Química IV Forense

UADER
Facultad de Ciencia y Tecnologa

Licenciatura en Criminalstica
QUMICA IV
Forense
Prof. Lic. Ral Cerolini

Prof. Bquim. Viviana Gassmann
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INDICE
UNIDAD I: SANGRE
Pg. 3
UNIDAD II: MANCHAS de SEMEN
Pg. 13
UNIDAD III: ANLISIS de ADN en GENTICA FORENSE
Pg. 21
UNIDAD IV: ANLISIS PERICIAL de PELOS
Pg. 27
UNIDAD V: REVENIDOS QUMICOS
Pg. 33
UNIDAD VI: MTODOS INSTRUMENTALES de ANLISIS QUMICOS
Pg. 36
UNIDAD VII: ESTUDIO de VIDRIOS
Pg. 40
UNIDAD VIII: ESTUDIO de INCENDIOS
Pg. 46
UNIDAD IX: ESTUDIO DE FIBRAS
Pg. 48
UNIDAD X: PLSTICOS y PINTURAS
Pg. 52
UNIDAD XI: COTEJO PERICIAL de TIERRAS
Pg. 59
UNIDAD XII: ESTUDIO de POLEN
Pg. 62
UNIDAD XIII: ESTUDIO de PLVORAS
Pg. 67
BIBLIOGRAFA
Pg. 70
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UNIDAD I: SANGRE
Sistemtica en el Levantamiento de Indicios
La ubicacin original de los indicios en el lugar del hecho quedar fehacientemente establecida
mediante documentacin fotogrfica flmica, con detalle de la localizacin relativa de cada elemento en
el contexto general, tras lo cual se realizar el relevamiento planimtrico. En el croquis de referencia
quedar establecida la posicin de cada evidencia a travs de dos (2) medidas exactas, acotadas en un
extremo comn por el elemento objeto de levantamiento y en el otro una estructura no removible
diferente en cada toma.
La mancha de sangre reciente depositada sobre soportes de escasa coloracin de base presenta
color rojo brillante, tornndose opaca si la matriz del mismo es absorbente. La opacidad se hace ms
evidente si queda expuesta a la luz solar, evolucionando el color al pardo rojizo por formacin de
hematina. En cambio, si el soporte es oscuro la mancha puede quedar enmascarada.
En el caso de manchas secas se embebe un trozo de gasa (5 x 5 mm) en solucin fisiolgica y se
deposita sobre la superficie de la mancha, ejerciendo ligera presin de contacto, rotando peridicamente
hasta completar el levantamiento. Seguidamente se depositan en tubos frasquitos de vidrio, viales
Ependorff, etc., rotulados convenientemente.
El tamao del recorte de gasa se debe a que lo que se busca es concentrar la muestra en ella, no
diluirla a travs de una gran superficie. Es por este motivo que, si el tamao de la mancha fuese muy
reducido podrn extraerse mediante pinza algunos hilos de gasa de uno de estos recortes, con el
objetivo de concentrar la muestra en la menor cantidad de hilo posible.
Es importante utilizar guantes de ltex al manipular las muestras para no contaminarlas.
Si se presume que parte del soporte se podra solubilizar en la solucin salina y arrastrarse
contaminando la muestra, se puede practicar un raspado con bistur sin hidratacin previa,
depositndose las escamas obtenidas en sobres de papel viales como los detallados,
convenientemente rotulados.
Si se detectan manchas en elementos fcilmente transportables, es conveniente levantar
directamente el soporte y archivarlo en recipientes de vidrio papel.
Frente a la presencia de material absorbido en soportes porosos (tierra, arena, aserrn, etc.) lo ideal
es la remocin del rea manchada, en lo posible en su totalidad, por cuanto se desconoce en principio
que volumen de esa muestra se podr recuperar a partir de esos soportes.
En el caso de encontrar sangre fresca extravasada, se aspira con pipeta Pasteur, jeringa gotero y
se deposita en vial con anticoagulante. Esto permite en la mayora de los casos, la determinacin de
grupo y factor sanguneo por tcnica directa con los sueros hemotipificadores respectivos.
Cualquiera sea la tcnica de recoleccin, se debe tener en cuenta que tratndose de material
biolgico es altamente probable su descomposicin si transcurre un lapso prolongado entre el
levantamiento y la remisin al laboratorio, lo que hace necesario proceder al secado de las muestras
antes de su envo, lo cual debe hacerse al aire (no al sol) hasta su total secado.
Es preferible la utilizacin de sobre bolsas de papel antes que las de nylon para el envi de
muestras, ya que en este ltimo es frecuente la condensacin de la humedad interior, con lo cual se
estara creando un micro ambiente ptimo para el desarrollo microbiano.
Serologa Forense. Principios Bsicos.
La sangre es un sustancia lquida que circula por las arterias y las venas del organismo. Es roja
brillante o escarlata cuando ha sido oxigenada en los pulmones y pasa a las arterias; adquiere una
tonalidad ms azulada cuando ha cedido su oxgeno para nutrir los tejidos del organismo y regresa a los
pulmones a travs de las venas y de pequeos vasos capilares. En los pulmones, la sangre cede el
dixido de carbono que ha captado procedente de los tejidos, recibe un nuevo aporte de oxgeno e inicia
un nuevo ciclo. Este movimiento circulatorio de sangre tiene lugar gracias a la actividad coordinada del
corazn, los pulmones y las paredes de los vasos sanguneos.
La sangre est formada por un lquido amarillento denominado plasma, en el que se encuentran en
suspensin millones de clulas que suponen cerca del 45% del volumen de sangre total. Tiene un olor
caracterstico y una densidad relativa que oscila entre 1,056 y 1,066. En el adulto sano el volumen de la
sangre es una onceava parte del peso corporal, de 4,5 a 6 litros.
Una gran parte del plasma es agua, medio que facilita la circulacin de muchos factores
indispensables que forman la sangre. Un milmetro cbico de sangre humana contiene unos cinco
millones de corpsculos o glbulos rojos, llamados eritrocitos o hemates; entre 5.000 y 10.000
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corpsculos o glbulos blancos que reciben el nombre de leucocitos, y entre 200.000 y 300.000
plaquetas, denominadas trombocitos. La sangre tambin transporta muchas sales y sustancias orgnicas
disueltas.
Protenas
Las protenas, junto con los hidratos de carbono y los lpidos, son compuestos orgnicos vitales que
intervienen en diversas funciones esenciales. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los
componentes principales de las clulas y que suponen ms del 50% del peso seco de los animales.
Las molculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y el
pelo, hasta los glbulos compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar
reacciones metablicas. Tienen un peso molecular elevado y son especficas de cada especie y de cada
uno de sus rganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 protenas distintas, de las que slo
un 2% se ha descrito con detalle.
Las enzimas son protenas, al igual que la insulina y casi todas las dems hormonas, los anticuerpos
del sistema inmunolgico y la hemoglobina, que transporta oxgeno en la sangre. Los cromosomas, que
transmiten los caracteres hereditarios en forma de genes, estn compuestos por cidos nucleicos y
protenas.
Las protenas son el resultado de las distintas combinaciones entre veinte aminocidos distintos que
se conocen como -aminocidos y son los siguientes: alanina, arginina, asparagina, cido asprtico,
cistena, cido glutmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina,
prolina, serina, treonina, triptfano, tirosina y valina. Todos ellos responden a la siguiente frmula
general:
Como muestra dicha frmula, los grupos amino y carboxilo se encuentran unidos al mismo tomo de
carbono, llamado tomo de carbono alfa. Ligado a l se encuentra un grupo radical variable (R). Es en
dichos grupos R donde las molculas de los veinte -aminocidos se diferencian unas de otras. En la
glicina, el ms simple de los cidos, el grupo R se compone de un nico tomo de hidrgeno. En otros
aminocidos el grupo R es ms complejo, conteniendo carbono e hidrgeno, as como oxgeno,
nitrgeno y azufre.
Cuando una clula viva sintetiza protenas, el grupo carboxilo de un aminocido reacciona con el
grupo amino de otro, formando un enlace peptdico, con prdida de una molcula de agua. El grupo
carboxilo del segundo aminocido reacciona de modo similar con el grupo amino del tercero, y as
sucesivamente hasta formar una larga cadena. Esta molcula en cadena, que puede contener de 50 a
varios cientos de aminocidos, se denomina polipptido.
Una protena puede estar formada por una sola cadena o por varias de ellas unidas por enlaces
moleculares dbiles. Cada protena se forma siguiendo las instrucciones contenidas en el cido nucleico,
el material gentico de la clula. Estas instrucciones son las que determinan cules de los veinte
-aminocidos se incorporan a la protena, y en qu orden relativo o secuencia lo hacen. Los grupos R
de los diferentes aminocidos establecen la forma final de la protena y sus propiedades qumicas.
La mayora de las plantas y microorganismos son capaces de utilizar compuestos inorgnicos para
obtener todos los aminocidos necesarios en su crecimiento, pero los animales necesitan conseguir
algunos de los -aminocidos a travs de su dieta. A estos aminocidos se les llama esenciales, y en el
ser humano son: lisina, triptfano, valina, histidina, leucina, isoleucina, fenilalanina, treotina, metionina y
arginina.
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Clasificacin Estructural.
El nivel ms bsico de estructura proteica, llamado estructura primaria, es la secuencia lineal de
aminocidos que est determinada, a su vez, por el orden de los nucletidos en el ADN o en el ARN. Las
diferentes secuencias de aminocidos a lo largo de la cadena afectan de distintas formas a la estructura
de la molcula de protena. Fuerzas como los enlaces de hidrgeno, los puentes disulfuro, la atraccin
entre cargas positivas y negativas, y los enlaces hidrfobos (repelentes del agua) e hidrfilos (afines al
agua) hacen que la molcula se arrolle o pliegue y adopte una estructura secundaria; un ejemplo es la
llamada hlice . Cuando las fuerzas provocan que la molcula se vuelva todava ms compacta, como
ocurre en las protenas globulares, se constituye una estructura terciaria donde la secuencia de
aminocidos adquiere una conformacin tridimensional. Se dice que la molcula tiene estructura
cuaternaria cuando est formada por ms de una cadena polipeptdica, como ocurre en la hemoglobina y
en algunas enzimas. Determinados factores mecnicos (agitacin), fsicos (aumento de temperatura) o
qumicos (presencia en el medio de alcohol, acetona, urea, detergentes o valores extremos de pH)
provocan la desnaturalizacin de la protena, es decir, la prdida de su estructura tridimensional; las
protenas se despliegan y pierden su actividad biolgica.
Sistema Inmunolgico.
Tambin llamado sistema inmune, es el sistema corporal cuya funcin primordial consiste en destruir
los agentes patgenos que encuentra en el organismo. Cualquier agente considerado extrao por un
sistema inmunolgico se denomina antgeno.
Como primera barrera inmunitaria inespecfica (no es contra un agente determinado sino contra
cualquier patgeno) tenemos la piel, las mucosas y las lisozimas (enzimas de accin anti-microbiana,
principalmente frente a bacterias no patgenas).
La segunda barrera, tambin inespecfica, estara constituida por los granulocitos, los macrfagos
(monocitos) y los neutrfilos.
Los granulocitos son las clulas con ncleo ms abundantes en la sangre. Estas clulas fagocitan
(ingieren) los antgenos que penetran en el cuerpo, sobre todo si estos antgenos han sido recubiertos en
la sangre por inmunoglobulinas
Los monocitos constituyen un pequeo porcentaje de la totalidad de las clulas sanguneas; cuando
se encuentran localizados en los tejidos, fuera de la circulacin sangunea, experimentan cambios fsicos
y morfolgicos, y reciben el nombre de macrfagos. Al igual que los granulocitos, los monocitos tambin
ingieren sustancias extraas, interaccionan con las inmunoglobulinas y con las protenas del
complemento, y contienen enzimas potentes dentro de su citoplasma. Sin embargo, los monocitos
alteran adems los antgenos, haciendo que la respuesta inmune del tercer tipo de clulas
inmunolgicas, los linfocitos, sea ms fcil y ms eficaz.
En algunos aspectos, los linfocitos, la tercera barrera inmunolgica pero de carcter especfico, son
las clulas ms importantes del sistema inmunolgico. Existen dos tipos principales de linfocitos: los
linfocitos B (maduran en el baso del feto) y los linfocitos T (maduran en el timo del feto). Los primeros
son responsables de la inmunidad humoral o serolgica; es decir, los linfocitos B y sus descendientes
directos, que reciben el nombre de clulas plasmticas, son las clulas responsables de la produccin de
unos componentes del suero de la sangre, denominados inmunoglobulinas. Los linfocitos T son
responsables de la inmunidad celular; es decir, atacan y destruyen directamente a los antgenos. Estas
clulas tambin amplifican o suprimen la respuesta inmunolgica global, regulando a los otros
componentes del sistema inmunolgico. Los linfocitos T constituyen el 70% de todos los linfocitos.
Tanto los linfocitos T como los linfocitos B tienen la capacidad de recordar, desde el punto de vista
bioqumico, una exposicin previa a un antgeno especfico, de manera que si la exposicin es repetida
puede producirse una destruccin ms eficaz del antgeno.
Adems de estos componentes celulares, el sistema inmune est formado por tres (3) tipos de
protenas que se encuentran disueltas en el suero (la porcin lquida de la sangre), y son las
inmunoglobulinas, las citoquinas y las protenas del complemento.
Hay miles de clases diferentes de inmunoglobulinas, que reciben el nombre de anticuerpos; cada una
de ellas se combina de manera exacta con un tipo especfico de antgeno y contribuye a su eliminacin.
Esta inmensa diversidad es la caracterstica principal del sistema inmunolgico en conjunto. Las cinco
clases conocidas de anticuerpos se distinguen por las letras M, G, E, A, y D, precedidas todas por la
abreviatura Ig de inmunoglobulina.
La IgE se asocia con alergias. La IgA se encuentra en la saliva y la leche materna. El papel que
desempea la IgD es desconocido.
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La inmunoglobulina G es el anticuerpo que predomina en el suero, y se produce principalmente

cuando hay una segunda exposicin a un antgeno. Esta compuesta por dos (2) cadenas pesadas y
dos (2) livianas (por el nmero de aminocidos que las componen), unidas entre s por puentes
disulfuro.
La IgM es el primer anticuerpo elaborado por los recin nacidos y el primero que aparece durante una
infeccin. Por su tamao y polivalencia, es significativamente ms eficiente que la IgG para formar
empalmes intercelulares y vencer la repulsin entre glbulos determinada por la carga negativa conferida
a la membrana por los residuos de cido slico de la misma, importante esto para la investigacin de
aglutingenos y aglutininas.
Cuando una anticuerpo reacciona y se une a un antgeno invasor, la reaccin es del tipo llavecerradura: las uniones que se dan son del tipo intermolecular de Van der Waals (dbiles)
Inmunoglobulinas G y M respectivamente
Ensayos Preliminares Presuntivos

Estos exmenes, tambin llamados de screening, sirven como ensayos de orientacin y requieren
confirmacin a travs de mtodos que certifiquen la presencia de sangre.
Todos se basan en la capacidad potencial que posee el grupo hemo de la hemoglobina de ejercer
actividad peroxidasa. Aportando al sistema reaccionante agua oxigenada (perxido de hidrgeno), el
hemo induce desprendimiento de oxgeno por descomposicin del perxido, el cual acta sobre un
sustrato orgnico reducido (bencidina, fenolftalena, luminol, etc.) transformndolo en su forma oxidada
cromtica.
Grupo Hemo de la Hemoglobina
El ensayo de fenolftalena es el utilizado en la direccin criminalstica local, por su eficiencia y

costo. La fenolftalena no es soluble en agua, con lo que normalmente se disuelve en alcohol para su uso
en experimentos.
Molcula de Fenolftalena
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Es un acido dbil que pierde cationes en solucin. La molcula de fenolftalena es incolora, en

cambio el anin derivado es de color rosa. Cuando se agrega una base, la fenolftalena pierde cationes
formndose la fenolftalina y haciendo que tome coloracin rosa. Es decir, la fenolftalena es un indicador
de pH que en soluciones cidas permanece incoloro, pero en presencia de bases se torna rosa o violeta.
El ensayo es el siguiente: en un matraz se colocan 20 gr. de hidrxido de potasio 4N; 2 gr. de polvo
de fenolftalena y 20 gr. de zinc en polvo. Una vez hecho esto, se tapa y se coloca un tubo de reflujo. La
sustancia es blanca-rosada; tras la operacin debe quedar incolora por reduccin de la fenolftalena a
fenolftalina.
Luego, se filtra el polvo de zinc, quedando slo lquido, completando el volumen con etanol (solucin
hidro-alcohlica de fenolftalina): este es el reactivo conocido con el nombre de Kastle-Meyer.
En un tubo de ensayo se coloca un hilo de gasa embebido en la muestra de presunta sangre. Se le
aade solucin fisiolgica y 2-3 gotas del reactivo de Kastle-Meyer. Paralelamente se inicia un ensayo
blanco (sin sangre)
Posteriormente, se le agregan 2-3 gotas de agua oxigenada 10% v/v y se observa: si aparece color
rosa-violeta, presuntamente es sangre. Si contina incoloro, es negativo absoluto.
El ensayo que utiliza el reactivo de Adler recurre a la solucin de Bencidina en medio actico
etlico. Se realiza agregando 0,5 ml del reactivo sobre 1-2 hilos impregnados de la muestra colocados en
un tubo de ensayo. Tras el agregado de 2-3 gotas de agua oxigenada, y en presencia de sangre, el
contenido del tubo vira al azul verdoso, por formacin de azul de bencidina. El uso de este reactivo est
casi totalmente descartado debido a sus caractersticas cancergenas.
El Luminol, un derivado del cido ftlico (3-aminonaftilhidracina), es un slido verdoso poco
soluble. Su mayor importancia reside en la reaccin de quimo-luminiscencia que da con perxidos en
presencia de complejos de hierro como catalizadores.
Es una prueba muy popular usada para la visualizacin de manchas tan diluidas que son invisibles al
ojo desnudo. Esta pericia es altamente sensible a la presencia de manchas que han sido limpiadas.
Tambin se emplea para visualizar huellas sanguinolentas de zapatos dejadas en la escena del delito.
Este popular producto puede ser preparado en laboratorio bien adquirido en su preparacin
comercial. La primera posibilidad presenta la dificultad de ser difcil de preparar y estabilizar, por lo que
normalmente se adquiere comercialmente. En cualquiera de los casos, el Luminol se aplica por
aspersin sobre la zona donde se cree puede existir un rastro de sangre, de donde viene su principal
ventaja: se puede aplicar en extensas superficies, detectando sangre hasta a nivel de trazas.
Diagnstico Diferencial de la Especie
Reaccin de Inmunoprecipitacin, Inmunodifusin u Test de Ouchterlony. Un animal contiene y puede
tolerar slo un tipo de protena. Si se le inyectan protenas de otra especie, como la humana, se pone en
accin un mecanismo de respuesta inmunolgica: genera anticuerpos especficos que se unirn a las
protenas extraas, dando como resultado macro-complejos en forma de redes tridimensionales. De este
modo se generan conglomerados de alto peso molecular que decantan de la suspensin.
En la prctica se inyecta un animal, generalmente un conejo, suero humano empleando tcnicas

