parásito, de manera que en
las glándulas salivares del vector se desarrollaría
cada vez una subpoblación con características
morfológicas diferentes.
Dentro de una misma especie de tripanosoma
pueden encontrarse variaciones morfológicas
significativas que pueden conducir a la separación
de una misma especie en dos o más especies
diferentes (21). Varios autores han señalado
pleomorfismos o variaciones morfológicas de T.
116
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
rangeli cuando se infectan diferentes vertebrados
con un mismo aislamiento. El pleomorfismo de
los tripomastigotes sanguíneos detectado en el
presente trabajo en ratón, Didelphis y perro al
tercer día posinoculación revela que la longitud
total de estas formas de T. rangeli sería
dependiente del vertebrado en el cual se examina
(figura 2). Estos resultados preliminares indican
que probablemente el vertebrado también
selecciona diferentes subpoblaciones del parásito,
o que la morfología de T. rangeli sería dependiente
de la respuesta inmune del hospedero vertebrado.
El hallazgo de este carácter pleomorfico en T.
rangeli podría contribuir a aclarar la posición
taxonómica de los tripanosomas semejantes a T.
rangeli, tales como T. (H.) mesnilbrimontí, T. (H.)
preguici, T. (H.) myrmecophague, T. (H.) mycetae,
T. (H.) diasi, T, (H.) cebus, T. (H.) saimiri, y T.
(H.) advieri, entre otros, pues como se sabe, estos
parásitos fueron clasificados como especies
diferentes con base en diferencias de tamaño al
ser comparados con cepas de T. rangeli aisladas
de R. prolixus.
Los resultados de la caracterización molecular
preliminar mediante RAPD de las cepas de T.
rangeli (figura 4) muestran una clara divergencia
entre el grupo de cepas KP1(+) y KP1(-), indicando
la existencia de cuatro grupos de T. rangeli
genéticamente divergentes y asociados con R.
prolixus, R. pallescens, R. colombiensis y R.
ecuadoriensis. Estos grupos difieren de los cuatro
grupos de T. rangeli previamente detectados por
Maia da Silva et al. (26), quienes utilizando
análisis de RAPD encontraron un grupo formado
por cepas de T. rangeli de Colombia, Venezuela,
Honduras, la Isla de Marajó, Pará y Rondonia en
Brasil, un segundo grupo formado por las cepas
aisladas en Acre y Pará (Brasil), un tercer grupo
formado por cepas aisladas en Panamá y el Sal-
vador y un cuarto grupo formado por la cepa SC58
aislada en Santa Catarina (Brasil). Los resultados
del presente trabajo, en conjunto con los de otros
autores (26), indican que T. rangeli está formado
por varios grupos genéticamente divergentes,
probablemente asociados a diferentes especies
de Rhodnius. Posteriores estudios filogenéticos
en el grupo de cepas KP1(-), utilizando otros
marcadores moleculares, podrían indicar si estas
Biomédica 2007;27(supl. 1):110-8
cepas evolucionaron de norte a sur en el mismo
sentido que se propone la evolución del cline
conformado por las especies de vectores del grupo
“pallescens”. Por otro lado, los estudios
filogenéticos en el grupo de T. rangeli KP1(+)
podrían arrojar información sobre la evolución de
los parásitos y sus vectores.
Las distancias genéticas de Nei observadas por
medio del análisis de isoenzimas en especies
diferentes de un mismo género varían entre 0,162
y 0,3 en la mayoría de las especies (27). Las
distancias obtenidas entre las subpoblaciones de
T.rangeli en el presente trabajo (figura 5) indicaron
que los grupos más próximos constituídos por las
cepas aisladas de R. pallescens y R. colombiensis
presentaron una distancia genética de Nei de
0,11110; sin embargo, las cepas aisladas de R.
ecuadoriensis presentaron una distancia genética
de 0,19955 con relación al grupo R.pallescens-R.
colombiensis; por otro lado, el cálculo de la
distancia genética de Nei entre poblaciones de T.
rangeli con el empleo de RAPDIST mostró que
las distancias entre T. rangeli KP1(-) y T. rangeli
KP1(+) fueron de 0,30435, lo cual indica una gran
divergencia genética entre estos dos grupos,
semejante a la observada en especies diferentes
de otros organismos (27).
Los resultados de la presente investigación
señalan que la interacción T. rangeli-vector es un
importante modelo, en el cual cada vector del
género Rhodnius transmite subpoblaciones del
parásito fenotípica y genotípicamente divergentes
y que, por lo tanto, los vectores actuarían como
filtros biológicos de dichas subpoblaciones. Es
posible que ocurran fenómenos semejantes en la
transmisión del agente causal de la enfermedad
de Chagas, pues recientemente se han descrito
seis subpoblaciones de T. cruzi (T. cruzi I, T. cruzi
IIa, IIb, IIc, IId y IIe) (28,29), que interactúan con
más de 100 especies de triatominos en diferentes
regiones de América Latina.
Conflicto de intereses
Los autores del presente artículo declaramos que
no teníamos conflictos de intereses de orden
académico, institucional u operacional en el
momento de realización de la investigación.
Interacción tripanosoma-vector-vertebrado
Financiación
El presente trabajo recibió financiación de las
siguientes instituciones: Instituto Colombiano
"Francisco José de Caldas" (Colciencias),
proyecto 1105-05-16919; Chagas Disease Inter-
vention Activities-European Community (CDIA-
EC), contrato No. ICA4-CT-2003-10049; SSA-EC:
Trypanosomiasis Update y Fondo de Investigaciones
de la Universidad del Tolima.
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Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29 Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus

ARTÍCULO ORIGINAL

Comparación del ciclo de vida de Rhodnius colombiensis

Moreno, Jurberg & Galvão, 1999 y Rhodnius prolixus Stal, 1872
(Hemiptera, Reduviidae, Triatominae)
en condiciones de laboratorio
Andrea Arévalo 1, Julio César Carranza 1, Felipe Guhl 2, Jairo Alfonso Clavijo 3,
Gustavo Adolfo Vallejo 1
1
Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima,
Ibagué, Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical, Universidad de los Andes, Bogotá
D.C., Colombia.
3
Departamento de Matemáticas y Estadística, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima, Ibagué,
Colombia.

Introducción. Rhodnius colombiensis es un triatomino silvestre asociado a palmas de vino

(Attalea butyracea) en la cuenca alta del río Magdalena (Colombia). La frecuente invasión de
estos vectores al domicilio y las elevadas prevalencias de Trypanosoma cruzi en infecciones
naturales constituyen un riesgo en la transmisión de la enfermedad de Chagas.
Objetivo. Comparar la duración del ciclo de vida de R. colombiensis y R. prolixus en condiciones
de laboratorio.
Materiales y métodos. Se utilizaron 92 insectos de cada especie. Se estudió la duración de
cada estadio, el número de comidas por estadio, el porcentaje de mortalidad, la causa de
muerte, el promedio de huevos puestos por cada hembra, el número de huevos fértiles y la
longevidad de los adultos.
Resultados. Los promedios de duración de todos los estadios de desarrollo de R. colombiensis
fueron mayores que en R. prolixus , presentando diferencias significativas en el tiempo
transcurrido desde huevo hasta adulto. Los promedios de huevos puestos y huevos fértiles,
presentaron diferencias significativas, siendo mayores en R. prolixus que en R. colombiensis.
El porcentaje total de mortalidad de R. colombiensis fue de 31,5% y de 6,5% para R. prolixus.
La longevidad en las hembras fue mayor en R. prolixus.
Conclusiones. Los estadios de R. prolixus tienen menor duración, las ninfas en general realizan
menor número de comidas que R. colombiensis , los adultos de R. prolixus toman mayor
número de comidas y ovipositan mayor número de huevos fértiles, presentando hembras con
mayor longevidad. Todos estos parámetros indican que R. prolixus presenta mejor éxito
reproductivo que R. colombiensis, en las condiciones experimentales utilizadas. Los datos
inéditos sobre el ciclo de vida de R. colombiensis serán de utilidad para el mantenimiento de
las colonias en el laboratorio.
Palabras clave: Rhodnius, etapas del ciclo de vida, longevidad, tasa de mortalidad.
Comparison of the life cycles of Rhodnius colombiensis Moreno, Jurberg & Galvão, 1999
and R. prolixus Stal, 1872 (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) under laboratory conditions
Introduction. Rhodnius colombiensis is a sylvatic triatomine associated with wine palm trees
(Attalea butyracea) in the high basin of the Magdalena river (Colombia). The frequent invasion
of these vectors into human dwellings and the high prevalences of natural infection with
Trypanosoma cruzi of these insects suggest an important role in the transmission of Chagas
disease.
Objective. The length of the life cycles of R. colombiensis and R. prolixus under laboratory
conditions were compared.

119
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29

Materials and methods. Ninety-two individuals for each species were studied. The mean
duration time of each stage, the number of bloodmeals for each stage, the percentage of
mortality, the cause of death, the mean of eggs laid by female, the number of fertile eggs and the
longevity of adults were recorded.
Results. The mean duration time of all stages of R. colombiensis was higher than in R. prolixus,
producing significant differences in the overall time from egg to adult. The mean of total eggs
and fertile eggs showed significant differences, being higher in R. prolixus than in R.
colombiensis. The total mortality was 31.5% for R. colombiensis and 6.5% for R. prolixus. The
longevity of females was higher in R. prolixus.
Conclusions. The stages of R. prolixus are of relatively short duration. In general, the nymphs
take fewer bloodmeals than R. colombiensis, the adults take more bloodmeals and oviposit a
larger number of fertile eggs, and females have a greater longevity. These parameters indicated
that R. prolixus has superior reproductive success in comparison with R. colombiensis under
the experimental conditions used. These new life cycle data of R. colombiensis will be useful
for maintenance of laboratory colonies.
Key words: Rhodnius, life cycle stages, longevity, mortality rate.

Como consecuencia del aumento de la ha sustituido por cultivos de cachaco (Musa

urbanización y la extensión de cultivos, durante
las últimas décadas se han presentado
intervenciones humanas en ecotopos naturales
de los triatominos silvestres y los reservorios de
Trypanosoma cruzi, lo cual ha favorecido la
interacción de estas especies con el ciclo
peridoméstico y doméstico de la enfermedad de
Chagas (1,2). Por otro lado, los cambios climáticos
pueden ocasionar modificaciones en la
distribución geográfica de las especies e
incremento en el número de comidas, lo cual
implicaría un aumento en la probabilidad de
infección y transmisión, una aceleración del ciclo
biológico y un aumento de la densidad poblacional
en los ciclos de transmisión (3).
Rhodnius colombiensis es una especie silvestre
distribuida en la cuenca alta del río Magdalena, la
cual incluye los departamentos de Cundinamarca,
Tolima y Huila, en donde se encuentra asociada
con palmas de vino ( Attalea butyracea ) en
simpatría con R. prolixus domiciliado en esta
misma región. El hábitat natural de R. colombiensis
en algunos municipios del departamento del
Tolima se ha intervenido sistemáticamente y se
Correspondencia:
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad
del Tolima, A.A. 546, Ibagué, Colombia.
Telefax (+57-8) 2669176.
gvallejo@ut.edu.co
Recibido: 23/03/06; aceptado: 08/09/06
balbisiana ). Estas actividades antrópicas al
parecer han favorecido la adaptación de los
insectos a ecotopos cercanos a las viviendas
humanas (Vallejo GA, Lozano LE, Carranza JC,
Sánchez JL, Jaramillo JC, Guhl F, et al. Ecología
de los triatominos no domiciliados en Colombia
con especial referencia a Rhodnius colombiensis
en el departamento del Tolima. En: Vallejo GA,
Carranza JC y Jaramillo JC editores. Curso Taller
Internacional: Biología, Epidemiología y Control de
la Tripanosomosis Americana y Leishmaniosis.
Ibagué, Colombia 2000. p. 1-134). Por otro lado,
se han encontrado ninfas de cuarto y quinto
estadio, hembras y machos de R. colombiensis
en viviendas y construcciones peridomiciliares de
14 municipios del departamento del Tolima,
constituyendo un indicio de la invasión esporádica
de esta especie al peridomicilio y domicilio
humano (datos no publicados). De manera
semejante, otras especies consideradas
exclusivamente silvestres se han encontrado en
infestaciones domiciliares y peridomiciliares, como
es el caso de Panstrongylus geniculatus en el
estado de Lara en Venezuela y en la cuenca del
Amazonas en Brasil (4,5). En el departamento del
Tolima también se han observado en R.
colombiensis preva-lencias de T. cruzi y T. rangeli
del 45 y 28,6%, respectivamente (datos no
publicados), situación que configura un riesgo para
la transmisión de T. cruzi por parte de este vector.
El éxito de las estrategias de vigilancia y control
de los triatominos no domiciliados en Colombia y

120
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
en América Latina depende en parte del
conocimiento de su biología, de su evolución y
genética, puesto que estas especies constituyen
un riesgo potencial en el desarrollo de procesos
de domiciliación. Por este motivo, en el presente
trabajo se describe el ciclo de vida de R.
colombiensis, la mortalidad, el número de comidas
de cada estadio de desarrollo y el número de
huevos puestos por las hembras durante su vida,
y se compara en las mismas condiciones
experimentales con el ciclo de vida de R. prolixus,
principal vector domiciliado en Colombia.
Adicionalmente, los resultados inéditos de la
bionomía de R. colombiensis serán de utilidad para
el mantenimiento de las colonias en el laboratorio.
Materiales y métodos
Los especímenes de R. colombiensis se
capturaron en palmas de Attalea butyracea y los
de R. prolixus en domicilios humanos en el
municipio de Coyaima, departamento del Tolima,
Colombia.
Las colonias de ambas especies se mantuvieron
a 28 ± 1°C, 75 a 80% de humedad relativa y
fotoperiodicidad de 12/12 horas en una incubadora
automática B.O.D. Lab-Line. Los triatominos
fueron alimentados con sangre de gallina
semanalmente. Treinta y seis hembras y doce
machos de cada especie se emplearon para
obtener la descendencia con la cual se efectuó el
estudio del ciclo de vida. Los huevos se colocaron
individualmente en recipientes transparentes de
5 cm de altura y 3 cm de diámetro. Se estudió el
desarrollo de 92 insectos de cada especie. A las
N1 se les ofreció sangre de gallina diariamente
hasta su primera comida y luego se les alimentó
semanalmente con la misma fuente. Se revisaron
diariamente para determinar la duración de cada
estadio, y así mismo se determinó la mortalidad
por estadio y la causa de muerte.
Número de comidas en cada estadio de
desarrollo
De los 92 R. colombiensis estudiados, 63 de ellos
alcanzaron el estadio adulto, sin embargo, tres
de ellos no realizaron ninguna comida durante su
fase adulta y murieron por inanición, lo que explica
que en los análisis estadísticos se utilizaran 60
Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
insectos. Para cada individuo se verificó el número
de comidas necesarias para mudar de un estadio
a otro. De los 92 R. prolixus estudiados, 86
alcanzaron el estadio adulto y de ellos se
seleccionaron aleatoriamente 60 individuos para
el análisis estadístico.
Promedio de huevos e índice de fertilidad
Se establecieron 32 matrimonios con adultos
vírgenes de cada especie. Diariamente, y hasta
la muerte de las hembras, se contabilizaron los
huevos y se calculó el promedio de los índices
de ovipostura, establecidos como la relación entre
el número de huevos puestos por cada hembra
durante el período de vida. También se calculó el
promedio de los índices de fertilidad, o sea, la
relación entre el número de huevos fértiles y el
número total de huevos puestos por cada hembra.
Análisis estadístico
En cada una de las variables del estudio se
hicieron estimaciones de medias con los
respectivos intervalos de 95% de confianza. Se
utilizó una técnica de análisis multivariado de
varianza (MANOVA) para comparar los promedios
de las diferentes variables entre las dos especies
en cada uno de los estadios de desarrollo. Los
softwares utilizados fueron STATISTICA V. 4,5 y
ESM PLUS V. 8.2,0.
Resultados
Duración del ciclo de vida
La duración desde huevo hasta adulto en R.
colombiensis fue de 144,4 días con un mínimo
de 96 y máximo de 268 días. Por otro lado, la
duración del ciclo de vida de R. prolixus fue de
117,7 días en promedio, con un mínimo de 73 y
máximo de 206 días. El tiempo promedio de
incubación de los huevos de R. colombiensis fue
de 16,2 días, mientras que el de R. prolixus fue
de 15,4 días (cuadro 1).
El tiempo de duración para cada uno de los
estadios de desarrollo de R. colombiensis fue de
14,9 días para N1-N2, 18,5 días para N2-N3, 32,9
días para N3-N4, 29,4 días para N4-N5 y 32,5
días para el N5-adulto. Por su parte, los estadios
de desarrollo de R. prolixus tuvieron un tiempo
promedio de duración de 12,4 días para N1-N2,
121
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29

15,3 días para N2-N3, 19,8 días para N3-N4, 25,1
días para N4-N5 y 29,7 días para el N5-adulto.
Todos los estadios mostraron diferencias
significativas entre R. colombiensis y R. prolixus
(figura 1). Las N1 de R. colombiensis demoraron
en promedio 5,6 días, con un mínimo de 2 y un
máximo de 13, para la toma de su primer alimento,
mientras que las N1 de R. prolixus necesitaron
4,2 días en promedio, con un mínimo de 3 y un
máximo de 8.
Número de comidas por estadio
El promedio del número de comidas por estadio
de R. colombiensis fue de 1,8 para N1; 2,1 para
N2; 3,7 para N3; 3,4 para N4 y N5, y 19,9 para el
adulto. Para R. prolixus, el número promedio de
comidas fue de 1,3 para N1; 1,9 para N2; 2,3 para
N3; 2,9 para N4; 3,2 para N5, y 28,1 para el adulto
(cuadro 2). Los promedios del número de comidas
para los estadios N1, N3, N4 y adulto de ambas
especies presentaron diferencias significativas.
A excepción de los adultos, cada uno de los
estadios de R. colombiensis presentó un mayor
número promedio de comidas que los de R.
prolixus (figura 2).
Longevidad, fertilidad y mortalidad
La longevidad del adulto de R. colombiensis
presentó un promedio de 194,6 días, con un
mínimo de 24 y máximo de 357. Para R. prolixus

Cuadro 1. Ciclo de vida de 60 R. colombiensis y 60 R. prolixus desde huevo hasta adulto expresado en días. Desviación
estándar (S) y varianza (S2). El nivel de significación es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.

