UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Facultad de Pesquera
Departamento de acuicultura e industrias
pesqueras
Nutricin y Alimentacin de Organismos Acuticos

DESCAPSULACIN DE LOS CISTES DE ARTEMIA SP.

PROFESORA
GRUPO

Mg.SC. Jessie Vargas C.

E*

FECHA DE REALIZACION DE LA PRCTICA:

10/09/2015

FECHA DE ENTREGA DE LA PRCTICA:

N DE MESA
INTEGRANTES

17/09/2015

1
:
Alderete Malpartida, Edith.
Kuoman Quichz, Susana.
Robles Provelion, Alejandro.
Rodrguez Carrera, Luis.

2015

DESCAPSULACIN DE LOS CISTES DE ARTEMIA SP.

I.

INTRODUCCIN:

En la acuicultura, el alimento vivo es de suma importancia. La Artemia

constituye el alimento ms utilizado en larvicultura de peces y crustceos y
por ello tiene demanda dado el tamao que presenta en sus diferentes
etapas de desarrollo (quiste, nauplios y adultos). Los quistes pueden
permanecer en estado de dispausa por largos periodos de tiempo, as se ha
visto que algunos que han estado guardados durante diez aos, an son
viables.
Debido a las caractersticas de reproduccin que presenta Artemia de
enquistar los embriones bajo ciertas condiciones ambientales, es posible
tambin comerciar con dichos quistes, ya que son fcilmente almacenados
y transportados pudiendo rehidratarlos bajo tcnicas muy sencillas, con la
consecuente eclosin de los nauplios.
Para ello es importante conocer el proceso de descapsulacin de cistes de
Artemia sp ya que los cistes no eclosionados causan a menudo obstruccin
del tubo digestivo y ya que las cscaras estn cargadas de bacterias
pueden ocasionar infecciones en las especies a alimentar. Dicho proceso
indica cmo eliminar el corin (dura capa externa del ciste) sin afectar la
viabilidad del embrin por medio de una exposicin de corta duracin de los
cistes hidratados a una solucin de hipoclorito.

II.

REVISIN DE LITERATURA:

IMPORTANCIA DE LA ARTEMIA SP.

Artemia constituye el alimento bsico de en sus primeras etapas de la vida,
tanto por calidad nutricional, como por talla y movilidad para peces y
camarones (Sorgeloos 1996)
Quistes con un dimetro de 240 micras con un corion grueso de 7.5 micras
en promedio presenta el porcentaje y eficiencia de eclosin son bajos, pero
cuando estos son descapsulados llegan a alcanzar cerca del 90% y
2000.0000 nauplios /gramo de quistes; la calidad de quiste se puede
mejorar si se tiene un manejo adecuado en las cosechas (Sorgeloos 1991 y
Avarez y Sanchez 1994)

Morfologa de los quistes secos:

El corion: Capa dura formada

de lipoprotenas impregnadas de
quitina y hematina (= producto
de descomposicin de la
hemoglobina; la concentracin
de hematina determina el color
de la cscara, variando de un
marrn plido a un marrn
oscuro). La principal funcin
del corion es la de
proporcionar una proteccin
adecuada al embrin contra
rupturas mecnicas y radiaciones Esta capa puede ser completamente
eliminada (disuelta) por un tratamiento oxidativo a base de hipoclorito (=
decapsulacin del quiste).
La membrana cuticular externa: Protege al embrin de la penetracin
de molculas mayores que la molcula del CO2 (= membrana compuesta de
varias capas y con una funcin de filtro muy especial, actuando como
barrera de permeabilidad).
La cutcula embrionaria: Una capa transparente y altamente elstica
que queda separada del embrin por la membrana cuticular interna (que se
transforma en membrana de eclosin durante el proceso de incubacin)

Estos quistes son

metablicamente
inactivos y no se
desarrollan mientras se,
mantengan secos .una
vez puestos en
inmersin con agua de
mar, los quistes, toman
un forma esfrica al
hidratarse y, dentro de
la cascara, el embrin
reanuda su metabolismo
interrumpido (Clegg y Conte 1980)
Despus de 20 horas la membrana cuticular exterior del quiste, se rompe, lo
que se llama etapa de ruptura y cuando el embrin rodeado por la
membrana de eclosin, sale progresivamente de los restos de los quiste, a
esta etapa se le conoce como la del paraguas (Clegg y Conte 1980;
Trotman 1991)
Mientras que el embrin se cuelga debajo de la cascara vaca el desarrollo
de los nauplios se completa y, en un corto plazo de tiempo, se rompe la
membrana de eclosin y finalmente nacen los nauplios libre nadadores
(Clegg y conte 1980)