apropiadas de inmunizacin. Cuando el conejo haya formado suficiente cantidad de anticuerpos contra
las protenas inyectadas se procede al sangrado, separacin del suero animal y convertido en antisuero
contra la especie particular cuyo suero sanguneo se utiliz en la inyeccin.
El ensayo se lleva a cabo en un medio geloso, utilizando gel de agar (derivado de protenas que tiene
la capacidad de absorber agua). Se utiliza esta tcnica porque no consume mucha muestra en su
realizacin. Se basa en la bsqueda de protenas humanas especficas.
Adems, el mtodo es reproducible (por su estandarizacin); fcil operatoria; confiabilidad (a pesar
de tener falsos positivos y negativos, ya que estos son conocidos y previsibles la medidas a tener en
cuenta); el equipo de laboratorio necesario no es complejo.
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El agar es un medio semislido y en el mismo pueden difundir determinadas molculas. Al encontrase

antgenos con anticuerpos, se produce lo que se denomina reaccin primaria de interaccin, y
evoluciona a una secundaria de precipitacin por formacin de las mallas tridimensionales
mencionadas. La orientacin de la precipitacin, en este test, no est dirigida, se hace libremente.
Se utilizan porta-objetos limpios y desengrasados con una mezcla de etanol y ter. Tambin se
requieren: micro-pipetas; sacabocados; jeringas de Hamilton; solucin de cloruro de sodio al 0,8 %
(solucin fisiolgica); suero plasma testigo (control positivo) y suero plasma testigo de animales
(control negativo).
Para el ensayo se requiere que la muestra est disuelta en solucin fisiolgica, por lo que si la misma
est en una gasa ya seca, se debe macerar en la solucin salina y obtener el sobre-nadante, previa
centrifugacin del macerado.
Se disuelve en un recipiente el agar al 1% en solucin fisiolgica, esto es, 1 gr. de agar por cada 100
ml. de cloruro de sodio. Se coloca a bao mara y se deja hasta que se vuelva transparente. Se toman
luego 2 ml. del gel con una micro-pipeta y se deposita sobre el porta-objetos limpio y nivelado (para que
la pelcula formada sea homognea) Por encima de esta, se coloca papel de filtro para deshidratar
parcialmente la superficie. Posteriormente, se coloca otra capa de gel sobre la ya existente y se deja
secar hasta la solidificacin (el agar se torna opaco)
Luego, se practican sobre el gel cinco (5) perforaciones con el sacabocados, dejando una distribucin
entre los orificios de unos 5 mm. En el centro, se deposita, con la jeringa de Hamilton, el anti-suero;
arriba y abajo, los testigos humanos conocidos; a izquierda y derecha, las muestras.
Se incuba en una caja de Petri; dentro de la misma, adems, se debe colocar un algodn embebido
en agua (cmara hmeda) para que no se deshidrate el agar, se tapa y se coloca a 37-40C. El tiempo
estimado de incubacin es de unas 2-2 horas.
Pasado ese tiempo ser visible la difusin, que se produce en forma radial.
Si la muestra es humana, se observarn cuatro (4) arcos de precipitacin, evidenciando las
reacciones antgeno-anticuerpo y de precipitacin (a); si las muestras no son humanas, slo aparecen
arcos en los testigos (b), salvo algunos casos, como los equinos y los primates, pero en esos supuestos
los arcos no se intersecan (c).
Mtodo Electrofortico. Se intenta movilizar una ms especies orgnicas cargadas a travs de un

soporte mediante la aplicacin de un campo elctrico externo.
Como ya se vio, toda protena contiene grupos cidos y bsicos y su carga efectiva estar
condicionada por el pH de la solucin que las contiene. Entonces, la movilidad bajo accin de un campo
elctrico es directamente proporcional a esta carga, o sea, que indirectamente ser funcin del pH
seleccionado.
Para mantener el pH seleccionado en un valor constante se utilizan soluciones buffer. La
electroforesis se realiza en medio geloso.
Se siembra la incgnita y el anti-suero en pocillos sobre una misma lnea orientada en la direccin de
circulacin de corriente y se aplica una diferencia de potencial.
Los cationes presentes en la fase lquida constituyente del gel generan un flujo electroendosmtico
hacia el ctodo a travs del soporte. Al pH de trabajo (8,6) las protenas sricas se cargan
negativamente.
Las muestras objeto de ensayo se ubican en pocillos prximos al ctodo y el antisuero en el lado
correspondiente al nodo.
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Aplicando el campo elctrico, el movimiento de los reactantes es la resultante del concurso de las
fuerzas ejercidos por el flujo electroendosmtico que arrastra las molculas del antisuero, constituidas
predominantemente por fraccin gamma (hacia el ctodo -negativo-), mientras que las fracciones
constitutivas del antgeno (muestras) son llevadas en el sentido de circulacin de corriente (hacia el
nodo -positivo-).
El sector entre las cubetas en el que las especies reaccionantes contacten en proporciones
equivalentes evidenciar la presencia de las bandas de precipitacin caractersticas.
Mtodo de Inmunocromatografa: tiene un parmetro de deteccin de la hemoglobina entre
140-500 ng./ml., por lo tanto las muestras para este ensayo deben estar diluidas adecuadamente.
El procedimiento es el siguiente: se colocan por la ventana 4 a 5 gotas de muestra (unos 10L) con
micropipeta. Al transcurrir la reaccin, el frente cromatogrfico avanza en direccin a la ventana C. La
lectura de resultados debe hacerse a los 10-15 minutos de depositar la muestra Si aparecen dos (2)
lneas (en C y T) el anlisis es positivo para sangre.
Este examen se basa en la deteccin de la hemoglobina de la sangre utilizando un anti-suero
especfico, sembrado en la membrana de nitrocelulosa en esa zona (T).
Hemotipificacin. Grupo Sanguneo
El grupo sanguneo es un sistema de clasificacin de la sangre humana basado en los componentes
antignicos de los glbulos rojos. El ms importante de los diversos sistemas de clasificacin de la
sangre es el del grupo sanguneo ABO. Los cuatro tipos sanguneos que se contemplan en esta
clasificacin son el A, el B, el AB y el O.
Esta se basa en la presencia en los glbulos rojos de ciertos antgenos naturales, denominados
aglutingenos A y B, y de la presencia, adems, de ciertos anticuerpos aglutininas especficos de cada
antgeno. Cuando uno de estos aglutingenos est ausente en los glbulos rojos de una persona, su
correspondiente aglutinina est presente en el suero.
Las clulas sanguneas del grupo A tienen el antgeno A en su superficie. Adems, la sangre de este
grupo contiene anticuerpos contra el antgeno B presente en las clulas rojas de la sangre del grupo B.
La sangre de este ltimo grupo tiene la composicin inversa al grupo A. En el suero del grupo AB no
existe ninguno de los dos anticuerpos previos, y los glbulos rojos contienen los antgenos hbridos A-B.
El grupo O carece de estos antgenos en los eritrocitos, pero este suero es capaz de producir
anticuerpos contra los hemates que los contengan. Si se transfunde sangre del grupo A a una persona
del grupo B, los anticuerpos anti-A del receptor destruirn los glbulos rojos de la sangre transfundida.
Como los eritrocitos de la sangre del grupo O no contienen ningn antgeno en su superficie, la sangre
de este grupo puede ser empleada con xito en cualquier receptor. Las personas del grupo AB no
producen anticuerpos, y pueden por tanto recibir transfusiones de cualquiera de los cuatro grupos. As,
los grupos O y AB se denominan donante universal y receptor universal respectivamente.
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La especifidad antignica est determinada por el monosacrido terminal reducido de la cadena. Ese
azcar inmuno-dominante ser el mayor punto de contacto con el sitio de combinacin de la aglutinina
correspondiente.
Es decir, el espectro antignico presente en la membrana del eritrocito maduro determina un

poliformismo significativo entre individuos; la existencia de estos haloantgenos hace permisiva la
tipificacin serolgica de una muestra de sangre.
Las muestras de sangre en las que los eritrocitos mantienen su integridad de membrana se estudian
por pruebas directas.
Si la muestra est deshidratada, con visible desorganizacin de la membrana globular, la
hemotipificacin es indirecta, por cuanto la evidencia del antgeno presente en los fragmentos de
membrana se logra con el auxilio de paneles de glbulos rojos intactos de grupos conocidos.
Mtodo Directo por Reaccin de Aglutinacin. En sangre fresca la presencia ausencia de un
antgeno se determina por la aglutinacin no de los glbulos rojos puestos en contacto con un
antisuero especfico. Los complejos formados son de mayor tamao que en la reaccin de precipitacin y
el resultado puede ser visualizado a simple vista.
Para la hemotipificacin, partimos del supuesto de que existen glbulos enteros en la muestra, es
decir, que la muestra es fresca. Se coloca en un porta-objeto una gota de sangre y una de solucin
fisiolgica. Se mezclan y se observan a 10x de aumento. En el campo del micro se ven pequeos
glbulos rojos. Se agrega el antisuero a tres (3) muestras, una por cada grupo (anti-A, anti-B y anti-H) y
se observa la aparicin de la aglutinacin mencionada.
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Sistema Rhesus. Para la determinacin del Factor Rh se procede de forma similar, utilizando el
antisuero anti-D. A diferencia del sistema ABO y algunos otros, los antgenos del sistema Rhesus
estn confinados en la superficie del hemate.
Se conocen tres nomenclaturas para los factores integrantes de este sistema. Actualmente se postula
que la presencia de los antgenos Rh est determinada por un complejo conformado por dos genes
estrechamente relacionados. Mientras que los estudios bioqumicos revelan la presencia de los factores
D, C/c y E/e en por lo menos tres diferentes polipptidos, los estudios moleculares slo revelan dos
genes estructurales: RhD y RhCE. Los sujetos Rh(+) son portadores de ambos genes mientras que los
Rh(-) slo poseen el RhCE.
El factor D es marcadamente ms inmunognico que los otros, por tal motivo, al tipificar, se evala la
presencia ausencia de este factor, clasificando al sujeto como Rh(+) Rh(-).
Mtodo Indirecto: Mtodo de Absorcin-Elusin. Se conoce con este nombre en referencia a los dos
procesos sustanciales que se ponen en juego durante la prueba, esto es, la absorcin de los anticuerpos
componentes de los hemoclasificadores por parte de los determinantes antignicos de grupos retenidos
en hilos de gasa y su elusin posterior por accin del calor.
Etapa 1. Absorcin del material celular residual sobre hilos de gasa embebidos en solucin fisiolgica
(en el caso de material seco en otros soportes: se diluye la muestra en algunas gotas de solucin salina.
En caso de tener trozos de gasa hilos provenientes del lugar del hecho, el ensayo se hace con ellos)
Los hilos, para realizar este ensayo, deben presenta coloracin tras la impregnacin en la muestra.
Etapa 2. Se contactan los hilos manchados, en pocillos separados de una placa de toque de
porcelana, con los hemoclasificadores especificad anti-A, anti-B y anti-H.
En la primer fila se colocan hilos testigos embebidos con sangre tipo A; en la segunda, B, en la
tercera, O y en la ltima, las muestras a examinar.
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Una vez hecho esto, la placa se deja a temperatura ambiente para que seque (slo aire, no calor).
Luego, se agregan 2-3 gotas de los antisueros: en la primer hilera, anti-A; en la segunda, anti-B y en la
ltima, anti-H. Se debe embeber completamente el hilo.
Se deja reaccionar 24 horas a 6-8 C (heladera): los anticuerpos se unen a los antgenos presentes
en los restos de pared celular que se hallan fijados en los hilos.
Etapa 3. Se eliminan, con dos (2) lavados repetidos con solucin fisiolgica, los anticuerpos que no
hayan presentado interaccin con el material de los hilos.
Para ello se colocan en una caja de Petri los hilos correspondientes a la primera hilera (anti-A), en
otra, los de la segunda (anti-B) y en otra los de la tercera hilera (anti-H), respetando el orden de las filas.
En las mismas cajas, se coloca solucin salina al 0,8% y se lavan durante 30 minutos. Esta operacin se
repita al transcurrir el tiempo.
Etapa 4. Se eluyen por calor los anticuerpos fijados por los aglutingenos de los hilos y,
simultneamente, se plantea un sistema reaccionante donde uno de los reactantes ser la Ig M eluda y
el otro un panel de glbulos rojos que presenta el hemoaglutingeno correspondiente. Esos glbulos
rojos se obtendrn de muestras de sangre fresca tipificadas previamente segn el sistema ABO.
Para llevar a cabo esto, a los hilos previamente escurridos se los coloca sobre una placa de toque de
porcelana limpia, respetando el orden que posean. Paralelo a esto, se prepara una suspensin de
glbulos rojos: se carga en un tubo de centrfuga 2-3 ml de sangre fresca de grupo conocido
anticoagulada. Se lleva a 10 ml con solucin fisiolgica y se mezcla suavemente. Se centrifuga por 10
minutos a 1500 rpm (baja velocidad); se elimina el sobrenadante con pipeta y propipeta, etc. en la forma
ms completa posible. Se repite el proceso 3 veces. Luego, resuspender el paquete de glbulos rojos
lavados en 1-2 ml de fisiolgica.
Sobre los hilos que estuvieron en contacto con antisuero anti-A, se descargan 4-5 gotas de
suspensin de glbulos rojos A. Lo mismo con los anti-B (GRB) y con los anti-H (GR0)
Luego, las placas se disponen en cmara hmeda, a 50-55 C durante 15-20 minutos. Transcurrido
este tiempo, se retiran y se agitan en agitador orbital, a bajas revoluciones, por 20-30 minutos.
Etapa 5. Evidenciacin de la presencia ausencia de fenmenos de aglutinacin por microscopa
ptica (10 x), comenzando con los controles, por cuanto si no se obtienen los resultados lgicos con
stos, el ensayo debe ser descartado y repetido en su totalidad.
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UADER
UNIDAD II: MANCHAS DE SEMEN

Llmese semen, esperma o lquido seminal, al producto de secrecin del aparato genital masculino,
que aparece en el hombre despus de la madurez sexual.
Los materiales que con ms frecuencia se remiten al laboratorio, en busca de manchas
seminales, son: las prendas de vestir de la vctima, del acusado, o sospechoso, hisopos o lquidos de lavado
vaginal, o exudados diversos (vaginal, rectal). Cuando se requiere concurrir al lugar del hecho, se busca
rastros, adems, en muebles, alfombras, pisos, etc.
Aparato Genital Masculino
El aparato genital masculino est compuesto por un conjunto de glndulas y conductos, a los que
corresponde la funcin de elaborar el esperma y conducirlo a la bolsa copulatriz de la mujer. Las glndulas
fundamentales son los testculos, a cuyo producto de secrecin se suma el de otras glndulas
anexas (las vesculas seminales, la prstata y las glndulas de Cowper). Los conductos o vas
excretoras son: los epiddimos, los conductos deferentes, el conducto eyaculador y la uretra o conducto
urogenital.
Todas las glndulas y conductos mencionados son pares, a excepcin de la prstata y la
uretra. La uretra es un conducto largo que va desde el cuello de la vejiga urinaria hasta la
extremidad libre del pene. En su primera porcin pasa solamente orina, pero luego tambin conduce el
semen.
Los testculos, o glndulas seminales, producen el componente esencial del semen: los
espermatozoides. Las vesculas seminales, son reservorios del esperma y elaboran un lquido que:
favorece el funcionamiento del espermatozoide, diluye el esperma, favorece la circulacin, provee las
necesidades nutritivas y aumenta la vitalidad de dichas clulas (prueba de ello es que el
espermatozoide puede sobrevivir al individuo).
El contenido de las vesculas seminales es semilquido, algo grumoso o con consistencia de
jalea. Contiene, adems de los espermatozoides, otros elementos figurados, tales como grnulos de
hemoglobina, leucocitos aislados o agrupados, granulaciones de grasa, etc. El lquido segregado por las
vesculas seminales presenta color blanquecino-amarillento hasta grisceo; pH 7.3; componentes minerales
(potasio, fosfatos, cloruros); y componentes orgnicos (protenas, fructuosa, cido ascrbico, colina).
La colina es una base orgnica constitutiva de la lecitina, presente en todas las
clulas. Interviene en el transporte de los lpidos y en su metabolismo, formando los
fosfolpidos.
COLINA (Hidrxido de trimetil-hidroxi-etil amonio)
La enzima fosfatasa acida interviene en la formacin de la colina de las vesculas seminales, ya que
aquella se forma a partir de la fosforil colina por accin de dicha enzima.
El Semen
El semen, esperma o lquido seminal, presenta aspecto lechoso, opalescente, a veces ligeramente
amarillento, de olor sui generis. Contiene los espermatozoides en suspensin, los que pueden ser
separados por centrifugacin, obtenindose el plasma seminal, el cual presenta un pH entre 7,2 a 7,3.
El plasma seminal contiene una elevada proporcin de sustancias fosfatadas. Entre estas se encuentra el
difosfato de espermina: C10H26N4H3 2PO4H3 6H2O
La frmula de la espermina bsica es:
NH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2-CH2-CH2-CH2-NH2
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UADER
Se admite que la espermina se origina primitivamente en la prstata y que el fosfato se forma al