Especie R. colombiensis R. prolixus Comparaciones

2
Estadios Mínimo Máximo Promedio S S Mínimo Máximo Promedio S S2 Valor p
H-N1 15 19 16,2 0,7 0,4 12 16 15,4 0,7 0,5 0,00000
N1-N2 11 22 14,9 3,1 9,3 10 23 12,4 2,5 6,2 0,00002
N2-N3 11 41 18,5 4,4 19,5 10 33 15,3 4,4 19,8 0,00042
N3-N4 17 67 32,9 13,4 178,6 11 34 19,8 4,2 17,9 0,00000
N4-N5 17 59 29,4 9,9 97,3 7 50 25,1 8,6 74,2 0,01096
N5-adulto 25 60 32,5 6,3 40,4 23 50 29,7 5,2 27,6 0,00908
Total 96 268 144,4 - - 73 206 117,7 - - -

Figura 1. Comparación entre las medias del tiempo (días) de eclosión A (huevo-N1) y de muda de cada estadio de
desarrollo (B: N1-N2, C: N2-N3, D: N3-N4, E: N4-N5 y F: N5-adulto) con sus respectivos intervalos de confianza de 95% para
Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus.

122
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29 Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus

Cuadro 2. Número de comidas de 60 R. colombiensis y 60 R. prolixus durante el ciclo de vida. Desviación estándar (S) y
varianza (S2). El nivel de significancia es de 0,05. Las diferencias fueron significativas cuando p < 0,05.

Especie R. colombiensis R. prolixus Comparaciones

2 2
Estadios Mínimo Máximo Promedio S S Mínimo Máximo Promedio S S Valor p

N1 1 3 1,8 0,6 0,3 1 3 1,3 0,5 0,2 0,00000

N2 1 5 2,1 0,6 0,3 1 4 1,9 0,7 0,5 0,08032
N3 2 8 3,7 1,8 3,1 1 4 2,3 0,6 0,3 0,00000
N4 2 8 3,4 1,4 2 1 6 2,9 1,1 1,1 0,01746
N5 2 6 3,4 0,7 0,5 2 5 3,2 0,6 0,3 0,12078
Adulto 3 44 19,9 8,1 65,9 15 39 28,1 5,9 35,1 0,00000
Total 11 74 34,3 - - 21 61 39,7 - - -

Figura 2. Comparación entre las medias del número de comidas y los intervalos de confianza de 95% para cada uno de los
estadios de desarrollo (A: N1, B: N2, C: N3, D: N4, E: N5, F: adulto) para R. colombiensis y R. prolixus.

el período de longevidad fue de 226,4 días, con
un mínimo de 136 y máximo de 318, dándose
diferencias significativas entre las dos especies.
Se observó que el promedio de huevos
ovipositados por R. colombiensis fue de 214,5,
con un mínimo de 82 y máximo de 408, en un
período de vida promedio de las hembras de 187,3
días (rango 101 a 357 días). Para R. prolixus el
promedio de huevos fue de 574,1, con mínimo de
259 y máximo de 1.083, en un período de vida
promedio de las hembras de 222,7 días (rango
136 a 287 días). El promedio de huevos fértiles
para R. colombiensis fue de 183,6 (rango 41 a
332) y para R. prolixus fue de 514,1 (rango 250 a
903). Además, el promedio de huevos no fértiles
para R. colombiensis fue de 30,9 (rango 0 a 105)
y de 59,9 (rango 0 a 202) para R. prolixus. El
promedio del índice de ovipostura para R.
colombiensis fue de 1,1 y para R. prolixus de 2,6.
Por otro lado, el promedio del índice de fertilidad
para R. colombiensis fue de 0,8 y de 0,9 para R.
prolixus (cuadro 3).
De los 92 insectos de R. colombiensis observados,
29 murieron sin completar el ciclo de vida (31,5%),
presentándose el mayor porcentaje de mortalidad
en el estadio N3 a N4 (18,2%), seguido por el
estadio N5 a adulto, con 7,3%. En el estadio N1 a
N2, ningún individuo murió. De los 92 insectos
observados en R. prolixus, 6 (6,5%) murieron sin
completar el ciclo de vida. En este caso, el mayor

123
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29

Cuadro 3. Promedio de huevos puestos; promedio de huevos fértiles y no fértiles; promedio del índice de ovipostura;
fertilidad y promedio de longevidad de las hembras de R. colombiensis y R. prolixus. El nivel de significación es de 0,05.

Especies R. colombiensis R. prolixus Valores p

Variables
Promedios

Huevos puestos 214,5 574,1 0,00000

Huevos fértiles 183,6 514,1 0,00000
Huevos no fértiles 30,9 59,9 0,01532
Índice de oviposturaa 1,1 2,6 0,00000
Índice de fertilidadb 0,8 0,9 0,09122
Longevidad de las hembrasc 187,3 222,7 0,00342
a
Indice de ovipostura = __Número de huevos ovipositados por hembra_
Número de días de cada hembra (longevidad)
b
Indice de fertilidad = __Número de huevos fértiles por hembra__
Total de huevos ovipositados por hembra
c
Longevidad de las hembras = número de días

porcentaje de mortalidad lo presentó el quinto en 1999 (10); en el departamento del Tolima se

estadio ninfal con 4,4%. En los estadios N1 a N2 encuentra en simpatría con R. prolixus
y N3 a N4 ningún individuo murió. domiciliado. Por tratarse de un especie silvestre,
R. colombiensis se ha estudiado poco y los
De los 29 R. colombiensis muertos, el 83% murió
conocimientos sobre su biología son escasos. El
atrapado en la exuvia o realizó ecdisis
hallazgo de ninfas de cuarto y quinto estadio,
defectuosas, y el 17,2% murió por presentar
machos y hembras de R. colombiensis en el
problemas en la toma de alimento. De los seis R.
interior de viviendas humanas indicaría el inicio
prolixus muertos, el 33,3% murió por presentar
de su domiciliación, tal como se ha reportado para
problemas en la toma de alimento y el 66,7%
R. neivai, una especie silvestre limitada a zonas
atrapado en la exuvia o realizó ecdisis
áridas de la región central y occidental de
defectuosas.
Venezuela y del norte de Colombia, en donde se
Discusión han encontrado grupos de ninfas y adultos en las
viviendas humanas (11,12). Los estudios sobre
La presencia de T. cruzi en vectores, reservorios
el ciclo de vida y comportamiento de R.
silvestres y en humanos se viene reportando en
colombiensis podrían contribuír a evaluar el riesgo
el departamento del Tolima desde la década de
de adaptación de esta especie al peridomicilio e
1930 (6-8). Recientes estudios de serología en
intradomicilio y su potencial como vector de T.
bancos de sangre mostraron en el departamento
cruzi en esta región de Colombia.
del Tolima una serorreactividad contra T. cruzi
de 0,69% (9). Por otro lado, el 67% de las muestras Ciclo de vida
de sangre de habitantes del municipio de Coyaima
Este es el primer trabajo en el que se obtuvo el
seropositivos para infección chagásica presentó
promedio del ciclo de vida de R. colombiensis
PCR positivo para T. cruzi (Sánchez JL, Carranza
(144,4 días, mínimo de 96 y máximo de 268), el
JC, Vallejo GA, Lozano LE, Jaramillo JC, Guhl F.
cual supera en 26,7 días el promedio de vida de
Diagnóstico molecular de Trypanosoma cruzi en
Rhodnius prolixus (117,7 días, mínimo de 73 y
reservorios y humanos en una área endémica del
máximo de 206). Estos resultados reflejan el
departamento del Tolima (Colombia). En: Vallejo
mayor vigor de las colonias de R. prolixus
GA, Carranza JC y Jaramillo JC editores. Curso
comparadas con las colonias de R. colombiensis
Taller Internacional: Biología, Epidemiología y
bajo las mismas condiciones de laboratorio.
Control de la Tripanosomosis Americana y
Leishmaniosis. Ibagué, Colombia 2000. p.1-134). Se ha señalado que el desarrollo de los triatominos
R. colombiensis es una especie silvestre descrita varía de acuerdo a las especies estudiadas y a

124
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
las condiciones experimentales de temperatura,
humedad relativa y fuente de alimento (13,14).
En consecuencia, es difícil comparar los
resultados sobre ciclos de vida existentes en la
literatura, debido a las variaciones experimentales
de cada trabajo. Por ejemplo, para algunas especies
de Rhodnius se han reportado promedios de 102
y 120 días, como es el caso de R. ecuadoriensis
(15); de 101, 127 y 209,4 días para R. nasutus
(16,17); de 104, 131, 154,2 y 177,1 días para R.
neglectus (18,19); de 181,2, 118, 86,7 y 68,9 días
para R. neivai (20,21); de 212 y 126 días para R.
pallescens (22); de 190,7, 278 y 118 días para R.
pictipes (20,23,24); de 114, 140 y 118 días para
R. prolixus (20,25), y de 114 y 135 días para R.
robustus (26). En otros géneros de triatominos
se han observado promedios de 196,8 y 189,5
días para Meccus picturatus (27); de 230,3 días
para Triatoma flavida (28), y de 180,1 días para
T. rubrovaria (29).
Con relación a la variación del ciclo de vida
ocasionada por las diferencias en las fuentes de
alimento, varios autores han comparado los ciclos
de vida de al menos siete especies de triatominos,
encontrando que fueron más cortos cuando se
alimentaron sobre mamíferos (ratones) que
cuando se alimentaron sobre aves (gallinas, pollos
o palomas) (30-35). Sin embargo, el ciclo de vida
reportado en R. neivai alimentado sobre conejos
fue más prolongado que el de la misma especie
alimentada sobre gallinas (36). Por otro lado, no
se observaron diferencias significativas en
cohortes de Meccus picturatus alimentadas sobre
gallinas o sobre conejos (27). Los resultados
anteriores probablemente son el reflejo de
asociaciones específicas entre los vectores y
diferentes especies de mamíferos o de aves que
constituyen su principal fuente de alimento en
condiciones naturales.
Se han señalado otros factores de importancia
que influyen en la duración del ciclo de vida de
los triatominos como la temperatura y la humedad.
Se ha reportado que las temperaturas elevadas,
independientemente de la humedad asociada,
pueden acelerar el ciclo biológico de la especie;
sin embargo, también pueden afectar la
sobrevivencia de las colonias, impidiendo su
mantenimiento en el laboratorio (37). Por otro lado,
Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
se ha observado la existencia de rangos de
temperaturas y de humedades relativas propicias
para el óptimo desarrollo de los triatominos (38).
Es posible que otras variables, como la
competencia entre individuos por la toma del
alimento, puedan influir sobre los resultados. Por
esta razón, las condiciones experimentales
utilizadas en el presente trabajo fueron optimizadas
para evitar la competencia de individuos durante
el ofrecimiento y la toma del alimento de manera
que los resultados no fueran afectados.
Días para tomar el alimento por primera vez
Las ninfas de primer estadio de R. colombiensis
emplean más tiempo (5,6 días en promedio, con
mínimo de 2 días y máximo de 13) en tomar su
alimento por primera vez que las ninfas de primer
estadio de R. prolixus (4,2 días en promedio, con
mínimo de 3 días y máximo de 8). Probablemente
el proceso de esclerotización de las N1 de R.
colombiensis sea más demorado, aunque se han
reportado otros factores que podrían dificultar la
realización de la primera comida, como la fragilidad
del aparato bucal, la dificultad para alcanzar el
hospedero y alcanzar un capilar (39).
Se ha reportado que las ninfas de primer estadio
de R. pictipes presentan un promedio de 4,7 días,
con un mínimo de 3 y máximo de 7, para comer
por primera vez (23), dato que se asemeja al
observado en el presente trabajo para R. prolixus.
Número de comidas realizadas en cada estadio
de desarrollo
El número de comidas realizadas por los
triatominos es de gran importancia desde el punto
de vista epidemiológico, ya que cuanto más
contactos ocurran entre vectores y hospederos,
mayor será la probabilidad de infección o transmisión
de T. cruzi (30,37). Resulta de gran interés que
los estadios ninfales de R. colombiensis necesitaran
mayor promedio de comidas (entre 1,8 y 3,4) para
realizar la muda que los mismos estadios de R.
prolixus (entre 1,3 y 3,2). Por otro lado, los adultos
de R. prolixus presentaron un promedio de 28,1
alimentaciones y los de R. colombiensis un
promedio de 19,9 (figura 2). De acuerdo a lo
anterior, las ninfas de R. colombiensis infectadas
con T. cruzi presentarían mayor probabilidad de
125
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F. et al
transmisión que las ninfas de R . prolixus
infectadas con T. cruzi. De otra parte, los adultos
de R. prolixus infectados con T. cruzi tendrían
mayor probabilidad de transmisión que los adultos
de R. colombiensis infectados con el parásito.
Algunos trabajos realizados con diferentes
especies de triatominos han mostrado variabilidad
en el promedio de comidas tanto en ninfas como
en adultos. Así por ejemplo, en R. brethesi (40)
las ninfas presentaron un promedio del número
de comidas relativamente bajo (entre 1,57 y 1,73)
comparado con los resultados de R. colombiensis
y R. prolixus en el presente trabajo. En otros
trabajos se han observado promedios semejantes,
como en el caso de R. pictipes alimentados sobre
ratones o artificialmente con membrana de silicona
con sangre de carnero, presentando un promedio
de alimentaciones de 1 a 3,9 en los estadios
ninfales, y en adultos hembras y machos (39).
En Meccus picturatus las ninfas alimentadas con
sangre de gallina o conejo no superaron las 2,3
comidas en promedio (27). En T. flavida las ninfas
presentaron un número promedio que no superó
las 3,7 comidas (28). Resulta interesante la obser-
vación de los adultos de R. brethesi, los cuales
presentaron un promedio de 7,52, muy por debajo
de los adultos de R. colombiensis y R. prolixus
observados en el presente trabajo (40). Las
diferencias observadas en el número de comidas
de las ninfas reflejaría diferencias en la capacidad
de asimilación del alimento para promover la muda
y alcanzar el estado adulto. De igual manera, las
diferencias observadas en el número de comidas
del adulto reflejaría la variabilidad de la capacidad
de las hembras para la oviposición.
Porcentaje de mortalidad
Al comparar los datos de mortalidad de algunos
estudios, se observa una extensa variabilidad
entre diferentes especies e incluso dentro de la
misma especie. La mortalidad de R. colombiensis
y de R. prolixus presentó un patrón irregular en el
que las N1 de ambas especies no presentaron
mortalidad, las N2 presentaron baja mortalidad y
las N3 de R. colombiensis y las N5 de R. prolixus
presentaron la mayor mortalidad. Otros autores
también han reportado patrones irregulares de
mortalidad en T. flavida (28). En el presente
126
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
trabajo, R. colombiensis presentó mayor
mortalidad (31,5%) que R. prolixus (6,5%).
Estudios realizados por otros autores sugieren que
las diferentes tasas de mortalidad podrían estar
determinadas por la especie de triatomino
estudiada y por las condiciones experimentales
utlilizadas. Por ejemplo, se han reportado
mortalidades de 16,3% para R. brethesi (40); de
19,2% para R. domesticus (41); de 38 y 33% para
R. pictipes (20,23), y de 16% para R. prolixus (42).
En el presente trabajo se observó en R. prolixus
un mayor número de insectos que completaron
exitosamente su ciclo de vida, el 93,5% (86/92
insectos). En contraste, el 68,5% (63/92 insectos)
de los R. colombiensis completaron su ciclo de
desarrollo.
En estudios previos se ha observado que las
causas de mortalidad durante el ciclo de vida son
las mudas defectuosas y los problemas en la toma
de alimento (20,23,27,28,37,41). En el presente
trabajo también se observaron estas causas de
muerte, destacándose que para R. colombiensis
la principal causa de mortalidad fue la incapacidad
para la muda, pues el 83% (24/29) murió atrapado
en la exuvia. Igualmente, se ha observado la
incapacidad para la muda en el ciclo de R.
robustus como la principal causa de muerte (37).
Promedio de huevos
El promedio de huevos ovipositados por R.
colombiensis fue de 214,5, con un mínimo de 82
y máximo de 408, en un período de vida promedio
de 187,3 días (rango 101 a 357 días). El promedio
del índice de fertilidad fue de 0,8 para R.
colombiensis. El promedio de huevos para R.
prolixus fue de 574,1 huevos, con un mínimo de
259 y máximo de 1.083, en un período de vida
promedio de 222,7 días (rango 136 a – 287 días).
El promedio del índice de fertilidad fue de 0,9 para
R. prolixus.
Se ha observado en R. domesticus un promedio
de huevos de 335 (rango de 173 a 469) en un
promedio de vida de 328 ± 73 días (41), superior
al observado en R. colombiensis, pero inferior al
de R. prolixus.
En los triatominos, la fuente de alimento es un
factor importante en la tasa reproductiva y en el
Biomédica 2007;27(supl. 1):119-29
índice de fertilidad. Se ha planteado que la sangre
de gallina presenta mayor cantidad de nutrientes
que la sangre de mamífero (43) y que la digestión
de la sangre de gallina es más rápida para la
producción de huevos en los insectos que la de
la sangre de mamífero (44,45). En el presente
trabajo se utilizó sangre de gallina, sin embargo,
los resultados mostraron menores tasas de
oviposición y fertilidad en R. colombiensis que en
R. prolixus alimentados con sangre de gallina. Es
posible que R. colombiensis se encuentre más
adaptado a una fuente de alimento constituída por
mamíferos silvestres, ya que con frrecuencia está
asociado a los nidos de Didelphis marsupialis.
Probablemente en condiciones naturales esta
fuente de proteínas permita un ciclo de vida más
eficiente con mayores tasas de oviposición y
mayores índices de fertilidad.
Conclusiones
La extrapolación de datos de laboratorio a las
poblaciones naturales es relativamente fácil en
triatominos domiciliados como en el caso de R.
prolixus, debido a que en el domicilio todas las
etapas del ciclo de vida ocurren en un ambiente
relativamente uniforme. Para el caso de los
triatominos silvestres, como es el caso de R.
colombiensis , la extrapolación de datos de
laboratorio a poblaciones naturales es más difícil
porque las etapas del ciclo de vida pueden ocurrir
en ambientes heterogéneos, con variaciones
climáticas significativas durante el día y con
diferentes fuentes de alimento. Aunque el éxito
reproductivo de R. colombiensis fue menor que el
de R. prolixus en las condiciones experimentales
utilizadas en el presente trabajo, se ha
comprobado que R. colombiensis en condiciones
naturales presenta altas densidades de poblaciones
en ecotopos formados por las brácteas de Attalea
butyraceae, asociada con nidos de Didelphis
marsupialis en donde se han registrado promedios
hasta de 39,5 insectos/nido, lo que sugiere éxito
reproductivo en estos ecotopos (Vallejo GA,
Lozano LE, Carranza JC, Sánchez JL, Jaramillo
JC, Guhl F, et al. Ecología de los triatominos no
domiciliados en Colombia con especial referencia
a Rhodnius colombiensis en el departamento del
Tolima. En: Vallejo GA, Carranza JC y Jaramillo
JC editores. Curso Taller Internacional: Biología,
Ciclo de vida de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
Epidemiología y Control de la Tripanosomosis
Americana y Leishmaniosis. Ibagué, Colombia
2000. p.1-134). A manera de hipótesis se podría
plantear que si R. colombiensis, que posee un
ciclo de vida más largo y con mayor número
promedio de comidas que las ninfas de R. prolixus
en condiciones de laboratorio, presentara también
características biológicas semejantes en los nidos
de las palmas, podría depender más del huésped
vertebrado para su desarrollo hasta el estadio
adulto, lo cual explicaría la eficiencia de R.
colombiensis en la transmisión de T. cruzi y T.
rangeli a sus reservorios naturales en la cuenca
alta del río Magdalena. Por ello sería de gran
importancia explorar esta hipótesis estudiando la
duración del ciclo de vida de R. colombiensis y
su comportamiento cuando se alimenta sobre
mamíferos didélfidos. Finalmente, es importante
destacar que el presente estudio aporta datos
inéditos de la bionomía para el mantenimiento de
R. colombiensis en condiciones de laboratorio.
Agradecimientos
Los autores agradecen el análisis crítico y las
valiosas sugerencias aportadas por dos
evaluadores anónimos, las cuales mejoraron el
manuscrito original.
Conflicto de intereses
Los autores del presente artículo declaramos que
no teníamos conflictos de intereses de orden
académico, institucional u operacional en el
momento de realización de la investigación.
Financiación
Este trabajo recibió financiación del Instituto
Colombiano "Francisco José de Caldas"
(Colciencias), proyecto 105-05-279-99, y del Fondo
de Investigaciones de la Universidad del Tolima.
También recibió apoyo internacional de la Red
ECLAT (European Community – Latin-American
Network for Research on the Biology and Control
of Triatominae).
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129
Hoyos
Biomédica
R., 2007;27(supl. 1):130-6 L.A. et al
Pacheco L., Agudelo Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6

