Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento

Documentos
116
ISSN 0103 - 0205
Outubro, 2003

Noes de Cultivo de
Tecidos Vegetais

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Repblica Federativa do Brasil

Luiz Incio Lula da Silva
Presidente
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Roberto Rodrigues
Ministro
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Conselho de Administrao
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Presidente
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Vice-Presidente
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Chefe Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento
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Chefe Adjunto de Administrao
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Chefe Adjunto de Comunicao, Negcio e Apoio

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

ISSN 0103-0205
Outubro, 2003
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Centro Nacional de Pesquisa de Algodo

Documentos 116

Noes de Cultivo de
Tecidos Vegetais

Julita Maria Frota Chagas Carvalho

Mrcia Soares Vidal

Campina Grande, PB
2003

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Exemplares desta publicao podem ser solicitados :

Embrapa Algodo
Rua Osvaldo Cruz, 1143 Centenrio
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Supervisor Editorial: Nvia Marta Soares Gomes
Reviso de Texto: Julita Maria Frota Chagas Carvalho
Tratamento das ilustraes: Geraldo Fernandes de Sousa Filho
Fotos da capa: Raimundo Estrela Sobrinho
Editorao Eletrnica: Geraldo Fernandes de Sousa Filho
1 Edio
1 impresso (2003): 1.000 exemplares
Todos os direitos reservados
A reproduo no autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui
violao dos direitos autorais (Lei n 9.610).
EMBRAPA ALGODO (Campina Grande, PB).
Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais por Julita Maria Frota Chagas Carvalho
e Mrcia Soares Vidal . Campina Grande, 2003.
39p. (Embrapa Algodo. Documentos, 116).
1. Tecido - Cultura. 2. Biotecnologia. I.Carvalho, J.M.F.C. II. Vidal, M.S. III.
Ttulo. IV. Srie.
CDD 660.6

Embrapa 2003

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Autores

Julita Maria Frota Chagas Carvalho

Dra. Engo Agro da Embrapa Algodo, Rua Osvaldo Cruz, 1143
Centenrio C.P.174
CEP 58107-720 Campina Grande, PB. Tel.: 0XX83 315 4300
e-mail: julita@cnpa.embrapa.br

Mrcia Soares Vidal

Dra., Biloga da Embrapa Algodo
e-mail: mvidal@cnpa.embrapa.br

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Apresentao

A cultura de tecidos vegetais uma ferramenta de grande utilidade e com

mltiplas finalidades na agricultura, podendo-se citar entre elas a propagao de
plantas, o melhoramento gentico, intercmbio e conservao de germoplasma, a
engenharia gentica, entre outras.
Esta publicao descreve os princpios bsicos das tcnicas de cultivo de tecidos
vegetais contribuindo para que os interessados neste segmento da biotecnologia
possam conhecer suas principais tcnicas.

Luiz Paulo de Carvalho

Chefe Adjunto de Pesquisa & Desenvolvimento

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Sumrio

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais ............................................11

1. Introduo ..................................................................................11
2. Cultivo de Tecidos Vegetais .........................................................12
2.1. Aplicao do Cultivo de Tecidos ..........................................13
2.1.1. Micropropagao.......................................................14
2.1.1.1. Proliferao de Gemas Axilares ....................15
2.1.1.2. Induo de Gemas Adventcias
por Organognese Direta ou Indireta.............. 15
2.1.1.3. Embriognese Somtica .................................16
2.1.1.3.1. Embriognese Direta.......................16
2.1.1.3.2. Embriognese Indireta ....................16
2.1.2. Cultivo de Meristemasc ..............................................19
2.1.3. Cultivo de Protoplastos .............................................19
2.1.4. Cultivo de Clula Isolada ou Massa de Tecido
Desorganizado ..........................................................20
2.1.5. Cultivo de Embries Zigticos ou Embries Imaturos ....21
2.1.6. Cultivo de Anteras .................................................... 22
2.2. Fatores que Influem no Exito do Cultivo de Tecidos .............. 23
2.2.1. Origem e Tipo do Material Vegetal .............................23
2.2.2. Composio do meio de Cultivo ................................. 23
2.2.2.1. Reguladores de Crescimento ......................... 23
2.2.3. Condies de Incubao ............................................25
Anexo I .........................................................................................26
Anexo II ........................................................................................ 29
3. Referncias Bibliogrficas .............................................................37

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Noes de Cultivo de
Tecidos Vegetais
Julita Maria Frota Chagas Carvalho
Marcia Soares Vidal

1. Introduo
A biotecnologia vem sendo utilizada pela humanidade h milnios e foi
aplicada sem o conhecimento das tcnicas biolgicas, ressaltando-se que, desde
que existe a civilizao, h, tambm, a biotecnologia.
Define-se biotecnologia como a interveno do homem para desenvolver
mtodos e criar, assim, novas formas de vida que, mediante a natureza, seriam
impossveis de surgir, Gyves (1994). Na agricultura, a seleo de novas
cultivares para adaptao de plantas silvestres ao cultivo exemplo de
biotecnologia, mas tambm o so a fabricao de pes, queijos, bebidas
fermentadas, como vinhos e cervejas, e muitos outros produtos que o homem
vem utilizando ao longo dos anos, em seu prprio benefcio.
A biotecnologia moderna inclui metodologias avanadas de gentica, biologia
molecular e cultura de clulas e tecidos para seleo, engenharia gentica e
clonagem de espcies e variedades biolgicas, alm de processo fermentativo
para fins produtivos.
A engenharia gentica permite que seja realizada a introgresso de qualquer
gene caracterizado, alterando importantes rotas metablicas promovendo, com
isso, a alterao no tipo e na composio de amido, leos, protenas, vitaminas
etc., sem levar em considerao as usuais barreiras biolgicas (BINSFELD,
2000). Com essas modificaes objetiva-se: 1) elevar o valor nutricional dos

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

alimentos; 2) melhorar o processamento industrial e a comercializao dos

produtos; 3) desenvolver plantas transgnicas que funcionem como biorreatores,
onde seja possvel produzir polipeptdios de valor farmacutico como, por
exemplo, vacinas na forma de antgenos de vrus ou anticorpos, e 4) produzir
inmeras enzimas (protenas) para fins industriais, alm dos benefcios
ambientais que a engenharia gentica pode trazer, pois a idia dos produtos
transgnicos , em ltima anlise, tornar a agricultura menos dependente de
agrotxicos e inseticidas (MONTEIRO, 2000).
As tcnicas da engenharia gentica esto amplamente baseadas no cultivo de
tecidos, pois a transformao gentica requer o cultivo, in vitro, de protoplastos,
clulas e tecidos da planta que se deseja transformar como tambm das clulas e
tecidos transformados, seja possvel obter plantas regeneradas (GYVES, 1994).