mezclarse el semen con la secrecin prosttica.
El semen no contiene hormonas sexuales. El producto de una eyaculacin normal oscila entre 1,5 y 6 ml.
Llmese hipospermia cuando el volumen es inferior a 1,5 ml y aspermia a la falta de semen.
El esperma no es emitido en forma homognea, sino que comprende tres porciones de distinta
composicin: en primer trmino, el producto de la glndulas de Cowper (pH=8,4) que neutraliza la
acidez de la uretra; luego la fraccin prosttica; y finalmente, los espermatozoides junto con el lquido
segregado por la vesculas seminales. Este hecho revista gran importancia pericial, ya que al examinar
una mancha de semen, es probable no hallar espermatozoides, pero mediante diversas tcnicas se
puede determinar la presencia de otros componentes del mismo.
Los Espermatozoides
El espermatozoide constituye una clula mvil que consta de ncleo o cabeza, cuello, cuerpo y cola. Se
desarrollan en los tubos seminferos que constituyen la unidad estructural testicular.
Se calcula que en el producto de una eyaculacin normal existen unos 60 millones de
espermatozoides por ml de semen. Cuando tal concentracin se halla disminuida, se habla de
oligozoospermia. Cuando el esperma no contiene espermatozoides se califica como azoospermia.
Un espermatozoide humano normal posee una longitud
total que oscila entre 40 y 50 micrones.
La cabeza, vista de frente, es oval; vista de perfil, es
aguzada (piriforme). En ella se distinguen una parte anterior
(acrosoma) y otra posterior (ncleo). La casi totalidad se halla
cubierta por una tenue membrana, la galea capitis. El
acrosoma tiene la funcin de lograr la penetracin del
espermatozoide en el vulo.
El segmento intermedio o cuerpo, es cilindrico y
contiene la mayor parte del citoplasma, el cual recubre dos
filamentos, uno axial y el otro espiral, formado
especialmente por mitocondrias.
Mitocondrias: cuerpos esfricos asociados a clulas,
que constituyen asientos de enzimas oxidativas. Son
responsables de la actividad respiratoria celular, que produce la
liberacin de energa necesaria para el protoplasma.
La cola es el elemento de locomocin y est constituida
por una vaina cito-plasmtica que envuelve el filamento axil,
que parte del corpsculo posterior del cuello. Mediante
movimientos ondulatorios tipo anguila, permite la movilidad
del espermatozoide, que constituyen movimientos de
traslacin rpidos, que indican su viabilidad.
La movilidad del espermatozoide se mantiene hasta unas 30 horas despus de la eyaculacin, por
lo que es frecuente, en casos de ataques sexuales, donde la toma de muestra ha sido inmediata, que si se
agrega una gota de solucin fisiolgica al extendido vaginal en portaobjetos, se pueda observar an dicha
movilidad.
En el semen existen tambin otros elementos figurados, constituidos por clulas epiteliales de las
vas urinarias, pero difcilmente se puedan diferenciar de las propias clulas epiteliales vaginales de la
vctima. Tambin se pueden observar glbulos rojos y blancos, bacterias, piocitos y microorganismos.
Anlisis Pericial de Semen
Los estudios se realizan sobre diversos medios o materiales, por lo que para asegurar su hallazgo, se
detallan las operaciones a realizar para cada tipo de muestra.
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UADER
a)
La vctima: para comprobar la presencia de semen en la vctima de violacin, la toma
de muestra la realiza exclusivamente el mdico, ya que requiere la colocacin de un espculo
para asegurar la toma del fondo del saco vaginal, donde el material seminal queda retenido, an
cuando la vctima se halla higienizado luego del hecho.
Con un hisopo de algodn se toma la muestra del saco vaginal y se realiza el extendido sobre
un portaobjetos, el que ser tapado con un cubreobjeto y convenientemente unidos los mismos con
cinta engomada. No se debe colocar ningn lquido de conservacin, sino mantener en fro de heladera. El
hisopo, luego del extendido, deber ser colocado en un tubo con cierre hermtico, sin ningn
conservante, y reservado en freezer para permitir el anlisis de la fosfatasa acida prosttica. En caso de
violacin por va anal el procesamiento del hisopo es idntico.
b)
Soportes absorbentes: normalmente en los delitos sexuales se secuestran prendas
interiores, toallitas higinicas femeninas, sbanas, toallas, pauelos o trapos, papeles, etc., que puedan
contener semen.
En superficies absorbentes, la mancha queda apergaminada y de color blanca amarillenta cuando
es fresca; o blanca griscea cuando es ms vieja (ms de una semana). Cuando se deben examinar
muchos materiales o extensas superficies es til la observacin con luz UV. Bajo la radiacin ultravioleta,
las manchas de semen presentan una fluorescencia de color amarillo verdoso, que no es especfica,
porque otros materiales producen similar efecto. Asimismo se debe tener en cuenta los compuestos
fluorescentes de las telas (blancos pticos) los que dificultan la tarea.
Tambin se aconseja examinar el material sospechoso, primero por su fluorescencia y luego por su
fosforescencia. La fosforescencia consiste en la emisin de luz que persiste luego de cesada la fuente de
excitacin, mientras que fluorescencia es la emisin de luz que decae inmediatamente de suprimida dicha
fuente.
Bajo examen directo con luz ultravioleta "corta" (254 nm de longitud de onda) a temperatura
ambiente aparece la fluorescencia caracterstica. Bajo examen con luz ultravioleta previa refrigeracin con
nitrgeno a su temperatura de ebullicin (-195C), (tambin se logra observacin satisfactoria con la
colocacin de un bloque de hielo seco, la fosforescencia de las manchas de semen persiste unos 20
segundos despus de retirar la fuente. La fosforescencia es independiente de la presencia de
espermatozoides.
Los elementos absorbentes sospechosos de contener manchas de semen, deben ser secados al aire
antes de su embalaje para la remisin, ya que la humedad favorece el ataque por hongos. Dada la fragilidad
del espermatozoide, el personal del laboratorio proceder a extraer la muestra del soporte en forma muy
delicada, sumergiendo el mismo o la parte manchada, en solucin fisiolgica en cantidad suficiente para
cubrir la mancha, en una caja de Petri y colocar en heladera durante 24 horas, para que la mancha se vaya
desprendiendo en forma lenta y suave, y todo el contenido quede en suspensin.
c) Soportes no absorbentes: la mancha de semen sobre soportes no absorbente, una vez seca deja
un depsito caracterstico, constituido por una pelcula o escamas brillosas (costras). En caso de elementos
como el piso, artefactos de bao, maderas de la cama, etc., los cuales no pueden ser remitidos; colocar un
trocito de gasa sobre la mancha, agregar con gotero solucin fisiolgica, presionar suavemente con la pinza
y continuar agregando solucin fisiolgica, hasta lograr la disolucin de la mancha y su adhesin a la gasa,
sin frotar ni ejercer presin sobre ella, a fin de preservar los elementos formes.
Completado el levantamiento, la gasa es colocada en un frasquito para su remisin. Tambin en caso
que la mancha se encuentre seca, puede ser raspada con un bistur y colocada en frascos, para ser luego
hidratada en el laboratorio.
Observacin Microscpica Directa
El reconocimiento de un espermatozoide en una mancha es prueba irrefutable de que la misma est
constituida, total o parcialmente, por semen. El espermatozoide debe estar completo, es decir cabeza y
cola. Siempre aparecen clulas epiteliales, del varn o la mujer. Si no est entero, se deben buscar indicios
para demostrar que es una mancha de semen.
El espermatozoide tiene movilidad por 24-30 horas. Un espermatozoide inmvil, en un ambiente seco y a
temperatura menor a 30 C, puede durar 100 das entero.
a) Anlisis en la vctima.
Arribado el extendido vaginal o anal al laboratorio, el perito observar en
forma directa bajo el microscopio, con objetivo de 40X, en busca de
espermatozoides. Colocar el cubreobjeto sobre el extendido e hidratar por
capilaridad con solucin fisiolgica.
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UADER
Tipos de extendido:
Hisopo:
Para realizar el examen del portaobjeto con el microscopio, se debe barrer toda la superficie del mismo
en forma vertical u horizontal, a fin de hallar un espermatozoide entero, que permita afirmar un resultado
positivo.
En caso de no hallarse clulas espermticas, queda el recurso de trabajar con el hisopo. Debido a que la
ausencia de espermatozoides no siempre permite asegurar un anlisis negativo, ya que los mismo se puede
haber roto en la manipulacin, o puede ser un individuo asprmico u oligosprmico, o bien vasectomizado.
Retirar un pedacito de muestra del hisopo, y realizar el mismo procedimiento que en el caso de prendas.
Tal determinacin es cualitativa, ya que no se puede expresar concentracin de la enzima.
b)
En soportes absorbentes.
En el caso de las prendas, que como se indicara fueron colocadas en caja de Petri con solucin fisiolgica
para el desprendimiento de la mancha, el procedimiento es:
1. Cortar un pedacito de tela donde est la mancha.
2. Colocar el recorte en un tubo de ensayo y se agrega solucin fisiolgica.
3. Agitar suavemente y retirar el trozo de tela con pinza, escurriendo.
4. Centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos.
5. Retirar el lquido y pasar el sedimento al portaobjeto.
6. Observar al microscopio (40X) si hay espermatozoide entero.
c)
En soportes no absorbentes.
En caso de haber tomado la muestra sobre un soporte no absorbente mediante trocitos de gasa
embebidos en solucin fisiolgica, estos recortes sern tratados de igual manera que en prendas.
Observacin Microscpica Previa Coloracin
La tincin de las partes de un espermatozoide con distintos colores, permite su diferenciacin en la
observacin microscpica y poder diferenciarlos de otras clulas. Los preparados obtenidos sobre
portaobjeto, para que puedan ser coloreados adecuadamente, se deben dejar secar a temperatura
ambiente, preservndolo del polvo atmosfrico, y luego fijado al calor. Para el fijado bastar con pasarlos
rpidamente sobre la llama de un mechero, tres o cuatro veces. Puede fijarse tambin por inmersin en
metanol o etanol (de 70 a 80) durante cinco minutos.
Colorante de Loeffler: se prepara mezclando 3 ml de solucin alcohlica saturada de azul de metileno,
con 10 ml de solucin acuosa de hidrxido de potasio al 0,01%.
Colorante del carbol - fucsina: es una mezcla de 9 ml de solucin acuosa de fenol al 5%, con 1 ml de
solucin alcohlica saturada de fucsina. Esta solucin madre se diluye con agua 1 a 5 (1 ml de solucin
madre con 5 ml de agua).
La tcnica de tincin para los colorantes de Loeffler y carbol-fucsina es sumamente simple: basta cubrir
el preparado, ya fijado, con el colorante, dejando actuar durante 1 a 10 minutos. Pasado ese tiempo, se
vuelca el exceso y se lava con abundante agua corriente.
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Colorante de May-Grunwald-Giemsa: se trata de una combinacin de las propiedades tintreas del

Azur II eosina y Azur II, que constituyen el Giemsa, con las del eosinato de azul de metileno, que compone
el May-Grunwald.
La tcnica es algo ms compleja, pero arroja mejores resultados, al incorporar un segundo colorante
que acta como tinte de contraste. Aplicar el May-Grunwald en la forma indicada para las coloraciones
antes descriptas; se agrega igual cantidad de agua destilada, que se mezcla con el colorante con un suave
movimiento de inclinacin del portaobjetos. Luego se vuelca, y sin lavar se cubre con el colorante Giemsa
durante 30 minutos. Luego se lava con abundante agua corriente.
En todos los casos conviene, luego de la coloracin, sumergir el preparado en alcohol absoluto, para su
deshidratacin. Si la preparacin no fuera suficientemente ntida, se aconseja sumergirla durante unos
minutos en xilol.
Mtodo Cromatogrfico: Colina y Espermina

Por medio de una investigacin cromatogrfica en papel o en capa delgada, es posible detectar
componentes normales del semen, como la colina y la espermina; cuando no ha sido posible visualizar
espermatozoides. Tal ensayo no es usado hoy en da. Asimismo no es categrico su resultado puesto que
tales sustancias no son especficas del semen.
Se consigna a continuacin el mtodo de Hessel y Medgalin, que realizan la investigacin de colina
y espermina, revelando, luego de la corrida cromatogrfica, con el reactivo de Dragendorff (para colina) y
con yodoplatinato de potasio (para espermina).
a) Si la mancha se encuentra sobre gasa o tela, se corta 1 cm 2 y se coloca en un tubo de ensayo con
0.5 mi de solucin 1 N de cido clorhdrico. Si el soporte es del tipo no absorbente, se raspa una superficie de
1 cm2 y se trata de la misma manera.
b) Se agita con varilla de vidrio para facilitar la disolucin y salificacin de las bases nitrogenadas a
investigar. Exprimir la tela para escurrir el lquido que la impregna y centrifugar.
c) Sembrar 20 micro litros del extracto obtenido y 10 micro litros de semen testigo o standard de colina
y espermina. Se utiliza placa de silicagel G de 0.25 mm de capa activada en estufa.
d) Se desarrolla el cromatograma, utilizando como fase mvil el cido clorhdrico 1 N. Se retira la placa y
se seca.
e) Se cubre el tercio superior de la corrida y se revela con el reactivo de Dragendorff. En caso de
resultado positivo para colina se obtendr una mcula de color rosado en Rf=0,5.
f) Se cubre la parte ya revelada, y se realiza la aspersin del resto con el reactivo de yodoplatinato.
En caso de espermina positiva, se obtendr una mcula color prpura en Rf= 0,85.
Cromatofolio
Lnea de Siembra
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Reactivos:
- Acido clorhdrico 1 N: 10 mi de C1H concentrado se diluyen con 100 mi de agua destilada.
- Colina: 10 mg de clorhidrato de colina en 10 ml de agua destilada.
- Espermina: 1 mg de tetraclorhidrato de espermina con 1 mi de agua destilada.
- Semen: 1 mi de semen humano fresco con 4 mi de ClH 1 N.
- Dragendorff: Solucin A - 850 mg de subnitrato de bismuto; 10 mi de cido actico; 40 ml de agua.
Solucin B - 40 g de yoduro de potasio y 100 ml de agua. Se mezclan 5 mi de solucin A con 5 mi de B y se
diluyen con 100 mi de agua en que se habrn disuelto 20 ml de cido actico glacial.
- Yodoplatinato de potasio: 1 ml de solucin de cloruro de platino al 10% P/V; 25 mi de solucin de
yoduro de potasio al 4% P/V y 100 mi de agua.
Mtodo Enzimtico: Fosfatasa Acida
Llmese fosfatasa acida a cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgnico en medio cido. En
particular, se denomina fosfatasa acida prosttica a la existente en el plasma seminal, que produce la
hidrlisis de la fosforil colina en cido fosfrico y colina.
La fosfatasa acida se encuentra en sangre, semen, saliva, flujo vaginal, etc.; pero el nivel que existe en el
semen (origen prosttico) es muy concentrado.
Esta enzima acta a pH 5, aunque el mismo vara, de acuerdo con el ster fosfrico a hidrolizar, entre 4,5
y 5.
La mayora de los mtodos para la investigacin de la fosfatasa acida se basan en el uso de reacciones
cromticas. La determinacin de la accin hidroltica de la fosfatasa acida se puede llevar a cabo mediante la
deteccin del cido fosfrico o la sustancia orgnica (colina, fenoles, nitrofenoles, etc.), liberada por aquella.
Se entiende por copulacin a la reaccin entre una sal de diazonio (compuesto primario), con fenoles o
aminas (compuestos secundarios), para dar derivados azoicos fuertemente coloreados. Por lo tanto, si la
actividad de la fosfatasa acida se mide en base a una reaccin como sta, en la que se liberan productos
fenlicos, y si tal reaccin opera en presencia de un compuesto diazoico apropiado, se obtendr como
resultado final una coloracin que ser proporcional a aquella actividad.
El valor probatorio de la investigacin de las manchas de semen se vera atenuado, debido a que la
fosfatasa acida se encuentra en muchos medios orgnicos, pero para diferenciar la de origen prosttico del
resto, se demostr la existencia de un inhibidor de la fosfatasa acida prosttica por medio del cido L-tartrico.
Por lo que cualquier reaccin para la investigacin como las descriptas, no prosperara en presencia del tal
inhibidor.
cido L-Tartrico
Ensayo Kit Comercial

El mismo es rpido y sencillo. Para la muestra se utiliza el sobrenadante de la centrfuga. Para ello se
utilizan cuatro tubos de ensayo. A dos de ellos se le incorpora la muestra solamente, dejando un tubo con
agua. A continuacin se le introduce la solucin buffer a pH 5. Finalmente se agrega el inhibidor a solo dos de
ellos.
Luego incubar a 37 C durante media a una hora, dependiendo del kit. Cambio el pH con una solucin de
hidrxido de sodio (NaOH) a fin de detener la reaccin, debido a que la enzima solo trabaja a pH 5 que es el
ptimo. Se agrega el reactivo diazo compuesto a todos los tubos y se espera unos dos minutos.-
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Primer tubo: es el blanco del reactivo, resulta un color amarillo tenue debido al diazo y porque la solucin
buffer es incolora.
Segundo tubo: corresponde a fosfatasa acida de origen no prosttico, de color marrn oscuro y sirve de
comparacin con el tubo 3 ante la presencia de semen.
Tercer tubo: fosfatasa acida prosttica, indicadora de semen. De color amarillo claro, similar al tubo 1 .
Cuarto tubo: se corresponde con el blanco del individuo, y tiene un tenue color amarillo.
Protena p30 Antgeno Especifico Prosttico (PSA)
Todos los mtodos examinados hasta ahora, excepto la visualizacin clara de un espermatozoide, se
basan en la bsqueda de compuestos que no son especficos del semen (colina, espermina, fosfatasa acida).
Pero se realiz un importante avance en la bsqueda de un ensayo basado en la investigacin de un
componente especfico del plasma seminal: una protena que podra servir como marcador del mismo.
Se orient hacia una protena porque atendiendo a que la sntesis proteica est bajo directo control, tal
sustancia cumplira las bases biolgicas de especificidad para poder ser considerado como marcador.
La P30 es una protena nativa, vale decir, que existe como tal en el plasma seminal: no se trata de una
subunidad de otra protena de mayor peso molecular. Su denominacin corresponde a su peso molecular
(30). Mediante tcnicas inmunolgicas cuantitativas se encontr que el contenido de P30 en el semen
humano normal es de 1,92 mg/ml, con una variacin de 0,24 a 5,5 mg/ml. Este antgeno especfico prosttico
est presente tambin en sangre, leche materna, saliva, sangre menstrual, orina, y lquido vaginal; pero en
menos de 4 ng/ml.
En la mancha de semen, en el centro (la zona ms
hmeda) se encuentra alta concentracin de
espermatozoides; en cambio la protena se encuentra
en el exterior de la mancha.
La prueba comercial ABAcard P30 test esta diseada para la deteccin cualitativa de p30 en la
identificacin de semen. La protena P30 es un marcador aceptado para la deteccin de semen en casos
criminales incluyendo individuos vasectomizados o azoospermicos.
Para esta prueba el procedimiento es: 200 mL. de una muestra se agregan a la ventana s y se deja
filtrar. Si la P30 esta presente en el espcimen este reaccionar con el Ac. monoclonal antihumano P30 y se
forma un complejo visible. Esta reaccin anticuerpo-antgeno emigra a travs del dispositivo absorbente hacia
el rea de prueba t, donde se halla un anticuerpo monoclonal P30 antihumano. Este anticuerpo captura el
complejo antes mencionado para formar un nuevo complejo anticuerpoantigenoanticuerpo. Las partculas
coloreadas de rosa se acoplan en una zona angosta de la membrana. Cuando la concentracin de P30 en la
muestra exceda de 4 ng/ml las partculas color rosa formarn una banda en el rea de prueba t, indicando
as un resultado positivo de la prueba. Como un control positivo interno, la mancha del anticuerpo P30 no
ligada al anticuerpo en el rea de prueba t, ser capturada por el anticuerpo inmovilizado antiinmunoglobulina presente en el rea de control c formando un complejo. Las partculas capturadas de color
rosa formarn una banda en el rea de control indicando que la prueba funciona correctamente y que se ha
seguido el procedimiento adecuado.
As la presencia de dos lneas de color, una en el rea de prueba t y otra en el rea de control c
indicarn resultado positivo, mientras que una sola lnea en el rea c indicar un resultado negativo
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Semenogelina (Sg)
Las semenogelinas I y II son las principales protenas secretadas por la vescula seminal en el semen
humano. Ellas interaccionan no-covalentemente y vas puentes disulfuro para formar un cogulo luego de la
eyaculacin. Este se diluye pocos minutos despus debido a la accin de la protena srica prosttica (PSA),
la cual rompe la Sg en fragmentos.
Grupo Sanguneo en Manchas de Semen