COMUNICACIÓN BREVE

Seroprevalencia de la enfermedad de Chagas y factores de

riesgo asociados en una población de Morroa, Sucre
Richard Hoyos 1, Lisandro Pacheco 1, Luz Adriana Agudelo 2, German Zafra 3, Pedro Blanco 1,
Omar Triana 2
1
Grupo de Investigaciones Biomédicas, Universidad de Sucre, Sincelejo, Sucre, Colombia.
2
Grupo de Chagas, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.
3
Grupo de Inmunología y Epidemiología Molecular, Universidad Industrial de Santander,
Bucaramanga, Colombia.

Introducción. La enfermedad de Chagas constituye un grave problema de salud pública en

Latinoamérica; en Colombia existen en gran parte de su geografía las condiciones
ecoepidemiológicas propicias para la transmisión activa de esta enfermedad.
Objetivo. En este estudio fue evaluada una población del municipio de Morroa, departamento
de Sucre, para identificar factores de riesgo y determinar la seroprevalencia a la enfermedad
de Chagas.
Materiales y métodos. A una muestra de 122 personas pertenecientes al área rural (n=76) y
urbana (n=46), se les aplicó una encuesta epidemiológica y se les realizó un tamizaje serológico
con la prueba Elisa, confirmación de seropositivos con hemoaglutinación indirecta (HAI)
(Chagatest®) y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) como prueba parasitológica
confirmatoria.
Resultados. Cuatro de las personas resultaron positivas para Elisa (3,28%); sin embargo,
fueron negativas a HAI y PCR. La serología discordante fue definida con prueba de
inmunofluorescencia indirecta (IFI), encontrándose una de las cuatro personas positivas. La
población analizada mostró una baja presencia de anticuerpos anti–Trypanosoma cruzi. No
fue posible determinar la presencia del parásito en sangre usando la prueba PCR. Los
principales factores de riesgo presentes fueron casas con techos de palmas, piso de tierra,
paredes de bahareque y madera, y la presencia de reservorios (animales domésticos).
Conclusiones. Nuestros resultados indican que la zona estudiada presenta elementos de
riesgo para el establecimiento de un ciclo de transmisión activa, se hace necesario verificar la
presencia de triatominos en la zona de estudio y establecer medidas para prevenir la presencia
de la enfermedad de Chagas en el área de Morroa, Sucre.
Palabras claves: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, serología, factores de riesgo,
prueba de Elisa, epidemiología.
Seroprevalence of Chagas disease and associated risk factors in a population of Morroa,
Sucre
Introduction. Chagas disease is a major public health problem in Latin America. In Colombia,
a large area has the ecoepidemiological conditions which favor the active transmition of this
infection.
Objective. This study was undertaken in a population from the municipality of Morroa, Sucre
Province, to evaluate risk factors and to determine the seroprevalence to Chagas disease.
Materials and methods. A questionnaire was given to a sample population of 122 people
classed as rural (n=76) or urban area (n = 46). A serological screening was undertaken by Elisa
test, with confirmation of seropositives with IHA (Chagatest®) and parasitological confirmation
by polymerase chain reaction (PCR).
Results. Four people were positive by Elisa test (3.3%); however, they were negative by IHA
and PCR. One of the four positives by Elisa was positive by indirect immuno flourescence
(IFAT) as well. The sample showed a low presence of seropositives against Trypanosoma

130
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6 Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi

cruzi. However, the presence of parasite could not be confirmed by the PCR test.The main risk
factors were houses thatched with palm roofs, clay floors, wood walls, and presence of domestic
animal reservoirs.
Conclusions. The study population presented risk factors for the establishment of active
transmission. The presence of triatomines must be verified in this area and establishment of
control measures are necessary for preventiving the resurgence of the Chagas disease in
Morroa.
Key words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, serology, risk factors, Elisa test, epidemiology.

Trypanosoma cruzi , agente causal de la Cuando se desea determinar la presencia del

enfermedad de Chagas, es transmitido por
insectos vectores de la subfamilia Triatominae.
La fase crónica de la enfermedad se caracteriza
por complicaciones cardíacas y digestivas (1). Los
datos serológicos indican que alrededor de 17 a
24 millones de latinoamericanos se encuentran
infectados y cerca de 120 millones están en riesgo
de infectarse (2). En Colombia se ha estimado
que un 5% de la población puede estar infectada
y un 23% se encuentra en zona de alto riesgo (3).
Las principales condiciones para el establecimiento
de la enfermedad de Chagas en las zonas de
riesgo son la presencia del insecto vector, los
animales silvestres que sirvan de reservorios, la
circulación del parásito y las condiciones
socioeconómicas de la región (tipo de vivienda,
hacinamiento y presencia de animales domésticos
que facilitan la transmisión activa de T. cruzi) (4).
Las condiciones biológicas, ecológicas y
ambientales del territorio nacional favorecen los
ciclos ecoepidemiológicos del parásito, lo que
hace necesario realizar encuestas serológicas para
conocer la proporción de individuos infectados en
las zonas geográficas del país.
Para estos estudios epidemiológicos se utilizan
los métodos serológicos convencionales:
inmunoensayo ligado a una enzima (Elisa),
hemoaglutinación indirecta (HAI) e inmuno-
fluorescencia indirecta (IFI) para detectar la
presencia de anticuerpos contra T. cruzi, (4,5).
Correspondencia:
Richard Hoyos Lopez; Carrera 14 N° 16B – 32, Laboratorio
de Investigaciones Biomédicas, Sincelejo, Sucre, Colombia.
Teléfono: (055) 2820830; fax: (055) 2823867.
richard_hoyoslopez@yahoo.com
Recibido: 02/02/06; aceptado: 16/08/06
parásito T. cruzi en sangre circulante, la reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) constituye una
importante herramienta que de alguna manera reem-
plaza las técnicas de microscopía existentes (6).
La presencia de vectores triatominos en el
departamento de Sucre (7), la falta de datos
relacionados con la epidemiología y los factores
de riesgo para la enfermedad de Chagas en la
región motivaron el presente estudio de una
muestra poblacional del municipio de Morroa,
Sucre, considerado de bajo riesgo (8), con el fin
de determinar la seroprevalencia de la enfermedad
de Chagas con métodos serológicos convencionales
y evaluar los factores de riesgo asociados.
Materiales y métodos
Localidad y población de estudio
El estudio se llevó a cabo en el municipio de
Morroa (coordenadas geográficas: 9° 28' norte, 9°
18' sur, 75° 15' este y 75°21' oeste, departamento
de Sucre), situado a 150 metros sobre el nivel del
mar en la costa Atlántica de Colombia, con una
temperatura promedio de 27°C y predominio de
clima de sabana tropical y vegetación principal-
mente compuesta de palmas y áreas boscosas.
La población es de 16.120 personas, de las cuales
el 68% pertenece al área rural. La muestra
poblacional fue calculada basándose en el
programa estadístico Epi info 2003, utilizando un
promedio de prevalencia de la enfermedad de
Chagas del 5%, la población del municipio y un
nivel de confianza del 95%.
Muestras
Las personas que participaron en el estudio debían
pertenecer al área de Morroa y tener un periodo
de permanencia en la zona mayor a cinco años,

