LABORATORIO DE FARMACOLOGIA BASICA

PORTADA

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ndice
Introduccin

Competencias a desarrollar

Conocimientos previos y actividades previas

Materiales

Metodologa de la sesin

Resultados

Discusin

14

Conclusin

15

Cuestionario complementario

16

Referencias

18

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Introduccin
La gran mayora de mtodos instrumentales requieren una calibracin, proceso que
relaciona la seal analtica medida con la concentracin del analito. Los tres
mtodos ms frecuentemente utilizados son: la realizacin y el uso de una curva de
calibracin, el mtodo de la adicin estndar y el del patrn interno.[1] La curva de
calibracin es un mtodo muy utilizado en qumica analtica para determinar la
concentracin de una sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en
disoluciones. El mtodo se basa en la relacin proporcional entre la concentracin y una
determinada seal analtica (propiedad). Conociendo esta relacin, ser posible conocer la
concentracin en una muestra dada mediante la medida de esa seal. La relacin
concentracin seal se suele representar en una grfica a la que se le conoce como curva
de calibracin o curva de calibrado.[2]
Es imprescindible que la seal analtica utilizada mantenga una relacin proporcional con la
concentracin. Las seales ms utilizadas son aquellas cuya relacin con la concentracin
es lineal, al menos en el rango de trabajo. Por ejemplo, una de las propiedades ms
utilizadas es la absorbancia (absorcin lumnica) que suele mantener una relacin lineal con
la concentracin de solutos en disoluciones. Al ser una relacin lineal, se puede representar
mediante una recta, de ah que este tipo especfico de curva de calibracin se conozca
tambin como recta de calibracin.[2]
Es importante sealar que los mtodos analticos son establecidos por instituciones
nacionales o internacionales que proporcionan procedimientos y caractersticas del mtodo
y que concluyen con indicadores de calidad (denominados caractersticas del desempeo
analtico) que suelen incluir: exactitud, precisin, especificidad, adems de los parmetros
que se determinan a partir de los curvas de calibracin.[3][4]
Independientemente de la tcnica instrumental responsable de la seal analtica (cuyas
caractersticas se estudian en forma particular) los parmetros que se determinan a partir de
las curvas de calibracin obtenidas con cualquiera de ellas son: la linealidad la sensibilidad
el lmite de deteccin el lmite de cuantificacin el intervalo analtico.[3][4]
Existen diversos conceptos que deben conocerse para un completo entendimiento de este
proceso, algunos de ellos son:

Analito: especie qumica objeto del anlisis.

Linealidad: es la aptitud que presenta un mtodo para ofrecer, en la gama de medida
seleccionada, resultados proporcionales a la concentracin del compuesto buscado.
Adems requerimiento fundamental en la prctica del anlisis qumico cuando se realizan
curvas de calibracin.[3]
Sensibilidad: mide la capacidad para discriminar entre pequeas diferencias en la
concentracin del analito. Dos factores limitan la sensibilidad. la pendiente de la curva de
calibracin y la precisin del sistema de medida.[3]
Lmite de deteccin (LD): En general este trmino se define como la mnima concentracin
del analito detectable por el mtodo. Su determinacin es importante (particularmente en

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anlisis de trazas) pero los problemas asociados con ella son diversos; estos problemas
han sido estadsticamente estudiados y varios criterios de decisin han sido propuestos. [4]
Lmite de cuantificacin (LC): Llamado tambin lmite de determinacin, se define como
la ms pequea concentracin del analito que puede ser determinada con un nivel de
exactitud y precisin aceptables. Dependiendo del convenio utilizado se considera como la
concentracin de analito que corresponde al valor del promedio del blanco ms 5, 6 o 10
veces la desviacin estndar del mismo (esta ltima es la ms comn). [4]
Intervalo analitico: Est definido como el intervalo de concentracin en que el analito
puede ser determinado mediante la utilizacin de la curva de calibracin; se considera que
es el comprendido entre el lmite de cuantificacin hasta la concentracin en la cual se
pierde la linealidad de la curva. [3]
Longitud de onda: es la distancia real que recorre una perturbacin (una onda) en un
determinado intervalo de tiempo. Ese intervalo de tiempo es el transcurrido entre dos
mximos consecutivos de alguna propiedad fsica de la onda. [4]
Espectro de luz visible: regin del espectro electromagntico que el ojo humano es capaz
de percibir. A la radiacin electromagntica en este rango de longitudes de onda se le llama
luz visible o simplemente luz. [3]
Espectrofotmetro: La palabra espectrofotmetro se deriva de la palabra latina spectrum,
que significa imagen, y de la palabra griega phos o photos, que significa luz. Es uno de los
principales instrumentos diagnsticos y de investigacin desarrollados por el ser humano.
Utiliza las propiedades de la luz y su interaccin con otras sustancias, para determinar la
naturaleza de las mismas.[5]

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Competencias a desarrollar
1. Se aprendern los conceptos bsicos y el mtodo de realizacin de una curva de
calibracin.
2. Se aprender a calcular una muestra problema tomando como principio una curva de
calibracin previamente realizada.
3. Se comparar un mtodo analtico emprico y un mtodo analtico utilizando el
espectrofotmetro.

