INSTITUTO TECNOLGICO DE

ZACATEPEC
DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA Y
BIOQUMICA

PRCTICA 2
APLICACIN DE LA ECUACIN DE DISEO DE UN REACTOR
ENZIMTICO POR LOTES

INTEGRANTES
DANTE PREZ CORTS 12090329
TANIA DANIELA OCAMPO TLLEZ 12090326
LESLEE VARA ARREDONDO 12090354
MANUEL ZURITA ORTIZ
12090741

PROFESOR
FRANCISCO JAVIER HERNNDEZ CAMPOS

MATERIA
INGENIERA DE BIORREACTORES

FECHA DE ENTREGA 30/10/15

INTRODUCCIN:
El uso de enzimas como biocatalizadores es una gran opcin que se puede
desarrollar e impulsar el avance tecnolgico as como aprovecharlas para tener un
mayor progreso en la industria.
La hidrlisis de la sacarosa en glucosa y fructosa (azcar invertido) puede ser
realizada por dos enzimas: la betafructosidasa, que acta sobre el extremo
fructosa de la molcula de sacarosa, y la alfa-glucosidasa, que la ataca por el
extremo de la glucosa. Actualmente, se entiende generalmente por "invertasa" la
beta-fructosidasa, que es producida por levaduras (Sacaromyces cerevisiae,
Candida), mientras que la alfa-glucosidasa constituye preferentemente las
invertasas intestinales y de hongos (Aspergillus oryzae).
Se emplea en la industria farmacutica y alimentaria, donde el uso frecuente de la
invertasa en alimentos azucarados se basa en la transformacin lenta y parcial de
la sacarosa en azcar invertido que tiene mayor poder edulcorante, mayor
carcter humectante, mayor solubilidad y, por lo tanto, menor tendencia a
cristalizar y endurecer. De esta manera, acta como un agente de
reblandecimiento en alimentos azucarados con tendencia a cristalizar la sacarosa
y evaporar agua, lo que afecta su aspecto y consistencia. Adems, la fructosa
resultante tiene cierto carcter humectante y da sensacin de frescura al producto.
Productos de confitera, como bombones con relleno, productos de jaleas,
fondants, mazapanes y pasteles adquieren entonces una consistencia suave,
cremosa y blanda, an despus de un almacenamiento prolongado.
La actividad enzimtica de la invertasa depende del pH, siendo su ptimo de 4,5 a
5,0, y de la temperatura que puede variar de 25 a 55 C. Donde estas variables
son controladas para el adecuado manejo de dicha enzima durante un proceso
donde se requiera el uso de su accin enzimtica.
El diseo de un reactor para procesos catalizados por enzimas, se fundamenta
en el diseo tradicional de reactores para procesos qumicos con catalizadores
heterogneos. Los rectores enzimticos pueden operar en lotes durante un
proceso discontinuo o tambin funcionar en proceso de flujo continuo. Siendo
que el reactor por lotes tiene un uso limitado en los procesos con enzima
inmovilizada, ya que por lo general se hacen necesarias operaciones adicionales
para la recuperacin del enzima, lo que puede representar una prdida o la
inactivacin de la enzima inmovilizada.
En el caso de reacciones enzimticas cuyo mecanismo se supone que se ajusta al
modelo de Michaelis-Menten, la cuestin se simplifica a incluir la ecuacin de

velocidad en la ecuacin de diseo del reactor. Esto segn sea el tipo de reactor
que se requiera para llevar a cabo la operacin.

OBJETIVO GENERAL:
Aplicacin de la ecuacin de diseo de un reactor enzimtico en lotes.

