Bioqumica Analtica

Introduccin Terica a la Integracin del Metabolismo

Para el ser humano, as como para otros muchos organismos, los alimentos
representan la fuente que puede cubrir las necesidades energticas
inmediatas, a la vez que transformarse en una reserva de nutrientes y energa
que las clulas de los diferentes tejidos puedan utilizar en periodos de ayuno o
restriccin de aporte exgeno de nutrientes.
Rutas anablicas y catablicas
El metabolismo, definido como el conjunto de reacciones que proporciona un
aporte continuo de sustratos para el mantenimiento de la vida, incluye procesos
catablicos y anablicos. En las rutas catablicas se libera energa, parte de la
cual se transforma en trifosfato de adenosina (ATP) y se recoge en nucletidos
reducidos (NADH, NADPH y FADH2). Las reacciones anablicas necesitan un
aporte energtico que usualmente lo proporciona la hidrlisis del ATP, molcula
que es transportadora universal de energa metablica y que tambin es el
poder reductor necesario, suministrado por los nucletidos reducidos.
Tanto las rutas catablicas como las anablicas se suceden en tres niveles.
En el nivel 1, se produce la interconversin entre las macromolculas
complejas (protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos) y las molculas
sencillas, monomricas (aminocidos, nucletidos, azcares, cidos grasos y
glicerol). En el nivel 2, tiene lugar la interconversin de los monmeros y
compuestos orgnicos ms sencillos (piruvato y acetilCoA). Finalmente, en el
nivel 3, se lleva a cabo la degradacin de estos intermediarios metablicos a
compuestos inorgnicos (CO2, H2O y NH3,) o la utilizacin de estos
precursores para la sntesis de las diferentes biomolculas.
Cada tejido tiene un perfil metablico caracterstico
Cada tejido y rgano del cuerpo humano desempea una funcin especfica,
para la cual ha desarrollado una anatoma y las actividades metablicas
acordes con dicha funcin. De entre ellos, el hgado, por su destacada funcin
en la homeostasis del organismo, puede llevar a cabo la ms extensa red de
reacciones metablicas.

- El cerebro tiene como funcin principal la transmisin de los impulsos

nerviosos mediante un mecanismo que necesita el continuo aporte de ATP que
obtiene, a partir de la glucosa (en condiciones normales) o de los cuerpos
cetnicos (en situaciones como la inanicin), siempre que el suministro de
oxgeno sea el adecuado.
-El tejido adiposo est constituido por clulas (adipocitos) especializadas
en la reesterificacin de los cidos grasos (que almacenan como
triacilgliceroles en el citosol) y en la movilizacin de estos lpidos para
satisfacer la demanda energtica de las clulas de otros rganos y
tejidos. Por tanto, los adipocitos son clulas metablicamente muy activas que
conservan los cidos grasos y los liberan como fuente energtica respondiendo
con rapidez a distintos estmulos hormonales en coordinacin metablica con el
hgado, el msculo esqueltico y el corazn.
- El tejido muscular esqueltico acta transformando la energa qumica
(en forma de ATP) en energa mecnica que permite a sus clulas realizar
trabajo y desarrollar movimiento. Su caracterstica metablica ms importante
es la de estar muy especializado en la generacin de ATP como fuente
inmediata de energa a partir de creatina fosfato, glucosa, glucgeno, cidos
grasos y cuerpos cetnicos, segn su tipo y grado de actividad.
-El hgado es la central metablica del organismo. Regula los niveles de
metabolitos en el plasma, para asegurar el adecuado suministro de los mismos
al cerebro, msculo y otros rganos perifricos.
La organizacin estructural del parnquima heptico y los elementos
vasculares de este rgano, son los ms idneos para llevar a cabo esta
funcin. Todos los nutrientes absorbidos en el intestino (a excepcin de
los cidos grasos), se liberan en la vena porta que drena directamente en el
hgado, rgano que acta as, como un vigilante interpuesto entre el tubo
digestivo y el resto del organismo para controlar y distribuir tales nutrientes.
Es especialmente importante, la funcin del hgado como "regulador de
la glucemia". Aunque sensible a distintas hormonas, la concentracin de
glucosa en plasma, es en s, el verdadero sensor que alerta al hgado del
estado metablico del organismo. Dos protenas hepticas intervienen en este
proceso: la protena transportadora de glucosa GluT2 y la glucocinasa, protena
enzimtica que cataliza la fosforilacin de la glucosa en el hepatocito. El