Conocimientos previos y actividades previas

1. Preparacin de soluciones
Molaridad: es un valor que representa el nmero de moles de soluto disueltos en un litro de
solucin (mol / L). Para preparar una solucin de una molaridad dada, se pesa la cantidad
calculada de la sustancia (soluto), se disuelve en una pequea cantidad de solvente (agua
destilada u otro) y finalmente se completa hasta el volumen deseado con el solvente.
Porcentaje masa en volumen (%m/v): Es la cantidad en gramos de soluto por cada 100 ml
de solucin. Aqu como se observa se combina el volumen y la masa. Ej: Una solucin que
es
8%
m/v
tiene
8
gramos
de
soluto
en
100
ml
de
solucin.
Frmula: % m/v = x 100

2. Diluciones seriadas
Muy frecuentes en estudios biolgicos, se intenta analizar la variacin de algn parmetro
que depende de la concentracin de un soluto y se necesita preparar soluciones con
distintas
concentraciones
del
mismo.
En este caso es muy conveniente hacer un banco de diluciones seriadas que no son ms
que un tipo de diluciones sucesivas manteniendo constante el factor de dilucin en cada
paso.
El banco de diluciones seriadas tiene muchas ventajas prcticas, desde los clculos
previos, pasando por la manipulacin de volmenes y hasta en la representacin grfica de
resultados.
Slo hay que tener en cuenta la concentracin inicial, el volumen que se quiere conseguir
de
cada
concentracin
y
el
factor
de
dilucin.
El volmen necesario se asume que es el mismo para todas las concentraciones y depende
4

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de cada experimento. Es fcil ver que el volumen final que se consigue de cada
concentracin es exactamente igual al volumen fijo de solvente con que se cargan todos los
tubos
del
banco.
El factor de dilucin se calcula o aproxima sabiendo las concentraciones mxima y mnima
que se quieren estudiar y el nmero de concentraciones distintas que se quieren hacer.
El clculo de las concentraciones en los tubos sucesivos es tan sencillo como multiplicar la
concentracin del anterior por el factor de dilucin.
Se utiliza la frmula: (C1V1) = (C2V2), donde:
V1 es el volumen de la solucin original.
C1 es la concentracin de la solucin original.
V2 es el volumen de la solucin resultante.
C2 es la concentracin de la solucin resultante en las mismas unidades que C1.
3. Manejo de datos
4. Uso correcto de calculadora
5. Ecuacin de la recta y regresin lineal
Una lnea recta se puede entender como un conjunto de puntos alineados en una nica
direccin. Uno de los postulados de la geometra Euclidiana dice "para determinar una recta
slo es necesario dos puntos del plano.
El nombre que recibe la expresin algebraica (funcin) que determine a una recta dada se
denomina Ecuacin de la recta.

Se llama ecuacin principal de una recta a una expresin de forma: Y=mx+b.

El coeficiente de la x es la pendiente, m.
El trmino independiente, b, se llama ordenada en el origen de una recta, siendo (O, b) el
punto de corte con el eje de ordenadas.

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Materiales

Materiales individuales
Guantes de latex.
Bata obligatoria.
Protocolo de la prctica.

Materiales por equipo

Calculadora y/o telfono mvil con acceso a internet.
Hojas blancas.

Material proporcionado por el profesor

Solucin concentrada al 100% (10mg/ml).
10 tubos de vidrio.
Gradilla.
Propipeta casera.
Papel para limpieza.
Plumones y borrador.
Micropipetas y puntas.
Multiplaca de 96 pozos.
Lector de multiplacas.