MARCO TERICO:
Diseo de reactores enzimticos
El diseo de un reactor para procesos catalizados por enzimas, se fundamenta
en el diseo tradicional de reactores para procesos qumicos con catalizadores
heterogneos. Los rectores enzimticos pueden operar en lotes durante un
proceso discontinuo o tambin funcionar en proceso de flujo continuo. En este
ltimo caso se distinguen dos variantes extremas: el reactor de tanque agitado
contino (RP AC) y el reactor de flujo pistn (RFP).
El reactor por lotes tiene un uso limitado en los procesos con enzima
inmovilizada, ya que por lo general se hacen necesarias operaciones adicionales
para la recuperacin del enzima, lo que puede representar una prdida o la
inactivacin de la enzima inmovilizada.
Los RTAC y RFP son esencialmente diferentes y representan dos condiciones
extremas. Para el primero, el investigador se considerar idealmente perfecto y el
RFP el mezclado es idealmente nulo; como consecuencia de ello, se consideran
que las condiciones, como la concentracin del sustrato, en cualquier instante y
dentro del RFP varan con la distancia existente entre la entrada y la salida del
flujo.
Es importante sealar que las condiciones ideales del RTAC son relativamente
fciles de alcanzado en la prctica, lo que nos sucede con el RFP por quienes
desean presentan un gradiente de temperatura y velocidad de flujo normalmente a
la direccin del flujo y se presenta adems, difusin del sustrato en la direccin
axial. En los reactores enzimticos del lecho fluidificado se consideran intermedios
entre las condiciones extremas correspondiente a los tipos antes sealados.
Para la eleccin del tipo de reaccin y el deber de disearse en un proceso
enzimtico especfico, habr de tomarse en cuenta varias consideraciones
dendole tcnica y econmica. Entre otras pueden citarse la disponibilidad y
precios de enzimas y soportes, y cuando se trata de enzimas inmovilizadas, las

necesidades y posibilidad de recuperacin de catalizador; esevidente que con

enzimas inmovilizadas se prefieran los reactores continuos. Entre estos el anlisis
terico para casos especficos puede mostrar algunas ventajas intrnsecas.
Otras consideraciones importantes se refieren a la forma y propiedades cinticas y
mecnicas de la preparacin de enzima inmovilizada. Los esfuerzos cortantes
provocados por la agitacin pueden destruir o solubilizar la enzima. Por otro lado,
de enzima inmovilizada preparada en pequeas partculas puede ocasionar
taponamiento o provocar altas cadas de presin en reactores de flujo pistn. Para
reacciones con altos requerimientos de oxigeno se recomienda ms el uso de un
RTAC.
En trminos generales se puede decir que no hay reglas simples en la seccin del
tipo de reactores para un proceso con enzima inmovilizada en particular, cada
caso requiere se tome en cuenta las particularidades que le son propias .
Ecuaciones de diseo
En el caso de reacciones enzimticas cuyo mecanismo se supone que se ajusta al
modelo de Michaelis-Menten, la cuestin se simplifica a incluir la ecuacin de
velocidad en la ecuacin de diseo del reactor. De este modo la velocidad ser:

Para el caso de un reactor por lotes la ecuacin de diseo dada por Levenspiel
(19972)es:

Sustituyendo:

En la que So y S son las concentraciones del sustrato en el inicio y en el tiempo t

(tiempo de residencia), respectivamente.

Realizando la integracin indicada y considerando la conversin en el tiempo t

como X= (So-S)/So se obtiene:

De igual modo para un RTAC, en el que la ecuacin de diseo es segn Levespiel

(1972):

En la que t es la relacin espacio-tiempo del reactor:

Y para un RFP:

Cuando durante la reaccin se sucede algn tipo de inhibicin, la ecuacin de

velocidad que explica el mecanismo del proceso habr de incluir los parmetros
correspondientes. As, la ecuacin de diseo, por ejemplo, de un proceso con
inhibicin competitiva por producto, en el reactor tipo tanque con agitacin ser:

Enzimas
Las enzimas son protenas simples o conjugadas que actan como
biocatalizadores en las reacciones bioqumicas, es decir aumentan las velocidades
de las reacciones sin ser consumidas en ellas, por lo que son reutilizables, sin
embargo, a diferencia de los catalizadores inorgnicos, no son estables y deben
reemplazarse constantemente. Debido a que todas las enzimas son protenas
estn expuestas a desnaturalizacin por calor, variaciones de pH, agentes
precipitantes, entre otros. Las enzimas catalizan reacciones especficas en las que
intervienen uno o varios compuestos llamados sustratos, para cada sustrato hay
una enzima especfica, Las enzimas intracelulares tienen normalmente un slo
sustrato, mientras que las extracelulares actan sobre un grupo de sustratos
similares o relacionados. La especificidad de una enzima es la habilidad que tiene
para discriminar o identificar uno de dos sustratos similares por lo que compiten
entre s para ser tomados por ella. El resultado de la reaccin se denomina
producto. En el transcurso de la reaccin la enzima no forma parte del sustrato ni

del producto, antes de la reaccin la enzima tiene gran afinidad por su sustrato,
despus de la misma el producto no tiene afinidad por la enzima, por lo que se
desprende de ella y queda lista para catalizar otra reaccin. Las enzimas pueden
catalizar una reaccin bioqumica en ambas direcciones, sin embargo la direccin
en la que actan normalmente depende de las cantidades relativas presentes de
sustratos y productos.
Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces (aumentan la velocidad de
las reacciones entre 103 y 109 veces). No llevan a cabo reacciones que sean
energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios
qumicos, sino que aceleran su consecucin. Simplemente se alcanza ms rpido
el estado de equilibrio.
Al igual que las protenas, les hay de muy diferentes tamaos y requerimientos;
algunas necesitan para desarrollar su actividad tan slo su estructura
aminoacdica, mientras que otras requieren la presencia de un cofactor. Este
compuesto puede ser, sencillamente un ion inorgnico, Fe2+, Mg2+, Mn2+ o
Zn2+; o una molcula orgnica ms o menos compleja, que si se encuentra unida
covalentemente se denomina grupo prosttico, y si establece uniones de
naturaleza dbil y reversible se denomina coenzima.
Qumicamente son protenas simples de estructura terciaria o cuaternaria
(globulares) o protenas conjugadas; en ste ltimo caso, la parte proteica se
denomina apoenzima (inactiva, carece de los componentes qumicos apropiados
para la actividad que debe realizar) y necesitan de un cofactor, que puede ser un
ion metlico o una molcula orgnica. La molcula orgnica si se une fuertemente
a la apoenzima recibe el nombre de grupo prosttico, si se une dbilmente se
llama coenzima. Al conjunto de apoenzima y cofactor se le denomina holoenzima.
Las coenzimas actan como un sustrato ms y participan en la
reaccinmodificndose qumicamente con ella; sin embargo, al considerar la
secuencia de reacciones globales, la coenzima se recupera en los pasos
siguientes. La mayor parte de las coenzimas son vitaminas, o las vitaminas forman
parte de ellas, particularmente las del grupo B. No son especficas de un solo tipo
de apoenzimas, dndose casos de algunas que pueden unirse a ms de 100
apoenzimas diferentes.

INVERTASA (SUC2) DE S. cerevisiae

La invertasa (-fructosidasa, sucrasa o -fructofuranosidasa, EC 3.2.1.26) es una

de las primeras enzimas que se caracterizaron. Fue descubierta en 1871 por Ernst
Hoppe-Seyler y se la denomin invertasa porque esta enzima a partir de sacarosa
(dextrgira) produce azcar invertido (una mezcla 1:1 de D-glucosa dextrgira y
D-fructosa levgira). Estas enzimas escinden la sacarosa (-D-Glc-(12)--D-Fru)
en glucosa y fructosa rompiendo el enlace glicosdico que los une. La sacarosa se