suministro de glucosa heptica al torrente sanguneo e indirectamente a los

tejidos extrahepticos est asegurado por la actividad glucosa 6 fosfato
fosfatasa, ligada al retculo endoplasmtico de los hepatocitos. Adems, el
hgado contiene una importante reserva de glucosa en forma de glucgeno y
lleva a cabo la ruta de la gluconeognesis al biosintetizar glucosa a partir de
precursores no glucdicos (piruvato, lactato, glicerol y ciertos aminocidos).
La complejidad de los mecanismos que regulan el metabolismo energtico en
los mamferos permite a los mismos responder con eficacia a los cambios en
sus demandas energticas, integrando el metabolismo especializado de los
distintos rganos y tejidos en el conjunto del organismo.
La regulacin enzimtica como proceso fundamental en la integracin
metablica
Los organismos vivos deben coordinar estas vas metablicas para sobrevivir
en etapas deficitarias y en aquellas otras en las que la disponibilidad de
energa excede las necesidades inmediatas de la misma.
Entre los principales factores que controlan el flujo a travs de las vas
metablicas se incluyen: a) disponibilidad de sustratos; b) regulacin de la
actividad enzimtica (alostrica y/o por modificacin covalente); c) regulacin
de la concentracin de molculas enzimticas activas. Las variaciones en estos
parmetros estn, a menudo, ligadas a la presencia en el torrente circulatorio
de hormonas que constituyen una seal que simultneamente detectan clulas
distribuidas en rganos y tejidos diversos y que en definitiva dirigen la
integracin metablica del organismo completo.
Ya se ha citado la funcin de los alimentos como fuente de energa, pero como
la ingesta en el ser humano no es continua, la utilizacin de los mismos y la
movilizacin de las reservas endgenas se desplazan claramente durante las
pocas horas que transcurren entre las comidas cerrando un ciclo denominado
de alimentacin-ayuno, en el que se diferencian tres etapas: estado
postabsortivo despus de una comida; ayuno nocturno y estado de
realimentacin (primera ingesta). En todas ellas, el metabolismo energtico del
organismo, est integrado y regulado con el fin principal de mantener la
glucemia relativamente constante.

La estrategia metablica consiste en almacenar caloras cuando los

nutrientes estn disponibles y movilizar las reservas cuando no los hay. El
hgado, acta como un interruptor que desva el metabolismo hacia uno u otro
perfil, utilizando para ello los distintos mecanismos reguladores que ya se han
mencionado.
En el hgado de un organismo bien nutrido se favorece la degradacin
oxidativa de la glucosa (gluclisis), la sntesis de glucgeno (glucogenosntesis)
y la de los triacilgliceroles (lipognesis). Sin embargo, el perfil metablico de
este rgano en un estado de ayuno es bastante diferente: se activa la
degradacin de glucgeno (glucogenlisis), la sntesis de glucosa a partir de
precursores endgenos (gluconeognesis), la sntesis de cuerpos cetnicos
(cetognesis) y la degradacin de protenas (protelisis).
En el control del metabolismo energtico es factor decisivo, el estado de
fosforilacin de determinadas protenas cuya modificacin covalente de la
estructura primaria motiva aumento o prdida de su actividad. El predominio de
una u otra forma (fosforilada/no fosforilada) viene determinada por la relacin
de actividades catalticas protena cinasa/fosfoproten fosfatasa, enzimas que a
su vez, estn sometidas a un control hormonal: la insulina (I) estimula la
actividad fosfoproten fosfatasa y, por consiguiente, la desfosforilacin de
enzimas; el glucagn (G), por el contrario, estimula la fosforilacin de las
mismas a travs de la activacin de varias protenas cinasa. Mediante el
equilibrio entre la relacin de concentraciones plasmticas de insulina y de
glucagn ([I]/[G]), el organismo mantiene la glucemia casi constante a pesar de
las grandes fluctuaciones de la ingesta.
Pncreas como rgano clave en la regulacin del metabolismo
Esta glndula endocrina responde a la entrada de glucosa en sus clulas
(proceso que tiene lugar durante y despus de la ingesta alimenticia),
secretando insulina, hormona que en estados basales de glucemia, se
encuentra almacenada como proinsulina en las clulas b de los islotes
pancreticos de Langerhans.
Cuando la concentracin de glucosa en plasma es superior al valor normal
(5 mM), las clulas b del pncreas captan rpidamente el monosacrido