131
Hoyos R., Pacheco L., Agudelo L.A. et al
las personas que no cumplían con estos criterios
no fueron tenidas en cuenta para la realización
del estudio. Previa firma de consentimiento
informado, las personas respondieron una
encuesta epidemiológica y se extrajo una muestra
de sangre que fue dividida en dos viales: uno para
extracción de suero y uno con anticoagulante
(EDTA – 0,2 M, pH = 8,0) para extracción de ADN.
Las muestras de sangre y suero se recolectaron
en el Laboratorio Clínico del Centro Médico de
Salud San Blas del 2 de septiembre al 3 diciembre
del 2004, y correspondieron a 122 personas
asentadas en 117 viviendas del área rural y urbana.
Encuesta epidemiológica
Las variables tomadas en cuenta fueron el tipo de
vivienda; el conocimiento sobre el vector, para lo
cual a cada persona participante en el estudio se
le mostraron ejemplares adultos y ninfales de Tri-
atoma maculata; los lugares de avistamiento del
insecto, los tipos de animales domésticos y el
hacinamiento. Se realizó una búsqueda pasiva de
vectores, para lo cual se distribuyeron viales
plásticos rotulados estériles en el corregimiento
de Las Flores. Estos datos se procesaron en el
programa estadístico Epi Info 2003.
Ensayos serológicos
La Organización Mundial de la Salud (OMS)
recomienda que las muestras de suero sean
clasificadas como positivas para la enfermedad
de Chagas si son reactivas a dos de tres técnicas
serológicas con metodologías diferentes (2). En
este trabajo se utilizaron como pruebas
diagnósticas Elisa, HAI e IFI.
La prueba de Elisa se desarrolló de acuerdo al
protocolo descrito por Gea et al. (1987) y Takasu
et al. (1989) (9,10); el ensayo se realizó en
microplacas Nunc – Immuno Plate (Maxisorp sur-
face) y un lector de Elisa Biorad (model 550). El
antígeno consistió en un extracto crudo de
epimastigotes de T. cruzi (cepa Y), el cual se
adicionó a una concentración de 1,22 ug\ml e
incubado 24 horas en buffer carbonato (pH = 9,6).
Los sueros se utilizaron en diluciones de 1:800 y
como conjugado enzimático se utilizó anti-
inmunoglobulina G ligada a fosfatasa alcalina en
dilución de 1:1000. El sustrato p – nitrofenilfosfato
132
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
(Sigma # catalogo 104) se adicionó a una
concentración de 1 mg\ml para ser leída a una
longitud de onda de 410 nm después de agregar
50 ul de NaOH 3N. Se consideraron muestras
reactivas positivas aquellas cuya D.O fuera mayor
al punto de corte (punto de corte = 0,300).
Hemoaglutinación indirecta
Esta prueba se realizó con el kit Chagatest®
(Wiener Lab) y se consideraron reactivas las
muestras con títulos iguales o mayores a 1:32.
Inmunofluorescencia indirecta
En esta prueba se utilizaron como antígeno
proteínas formalizadas totales de epimastigotes
de la cepa HA de T. cruzi de Colombia, y como
anticuerpo, un anti IgG humano marcado con
isotiocianato de fluoresceína (FITC), según el
protocolo establecido en el laboratorio de Chagas
de la Universidad de Antioquia (11). El punto de
corte se estableció a partir de la segunda dilución
(1:40).
Extracción de ADN y PCR
El protocolo de extracción empleado es el descrito
por Sambrook et al. (1989) (12): 500 µL de sangre
se mezclaron con buffer de lisis 2X (Tris - HCl 10
mM PH = 7,4; EDTA 5M a pH = 8,0; SDS al 1%)
y 10 µL de proteinasa K (20 mg/ml); se incubaron
a 55°C por 1 hora y después toda la noche a 37°C;
luego se inactivó la proteinasa K (5 minutos a
95°C) para centrifugar a 12.000 r.p.m por 40
minutos; el sobrenadante resultante se tomó para
la extracción del ADN con sales de alta molaridad.
El sobrenadante de ADN se resuspendió en 50
µL de buffer TE 1X, almacenándose luego a -20°C
hasta su uso.
En la prueba de PCR se usaron los iniciadores
S35 (5‘AAA TAA TGT ACG GGT GAG ATG CAT
G 3‘) y S36 (5‘GGG TTC GAT TGG GGT TGG
TG 3‘), que amplifican un fragmento de 330 bp de
las regiones variables de minicírculos del kDNA
de T. cruzi. La reacción de amplificación se realizó
según Moser et al. (1989) (13) así: 2 µL de buffer
PCR (10X), 0,4 µL de dNTPs mezclados (200
mM), 1,2 µL de MgCl2 (1,5 mM), 1,2 µL de cada
iniciador (0,6 mM), 0,2 µL de Taq polimerasa y
6 µL de ADN problema, para un volumen final de
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
25 µL. La PCR se llevó a cabo en un termociclador
PCR – Express (Hybaid) en las siguientes
condiciones: 1 ciclo a 94°C (5 minutos), 35 ciclos
a 94°C (1 minuto) 65°C (1 minuto) 72 °C (1 minuto),
y una extensión final a 72°C (10 minutos). Los
productos amplificados se sometieron a una
electroforesis en gel de agarosa al 1,8% y se
visualizaron bajo luz U.V después de la tinción
con bromuro de etidio.
Consideraciones éticas
El Comité de Investigaciones de la Facultad de
Educación y Ciencias de la Universidad de Sucre
aprobó este estudio.
Resultados
La encuesta epidemiológica reveló que en la
muestra poblacional estudiada (n = 122), las
condiciones socioeconómicas de la vivienda
fueron uno de los factores de riesgo encontrados
con mayor frecuencia. Los tipos de vivienda
correspondieron principalmente a tres categorías:
la combinada (62 viviendas, 50,9%), que presenta
por lo menos un elemento estructural de riesgo
para la infestación por triatominos; en segundo
lugar tenemos el “rancho“(37 viviendas, 30,3%),
que presenta todos los elementos estructurales
de riesgo para la infestación por vectores de la
enfermedad de Chagas y, por último, la casa de
material (18,8%).
Los animales domésticos encontrados en la
mayoría de las viviendas de la población
encuestada fueron perros ( Canis familiaris,
57,2%), gallinas (Gallus gallus, 44,4%) y cerdos
(Sus scropha, 36,7%), presentándose convivencia
de diferentes especies dentro de la misma casa.
El hacinamiento fue un factor presente en el 83,6%
de los domicilios encuestados, ya que
presentaban cinco o más personas por habitación
en el domicilio.
Las personas que manifestaron conocer el vector
después de ver ejemplares adultos y ninfales de
T. maculata fueron 54 (44,2%), siendo las paredes
de las habitaciones el lugar más frecuente de
observación y los dormitorios el sitio predilecto
para la alimentación de los triatominos (34 y 44%,
respectivamente). La búsqueda pasiva de
Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi
vectores en el corregimiento de Las Flores fue
negativa.
El análisis por Elisa reveló cuatro personas
seropositivas, un hombre y tres mujeres que se
encontraban en el grupo de edad entre los 14 y 45
años. A los sueros seropositivos se les realizó
una prueba de HAI con el estuche Chagatest®
(Wiener Lab) con resultados negativos. Dada la
discrepancia que existía en cuanto al estado
serológico de estos cuatro individuos (Elisa +, HAI
-), se definió la seropositividad con el ensayo de
IFI, el cual dio resultado positivo en una de las
cuatro muestras, con un título de 1:40.
La amplificación del kDNA de T. cruzi por PCR
en las muestras de sangre pertenecientes a
individuos seropositivos por Elisa y positivos para
IFI fue negativa.
Discusión
En el ciclo silvestre los triatominos están ubicados
en ecotopos con unas características particulares
dependiendo del género Triatominae al que
pertenezcan; así, las especies pertenecientes a
Rhodnius se han encontrado asociadas
principalmente a palmas (14,15); Panstrongylus
sp. se encuentra en cavidades y huecos de palmas,
en árboles y también en madrigueras de
vertebrados silvestres (16); Triatoma sp.
frecuentemente se localiza en hábitats rocosos y
madrigueras de roedores (16). Los diferentes
nichos ecológicos colonizados por las especies
Triatominae se distribuyen de acuerdo a la
asociación que presentan en el ambiente silvestre
y las preferencias de sustrato se reflejan en los
sitios infestados por los triatominos dentro de las
casas (14); por esta razón, se considera que uno
de los factores de riesgo mas relevantes es el
tipo de construcción de los domicilios. En la
población estudiada, la mayor parte de las
viviendas presentaban por lo menos un elemento
estructural de riesgo para la infestación por
triatominos (50,9%), y otro porcentaje (30,3%)
presentaba todos los elementos estructurales de
riesgo para la infestación por vectores de la
enfermedad de Chagas, ya que las viviendas con
paredes de bahareque y techos de palma
presentan los micrositios (fisuras) y microclimas
que permiten una domiciliación acelerada de
133
Hoyos R., Pacheco L., Agudelo L.A. et al
triatominos por tener una temperatura y humedad
similares a las de los silvestres (17).
Aunque se considera que las casas con elementos
materiales sólidos (bloque, cemento y tejas de
asbesto-cemento, presentes en un 18,8%) no
presentan ningún tipo de riesgo, se ha observado
que algunas especies como T. maculata y T.
dimidiata, presentes en Colombia y la Costa
Atlántica (14,15,18), tienen una presencia ligada
al hacinamiento y no a estructuras de riesgo,
considerándose la presencia de estas especies
vectoras un factor de riesgo para cualquier tipo de
vivienda (15,19). El hacinamiento fue del 83,6%,
lo que indica que había casas con dos
habitaciones y cinco o más habitantes; además,
las características de higiene asociadas con el
hacinamiento se consideran como de riesgo para
la transmisión vectorial (19,20), la infestación, y
también para la picadura de los triatominos a
individuos, ya que facilitan una mayor
concentración de fuentes de alimentos en un
mínimo de espacio.
Los principales animales domésticos encontrados
coinciden con los reservorios caracterizados para
T. cruzi y con otras experiencias epidemiológicas,
en las que se han encontrado fuertes asociaciones
entre cerdos y la especie Panstrongylus
geniculatus (21), y entre gallinas y T. dimidiata,
T. maculata y Rhodnius prolixus (3,15, 22). Hay
que resaltar que existen reportes que asocian la
presencia de especies de triatominos infectados
con tripanosomas en los municipios del
departamento de Sucre (7,23,24).
Los perros son los reservorios principales para T.
cruzi y los tres principales géneros de Triatominae
tienen como fuente fundamental de alimento a esta
especie. La presencia de posibles fuentes de
alimentos susceptibles de ser reservorios está
ligada a altas densidades de animales domésticos
que duermen en el intradomicilio y peridomicilio,
además de la presencia de diferentes especies
de animales en la vivienda, como se observó en
la muestra poblacional estudiada, en la que
además de los tres reservorios antes mencio-
nados, se encontraron patos (Anas sp), pavos
(Meleagris gallipavo), gatos (Felis catus), burros
( Equus asinus ), vacas ( Bos taurus ), lo que
134
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
aumenta la densidad de animales en los domicilios
estudiados y facilita a los insectos vectores la
obtención de alimento.
Se realizó una búsqueda pasiva en los domicilios
del corregimiento de Las Flores (Morroa, Sucre),
después de realizar actividades de educación
sobre los peligros de la enfermedad de Chagas y
el vector Triatominae ; esta búsqueda arrojó
resultados negativos, pues no se encontraron
ejemplares de triatominos, aunque sí hay
antecedentes de infestación años atrás, según
informaciones anecdóticas de los moradores de
este corregimiento. No se descarta la presencia
de vectores en el área de este municipio, debido
a que el principal tipo de vegetación son las palmas
en el peri y extradomicilio, y en el departamento
de Sucre, Poyet (1995) (24) y Agudelo (2005)
(Agudelo L. Experiencias epidemiológicas del
Grupo de Chagas, Universidad de Antioquia. En:
Jaramillo N, Parra G, Triana O, Moreno J, editores.
Memorias del VIII Curso Internacional sobre la
Ecoepidemiología de la Enfermedad de Chagas y
sus Métodos de Estudio. Medellín: Editorial
Gráficas; 2005) reportan infestación con
triatominos (R. pallescens , T. dimidiata y P.
geniculatus) en palmas del género Attalea (Attalea
butyracea, “palma de vino”), Scheelea y Cocos
(Cocos nucifera, “palma de coco”).
Las pruebas serológicas constituyen importantes
herramientas que permiten estimar los niveles de
infección por T. cruzi y evaluar medidas de con-
trol epidemiológico y vectorial (20). Sin embargo,
la persistencia de resultados falsos debidos a la
gran cantidad de reacciones cruzadas con
anticuerpos de individuos que padecen otras
enfermedades parasitarias relacionadas (4) ha
llevado a la OMS a recomendar el uso de por lo
menos dos técnicas serológicas con fundamentos
metodológicos diferentes (2,4,5). En nuestro
estudio, la prueba Elisa para detectar niveles de
IgG anti–T. cruzi fue lo suficientemente sensible
en los sueros de la población estudiada,
discriminando cuatro muestras reactivas cuya
densidad óptica fue mayor al punto de corte y no
se ubicaron dentro de la zona gris (0,270 a 0,330).
Al realizar la prueba de HAI con el estuche
Chagatest®, las cuatro muestras resultaron
Biomédica 2007;27(supl. 1):130-6
negativas, resultado similar al obtenido por
Cárdenas et al.(2002), quien obtuvo seis muestras
reactivas por Elisa y todas negativas por
Chagatest®, lo que demuestra la discordancia
entre esta prueba y Elisa (25). Hay que destacar
que el kit Chagatest® utiliza antígeno
citoplasmático liofilizado de cepas argentinas, por
lo que podría explicarse que las muestras no
reaccionen debido a la posible diferencia en
determinantes antigénicos entre las cepas del
cono sur y las cepas de T. cruzi colombianas.
Esta hipótesis es expuesta por Enciso et al.
(2004), quienes, para explicar las discordancias
que existen al tamizar muestras por Elisa y
estuches de HAI foráneos, además proponen
aspectos relacionados con el estadio del parásito
utilizado como antígeno, su preparación, el ciclo
de transmisión al que pertenece la cepa aislada,
así como el huésped o reservorio de origen (26).
Estos sueros también se analizaron con la técnica
de IFI, y se confirmó una de las cuatro muestras
como positiva para T. cruzi, encontrándose el
primer caso autóctono de la enfermedad de
Chagas en un municipio considerado de bajo
riesgo, en el cual no se ha reportado la presencia
de individuos infectados por T. cruzi.
La PCR se realizó con el objetivo de detectar la
presencia del parásito en sangre; tres muestras
fueron negativas por ausencia de infección
(positivos para Elisa, negativos para Chagatest®
e IFI), y una muestra fue negativa por ausencia
de parasitemia en sangre periférica (positivo para
Elisa e IFI, negativo para Chagatest®); este
resultado es consistente con el de personas en
estado latente o crónico de la enfermedad de
Chagas, que presentan serología positiva pero
escasa presencia de parásitos en sangre (6,27);
otras posibles causas que pueden incidir en los
resultados son el tipo de extracción de ADN
utilizado y el volumen de sangre usado en la
extracción. Marcon et al (2002) desarrollaron una
PCR anidada para detectar T. cruzi en pacientes
en estado crónico de la enfermedad (28); sin em-
bargo, la alta sensibilidad encontrada con esta
técnica es consecuencia de la alta parasitemia
de las cepas procedentes de las áreas endémicas
brasileñas, característica diferente a la de los
aislamientos colombianos. En este sentido,
Seroprevalencia y factores de riesgo a T. cruzi
Morroa es considerada un área de bajo riesgo no
endémica para la enfermedad de Chagas.
En conclusión, la zona de estudio presentó los
elementos de riesgo estructurales con los
ecotopos artificiales propicios para la infestación
de triatominos; la convivencia con diferentes tipos
de animales domésticos facilita una fuente de
alimento estable y reservorios para el desarrollo
de colonias domiciliadas de triatominos y, en
consecuencia, la transmisión activa de T. cruzi.
Por la prevalencia de 1,22% encontrada en la
muestra estudiada se recomienda realizar
estudios para ubicar la presencia de vectores
triatominos y su índice de infección natural en los
corregimientos y veredas pertenecientes al
municipio de Morroa, así como establecer el
estado seroepidemiológico de poblaciones
pertenecientes al corregimiento de Tumbatoro
(Morroa, Sucre), sitio de origen del individuo
positivo por Elisa e IFI en este estudio.
Conflicto de intereses
Los autores manifiestan no tener conflictos de
intereses con respecto a los resultados de esta
investigación.
Financiación
Este trabajo de investigación pertenece a la línea
de investigaciones biomédicas de la Universidad
de Sucre y fue financiado parcialmente por el
proyecto 1102-04 -12901 registrado en Colciencias,
así como con recursos del Laboratorio de
Investigaciones Biomédicas de la Universidad de
Sucre y el Grupo de Chagas de la Universidad de
Antioquia.
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Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42 Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus

COMUNICACIÓN BREVE

Patrones electroforéticos de hemoproteínas salivares

(nitroforinas) de Rhodnius colombiensis y Rhodnius prolixus
(Hemiptera, Reduviidae, Triatominae)
Andrea Arévalo 1, Julio César Carranza 1, Felipe Guhl 2, Gustavo Adolfo Vallejo 1

1
Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima,
Ibagué, Colombia.
2
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical, Universidad de los Andes, Bogotá
D.C., Colombia.

Introducción. La electroforesis de hemoproteínas salivares en geles de almidón es una técnica

de reciente aplicación para diferenciar especies del género Rhodnius que poseen gran
similaridad fenotípica o para diferenciar subpoblaciones de la misma especie, separadas
geográficamente. De las 15 especies de Rhodnius descritas en latinoamérica, por lo menos
ocho han sido reportadas en el territorio colombiano.
Objetivo. Utilizar la electroforesis de hemoproteínas salivares para diferenciar R. prolixus de
R. colombiensis, dos especies con similaridad fenotípica cuyos ciclos doméstico y selvático se
superponen en la cuenca alta del río Magdalena en la región Central de Colombia.
Materiales y Métodos. El contenido de las glándulas salivares de cada insecto se sometió a
electroforesis en gel de almidón utilizando buffer de glicina y revelado de las bandas con
3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina. Los patrones de bandeo fueron registrados fotográficamente.
Resultados. Usando esta técnica se observaron los perfiles electroforéticos de las
hemoproteínas salivares de R. prolixus y R. colombiensis los cuales permitieron su inequívoca
diferenciación.
Conclusión. Estos resultados demuestran la utilidad de la técnica para la diferenciación entre
R. prolixus y R. colombiensis en adición a métodos morfométricos y moleculares previamente
utilizados para diferenciar estas dos especies.
Palabras clave: Rhodnius, Triatominae, saliva, Colombia.
Electrophoretic patterns of salivary hemeproteins (nitrophorines) of Rhodnius colombiensis
and R. prolixus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae)
Introduction. Salivary hemeprotein electrophoresis in starch gels is a recent technique used
for differentiation of Rhodnius species with great phenotypic similarity. Furthermore, populations
of the same species can be differentiated from geographically separated locales. Of the 15
described Rhodnius species in Latin America, at least eight have been reported in Colombia.
Objective. To use the salivary hemeproteins electrophoresis for R. prolixus and R. colombiensis
identification. These two species are phenotypically similar and have overlapping domestic
and sylvatic cycles where they occur in the upper basin of the Magdalena river, Central Colombia.
Material and methods. The content of salivary glands of each insect was subjected to starch
gel electrophoresis using glycine buffer, and the bands were revealed with 3,3’,5,5’-
tetramethylbenzidine. Band patterns were photographically recorded.
Results. Electrophoretic patterns of salivary hemeproteins of R. prolixus and R. colombiensis
were able to unequivocally differentiate the two species.
Conclusion. The usefulness of the starch gel technique for distinguishing between R. prolixus
and R. colombiensis was demonstrated as an additional tool to the morphometric and molecular
methods already in use for differentiation of these two species.
Key words: Rhodnius, Triatominae, saliva, Colombia.