Un alto porcentaje de individuos presenta antgenos del sistema ABO en otros lquidos biolgicos adems
de la sangre. Estos individuos se denominan secretores y constituyen aproximadamente el 80% de la
poblacin con grupos sanguneos distintos de 0.
Cuando se solicita la investigacin del grupo sanguneo en semen hallado en la vctima, como primera
medida determinar si la vctima y/o el supuesto autor se hallan dentro de este grupo (secretores), ya que si
ambos lo son se puede hallar el antgeno de la vctima en el semen, por lo que el anlisis es viable cuando
vctima y victimario de diferente grupo. Preferentemente vctima no secretora y victimario secretor.
Para realizar tal determinacin previa, se aconseja buscar los antgenos ABO en saliva, tomando muestra
de la mucosa bucal. Si la vctima es AB secretora, no se puede realizar el anlisis; si es O es posible. Si es
secretora A o B, pero diferente del victimario, el resultado es til.La determinacin se realiza por el mtodo de absorcin-elusin, siguiendo los mismos pasos que para el
anlisis de sangre.-
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UADER
UNIDAD III: ANLISIS DE ADN EN GENTICA FORENSE

Concepto de ADN
El cido Desoxirribonucleico es el material gentico de todos los organismos celulares y casi todos los
virus. Lleva la informacin necesaria para dirigir la sntesis de protenas y la replicacin.
-
Se llama sntesis de protenas a la produccin de las protenas que necesita la clula virus
para realizar sus actividades y desarrollarse.
La replicacin es el conjunto de reacciones por medio de las cuales el ADN se copia a si
mismo cada vez que una clula un virus se reproduce y transmite a la descendencia la
informacin de sntesis de protenas que contiene.
Estructura
Cada molcula de ADN est constituida por 2 cadenas bandas formadas por un elevado nmero de
compuestos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una especie de escalera en forma de caracol,
llamada doble hlice.
Cada nucletido est formado por 3 unidades: una molcula de azcar llamada desoxirribosa; un grupo
fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados: adenina y guanina (purinas); timina, citosina
(pirrimidinas)
La molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y est franqueada por un grupo fosfato de un
lado y una base del otro.
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UADER
El grupo fosfato est, a su vez, unido a la desoxirribosa del nucletido adyacente de la cadena. Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la hlice; las bases estn enfrentadas por
parejas, mirando hacia el exterior y formando los travesaos.
Los nucletidos de cada una de las cadenas que forman el ADN establecen una asociacin especfica con
los correspondientes de la otra cadena. Debido a la afinidad qumica entre las bases, los nucletidos que
contienen adenina se acoplan siempre con los que contienen timina y los que tienen citosina con los que
contienen guanina. Las bases complementarias se unen entre s por enlaces qumicos dbiles.
Replicacin de ADN
El ADN se replica mediante la accin de ADN-polimerasas: enzimas que catalizan la adicin de
nucletidos a una estructura molecular inicial. La replicacin comienza en un punto, en el que se abre la
doble hlice y, en el proceso de rplica, se copian las dos cadenas. Las ADN polimerasas van aadiendo
nucletidos en direccin 5'-3' (la direccin se indica de acuerdo a la numeracin de los tomos de
carbono del azcar), pero para comenzar necesitan que exista un grupo hidroxilo libre en 3'; por ello es
necesario que exista un iniciador. Este proceso de replicacin es semi-conservativo, ya que en cada
nueva doble hlice hay una hebra de nueva sntesis y otra vieja, procedente del ADN que se copia.
Adems de poseer actividad polimerasa, las ADN polimerasas tambin presentan actividad exonucleasa
3'-5', que permite comprobar y corregir los errores que se produzcan durante la replicacin.
ARN
El cido ribonucleico (ARN o RNA) es un cido nucleico, polmero lineal de nucletidos formando una
larga cadena. El eje de la cadena lo forman grupos fosfato y azcares ribosa de forma alternativa del que
toma su nombre. Los nucletidos del ARN contienen el azcar ribosa y entre sus bases nitrogenadas al
uracilo, a diferencia del cido desoxirribonucleico (ADN) cuyo azcar es una desoxirribosa y contiene
timina. La funcin principal del ARN es servir como intermediario de la informacin que lleva el ADN en
forma de genes y la protena final codificada por esos genes.
El ARN es transcrito desde el ADN por enzimas llamadas ARN-polimerasas y procesado en el
transcurso por muchas ms protenas. El uracilo, aunque es muy diferente, puede formar puentes de
hidrgeno con la adenina, lo mismo que la timina lo hace en el ADN.
Principios Bsicos de la Identificacin Humana
Como genoma humano se conoce al contenido total de ADN en cada clula humana, con el cdigo
gentico para la sntesis de protenas, las cuales son responsables de la fisiologa y morfologa de las
clulas que, a su vez, son los componentes bsicos de los tejidos y rganos.
Todas las clulas, con excepcin de las sexuales, son portadoras del mismo conjunto de
instrucciones genticas, por lo tanto, independientemente del rgano de que se extraigan muestras para
analizar, el perfil gentico que se obtenga ser el mismo (Principio de Universalidad)
El Principio de Diversidad dice que el ADN ofrece la posibilidad de obtener un cdigo gentico
identificador que permite distinguir de forma precisa a cada individuo de una poblacin (con excepcin de
los gemelos idnticos)
Una tercera caracterstica del genoma es su Estabilidad en muestras forenses, es decir, que es
posible obtener y descifrar la secuencia de parte del material gentico a partir de un vestigio biolgico de
inters forense: sangre, semen, pelos, etc.
ADN Nuclear y ADN Mitocondrial
La informacin gentica se organiza en dos genomas: el ADN nuclear, de herencia compartida por
ambos progenitores y el genoma mitocondrial que transmiten exclusivamente las madres en sus vulos.
El ADN nuclear, como lo indica su nombre, se encuentra en el ncleo de las clulas y representa el
99% del contenido de ADN celular. Se encuentra asociado a ciertas protenas formando los cromosomas.
Un zigoto humano tiene 23 pares de cromosomas, un miembro de cada par provenientes de padre y
madre. Por el contrario, las clulas reproductoras reciben, durante su formacin al azar solamente un
miembro de cada par, es decir, slo tienen 23 cromosomas.
22
UADER
La cantidad total de ADN de una clula es alrededor de 3.000 millones de nucletidos. Un gen es un
segmento de ADN (3.000-100.000 nucletidos) que contiene la informacin para la sntesis de una
protena. Se estima que el nmero de genes humanos es de 30.000, siendo desconocida la funcin de
ms del 50% de ellos. Sin embargo, estos genes representan slo una pequea fraccin del ADN total
de una clula. El resto est compuesto de secuencias de ADN repetitivo sin una funcin clara y que
suele denominarse ADN no-codificante, pues no codifica informacin para la sntesis de protenas. Es
precisamente este ADN el de ms inters forense, ya que se trata de regiones de gran variabilidad de
tamao entre los individuos.
Las regiones de ADN no-codificante de mayor inters en un estudio gentico forense son las
denominadas de ADN microsatlite: pequeas regiones (100-500 nucletidos) compuestas por una
secuencia (4-5 bases) que se repite en tandem n cantidad de veces. Es el nmero de veces que se
repite la secuencia lo que presenta variabilidad entre los individuos de una poblacin.
La mayora de los anlisis forenses de ADN se basan en el estudio simultaneo de un conjunto de 10 a
15 de estas regiones cortas distribuidas en los distintos cromosomas humanos. Un perfil gentico es
un patrn de estos fragmentos cortos de ADN ordenados por su tamao.
Adems del ADN nuclear, las clulas humanas contienen un pequeo genoma circular (de 16.569
nucletidos) que se encuentra dentro de las mitocondrias (orgnulos celulares encargados de producir
energa) y que se hereda exclusivamente de la madre, ya que las mitocondrias son aportadas por el
citoplasma del vulo y no por el espermatozoide.
Este ADN mitocondrial, tambin presenta variabilidad gentica, y por lo tanto tambin es til en el
identificacin humana.
23
UADER
Es un genoma de gran sensibilidad: hay entre 100 y 10.000 copias de ADN mitocondrial por cada
copia del nuclear. Por tanto, ser de aplicacin en muchos casos en los que no sea posible la obtencin
de ADN nuclear (raz de cabello; restos seos antiguos; etc.) Sin embargo, la variabilidad gentica es
menos que la secuencia observada mediante el anlisis de las secuencias de ADN repetitivo antes
descrito. El perfil gentico que se obtiene tiene, por lo tanto, un poder de discriminacin mucho ms
limitado: este tipo de ADN ms que perfiles individuales permite identificar linajes maternos.
Identificacin Mediante la Tcnica de ADN: Resea
En 1953, el bioqumico estadounidense James Watson y el biofsico britnico Francis Crick publicaron
la primera descripcin de la estructura del ADN. Su modelo adquiri tal importancia para comprender la
sntesis proteica, la replicacin del ADN y las mutaciones, que los cientficos obtuvieron en 1962 el
Premio Nobel de Medicina por su trabajo.
Los primeros casos de Criminalstica fueron resueltos gracias a la tcnica de los RFLPs (Fragmentos
de Restriccin de Longitud Polimrfica). Jeffreys descubri la existencia de unas regiones minisatlites
hipervariables dispersas por el genoma humano que al ser tratadas con enzimas de restriccin
generaban fragmentos de longitud variable. Estudios posteriores realizados por el mismo Jeffreys
demostraron que las diferencias en el tamao de estos fragmentos se deban a que estas regiones
consistan en un determinado nmero de repeticiones en tndem de una secuencia central, el cual
variaba de unos individuos a otros.
El primer locus de ADN polimrfico fue descubierto por Wyman y White en 1980 usando una sonda
de ADN arbitraria.
Estos loci hipervariables constaban de repeticiones en tndem de una secuencia de oligonucletidos
(11 a 60 pb), de manera que las diferentes longitudes de los fragmentos originados dependan del
nmero de dichas repeticiones y se les denomin VNTR (Variable Number of Tandem Repeat).
Aplicacin Forense del Anlisis de ADN
Tras el descubrimiento de los primeros VNTRs se vio que stos podan ser aplicados a la medicina
forense y sustituir a los marcadores clsicos.
En un principio la manera de estudiar dichos marcadores se hizo por medio de la tcnica llamada
hibridacin con sondas o Southern Blot.
1.- HIBRIDACIN CON SONDAS. Bsicamente consiste en la identificacin de una regin
determinada mediante el uso de una sonda, que es un fragmento monocatenario de ADN
complementario a una secuencia de bases conocida. Esta sonda, marcada con un producto radiactivo o
quimioluminescente, se pone en la solucin con el ADN de la muestra y se visualiza despus de una
serie de procesos para separar los diferentes alelos que puedan existir con base en la longitud de los
mismos.
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UADER
Informacin aportada: las sondas multi-locus tienen una mayor capacidad discriminativa al aparecer
mltiples bandas. No obstante, las mono-locus son ms especficas ya que el fragmento de ADN con el
que hibridan es de mayor tamao.
Cantidad y calidad del ADN: cuando se usan sondas multi-locus se requiere aproximadamente un
microgramo de ADN sin degradar mientras que en el caso de las mono-locus se necesita menos de 100
ng y este ADN no necesariamente debe estar en perfecto estado, siempre y cuando el fragmento
complementario a la sonda est intacto.
Especificidad entre especies: las sondas multi-locus permiten su uso sobre el ADN humano y de
cientos de animales superiores, mientras que las mono-locus son exclusivas de ADN humano.
A pesar de que el anlisis SLP ha sido y es bastante til en estudios de paternidad no puede decirse
lo mismo de su aplicacin a la Criminalstica ya que presenta una serie de inconvenientes como son:
-
La cantidad de ADN que se necesita est entre 20 y 100 ng, cantidad difcil de conseguir
en casos de criminalstica en los que los indicios biolgicos encontrados son mnimos.
En cuanto a la calidad del ADN, en la prctica forense es muy difcil encontrar en estado
no degradado toda la cantidad de ADN que se necesita para un anlisis con sondas
mono-locus.
El tiempo requerido para este tipo de anlisis es de dos o tres das.
El hecho de que se requieran cantidades elevadas de ADN hacen que normalmente, con
el primer anlisis se consume la totalidad de la muestra, con lo que se dificultan
contrapericias y una posterior revisin del caso.
2.- REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR). Esta tcnica supuso una verdadera
revolucin y es la ms extendida en la actualidad, por s sola o como paso intermedio de la
secuenciacin. Inventada por Kary MULLIS en 1987, le supuso el premio Nbel de Qumica.
Gracias a esta tcnica se puede amplificar una determinada regin del ADN que est delimitada por
una secuencia especfica y complementaria a unas pequeas sondas denominadas primers que actan
como iniciadores de la reaccin de polimerizacin que lleva a cabo una enzima, habitualmente la
Taq-polimerasa. Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para
replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar
las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a continuacin, dejar que
vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.
En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de las cuales est constituido).
Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95 C) de la muestra la
forma ms habitual. Otros mtodos, raramente empleados en la tcnica de la PCR, seran la adicin de
sales o agentes qumicos capaces de realizar la desnaturalizacin. A continuacin se producir la
hibridacin del primer, es decir, el iniciador se unir a su secuencia complementaria en el ADN molde.
Para esto es necesario que la temperatura descienda (generalmente, a 55 C, aunque se puede variar
segn sea el caso entre 45 C y 65 C). Estos cebadores actuarn como lmites de la regin de la
molcula que va a ser amplificada. Por ltimo acta la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para
sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la
sntesis de nuevo ADN. Se aumenta la temperatura hasta 72 C (para la Taq Polimerasa), temperatura a
la cual la ADN polimerasa presenta su mximo de actividad, aumentando geomtricamente la cantidad
de fragmentos de ADN amplificados en la reaccin.
Una vez completados todos los ciclos, se finaliza con dos pasos, uno de extensin de la cadena a la
temperatura ptima de la ADN polimerasa, normalmente 72 C, para finalizar enfriando la muestra a 4 C
para su conservacin.
25
UADER
Este ciclo (desnaturalizacin-hibridacin-extensin) se repetir un nmero de veces dependiente de

la cantidad de fragmentos amplificados que se desee. Generalmente son 30 ciclos, ya que un nmero
mucho mayor de ciclos no implica un mayor rendimiento.
De este modo es posible que cuando se dispone de muy escasa cantidad de ADN en un indicio o
est parcialmente degradado, sea posible amplificarlo y obtener una cantidad suficiente para su anlisis.
Luego, los segmentos amplificados se someten a un campo elctrico en el interior de un soporte
semislido o gel (electroforesis). Como el ADN est cargado negativamente, se dirige hacia el polo
positivo, los fragmentos pequeos ms rpido que los grandes, produciendo su separacin. Finalmente,
los fragmentos separados se visualizan mediante diferentes mtodos:
- Radiactivos: si uno de los nucletidos estaba marcado radiactivamente, basta poner el gel en
contacto con una pelcula radiogrfica, que se revela para observar las bandas.
- Tincin con plata: se trata el gel con sales de plata, que por su carga positiva son atradas por la
carga negativa de los fragmentos de ADN, y se revela de modo similar a una fotografa.
Tanto los mtodos radiactivos como los de tincin con plata estn cayendo en desuso, y en la
actualidad son empleados solamente por laboratorios que poseen un escaso volumen de trabajo.
- Sistemas automatizados: son los de ltima generacin, en los cuales al proceso de electroforesis lo
efecta un secuenciador automtico, que lee mediante un rayo lser los "primers", marcados con un
fluorocromo, adheridos a las zonas variables. Una computadora permite determinar qu variantes son las
que se encuentran en cada muestra.
Calidad del ADN: Cuando se trabaja con ADN cuya calidad es ptima no suele haber problemas en la
amplificacin y cantidades del mismo por encima e incluso por debajo de los
5 ng rinden buenos
resultados. El problema aparece cuando la calidad del ADN obtenido no es la idnea, bien porque est
degradado o bien porque dicho ADN vaya ligado a una serie de contaminantes que pueden inhibir la
actividad de la polimerasa. Si el ADN est degradado por la accin de enzimas de restriccin el que se
obtenga o no resultado en la amplificacin va a depender de que el fragmento a amplificar haya sido
daado o no. En el caso de tener ADN sin degradar pero unido a una serie de contaminantes habra que
intentar diluir al mximo la muestra para disminuir dichos contaminantes, pero siempre dentro de un
rango de ADN que no est por debajo del lmite de sensibilidad de la PCR. El problema de las cantidades
mnimas de ADN y la presencia de contaminantes o inhibidores de la Taq es un hecho habitual en
Criminalstica y requiere un estudio pormenorizado de la muestra antes de la amplificacin.
La PCR ofrece una serie de ventajas, frente al uso de las tcnicas de anlisis gentico utilizadas con
anterioridad, como son:
-
Su capacidad para obtener resultados en casos en los que la cantidad de ADN es mnima
o en casos en los que el ADN est parcialmente degradado.
Genera en un espacio corto de tiempo un elevado nmero de copias de la secuencia de
ADN que es objeto de estudio, lo cual permite utilizar tcnicas de visualizacin ms
sencillas y rpidas que el uso de sondas marcadas radioactivamente.
Permite la determinacin y agrupacin allica en clases discretas, lo que facilita la
elaboracin de bases de datos al ser la estandarizacin inmediata y posibilitar la
aplicacin de mtodos bio-estadsticos y programas elaborados.
El uso de marcadores microsatlites de pequeo peso molecular aumenta las probabilidades de

obtener resultados positivos de amplificacin cuando el ADN se encuentra degradado ya que puede ser
que dichos fragmentos no hayan sido digeridos. Esta ventaja es de gran importancia en Criminalstica ya
que normalmente los indicios biolgicos encontrados han estado sometidos a diversos factores (calor y
humedad) que favorecen el crecimiento bacteriano.
Sin embargo, una de las grandes ventajas de la PCR que es su elevada sensibilidad puede, en
ocasiones, convertirse en un gran problema ya que se podra co-amplificar un ADN extrao o ajeno al
que nos interesa. No obstante, en los laboratorios de Gentica Forense las medidas de precaucin que
se toman para evitar problemas de contaminacin por manipulacin son extremas.
26
UADER
UNIDAD IV: ANLISIS PERICIAL DE PELOS