mediante la protena transportadora de glucosa GluT2. La elevada constante

de transporte propia de esta protena (aproximadamente 60 mM) permite la
entrada de glucosa segn una cintica lineal y no saturable en condiciones
fisiolgicas.
En el interior celular, la glucosa, por la accin cataltica de la glucocinasa, se
convierte inmediatamente en glucosa 6 fosfato que sigue la va glucoltica. La
activacin de esta ruta degradativa favorece la entrada de Ca2+ en las clulas
pancreticas a travs de los canales situados en la membrana plasmtica y
como consecuencia, la liberacin de insulina por exocitosis.
Una vez en el torrente sanguneo, la insulina se une a los receptores
especficos presentes en la membrana plasmtica de las clulas de diferentes
tejidos. Estos receptores son protenas que atraviesan la membrana plasmtica
y poseen actividad tirosina-cinasa, a las que se une la insulina para iniciar una
cascada de sealizacin que regula la trascripcin de genes determinados, la
sntesis de determinadas protenas y la actividad de enzimas citoslicas.
Por otra parte, el descenso en la concentracin de glucosa que se produce
durante el ayuno, induce a que las clulas a del pncreas secreten glucagn.
Esta hormona se une a receptores especficos (presentes en hepatocitos y
adipocitos) que a su vez se acoplan a protenas G heterotrimricas, lo que
activa la cascada de sealizacin de la adenilato ciclasa. Esta enzima asociada
a la membrana plasmtica cataliza la transformacin de ATP en AMPc,
segundo mensajero que al unirse a algunas protenas citoslicas, modula su
actividad biolgica.
La protena cinasa A (PKA) es una de estas protenas para la que el AMPc
es activador alostrico que se une al correspondiente centro regulador en la
enzima, induciendo la disociacin de las subunidades reguladoras y catalticas;
estas ltimas quedan as dispuestas para la unin de las correspondientes
protenas sustrato, a las que fosforila a expensas de ATP y como
consecuencia, modifica su actividad.
Enzimas cuya actividad cataltica se regula por fosforilacin.
La tabla de ms abajo recoge una serie de enzimas con importante funcin
reguladora de diferentes vas metablicas y cuya actividad cataltica depende
de su estado de fosforilacin que a su vez viene determinado por la actividad

de protenas cinasa y fosfoprotenas fosfatasa dependiente de la seal

hormonal [I]/[G]. Entre las enzimas indicadas, son sustratos de la PKA: la
glucgeno sintasa, la piruvato cinasa, la acetilCoA carboxilasa y la triacilglicerol
lipasa. La fosforilacin y activacin de la glucgeno fosforilasa depende de la
glucgeno fosforilasa cinasa, enzima esta ltima que es sustrato de la PKA.
Todas las enzimas citadas en su estado fosforilado son sustrato de la
fosfoproten fosfatasa cuya actividad se estimula en respuesta a la insulina. El
pncreas es el rgano esencial para el control de la glucemia haciendo posible
el mantenimiento, prcticamente constante, de la concentracin de glucosa en
sangre. Esa funcin clave la desempea a travs de modificaciones en la
relacin de concentraciones plasmticas de dos hormonas, insulina y
glucagn que el propio rgano biosintetiza y secreta. La primera de las
hormonas citadas reduce la glucemia y estimula los procesos anablicos:
sntesis de lpidos, glucogenosntesis y sntesis de protenas, mientras que la
segunda, motiva aumento de la concentracin de glucosa en plasma y estimula
la glucogenlisis en el hgado, la liplisis en el tejido adiposo y la degradacin
de las protenas en el msculo esqueltico.

Enzima

Va

Localizacin

Form

Efecto del incremento del

metablica

Principal

cociente (I)/(G)

activa

Actividad

Actividad de la va

cataltica
(-)

metablica
Disminucin de la

Glicgeno

Degradacin

Hgado.

fosforilasa

del

Msculo

Glucgeno

glucgeno
Sntesis del

esqueltico
Hgado.

sintasa

glucgeno

Msculo

Piruvato

Gluclisis

esqueltico
Hgado

NO-P

(+)

Activacin de la

quinasa
acetilCoA

Sntesis de

Hgado.