2. Cultivo de Tecidos Vegetais

A cultura de tecidos vegetais uma tcnica recente visto que os primeiros
passos foram dados no incio do sculo XX e os maiores avanos foram notados
a partir da segunda metade do sculo. No anexo 1 tem-se um breve histrico da
cultura de tecidos vegetais.
A tecnologia da cultura de clulas, protoplastos e tecidos de plantas, constitui
uma das reas de maior sucesso, como parte do complexo da biotecnologia e
vem sendo ampliada dia-a-dia. Aps quase meio sculo de progresso, esta
tecnologia conquistou destacada posio na propagao comercial e industrial de
plantas, no melhoramento gentico, no manejo, no intercmbio e na conservao
de germoplasma e em outras aplicaes, como as pesquisas em fisiologia vegetal
e produo industrial in vitro de compostos secundrios. Tambm, por meio do
cultivo de tecidos se pode regenerar plantas a partir de meristemas para obter
material livre de vrus, clulas isoladas ou massa de tecidos desdiferenciados
(calo) para obteno e seleo de plantas resistentes s condies adversas.
Por cultivo de tecido, ao qual tambm se faz referncia como cultivo in vitro,
entende-se o conjunto de metodologias que permitem o crescimento e a
multiplicao de clulas, tecidos, rgos ou partes de rgos de uma planta
(explante) sobre um meio nutritivo e em condies asspticas. Utilizam-se
recipientes semi-hermticos e o cultivo se realiza sob condies ambientais de
iluminao e temperatura controladas. Esta tcnica se baseia, principalmente no
aproveitamento da totipotncia das clulas vegetais, ou seja, na capacidade de
produzir rgos, como brotos e/ou razes (organognese) ou embries somticos
que regeneram uma planta completa (embriognese somtica) num meio de

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

cultivo favorvel. No anexo 2 so apresentados alguns conceitos bsicos em

cultura de tecidos vegetais.
A tcnica de cultivo in vitro apresenta, portanto, grande potencialidade,
favorecendo a obteno de novos gentipos, de linhas celulares e de hbridos
que, de outra maneira, no poderiam ser obtidos na natureza, por causa das
barreiras reprodutivas na hibridao sexual.
Os cultivos de tecidos vegetais podem ser iniciados com qualquer parte da
planta: gemas, razes, folhas, clulas isoladas, protoplastos (clula sem parede
celular), semente, embries zigticos, antera etc. A escolha de um ou de outro
explante depender dos objetivos desejados e da disponibilidade e capacidade de
resposta do material vegetal.
Qualquer tcnica de cultivo in vitro tem, como fim primrio, dirigir o crescimento
e o desenvolvimento do explante manipulado em um meio de cultivo. Este
controle exercido, basicamente, pela adio de substncias de diversas
naturezas ao meio de cultivo. Dentre essas substncias encontram-se os
reguladores de crescimento e alguns nutrientes. Outro ponto de controle leva em
conta as condies fsicas (iluminao, temperatura, umidade etc) e qumicas (pH
etc).
Uma planta cultivada in vitro tem seu metabolismo heterotrfico e por isso
necessita de: gua, macro e micronutrientes e carboidrato, como fonte de
carbono (PIERIK, 1988).
No cultivo de tecidos so fundamentais, para todas as suas tcnicas, a assepsia,
o explante, o meio nutritivo e os fatores ambientais: luz, temperatura, dixido de
carbono (CO2) e oxignio (O2), segundo CID, 2001. Para evitar a contaminao
dos meios por impurezas minerais, todos os sais utilizados na sua preparao
devem ser de qualidade analtica (p.a.)

2.1. Aplicaes do Cultivo de Tecidos

Vrias so as aplicaes das tcnicas do cultivo de tecidos, a comear pela
clonagem, seu lado mais visvel, seguida pela cultura de clula (suspenses
celulares em meio lquido), tecidos e rgos para fins prticos, obteno de
plantas haplides a partir da cultura de anteras, produo de metablitos
secundrios em biorreatores, gerao de variantes somaclonais, microenxertia,
tecnologia dos protoplastos etc. Um dos esteios bsicos da chamada biologia
molecular de plantas (engenharia gentica) depende, em grande extenso, de
estratgias e tcnicas utilizadas em biologia celular.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

2.1.1. Micropropagao
A micropropagao ou clonagem a propagao vegetativa in vitro, utilizada
principalmente naquelas plantas de difcil multiplicao pelos mtodos
convencionais, permitindo a obteno de grande nmero de plantas sadias e
geneticamente uniformes, em curto perodo de tempo. Atualmente, a maior
concentrao da atividade de micropropagao reside na limpeza clonal e na
produo de mudas de espcies ornamentais herbceas e arbustivas (BAJAJ,
1993).
A primeira aplicao comercial da micropropagao foi realizada por Morel
(1960), ao multiplicar orqudeas atravs da cultura de pices caulinares e
regenerao de protocormos (diminutas estruturas que se diferenciavam e davam
origem a embries). A sucessiva diviso desses protocormos possibilitou
acelerar o processo de propagao de orqudeas.
Mais tarde, Smith e Murashige (1970) conseguiram desenvolver plantas inteiras
a partir de meristemas apicais (sem qualquer primrdio foliar) em meio contendo
sais minerais e vitaminas, enriquecido com reguladores de crescimento.
Murashige (1974) apresentou o seguinte esquema padro para sistemas de
micropropagao:
Estdio I - seleo de explantes, desinfestao e cultivo em meio nutritivo, sob
condies asspticas
Estdio II - multiplicao dos propgulos atravs de sucessivas subculturas, em
meio prprio para multiplicao
Estdio III - transferncia das partes areas produzidas para meio de enraizamento
e subseqente transplantio das plantas, obtidas para substrato do solo.
Este esquema pode variar conforme as peculiaridades de cada espcie, podendo
ser necessria uma fase adicional de alongamento das partes areas antes do
enraizamento, ou o esquema pode ser simplificado, eliminando-se a etapa de
enraizamento in vitro, manipulando-se as partes areas como microestacas, as
quais enraizam diretamente no substrato de transplantio. Um estgio zero , s
vezes, citado, o qual corresponde ao tratamento dado planta-matriz de onde
so retirados os explantes (GRATTAPAGLIA e MACHADO, 1990).
Para se fazer a micropropagao, utilizam-se os seguintes mtodos:

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

2.1.1.1. Proliferao de Gemas Axilares

Segmentos apicais ou nodais so

adequados como fonte de explantes para
o processo de preservao de
germoplasma in vitro. Tal material
apresenta as seguintes vantagens:
adaptao s condies in vitro; alto grau
de valor gentico da planta matriz; maior
garantia de regenerao, que meristemas
ou calos, e economia de espao para
armazenamento.