Observaciones externas de los quistes en

desarrollo:
Cuando se incuban en agua de mar, los quistes
bicncavos se hinchan adoptando una forma
esfrica en el plazo de 1 a 2 horas. Una vez
completamente hidratados, el dimetro del
quiste ya no vara. Transcurridas de 15 a 20
horas desde la hidratacin, la cscara del
quiste, (incluyendo la membrana cuticular
externa) estalla (=
breaking o estado E-1) con lo que se hace visible el prenauplio rodeado de la
membrana de eclosin. El embrin deja definitivamente la cscara (estado
E-2) y cuelga hacia abajo de la cscara vaca (la membrana de eclosin
puede estar an unida a la cscara). A travs de la transparencia de la
membrana de eclosin se puede seguir la diferenciacin del prenauplio
hasta el estado I de larva de nauplio, el cual comienza a mover los
apndices. Poco tiempo despus, la membrana de eclosin se romper
(hatching) liberando la larva nadadora de Artemia (comenzando por la
cabeza)
Estadios de desarrollo:
Una vez puestos en agua de mar, los quistes bicncavos se hidratan
tomando forma esfrica y el embrin recobra su metabolismo reversible
interrumpido. Tras unas 24 horas la
membrana externa de los quistes
se rompe y aparece el embrin
rodeado de la membrana de
aclosin. Durante las horas
siguientes, el embrin abandona
completamente la cscara del
quiste: colgando entretanto de la
cscara vaca a la cual permanece
todava unido. Dentro de la
membrana de eclosin se completa
el desarrollo del nauplio, sus
apndices comienzan a moverse y
en un breve periodo de tiempo la
membrana de eclosin se rasga
emergiendo el nauplio que nada
libremente. (Castroy de Lara 1991 )
El primer estado larvario mide entre 400 y 500 micras de longitud, tiene un
color pardo anaranjado y posee tres pares de apndices: el primer par de
antenas el segundo par de antenas y las mandbulas. Un nico ocelo de
color rojo tambin llamado ojo nauplial se encuentra situado en la cabeza
entre el primer par de antenas. La cara ventral del animal se encuentra
cubierta por un amplio labro que interviene en la toma de alimento. El

estado larvario I no se alimenta ya que su aparato digestivo no es todava

funcional. (Clegg y Conte (1980).
Tras aproximadamente 24 horas, el animal muda al segundo estado larvario.
Pequeas partculas alimenticias con un tamao que vara entre 1 y 40
micras son filtradas por el segundo par de antenas, siendo entonces
ingeridas por un aparato digestivo ya funcional. La larva contina su
crecimiento apareciendo diferenciaciones a lo largo de las 15 mudas. As
van apareciendo unos apndices lobulares pares en la regin torcica que
se diferenciarn posteriormente en toracpodos, se desarrollan ojos
complejos laterales a ambos lados del ojo nauplial.

Parmetros crticos para una eclosin ptima

Temperatura
La temperatura deber mantenerse en el intervalo de 2530C. A
temperatura por debajo de 25C la eclosin es ms lente y por encima de
30C el metabolismo de los quistes se detiene irreversiblemente. Es mejor
mantener una temperatura constante en el medio de eclosin para obtener
una produccin mxima de nauplios en estado I

El metabolismo activo
actua en el intervlo de
temperatura entre 4 y
32C; aunque si bien el
porcentaje de eclosin
permanece constante, los
nauplios eclosionan antes
a medida que la
temperatura es ms alta
Salinidad y pH
Mayormente se usa el agua de mar (35%0) para la eclosin de los quistes.
Sin embargo, a una salinidad de 5 aumenta la tasa de eclosin (ya que se
tiene que producir menos glicerol y se han registrados eficiencias de
eclosin ms elevadas para algunas cepas de quistes, teniendo los nauplios
un mayor contenido energtico. A pesar de todo, aconsejamos utilizar agua
de mar natural diluida con agua dulce hasta 5%., complementndola con 2
g por litro de NaHCO3 industrial. Es esencial incrementar las cantidades de
tampn cuando se eclosionan grandes densidades de quistes (= gran