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Metodologa
1. Realizar los clculos necesarios para elaborar las diluciones seriadas solicitadas, utilizando
la frmula C1V1=C2V2. Con los datos obtenidos elaborar la tabla l.
2. Una vez elaborada la curva de calibracin, se debe asignar absorbancia relativa de 1 a la
dilucin del tubo A, posteriormente calcular la absorbancia relativa para los tubos restantes.
Con los datos obtenidos elaborar la tabla ll.
3. Con la informacin obtenida en los pasos anteriores, elaborar una grafica (dispersion X,Y),
realizar la regresin lineal y obtener la ecuacin de la recta para la curva de calibracin.
4. Terminados los pasos 1,2 y 3, comparar la tonalidad de color de las 10 muestras problema
con la curva de calibracin, se debe asignar un valor arbitrario que no sea igual al de los
puntos de la curva. Utilizando la ecuacin de la recta obtenida calcule la concentracin de
cada una de las muestras problema. Con los datos obtenidos elaborar la tabla lll.
5. Depositar 200L de cada dilucin de la curva y las muestras problema de calibracin en la
multiplaca de 96 pozos y analizar en el espectrofotmetro la placa.
6. Calcular la concentracin real en g/l de la curva de calibracin, teniendo en cuenta que la
concentracin al 100% es de 10mg/ml. Con las absorbancias reales obtenidas elaborar la
tabla IV.
7. Obteniendo un promedio de las absorbancias reales, elaborar una grafica (dispersion X,Y),
realizar la regresin lineal y obtener la ecuacin de la recta para cada curva de calibracin.
8. Utilizando la ecuacin de la recta obtenida, calcular la concentracin real de cada una de las
muestras problemas. Con los datos obtenidos elaborar la tabla V.

Resultados
1. Tabla l y fotografa de la curva de calibracin.

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Tubo

Dilucin
porcentaje

Volumen en ml
de solucin
(colorante)

Volumen de
agua en ml
requerido

Volumen final

100%

8ml

1.6ml

80%

6.9ml

1.6ml

3ml

50%

5ml

3ml

4.8ml

20%

3.2ml

4.8ml

4ml

10%

4ml

4ml

4ml

5%

4ml

4ml

4ml

2.5%

4ml

4ml

4ml

1.25%

4ml

4ml

4ml

0.625%

4ml

4ml

8ml

8ml

FIGURA I. CURVA DE CALIBRACION.

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2. Tabla ll y grfica en Excel de la ecuacin de la recta de la curva de calibracin.

Tubo

Dilucin
porcentaje

Absorbancia
Relativa
(Abs/rel)

100%

80%

0.8

50%

0.5

20%

0.2

10%

0.1

5%

0.05

2.5%

0.025

1.25%

0.0125

0.625%

0.00625

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3. Tabla lll y fotografa de las muestras problema.

Muestra problema

Absorbancia relativa
(Abs/rel)

Concentracin

0.19

19%

0.21

21%

0.10

10%

0.9

90%

0.45

45%

0.82

82%

0.00623

0.623%

0.00630

0.63%

0.48

48%

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FIGURA II. MUESTRAS PROBLEMA

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4. Tabla lV y grfica en Excel de la ecuacin de la recta de los promedios de todas las curvas
de calibracin.
Tubo

Concentracin en
g/l

Absorbancia real (Abs) de cada

equipo

Promedio de las
absorbancias

0.005

-0.003

-0.003

-0.011

- 3 x 10-03

0.00000009765625

0.008

0.017

0.040

0.006

0.01775

0.000015625

0.031

0.032

0.046

0.029

0.0345

.00125

0.071

0.068

0.066

0.066

0.06775

.004

0.133

0.165

0.224

0.160

0.1705

0.08

0.309

0.329

0.329

0.309

0.319

.8

0.637

0.651

0.700

0.591

0.64475

1.843

1.689

1.381

1.647

1.64

2.245

2.709

2.315

2.571

2.46

10

3.233

***

3.364

3.290

2.47175

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5. Tabla V y grfica de barras de la concentracin de las muestras problema.