Foto: Srgio Cobel

Gemas axilares so estimuladas a crescer (Figura 1) formando brotos simples ou

tufos de brotos que so divididos, dando
origem a novos explantes.

Fig. 1. Gemas axilares oriundas

de algodo G. hirsutum cultivadas
in vitro.

2.1.1.2. Induo de Gemas

Adventcias Por Organognese Direta Ou Indireta

Foto: Srgio Cobel

Foto: Julita Maria F. C. Carvalho

Formao de gemas em locais no convencionais (Figura 2) tanto diretamente de

tecidos com potencial morfogentico quanto indiretamente, atravs da formao
de calos. Entende-se por calo (Figura 3) um aglomerado de clulas
desorganizadas, formadas por clulas diferenciadas e no diferenciadas, que se
dividem ativamente e que, em geral, se originam em zonas com injrias qumicas
ou fsicas (BAJAJ, 1989). A definio de protocolo de induo de
organognese a partir de meristema apical, isto , induo de uma multibrotao
das culturas a serem transformadas, aumentaria significativamente a freqncia
de plantas transformadas (ARAGO et al., 1998).

Fig. 2. Organognese direta a partir

de fragmentos de folha de Violeta
africana Saintpaulia ionantha

Fig. 3. Calo frivel oriundo de

hipoctilo de plntulas de algodo G.
hirsutum in vitro

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

2.1.1.3. Embriognese Somtica

Consiste na formao de embries somticos (embriides) a partir de tecidos
somticos, com constituio idntica da planta-me, a no ser nos casos em
que ocorre a embriognese por via indireta, passando pela formao de calos,
quando poder ocorrer variabilidade gentica. Para que ocorra embriognese
somtica, as clulas diferenciadas devem ser primeiro desdiferenciadas
(desprogramao gnica) para serem consideradas como clulas embriognicas
aps a diviso celular (PASQUAL et al., 1997). A induo de embriognese no
muito fcil, seno impossvel, no caso de muitas espcies vegetais. Entretanto,
quando possvel, apresenta vrias vantagens sobre as tcnicas de
micropropagao, dentre elas se destacam: 1) a capacidade de produzir grande
nmero de embries num espao limitado; 2) os embries so individualizados e
se desenvolvem diretamente em plantas (LAWRENCE, 1981). Os embriides
podem ser utilizados tanto na continuao da propagao in vitro quanto na
produo de sementes sintticas.
As principais limitaes da embriognese somtica em plantas perenes,
especialmente frutferas tropicais, so: 1) o baixo nmero de plantas
desenvolvidas em condies de campo, apesar de ser possvel o processo de
embriognese, e conseqentemente, a obteno de embries somticos, em
diversas espcies; 2) as dificuldades de obtenes de embries a partir de
partes maduras/adultas das plantas, com a maioria dos sucessos obtidos com
tecidos de sementes ou de plntulas (BARROS, 1999). Entretanto, os embries
zigticos so a fonte para a obteno das cpias, o que quase sempre no
desejvel, por ser desconhecido o valor gentico desses indivduos.

2.1.1.3.1. Embriognese Direta

Os embries somticos so originados diretamente do explante. A ocorrncia de
embriognese direta tem sido registrada em tecidos gametofticos, esporofticos e
em tecidos que se originaram em funo da fertilizao dos gametas. Este
fenmeno ocorre com maior probabilidade em micrsporos dentro da antera e
tecidos de partes do ovrio, incluindo as paredes do ovrio ou carpelos, vulo,
embrio zigtico ou plntulas jovens (BAJAJ, 1992a).

2.1.1.3.2. Embriognese Indireta

Os embries somticos so produzidos a partir de calo. A verdadeira
embriognese indireta (Figura 4) requer que as clulas diferenciadas de um
explante sejam induzidas a formar calos no-diferenciados e, ento, algumas

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Foto: Julita Maria F.C. Carvalho

clulas se tornam comprometidas ou predeterminadas em uma rota embriognica

(BAJAJ, 1992b).
Fig. 4. Embries somticos de algodo G.
hirsutum, obtidos a partir de explante de
hipoctilo.

Os embries somticos podem ser distinguidos de brotos adventcios por serem

bipolares, possuindo primrdios radiculares e foliares, xis e cotildones e no
terem conexo vascular com o tecido paternal. Por outro lado, gemas axilares ou
adventcias podem induzir a formao de condutos procambiais no tecido
maternal. Esses condutos na planta intacta estabelecem uma conexo entre broto
novo e o sistema vascular da planta-me. Diferentes dos meristemas, que
originam brotos e razes separadamente, esses embries quase sempre se
originam superficialmente sobre calos e se desprendem facilmente (Figura 5).

Fig. 5. Diagrama mostrando diferena entre propagao a partir de gema e embrio

somtico.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

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Os embries somticos so formados a partir de clulas caracteristicamente

meristemticas e, portanto, diferentes das usuais clulas vacuoladas
parenquimatosas (Figura 6b) encontradas em calos e em culturas em suspenso;
elas possuem citoplasma denso, ncleo grande e muitos gros de amido (Figura
6a) (BAJAJ, 1991).

Foto: Julita Maria F.C. Carvalho

Fig. 6. Diferena entre clulas

meristemticas (A) e clulas
parenquimatosas (B).

Foto: Julita Maria F.C. Carvalho

As formas dos embries somticos correspondentes s distintas fases de

desenvolvimento, so: pr-embriide, cordiforme, torpedo e cotiledonar (Figura
7).

Fig. 7. Estdio de desenvolvimento de embrio somtico: A- pr-embriide; Bcorao; C- torpedo; D- cotiledonar.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

2.1.2. Cultivo de Meristemasc

O cultivo de meristemas
utilizado para limpeza de viroses,
baseando-se no princpio de que
esta parte da planta a nica no
infectada por vrus, devido
velocidade de multiplicao
celular e ausncia de um
sistema vascular por onde os
vrus pudessem ser
disseminados.

Foto: Cincia & Natureza: Vida das Plantas

Os meristemas (Figura 8) so tecidos vegetais formados por grupos de clulas

no diferenciadas (clulas com algumas caractersticas e funes no especficas)
que se caracterizam por sua alta atividade de diviso e so responsveis pelo
crescimento dos distintos rgos da planta (DEBERGE e ZIMMERMAN, 1991).

