REACCIONES SEROLGICAS: AGLUTINACIN Y PRECIPITACIN

INTRODUCCION
Las reacciones serolgicas son aquellas reacciones antgeno y anticuerpo que son
realizadas con el fin de comprobar la presencia de anticuerpos en la sangre; realizndose
un examen que tiene como fin conocer la exposicin o presencia de un microorganismo
patgeno en particular y a partir de ella ver la capacidad de respuesta del individuo a tal
infeccin, se puede utilizar la sangre o tomar solo el suero, el cual se obtiene luego de
centrifugar la sangre coagulada.
Este examen serolgico se realiza tambin para descartar sospechas de alguna infeccin.
En nuestro caso estaremos trabajando con bacteria salmonella typhi.
Vamos a poder observar cmo es que se dan estas reacciones con esta bacteria, lo
veremos en una reaccin de aglutinacin; a continuacin veremos la reaccin antgeno
anticuerpo con la muestra de suero humano haciendo uso de la reaccin de precipitacin.

OBJETIVOS

Aprender a diferenciar y saber cmo se realizan las reacciones serolgicas.

Comprender como es que el anticuerpo y el antgeno reaccionan a travs de la
aglutinacin y la lnea de precipitacin.

FUNDAMENTO TEORICO
Las pruebas serolgicas basadas en la reaccin antgeno anticuerpo constituyen una valiosa
herramienta en el diagnstico y manejo de la enfermedad infecciosa. Su introduccin como
ayudas diagnsticas se inici a finales del siglo pasado y tuvo uno de sus momentos estelares
hacia 1905 cuando August Von Wassermann O), adapt la fijacin de complemento desarrollada
por Jules Bordet (2,3) al diagnstico de la sfilis (4), convirtindola en un procedimiento clsico que
hasta hace pocos aos constitua el pilar fundamental de laboratorio para el diagnstico de esta
enfermedad, fue la famosa reaccin de Wassermann. De entonces a nuestros das las pruebas
serolgicas han recorrido un largo camino buscando la precisin del diagnstico de la enfermedad
infecciosa.

Reaccin serolgica de Aglutinacin

En las tcnicas de grupos sanguneos eritrocitarios las reacciones ms importantes son las de
aglutinacin. Los antgenos situados en la membrana de los hemates reaccionan con los
anticuerpos y el resultado de la reaccin es la formacin de grumos de hemates o aglutinados.
Las determinaciones de antgenos hemticos y el estudio de anticuerpos en sueros se basan
principalmente en la aglutinacin de los hemates, aunque en ocasiones la unin
antgeno/anticuerpo que activa la va clsica del sistema del complemento puede ser detectada
por una hemlisis in vitro. Los anticuerpos de grupo sanguneo esencialmente hemolticos son:
anti-A, anti-B, anti-Lea, anti-Vel y anti-PP1p .
La reaccin hemolitica in vitro debida a los anticuerpos de grupo sanguneo se produce con
poca frecuencia ya que la secuencia de la activacin del complemento se interrumpe a partir del
componente C3Un factor muy importante es el tipo de inmunoglobulina a que pertenecen los anticuerpos
reaccionantes. Si los anticuerpos son del tipo IgM la aglutinacin se produce directamente. Por su
tamao molecular y la distribucin de los lugares de reaccin con los antgenos, pueden unirse
fcilmente con varios hemates y producir su aglutinacin.

Reaccin Serolgica de Precipitacin

Las pruebas de precipitacin, cuya dinmica fue estudiada por Heildelberger hacia 1.930 (5),
constituyen una de las pruebas secundarias ms verstiles. La caracterstica fundamental de sta,
es que el antgeno est siempre en dilucin en una solucin tampn la cual generalmente es
solucin salina. Heildelberger (5) encontr que el fundamento visible de la reaccin antgenoanticuerpo ocurre en las reacciones de precipitacin solamente cuando los dos componentes
estn en proporciones ptimas y que este fenmeno puede evidenciarse claramente en la llamada
curva de precipitacin; cuando se coloca una serie de capilares con concentraciones
descendentes de anticuerpos dirigidos contra una concentracin constante del antgeno homlogo
en dilucin, se produce, luego de un perodo de incubacin, el fenmeno visible y se puede
determinar la presencia de tres zonas claramente diferenciables.
Utilizada en el diagnstico serolgico de los antgenos solubles. Se realiza en un gel con objeto de
que los antgenos y anticuerpos puedan difundir libremente y que, por el contrario, el entramado
tridimensional formado entre antgenos y anticuerpos especficos quede atrapado en el gel,
formando un precipitado macroscpico.