NO-P

(+)

gluclisis
Activacin de la

carboxilasa

cidos

Tejido

Triacilglicerol

grasos
Degradacin

adiposo
Tejido

lipasa

de los cidos

adiposo

glucogenolisis
NO-P

(+)

Activacin de la
glucogenognesis

sntesis de cidos
P

(-)

grasos
Inactivacin de la
liplisis

grasos desde
los depsitos

Integracin del metabolismo en diferentes situaciones energticas

La alteracin de los valores normales de la concentracin plasmtica de

glucosa se asocia a una serie de manifestaciones patolgicas: la hipoglucemia
puede motivar prdida de la conciencia y en situaciones crticas, la muerte
por la dependencia del cerebro de la glucosa como fuente energtica y por el
contrario, la hiperglucemia sostenida, como ocurre en la diabetes, origina
desequilibrios metablicos e induce dao tisular, va glucosilacin de protenas,
ocasionando fallo renal, ceguera y enfermedad cardiovascular entre otras
patologas. Para adaptarse a las distintas situaciones fisiopatolgicas que
alteran la glucemia, el organismo ha desarrollado una serie de mecanismos
homeostsicos intrnsecos que permiten mantener los valores de la
concentracin de glucosa en sangre en el margen fisiolgico que asegura
nuestra salud. Para la coordinacin de esos mecanismos, el metabolismo de
cada rgano y tejido debe estar estrictamente regulado e integrado con el del
resto del organismo. En el ciclo alimentacin-ayuno (estados: postabsortivo,
ayuno y realimentacin) las hormonas pancreticas insulina y glucagn, son las
principales seales que alertan a las clulas del estado de la glucemia, para
que mediante un metabolismo integrado, se mantengan disponibles las fuentes
energticas y los precursores biosintticos que el organismo necesita para su
supervivencia.
Integracin metablica en el estado postabsortivo
Los glcidos, los lpidos y las protenas que se ingieren sufren la digestin, a
travs de hidrlisis enzimticas, en el conducto gastrointestinal. En el
enterocito, se resintetizan los triglicridos que se transportan, incluidos en los
quilomicrones, a travs de la va linftica, a la sangre desde donde se
distribuyen a los tejidos extrahepticos.
La mayor parte de los azcares y los aminocidos acceden al hgado a
travs de la vena porta; los hepatocitos captan estos nutrientes, en mayor o
menor cantidad, segn factores como el tipo de dieta e intervalo de tiempo
entre cada ingesta. Estas clulas transforman dichos nutrientes en los
combustibles y precursores biosintticos necesarios para otros tejidos, cuyas
necesidades varan con la actividad del organismo. En este sentido, el hgado,
tiene gran flexibilidad metablica para adaptarse a las distintas circunstancias y
mantener la homeostasia de la glucosa.

La glucosa que no es captada por los hepatocitos, se distribuye a otros

tejidos u rganos como el cerebro que utilizan este azcar como fuente de
energa y al tejido adiposo y al muscular, donde se almacena en forma de
triacilgliceroles y de glucgeno, respectivamente. Los tejidos extrahepticos
captan la mayor parte de los aminocidos y el excedente se utiliza en el
hgado para la sntesis de protenas o se degrada en este rgano.
La elevacin de la concentracin de glucosa en el plasma y la consiguiente
liberacin de insulina por el pncreas motiva, en el hgado, la activacin de: la
sntesis de glucgeno, la gluclisis y la transformacin del piruvato, procedente
de esta ltima va, en acetilCoA. Molcula, esta ltima, que se utiliza como
sustrato para la sntesis de cidos grasos cuyo destino inmediato es su
oxidacin mitocondrial y consiguiente generacin de energa.
Los cidos grasos excedentes se esterifican y en forma de triacilgliceroles se
incluyen en las VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad) que hacen posible
su distribucin desde el hgado a los tejidos extrahepticos.
En definitiva, la insulina favorece la captacin de la glucosa por las
clulas y el almacenamiento de su exceso en forma de glucgeno. As mismo,
estimula los procesos que hacen posible la transformacin del azcar en
lpidos de reserva (triacilgliceroles).
Integracin metablica en el estado de ayuno
Tras la ingesta, como consecuencia de la rpida captacin de la glucosa
por las clulas de diferentes tejidos, la concentracin plasmtica del
monosacrido desciende y se restablece el valor normal de la glucemia, lo que
frena la tasa de liberacin de insulina por el pncreas.
Cuando el organismo entra en fase de ayuno, el descenso adicional de
la concentracin de glucosa plasmtica motiva que las clulas a de esta
glndula secreten glucagn. La cada del cociente insulina/glucagon dirige el
metabolismo celular de los distintos rganos y tejidos, as como su perfecta
interconexin e integracin, asegurando el suministro continuo de glucosa al
cerebro. En el estado de ayuno la glucogenolisis heptica es la va principal
que mantiene la glucemia. La glucosa heptica liberada a la sangre es la fuente
energtica que captan las clulas del cerebro y del msculo. En este ltimo, el
piruvato y el lactato originados en la degradacin glucoltica del monosacrido,