Introduccin
El ser humano, as como todos los animales con pelo, pierden pelos permanentemente, siendo
reemplazado por otro en el mismo folculo piloso. Esto determina que en casi la totalidad de los hechos
delictivos queden en el escenario o en las personas, pelos cados a veces arrancados, que son
pasibles de cotejo por microscopa de comparacin a los fines de determinar si pueden pertenecer a
determinada persona animal.
El examen microscpico comparativo de cabello humano provee una evidencia de valor asociativo,
esto es, permite hacer una asociacin entre individuos entre individuos y objetos. La comparacin de
cabellos humanos nunca debe ser usada para la identificacin concluyente de un individuo. Por el mismo
motivo, la ausencia de un resultado positivo en el examen comparativo de cabello humano, nunca debe
ser usado para excluir concluyentemente una asociacin entre personas y objetos.
Cuando son aplicados apropiadamente en conjunto con otro tipo de evidencia asociativa, los
resultados de la comparacin de cabello humano pueden impactar significativamente en el cuerpo de
evidencia para avanzar en el procesamiento criminal.
La importancia del pelo como elemento de estudio forense radica en su resistencia a la
descomposicin, manteniendo sus caractersticas a lo largo del tiempo e incluso en el cadver luego de
transcurrido considerable tiempo de la muerte, por lo que es una de las pocas muestras biolgicas que
se conservan a los largo del tiempo, siendo pasibles de someterse a estudio.
Estructura y Morfologa
El pelo est constituido por protenas, lpidos, pequeas proporciones de sales minerales, sustancias
hidrfilas y agua.
Las protenas capilares son, en su mayor parte, queratina: sustancia de sostn formada por
macromolculas constituidas por largas cadenas de aminocidos unidos entre s.
La estructura del cabello, de afuera hacia adentro est compuesta por cutcula, corteza y mdula.
27
UADER
La cutcula est formada por escamas superpuestas que apuntan hacia la punta del pelo, formadas
por clulas especialmente queratinizadas, que forman de 6 a 8 capas. Es interesante conocer, con fines
de anlisis, el ndice escamoso: cantidad de escamas por unidad de longitud. En el hombre, la cutcula
es suave y poco saliente, con escamas imbricadas. Tambin las hay dentadas, crenadas, ovaladas,
acuminadas, etc.
La corteza cortex est sostenida de la capa protectora de la cutcula y la constituyen clulas

corticales en forma de aguja, alineadas regularmente paralelas a la longitud del cabello. Su importancia
forense radica en que se halla implantada con grnulos pigmentarios que originan el color del cabello. El
tono y distribucin de estos es un importante punto de comparacin y diferenciacin.
Fotomicrografas de la distribucin pigmentaria en cabellos humanos (a y b) y animal (c)
La mdula es el canal central que corre a travs del cabello y que puede o no estar, y cuando est,
variar el grado de medulacin (raramente es continua en humanos)
Ofrece algunos datos de inters, como el ndice medular: relacin entre el dimetro de la mdula y el
dimetro del pelo. Se expresa mediante una fraccin; en humanos se acerca a 1/3.
Diferente grado de medulacin en cabellos
Examen y Determinaciones de Inters Forense

Gross dice que a menudo la suciedad adherida es ms importante que el pelo en s, por esto no se
debera tomarlo entre los dedos; usar aumentos para determinar e individualizar punta y raz; se deben
colocar sobre fijados sobre un papel blanco en un sobre.
28
UADER
Los pelos relacionados con un hecho delictivo deben ser levantados con una lgica de clasificacin,
que permita posteriormente relacionarlos con las etapas del hecho circunstancias del mismo.
Ya en el laboratorio, se debe examinar toda la evidencia en un rea limpia y sin corriente de aire, por
separado para evitar que se mezclen. Hacer una descripcin escrita de cada objeto de evidencia,
resaltando caractersticas fsicas y mtodo de embalaje.
Remover cada pelo de los objetos remitidos, usando pinzas y guantes. Etiquetar todos los recipientes
y portaobjetos con la fuente, nmero de caso, nmero de tem, etc. Cuando no sea posible utilizar pinzas
guantes, se puede usar una cinta adhesiva. Recordar, re-empacar cada muestra antes de examinar la
siguiente.
Con el aumento adecuado, es posible determinar: origen; raza; sexo; lugar del cuerpo de donde
proviene; si se trata de un cabello teido; si se trata de un pelo cado, arrancado cortado;
enfermedades que sirvan para reducir la bsqueda o descartar sospechosos. Adems, se puede
determinar el grupo sanguneo de un sujeto a travs de un ensayo de absorcin-elusin.
Bajo microscopio comparador se deben cotejar pelo a pelo todos los pelos dubitados con la totalidad
de la muestra indubitada (no menos de 12-15 pelos) y slo se debe informar cotejo positivo cuando el
indubitado coincide al menos con uno de los pelos testigo en la totalidad de las caractersticas descritas.
Origen del Pelo. No hay caractersticas especfica conocidas de identificacin de pelo humano,
respecto del pelo animal; pero el pelo de ningn animal rene todas las caractersticas del pelo humano.
PELO HUMANO
PELO ANIMAL
Canal Medular
Red area granulosa
Contenido areo voluminoso
Clulas medulares invisibles
Clulas medulares aparentes
IM: 0,3
IM: 0,5
Pelos del vello: sin mdula
Pelos del vello: mdula en escalones moliniforme
Sustancia Cortical
Forma un grueso manguito
Constituye un cilindro hueco
Pigmento en granulaciones
Pigmento en granulaciones mayores que en el hombre
Cutcula
Escamas gruesas, salientes y menos imbricadas que en
Escamas delgadas, poco salientes e imbricadas
el hombre
Pelos de ganado, perro y ser humano, respectivamente
Determinacin de la Raza. Los pelos del cuero cabelludo proveen el criterio ms seguro para
identificar la raza, pues permiten una mejor diferenciacin que los de otras partes del cuerpo. La tcnica
consiste en realizar un molde del pelo en parafina resina polister y luego efectuar cortes transversales
con la ayuda de un microtorno. En la raza blanca la seccin es circular o de contorno ovoide y la mdula
es pequea y centrada. El pigmento est concentrado en las zonas perifricas de la corteza. Los indios
americanos y los asiticos (mongoloides) poseen cabello con tallos cilndricos triangulares con la
mdula situada en forma central. El cabello de la raza negra es oval y estrecho puede ser casi plano; el
canal medular est situado en forma excntrica.
Cortes transversales de cabellos humanos de raza caucsica, mongoloide y negra.
29
UADER
Sexo del Individuo. La determinacin de sexo mediante pelos encontrados en el lugar del hecho, se
basa en la tincin diferencial de los cromosomas sexuales que se hallan en la interfase de los ncleos de
las clulas de la vaina de la raz del pelo. En la mujer, uno de los cromosomas x aparece condensado y
puede ser teido para que aparezca como un cuerpo marginal en el ncleo; a este se lo conoce como
Cuerpo de Barr. El nmero de estos es menor que el nmero de cromosomas x. Su deteccin se
realiza haciendo un frotis con la raz del pelo y tindolo con orcena en medio actico. Por transparencia
en campo claro, aparece el citoplasma de color rosado plido y el ncleo rojo ms oscuro con una clara y
definida membrana nuclear. El cuerpo de Barr se observa como un corpsculo pequeo, castao oscuro,
cercano a la membrana nuclear. Si el 30% de las clulas contienen corpsculos de Barr, se considera
que el pelo es de origen femenino.
En el caso del hombre, el cromosoma y tiene gran afinidad para fluorescer ante el clorhidrato de
quinacrina, apareciendo como una mancha fluorescente brillante color verde. Otra forma consiste en
impregnar la raz del pelo con solucin de leucofucsina y observar fluorescencia. En ambos casos, la
presencia de un porcentaje igual o mayor al 30% de las clulas fluorescentes, determinan el origen
masculino de la muestra.
Corpsculos de Barr y cromosoma Y en frotis de cabello
Grupo Sanguneo. Esto es posible en sujeto secretores de su grupo sanguneo. Para ello se aplican
las mismas tcnicas enunciadas para el anlisis de sangre, siendo de eleccin la tcnica de absorcinelusin. Para ello se cortan 3 fragmentos de un pelo previamente lavado con jabn y ter, y se aplica en
cada fragmento el correspondiente antisuero (anti-A, anti-B anti-H). El tiempo de incubacin para la
etapa de absorcin es de 3 horas como mnimo, con constante agitacin, y tras el lavado con solucin
fisiolgica y el agregado de los glbulos rojos se incuban a 50 durante 10 minutos, sometindolos
finalmente a la accin del vibrador ultrasnico. Para observar la aglutinacin, la tcnica se completa con
centrifugacin a 120 G durante 2 minutos.
Regin del Cuerpo. Para la determinacin de la regin del cuerpo de la que proviene el pelo, se
considera el largo, dimetro, la forma de la punta, el material que cubre la superficie y la forma de la
seccin transversal. As tendremos vello facial, pbico, de la cabeza (frente, sienes, nuca, patillas), de las
axilas, del pecho, cejas, pestaas, etc.
Cabello Teido. Los cabellos con algn tratamiento artificial de coloracin presentan uniformidad en
su tonalidad; adems, generalmente no estn teidos en la parte prxima a la raz. A menudo falta el
brillo y presenta aspecto quebradizo.
Cabello Cortado, Cado Arrancado. El pelo recin cortado muestra el extremo seccionado, con
bordes limpios, netos, formando ngulos agudos; pasados 3 das, la punta comienza a redondearse. El
que cae espontneamente muestra un bulbo lleno, bien formado porque ha completado su ciclo. Los que
tiene bulbo hueco excavado, no han llegado a su completo desarrollo: indica esto que han sido
arrancados. Cuando este hecho ha sido muy violento, se encuentra que la raz tiene partculas clulas
de la piel adyacente colgada a la misma: es en estas condiciones que un cabello puede ser sometido a
anlisis de ADN, ya que la muestra se extrae de las clulas de la piel que se hallan adherido al bulbo.
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UADER
Cabello recin cortado y de punta redondeada
Cabello con bulbo completo (cado) y bulbo con partculas de piel (arrancado)
Enfermedades del Pelo. Evidentemente, la identificacin de pelos y cabellos es muy til para
esclarecer ciertas cuestiones, pero ha resultado ser, adems, muy importante para identificar a un
individuo. En efecto, dejando de lado algunos caracteres morfolgicos, las anomalas del tallo del pelo
son un elemento til para las identificaciones; entre ellas, las causadas por enfermedades.
Estas pueden deberse a anomalas debidas a enfermedades nodulares del pelo, como la tricorrexis
nudosa, la tricoptilosis, la triconudosis, etc.; a anomalas en caso de alopecia (cada total o parcial de
pelos y cabellos); anomalas que toman la forma de distrofia generalizada que afectan todas las
pigmentaciones del cuerpo bien a infecciones debidas a parsitos del pelo y del folculo.
A la izquierda, cabello con tricorrexis nudosa.

A la derecha, piojo de cabeza y piojo pbico, respectivamente.
Ensayos Enzimticos y Anlisis por Activacin Neutrnica.

La investigacin de isoenzimas en pelo constituye un valioso aporte para la tipificacin. La bsqueda
del fenotipo al cual pertenece el pelo, dentro de cada uno de los sistemas enzimticos polimrficos
conocidos, permite mejorar su valor evidencial en la identificacin personal.
Twibel y Whitehead (1978) demostraron la presencia de varios sistemas enzimticos polimrficos en
la raz del pelo. Utilizando mtodos electroforticos en gel de almidn, determinaron fosfoglucomutasa
(PGM), adenosindeaminasa (ADA), adenilaloquinasa (AK) y estearasa (EsD). Sin embargo era necesario
un cabello por cada sistema de enzimas.
31
UADER
Lawton y Sutton, en 1981, lograron una tipificacin mltiple de enzimas en un solo pelo. Una tcnica
de corte de pelo permiti determinar, simultneamente, por isoelectroenfoque, fosfoglucomutasa,
glioxidasa (GLO I) estearasa D y adenilatoquinasa.
Sistema
AK
EsD
GLO
G6PD
PHI
PGM
6PGD
Fresco
+
+
+
+
+
+
+
3 Semanas
+
+
+
+
+
+
7 Semanas
+
+
+
+
-
Referencias: - no detectable; + tipificable
La activacin neutrnica es una tcnica nuclear de anlisis qumico que permite la determinacin
cuantitativa de un gran nmero de elementos. Se caracteriza por ser una tcnica instrumental no
destructiva que facilita simultneamente informacin de todos los elementos. El mtodo se basa en
procesos que tienen lugar en el ncleo atmico. El estado fsico y qumico de los elementos no influye en
el resultado final. Una de las ventajas es que no precisa un tratamiento inicial de la muestra ya que el
anlisis se realiza por activacin.
La tcnica requiere que se desarrolle en tres fases: irradiar con neutrones la muestra en el ncleo del
reactor fuente neutrnica, con lo que algunos tomos son convertidos en istopos radioactivos;
obtencin de los espectros gamma de las muestras radiactivas y procesar los espectros gamma
utilizando programas que transforman la informacin digital almacenada en valores de concentracin.
Con la activacin neutrnica se determina cual es la composicin qumica del cabello, facilitando
informacin sobre los valores de concentracin de compuestos orgnicos (protenas, vitaminas,
colesterol y acido rico) y elementos inorgnicos (arsnico, plomo silicio, hierro y fosfatos).
32
UADER
UNIDAD V: REVENIDOS QUMICOS

Concepto
Conforme a su acepcin, la palabra revenir significa tornar una cosa a su estado propio.
Tecnolgicamente se denomina revenido a la operacin metalrgica consistente en el calentamiento, por
debajo de cierta temperatura crtica, de un acero templado, para disminuir las tensiones internas y su
fragilidad.
Desde el punto de vista estrictamente pericial criminalstico, se denomina revenido al procedimiento
usualmente utilizado para regenerar las marcas seriales eliminadas de diferentes elementos, mediante
operaciones fsicas y qumicas.
Para comprender de que manera el tratamiento mediante reactivos de una superficie metlica en la
que se ha borrado una grabacin permite volver a ver la misma, es necesario tener en cuenta algunas
particularidades de la estructura de los metales y del proceso de estampacin de las numeraciones.
Los metales poseen estructuras cristalinas de una forma geomtrica definida; la mayor parte forman
cristales cbicos hexagonales.
Toda fuerza ejercida sobre el material metlico produce una deformacin. Cuando las fuerzas
ejercidas son de intensidad considerable, el material experimenta una deformacin plstica que origina
tensiones residuales.
Izquierda, estructura cristalogrfica normal. A la derecha, estructura alterada por la fuerza F
El proceso en cuestin conduce a cambios en las propiedades fsicas y qumicas de la estructura

afectada, provocando a su vez alteraciones en la dureza, propiedades magnticas, resistencia mecnica,
resistencia a la corrosin, etc. sta ltima propiedad es la que da origen al proceso de revenido qumico,
que pone en evidencia dicha alteracin mediante el tratamiento con reactivos qumicos que actan a
diferente velocidad en las zonas alteradas, respecto a las zonas intactas.
. .
Arriba, Esquema del corte del metal en el que se ha realizado la marcacin.
Abajo, mismo corte, en el que se ha realizado el limado de la marcacin.
33
UADER
Si bien el intenso ataque oxidativo al que se somete el metal a revenir condiciona procesos de
corrosin diferenciales entre las reas tensionadas y las que conservan su estructura original, estos
procesos no pueden ser solamente atribuidos a un simple fenmeno oxidativo, sino que interviene
activamente un componente de carcter electroltico.
Mtodos Frecuentes para Realizar Marcaciones
Cuanto ms drstico haya sido el medio empleado para la marcacin original, mayores posibilidades
habr de regenerarlas. Algunas formas de marcacin no permiten la regeneracin por revenido, debido a
que las estructuras cristalogrficas no sufren alteracin alguna durante su produccin, como en el caso
de vaciado y pintado. Algunas, alteran en pequea medida las propiedades qumico-fsicas de los
metales, y el revenido tiene pocas posibilidades de dar un resultado positivo: por grabado mecnico
(medallas, relojes, anillos, etc.) y el grabado qumico (poco frecuente)
Los mtodos ms frecuentes y que ofrecen resultado ms visibles ante el ataque qumico de los
reactivos son lo que proceden de estampaciones por cuo metlico aplicado por percusin y el grabado
elctrico, por ser los que mayores y ms profundas perturbaciones estructurales causan en el metal. En
el primero se usan lpices elctricos vibratorios que originan en la superficie metlica puntos
pequeos crteres por fusin de metal, que dan origen a nmeros y letras. En caso del grabado con
cuos, se utilizan punzones de acero duro y poseen en su extremo la marca deseada en sobre relieve. El
grabado se concreta por golpe fuerte y seco que provoca la introduccin del punzn a una profundidad
determinada. El nmero, letra signo queda as marcado en bajo relieve. Las grandes empresas poseen
para ello equipos que brindan un estampado de caractersticas prolijas y constantes, detalle a tener en
cuenta para determinar si una numeracin sometida a examen es original falsa.
Mtodos Utilizados para la Eliminacin de Marcas Seriales
Para la erradicacin de las numeraciones inscripciones originales se recurre al pulido con lima
pulidora; lijado (suele disimularse con pintura); punteado elctrico; soldadura; correccin por adicin (se
agregan trazos a los ya existentes para adulterarlos). Otra forma es practicar sobre la superficie que
exhibe la marcacin, una serie de perforaciones con taladro similar. Este mtodo imposibilita
totalmente la regeneracin, en caso de que sea de profundidad considerable.
Mtodos de Revenido Qumico
Existen reactivos y mtodos de revenido para hierro y acero dulce, acero duro, aluminio, cobre, zinc,
estao, metales preciosos (oro, plata, platino), etc.
Para que sea posible la visualizacin, la superficie a tratar debe estar lo ms lisa posible, ya que si el
adulterador alter la misma por rayados profundos con elementos punzantes, la golpe con elemento
contundente dejando notorias irregularidades, no ser posible al perito observar con claridad las tenues
lneas de revenido que puedan aparecer.
Por otra parte, si el adulterador produjo un regrabado sobre la superficie borrada, ste puede no
interferir en la observacin del revenido, ya que sera muy raro que asestara cada cifra exactamente en
el mismo lugar donde estaba la que borr, por lo que en general el revenido aparece claramente visible.
Antes de iniciar la prctica de un revenido qumico, se deber asegurar de que efectivamente hubo
borrado de numeracin anteriormente asentada en el metal, bien, hubo modificacin de alguna cifra
por reescritura; en este ltimo caso, no corresponde la prctica del ensayo.
El revenido qumico se realiza en todos los casos mediante reactivos fuertemente oxidativos. La
mayor parte de los metales reaccionan muy bien al ataque en fro.
En todos los casos, el tratamiento es gradual, es decir, que entre aplicacin y aplicacin de reactivo y
enjuague posterior es necesario ir observando, con buena iluminacin y a veces con lupa de mano, para
ir captando la aparicin de los nmeros borrados.
La eleccin del reactivo no siempre es fcil, y a medida que el perito va adquiriendo experiencia
propia se le facilita esta decisin.
Reactivos:
Soluciones para ataque en caliente:
o cido ntrico al 10%
o Cloruro frrico al 25%
o cido clorhdrico al 25%
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UADER
Soluciones para ataque en fro:

o cido sulfrico al 10% + dicromato de potasio (aplicar como bao y luego esmeril
fino a intervalos)
o Solucin: 80 ml de cido clorhdrico + 60 ml de agua + 12,9 gr. de cloruro cprico +
50 ml de alcohol secar con algodn + cido ntrico al 15% - secar y repetir
alternativamente -.
Para aluminio:
o Hidrxido de sodio al 30% en fro
o 30 ml de glicerina + 20 ml de cido fluorhdrico con estopa
Para cobre, bronce, plata alemana:

o Solucin: 19 gr. de cloruro frrico + 6 gr. de cido clorhdrico + 100 gr. de agua
(bao abundante)
Para acero inoxidable, acero, hierro:

o Limpiar la superficie con benceno acetona, calentar con lmpara de soldar hasta
rojo, enfriar lentamente.
o Reactivo de Fry: 90 gr. de cloruro cprico + 120 ml de cido clorhdrico + 100 ml de
agua (cubrir la superficie con un algodn, secar, cubrir con cido clorhdrico al 1020 %, secar, repetir, al final lavar con cido ntrico diluido)
Para acero fundido:

o Dicromato de potasio en cido clorhdrico al 10% (hacer una pared con plastilina y
cubrir, renovar cada tanto)
Para aleaciones de cobre:

o Cloruro frrico en cido clorhdrico al 10% (dejar 20 minutos a una hora)
Para aleaciones de aluminio:

o Solucin de Villilla: 2 partes de cido fluorhdrico + 1 parte de cido ntrico + 3-4
partes de glicerina
El procedimiento inicia con la conformacin de una cubeta que contornee el sector a revenir: la
plastilina es el material que presenta una mejor performance. Luego se establece el tipo de material base
que va a ser tratado, en base a lo cual se adecuar la batera de reactivos de trabajo y la secuencia de
aplicacin.
A esta altura, es interesante mencionar la teora de la aireacin diferencial, que postula que si se
sumerge una placa metlica en el seno de una solucin salina cida, la zona de corrosin ms intensa
se verifica en aquellos sectores menos accesibles al oxgeno del aire, o sea en aquellos recubiertos por
la pelcula lquida. En caso de que la superficie a tratar est inclinada, se facilita la aireacin diferencial
de la mesada o elemento metlico en contacto con el cido y se potencia el efecto corrosivo de este.
En la medida de lo posible, se deber evitar que el trabajo iniciado por un perito sea discontinuado
por ste y retomado por otro, por cuanto es difcil describir en forma verbal imgenes fugaces que se
suelen observar preliminarmente, que no logran ser captadas por fotografa, y que luego se pueden
evidenciar nuevamente se pueden perder definitivamente.
Luego del primer contacto con el cido unos 10-15 minutos, se descarga la cubeta con pipeta
jeringa, sin tocar la superficie, ya que de lo contrario se generan rayas que enmascaran los diseos
borrados, y se recarga con agua tantas veces como sea necesario para que desaparezca
completamente el desprendimiento gaseoso que caracteriza el ataque del cido sobre el metal.
Producido el lavado, se evacua el agua remanente y se observa la eventual aparicin de alguno de los
contornos borrados. Se carga nuevamente con la solucin corrosiva: esta vez el tiempo de contacto no
superar los 5 minutos. Este procedimiento se continua hasta obtener los resultados de revelado, total
parcial, que permitan arribar a una conclusin positiva.
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UADER
UNIDAD VI: MTODOS INSTRUMENTALES DE ANLISIS QUMICOS

Espectroscopia.
La espectroscopia estudia el comportamiento de la materia frente a diversos tipos de radiacin. La
espectrometra es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un compuesto en
solucin, basada en la capacidad de las molculas de absorber radiaciones electromagnticas. Esta
absorcin depende de la estructura atmica de la sustancia y de las condiciones del medio.
Al irradiar una molcula con luz visible ultravioleta, puede originarse una transicin electrnica
durante la cual la molcula absorbe energa, y se excita un electrn desde el orbital que ocupa en el
estado fundamental a otro orbital de energa ms elevada. Cada molcula tiene una serie de estados
excitados (o bandas) que la distingue del resto de molculas. Como consecuencia, la absorcin que a
distintas longitudes de onda presenta una molcula -espectro de absorcin- constituye una caracterstica
propia y que permite identificarla. Por ltimo, la molcula en forma excitada libera la energa absorbida
hasta el estado energtico fundamental.
Es decir, que el espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de luz
absorbida a diferentes valores de longitud de onda. La espectrometra es el estudio e interpretacin de
los espectros.
Espectrmetro de masas tipo TOF modelo MSD TOF, Agilent Technologies
La Espectrometra de Masas (MS) permite estudiar compuestos de naturaleza diversa y obtener

informacin cualitativa o cuantitativa. El anlisis espectromtrico permite conseguir informacin de la
masa molecular del compuesto analizado, como as tambin informacin estructural del mismo.
Para ello es necesario ionizar las molculas y obtener los iones formados en fase gaseosa. Esto tiene
lugar en la fuente de ionizacin. Existen diferentes tcnicas que permiten llevar a cabo este proceso,
Impacto Electrnico (EI), Bombardeo con tomos rpidos (FAB), Ionizacin Qumica a Presin
Atmosfrica (APCI), Desorcin/Ionizacin por Lser Asistida por Matriz (MALDI) Electrospray (ESI).
Luego, esos iones se dirigen a un analizador de masa, que los separa en funcin de su relacin
masa/carga (m/z) mediante la aplicacin de campos elctricos, magnticos simplemente determinando
el tiempo de llegada a un detector. Entre estos se puede mencionar el analizador por tiempo de vuelo
(TOF), de cuadrupolo, trampa inica (ITD QIT), analizador de transformada de Fourier (FTMS), etc.
Los iones que llegan al detector producen una seal elctrica que es procesada, ampliada y enviada
a un ordenador. El registro obtenido se denomina espectro de masas y representa las abundancias
inicas obtenidas en funcin de la relacin masa/carga de los iones detectados.
Un espectrofotmetro genera su propia luz blanca y se usa para medir espectros luminosos de
sustancias que esa luz atraviesa; las distintas intensidades en sus distintas frecuencias/longitudes de
onda. Estos instrumentos antes empleaban prismas para descomponer la luz blanca en sus
componentes; hoy emplean redes de difraccin. Las distintas intensidades luminosas pueden emplearse
para saber la concentracin de una sustancia qumica.
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UADER
Diagrama
esquemtico
de un
espectrofotmetro moderno (Beckman Modelo DU).
La Espectroscopia Infrarroja (IR) se fundamenta en la absorcin de la radiacin IR por las molculas

en vibracin. Una molcula absorber la energa de un haz de luz infrarroja cuando dicha energa
incidente sea igual a la necesaria para que se de una transicin vibracional de la molcula. Es decir, la
molcula comienza a vibrar de una determinada manera gracias a la energa que se le suministra
mediante luz infrarroja.
Pueden distinguirse dos categoras bsicas de vibraciones: de tensin y de flexin. Las vibraciones
de tensin son cambios en la distancia interatmica a lo largo del eje del enlace entre dos tomos. Las
vibraciones de flexin estn originadas por cambios en el ngulo que forman dos enlaces. En la siguiente
figura se representan los diferentes tipos de vibraciones moleculares.
En principio, cada molcula presenta un espectro IR caracterstico, debido a que todas las molculas
(excepto las especies diatmicas mononucleares como O 2 y Br2) tienen algunas vibraciones que, al
activarse, provocan la absorcin de una determinada longitud de onda en la zona del espectro
electromagntico correspondiente al infrarrojo.
De esta forma, analizando cuales son las longitudes de onda que absorbe una sustancia en la zona
del infrarrojo, podemos obtener informacin acerca de las molculas que componen dicha sustancia.
La espectroscopia infrarroja tiene su aplicacin ms inmediata en el anlisis cualitativo: deteccin de
las molculas presentes en el material.
En la zona del espectro electromagntico IR con longitudes de onda del infrarrojo medio (entre 4000 y
1300 cm-1) se suelen observar una serie de bandas de absorcin provocadas por las vibraciones entre
nicamente dos tomos de la molcula. Estas vibraciones derivan de grupos que contienen hidrgeno o
de grupos con dobles o triples enlaces aislados.
En la zona del espectro electromagntico IR con longitudes de onda comprendidas entre 1300 y 400
cm-1 (infrarrojo lejano), la asignacin de las bandas de absorcin a vibraciones moleculares es ms difcil
de realizar, debido a que cada una de ellas est generada por absorciones individuales sumadas
(multiplicidad de las bandas). Es la denominada zona de la huella dactilar (flexin de enlaces CH, CO,
CN, CC, etc..). En esta zona de longitudes de onda, pequeas diferencias en la estructura y constitucin
de las molculas dan lugar a variaciones importantes en los mximos de absorcin.
El Espectrmetro de Absorcin Atmica consiste en una fuente luminosa que emite una luz de
longitud de onda determinada de intensidad I 0 enfocada sobre una celda (llama horno de grafito) que
contiene los tomos en estado fundamental. Este dispositivo, normalmente una llama, evapora la
muestra. Alineada con la llama se encuentra la fuente de luz que tiene por finalidad provocar la
excitacin de los tomos. Parte de esta intensidad de la luz incidente ser absorbida y disminuir en
forma proporcional al nmero de tomos presente en estado basal, es decir, la absorcin es
directamente proporcional a la concentracin. La luz no absorbida tendr ahora una intensidad I, la cual
es detectada generalmente por un detector foto-multiplicador.
Con estos datos se podr calcular la transmitancia y con ella, mediante la aplicacin de la Ley de
Lambert-Beer, la concentracin.
En el equipo ms corriente se introduce el lquido a fin de pulverizarlo y lograr que de ste salgan
pequeas gotas de tamao similar. Estas gotitas se introducen en el seno de la llama. El mechero
comnmente es de una sola ranura, donde el rayo de luz lo atraviesa longitudinalmente, hallando mucho
tomos en su recorrido, de modo de aumentar la sensibilidad. Las lmparas ms comunes son las de
ctodo hueco, recubierto con el elemento en cuestin, con nodo de tungsteno y gas de relleno: nen
argn.
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UADER
Esquema de un espectrofotmetro de emisin atmica
Tcnicas Cromatogrficas.
Estas son usadas para separar mltiples componentes en una muestra dada, basado en la relativa
afinidad de esos componentes con una fase mvil y una fase estacionaria con las que interactan, para
posteriormente identificar y cuantificar dichos elementos.
Se las puede clasificar en:
-
Cromatografa Plana: en papel en capa delgada

Cromatografa en Columna: de lquidos, de gases de fluidos supercrticos
Las tcnicas de cromatografa ms difundidas son las que se realizan en Cromatografa en Capa
Delgada (CCD TLC), que utilizan un soporte de silicagel sobre el que se siembra una pequea porcin
de muestra solubilizada y se hace avanzar la misma mediante un solvente de corrida que va siendo
absorbido por la slica por tensin superficial, separndose los componentes de una muestra en funcin
de su peso molecular, afinidad con el solvente y con el soporte, polaridad, etc. La tcnica no requiere
gran equipamiento, es relativamente sencilla de realizar y se obtienen resultados rpidamente.
Cromatografa en capa delgada parcialmente revelada
Se critica el hecho de que, en casos donde la formulacin de las sustancias a separar posea
componentes estructuralmente similares, la separacin cromatogrfica no es sencilla de visualizar,
obligando a utilizar diferentes sistemas solventes con el fin de obtener resultados ptimos. Adems, la
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UADER
apreciacin de los factores de retardo (fr) como parmetro de identificacin es discutida, lo que dificulta
la creacin de bases de datos confiables con dichos datos. Al mismo tiempo, el anlisis insume una
mayor cantidad de muestra en comparacin con otras tcnicas separativas disponibles.
La Cromatografa Gaseosa (CG) es una tcnica utilizada para la separacin y anlisis de mezclas de
sustancias voltiles. La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un gas inerte denominado que
es la fase mvil. Este flujo de gas con la muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase
estacionaria (columna cromatogrfica), donde ocurre la separacin de la mezcla. La fase estacionaria
puede ser un slido adsorbente (Cromatografa Gas-Slido) o, ms comnmente, una pelcula de un
lquido poco voltil, soportado sobre un slido inerte (Cromatografa Gs-Lquido con Columna
Empaquetada o Rellenada) o sobre la propia pared del tubo (Cromatografa Gaseosa de Alta
Resolucin). En la cromatografa gas-lquido (CGL), los dos factores que gobiernan la separacin de los
constituyentes de una muestra son:
-
- Solubilidad en la fase estacionaria: cuanto mayor es la solubilidad de un constituyente en

la FE, ste avanza ms lentamente por la columna.
Volatilidad: cuanto ms voltil es la sustancia (o, en otros trminos, cuanto mayor es la
presin de vapor), mayor es su tendencia de permanecer vaporizada y ms rpidamente
avanza por el sistema.
Sin embargo, el proceso no es tan simple. En primer lugar, la muestra requiere un paso operativo
previo, ya que en el inyector del cromatgrafo no se pueden inyectar nuestras biolgicas, como sangre u
orina, ni polvos, pastillas u otras formas slidas, sino los extractos orgnicos limpios obtenidos a partir de
ellas. Luego de los procesos extractivos y de purificacin previos, el material extrado de la muestra se
hallar disuelto en un muy pequeo volumen de un solvente orgnico voltil, que puede ser cloroformo,
ter etlico, acetato de etilo, etc. Un pequeo volumen de dicho material (del orden de 0,1 a 1 mL) ser
introducido en el inyector.
Las sustancias separadas salen de la columna disueltas en el gas de arrastre y pasan por un
detector; dispositivo que genera una seal elctrica proporcional a la cantidad del material eludo. El
registro de esta seal en funcin del tiempo es el cromatograma, en donde las sustancias aparecen
como picos con reas proporcionales a sus masas, lo que posibilita el anlisis cuantitativo.
Tcnicas Electroforticas.
Esta tcnica est basada en la diferencia de movilidad de las molculas bajo la influencia de un
campo elctrico, ligada principalmente a la carga elctrica propia de cada una de las molculas y a su
tamao. La muestra se coloca en un soporte impregnado con una solucin electroltica. Se aplica luego
un potencial elctrico a travs de dicho soporte durante un tiempo estandarizado, lo que provoca que los
iones positivos sean atrados hacia el ctodo y los iones negativos hacia el nodo. El ritmo de migracin
a travs del soporte aumenta a medida que la carga de los iones es mayor y disminuye a medida que el
tamao y masa de estos asciende. Variando el potencial elctrico aplicado se puede controlar la
velocidad de migracin.
La electroforesis se puede hacer en medio geloso en tubos capilares. sta ltima, denominada
electroforesis capilar (CE), utiliza tubos capilares de slica fundida de unos 30-50 cm. de longitud y
dimetros interno de 0,01-0,8 mm. Dos parmetros caractersticos se pueden obtener simultneamente:
factor de movilidad y espectro ultravioleta-visible (se debe anexar un detector del arsenal del fotodiodo).
Este ensayo insume una menor cantidad de muestra que la separacin por cromatografa (en el orden de
los nL).
Sistema de electroforesis capilar
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UNIDAD VII: ESTUDIO DE VIDRIOS