137
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F., Vallejo G.A.
La saliva de los insectos hematófagos presenta
sustancias anticoagulantes, antihistamínicas,
vasodilatorias y antiplaquetarias que facilitan el
proceso de alimentación sobre el huésped
vertebrado (1-4). En los triatominos se han
encontrado varias sustancias relacionadas con
estas funciones. En el caso del género Rhodnius,
hasta el momento se han reportado ocho proteínas
salivares: tres factores que contrarrestan la
agregación plaquetaria, llamados inhibidores de
agregación de R. prolixus (RPAI 1-3) (proteínas
lipocalinas) (4,5); una apirasa que se encarga de
hidrolizar el ADP bloqueando la agregación
plaquetaria (4,6), y, por último, las nitroforinas
(NPs), un grupo de cuatro hemoproteínas
denominadas NP1 a NP4 según su relativa
abundancia en las glándulas salivares (7). Las
nitroforinas se pueden agrupar en dos conjuntos
con base en las relaciones de sus secuencias de
aminoácidos; es así como NP1 y NP4 son
idénticas en un 90%, y NP2 y NP3 son idénticas
en un 80% (4,7,8). Para Cimex lectularius de la
familia Cimicidae se ha reportado otra nitroforina
que, aun cuando no es significativamente similar
a las de R. prolixus (familia Reduviidae), revelaría
una evolución convergente entre estas
hemoproteínas (9,10). En Rhodnius , las NP
transportan óxido nítrico e histamina a través de
su grupo hemo (Fe III), el cual es el sitio de enlace
para ambas moléculas (4,11-14). El óxido nítrico
permite la vasodilatación e inhibe la agregación
plaquetaria (4,11,15). Por su parte, la unión de la
histamina a las NP impide la respuesta de
inflamación en el huésped vertebrado (4,12,13).
La NP2 o prolixin-S se encarga de bloquear la
cascada de coagulación, ya que evita que el factor
X se convierta en el factor Xa (4,13,16). Por otro
lado, se ha comprobado que las NP en R. prolixus
son estadio específicas, es decir, que puede
presentarse una o faltar otra de un estadio a otro.
Es así como la NP2 está presente desde el primer
Correspondencia:
Gustavo Adolfo Vallejo, Laboratorio de Investigaciones en
Parasitología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad
del Tolima, Ibagué, Colombia.
Fax (+57-8) 2669176.
gvallejo@ut.edu.co
Recibido: 23/03/06; aceptado: 08/09/06
138
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
estadio ninfal (N1) hasta el adulto. En el primer
estadio se han purificado, además, dos
hemoproteínas salivares, la NP5 y la NP6, cuya
cantidad va disminuyendo en las glándulas
salivares con las mudas sucesivas hasta
ausentarse en la fase adulta. En el segundo
estadio (N2) aparece la NP4. En el tercer estadio
ninfal (N3) se presenta la NP1. Por ultimo, en el
quinto estadio ninfal (N5) aparece la NP3, y a
partir de este momento ya están presentes las
cuatro nitroforinas, NP1 a NP4, que perduran en
el adulto (17).
En el género Rhodnius existen varias especies
epidemiológicamente importantes para la
transmisión de los parásitos T. cruzi y T. rangeli.
Según las características biológicas, ecológicas
y etológicas de estos vectores, que suelen variar
de una zona geográfica a otra, pueden
considerarse como vectores primarios o
secundarios, o estar en proceso de alcanzar este
último nivel. Algunas especies del género
Rhodnius suelen ser fenotípicamente similares y,
además, ser simpátricas en algunas zonas
geográficas. En los estudios de la epidemiología
y la biología de los vectores y de los ciclos de
transmisión de los parásitos T. cruzi y T. rangeli,
así como en las encuestas entomológicas y en
las campañas de control y prevención vectorial,
se han utilizado diferentes tipos de técnicas que
han permitido distinguir la mayoría de las especies
pertenecientes a este género, entre ellos la
morfología (18-20), las isoenzimas (21-23), la
morfometría cuantitativa (23), el análisis
cuantitativo de patrones de sensilias antenales
(24), el análisis de secuencias de ADN
mitocondrial (25,26) y el análisis de genitalia
masculina (20,27); sin embargo, algunas veces
no suelen ser muy efectivas, ya que no generan
diferencias y, además, algunas son dispendiosas
y muy costosas.
Mediante la electroforesis de hemoproteínas
salivares es posible diferenciar especies
fenotípicamente similares o poblaciones de una
misma especie separadas por áreas geográficas
(28,29). Además, los perfiles electroforéticos de
las hemoproteínas pueden reflejar distancias
biogeográficas entre poblaciones y revelar
relaciones filogenéticas entre las especies (28).
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
Estas diferencias son considerablemente
importantes para la epidemiología de los vectores
de T. cruzi (30) y T. rangeli, y ayudan a identificar
las especies relacionadas en el ciclo de
transmisión de un área geográfica específica.
Trabajos previos han mostrado que la
diferenciación morfológica de R. colombiensis y
R. prolixus no es fácil, tanto así que durante varios
años a la especie R. colombiensis se le denominó
R. prolixus “forma Tolima” (31); posteriormente, a
partir de estudios de isoenzimas, genitalia y genes
ribosomales, se concluyó que se trataba de una
especie diferente hoy denominada como R.
colombiensis (20, 32). En el presente trabajo se
detectaron diferencias por medio de los patrones
electroforéticos de hemoproteínas entre las
especies R. colombiensis y R. prolixus, dos
especies fenotípicamente similares y simpátricas,
ya que sus ciclos selvático y doméstico se
traslapan en la cuenca alta del Río Magdalena.
Estas especies se han considerado vectores
importantes para la transmisión de T. cruzi y T.
rangeli en esa zona geográfica. R. colombiensis
presenta prevalencias de T. cruzi y T. rangeli del
45 y 28,6%, respectivamente (datos no
publicados), situación que configura un riesgo para
la transmisión de T. cruzi por parte de este vector
en la región central de Colombia.
Materiales y métodos
Insectos
Los triatominos fueron recolectados en el
municipio de Coyaima, departamento del Tolima,
Colombia. Los adultos de R. colombiensis fueron
capturados en siete palmas de vino (Attalea
butyraceae) y los de R. prolixus dentro de 10
viviendas humanas de las veredas Totarco Dinde
y Chenche Cucal del municipio de Coyaima. Los
insectos se mantuvieron a 28 ± 1°C, con humedad
relativa de 75 a 80% y una fotoperiodicidad de
12/12 horas en una incubadora automática B.O.D.
Lab-Line, y fueron alimentados semanalmente
sobre gallinas.
Para la determinación de las especies se utilizó
la clave taxonómica de Lent & Wygodzinsky
(1979) (18) y se realizó amplificación por reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) de genes ADNr
Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
siguiendo la metodología descrita por Jaramillo
et al. 2001 (32).
Preparación de la muestra y electroforesis
Se disectaron 13 insectos adultos de R. prolixus
y 13 de R. colombiensis y sus glándulas salivares
fueron lavadas en solución salina estéril al 0,9%.
Las glándulas salivares de cada insecto se
maceraron y homogeneizaron con 10 ml de buffer
de corrido (glicina 0,15 M/NaOH, pH 9,5). Una vez
homogeneizadas, el contenido de las glándulas
fue absorbido en hilos de algodón estériles de 0,9
cm y colocados en las canaletas del gel de
almidón al 8% preparado con buffer de corrido
(glicina 0,15M/NaOH, pH 9,5) diluido 1:10. La
electroforesis se llevó a cabo a 300 voltios por
cuatro horas. Para el revelado, los geles se
sumergieron en una solución de 0,3 mg/ml de
3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina en una mezcla de
etanol, ácido acético y agua en proporción 1:1:1.
Luego se transfirieron a una solución de peróxido
de hidrógeno al 2% hasta la aparición de las
bandas (28,29). Con fines comparativos, se
examinaron los patrones electroforéticos de las
hemoproteínas de dos adultos de R. pallescens.
El número de bandas generado en cada carril del
gel fue determinado en el momento inicial en que
se desarrolla la coloración, pues a medida que
transcurre el tiempo, las bandas pierden
resolución. A partir de las fotografías y del número
de bandas observadas al inicio de la coloración
se obtuvieron diagramas que representan el
número de bandas en cada carril.
Análisis de datos
De conformidad con el análisis propuesto por
Soares et al . (29), se calculó el índice de
polimorfismo de hemoproteínas (P) para cada
especie, p = 1- Σ(X2), donde X es igual a la
frecuencia absoluta de cada perfil de
hemoproteínas en la especie sobre el número total
de insectos examinados.
Resultados
El número de perfiles y el patrón de bandeo
obtenido a través de la electroforesis de
hemoproteínas salivares en geles delgados de
almidón para R. colombiensis y R. prolixus
139
Arévalo A., Carranza J.C., Guhl F., Vallejo G.A. Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42

permitió establecer una clara diferencia entre las

dos especies (figura 1 y 2). R. prolixus presentó
cinco perfiles en el corrido electroforético,
designados desde la A hasta la E en las figuras 1
y 2; por otro lado, R. colombiensis mostró tres
perfiles (A, B y C) (figuras 1 y 2)
R. prolixus presentó un promedio de 3,1 bandas,
con un máximo de cinco y un mínimo de dos; en
R. colombiensis solamente se observaron dos
bandas en todos las insectos examinados (figuras
1 y 2). Además, se observó que las hemoproteínas
salivares de R. colombiensis tienen polaridad
negativa, pues corrieron hacia el polo positivo.
En R. prolixus, las hemoproteínas presentan carga
positiva y negativa, pues en el corrido
electroforético fue evidente una atracción hacia
ambos polos (figura 1 y 2).
El índice de polimorfismo de las hemoproteínas
salivares (p) para las dos especies estudiadas Figura 2. Electroforesis en gel delgado de almidón al 8% de
hemoproteínas salivares de R. prolixus (canaletas 1 a 7) y
fue de p = 0,7577 en R. prolixus y en R.
R. colombiensis (canaletas 8 a 14). El panel inferior de la
colombiensis de p = 0,6156. figura corresponde a un diagrama que representa las bandas
del panel superior.
Discusión
R. prolixus presentó un índice de polimorfismo de (p = 0,6156). Para Soares et al., (29) el índice de
hemoproteínas (p) alto (p = 0,7577) con respecto polimorfismo de R. prolixus presentó un valor p =
a R. colombiensis, que presentó un índice inferior 0,7300, inferior en 0,0277 al valor obtenido para
esta especie (p = 0,7577) en el presente trabajo.
Es probable que esta diferencia se deba a la
procedencia de ambas poblaciones, ya que la
población utilizada por Soares et al. (29) era
originaria de Venezuela, mientras que los R.
prolixus utilizados en el presente estudio se
recolectaron en la región central de Colombia. Por
otro lado, los perfiles electroforéticos de las
hemoproteínas pueden reflejar distancias
biogeográficas entre las poblaciones estudiadas
(28). El valor (p) de R. colombiensis (p = 0,6156)
se acerca mucho al índice de polimorfismo de R.
pallescens (p = 0,6524) (29), especies éstas
morfológicamente similares (20,31). Estos valores
estarían reflejando el parentesco filogenético entre
estas dos especies pertenecientes al grupo
“pallescens”, conformado por R. pallescens, R.
colombiensis y R. ecuadoriensis que representa
Figura 1. Electroforesis en gel delgado de almidón al 8% de un cline evolutivo desde el norte de Colombia
hemoproteínas salivares de R. prolixus (canaletas 1 a 6), R.
pallescens (canaletas 7 y 8) y R. colombiensis (canaletas 9
hasta el sur de la cordillera de los Andes, en donde
a 14). El panel inferior de la figura corresponde a un diagrama finalmente se originó R. ecuadoriensis en el
que representa las bandas del panel superior. Ecuador y norte del Perú (31).

140
Biomédica 2007;27(supl. 1):137-42
La electroforesis de hemoproteínas salivares es
una técnica fácil y rápida que permite diferenciar
especies del género Rhodnius, al cual pertenecen
especies epidemiológicamente significativas en
la transmisión de los parásitos T. cruzi y T. rangeli
en muchas regiones de Colombia. Además, la
técnica podría ser útil en casos en que no se
pueda diferenciarlas debido a la similitud
morfológica de las especies.
Por otro lado, podría ser una herramienta útil para
los trabajos de encuestas entomológicas y en los
programas de control y prevención vectorial, pues
mediante ella se podrían identificar las especies
de una manera fácil y rápida cuando se encuentren
circulando en los ciclos de transmisión silvestre
o doméstico en una región geográfica específica.
Ello también sería útil cuando se van a emplear
estrategias de control vectorial, ya que pueden
existir especies silvestres que estén invadiendo
las viviendas, como en el caso de R. colombiensis
en la cuenca alta del río Magdalena (región central
de Colombia), cuyas ninfas de cuarto, quinto
estadio, hembras y machos han sido encontradas
durante trabajos previos en viviendas y
construcciones peridomiciliares de zonas en donde
se adelantan programas de control tendientes a
eliminar a R. prolixus , el principal vector
domiciliado en Colombia (datos no publicados).
La técnica de electroforesis de hemoproteínas es
una herramienta que permite diferenciar especies
de triatominos de una forma fácil, sin embargo,
es importante durante el procedimiento de
coloración registrar inmediatamente el número
original de las bandas, pues la intensidad de las
mismas va disminuyendo con el tiempo. En
conclusión, estos resultados demuestran la
utilidad de la técnica para la diferenciación entre
R. prolixus y R. colombiensis y como
complemento de métodos morfométricos y
moleculares previamente utilizados para
diferenciarlas.
Conflicto de intereses
El primer autor y los coautores del presente
artículo declaramos que no teníamos conflictos
de intereses de orden académico, institucional u
operacional en el momento de realización de la
investigación.
Nitroforinas de Rhodnius colombiensis y R. prolixus
Financiación
Este trabajo recibió financiación del Instituto
Colombiano "Francisco José de Caldas"
(Colciencias), proyecto 105-05-279-99, y del Fondo
de Investigaciones de la Universidad del Tolima.
También recibió apoyo internacional de la Red
ECLAT (European Community–Latin-American
Network for Research on the Biology and Control
of Triatominae).
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Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

REVISIÓN DE TEMA

Actualización de la distribución geográfica y ecoepidemiología

de la fauna de triatominos (Reduviidae: Triatominae)
en Colombia
Felipe Guhl, Germán Aguilera, Néstor Pinto, Daniela Vergara
Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical (CIMPAT), Facultad de Ciencias,
Universidad de los Andes, Bogotá, Colombia.
La información de 10 departamentos del total de 31 que contempla este manuscrito, ha sido publicada en
“Memorias Primer Taller Internacional Sobre Control de la Enfermedad de Chagas. Curso de Diagnóstico,
Manejo y Tratamiento de la Enfermedad de Chagas. VI Reunión de la Iniciativa Andina para el Control de la
Enfermedad de Chagas, Bogotá; 2005. p.25-41.

La presente publicación recopila la información de registros de triatominos y datos sobre

infección natural con tripanosomátidos a nivel departamental y municipal, publicada hasta la
fecha así como la reportada por los servicios departamentales de salud e institutos de
investigación. Se presentan figuras elaboradas de acuerdo a la información suministrada por
los registros y una clasificación de la fauna triatomínica de acuerdo a las condiciones
ecoepidemiológicas del país, teniendo en cuenta la altitud como factor determinante en la
distribución de estos insectos.
Teniendo en cuenta la frecuencia con que se reportan en el domicilio y peridomicilio, se
consideran las siguientes especies como las de mayor riesgo de transmisión en Colombia:
Rhodnius prolixus, Triatoma dimidiata, Triatoma maculata y Triatoma venosa.
Se resalta la importancia de la vigilancia entomológica como herramienta indispensable para
reforzar las estrategias de control de la transmisión de la enfermedad de Chagas, permitiendo
también la evaluación del riesgo que representan las especies de triatominos silvestres en
Colombia.
Palabras clave: Triatominae, ecología de vectores, ubicaciones geográficas, enfermedad de
Chagas, control vectorial.
Updated geographical distribution and ecoepidemiology of the triatomine fauna (Reduviidae:
Triatominae) in Colombia
Information concerning triatomine records from provinces and municipalities was accumulated—
including data indicating natural infections with trypanosomatides—that has been previously
published or reported by Colombian provincial health services and research institutes. Altitude
appeared to be the main factor responsible for the distribution of the insects. Illustrations
summarize the information provided by the above records. A triatomine fauna classification is
presented that corresponds to the eco-epidemiological conditions of the country, considering
altitude as the factor determining the geographical distribution of these vectors. Rhodnius
prolixus, Triatoma dimidiata, Triatoma maculata and Triatoma venosa are considered the major
transmission risk species in Colombia, according to the frequency in which they are reported
inside dwellings and peridomiciliary areas.
Entomological surveillance providess a necessary tool to reinforce the control strategies for
Chagas disease. This also allows the evaluation of transmission risk that the sylvatic triatomines
represent in Colombia.
Key words: Triatominae; ecology, vector; geographic locations; Chagas disease; vector control.