se transportan al hgado, donde se utilizan como precursores de la glucosa en

la va gluconeognica, completndose as, el denominado ciclo de Cori
(glucosa-lactato). Tambin la alanina, generada por transaminacin del
piruvato, se puede convertir en glucosa en el hgado, cerrando el ciclo glucosa
alanina. A medida que el ayuno se prolonga, las reservas hepticas de
glucgeno se agotan. La gluconeognesis a partir de lactato y alanina contina,
sin embargo, este proceso nicamente recupera la glucosa que previamente se
haba convertido en lactato y alanina en los tejidos perifricos. Como el cerebro
consume glucosa continuamente, es necesaria su sntesis a partir de otras
fuentes carbonadas. Uno de los sustratos que aporta carbonos es el glicerol
liberado en la liplisis en el tejido adiposo; los aminocidos, glutamina y alanita,
cuyo origen es la protelisis muscular tambin son sustratos gluconeognicos.
Los cidos grasos que se movilizan del tejido adiposo, constituyen una buena
fuente energtica que se utilizar con preferencia a la glucosa en la mayora de
los tejidos. En el hgado, la oxidacin de los cidos grasos aporta la mayor
parte del ATP necesario para la gluconeognesis. Sin embargo, en el estado de
ayuno, slo una pequea parte del acetilCoA que se libera en la oxidacin,
entra en el ciclo del cido ctrico para su completa oxidacin. El destino
principal de esta molcula es la formacin heptica de cuerpos cetnicos que
se liberan a la sangre y se captan por los tejidos que pueden utilizarlos como
fuente energtica. En el cerebro, aunque constituyen el combustible alternativo
a la glucosa, los cuerpos cetnicos no satisfacen por completo las necesidades
energticas de sus clulas para las cuales es siempre necesario el suministro
del monosacrido. En el msculo esqueltico, los cuerpos cetnicos evitan la
hidrlisis de sus protenas ya que en la medida en que los cidos grasos se
oxidan en el hgado, aumenta la concentracin de cuerpos cetnicos en el
plasma y en consecuencia, las clulas demandan menos glucosa y menos
aminocidos gluconeognicos. En estas condiciones, no se activa la protelisis,
ni tiene lugar, por tanto, la destruccin del fundamental tejido muscular.
Estas interrelaciones estn coordinadas a travs del glucagn, cuyo efecto es,
en definitiva, la estimulacin de la glucogenolisis y la liberacin de la glucosa
desde el hgado, as como la movilizacin de los cidos grasos en el tejido
adiposo.

Integracin metablica en el estado de realimentacin

Con la realimentacin, los triacligliceroles se metabolizan inmediatamente de la
forma habitual propia del estado nutricional (postabsortivo), pero la glucosa
requiere, en cambio, un tiempo de adaptacin: inicialmente -debido a la baja
concentracin de este azcar en la sangre- las clulas hepticas apenas
captan glucosa , por lo que la mayor parte de la que recibe el hgado va
porta, se distribuye al cerebro y a otros tejidos perifricos que necesitan este
combustible energtico. Realmente, el hgado permanece en estado
gluconeognico durante algunas horas despus de la ingesta, con el
fin principal, no de liberar glucosa a la sangre, sino de proporcionar glucosa
fosforilada para restablecer las reservas de glucgeno heptico.
Pero, a medida que la concentracin plasmtica de glucosa se eleva, tambin
aumenta la velocidad de captacin de este azcar por el hgado que lo utiliza
para obtener energa mediante la gluclisis; su exceso, queda disponible para
la sntesis de glucgeno y seguidamente, los metabolitos procedentes de
la degradacin oxidativa de la glucosa, se destinarn a la sntesis de cidos
grasos y de triacilgliceroles. Estos ajustes metablicos desencadenados por la
insulina y el glucagn tienen lugar en cortos intervalos de tiempo. A ms largo
plazo actan otros mecanismos reguladores para mantener en equilibrio la
ingesta de nutrientes y el gasto energtico, de manera que el organismo de los
mamferos se mantenga en una homeostasia perfectamente controlada.