Fig. 8. Gema formada de domo meristemtico,

Nos ltimos anos, o cultivo de
primrdio foliar e poro inferior ao promrdio
meristemas tem ganhado, em
foliar.
algumas culturas, certa
importncia, por ser utilizado
para a obteno de tecidos para a transformao gentica por agentes biolgicos,
como Agrobacterium (GOULD et al., 1991).

2.1.3. Cultivo de Protoplastos

Protoplasto uma clula cuja parede foi removida por ao enzimtica. O cultivo
de protoplastos vm sendo utilizado no melhoramento de espcies de interesse
agronmico, para obteno de plantas transgnicas, de hbridos somticos e de
mutantes ou variantes somaclonais. Alm disso, protoplastos constituem um
sistema vegetal para estudo da expresso de genes isolados e sua regulao.
A tcnica de isolamento de protoplasto em fumo, foi estabelecida por Nagata e
Takebe (1970), a partir de clulas de mesfilo de folha, a qual vem sendo
empregada como metodologia bsica em diferentes espcies. Vrios parmetros
so importantes para a obteno de protoplastos viveis, entre os quais se
destacam: a espcie, as condies de desenvolvimento da planta, tipo e idade do
explante e as condies de isolamento dos protoplastos. Teoricamente,
utilizando-se uma mistura adequada de enzimas pectocelulolticas, protoplastos
podem ser isolados a partir de qualquer tipo de tecido vegetal. Essas enzimas

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

pectocelulolticas foram usadas, a princpio, na indstria para produo de sucos

de frutas. Elas so isoladas de microrganismos simbiticos, parasitas ou
saprofticos, que degradam naturalmente as paredes celulares (CARNEIRO et al.,
1998).
As tcnicas de obteno e cultivo de protoplastos so fceis de manipular e no
requerem equipamentos sofisticados, porm a metodologia no pode ser
generalizada, pois cada gentipo um caso particular, necessitando de alguns
ajustes especficos na cultura. A etapa limitante na generalizao dessa
metodologia a regenerao de plantas.
Apesar de ser possvel o isolamento de protoplastos de vrios tecidos, as
suspenses celulares so ultimamente mais utilizadas, pela facilidade de
manipulao e alta eficincia no isolamento. Com o objetivo de regenerar plantas
a partir dos protoplastos, clulas embriognicas so sempre recomendadas,
sobretudo em plantas monocotiledneas (HORN et al., 1988; MEGIA et al.,
1993).
A fuso de protoplastos de cultivares, espcies ou gneros diferentes,
induzida por vrios produtos e mtodos. O polietileno-glicol (PEG) o produto
mais usado para induo da fuso obtendo-se, desta forma, o hbrido somtico
(PASQUAL et al.,1997). As solues salinas neutralizam as cargas negativas
das membranas, e o PEG pode formar pontes moleculares entre certas protenas
da membrana, o que facilita as agregaes dos protoplastos (ALDWINCKLE et
al., 1982).
A hibridao somtica de plantas envolve quatro estgios distintos (PASQUAL et
al.,1997): 1) isolamento de protoplasto; 2) fuso de protoplastos; 3)
regenerao de plantas a partir de tecidos selecionados e, 4) anlise das plantas
regeneradas.

2.1.4. Cultivo de Clula Isolada ou Massa de Tecido

Desorganizado
O cultivo de clula isolada ou massa de tecido desorganizado (calo) uma
alternativa para a obteno e seleo de plantas resistentes a condies adversas
(fungo, bactria, herbicidas etc.) e distintos tipos de explantes para produzir
compostos de interesse (AMMIRATO et. al., 1984). A seleo in vitro tem,
como vantagens: 1) as unidades experimentais so mantidas em meio definido e
condies controladas, permitindo a seleo de pequenos incrementos em
resistncia; 2) clulas cultivadas podem ser expostas ao agente seletivo de

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

maneira uniforme, reduzindo a possibilidade de escapes; 3) sistemas de cultivo

mantidos em pequenos espaos podem, potencialmente, substituir onerosas
casas-de-vegetao ou campos de teste, e 4) o agente causador da doena ou
outro fator permanece confinado no laboratrio.

2.1.5 Cultivo de Embries Zigticos ou Embries Imaturos

Foto: Srgio Cobel

O cultivo de embries zigticos ou embries imaturos (Figura 9) usado para

obteno de hbridos entre diferentes espcies, tornando possvel, a certas
cultivares, a transferncia de genes desejveis. Trabalho pioneiro de cultivo de
embries maduros foi realizado por Hanning (1904), cultivando embries
maduros de Raphanus sativus, R. landra, R. caudatus e Cochlearia danica, cuja
exigncia nutricional consistia de sais minerais, acares e aminocidos.

Fig. 9. Cultivo de embrio zigtico a

partir de sementes secas de mamona (R.
communis).

Desde ento, a tcnica de cultura de

embries tem-se expandido e
ensejado importantes contribuies
em estudos bsicos da fisiologia do
desenvolvimento do embrio, em
programas de melhoramento
gentico, pela recuperao de
hbridos de interesse de cruzamentos
incompatveis, bem como para a
quebra de dormncia de sementes,
observada em algumas espcies
(FERREIRA et al., 1990).

A medida em que o embrio zigtico

se desenvolve, ocorrem mudanas progressivas na sua exigncia nutricional,
passando de heterotrfico a autotrfico. A distino entre essas duas fases
baseia-se na dependncia do embrio pelas substncias nutritivas armazenadas
no endosperma. Inicialmente, o zigoto e o embrio tm, nas fases subseqentes
fecundao, pouca capacidade de sntese e se utilizam das reservas nutricionais,
reguladores de crescimento e outros metablitos essenciais presentes no
endosperma e clulas acessrias do saco embrionrio. Ainda no estgio globular,
o embrio continua sendo heterotrfico. Somente a partir do estgio cordiforme
final, com incio do desenvolvimento dos cotildones, que o embrio comea a
se tornar independente e autotrfico (RAGHAVAN, 1976).
Hanning (1904) observou que incluso de sacarose era necessria para a
germinao e demonstrou a influncia de diferentes fontes de nitrognio sobre a
morfologia do embrio (RAGHAVAN,1976).

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Diversos fatores podem afetar a eficincia e o sucesso da cultura de embries,

porm as condies gerais foram testadas e determinadas por vrios
pesquisadores, em trabalhos clssicos, desde o incio do sculo.
Para obteno de hbridos interespecficos por meio do melhoramento
convencional, h necessidade da conduo de sucessivas geraes de
retrocruzamento com parental recorrente, no sentido de introgredir a
caracterstica selvagem no mesmo e recuperar a sua performance; entretanto,
este mtodo limitado em certas espcies, por barreiras de origem bitica: os
cruzamentos so incompatveis ou ocorre a formao do zigoto no vivel. Uma
alternativa usada para contornar o problema implica na exciso do embrio
imaturo e no seu posterior desenvolvimento in vitro.
Vrios so os fatores que afetam a cultura de embries in vitro, tais como a
escolha do meio nutritivo adequado, os reguladores de crescimento utilizados, as
substncias fenlicas liberadas e a prpria remoo inadequada do embrio.