La serologa del gnero Salmonella constituye el complemento necesario para

el diagnstico de la fiebre tifoidea.

El gnero Salmonella tiene principalmente dos clases de antgenos.

o El antgeno O o antgeno somtico termoestable.
o El antgeno H o antgeno flagelar termolbil.

A partir de la segunda semana, el paciente que sufre de fiebre tifoidea, contiene

anticuerpos en la sangre, que pueden ser identificados probando el suero del
paciente contra antgenos de Salmonellas, los cuales pueden ser demostrados por
la reaccin de Widal.

La reaccin de Widal incluye:

o Aglutinacin en placa

Procedimiento ampliamente utilizado por su simplicidad.

MATERIALES
*Para la reaccin de Aglutinacin

Cultivo de salmonella typhi

Suero anti salmonella typhi
Porta objeto
Aza bacteriolgica
Mechero

*Para la reaccin de Precipitacin

Una lmina porta objeto

Colocar 1 gota de Agar Noble (3-4ml)
Antgeno suero humano

Anticuerpo suero humano

Placa Petri
Coloracin azul de amidoschaiwtz

PROCEDIMIENTO
Para la reaccin de Aglutinacin
1. En una lmina porta objeto, colocamos una gota del antgeno.
2. En la misma lmina colocamos una gota del anticuerpo.
3. Observamos si hay reaccin.

Para la reaccin de Precipitacin

En una lmina porta objeto colocar 1 gota de Agar Noble (3-4ml)

Colocar el antgeno y el anticuerpo esto debe estar a una distancia de 6mm.

ANTICUERPO

ANTIGENO

SUERO

SUERO
HUMANO
6mm

Colocar el colorante azul.

Colocarlo en una placa Petri con agua y dejarlo encubar por 3 das.
Observar cmo se form la lnea de Precipitacin.

Lnea de
Precipitacin

RESULTADOS

En el primer caso de aglutinacin observamos perfectamente la reaccin ocurrida,

se form unos grumos blancos en la reaccin.

En el segundo caso de precipitacin tambin pudimos observar cmo fue que

reacciono el suero humano con su antgeno y su anticuerpo formndose la lnea de
precipitacin.

DISCUSION

La primera prueba fue muy sencilla ya fue solo se coloc el antgeno y el anticuerpo
juntos y se esper a que ocurra la reaccin, la cual se observ por los pequeos
grumos blancos que presentaba; a la cual se le llama aglutinacin.
Hubo complicaciones a la hora de observar todos, ya que todos se amontonaban
para ver la reaccin.
Esta prctica se realiz con mucho cuidado ya que se us la bacteria de la
salmonella typhi, el cual es muy contagioso.
En la segunda reaccin de precipitacin, solo observamos el resultado final que se
pudo observar gracias a la coloracin azul, pudimos divisar la lnea de precipitacin.

CONCLUCION

Llegamos a la conclusin de que las reacciones serolgicas son pruebas muy

necesarias para saber cmo es que reaccionan los antgenos y anticuerpos, si es
que hay reaccin o no, con estas pruebas se pueden detectar enfermedades
infecciosas y tambin los grupos sanguneos, en la actualidad son de gran utilidad
ya que es requerida cuando se ingresa un elemento extrao al cuerpo de una
persona, para saber que reaccin va a provocar.

BIBLIOGRAFIAS

Guzmn MA. Inmunofluorescencia. Fundamentos.lnstituto Nacional de Salud. Series de

notas e Informes tcnicos NO.l 2 Ed. Bogot 1996.

Yalow RS, Berson SAo Immunoassay of endogenous plasma insulin in mano J Clin Invest

1960; 39:1157-1175
Engvall E, Perlman P. E nzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), quantitative assay of

immunoglobulin G. Immunochemistry 1971; 8:871-879.

Voller A, Bidwell DE, Bartle A. The enzyme linked immunosorbent assay (ELISA): A guide

with abstracts ofmicroplate applications .Dynatech Laboratories.Alexandra, Virginia 1979.

Southern EM. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel
electrophoresis. J Mol Biol 1975; 98:503-517.

Towin H, Staelin T, et al. Electrophoretic transfer of proteins fron polyacrilamide gels to

nitrocelIulose

sheets.Procedure

and

sorne

applications.

Proc

Nat

Acad

Sci

USA

1979;76:4350- 4354 23. Hsu YH. Immunogold for detection of antigen on nitrocellulose
paper. Ann Biochem 1984; 142: 221-225.