El Vidrio. Naturaleza y Composicin Qumica.
El vidrio es una sustancia amorfa fabricada sobre todo a partir de slice (SiO 2) fundida a altas
temperaturas con boratos o fosfatos. Tambin se encuentra en la naturaleza, por ejemplo en la
obsidiana, un material volcnico, o en los enigmticos objetos conocidos como tectitas. Es una sustancia
amorfa porque no es ni un slido ni un lquido, sino que se halla en un estado vtreo en el que las
unidades moleculares, aunque estn dispuestas de forma desordenada, tienen suficiente cohesin para
presentar rigidez mecnica.
El vidrio comn est compuesto por silicato de sodio y calcio. El mtodo de obtencin clsico consiste
en la fusin de dixido de silicio (arena) con carbonato de sodio (soda) y carbonato de calcio (caliza), en
proporciones adecuadas. Las 3 sustancias mencionadas producen, alrededor de los 1300 C, las
siguientes reacciones:
CO3Na2 + SiO2 CO2 + SiO3Na2
CO3Ca + SiO2 CO2 + SiO3Ca
El dixido de carbono formado se desprende, quedando la mezcla de los silicatos de sodio y calcio,
constituyentes, como se mencionara, del vidrio comn. Este es el comnmente utilizado en la fabricacin
de objetos comunes, en dos conformaciones principales: vidrios planos de ventana, y vidrios huecos,
de botella, lmparas, etc.
Variedades de Vidrios.
La materia prima bsica para hacer un vidrio son las arcillas. Cuando a esta materia se le agregan
distintos compuestos qumicos se obtienen diferentes tipos de vidrio. Con base en su composicin
qumica se pueden clasificar en: vidrio sdico-clcico; de plomo; de borosilicato y vidrio de slice. Una
segunda clasificacin se basa en su funcin ms que en su composicin. De esta forma podemos tener:
vidrios de seguridad; aislantes; dielctricos; conductores y vidrios contra el sol. Finalmente, la coloracin
de los vidrios (transparentes, opacos, traslcidos de diferentes colores) se debe al agregado durante el
proceso de fabricacin de xidos metlicos, sulfuros seleniuros. Otros colorantes se dispersan en
forma de partculas microscpicas.
Elementos
Slice
Sodio
Potasio
Calcio
Plomo
Boro
Aluminio
Magnesio
Sdico-clcico
70-75
12-18
0-1
5-14
0.5-3
0-4
Plomo
53-68
5-10
1-10
0-6
15-40
0-2
-
Borosilicato
73-82
3-10
0.4-1
0-1
0-10
5-20
2-3
-
Slice
96
3-4
-
El Vidrio Sdico-Clcico
Est formado por slice, sodio y calcio principalmente. La slice es parte de la materia prima bsica, el
sodio le da cierta facilidad de fusin y el calcio la provee de estabilidad qumica. Sin el calcio el vidrio
sera soluble hasta en agua
Este tipo de vidrio es el que se funde con mayor facilidad y el ms barato. Por eso la mayor parte del
vidrio incoloro y transparente tiene esta composicin. Las ventanas de los edificios, desde la ms grande
hasta la ms pequea estn hechas con este vidrio. Lo nico que cambia de una diminuta ventana a un
ventanal de enormes dimensiones es el espesor. Est tan estudiado el grosor en relacin con el tamao,
que hay una clasificacin y una reglamentacin para el tipo de vidrio que se debe usar en cada
construccin.
La resistencia qumica del vidrio sdico-clcico se ha mejorado en aos recientes al aumentar la
proporcin del slice, porque sta es poco reactiva. Tambin se aumenta la fortaleza a lo que se conoce
como choque trmico.
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UADER
El Vidrio de Plomo
El siguiente tipo de vidrio que aparece en la tabla es el de plomo, en el cual se sustituye el xido de
calcio por xido de plomo. Es igual de transparente que el vidrio sdico-clcico, pero mucho ms denso,
con lo cual tiene mayor poder de refraccin y de dispersin. Se puede trabajar mejor que aqul porque
funde a temperaturas ms bajas. Su coeficiente de dilatacin calorfica es muy elevado, lo cual quiere
decir que se expande mucho cuando se aumenta la temperatura y por lo tanto no tiene gran resistencia
al choque trmico. Posee excelentes propiedades aislantes, que se aprovechan cuando se emplea en la
construccin de los radares y en el radio. Absorbe considerablemente los rayos ultravioletas y los rayos
X, y por eso se utiliza en forma de lminas para ventanas o escudos protectores.
Es un vidrio blando a baja temperatura que permanece con cierta plasticidad en un rango de
temperatura, lo cual permite trabajarlo y grabarlo con facilidad. Las piezas del material conocido como
cristal cortado estn hechas con este vidrio. Asimismo, se utiliza en la elaboracin de vidrios pticos,
para lo cual se aade xido de lantano y tono. Estos vidrios dispersan la luz de todos los colores. Son
excelentes lentes para cmaras fotogrficas porque con una correccin mnima dan luz de todos los
colores y la enfocan de manera uniforme en el plano de la pelcula. Si no fuera as, unos colores seran
ms intensos que otros en una fotografa, y no se lograran imgenes tan reales.
El Vidrio de Borosilicato
Naci en 1912. Despus de la slice, su principal componente es el xido de boro. Es prcticamente
inerte, ms difcil de fundir y de trabajar. Los tomos de boro se incorporan a la estructura como Si-O-B.
Tiene alta resistencia a cambios bruscos de temperatura, pero no tan alta como la del vidrio de slice
puro, pues aun cuando presenta el mismo tipo de vibracin, la longitud de los enlaces vara ms cuando
est presente el boro y el material tiene un coeficiente de dilatacin mayor. El valor de este coeficiente es
0.000005 centmetros por grado centgrado. Esto quiere decir que por cada grado centgrado que
aumenta la temperatura, el vidrio se agranda 0.000005 centmetros. Por eso se utiliza en la elaboracin
de utensilios de cocina para el horno y de material de laboratorio, pues es muy resistente al calor y a los
cambios bruscos de temperatura. Estos objetos no se hacen de vidrio de slice puro porque su
manufactura es complicada, ya que tienen que alcanzar temperaturas de 1650 C para hacerlo.
El Vidrio de Slice
Formado con 96% de slice es el ms duro y el ms difcil de trabajar, pues es necesario emplear una
costosa tcnica al vaco para obtener un producto para usos especiales, que transmite energa radiante
del ultravioleta y del infrarrojo con la menor prdida de energa. Tambin existe otra novedosa tcnica en
cuya primera etapa se utiliza vidrio de borosilicato que se funde y se forma, pero con dimensiones
mayores a las que se desea que tenga el producto final. Este artculo se somete despus a un
tratamiento trmico, con lo cual se transforma en dos fases vtreas entremezcladas, es decir, en dos
tipos de vidrios diferentes entremetidos uno en el otro. Uno de ellos es rico en lcali y xido de boro,
adems de ser soluble en cidos fuertes (clorhdrico y fluorhdrico) calientes. El otro contiene 96% de
slice, 3% de xido de boro y no es soluble. Esta ltima es la composicin final del vidrio de slice.
En la segunda etapa de fabricacin el artculo se sumerge en un cido caliente, para diluir y quitar la
fase soluble. El vidrio que tiene grandes cantidades de slice, y que no se disuelve, forma una estructura
con pequeos agujeros, llamados poros. Posteriormente se lava el vidrio para eliminar el cido brico y
las sales que se forman, concluyendo con un secado.
En la tercera y ltima etapa el artculo se calienta a 1.200 C, y se observa una contraccin de
aproximadamente 14%. Esto quiere decir que su tamao disminuye en ese porcentaje. Los poros
desaparecen. Su estructura se consolida sin que se produzca ninguna deformacin. Los gases
contenidos en el interior son desorbidos y el vidrio adquiere una apariencia perfectamente transparente y
hermtica.
Los vidrios que contienen 96% de slice tienen una estabilidad tan grande y una temperatura de
reblandecimiento tan elevada (1 500 C) que soportan temperaturas hasta de 900 C durante largo
tiempo. A temperaturas ms altas que stas puede producirse una desvitrificacin y la superficie se ve
turbia. Por todas estas propiedades se utilizan en la fabricacin de material de laboratorio, que requiere
una resistencia excepcional al calor, como sucede con los crisoles, los tubos de proteccin para
termopares, los revestimientos de hornos, las lmparas germicidas y los filtros ultravioletas.
El Vidrio de Seguridad
Para elaborar un vidrio de seguridad es necesario elegir placas que no tengan distorsiones, pegarlas,
cortarlas y agujerarlas hasta que tengan la forma deseada. Para elaborar el vidrio de seguridad simple,
conocido con el nombre de Security, estas placas se tienen que meter al horno para calentarlas a cierta
41
UADER
temperatura y despus enfriarlas con aire, proceso que se conoce como templado. Esto provoca una
serie de tensiones, ya que la superficie queda sometida a fuerzas de compresin, mientras que en el
centro existen fuerzas de tensin. En el interior del vidrio, donde las fuerzas de tensin se incrementan
por el templado, la fuerza del material es casi ilimitada porque est prcticamente libre de
imperfecciones. Esto se debe a que los enlaces entre los tomos tienen la misma fuerza y por lo tanto
disminuyen hasta un mnimo las tensiones internas. Ningn tomo jala ms que el otro, y esto le da una
fortaleza adicional. Tambin se suele poner una placa de plstico transparente entre dos lminas de
vidrio, lo cual, adems de hacerlo ms resistente, lo hace ms seguro, porque al romperse se fraccionar
en numerosos trozos pequeos, sin producir astillas, evitando con esto que queden pedazos de vidrio
cortantes.
El Vidrio Aislante
Los acristalados aislantes se fabrican montando dos o ms placas separadas entre s, de forma que
los espacios intermedios permanezcan hermticamente cerrados y deshumidificados para que
conduzcan lo menos posible el calor. En los bordes del vidrio se colocan nervios distanciadores soldados
con estao. De esta forma se tienen dos placas de vidrio que no se tocan, separadas por aire que no
puede transmitir el calor con facilidad, y as se evita que se escape la energa. Al mismo tiempo, una
ventana de este tipo amortigua considerablemente los ruidos, lo cual siempre es una ventaja adicional.
Vidrio aislante
El Vidrio Dielctrico
A los materiales que pueden polarizarse en presencia de un campo elctrico se les conoce como
dielctricos. Polarizar quiere decir que las molculas o los tomos se convierten en dipolos, acomodando
todas sus cargas negativas hacia un lado y las positivas hacia otro. Los dipolos elctricos se acomodan
en la misma direccin que el campo elctrico local que los produce. Son importantes porque una vez
formados son capaces de conducir la electricidad, pero antes no. Un vidrio dielctrico se obtiene a partir
de arcillas ricas en plomo y se utiliza para fabricar cintas para los condensadores electrnicos. Estos
materiales necesitan una gran resistencia, por lo que se suele utilizar tambin vidrio de 96% de slice y
cuarzo fundido.
El Vidrio Conductor
Para que un vidrio tenga una conductividad elctrica apreciable, en su elaboracin se tiene que elevar
la temperatura a 500 C, o recubrirlo con una pelcula conductora de metales, xidos alcalinos o
aleaciones, en cuyo caso el que conduce es el metal que se le pone y no tanto el vidrio.
El Vidrio Protector contra el Sol
Este vidrio refleja la luz del Sol. La capa de recubrimiento que lleva incorporada, adems de reflejar
puede presentar diversas tonalidades de color, como plateado, bronce, verde o gris. Se coloca en el
espacio intermedio y en la capa interior de la placa externa. De esta forma se hace el vidrio polarizado y
el de tipo espejo. Los espejos que se instalan en las ventanas de los edificios modernos son
precisamente para proteger contra el Sol.
42
UADER
Determinaciones Fsicas en Vidrios

Forma. El examen directo de los trozos de vidrios remitidos al laboratorio, permite establecer si ellos
proceden de un vidrio plano, de superficie, de un foco de automvil, de un reloj, etc., salvo que sean de
un tamao extremadamente pequeo.
En el caso de todos ellos es importante la determinacin de su espesor y de igual forma de inters de
reconstruir el objeto original a modo de rompecabezas. Se sugiere marcar con un lpiz graso, en forma
diferencial, los vidrios desconocidos y conocidos, intentando con paciencia el armado de ellos,
empezando por los segundos generalmente ms grandes y de mayor posibilidad de ensamble, ubicando
luego los primeros en los lugares vacos. Dicha tarea es facilitada por la presencia de adherencias,
manchas, marcas, etc.; que eventualmente aparecen en unos y otros cuya continuidad indica la posicin
correcta.
Un factor negativo de esta labor es el fraccionamiento en forma de pequesimos trozos, que se
desprenden con gran velocidad en el sentido opuesto a la fuerza que se produce la rotura. Lograda la
perfecta yuxtaposicin la pieza reconstruida se debe fotografiar con el mayor detalle posible.
Color. Aqu conviene sealar la diferencias que existen entre los vidrios intensamente coloreados y
los que presenta una suave coloracin. En los primero, el tono se logra mediante el agregado de las
sustancias antes mencionadas, lo cual no presenta complicaciones; en el segundo caso, la variacin
tonal puede deberse a la presencia de impurezas en la materia prima.
COLOR
Rojo
Rosa
Naranja
Amarillo
Verde
Azul
Violeta y
prpura
Marrones
Ahumados
Negros opacos
Blancos
opacos
SUSTANCIAS PRESENTES
xido de cobre, oro, selenio, manganeso, xido ferroso
Menos cantidad que los anteriores o neodimio
Rojo ms cadmio
Plomo, xido de antimonio, cadmio, hierro ms manganeso, xido de uranio y
uronato de sodio y titanio
xido de cromo, hierro, compuestos de uranio, cobre, cobre ms cromo, xido de
cobalto y antimonio
xido de cobalto, cobre, xido de cobalto ms xido de manganeso
xidos de manganeso ms xido de nquel
Azufre con carbono, nquel, compuestos de hierro, hierro ms manganeso, uranio
Platino, iridio
xido de zinc y xido de manganeso
xido de zinc, xido de calcio, fosfato clcico, fluoruro clcico.
Superficie. Se analiza para detectar marcas de pulido, esmerilado, etc. Si las muestras pueden
compararse con algn material testigo, la existencia de estas seales particulares de tratamiento
superficial, aportarn otro datos ms, ya que si provienen del mismo vidrio, stas tendrn coincidencias.
Fluorescencia. Para el estudio de la fluorescencia, las muestras deben ser lavadas con disolventes de
grasa (cloroformo, solucin de alcohol etlico-ter). El vidrio no es fluorescente a la luz ultravioleta, tal
procedimiento se observa ms a menudo en variedades oftalmolgicas. La fluorescencia se atribuye a la
presencia de metales pesados, inclusive al estao utilizado en la fabricacin de vidrios mediante el
proceso llamado Flont Glass.
Se va a aumentar en el vidrio a una longitud de UV. La longitud ideal es de 300-400 nanmetros o
253 nm. Lo que puede variar es la variacin del color. Para el estudio de la fluorescencia es necesario
realizar pruebas como la densidad (en sus tres formas): hay macromtodos y micromtodos, estos
dependiendo del tamao de la muestra.
Mtodos para Determinar la Densidad. Siempre y cuando las muestras halladas de vidrio tengan u
peso mayora a dos gr. se har las determinaciones de la densidad mediante macromtodos, si las
muestras halladas tienen un peso menor a un gramo las muestras se trabajarn con el uso de
micromtodos.
Macromtodos.
Mtodo de la Balanza Hidrosttica: Consiste en determinar el peso del trozo de vidrio en el aire (P),
y luego su peso en agua destilada (P) a temperatura establecida.
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UADER
Mtodo del Picnmetro: El picnmetro es un pequeo frasco de vidrio con tapn esmerilado,
atravesado este por un conducto capilar vertical; tal disposicin permite que cundo se llene el
picnmetro con un lquido a temperatura determinada, el volumen admitido sea siempre exactamente el
mismo. Para la determinacin de la densidad relativa del trozo de vidrio mediante este mtodo se deben
efectuar tres pesadas: del trozo de vidrio, peso del picnmetro ms agua, peso del picnmetro ms agua
ms el vidrio; ests pesadas se realizan en una balanza de precisin.
El peso del lquido desplazado podr luego determinarse, y as hallar la gravedad especfica del trozo
del vidrio.
d=m/v
Luego, la densidad de la muestra es:
d1 = (m1 x d2) / m2
m1: masa de MUESTRA dentro del picnmetro
m2: masa de AGUA (o lquido de densidad conocida) dentro del picnmetro
d1: densidad de la MUESTRA dentro del picnmetro
d2: densidad del AGUA (o lquido de densidad conocida) dentro del picnmetro
Micromtodos.
Mtodo de Flotacin: Si se coloca un cuerpo slido en un lquido que no lo disuelva, pueden ocurrir
tres cosas: Que el slido flote, que se mantenga en equilibrio en el centro del lquido o que se sumerja
hasta el fondo del recipiente. Ello depende de que el lquido tenga mayor, igual o menor densidad que el
vidrio respectivamente. Este mtodo da buenos resultados en los anlisis tendientes a establecer si dos
trozos de vidrio presentan igual o distinta densidad, y en especialmente adecuado para muestras muy
pequeas dimensiones.
Para llevarlo a cabo se colocan los trozos de vidrio correctamente individualizados y de forma o
tamaos similares en un recipiente cilndrico de vidrio incoloro de ms de 10 mililitros de un liquido ms
liviano en el cual los trozos quedan sumergidos; se aade gota a gota un liquido ms pesado que el
vidrio, pero misible con el anterior hasta lograr que el vidrio flote en e centro de la mezcla. Silos dos
vidrios (incriminados y testigo) presentan igual comportamiento en este ensayo, ellos tiene igual
densidad y cuando se aumenta un grado centgrado se disminuye la densidad.
ndice de Refraccin. La refraccin de la luz es un fenmeno consistente en el cambio de direccin de
u rayo luminoso cuando pasa de un medio transparente a otro de distinta densidad ptica. Se llama
ndice de refraccin absoluto "n" de un medio transparente al cociente entre la velocidad de la luz en el
vaco ,"c", y la velocidad que tiene la luz en ese medio, "v". El valor de "n" es siempre adimensional y
mayor que la unidad, es una constante caracterstica de cada medio:
n = c/v
El ndice de refraccin de un medio vara con la temperatura disminuyendo en general el primero al
aumentar esta.
Determinacin del ndice de refraccin de pequeos trozos de vidrios: Si se dispone de muestras
de vidrio de volmenes adecuados y de los medios necesarios para proceder al corte y pulido de los
mismos es mediante el refractmetro. Todas las muestras deben ser analizadas mediante tcnicas
iguales y en condiciones ms simples posibles. Al igual que la determinacin de la densidad, no es
necesario arribar a la obtencin de valores absolutos de los ndices de refraccin de las muestras
conocidas y desconocidas, siendo en general suficiente establecer la igualada o desigualdad de ellos
respecto de dicho parmetro
Si se coloca un slido transparente e incoloro en el centro de un lquido dotado de esas mismas
propiedades el primero ser tanto ms visible cuando mayor sea la diferencia de ndice de refraccin
igual entre ambos. Si se lograra igualar el ndice de los dos, el slido se hara invisible; para llevar a cabo
el mtodo se coloca la muestra de vidrio en un vaso pequeo de precipitado, y se cubre con un liquido
de menor ndice de refraccin que el de aquel. Luego se va agregando gota a gota otro lquido, de mayor
ndice que el del vidrio, agitando luego de cada aadido hasta que este sea invisible. En ste momento,
el ndice de refraccin del vidrio es igual al del liquido cuyo valor numrico se puede determinar
fcilmente con el refractmetro.
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UADER
Toma de Muestras en el Lugar de los Hechos.