2.1.6. Cultivo de Anteras

Atravs do cultivo de anteras pode-se conseguir plantas clones de clulas que
possuem uma s cpia da dotao cromossmica (AMMIRATO et al., 1990). As
plantas haplides, assim obtidas, so estreis e no formam sementes;
entretanto, pode-se conseguir plantas diplides homozigticas, pela duplicao
dos cromossomos das clulas, mediante tratamento com agentes duplicadores
como, por exemplo, colchicina, nica etapa substituindo as muitas geraes de
autofecundao necessrias no processo usual de obteno de linhagens.
A cultura de anteras considerada uma ferramenta importante em programa de
melhoramento, pois possibilita a obteno de linhas 100% homozigotas. A
obteno de plantas puras em geraes segregantes acelera o processo de
obteno de novas cultivares em vrios anos (FERNANDES, 1990).
As plantas haplides podem ser obtidas tanto diretamente por embriognese,
quanto indiretamente, via formao de calos. Na andrognese direta o
micrsporo se comporta como um zigoto, passando por vrios estdios de
embriogenia, semelhante ao que ocorre ex vitro. Na andrognese indireta se
dividem e formam calo. As plantas derivadas de calos podem apresentar
variaes genticas.
Segundo Nitsch (1983), alguns fatores influenciam a obteno de plantas
haplides viveis atravs da cultura de anteras ou plens, como: a viabilidade do
plen, vigor que a planta apresenta no estdio homozigoto, e a reao das
plantas haplides em relao aos agentes duplicadores dos cromossomos.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

2.2. Fatores que Influem no xito do Cultivo De Tecidos

2.2.1. Origem e Tipo do Material Vegetal
So, talvez, o fator mais importante. Cada espcie ou variedade se comporta de
maneira diferente, e tm grande influncia a idade da planta e suas condies
prvias no campo, a poca da coleta, o tipo de explante, a posio que este
ocupa na planta e uma larga lista de aspectos, prprios do material vegetal, que
dificilmente podem ser controlados em sua totalidade. O material cultivado in
vitro tem que estar livre de microrganismos que possam interferir durante o
processo (PIEREK, 1988).

2.2.2. Composio do meio de cultivo

O meio de cultivo desempenha vrias funes pois, ao mesmo tempo em que
serve de suporte fsico para o explante, proporciona-lhe os nutrientes necessrios
sua sobrevivncia; alm disso, tal como se indicou anteriormente, os
componentes do meio podem ser utilizados para dirigir o crescimento e o
desenvolvimento do material vegetal (GEORGE, 1996). O meio de cultivo pode
ser lquido ou solidificado com gar ou outro tipo de agente gelificante
(CARVALHO, 1996). Existem vrios meios de cultivo, entretanto, o mais
amplamente utilizado o formulado por Murashige e Skoog (1962), de
denominao MS. Os componentes deste meio e suas concentraes, so
listados na Tabela 1

2.2.2.1. Reguladores de Crescimento

a) Auxinas
um grupo de reguladores de crescimento utilizados para induzir o
desenvolvimento de ns, formao de calo e desenvolvimento de razes
adventcias. As auxinas utilizadas com maior freqncia em cultivo in vitro, so:
cido indol-3-actico (AIA), cido indol-3-butrico (AIB), cido -naftalenoactico
(ANA) e cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4D). O AIA uma auxina que,
comumente, adicionada a concentraes relativamente elevadas (1-30 mg/l)
devido ao fato de se decompor na presena de luz, mediante oxidao
enzimtica. As outras auxinas mencionadas so sintticas e mais ativas
utilizando-se, portanto, em concentraes inferiores.

b) Citocininas
Trata-se de um grupo de reguladores de crescimento que estimulam a diviso

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24

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Tabela 1. Composio das solues concentradas utilizadas para a preparao do meio

de cultivo MS.

Fonte: Murashige e Skoog, 1962.

celular, sobretudo junto de uma auxina. As citocininas mais utilizadas em cultivo

in vitro, so: kinetina (KIN), zeatina (citocinina natural), 6-benzilaminopurina
(BAP ou BA) e 6-(g,g-dimetilalimino) purina (2iP). Em concentraes elevadas
induzem formao de brotos adventcios e inibem a formao de razes; so,
assim, responsveis pela eliminao da dormncia apical, promovendo o
desenvolvimento das gemas axilares.

c) Giberelinas
So reguladores de crescimento que induzem o desenvolvimento dos ns e o
crescimento dos meristemas, ou gemas in vitro; podem, tambm, romper a
dormncia de embries isolados ou gemas e inibir a formao de razes e brotos
adventcios, e so utilizados com menor freqncia que as auxinas e as
citocininas. Dentro das giberelinas, o cido giberlico (GA3) o mais

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

empregado. Deve-se ter em conta que o GA3 perde 90% de sua atividade ao se
esterilizar junto ao meio no autoclave (PIERIK, 1988).

2.2.3. Condies de Incubao

No comum que as condies de incubaes variarem muito de um cultivo a
outro ainda que sua importncia seja equiparvel dos demais fatores de
cultivo. Embora cada planta, explante e perodo de cultivo, possa ter seus
requerimentos especficos, comum utilizar-se a qualidade e a intensidade de
luz, fotoperodos e termoperodos, mais ou menos padronizados. Por exemplo,
para culturas tropicais uma intensidade luminosa de 2.500 lux com um
fotoperodo de 16 horas de luz e 8 horas no escuro e uma temperatura de 25 C
a 30C (MONTOYA HENAO, 1991) .
Combinando-se adequadamente esses trs fatores (material vegetal, meio de
cultivo e condies de incubao) conseguir-se- obter, no material vegetal,
alguns dos seguintes processos morfogenticos:
desenvolvimento dos meristemas j existentes no explante;
organognese, isto , formao de multibrotao e/ou razes adventcias;
embriognese assexual, ou seja, formao de embries somticos
(embriides) a partir de clulas que no so produto de fuso gamtica e,
desdiferenciao (converso de clulas diferenciadas em clulas no
diferenciadas, ou seja, meristemticas) de tecidos e proliferao de massa de
calo.