143
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D.
La tripanosomiasis americana es una zoonosis
muy compleja; el parásito Trypanosoma cruzi
presenta una gran variedad de cepas e infecta a
través de los triatominos vectores a 150 especies
de 24 familias de animales domésticos y
silvestres (1). La existencia de la enfermedad de
Chagas humana es un hecho puramente
accidental. En la medida en que el hombre fue
entrando en contacto con los focos naturales y
provocó desequilibrios ecológicos, forzó a los
triatominos silvestres infectados a ocupar
viviendas humanas, llevándose a cabo el proceso
de domiciliación, ya que allí no solamente
encuentran refugio, sino también suficiente
alimento en la sangre humana y de animales
domésticos. De esta manera, el hombre entra a
formar parte activa de la cadena epidemiológica
de la enfermedad de Chagas (Guhl F, Aguilera G,
Pinto N, Vergara D. Distribución geográfica de las
especies de triatominos en los departamentos
endémicos para la enfermedad de Chagas en
Colombia. En: Felipe Guhl. Memorias Primer Taller
Internacional Sobre Control de la Enfermedad de
Chagas. Curso de Diagnóstico, Manejo y
Tratamiento de la enfermedad de Chagas. VI
Reunión de la Iniciativa Andina para el Control de
la Enfermedad de Chagas, Bogotá; Corcas
Editores, 2005. p. 25-41). La enfermedad, asociada
con la pobreza y las malas condiciones de
vivienda, además de por los insectos triatominos,
se transmite a través de transfusiones de sangre
contaminadas por el parásito y también
congénitamente de madre infectada a hijo. Son
de especial importancia epidemiológica aquellos
vectores que se encuentran domiciliados y los
que están en proceso de domiciliación (1).
El estimativo de la prevalencia de la infección
humana por Trypanosoma cruzi en Colombia es
de 1’300.000 habitantes; alrededor de 3’500.000
individuos están bajo riesgo de adquirir la infección
de acuerdo a la distribución geográfica de los
Correspondencia:
Felipe Guhl, Departamento de Ciencias Biológicas,
Universidad de los Andes, Bloque A (Of.201), A.A. 4976,
Carrera 1ª N° 18A -10 Bogotá, Colombia.
Tel/Fax: +57 1 3324540.
fguhl@uniandes.edu.co
Recibido: 10/02/06; aceptado: 26/06/06
144
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
insectos vectores. Si se tiene en cuenta que el
principal mecanismo de transmisión de la
enfermedad de Chagas es a través del contacto
del hombre y los animales reservorios con los
insectos vectores, el conocimiento de la
distribución de los triatominos es de gran impor-
tancia para poder encaminar de manera adecuada
las medidas de control y prevención (2).
Factores ecoepidemiológicos que determinan
la distribución de los triatominos
Hay dos factores importantes en la distribución
de los Triatominae: primero, el grupo es
principalmente tropical y subtropical, y segundo,
está restringido al hemisferio occidental y a la
región oriental, encontrándose completamente
ausente de las regiones paleártica y etiópica, sin
considerar a Triatoma rubrofasciata, especie
dispersada por el hombre que toca marginalmente
la región australiana. Las regiones tropicales y
subtropicales de Sur América son el centro de la
diversidad de la subfamilia (3).
Dos terceras partes del territorio de Colombia
están ubicadas en la zona intertropical o ecuatorial
que se caracteriza por dos épocas de lluvia y dos
épocas secas en un mismo año. La duración de
la radiación solar es prácticamente igual durante
todo el año. La conformación montañosa derivada
de la trifurcación andina, que se extiende a través
de todo el país desde el suroeste hasta el noreste
abarcando el territorio montañoso con sus valles
interandinos de diferentes alturas y climas, ofrece
un ambiente muy favorable para la domiciliación
de varias especies de triatominos. Esta región
también se caracteriza por ser la zona más
densamente poblada del país.
Distribución de las especies de triatominos
adaptadas al hábitat humano de acuerdo a las
condiciones ecoepidemiológicas
La ubicación de Colombia y su orografía
determinan las diferencias en el clima y los
ecosistemas, generando seis grandes regiones
biogeográficas que se caracterizan por su
fisiografía, vegetación y suelos, lo que se relaciona
con la presencia y distribución de los triatominos
(Guhl F, Pinto N, Aguilera G. Distribución y
ecoepidemiología de los triatominos vectores de
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
la enfermedad de Chagas en Colombia. Memorias
XII Congreso Colombiano de Parasitología y
Medicina Tropical, Biomédica. 2005; 25:76-9).
A continuación se hace una primera aproximación
a la distribución de los principales triatominos
adaptados al hábitat humano de acuerdo con las
condiciones geográficas y teniendo en cuenta que
su distribución en Colombia está determinada por
factores altitudinales (4) (la cota que limita su
distribución es de 2.000 msnm).
1. Las llanuras del Caribe, con clima ambiental
que va desde semihúmedo hasta árido. Allí
se encuentran ampliamente distribuidas
Triatoma maculata (en vías de domiciliación)
y Rhodnius pallescens (especie de hábitos
silvestres).
2. La costa del Pacífico, con clima ambiental
húmedo y superhúmedo, no representa una
región que permita albergar especies de
triatominos de importancia epidemiológica.
3. La región Andina, que presenta sub-regiones
con diferentes cinturones horizontales y
verticales de clima, vegetación y suelos,
incluye los valles interandinos y constituye la
región de mayor densidad de asentamientos
humanos del país. Aquí se encuentran
ampliamente distribuidas las principales
especies de triatominos domiciliados, Rhodnius
prolixus, Triatoma dimidiata y T. venosa; en
los valles interandinos a lo largo del río
Magdalena se encuentran ampliamente
distribuidas especies silvestres como
Rhodnius colombiensis.
4. Los llanos de la Orinoquía se caracterizan por
extremos de sequía y humedad durante el año.
Las especies domiciliadas predominantes son
R. prolixus, T. dimidiata y T. maculata. Varios
reportes demuestran la existencia de R.
prolixus silvestre asociado a palmas tanto
silvestres (Attalea butyracea, Maximiliana
elegans y Mauritia flexulosa) como de cultivos
agroindustriales (Elaeis guineensis).
5. La selva de la Amazonía colombiana presenta
un clima frecuentemente húmedo y caluroso
durante todo el año y registra muy pocos
triatominos domiciliados. Rhodnius brethesi,
Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
R. prolixus y R. pictipes son las especies
silvestres de mayor distribución. Solamente
se ha reportado un caso de R. prolixus
domiciliado.
6. En la Sierra Nevada de Santa Marta, que
comprende todos los pisos térmicos hasta las
nieves perpetuas, se encuentran bien
distribuidos R. prolixus y T. dimidiata
domiciliados. Hay registros de T. maculata y
T. dimidiata silvestres.
La figura 1 muestra la distribución de las especies
de triatominos más adaptadas al hábitat humano
en Colombia según las zonas descritas.
Vectores de la enfermedad de Chagas en
Colombia
De las 24 especies de triatominos presentes en
Colombia, 15 se han encontrado con infecciones
naturales por T. cruzi (cuadro 1): Panstrongylus
geniculatus, Panstrongylus lignarius,
Panstrongylus rufotuberculatus, T. dimidiata,
Triatoma dispar, T. maculata, T. venosa, R.
brethesi, R. colombiensis, R. pallescens, R.
pictipes, R. prolixus, Eratyrus cuspidatus,
Eratyrus mucronatus, Cavernicola pilosa.
La presencia de Trypanosoma rangeli en áreas
endémicas para T. cruzi constituye un factor
epidemiológico de importancia, dado que
comparten algunos insectos vectores y
huéspedes mamíferos, incluido el hombre. A
pesar de que T. rangeli se ha considerado como
no patógeno para el huésped mamífero, su ciclo
de vida aún no se conoce y su presencia tanto en
las heces de los triatominos como en la sangre
de los mamíferos puede constituir una fuente de
error en el diagnóstico. Desde el punto de vista
epidemiológico es importante conocer su
distribución dado que sí es patógeno para los
insectos vectores que infecta.
De las 24 especies de triatominos presentes en
Colombia, siete se han encontrado con infecciones
de T. rangeli (37): R. colombiensis, Rhodnius
dalessandroi , R. pallescens , R, prolixus , R.
robustus, T. dimidiata y E. mucronatus.
Las principales especies que transmiten T. cruzi
en Colombia son R. prolixus y T. dimidiata, las
145
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D.
cuales presentan un ciclo epidemiológico muy
complejo que no sólo involucra una distribución
en el domicilio sino también en el peridomicilio y
en hábitats silvestres. Las poblaciones de
insectos no domiciliadas causan dificultad en el
control, pues pueden ser fuente de infestación o
de reinfestación de las viviendas ya intervenidas
con insecticidas y, por lo tanto, hay posibilidad
de que se reinicíe el ciclo de transmisión a los
humanos.
R. prolixus se ha adaptado extremadamente bien
a los domicilios humanos; sin embargo, estudios
recientes adelantados en el departamento de
Casanare han mostrado poblaciones abundantes
de R. prolixus silvestres asociadas a palmas
nativas, A. butyracea, y a palmas introducidas
en cultivos agroindustriales, E. guineensis. Los
índices de infección natural por T.cruzi
encontrados en los insectos capturados en estas
especies de palmeras fueron de 67 y 41%,
respectivamente, y los índices de colonización,
de 92,8 y 100%, respectivamente.
Estos hallazgos indican la necesidad de instaurar
programas de vigilancia entomológica muy activos
encaminados a evaluar el riesgo epidemiológico
que representan estas poblaciones de insectos
silvestres (Guhl F, Pinto N, Marín D, Herrera C,
Aquilera G, Naranjo JM, Vallejo G. Primer reporte
de Rhodnius prolixus Stal, en Elaeis guineensis,
variedad Papúa, en plantaciones agroindustriales
de Villanueva, Casanare. Memorias XII Congreso
Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical,
Biomédica 2005;25:158-59 y Pinto N, Marín D,
Herrera C, Vallejo G, Naranjo JM, Guhl F.
Comprobación del ciclo silvestre de Rhodnius
prolixus Stal en reductos de Attalea butyracea en
el departamento de Casanare. Memorias XII
Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina
Tropical. Biomédica 2005;25:159).
De igual manera es importante anotar que también
se han reportado poblaciones silvestres de T.
dimidiata en algunos municipios del departamento
de Boyacá, al igual que en la Sierra Nevada de
Santa Marta (Guhl F, Aguilera G, Pinto N, Vergara
D. Distribución geográfica de las especies de
triatominos en los departamentos endémicos para
la enfermedad de Chagas en Colombia. En: Guhl
146
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
F. Memorias Primer Taller Internacional Sobre
Control de la Enfermedad de Chagas. Curso de
Diagnóstico, Manejo y Tratamiento de la
Enfermedad de Chagas. VI Reunión de la Iniciativa
Andina para el Control de la Enfermedad de
Chagas, Bogotá; Corcas Editores: 2005. p.25-41).
Estos hallazgos merecen consideraciones
similares a las ya expuestas para R. prolixus.
Las especies que no representan riesgo de
transmisión al hombre, y que conservan hábitos
silvestres específicos, pueden resumirse de la
siguiente forma: Psamolestes arthuri en nidos de
aves, palmas o debajo de la corteza de árboles
muertos; Panstrongylus lignarius en nidos de aves;
Cavernicola pilosa en cuevas o árboles y palmas
donde habitan murciélagos; Belminus rugulosus
en palmas; R. colombiensis en palmas; T. dispar
en zonas boscosas, y Microtriatoma trinidadensis
bajo de la corteza de árboles muertos.
En el cuadro 1 se presenta el resumen de la recopila-
ción de toda la información actualizada sobre los
registros de las especies de triatominos presentes
en Colombia y su infección natural con tripano-
somátidos a nivel departamental y municipal según
actualización y modificación de Molina J et al. (4).
Distribución geográfica de los triatominos en
Colombia
En los últimos años se ha hecho evidente el
interés de los grupos de investigación en la
epidemiología de la enfermedad de Chagas en
Colombia.
De igual manera, el personal de los servicios de
salud ha adquirido un mayor conocimiento sobre
la fauna de triatominos y la importancia de los
programas de vigilancia y control. Estos hechos
han permitido aumentar el registro de nuevas
especies de triatominos en el país y aumentar de
manera considerable el número de registros en
nuevas localidades a nivel nacional.
Teniendo en cuenta esta información se presentan
mapas que indican la distribución de los
triatominos por departamento y municipio (figuras
2-11).
Las figuras 4, 6, 7, 9 y 11 corresponden a los
departamentos que conforman la región andina;
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

Cuadro 1. Registro por departamentos y municipios de las especies de triatominos presentes en Colombia y su
infección natural con tripanosomátidos.

Departamento Especie Municipio

Amazonas P. geniculatus* El Calderón (Leticia) (5), Leticia (a), (b), Tarapacá (A)
R. pictipes* El Calderón (Leticia) (5), Leticia (a) ,(b), Puerto Nariño (A, 5), (b)
R. prolixus° Tarapacá (A)
R. robustus° Leticia (A), Puerto Nariño (b)
Antioquia B. rugulosus¨ San Carlos (c)
E. cuspidatus¨ Apartadó (B), Chigorodó (B), San Carlos (B, c)
E. mucronatus¨ San Carlos (c)
P. geniculatus*+ Amalfi (B) (6) Anori (B), Arboletes (B), Campamento (B) Caracolí (B),
Cisneros (B), Cocorna (B), Dabeiba (B), Hispania (B), La pintada (B),
Maceo (B), Medellín (7, 8), Murindó (B), Nariño (B), Peque (B), Puerto
Berrío (B, b), Puerto Triunfo (B), San Carlos (B,b), San Francisco (B), San
Juan de Urabá (B), San Luis (B), San Pedro de Urabá (B), San Rafael (B),
San Roque (B), Sonsón (B), Támesis (B), Taraza (B), Urabá (d), Uramita
(B), Valdivia (B), Vegachí (B, 9, 10), Yalí (B), Yolombó (B)
P. humeralis° Puerto Berrío (B, e), San Carlos (c, e), Vegachí (e)
P.rufotuberculatus° Anori (B), Puerto Berrío (B, e), San Carlos (c, e), Vegachí (B, e)
R. pallescens* Amalfi (B), Anori (B), Arboletes (B), Chigorodo (B), Maceo (B), Necoclí (B),
Puerto Berrío (B, 4), Puerto Nare (B), Remedios (B), San Carlos (c, e),
San Juan de Urabá (B), San Pedro de Urabá (B), Tarazá (B), Turbo (B, f),
Vegachí (B, c), Yalí (B), Yondo (B), Zaragoza(B)
R. prolixus° Necoclí (B, 9, 10)
T. dimidiata+ Apartadó (B), Chigorodó (B), Necoclí (B), Turbo (B)
T. dispar* Amalfi (B), Cocorná (B), Dabeiba (B, d, 11), Murindó (B), San Francisco (B)
T. venosa* Concepción (B), Nariño (B), San Francisco (B), San Luis (B), Puerto Nare
(B, g)
Arauca E. mucronatus° Saravena (C)
R. prolixus¨ (C, 9, 10), Arauca (I)
R. robustus° (C)
T. dimidiata° Arauca (C)
T. maculata°¨ Arauca (C), Tame (C), Arauca (I)
P. arthuri¨ Arauca (I)
C. pilosa° Arauca (I)
Atlántico T. maculata° (9, 10, 12)
Bolívar E. cuspidatus¨ Talaigua Nuevo (B),
P. geniculatus¨ Cantagallo(B), Santa Catalina (B), Santa Rosa del Sur (B)
R. pallescens¨ María la Baja (B), Mompós (B), Morales (B), San Juan Nepomuceno (B),
Santa Rosa del Sur (B), Turbacó (B, 9, 10)
R. prolixus° Las Boquillas (Mompós) (A)
R. robustus° (13)
T. maculata¨ Cantagallo (B), Córdoba (B), Mompós (B), Santa Catalina (B), San Juan
Nepomuceno (B), Santa Rosa del Sur (B), Talaigua Nuevo (B)
Boyacá E. cuspidatus° Páez (D), San Pablo de Borbur (D, d, 10, h)
E. mucronatus° Páez (D, h)
P. geniculatus° Berbeo (D), Boavita (D), La Victoria (D), Maripí (D), Puerto Boyacá (D),
San Pablo de Borbur (D), San Eduardo (D), Santa María (D), Soatá (D),
Susacón (D), Zetaquirá (D)
P. rufotuberculatus° Miraflores (D), San Pablo de Borbur (D), Zetaquirá (D)
R. pictipes° Garagoa (D, h)
R. prolixus*·+ Almeida (D), Berbeo (D), Boavita (D), Campo Hermoso (D), Chiquinquirá (13,
14), Chitaraque (D), Chivor (D), Covarachía (D), Cubará (D), Garagoa (D, 7,
13), Guateque (D, 7, 13, 14), Guayatá (D, 13, 14), Labranza Grande (D), La
Capilla (D), La Uvita (D), Macanal (D), Miraflores (7, 13), Moniquirá (D, 7,
13, 14), Otanche (D, 13), Pachavita (D), Páez (D), Pajarito (13), Pauna (13),

147
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62

Departamento Especie Municipio

Paya (D), Pisba (D), Puerto Boyacá (D), Ramiriquí (13), Rondón (D), San
Eduardo (D), San Luis de Galeno (D), San Mateo (D), Santa María (D),
Sátiva Norte (D), Soatá (D, c, 13, 14, 15), Somondoco (D), Susacón (D),
Sutatenza (D), Tenza (D), Tinjacá (13), Tipacoque (D), Togui (D), Zetaquirá
(D, 9, 10, h)
T. dimidiata*·+ Boavitá (D), Campo Hermoso (D), Chiscas (D), Chitarque (D), Guayatá (13),
La Uvita (D), Miraflores (13), Moniquirá (D), Páez (D), Pisba (D), Puerto
Boyacá (D), San Eduardo (D), San Mateo (D), Sátiva Norte (D), Soatá (D, 7,
13, 14), Susacón (D), Sutatenza (D), Tipacoque (D), Zetaquirá (D, 9, 13, h)
T. maculata° Cubará (D), Páez (D), Paya (D, h)
T. venosa* Boavita (D), Campo Hermoso (D), Chinavitá (D), Chivor (D), Garagoa (D),
Guateque (D, 13), Guayatá (D, 13), La Capilla (D), La Victoria (D), Macanal
(D), Moniquirá (D), Munantá (4), Pachavitá (D), Páez (D), Pisba (D),
Ramiriquí (4), San Pablo de Borbu r (D), Santa María (D), Sátiva Norte (D),
Soatá (D), Somondoco (D), Susacón (D), Sutatenza (D), Tenza (D), Tinjacá
(13), Tipacoque (D), Zetaquirá (9, 10, h)
Caldas R. pallescens° Samaná (A)
Caquetá P. geniculatus* Belén de los Andaquíes (A), Solano (16, 17)
R. pictipes¨ Tres Esquinas (13, g)
R. prolixus* Doncella (A), Florencia (c, 13, 14), Maguareño (A), Puerto Rico (A), Santa
Helena (A, 9, 10)
Casanare C. pilosa° Yopal (G)
E. cuspidatus° Nunchía (D), Sabanalarga (D), Tauramena (D), Villanueva (D)
E. mucronatus° Nunchía (D), Poré (D), Villanueva (D), (G)
P. geniculatus° Hato Corozal (D), Sabanalarga (D), Tauramena (D), Villanueva (D, G)
P. lignarius° Yopal (G)
Ps. arthuri° Monterrey (D, G), Paz de Ariporo (D), Villanueva (D)
R. prolixus*· Aguazul( D), Hato Corozal (D), Maní (13, 14), Monterrey (D), Nunchía (D),
Orocué (D), Paz de Ariporo (D), Poré (D), Recetor (D), Sabanalarga (D),
San Luis de Palenque (D), Támara (D), Tauramena (D), Trinidad (D),
Villanueva (D), Yopal (D, G, 9, 10, 14)
T. dimidiata*· La Salina (D, G, 9, 10), Sácama (D)
T. maculata*+ Aguazul (D), Hato Corozal (D, g), Monterrey (D), Nunchía (D), Paz de
Ariporo (D), Poré (D), San Luis de Palenque (D), Tauramena (D), Villa Nueva
(D), Yopal (D, G)
Cauca P. geniculatus° Gorgona (9, 10 , 15, 16)
T. nigromaculata El Tambo ver. La Playa (18)
P. rufotuberculatus* Santander de Quilichao (13, e, 17)
Cesar B. herreri° San Alberto (C), San Martín (C)
E. cuspidatus° San Alberto (C), San Diego (C)
P. geniculatus° Aguachica (C), Chiriguaná (C), Agustín Codazzi (C), Chimichagua (C),
Curumaní (C), El Paso (C) Gamarra (C), La Paz (C), Pailitas (C), Pelaya (C),
Río de Oro (C), San Alberto (C), San Diego (C) Valledupar (C)
R. neivai° La Paz (C), San Alberto (C), Valledupar (C, 9, 10)
R. pallescens¨ Caserío Los Pajaritos (g), Chimichagua (C), Chiriguana (C), Agustín Codazzi
(C), Curumaní (C), Gamarra (C), La Paz (C), Pailitas (C), Pelaya (C), San
Martín (C), Tamalameque (C)
R. prolixus*· Chiriguaná (13), El Paso (13), La Jagua (C), Río de Oro (9, 10), San Alberto
(C), Valledupar (C)
T. dimidiata¨ Aguachica (C), Chiriguana (C), Agustín Codazzi (C), Curumaní (C), La Jagua
(C), La Paz (C), Pailitas (C), Pueblo Bello (C), Río de Oro (C), San Diego
(C), Valledupar (C, g)
T. maculata° Astrea (C), Becerri l(C), Agustín Codazzi (C), El Copey (C), El Paso (C), La
Jagua (C), La Paz (C), San Diego (C), San Juan del Cesar (9, 10, 12, 19),
Valledupar (C)