utiliza como fuente de energa y carbono en muchos seres vivos, como bacterias,
hongos y plantas. En plantas, la glucosa y la fructosa estn implicadas en las rutas
de sealizacin, por lo que la concentracin de sacarosa juega un papel
importante como sensor de su estado nutricional, y por lo tanto, la invertasa tiene
una funcin determinante en controlar el desarrollo y diferenciacin celular (Sturm
1999, Sturm y Tang 1999). Aunque los animales, incluyendo al hombre, muestran
una gran preferencia por dietas que contienen sacarosa, sus genomas no
codifican invertasas. En su lugar, para hidrolizar sacarosa utilizan -glicosidasas
(EC 3.2.1.48), otro tipo de enzimas que no estn relacionadas filogenticamente
con las invertasas (Alberto et al. 2004). Los genomas de microorganismos
intestinales humanos como especies del gnero Bifidobacterium (Schell et al.
2002) s codifican invertasas, de modo que se pueden aprovechar de la gran
ingesta de sacarosa por parte del ser humano (Alberto et al. 2004). Existen
invertasas dentro de las familias GH32, GH68 y GH100 y algunas de ellas han
demostrado tener una importante capacidad transfructosilante. En Saccharomyces
cerevisiae la invertasa es codificada por una familia de genes formada por SUC1,
SUC2, SUC3, SUC4, SUC5 y SUC7. Una cepa de levadura especfica puede
presentar uno, varios o ninguno de estos genes de forma funcional, si bien, todas
las cepas de levadura de S. cerevisiae llevan en su genoma al menos uno de los
dos alelos naturales conocidos (SUC2+ o el alelo silencioso suc20 ) en el locus
SUC2 (Carlson et al. 1985, Carlson y Botstein 1983). Los niveles de produccin de
invertasa son muy variables, y dependen de la cepa y del gen SUC presente en la
clula. La diferencia de expresin de las diferentes invertasas depende de la
eficiencia en la transcripcin de los distintos promotores de los genes SUC (del
Castillo L. et al. 1992). Cada uno de estos genes codifica una forma extracelular y
una forma intracelular de invertasa (Gozalbo y del Castillo Agudo 1994).

MATERIAL Y REACTIVOS:
-

3 Matraces Erlenmeyer de 200 mL.

1 bureta de 1000 mL.
Matraz aforado de 200 mL
Un bao mara elctrica.

1 pizeta
2 pipetas (10 y 5 ml)
1 gradilla
Espectrmetro
4 tubos de ensayo

Reactivos:
Sacarosa ( 50 g/l)
DNS
Invertasa
Fosfato de sodio dibsico
Fosfato de sodio monobsico.

METODOLOGA:
Se prepararon las soluciones que
fueron la de la sacarosa (100g/L) y
la buffer de fosfato de sodio
dibsico con pH 5 con una
concentracin de enzima de .3 g/L.

Para la preparacin del reactor se

coloc 50 mL de la solucin de
sacarosa con 50 mL de solucin
de invertasa con el buffer,
teniendo
al
final
una
concentracin de solucin de 50
g/L
de
sacarosa
y
una
concentracin de enzima de 0.15
g/L.

Inmediatamente pasado el tiempo se

le agregaron 100 ml de solucin de
DNS y se dejaron en bao mara
durante 10 min a 100 C.

Se pusieron en bao mara a 55C por

1.13 horas.

Se analizaron las tres muestras en

el espectrofotmetro a 575nm y se
tom nota de la absorbancia que
presentaba cada tubo.

Utilizando la curva estndar

obtenida en la prctica anterior se
calcularon las concentraciones.