produccin de CO2), con el fin de mantener los niveles de pH por debajo de

8.0 (segn Sato, 1967)
Oxgeno
A fn de lograr una eclosin mxima (tanto en tasa como en eficiencia), se
recomienda mantener unos niveles de oxgeno por encima de 2 mg/l. Las
tasas ptimas de aireacin han sido controladas localmente en funcin del
tamao del tanque y de la densidad de quistes incubados; por ej. Para lograr
una eclosin mxima de 100 g de quistes en un recipiente de 20 l se debe
mantener una tasa de aireacin de 7 l de aire/tanque.
Iluminacin
La iluminacin de los quistes, al menos durante las primeras horas tras su
hidratacin, es esencial para lograr una eclosin mxima. Teniendo en
cuenta las diferencias que se observan entre las cepas de Artemia, es
aconsejable para obtener unos resultados ptimos, mantener una
iluminacin de aproximadamente unos 2000 lux en la superficie del agua.
Este nivel de iluminacin se logra, principalmente, durante el da en tanques
transparentes puestos a la sombra en el exterior. Sin embargo y con el fn
de independizarse de las fluctuaciones estacionales, es mejor situar los
tanques de eclosin en el interior (siendo an mejor con control de
temperatura, ver anteriormente) y proporcionndoles iluminacin artificial
Definicin de los criterios de eclosin
H%= Nmero de nauplios que pueden ser producidos a partir de 100
quistes hidratados y conteniendo un embrin; en este criterio no se incluyen
impurezas o quistes defectuosos, ej. Cscaras rotas, arena, sal, etc.
HE=Nmero de nauplios que se producen a partir de 1 gramo de quistes
secos cuando se les incuba bajo condiciones estndar de eclosin (48 horas
de incubacin, agua de mar de 35 saturada de oxgeno a 25C, mnimo
de 1000 lux de iluminacin y pH entre 8.0 y 8.5)

III.

MATERIALES Y METODOS:

MATERIALES:

2g de cistes de artemia.
Beakers, pipetas y recipientes graduados.
Botellas de plsticos de 2 litros.
Placas Petri.
Bombilla.
Pipeta.
Hipoclorito de sodio (leja comercial marca clorox).
Malla de 40m.
Estereoscopio.
Esptula.
Aireadores, manguerillas de aireacin.

Agua salobre (agua de mar) (16).

cido actico
Cmara de sedwick Rafter (cmara de conteo).

METODOLOGIA:
-Dentro de la metodologa dada en esta prctica intervinieron tres pasos:

La descapsulacin por hipoclorito de sodio.

Incubacin de los cistes en su medio natural (agua a 16 %o).
La observacin de los diferentes estadios a las 24 hrs de la
incubacin.

1) DESCAPSULACION:

Hidratacin de los cistes:

-Colocar 2g de cistes (ARTEMIA) en un recipiente pequeo con una solucin

de agua al 16 %o, con aireacin constante por aproximadamente 1 hora.
-Ubicar algunos cistes deshidratados, colocarlos en una placa Petri y
observar en el estereoscopio para luego de transcurrido 1 hora observar y
comparar con los cistes hidratados.

Preparacin de solucin descapsuladora:

-Preparar la solucin descapsuladora, para ello se debe realizar algunos

clculos como se muestra a continuacin:
-Segn los requerimientos de Cl- activo para 2g de cistes de artemia:
0.5g Cl- activo
X

1g cistes de artemia
2g cistes de artemia
X = 1g de Cl 1- activo

-Volumen requerido de leja segn su composicin para 1g de Cl - activo:

5.25g de Cl - activo

100 ml Leja

1g Cl- activo

Y
Y = 19 ml leja.

-Volumen total de solucin descapsuladora:

14 ml totales

1g de cistes de

artemia
Z

2g de cistes de

artemia
Z= 28 ml totales.

-Como tenemos aproximadamente 19 ml de leja y nuestro volumen total de

solucin descapsuladora es 28 ml, entonces los 9 ml restantes son
completados con agua dulce o salada.
-Agregar en un beaker pequeo, los 19 ml de leja y los 9 ml de agua (ya sea
salada o dulce) en este caso agua salada, y en seguida colocar una
manguerilla conectada a una bomba para brindar aireacin al proceso.
-Usar el tamiz de 40 um y filtrar los cistes de artemia que estaban en
hidratacin por 1 hora.
-Agregar los cistes que
ayuda de una esptula
solucin descapsuladora

quedaron en el tamiz con

al beaker donde est la
(leja + agua).

-Medir
temperatura, no debe
llega
a
temperatura

aproximadamente
la
pasar de los 40C, si se
criticas agregar hielo.

-Observar el cambio de color de los cistes cada 30, de tal manera que se
cumpla la siguiente secuencia: CAF GRIS NARANJA, Cuando la
proporcin de cistes naranjas sea mayor a los cistes blanco, se hace el
traspaso a la malla (filtrado en malla de 40 um), y se lava profundamente
con agua de cao, hasta que desaparezca por completo el olor a leja.