148
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

Departamento Especie Municipio

Chocó P. geniculatus° Quibdó (7, 8, 13)

R. pallescens* (20)
T. dispar° San José del Palmar (16)
T. venosa° (D)
Córdoba E. cuspidatus* Buenavista (B)
P. geniculatus° Moñitos (B), Planeta Rica (B), Sahún (B), San Andrés Sotavento (B), San
Antero (B)
R. pallescens* Canalete (B), Chinu (B), Cienaga de Oro (B), Los Córdobas (B), Moñitos (B),
Planeta Rica (B), Sahún (B), San Carlos (B), San Pelayo (B), Valencia (B)
Cundinamarca C. pilosa* Girardot (13), Tocaima (13), Villeta (9, 10)
E. cuspidatus° Medina (D)
E. mucronatus° Medina (D)
P. geniculatus° Agua de Dios (D), Caparrapí (D), La Mesa (D), La Palma (D), Medina (D),
Nilo (D), Pacho (D), Paime (D), Paratebueno ( D), San Antonio del Tequen-
dama (D), Tibacuy (D), Tocaima (D), Viotá (D), Yacopí (D, 9, 10)
P. lignarius° (D)
P. rufotuberculatus° Guayabetal (D), Nilo (D), Pacho (D)
R. colombiensis° Apulo (A), Nilo (A), Viotá (D)
R. pallescens° Yacopí (D)
R. pictipes° Medina (i)
R. prolixus*· Agua de Dios (D), Anapoima (D, 7, 13), Anolaima (7, 13, 14), Apulo (7, 13,
14), Cáqueza (7, 13), Choachí (7, 13, 14), El Peñón (D), Fómeque (7, 13,
14), Fosca (D), Fusagasugá (7, 13, 14), Gachalá (D, 9), Gachetá (7, 13),
Girardot (7, 13, 14), Guachetá (13), Guaduas (13, 14), Guayabal (13), La
Mesa (D, 13, i), La Palma (13, 14, 21), La Unión (Fómeque) (7, 13, 14), La
Vega (7, 13, 14), Machetá (7, 13) , Manta (7, 13, 14), Medina (D), Mesitas del
Colegio (7, 13), Nariño (7, 13, 14), Nilo (D, 7, 13, 14), Pacho (D, 7, 13, 14,
22), Pandi (13), Paratebueno (D), Puerto Salgar (13, 14), San Antonio de
Tena (13, 14, 21), San Antonio del Tequendama (D), Tibacuy (D), Tibiritá (7,
13, 14), Tocaima (D, 13, 14), Ubalá (D), Ubaque (13, 14, 21), Villeta (13),
Viotá (7, 10, 13), Yacopí (D, 9, 10)
R. robustus° Viotá (i)
T. dimidiata¨ Guachetá (13), Machetá (9, 10, 13)
T.venosa° El Peñón (D), Manta (D), Paime (D), Tibiritá (D), Villagómez (D)
Guainía P. geniculatus° Barranco Mina (23, j), Inírida (23, j)
R. brethesi* Cacahual (24), Inírida (j), Puerto Colombia (24)
R. prolixus° Barranco Mina (23, j)
Guaviare P. geniculatus San José del Guaviare (H)
R. pictipes San José del Guaviare (H),
R. prolixus San José del Guaviare (H)
Huila P. geniculatus° La Plata (9, 10, 13, 16)
R. prolixus*· Altamira (13), Baraya (7, d), Campoalegre (7, 13), El Hobo (7, 13), Garzón
(13), Gigante (7, 13, 14) Neiva (7, 13, 14), Planadas (9, 10, 13)
T. dimidiata* Altamira (13), Garzón (7, 13), Neiva (9, 10)
T. dispar° La Plata (16)
La Guajira E. cuspidatus° (19)
P. geniculatus° Maicao (19)
R. neivai° Maicao (19)
R. prolixus* Manaure (14, 21), Rioacha (9, 10, 14)
T. dimidiata· Perijá (g)
T. maculata° Barrancas (C), El Molino (C), Fonseca (C), Hato Nuevo (C), Maicao (19),
San Juan (C), Urbilla (C, 9, 10, 12, 19), Villanueva (C)
Magdalena E. cuspidatus° El Banco (B, F), Guamal (A, B, F), Santa Marta (D, E, F)
P. geniculatus* Ariguani (B), Cienaga (A, B), El Banco (B, F) Fundación (B), Guamal (A, B)

149
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62

Departamento Especie Municipio

Pueblo Viejo (B), Santa Marta (B, E, F), Sierra Nevada de Santa Marta (E, F)
P. rufotuberculatus° Santa Marta (B, D, E, F)
R. pallescens*+ El Banco (A, B, F), Fundación (B), Guamal (A, F) Pijiño del Carmen (B), San
Sebastián (F) Santa Marta (B, D, E, F), Sierra Nevada de Santa Marta (E)
R. neivai Sierra Nevada de Santa Marta (E, F)
R. prolixus*· Aracataca (B), Fundación (B), Pivijay (14, 21), Santa Marta (A, g), Sierra
Nevada de Santa Marta (E, F)
T. dimidiata* Aracataca (B), Cienaga (B), Fundación (B), Santa Marta (9, 10, g), Sierra
Nevada de Santa Marta (E, F)
T. maculata¨ Guamal (B, F), Pijiño del Carmen (B), San Sebastián de Buenavista (B),
Santa Ana (B), Santa Marta (A, E, F, g)
Meta C. pilosa*+ El Porvenir (Puerto Gaitán) (24), Granada (9, 10)
E. cuspidatus° Puerto Gaitan (D)
E. mucronatus° (9, 10)
M. trinidadensis° San Martín (9, 10 )
P. geniculatus* Acacias (D), El Porvenir (24),Granada (D), La Macarena (D, k), Restrepo
(D), Villavicencio (D)
P. lignarius* El Porvenir (d, 13, g, 24)
P. rufotuberculatus° El Calvario (D, 9)
Ps. arthuri¨ El Porvenir (d, 13, g, 24)
R. dalessandroi· San Martín (9, 10, 25)
R. pictipes* Acacias (D), Cumaral (A), Fuente de Oro (D), Granada (D), Guamal (D), La
Macarena (D, k), La Uribe (D), Lejanías (A, D), Mesetas (D), San Carlos de
Guarda (D), San Martín (9, 10, 26), Villavicencio (D)
R. prolixus*·+ Acacias (13, 14), Barranca de Upía (D), Cumaral (13), El Porvenir (12, 24),
Fuente de Oro (D), Granada (D), Guamal (13, 14), Guape (Granada) (10),
La Macarena (D), Lejanías (D), Mesetas (D), Puerto Gaitán (D), Puerto
Lleras (D), Puerto López (13, 14), Restrepo (7, 13, 14), San Antonio (13),
San Carlos de Guarda (D), San Juan de Arama (D), San Martín (7, 13),
Villavicencio (7, 9, 10, 12, 14), Vista Hermosa (14)
T. dimidiata° Cumaral (27), Restrepo (27)
T. maculata¨ El Porvenir (24)
Nariño T. dispar* Inda (28), Tumaco (A)
Norte de SantanderE. cuspidatus° (9, 10)
E. mucronatus*· Acarí (C), Convención (C), Cúcuta (C), El Carmen (C), Los Patios (C), San
Cayetano (C), Santiago (C), Sardinata (C), Teorema (C, 9, 10)
P. geniculatus* Arboledas (C), Cúcuta (C), Durania (C), El Carmen (C), El Zulia (C),
Santiago (C), Sardinata (C), Teorema (C), Tibú (14), Villa del Rosario (16).
(9, 10)
R. pallescens° La Esperanza (C)
R. pictipes° (C)
R. prolixus*· Convención (C), Cúcuta (C, 7, 13, 14), Cucutilla (l), Chinácota (7, 13, 14),
Gramalote (13, 14), San Cayetano (13, 14), Santiago (13, 14), Tibú (7, 13,
14), Toledo (13, 14), Villa del Rosario (13, 14), Zulia (9, 10, 14)
R. robustus· Cúcuta (C), El Zulia (C). (9, 10)
T. dimidiata° El Carmen C, Toledo (9, 10)
Putumayo P. geniculatus° Puerto Asís (m), Valle del Guamuez (m, 9, 10)
R. pictipes* Puerto Asís (m), Puerto Guzmán (m), Puerto Leguízamo (m, 9, 10)
R. prolixus*+ Puerto Asís (g, m), Puerto Guzmán (m), Orito (9, 10, g), Villa Garzón (m)
Risaralda P. geniculatus° Pueblo Rico (16)
San Andrés y
Providencia T. dimidiata Sector Aguamansa (D) (n)
Santander B. herreri° El Carmen (C), San Vicente de Chucurí (C)
C. pilosa° Curití (C), Galán (C), San Gil (C), Socorro (C)

150
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

Departamento Especie Municipio

E. cuspidatus° Bolívar (C), El Carmen (C), Pinchote (C), San Gil (C), San Vicente de
Chucurí (C), Socorro (C)
P. geniculatus° Barichara (29), Capitanejo (C), Contratación (29), Curití (29), El Carmen
(29), El Playón (C), Enciso (C), Málaga (C, 6), Pinchote (29), San Gil (o), San
José de Miranda (C), San Vicente del Chucurí (29), Simácota (29), Socorro
(9, 10, o)
P. humeralis° El Carmen (29), San Vicente del Chucurí (29)
P. rufotuberculatus° El Carmen (29), San Vicente de Chucurí (29)
R. pallescens° Bolívar (C), Contratación (29), El Carmen (29), El Peñón (C), El Playón (C),
San Gil (29), San Vicente de Chucurí (29), Socorro (29), Sucre (C)
R. prolixus*· Barbosa (13, 14, 21), Betulia (C), Bolívar (C), Bucaramanga (8, 13),
Capitanejo (C), El Carmen (29), Charalá (13, 29), Chimá (29), Cimitarra (9),
Coromoro (29), Curití (13, 29), El Peñón (C), Enciso (C), Gambita (29),
Guadalupe (29), Guapotá (29), Guavatá (13), Güenza (13, 14), Güepsa
(13), Macravita (C), Málaga (7, 13, 14), Miranda (7, 13, 14), Mogotes (13,
29), Molagavita (C), Ocamonte (29), Oiba (7, 13, 14, 29), Onzaga (13, 14,
29), Páramo (29), Piedecuesta (7, 13, 14), Pinchote (13), Puente Nacional (7,
13, 14), Rionegro (7, 13, 14), San Gil (7, 13, 14, 29), San Joaquín (13, 14,
29), San Miguel (C), San Vicente de Chucurí (7, 13, 29), Simácota (29),
Socorro (7, 13, 14, 29), Suaita (29), Sucre (C), Valle de San José (13, 29),
Vélez (7, 9, 10, 14)
R. robustus° (10, 13)
T. dimidiata*· Capitanejo (C), Charalá (29), Curití (29), El Carmen (29), El Hato (29),
Enciso (C), Guacamayo (C), Guadalupe (C), Macaravita (C), Málaga (13),
Mogotes (13, 29), Molgavita (C), Onzaga (13, 14, 29), San Gil (29), San
Joaquín (13, 29, 30), San José de Miranda (C), San Miguel (C), San Vicente
de Chucurí (29), Socorro (o), Suaita (9, 10, 29)
T. maculata° Capitanejo (C)
T. venosa* Bolívar (C), Contratación (29), El Carmen (29), Florian (C), Gambita (C),
Matanza (C), Onzaga (13), San Gil (29), San Joaquín (13), San Vicente de
Chucurí (9, 10, 29), Socorro (29), Suaita (29)
Sucre E. cuspidatus* Galeras (C, c, d, 9, 10)
P. geniculatus+ Coloso (B), Corozal (B), Ovejas (B), San Marcos (B),San Onofre (B), Since
(B), Sincelejo (B), Toluviejo (B, d, 10)
R. pallescens+* Caimito (B), Galeras (C, 9, 31), Guaranda (C) , La Unión (C) , San Benito
Abad (c), San Marcos (C), San Onofre (C, d, 10, 32)
T. dimidiata* Galeras (9, d, 20)
Tolima C. pilosa* Guamo (13), Honda (d, 10, 33, p)
P. geniculatus° Casablanca (D), Dolores (D), Falan (D), Fresno (D), Iconazo (D), Prado (D),
Purificación (D, d, 9, 10, p)
R. colombiensis*·+ Alvarado (D, q), Carmen de Apicalá (D, q), Chaparral (4), Coello (D, q),
Coyaima (D, 20, q 34, r, 35), Guamo (D, q), Ibagué (D, q), Icononzo (q)
Lerida (D, q) Libano (D, q), Melgar (D), Ortega (D c, 13, q) Prado (D, q)
Purificación (D, q) San Luís (D, q) Santa Isabel (D, q)
R. prolixus*· Alvarado (7, 13), Carmen de Apicalá (13), Coello (13, 21), Coyaima (D, c, r,
31), Espinal (13, 14, 21), Flandes (13), Guamo (13), Honda (7, 13), Ibagué
(7, 13), Lérida (13), Líbano (13), Mariquita (7, 13), Melgar (7, 13), Natagaima
(D, 13), Ortega (7, 13), Prado (7, 13, 14, 22), Saldaña (13, 14), San Antonio
Suárez (d, 10)
R. robustus*· Coyaima (13, p)
T. venosa° Villahermosa (D)
Valle del Cauca C. pilosa* Palmira (13), Restrepo (9, 10)
P. geniculatus° Buenaventura (9, 10, 16)
P. rufotuberculatus° Buenaventura (9, 13, 16, 35)
R. proluxus° Cali (13)
T. dispar* Buenaventura (16, 36), Calima (15, 16, 28) Caserío Bajo Calima (s)

151
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62

Departamento Especie Municipio

Vaupés E. mucronatus° Mitú (A)

P. geniculatus° Mitú (A)
R. pictipes° Mitú (A)
R. prolixus° Mitú (A)
Vichada P. lignarius° (13, e)
R. prolixus¨ (13, e)
T. maculata° (13, e, h)

* Presencia de T. cruzi; . presencia de T. rangeli; + presencia de Trypanosoma sp; ° sin datos disponibles; ¨ negativos
para T. cruzi, T. rangeli y Trypanosoma sp.