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26

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Anexo 1: Histrico da Cultura de Tecidos Vegetais

Apresenta-se, neste anexo, um histrico sucinto, visando oferecer uma idia das
bases e da evoluo da cultura de tecidos vegetais.
Em 1838, Schleiden e Schwann levantaram a hiptese de que toda clula tinha
capacidade de gerar um indivduo.
Em 1892, Sachs definiu que as plantas sintetizam substncias capazes de
formar rgos e que apresentam distribuio de forma polar.
Em 1902, Haberdandt tentou demonstrar a totipotencialidade das clulas das
plantas, a partir de material maduro, e obteve pouca expanso, porm no
conseguiu diviso celular. O desconhecimento dos reguladores de crescimento
contribuiu para este insucesso.
Em 1904, Hanning foi o primeiro a cultivar embries imaturos de crucferas in
vitro com sucesso.
Em 1922, Robbins e Kotte mantiveram, com sucesso, razes de gramneas em
meio de cultura.
Em 1925, Laibach aplicou o cultivo de embries a cruzamentos interespecficos
de Linum.
Os progressos na cultura de tecidos s foram possveis a partir da dcada de 30.
Em 1934, White manteve o crescimento de pices de razes de tomate, em meio
lquido, por um perodo ilimitado. Neste mesmo ano, Kogh et al. identificaram o
primeiro fitohormnio, a auxina, cido indolilactico.
Em 1939 Gautheret e Nocourt estabeleceram um protocolo para a manuteno
de cultura de calo de cenoura. Neste mesmo ano, White conseguiu manter calo
de fumo em meio contendo AIA.
Outros mritos no avano das tcnicas de cultivo in vitro so devidos s
observaes de Van Overbeek et al. (1941) que promoveram a diferenciao e o
crescimento de calo a partir de embries de Datura stramonium, pela incluso de
leite de coco no meio de cultivo.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Em 1946, Ball regenerou plantas de Lupinus e Tropaelum, a partir de pices

caulinares.
Em 1948, Skoog e Tsui demonstraram a regulao qumica da formao da parte
area e raiz, em calo de fumo.
Em 1952, Sussex e Steve, trabalhando com primrdio foliar, observaram que
este originava uma planta. Neste mesmo ano, a suplementao do meio de
cultura com auxina e leite de coco permitiram que Steward e Caplin (1952)
obtivessem formao de calo em diversas espcies de plantas. Tambm em
1952, Morel e Martin recuperaram plantas de dlia livres de Vrus do Mosaico
pela cultura de pices caulinares
Em 1953, Tulecke obteve calo haplide a partir do cultivo de plen de Gingko
biloba.
No perodo de 1953 a 1954, Muir observou que clulas colocadas em meio de
cultura continuavam se multiplicando.
Em 1954, Muir et al. obtiveram a primeira planta, a partir de uma clula isolada.
Com a descoberta da cinetina (primeira citocinina) por Miller et al. (1955), foi
possvel demonstrar-se que a diferenciao da parte area, raiz ou ambos, em
calo de fumo, era regulada pelo balano hormonal auxina/citocinina. A partir
desta descoberta houve grandes avanos no estudo da cultura de tecidos
vegetais.
Em 1958, Wickson e Thimann observaram que quando se aplicava cinetina a
uma gema terminal ou lateral dormente, esta saa da dormncia. No mesmo ano,
Reinert e Steward et al. (1958) obtiveram formao de embries somticos a
partir de calo de cenoura, e Maheswari e Rangaswamy estudaram a cultura de
ncelos e a regenerao de embries somticos em Citrus.
Em 1959, Melchers e Bergmann constataram uma variao na ploidia com o
avano do tempo em que o explante permanecia no meio de cultura.
Em 1960, Morel recuperou cultivares de orqudeas livres de vrus, mediante
cultura de meristemas, trabalhando com pice caulinar (meristema + primrdio
foliar + poro inferior ao primrdio foliar) demonstrando a pontencialidade das
aplicaes comerciais da micropropagao.
O mtodo de isolamento de protoplastos de plantas com enzima de degradao
da parede celular, foi desenvolvido por Cocking (1960).

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Murashige e Skoog elaboraram, em 1962, o meio de cultura conhecido

universalmente, denominado meio MS. Tambm em 1962 Kanta et al. obtiveram
sucesso na polinizao in vitro de Papaver somniferum. vulos isolados eram
colocados em cultura e, em seguida, gros de plen eram depositados sobre os
mesmos, ocorrendo o desenvolvimento do tubo polnico, a fecundao, a
formao do embrio e, posteriormente, a obteno de sementes.
J em 1965, Aghion-Prat induziu a florao in vitro em tecidos de fumo.
Em 1966, Guha e Maheswari foram os pioneiros na induo de andrognese in
vitro em Datura, a partir de gros de plen, mediante cultura de anteras.
Smith e Murashige obtiveram, em 1970, a formao de plantas pela cultura de
meristemas propriamente dito (poro distal ao mais novo primrdio foliar)
O mtodo de excluso de viroses e virides em plantas de Citrus foi
desenvolvido por Murashige et al. (1972) e consistia na garfagem de pices
caulinares (meristemas com dois primrdios foliares) em porta-enxerto in vitro.
Ainda neste mesmo ano, Carlson et al. (1972) comunicaram a primeira fuso de
protoplastos, obtida em Nicotiana.
Em 1974, Reinhard iniciou estudos sobre a biotransformao de tecidos
vegetais e Zaenen et al. descobriram que o plasmdio Ti o princpio indutor
de tumores de Agrobacterium, uma bactria de grande importncia na
transformao gentica em protoplastos vegetais.
Em 1978, Melchers et al. conseguiram hbridos somticos entre batata e tomate.
Em 1982, Krens et al. alcanaram a incorporao de DNA isolado por
protoplastos, tornando possvel a transformao de clulas vegetais a partir de
um DNA isolado. Neste mesmo ano, Zimmermann obteve a fuso de
protoplastos, atravs de estmulo eltrico.
Em 1985, Horsch et al. obtiveram a infeco e a transformao gentica de
disco foliares de tabaco com Agrobacterium, bem como a regenerao das
plantas transformadas.
No Brasil, os trabalhos pioneiros com cultura de tecidos foram desenvolvidos no
Instituto Biolgico, na dcada de 1950. A primeira equipe de cultura de tecidos
foi formada em 1971, na ESALQ, em Piracicaba, SP.
Entre 1975 e 1980 foram criados os laboratrios da Universidade de Campinas,

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

do Instituto Agronmico de Campinas e da EMBRAPA. Atualmente, a maioria

das instituies tem laboratrio nesta rea, trabalhando com diferentes
metodologias de manipulao de plantas in vitro.