Lavado de cistes
-Cosechar los embriones (coloracin naranja) sobre la malla de 40 um,
siempre y cuando haya desaparecido por completo el olor a leja.
2) INCUBACION:
-Colocar los cistes descapsulados a incubar, en un volumen de agua
conocido (1L) con 16 de salinidad y constante aireacin.

Incubacin de nauplios
-Colocar una fuente de luz a 20 cm.
-Esperar la eclosin en las prximas 24 horas.

3) OBSERVACION DE LOS ESTADIOS DE DESARROLLO:

-Tomar una muestra de 1 ml. y diluirla en caso este muy concentrado, en 10
ml de agua, luego procedimos a Homogenizar tomando luego unas 4 submuestras de 1 ml cada una.
-Colocar la muestra en una cmara de conteo o Cmara de sedwick Rafter.
-Aplicar 3 gotas de cido actico o lugol a cada una de las sub-muestras.
-Observar al estereoscopio y realizar el conteo de nauplios en los 3 estadios
naupliares.
-Luego sumar todo lo contado por cada placa observada y dividirlo entre 4
para obtener el promedio, en caso este muy concentrado multiplicarlo por
10 y esto nos dar la cantidad estimada de nauplios en 1 ml
-Luego multiplicamos por 1000 para totalizar la cantidad de nauplios que se
encontraran en 1L.

IV.

RESULTADOS:

Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Promedio de muestras

a)

27.25 nauplios 1 mL

X 1 1000 mL

Huevos eclosionados en 1mL de

muestra
25
23
32
31
27.75

X 1=27750 nauplios en1000 mL

b)

27750 nauplios 2 g

X 2 1 g
X 2=13875 nauplios

Color del agua donde estaban las artemias de todas las mesas:

Mesa 4

Mesa 3

Mesa 2

Mesa 1
Observaciones
o El aire suministrado a nuestra botella era muy fuerte (esto solo
pasaba en nuestra botella, no en la de los dems grupos) y
hacia que el agua se moviera muy bruscamente.
o La capa que se forma en el borde del agua en las botellas era
muy pronunciado y muy cargado de restos del corion o de
huevos que no eclosionaron.
o La luz del foco no llega de forma directa ni completamente a
nuestra botella, ya que est colocada al extremo de la mesa.

Vista desde arriba de

las botellas
V.

Vista frontal de las

botella (nuestra botella
es la del agua mas
clara)

DISCUSIONES:
Segn (Sorgeloos, et al 1986) El mximo tiempo que se deja en
contacto con el lquido descapsulador puede ser hasta 3 minutos ya
que si se excede este periodo de tiempo se puede quemar los quistes
de la Artemia inhibiendo el desarrollo embrionario y limita la eclosin
al organismo, lo cual se concuerda con los resultado obtenidos
despus de las 24 horas de incubacin de los cistes :

mayora de los cistes estuvieron pegados a la pared de la botella.

La capa que se forma en el borde del agua en la botella (mesa 1)

era muy pronunciado y cargado, de restos del corion o de huevos
que no eclosionaron

La botella (mesa 1) a diferencia de las dems el agua estuvo ms

clara este es debido a que hubieron quistes sin descapsular .

Esto se debi a que si bien seguimos los pasos del proceso, tuvimos
una pequea variacin usual en aprendices: echamos los cistes
pegados del vaso precipitado (cistes con el lquido descapsulador)
que estaban clorados al tamiz con nuestros quistes que ya estaban