RESULTADOS:

Cs0= 50
g/L

Calculando tiempo requerido para Cs=2g/L

ocupando la ecuacin de diseo del reactor
operado en lotes
V= 100
mL

Cs= 2 g/L

Diagrama1. Reactor enzimtico

Cs0
trmax KmLn
Cs0 Cs
Cs
Cs0
KmLn
Cs0 Cs
Cs

t
rmax
Parametros cinti cos obtenidos de prctica
anterior
Km 20.0496 g / L
rmax 99.336 g / Lh

Sustituyendo datos cinticos en la ecuacin

50 g / L
50 2 g / L
2g / L
99.336 g / Lh

(20.0496 g / L) Ln

t 1.1328h
Datos obtenidos del
espectrofotmetro.
reactor

absorbanci Factor
a
de
dilucin
0.07
0.7

0.065

0.65

0.06

0.6

Obtencin de concentraciones de
glucosa a partir del patrn de glucosa

y 3.7767 x 0.0841
y1 3.7767 x 0.0841
y1 2.727 g / L
y 2 2.5389 g / L
y 3 2.3501g / L
y p 2.5386 g / L

Obteniendo concentracin de sacarosa al final del proceso

1mol sacarosa
342 g sacarosa
( 2.5386 gglu cos a / L) X (.0.1L) X (
)X (
) 0.4822 g sacarosa
1mol glu cos a
1mol de sacarosa
concentracin de sacarosa final
0.4822 g sacarosa
Cs
0.1L
Cs 4.822 g / L

CONCLUSIONES:
De acuerdo a los parmetros cinticos que se obtuvieron de una prctica anterior,
se mostr que la concentracin de sacarosa final fue de 4.822g/L de acuerdo al
tiempo calculado de 1.13 horas, ocupando la ecuacin de diseo de un reactor
enzimtico operado por lotes, por lo que es clara la variacin respecto a la
concentracin final obtenida con respecto a la que se propuso al realizar los
clculos, que fue de 2g/L.

DISCUCIONES:
Debido a que se utilizaron los parmetros cinticos de una prctica anterior, se
estima que las condiciones de la enzima han variado al da de hoy, debido a la
edad de la enzima, sus modos de almacenamiento y/o a una manipulacin
incorrecta de la misma, por lo que se especula que dicha enzima pudo tener algn

deterioro, y no mostrar su correcta actividad como tal. Por lo que se debieron

determinar nuevamente los parmetros cinticos de la misma, as como la curva
de equilibrio con el DNS, para obtener los resultados deseados o propuestos en
los clculos determinados y minimizar el error.

BIBLIOGRAFA
1. Extraccin y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera
Manuel Tena Aldave, Jess V. JorrnNovo.Departamento de Bioqumica y
Biologa Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo
Ochoa, 14071-Crdoba.
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-bio-mol/pdfs/31%20INVERTASA
%20ENSAYO.pdf

2. ENZIMAS Dr. Santiago Ren Anzalda Arce.

http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_6.p
df

3. Carlos Alberto Prieto Velasco (2007). Diseo y optimizacin de un reactor

de membrana discontinuo para la hidrlisis enzimtica de protenas.
Espaa: Editorial de la Universidad de Granada.
http://hera.ugr.es/tesisugr/17243543.pdf
4. Julio A. Solis -Fuentes,Carmen Durn Domnguez . Reactores enzimticos
en el procesamiento de residuos agroindustriales:residuuoslacteos con BGalactosidasa inmovilizada . Universidad Veracruzana.
http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/5167/1/19921213P85.pdf

Anexo

Reactivo de DNS: Reactivo de DNS. Acido 3,5-dinitrosaliclico (C7H4N2O7; PM

228,1) al 0,1 % (p/v), tartrato sdico potsico [NaK(COO)2(CHOH)24H2O; PM
282,23] al 30 % (p/v) en NaOH (PM 40) 0,4 M. Disolver 1 g de cido 3,5dinitrosaliclico y 300 g de tartrato sdico potsico en 200 ml de hidrxido sdico 2
M (16 g de NaOH en 200 ml de agua destilada) y diluir hasta 1000 ml con agua
destilada. El reactivo debe guardarse en bote oscuro (color topacio), siendo
estable durante varias semanas.