ANEXO 2: Conceitos Bsicos em Cultura de Tecidos

Vegetais

Na cultura de tecidos, como qualquer outra rea do conhecimento, existem

termos e conceitos bsicos, os quais devem ser conhecidos por quem trabalha
ou quer trabalhar na rea. Neste anexo, so apresentados os conceitos de uso
mais freqente na cultura de tecidos vegetais.
Adulto: fase do ciclo vital, na qual uma planta tem alcanado o grau de
maturidade suficiente para florescer ou reproduzir.
Aclimatao: processo de adaptao da planta s condies ambientais, aps

sua transferncia da condio in vitro, antes do transplante para o local

definitivo.
Adventcio: estruturas ou rgos desenvolvidos fora do seu lugar normal de

desenvolvimento, a partir de tecido adulto, num ponto de iniciao no

predeterminado, por exemplo, embries a partir de qualquer clula que no
seja zigoto; folhas e ramos a partir de razes.
gar: produto extrado de algas marinhas, utilizado para solidificar o meio de

cultura.
gua deionizada, desminerilizada ou destilada: gua livre de certas impurezas,

particularmente sais e diversos ons.

Andrognese: partenognese masculina ou o desenvolvimento haplide de

uma plntula ou de suas partes, a partir de gameta masculino.

Aneuplodia: perda ou ganho de cromossomos atravs de vrios processos que

resultam em complementos cromossmicos anormais na metfase.

Antioxidantes: produtos qumicos que evitam a oxidao.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

pice caulinar: estrutura formada pelo meristema apical acompanhado de

primrdios foliares e tecidos adjacentes da haste.

Apomixia: reproduo assexual que resulta na formao de um embrio sem

prvia fertilizao, a partir de uma nica clula ou de um conjunto de clulas.

Assepsia: no cultivo in vitro, significa ausncia de qualquer microrganismo.
Assptico: substncia, local, equipamento livre de fungos, bactrias, vrus,

micoplasmas e outras contaminaes orgnica.

Autoclavagem: fornecimento de calor sob presso, com o objetivo de proceder

esterilizao.
Autotrfico: organismo que utiliza CO2 como nica fonte de carbono para

sntese de suas biomolculas.

Autotrficas: plantas ou outros organismos capazes de sintetizar suas prprias

substncias orgnicas, a partir de componentes inorgnicos simples, mediante

fotossntese ou quimiossntese.
Auxinas: grupo de reguladores de crescimento vegetal, quimicamente ou

funcionalmente relacionados ao hormnio natural AIA (cido indolactico) que

causam alongamento celular, dominncia apical, enraizamento e outros
fenmenos.
Auxotrfica: clulas ou organismos cujos crescimento e desenvolvimento

dependem da presena, no meio de cultura, de suplementos, porque no so

capazes de sintetizar certos metablitos essenciais, necessitando da adio de
nutrientes exgenos.
Biotecnologia: conjunto de tcnicas especficas para modificao e melhoria

dos sistemas biolgicos, ou seja plantas, animais, microrganismos, clulas em

cultivo ou produtos derivados.
Calo: aglomerado de clulas no organizadas, irregularmente diferenciadas, que

se multiplicam desordenadamente e se desenvolvem a partir de tecidos

vegetais, normalmente em resposta a injrias qumicas ou fsicas.
Calognese: induo e desenvolvimento de calos.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Clula diferenciada: qualquer clula no meristemtica.
Clula no diferenciada: clula meristemtica.
Cmara de crescimento ou de cultivo: cmara com controle de iluminao,

fotoperodo e temperatura, na qual so mantidos os cultivos.

Cmara de fluxo laminar: cmara para manipulao do material vegetal

assptico, utilizada nas operaes de estabelecimento e transferncia dos

cultivos, que mantm em seu interior um ambiente livre de agentes
contaminantes por meio de um fluxo no turbulento e contnuo de ar estril.
Citocininas: grupo de reguladores de crescimento vegetal, quimicamente ou

funcionalmente relacionados ao hormnio natural zeatina, que causam diviso

celular, diferenciao celular e de brotos, quebra de dormncia apical e outros
fenmenos.
Clonagem: tem pelo menos dois significados distintos: 1) ato de se obter

novas culturas atravs de subcultivos mantendo a identidade gentica do

material, e 2) isolar uma seqncia de DNA em uma molcula vetora (o que
possibilita sua conservao e multiplicao).
Clone: conjunto de clulas, tecidos, plantas ou animais, obtidos

assexualmente ou por partenognese, a partir de um nico indivduo, o que

possibilita a obteno de um novo indivduo com a mesma carga gentica do
indivduo a partir do qual foi gerado.
Criopreservao: conservao de material biolgico em

nitrognio lquido a

196C, ou em sua fase de vapor, a 150C.

Cultura em suspenso: cultura de clulas individuais, agregados ou tecidos em

meio lquido, freqentemente sob agitao para fornecer aerao adequada.

Densidade crtica de clulas: menor inculo a partir do qual se pode

desenvolver um novo cultivo em suspenso. Nmero de clulas por unidade

de volume.
Desinfeco: eliminao de microrganismos localizados internamente nos

tecidos.
Desinfestao: eliminao de microorganismos localizados na superfcie do

tecido ou rgo.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Desdiferenciao: converso das clulas diferenciadas ao estado meristemtico

e ocorre quando os tecidos so feridos.

Diferenciao: srie de modificaes relativamente permanentes e irreversveis,

que ocorrem em clulas meristemticas e resultam em distines entre os tipos

de clulas de um organismo, desenvolvendo clulas ou tecidos com
caractersticas e funo especficas.
Diplide: clula ou planta com duas vezes o nmero bsico de cromossomos

(2n).
Dominncia apical: anulao do crescimento das gemas laterais pela gema

apical.
Embrio: estado precoce de desenvolvimento de uma planta, consistindo de

primrdio de raiz, broto e folhas.

Embriognese: processo de iniciao e desenvolvimento de embrio que pode

ser sexual (embrio zigtico, embriognese propriamente dita) ou assexual

(embrio somtico, embriognese somtica).
Embriide: estrutura semelhante ao embrio, porm originria de uma clula

somtica. Tambm chamado embrio somtico ou embrio adventcio.

Epigentico: qualquer mudana no fentipo que no resultante de uma

alterao na seqncia do DNA.

Esterilizao: consiste na eliminao de todos os microrganismos; normalmente

efetuado por autoclavagem.

Ex vitro: desenvolvido fora do recipiente de cultivo.
Explante: fragmento de tecido ou rgo de plantas utilizado para se iniciar uma

cultura in vitro.
Fitohormnios: compostos naturais que regulam o desenvolvimento das

plantas. Os principais grupos incluem auxinas, citocininas, giberelinas, cido

abscsico e etileno.
Gema axilar: refere-se gema localizada na axila das folhas.
Gametoclone: propagao clonal de gametas (plen, vulos).