Muestra problema

Absorbancia real

Concentracin real

3.364

336.4%

2.315

231.5%

1.381

138.1%

0.700

70%

0.329

32.9%

0.224

22.4%

0.066

6.6%

0.046

4.6%

0.040

4%

10

-0.003

-0.3%

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Discusin.
en una primera instancia al momento deleer la practica previo a la sesin de
laboratorio, se espero que fuera un tanto complicada pero como siempre bastante
educativa y entretenida, pero al inicio de la practica nos dimos cuenta que seria un
poco complicada, de hecho, un poco mas complicada de lo normal ya que al
momento de ver las pipetas casera, aun que no estamos del todo familiarizados con
el rea de la bioqimica y de la farmacologa donde se las formulas y se resuelven
distintos problemas en el laboratoroio, tras una explicasion apropiada del maestro
algunos de los compaeros entendieron, he aqu cuando entendemos la importancia
de trabajar en equipo, ya que, algunos de nosotros entendimos algunas partes de la
practica y otros otras partes, entonces al trabajar en equipo y complementarnos es
que pudimos llegar a una solucin correcta de la practica.
Uno de los mayores retos que se presento es el resolver las tablas, pero como lo
dije con trabjo en equipo y analizando los datos pudismos resolverlo, las tablas
fueron una parte importantsima para la realizacin de la practica, ya que, estas nos
indicaron como realizar correctamente la practica y las cantidades correctas que
debbiamos anadir en cada tubo.
Otro de los grandes desafos que se nos presento en un principio fue utilizar las
pipetas caseras, generalmente podemos estar acostumbrados a trabajar con
artefactos mas profesionales, pero esta clase de expriencias nos ayudan a mejorar
nuestra formacin profesional y a resolver retos que nos podemos encontrar en la
practica profesional, por lo que es muy importante la resolucin de estos problemas
de la vida diaria.
Durante la realizacin de la practica resulto un tanto difcil interpretar que cantidad
de colorante y agua debamos de depositar en los distintos tubos, esto debido a que
en un principio se creyo que debamos depositar cada cantidad tomndola
directamente de el frasco de colorante, pero despus entendimos que la prueba que
realizbamos eran disoluciones seriadas, por lo que entendimos que la cantidad de
colorante indicada se tenia que tomar del tubo con colorante previo.

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Conclusin.
En conlcusion podemos decir que el aprender sobre la curva de calibracin es de
gran utilidad para nuestra formacin profesional, pero aun mas importante para
algunos de nosotros si pensamos dedicar nuestra vida a algn campo de la
investigacin. A pesar de que hoy en dia muchos de estos procedimientos son
computalizados es importante que nosotros sepamos realizar estos procedimientos
mayor mente para realizar tratamientos adecuados, si no tambin mirndolo de una
manera mas en un mbito profesional, el saber esta clase de cosas pueden abrirnos
mas puertas en el mbito laboral.

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Cuestionario complementario
1. Mencione las principales caractersticas y utilidades del Rojo de fenol:
EL rojo de fenol es un compuesto orgnico utilizado en el laboratorio como indicador de pH,
el indicador nos muestra cuando la reaccin se ha neutralizado mediante un viraje que es el
cambio de color.
Se presenta en polvo o en cristales de color rojo, es inodoro y se descompone a
temperatura de ebullicin Tiene baja solubilidad en agua, soluble en disoluciones de
hidrxidos alcalinos y ligeramente soluble en acetona y alcohol etlico.En medios de cultivo
se utiliza como indicador de pH.
pH inferiores a 6'8, el cultivo vira a amarillo
pH superiores a 8 el cultivo se torna de color rojo
pH entre 6'8 y 8 dan tonalidades graduales de color naranja
2. Para el desarrollo de esta prctica se prepar 0.5L de Rojo de fenol. Calcule la
molaridad de la solucin concentrada (100% o bien 10mg/ml).
Molaridad = n (no. de solutos)/vol. de disolucin
Peso molecular Rojo de fenol: C19H14O5S = 354.39
.5 L = 500ml
500ml x 10mg/ml = 5000mg
1g = 1000mg por lo tanto 5g = 5000mg
No. de moles = g/Pmol
5g/354.390=0.014 moles de soluto
0.014/0.5 L = 0.028 m/L
M = 0.028m/L
3. Teniendo en cuenta el punto anterior diga cul es la concentracin micromolar (M)
de cada una de las muestras problemas analizadas.
Muestra
problema

Concentracin
micromolar (M)

949.23 M

653.23 M

389.68 M

197.52 M

92.8355 M

63.207 M

18.6235 M

12.9800 M

11.2870 M

10

-0.8465 M

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Referencias
1. Skoog, D. A., Holler, F.J. & T. A. Nieman. Principios de Anlisis Instrumental. 5ta Ed.
Mxico: Editorial McGrawHill; 2001.
2. Departamento de Quimica Analitica: Operaciones bsicas en analisis qumico, farmacutico
y medioambiental [Pgina de internet]. Valencia: c2006. [Citado 9 Oct 2016]. Recuperado
de: http://www.uv.es/gammmm/Subsitio%20Operaciones/index
3. Harris Daniel C. Anlisis Qumico Cuantitativo, 2 edicin. Editorial Reverte, Espaa 2001.
4. Alcntara Pineda A. Rodrguez R. Gua de validacin de Mtodos Analticos, Editada por el
Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos Mxico, A. C., Mrida.
5. Castellanos, J., Sistema de capacitacin tcnica, Mantenimiento de equipo mdico, Mdulo
Laboratorio Clnico, submdulo 2, espectrofotmetro, Bogot, Colombia, Fondo Nacional
Hospitalario, Divisin de Ingeniera y Mantenimiento, 1989.

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