bastante desclorados los cistes se pasmaron (se nos pas el tiempo

de hidratacin) por lo que se formaron grumos de cistes respondiendo
as a un mal seguimiento en los pasos del proceso de eclosin.
Segn la FAO En el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la
presencia de O2 es relevante. Para conseguir una eclosin eficiente se
recomiendan altos niveles de O2 (condiciones anaerbicas afectan la
eclosin y el metabolismo de Carbohidratos)a pesar de tener un
mximo de oxgeno disuelto no se observ una mxima eclosin de
cistes debido a los errores ya mencionados.
Sin embargo, dado que se tuvieron unos niveles de eclosin muy por
debajo de los esperados en nuestra botella, podra darse una
contraparte desde el punto de vista fsico: (ya que debe ser en
funcin del tamao del tanque y de la densidad de quistes incubado)
puede haber sido consecuencia del posible exceso de aireacin que
tuvo por lo cual que no dejara a los nauplios poder desprenderse del
corion y de las dems membranas, por el exceso de movimiento que
produce el aire. Ya que vimos una gruesa capa de cscaras del corion
(a simple vista), tambin podran ser quistes sin eclosionar.
Tambin influenci la luz que no llega de forma directa ni
completamente a nuestra botella, ya que est colocada al extremo de
la mesa. Segn FAO: La iluminacin de los quistes, al menos durante
las primeras horas tras su hidratacin, es esencial para lograr una
eclosin mxima es aconsejable para obtener unos resultados
ptimos, mantener una iluminacin de aproximadamente unos 2000
lux en la superficie del agua. Sin embargo si la luz usada en el
laboratorio es de bombillas incandescentes de 100 watts lo que da
como mximo 700 lux y encima teniendo en cuenta que a nuestros
cistes no les daba directamente la luz, la cantidad de unidades lux
recibidas deben haber estado muy por debajo de lo aconsejable.
Es posible que los cistes no llegaron a eclosionaron totalmente debido
a que no estuvieron cerca de la temperatura ptima de eclosin 25
30C o en todo caso la luz no penetraba del todo en nuestra botella
con los cistes, es mejor mantener una temperatura constante en el
medio de eclosin para obtener una buena produccin mxima de
nauplios, Segn la FAO, la temperatura deber mantenerse en el
intervalo de 25C a 30C, sin embargo, por debajo de 25C la eclosin
es lenta, es mejor mantener una temperatura constante en el medio
de eclosin para obtener una produccin mxima de nauplios.
Segn la Informacin que nos brinda la FAO, 1986; la salinidad
mnima para la incubacin es de 5%O, vemos que el pH ptimo para
que se d el 99% de la eclosin es a un pH de 8.0. La salinidad del
agua de mar dada en el laboratorio fue de un 16 generando un
medio salino adecuado y ptimo para la incubacin, ya que la artemia
es una especie que se encuentra en ambientes salinos.

VI.

CONCLUSIONES:

 Se desarroll el protocolo en pequea escala de descapsulacin de

cistes de artemia para la obtencin de nauplios utilizando hipoclorito
de sodio, pero hubo errores al momento de ejecutarlo por la
formacin de grumos. Adems de los errores que escapan de nuestro
control (como alumnos) como la iluminacin (que no era
perpendicular ni intensa) y la intensidad de aireacin (la aireacin por
medio de la manguera que conectaba a nuestra botella era muy
fuerte y no es del nivel adecuado para la eclosin).
La presencia de oxigeno es relevante para la eclosin de los nauplios,
en lo que refiere al metabolismo de carbohidratos. Para conseguir una
eclosin eficiente se recomiendan altos niveles de O 2 (condiciones
anaerbicas afectan la eclosin y el metabolismo de Carbohidratos.).
Pero no en exceso.
El mtodo de descapsulacin de la artemia, resulto ser til y eficiente
obteniendo as alimento vivo de alta calidad para las larvas de peces
y crustceos; debido a que se le ahorra trabajo al nauplio para
romper el cascaron, conservando as casi todos los nutrientes.
Se conocieron las tcnicas de fijacin y conteo de nauplios de
artemia, utilizando as la tcnica de conteo con ayuda de la cmara
de Sedwick Rafter.
Se logr visualizar y diferenciar cada uno de los cistes de artemia ya
eclosionadas segn la teora aprendida en clase ya que las formas
observadas fueron alargaditas, por el poco zoom no se pudo
visualizar bien en qu estadio exacto se encontraban los nauplios.
VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

SORGELOOS, P., LAVENS, P., L, P., TACKAERT, W. y VERSICHELE, D.

Depsito de documentos de la FAO - Manual para el cultivo y uso de
artemia en acuicultura. PROGRAMA COOPERATIVO GUBERNAMENTAL
FAO ITALIA. Consultado 16 sep. 2015. Disponible en:
http://www.fao.org/docrep/field/003/AB474S/AB474S00.htm

Depsito de documentos de la FAO Produccin de nauplios de

artemia y quistes decapsulados para usarlos como alimento en
centros de puesta de peces y crustceos. Consultado 16 sep. 2015.
Disponible en:
http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/AB474S05.htm

La produccin de alimento vivo y su importancia en la acuicultura.

Una diagnosis. FAO Italia. Consultado 16 sep. 2015
http://www.fao.org/docrep/field/003/ab473s/AB473S04.htm

Manual para el cultivo de artemias de la FAO:

http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/ab474s00.HTM Articulo de
cultivo domestico de artemia salina

VARGAS, J. Nutricin y alimentacin de organismos acuticos

Manual de prcticas de laboratorio. Universidad Nacional Agraria La
Molina.