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Gametfito: clulas e tecidos da fase haplide do ciclo vital das plantas.
Gametoplasma: conjunto de materiais hereditrios de uma espcie.
Gene: unidade do material de herana; seqncia ordenada de nucleotdeos

que compreende um segmento de DNA.

Gene marcador de seleo: so aqueles que codificam para uma protena,

geralmente com atividade enzimtica, ou para outro produto que ir conferir,

s clulas transformadas da planta, resistncia a um determinado substrato,
permitindo distinguir clulas transformadas de no transformadas.
Gene reprter: so aqueles que codificam para uma protena, geralmente de

atividade enzimtica, cujo produto facilmente detectado. Esses genes so

marcadores que possibilitam identificar ou marcar clulas transformadas sem,
contudo, eliminar as clulas no transformadas.
Giberelinas: grupo de reguladores de crescimento que induzem o alongamento

dos entrenos e o crescimento dos meristemas ou gemas in vitro. Tambm

podem romper a dormncia dos embries isolados ou gemas e inibir a
formao de razes e gemas adventcias.
Habituao: capacidade necessria para as clulas crescerem e se dividirem

independentemente de reguladores de crescimento. Geralmente, depois de um

certo perodo das clulas ou tecidos em cultivo, este fenmeno reduz as
concentraes de reguladores de crescimento necessrias para permanncia a
uma terminada resposta.
Haplide: condio correspondente a um conjunto nico de cromossomos no

pareados em cada ncleo. caracterstica dos gametas.

Heterotrfico: organismo que requer substncias orgnicas como fonte de

carbono, para a sntese de biomolculas.

Indexao: processo de deteco de patgenos em plantas ou culturas,

visando identificao de plantas sadias.

Induo: remoo do agente de represso, permitindo a iniciao de um

processo.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Inocular: em cultivo de tecidos, significa introduzir clulas, tecidos, rgos ou

organismos em ou sobre um meio de cultivo.

In vitro: cultivo de qualquer material vivo, em condies asspticas, sobre um

meio sinttico determinado sob condies ambientais controladas.

In vivo: referente a fenmenos que ocorrem nas clulas ou organismos vivos,

normalmente fora do ambiente de cultivo de tecidos.

Juvenilidade: fase do ciclo vital de uma planta determinado por caractersticas

especficas e sua incapacidade de manifestar a reproduo sexual. Em

condies de cultivo in vitro, este material se caracteriza por possuir elevada
capacidade morfognica.
Lux: unidade de medida da luz incidente que ilumina uma superfcie de 1m2

situada a 1m da fonte de irradiao.

Macroelementos: grupo de elementos essenciais requeridos em concentraes

relativamente elevadas na nutrio mineral das plantas.

Meio lquido: meio nutritivo em estado lquido, sem agente solidificante.
Meio slido ou semislido: meio nutritivo, solidificado por um agente como o

gar, gelrite etc.

Meristema: tecido vegetal formado por grupos de clulas no diferenciadas,

que se caracterizam por sua alta atividade de diviso e so responsveis pelo

crescimento dos distintos rgos da planta.
Meristemide: uma clula com caractersticas que se assemelham quelas do

embrio, ou meristema apical e capaz de manifestar sua totipotncia, originada

por diferenciao de clulas do calo.
Microelemento: grupo de elementos essenciais requeridos em concentraes

relativamente pequenas na nutrio mineral das plantas.

Micropropagao: tcnica de propagao assexual de plantas, mediante o

cultivo in vitro.
Micrsporo: esporo haplide, uninucleado, que se desenvolve no gro de

plen.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Morfognese: conjunto de fenmenos que do origem a um tecido, rgo ou

organismo. Evoluo de uma estrutura desde um estado indiferenciado at um

estado diferenciado.
rgo: conjunto de tecidos que atuam como unidade estrutural ou funcional

(raiz, gema, folha, flor, fruto).

Organognese: processo de diferenciao no qual se formam rgos vegetais

novos, a partir de estruturas preexistentes.

Oxidao: escurecimento de tecidos cortados que resulta da reao de

compostos fenlicos, liberados ao meio, com o oxignio.

pH: logaritmo da concentrao de ons de hidrognio convertido em sinais;

medida da acidez ou basicidade.

P/V: peso/volume: indica a concentrao de um composto slido em gua.

Exemplo: glicose a 2%, significa 20g/1000ml.

Partenognese: desenvolvimento do embrio a partir de vulos no

fertilizados.
Primrdio: estdio rudimentar de um rgo que comea a se formar.
Propgulo: qualquer parte vegetativa de uma planta, destinada propagao.
Protoplasto: clula desprovida da parede celular.
Regenerao: resposta morfognica a um estmulo, que resulta na produo de

rgos, embries ou plantas completas.

Regulador de crescimento: composto orgnico natural ou sinttico que, a

baixas concentraes, promove, inibe ou modifica o crescimento e o

desenvolvimento da planta.
Repicar: subdividir uma cultura e transferi-la para um meio novo.
Rizognese: induo e desenvolvimento de razes.
Senescncia: degradao celular, culminando com a morte das clulas.
Somaclone: propagao clonal de clulas somticas.

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Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

Somtica: refere-se aos processos e estruturas que envolvem as clulas de um

organismo, exceto das clulas reprodutivas.

Subcultura (Repicagem): transferir para um meio novo pequenas pores do

material cultivado.
Tecido: grupo de clulas com caractersticas comuns.
Tecido diferenciado: qualquer tecido no meristemtico, inclusive o calo.
Tecido no diferenciado: tecido meristemtico ( um tecido organizado, mas

no diferenciado).
Tecido no organizado: calo.
Tecido organizado: qualquer outro tecido, exceto o calo.
Termolbil: substncia que se decompe com o calor.
Termoterapia: tratamento com temperaturas elevadas, objetivando-se

principalmente a desativao de vrus.

Totipotncia: capacidade de clulas individuais expressarem o fentipo da

planta completa da qual foram derivadas.

Volume/Volume (V/V): indica a concentrao de um composto lquido, por

exemplo: 3ml/1000ml de ANA.

Variao somaclonal: variao observada em plantas obtidas por cultivo in

vitro de tecidos somticos que pode ser transmitida sexualmente.

Vitrificao: manifestao fisiolgica devido provavelmente, ao excesso de

absoro de gua em cultura de tecidos, tornando os brotos quebradios

(vitrificados).
Zigoto: clulas diplides resultantes da fuso de gametas.

Noes de Cultivo de Tecidos Vegetais

3. Referncias Bibliogrficas

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