A Material identificado por el Instituto Nacional de Salud (INS)

B Material identificado en el Instituto Colombiano de Medicina Tropical (ICMT) de Medellín.
C Material identificado en el Centro de Investigaciones Tropicales (CINTROP) de la Universidad Industrial de Santander.
D Material identificado en el Centro de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical (CIMPAT) de la Universidad
de los Andes, Bogotá.
E Material identificado en La Fundación Salud Para el Trópico (FSPT)
F Material identificado en el Laboratorio Departamental de Salúd Pública del Magdalena (LDSP).
G Material identificado por Grupo ETV, Secretaría de Salud de Casanare.
H Material identificado por la Secretaria de Salud del Guaviare (Primer informe de la presencia de vectores de la
tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas en el departamento del Guaviare. Fajardo, Torres).
I Material identificado por el Laboratorio de Salud Pública Fronterizo – Unidad Administrativa Especial de Salud de Arauca.
a. Gualdrón LE, Brochero HL, Arévalo C, Pérez L, Suárez M, Olano VA. Hallazgo de algunos vectores de la
enfermedad de Chagas en el departamento del Amazonas. Resúmenes, XXVI Congreso Sociedad Colombiana de
Entomología, Santafé de Bogotá; 1999. p.72.
b. Rodríguez MH. Etnoconocimiento de los vectores de la enfermedad de Chagas de las comunidades indígenas Ticuna
y Huitoto del trapecio amazónico, departamento del Amazonas, Colombia. P. 71-8. En Guhl F, Schofield CJ Editores.
Proceedings of the ECLAT-AMCHA International Workshop on Chagas disease surveillance in the Amazon region, Palmari,
Brazil. Bogotá; 2004. p.75-82).
c. Moreno J. Recientes estudios epidemiológicos de tripanosomiasis americana en diferentes áreas de Colombia.
Biomédica 1991;11:43-4.
d. Moreno J. Estudios epidemiológicos sobre la enfermedad de Chagas en algunas regiones de Colombia. En: Guhl F,
editor. Memorias del curso de postgrado, Genetica poblacional de Triatominos aplicada al Control vectorial de la Enfermedad
de Chagas. Santafé de Bogotá: Corcas Editores Ltda.1997. p.35-41.
e. Ospina S. Situación actual de la enfermedad de Chagas. En: OPS/OMS/Ministerio de Salud, Dirección de Campañas
Directas. III reunión de investigadores de malaria y otras enfermedades tropicales. Rionegro, Antioquia: Ministerio de
Salud; 1991. p.69-70.
f. Londoño E, Isaza D. Rhodnius pallescens (Barber, 1932) y Trypanosoma cruzi en Urabá. Biomédica 1997;17:66-7.
g.Guhl F, Marinkelle CJ, Becerra W, Romero C. Nuevos registros de triatominos en Colombia. Biomédica 1991;11:90-
1.
h. Pinto N, Molina J, Zipa N, Cuervo R, Guhl F. Determinación de la distribución de triatominos en el departamento de
Boyacá. Resúmenes, XXVI Congreso Sociedad Colombiana de Entomología, Santafé de Bogotá; 1999. p.69.
i. Guhl F, Pinto N, Molina J. Nuevos registros de Rhodnius pictipes y Rhodnius robustus (Reduviidae: Triatominae) en
Cundinamarca, Colombia. Biomédica 1997;17:152.
j. Villegas ME, Manotas LE, Molina J, Guhl F. Primer reporte de la presencia de Rhodnius brethesi Matta, 1919 en
Colombia; Resúmenes XXVI Congreso Socolen. Bogotá; 1999. p.68.
k. Molina JA, Guhl F, Marinkelle CJ. Primer registro de Rhodnius pictipes y Panstrongylus geniculatus (Reduviidae:
Triatominae) En PNN Tinigua, La Macarena, Colombia. Biomédica 1995;15:86.
l. Duque S, Peláez D, Gualdrón LE, Villareal E, Corredor A. Aislamiento de tripanosomas a partir de material fecal de
Rhodnius prolixus. Biomédica 1986;6:37-9.
m. Barreto M, Burbano M.E, Barreto P. Nuevos datos sobre la distribución de Triatominae (Hemiptera: Reduviidae) en
el departamento de Putumayo, Colombia. Memorias XI Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical. Biomédica
2003;23:1:101.
n. Guhl F, Cano A, Aguilera G, Pinto N. Primer reporte insular de Triatoma dimidiata (Latreille): isla de Providencia,
Colombia. Memorias XII Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical, Biomédica 2005;25:103-4.
o. Angulo VM, Tarazona A, Arismendi MJ; Joya MI, Sandoval CM. Distribución de triatomineos (Hemiptera: Reduviidae)
domiciliarios en 27 municipios de Santander. Biomédica 1997;17:81.

152
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

p. Vallejo G, Jaramillo JC, Silva JC, Castañeda N, Gualtero D, Lozano LE, et al. Implementación de un programa de
control de la trasmisión vectorial de la enfermedad de Chagas, municipio de Coyaima, Tolima. Biomédica 1997;17:94-6.
q. Carranza J.C, Lozano L, Vallejo G. Distribución y Dinámica Poblacional de Rhodnius colombiensis en la Cuenca alta
del Río Magdalena En: Memorias Curso Taller Internacional Sistemas de Información Geográfica, Sensores Remotos y
Genética Poblacional de Vectores y Parásitos Aplicados al Control de la Enfermedad de Chagas. Universidad de los
Andes, Bogotá; 2002. p.165-9.
r. Ospina S. Estudio preliminar de un foco de tripanosomiasis americana en el municipio de Coyaima, departamento de
Tolima. En: OPS/OMS/Ministerio de Salud, Dirección de Campañas Directas. III Reunión de investigadores de malaria y otras
enfermedades tropicales. Rionegro, Antioquia: Ministerio de Salud. 1991. p.71.
s. Barreto M, Burbano ME, Barreto P. Actividad de Triatoma dispar (Hemiptera: Reduviidae) en Hanz, Bajo Calima,
Buenaventura, Valle, Colombia. Memorias XI Congreso Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical. Biomédica
2003;23:101-2.
( ) Entre paréntesis aparecen el número y la letra en minúscula de la referencia bibliográfica correspondiente.

Figura 1. Distribución de los principales triatominos asociados al hábitat humano según las zonas biogeográficas.

153
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D.
la figura 5 contiene la información para la costa
Pacífica (departamento del Chocó) e incluye los
departamentos de Caldas y Risaralda; la figura 3
corresponde a los departamentos de la región de
la llanura del Caribe, incluida la Sierra Nevada de
Santa Marta y la isla de Providencia; la figura 2
muestra la distribución de los triatominos en los
departamentos de la Amazonia, y las figuras 8 y
10 corresponden a los departamentos de Meta,
Casanare y Arauca.
Se destaca el nuevo registro de Triatoma
nigromaculata, especie recientemente descrita
para el departamento del Cauca (27). Molina et
al. en el año 2000 (4) predijeron la aparición de
esta especie con base en su presencia en países
vecinos, en los cambios ambientales y el aumento
en las migraciones poblacionales.
Los nuevos registros de R. prolixus silvestres
infectados con T. cruzi en los departamentos de
Casanare, Magdalena y Arauca (figuras 3 y 10)
ponen de manifiesto la importancia de reforzar los
programas de vigilancia entomológica, sobre todo
si se tienen en cuenta sus altos índices de
infección natural con el parásito.
El departamento de Arauca muestra datos de los
especímenes recolectados e identificados por el
personal del Laboratorio de Salud Pública
Fronterizo, Unidad Administrativa Especial de
Salud de Arauca, que indican un aumento
considerable en el registro de la fauna triatomínica,
incluidos nuevos registros de Ps. arthuri y de R.
prolixus silvestre (figura 10)
De igual manera, se destaca el primer reporte
insular de T. dimidiata en la isla de Providencia
(departamento de las islas de San Andrés y
Providencia) (Guhl F, Pinto N, Aguilera G.
Distribución y ecoepidemiología de los triatominos
vectores de la enfermedad de Chagas en
Colombia. Memorias XII Congreso Colombiano de
Parasitología y Medicina Tropical. Biomédica
2005;25:76-9.). Al compararlos morfométricamente
con ejemplares capturados en el interior del país,
los ejemplares capturados en un domicilio de la
isla corresponden fenotípicamente a ejemplares
centroamericanos. Esto indica un alto grado de
dispersión humana, comprobándose una vez más
154
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
el efecto de la dispersión pasiva en triatominos
(figura 3).
Por otra parte, los reportes de ejemplares de T.
dimidiata (figuras 3, 6 y 11) capturados en hábitats
de palmas y cuevas en los departamentos de
Santander, Boyacá y Magdalena (Guhl F, Pinto
N, Aguilera G. Distribución y ecoepidemiología de
los triatominos vectores de la enfermedad de
Chagas en Colombia. Memorias XII Congreso
Colombiano de Parasitología y Medicina Tropical.
Biomédica 2005;25:76-9) demuestran la
importancia de fortalecer los programas de
vigilancia entomológica para que futuros trabajos
centren su interés en las especies silvestres como
un elemento fundamental en la epidemiología de
la enfermedad de Chagas. Los departamentos
de Santander, Norte de Santander, Boyacá,
Casanare, Tolima y Meta (figuras 4, 6, 8, 10 y
11) continúan siendo las zonas de mayor
importancia en cuanto al número de registros. Se
confirma igualmente que R. prolixus es la especie
con la mayor distribución en el país, seguida por
especies del género Triatoma como T. dimidiata,
T. maculata y T. venosa.
Los nuevos registros de la fauna triatomínica en
la Amazonia (figura 2) (Rodríguez MH. Etnoco-
nocimiento de los vectores de la enfermedad de
Chagas de las comunidades indígenas Ticuna y
Huitoto del trapecio amazónico, departamento del
Amazonas, Colombia. En: Guhl F, Schofield CJ.
Proceedings of the ECLAT-AMCHA International
Workshop on Chagas disease surveillance in the
Amazon region, Palmari, Brazil. Bogotá: Corcas
Editores; 2004. p.75-82) han contribuido en la
implementación de la reciente iniciativa de los
países amazónicos. Al igual que las ya existentes
(del Cono sur, Andina, Centroamericana y de
México), esta iniciativa, creada en el año 2.004
por los Ministerios de Salud de los nueve países
amazónicos, pretende fijar políticas y estrategias
de vigilancia epidemiológica y control efectivas
en la cuenca amazónica.
La amplia distribución de P. geniculatus, especie
de hábitos eminentemente silvestres, debe
tenerse en cuenta de manera especial en los
programas de vigilancia, ya que existen reportes
de su domiciliación en el municipio de Amalfi,
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
Antioquia, (Gualdrón LE, Brochero HL, Arévalo C,
Pérez L, Suárez M, Olano VA. Hallazgo de algunos
vectores de la enfermedad de Chagas en el
departamento del Amazonas. Santafé de Bogotá;
Resúmenes XXVI Congreso Sociedad Colombiana
de Entomología: 1999. p.72). Igualmente, la
demostración del proceso de domiciliación de T.
maculata en Santa Marta (Guhl F, Aguilera G, Pinto
N, Vergara D. Distribución geográfica de las
especies de triatominos en los departamentos
endémicos para la enfermedad de Chagas en
Colombia. En: Felipe Guhl. Memorias Primer Taller
Internacional Sobre Control de la Enfermedad de
Chagas. Curso de Diagnóstico, Manejo y
Tratamiento de la Enfermedad de Chagas. VI
Reunión de la Iniciativa Andina para el Control de
la Enfermedad de Chagas, Bogotá; Corcas
Editores: 2005. p.25-41), pone de manifiesto la
importancia de mantener bajo estricta vigilancia
Figura 2. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos que conforman la región de la
Amazonia y la Orinoquia.
Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia
estas especies, originalmente consideradas como
de hábitos silvestres.
Los índices de infección natural en 15 de las 24
especies de triatominos registradas en Colombia,
la presencia de R. prolixus en 21 departamentos,
sumada a la continua acción antrópica sobre los
ambientes silvestres que sirven de hábitat a los
triatominos selváticos, así como el
desplazamiento masivo de poblaciones humanas,
constituyen factores determinantes en la
aceleración de los procesos de domiciliación de
los triatominos.
Se espera que la información aquí presentada sirva
como herramienta para reforzar las estrategias de
control de la enfermedad de Chagas, permitiendo
también la evaluación del riesgo que representan
las especies de triatominos silvestres en
Colombia.
155
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62

Figura 3. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos que conforman la región de la llanura
del Caribe, incluida la Sierra Nevada de Santa Marta y la isla de Providencia (perteneciente al departamento de San Andrés
y Providencia).

Figura 4. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Cauca, Huila, Nariño, Tolima y
Valle.

156
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

Figura 5. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Chocó, Caldas y Risaralda.

Figura 6. Distribución de las diferentes especies de triatominos en los departamentos de Norte de Santander y Santander.

157
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D. Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62

Figura 7. Distribución de las diferentes especies de triatominos en el departamento de Cundinamarca.

Figura 8: Distribución de las especies de triatominos en el departamento del Meta.

158
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62 Distribución y ecoepidemiología de triatominos en Colombia

Figura 9. Distribución de las diferentes especies de triatominos en el departamento de Antioquia.

Figura 10. Distribución de triatominos en los departamentos de Arauca y Casanare.

159
Guhl F., Aguilera G., Pinto N., Vergara D.
Figura 11. Distribución de las diferentes especies de triatominos en el departamento de Boyacá.
Adendo
Al cierre de esta edición se ha reportado una nueva
especie para Colombia, recientemente descrita que
corresponde a Belminus corredori (38). Los
ejemplares fueron capturados en una vivienda de
buena calidad, ubicada en la vereda Puente Tierra
en el municipio de San Gil, departamento de
Santander. La región se caracteriza por la presencia
de bosque montano seco a una altura de 1.810
metros sobre el nivel del mar. Con este nuevo
registro se completan 25 especies de triatominos
en Colombia.
Conflicto de Intereses
Los autores declaran no tener conflicto de
intereses con el contenido del manuscrito.
Financiación
Este estudio se realizó con el apoyo financiero
del Fondo de Investigaciones y Posgrados de la
Facultad de Ciencias de la Universidad de los
Andes y el CDIA- EC - Chagas Disease
Intervention Activities - Contract N° ICA4CT-2003-
10049.
160
Biomédica 2007;27(supl. 1):143-62
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clínicos de enfermedades que destacan alguna
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601
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603
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Categoría

Artículo original ______ Comunicación breve______ Nota técnica______

Revisión de tema______ Reseña histórica______ Ensayo ______

Comentario ______ Imágenes en biomedicina ______

Presentación de caso ______ Haga usted el diagnóstico ______

Carta al editor ______ Reseña bibliográfica ______

1- Presentación:
___ Texto escrito a doble espacio en fuente Arial de 12 puntos de tamaño, en una sola cara de la
hoja, tamaño carta.
___ Páginas numeradas consecutivamente en la esquina inferior derecha.
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programas utilizados y las versiones, además de los nombres de archivo.

2- Título:
___ Se incluyen los títulos en español e inglés (máximo 165 caracteres).
___ Se incluye el título abreviado en español (máximo 50 caracteres).
___ Los autores aparecen sólo con su afiliación institucional, sin mencionar cargos ni títulos
académicos.
___ El autor de la correspondencia suministró los datos completos: nombre, apellidos, dirección,
teléfono, fax y correo electrónico.

3- Resumen:
___ Se incluye el resumen estructurado en español e inglés, con una extensión máxima de 250
palabras y con los siguientes subtítulos: introducción, objetivos, materiales y métodos,
resultados y conclusiones.
El resumen estructurado es sólo para artículos originales y comunicaciones breves.

4- Palabras clave:
___ De 6 a 10 por artículo en cada idioma.
___ Se incluyen las palabras clave en español e inglés (keywords), indexadas en los Descriptores
en Ciencias de la Salud (DeCS), http://decs.bvs.br/E/homepagee.html.

5- Estructura del artículo original:

Se incluyen los siguientes apartados:
___ Página de presentación: título en español, título en inglés, título abreviado en español,
presentación de los autores y datos completos del autor de correspondencia.

604
___ Resúmenes: en español e inglés.
___ Materiales y métodos.
___ Resultados.
___ Discusión.
___ Agradecimientos.
___ Declaración de conflicto de intereses.
___ Fuente de financiación.
___ Referencias.
___ Cuadros y figuras con sus respectivas leyendas.
6- Figuras:
___ Se incluye cada una en página aparte.
___ Se incluyen las leyendas correspondientes en hoja aparte.
7- Cuadros:
___ Se adjuntan en hoja aparte, elaborados en el modelo más sencillo de tablas del programa
Word y las copias en impresora láser.
___ Se ordenan secuencialmente.
___ Se incluye el título correspondiente.
8- Fotografías:
___ Se adjuntan tres copias.
___ Se señala la identificación de la misma y la orientación al respaldo.
___ Se acompañan del correspondiente pie de foto en hoja aparte.
9- Referencias:
___ Las citas se numeran según orden de aparición en el texto.
___ Se ordenan secuencialmente y en el formato adecuado, tal y como lo indican las normas de
Biomédica en las instrucciones a los autores (http://www.icmje.org/index.html).
___ Cuando se citan referencias en los cuadros, éstas deben seguir el orden con el que se
venía en el texto.
10- Abreviaturas y siglas:
___ Se anota entre paréntesis después de la primera vez cuando debe aparecer en formacompleta
y en el idioma original.
11- Nomenclatura:
___ Los nombres de género y especie están escritos en letra cursiva.
___ Los nombres de microorganismos se escriben completos la primera vez que se citan, incluso
en el título y en el resumen, y luego se usa la solamente inicial del género y permanece el
nombre completo de la especie.
12- Consideraciones generales:
___ Carta firmada por todos los autores.
___ Incluye autorización del Comité de Ética para la experimentación en humanos.
___ Incluye autorización del Comité de Ética para la experimentación en animales.
___ Los autores deben certificarle al Comité Editorial que la (s) persona (s) mencionada (s) en los
agradecimientos tiene (n) conocimiento y está (n) de acuerdo con aparecer en ellos.
___ Todos los manuscritos deben incluir declaración de conflicto de intereses y fuente de
financiación.
___ Los decimales en español deben separarse de los enteros por comas, no por puntos.
___ Se envían los nombres de 4 evaluadores con sus respectivos datos.

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