Es ampliamente recomendable tomar la mayor cantidad de muestras posibles y en particular aquellas,
que se limitan la parte daada, debindose evitar roturas posteriores para lo cual se requiere de un
cuidadoso embalaje y transporte.
Si se buscan trozos pequeos se debe tomar en cuenta que la alta velocidad con que ellos son
proyectados en el momento de la rotura, y la posibilidad de choques, aconsejan que le rastreo se realice
a un el lugar aparentemente lejanos o tambin ilgicos.
Se deben embalar en una caja de madera con varios compartimientos desarmable en ambos
extremos por tornillos; con la finalidad de no seguir fragmentando la muestra, se deben tomar por los
contornos apara no imprimir nuestras huellas y no borrar nada que tenga en la superficie.
Es importante resaltar que, en el laboratorio criminalsticos, es frecuente el envo de materiales
diversos con el propsito general de buscar elementos de juicio relacionados con el hecho investigado,
entre los que se cuentan las partculas trozos de vidrio. En tales casos es recomendable la ejecucin
de un prolijo examen sobre un amplio papel blanco, utilizando lupa y efectiva iluminacin.
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UADER
UNIDAD VIII: ESTUDIO DE INCENDIOS

La Qumica de la Combustin
Se entiende por combustin, la combinacin qumica violenta del oxigeno (o comburente), con
determinados cuerpos llamados combustibles, que se produce con notable desprendimiento de calor.
Tambin es necesario que la temperatura en algn punto de la mezcla de oxgeno y combustible,
adquiera un determinado valor.
Una combustin se considera imperfecta, cuando parte del combustible que entra en reaccin, se
oxida en grado inferior al mximo, o no se oxida. La combustin es completa cuando el combustible se
quema en su totalidad.
Todos los combustibles utilizados en los diversos procesos industriales estn constituidos nicamente
por dos sustancias qumicas, el carbono y el hidrgeno los cuales estn unidos entre s, formando los
diversos combustibles utilizados.
El incendio es una combustin viva que se propaga, por efecto de las llamas que produce,
destruyendo todos los materiales combustibles que se encuentran a su paso.
El calor desprendido altera incluso materiales incombustibles: el vidrio se funda, el hierro al calentarse
pierde su rigidez, llegando a ablandarse a tal extremo que las vigas se deforman, cediendo ante el peso
de la mampostera o techados que sostienen, producindose derrumbes, etc.
El incendio no solo ocasiones importantes daos materiales sino que es responsable de la prdida de
considerable cantidad de vidas humanas, de donde se deduce la importancia y trascendencia de este
tipo de siniestros.
Los incendios provocados son uno de los delitos ms difciles de esclarecer debido a que en la
mayora de los casos slo existen indicios circunstanciales, generalmente no hay testigos y las pruebas
se consumen con el fuego.
Por otra parte aunque muchas veces se aprecien acelerantes, estos estn tan ligados a la actividad
humana que el simple hecho de detectarlos es de un valor probatorio limitado, es por ello que el
investigador de incendios mediante una inspeccin ocular detallada puede establecer en la gran mayora
de los casos si un incendio ha sido provocado o accidental.
Acelerantes de la Combustin
Se denominan acelerantes de la combustin a las sustancias mezcla de ellas agregadas a un
material combustible (intencional accidentalmente), las cuales tiene la propiedad de facilitar el
desarrollo del fuego.
El tipo de sustancia inflamable depende de la motivacin y mvil del incendiario. Entre los ms
comunes se puede citar: naftas, kerosn, gas-oil; fuel-oil; etc.
La cantidad de acelerantes remanentes una vez extinto el fuego, depende de factores como la
cantidad y tipo de sustancia utilizada, tiempo transcurrido desde comenz el fuego, severidad del mismo
y tambin de la naturaleza del material sobre el que se aplic.
Investigacin en el Lugar del Hecho. Toma de Muestras
Informacin de trascendente importancia se extraer de la inspeccin ocular que debe llevar a cabo
en el lugar de los hechos el personal tcnico especialmente capacitado para este tipo de tareas. Se hace
necesario conocer las condiciones y disposicin original del local afectado, sus caractersticas e
instalaciones y comprobar a travs del estudio del lugar, las alteraciones o modificaciones causadas por
el fuego. En concreto, la inspeccin ocular tiende a reconstruir el lugar del suceso con indicacin de
particularidades tales como distribucin de muebles, mquinas y otros efectos; caracterstica y
localizacin de instalaciones elctricas, de gas natural y todo otro detalle que haya estado presente
originariamente en el lugar afectado.
El experto debe tener en cuenta la movilizacin de objetos que pueda haber efectuado el personal
destinado a las tareas de extincin y la remocin de escombros o restos que se pueda haber efectuado
inmediatamente despus de apagado el incendio, razn por la cual es de gran importancia la
participacin en la inspeccin ocular del funcionario a cargo de la brigada de extincin y de los
moradores, cuidadores o encargados del lugar afectado por el fuego.
La determinacin de la cantidad y calidad de efectos o mercaderas, su mayor o menor
susceptibilidad a entrar en combustin, la posibilidad de que generen combustin espontnea, etc. son
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fundamentales para el tcnico a cargo de la investigacin, como lo es tambin el acabado conocimiento

de las caractersticas de las instalaciones presentes en el lugar, ya que permitirn efectuar apreciaciones
relacionadas con la evolucin lgica del fuego, su propagacin acorde a la disposicin de los efectos
presentes, corrientes de aire, etc.
El experto deber adoptar las medidas para documentar adecuadamente el lugar del hecho mediante
la obtencin de las placas fotogrficas necesarias y la confeccin de los croquis planimtricos necesarios
para objetivizar la evolucin del fuego y determinar las zonas afectadas.
Se debe localizar el lugar donde se inici la combustin, lo que es fundamental para concluir sobre las
causa del mismo, ya que ello permite circunscribir la bsqueda de la causa a un sector determinado,
eliminando as probables factores de error que obstaculicen la investigacin. Es en este sector,
denominado foco del incendio, donde se debe buscar, localizar e identificar el agente determinante del
inicio del fuego. La presencia de ms de un foco indicar primariamente la posibilidad de un incendio
intencional.
Los contenedores de restos combustos deben mantener la muestra aislada (evitar que las sustancias
se escapen por evaporacin, etc. que puedan ingresar sustancias extraas) y no se debe introducir
artefactos (sustancias elementos que originalmente no estaban presentes en las muestras) Los
recipientes de vidrio resultan ser los ms recomendables, siendo posible su uso en caso de muestras
lquidas. Una vez levantada la muestra, es conveniente mantenerla en lugar refrigerado hasta el
momento de procesarla.
Recuperacin de Acelerantes en la Muestras
La recuperacin de los posibles acelerantes para su anlisis e identificacin se realiza mediante la
tcnica del espacio cabeza ("head space"): se puede realizar en forma rpida y sencilla el aislamiento e
identificacin del principio voltil contenido en una muestra.
Fundamento: a una temperatura dada existe un equilibrio de particin (aire-muestra) para una
sustancia voltil determinada, utilizndose agentes liberadores del txico y calor, es decir, la sustancia a
analizar pasa del la fase lquida/slida a fase gaseosa. Luego, el txico presente en la fase vapor es
analizado por cromatografa gaseosa (CG).
En la columna capilar del cromatgrafo tiene lugar la separacin de las sustancias presentes en la
muestra, no slo en razn de su peso molecular sino tambin por sus caractersticas qumicas. Los
compuestos separados pasan al detector de masas. Una vez all se ionizan, producindose el
fraccionamiento de las molculas; estas fracciones son posteriormente separadas e identificadas segn
su relacin masa/carga. El detector generar un grfico denominado espectro de masas.
El estudio de los datos obtenidos comienza con la bsqueda de familias de sustancias habitualmente
presentes en los acelerantes de la combustin.
Compuestos
Alifticos
Alicclicos/olefinas
Aromticos simples
Estireno/dihidroideno
Naftaleno/alquilnaftaleno
Polinucleares
aromticos
condensados
Tetraetilo de plomo (nafta con plomo)
MTEB (nafta sin plomo)
Relacin m/e
57, 71, 85
41, 55, 69, 83, 97
91, 105, 119, 133
104, 118, 132, 146
28, 142, 156
178, 192, 206
208, 237, 295
41, 43, 57, 73
Con el anlisis de estos datos es posible distinguir y confirmar la presencia de distintos tipo de
acelerantes. En la siguiente tabla se muestran las abundancias relativas de los distintos iones comunes a
4 tipos de acelerantes de la combustin.
Acelerante
Nafta sin plomo
Nafta con
plomo
Kerosene
Gas-oil
92
100
Relacin masa/carga
106 120 128 142
48
16
5
0
97
100
50
37
11
6
63
9
71
30
100
58
71
100
53
81
47
156
0
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UNIDAD IX: ESTUDIO DE FIBRAS

Las Fibras Textiles
El trmino fibras textiles se refiere a las que se pueden hilar utilizar para fabricar telas mediante
tejido, trenzado fieltrado. El tejido, una de las primeras actividades artesanales, ya se practicaba en el
neoltico. Segn su origen, las fibras se pueden clasificar y sub-clasificar en:
Natural = Amianto
Minerales
Naturales
Vegetales
(celulosa)
Animal
(protenas)
Artificiales
Qumicas
Sintticas
Fibra de vidrio
Metales: oro, plata y cobre
Transformadas
De semilla = algodn
De tallo = lino, camo y yute
De hoja = esparto y pita
Lana
Seda
Cuero
Celulsicas = Rayones (nitrocelulosa, cuproamoniacal, viscosa, acetato)
Animales (casenas de la leche) = fibrolana y lanitel
Protenicas
Ardil
Vegetales
Vcara
Algnidas (algas marinas)
Rayn alginato
Poliamidas
Policondensadas
Polister
Acrlicas
Polmeros
Polietilnicas, polipropilnicas
Poliuretano
Fibras de Origen Mineral

Se obtienen de minerales de estructuras fibrosa. Se ha comprobado que su manipulacin provoca
leucemias y cnceres.
- Fibra de vidrio: se obtiene tras la unin de diversos minerales seguida de la fusin de los
mismos. Se utiliza para aislantes trmicos y acsticos.
- Fibras de algunos metales: metales como el oro y la plata pueden ser convertidos en hilos y
son utilizados para el culto religioso y trajes regionales.
Fibras de Origen Vegetal
- Algodn : la materia predominante es la celulosa (91.5 %). El hilo de algodn 100% tiene
inconvenientes como que encoge , destie... aunque no produce alergias y absorbe con
facilidad el sudor
- Lino: fibra mas resistente pero menos elstica y flexible. Es mas caro y se emplea en la
confeccin de vestidos, manteleras.
- Esparto: su principal aplicacin es de articules de artesana y decoracin.
Fibras de algodn
Fibras de Origen Animal

Los pelos de diversas especies son muy utilizados por sus buenas condiciones de hilabilidad.
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- Lana: se obtiene del pelo que recubre el cuerpo de las ovejas, es muy elstica aunque tiene el
inconveniente que el calor hmedo provoca alteraciones en la fibra
- Seda: nico filamento contino producido por la naturaleza por los gusanos de seda. El
principal productor es china
Esta fibra es de mayor resistencia, su elasticidad es notable pero es mala conductora de la
Electricidad.
- Cuero: es el pellejo de un animal sometido a un proceso de curtido. Hay una gran variedad de
animales de las que se utiliza su piel. El curtido consiste en eliminar el pelo y la epidermis dejando la
dermis. Despus se le aaden sustancias que la hacen mas plstica y ligera y hacindolas
imputrescibles.
Fibras de lana
Fibras Artificiales
- Fibras artificiales celulsicas: rayones. La materia prima es la celulosa. Tienen una gran
resistencia mecnica en seco. Obtencin: Celulosa extraccinmolido>disolucin>masa pastosa
coagulacin y extraccin de hilos
- Fibras artificiales protenicas: no han respondido a las expectativas. Su fabricacin consiste en
la hilatura de masa obtenidas por la disolucin de protenas.
o Fibrolana o lanitel: se fabrica a partir de la casena de la leche disuelta en soda
custica
o Picara: se obtiene de las protenas del maz disuelto en sosa custica
o Rayn alginato: se obtiene de las protenas de algas marinas disueltas en soda
custica.
Fibras Sintticas
-
Gran duracin y resistencia a los agentes

Fcil cuidado
La suciedad desaparece con facilidad
Son poco giroscpicas
Pueden provocar alergias
1) Fibras por policondensacin

a) Poliamidas: la fibra mas conocida es el nylon. Tienen gran resistencia y elasticidad; son poco
giroscpicas
b) Polister: se obtiene de un dicido y de un dio. La fibra mas conocida es el tergal
Fibras de Nylon
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UADER
2) Fibras por polimerizacin

a) Acrlicas: se obtiene por polimerizacin del acrilonitrilo. Resistentes a la luz la intemperie. La
fibra mas conocida es el tergal
b) Polivinlicas. Se obtienen por polimerizacin del vinilo. Son muy suaves y se utilizan para
prendas de bebes. La fibra mas conocida es el rhovil
c) Polietilnicas: se obtienen de los hidrocarburos del etileno. es resistente a la abrasin y la
fibra mas conocida es el sarn
d) Polipropileno: se obtienen de los hidrocarburos del propileno. La fibra mas conocida es el
merklon
e) Poliuretano: se obtienen del uretano, tienen mucha elasticidad y la fibra mas conocida es la
lycra
Elastmeros
Permite enormes deformaciones elsticas, despus del vulcanizado. El oxigeno y la luz solar actan
lentamente sobre los elastmeros reduciendo la elasticidad del materia
Clasificacin:
1) Natural
a) Caucho: es un jugo lechoso (ltex) que se emplea en colchones y almohadas
2) Sintticos
a) Neopreno: formado por un polmero de cloropreno. Es incombustible y no se deteriora con
facilidad.
b) Siliconas: tiene como base silicio y resisten los agentes externos.
Caucho sinttico: resiste el calor, la abrasin y el envejecimiento. Su principal aplicacin es en los
neumticos.
En el Lugar del Hecho.
Esta evidencia es encontrada con frecuencia en abrasiones de telas o guindando en materiales
rasgados, en casos de arrollamientos. En algunos casos de hurto, puede encontrarse en mallas
protectoras rasgadas por el intruso, en vidrios rotos, u otros similares.
El examen de dichas fibras puede ser hecho normalmente para determinar el tipo y el color. El
examen mostrar generalmente el tipo de prenda o tela de las que proviene.
Fibras e hilos pueden tambin ser comparadas con las ropas del sospechoso para determinar si
venan o no de aquellas.
Si se encuentran hilos o fibras visibles, pueden recogerse con los dedos pinzas (como en el caso de
los cabellos y pelos) y colocadas en un trozo de papel, luego en un sobre para monedas (sobre
pequeo), este ltimo ser marcado y sellado. Nunca colocar las fibras en un sobre grande de correos ya
que pueden perderse fcilmente.
Si son pocas las fibras recolectadas, y si es posible, envolver toda el rea en donde estn las fibras
con papel y enviar todo el objeto al laboratorio.
Recoger las fibras usando cinta adhesiva solo si el laboratorio lo permite y as lo indica. Cuando se
recolecta este tipo de evidencia, tambin enviar las ropas de las personas de donde se presuma se han
originado al laboratorio para propsitos de comparacin.
En delitos sexuales, actos lascivos, y algunos otros casos, puede ser posible indicar o demostrar el
contacto entre dos individuos o entre una persona y un objeto, verbi gratia el asiento de un vehculo, por
comparacin de fibras. Estos exmenes solo tienen valor cuando se sabe sin lugar a dudas que no hubo
contacto entre los individuos de que se trate o entre el individuo y el objeto antes de luego del delito.
Se debe tener sumo cuidado de mantener cada pieza de ropa o evidencia separada de las dems. Cada
prenda debera depositarse sobre papel de envolver limpio, luego enrollada dentro del papel para luego
ser marcada. Si la ropa de un sospechoso toca la prenda del otro, si es colocada en la misma mesa o
colocada en asiento del vehculo en contacto con la ropa de otro imputado, las comparaciones pueden
no tener ningn valor.
En el Laboratorio.
Si una fibra presenta las mismas propiedades microscpicas y pticas de un tejido testigo, la fibra
podra haber provenido de ese tejido. Aunque no es posible decir que una fibra es efectivamente de un
determinado tejido. Debido a la gran cantidad de tipos de fibras y tejidos y las diferentes formas en que
51
UADER
se pueden colorear, la probabilidad de encontrar una coincidencia significativa en si misma es baja. Es

posible, sin embargo, decir positivamente que un trozo de tela desgarrado proceda de otro si el tejido
desgarrado coincide en los bordes.
Propiedades de las Fibras
Geomtricas:
-
Longitud
Finura
Rizado
Forma de la seccin transversal
Fsicas:
-
Propiedades pticas: brillo y color

Propiedades Trmicas: accin al calor, tratamientos trmicos, comportamiento al fuego
Propiedades Elctricas
Propiedades Superficiales: comportamiento a la friccin
Propiedades Mecnicas: comportamiento a traccin, a torsin y a flexin
Absorcin:
-
Humedad y agua
Disolventes orgnicos: hinchamiento, disolucin
Colorantes: propiedades tintreas
Qumicas:
-
Resistencia a tratamientos cidos, lcalis

Accin de la intemperie: luz solar
Accin de insectos y microorganismos
52
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UNIDAD X: PLSTICOS y PINTURAS

Breve Evolucin de los Plsticos
El trmino plstico, en su significacin mas general, se aplica a las sustancias de distintas estructuras
y naturalezas que carecen de un punto fijo de ebullicin y poseen durante un intervalo de temperaturas
propiedades de elasticidad y flexibilidad que permiten moldearlas y adaptarlas a diferentes formas y
aplicaciones. Sin embargo, en sentido restringido, denota ciertos tipos de materiales sintticos obtenidos
mediante fenmenos de polimerizacin o multiplicacin artificial de los tomos de carbono en las largas
cadenas moleculares de compuestos orgnicos derivados del petrleo y otras sustancias naturales.
La preparacin y uso de nuevos polmeros comienza con el qumico britnico Alexander Parkes, el
cual patenta en 1862 un material (parkesina) de aspecto similar al marfil. Dicho producto se obtuvo a
partir de nitrocelulosa, sustancia inflamable empleada en la manufactura de explosivos. El producto
obtenido era duro y frgil, por lo que Parkes le aadi alcanfor, descubriendo as el primer plastificante.
Form una empresa para explotar su descubrimiento, pero no tuvo xito. Quin si tuvo xito fue el
norteamericano John Wesley Hyatt, quien tras realizar el mismo descubrimiento en 1869, comercializ el
producto con el nombre de celuloide. En 1867, qumicos alemanes obtienen un nuevo material, la
galatita, mediante la precipitacin de casena (protena presente en la leche).
El primer polmero totalmente sinttico (es decir, no obtenido de la naturaleza) es la bakelita,
sintetizada por Leo Hendrick Bakeland en 1909. El producto obtenido tena la propiedad, desconocida
hasta entonces, de termoendurecerse. Es decir que el material, una vez endurecido, no se poda fundir.
Cerca de 50 aos fueron necesarios para desarrollar el plexigls. Ya en 1880 se conoca que el cido
acrlico solidificaba a altas temperaturas bajo presin. Pero fue necesario esperar hasta finales de la
dcada de 1920, con la observacin de la transparencia de los polmeros resultantes, para que tuviera
inters su produccin industrial (efectiva en 1930). El plexigls, o polimetilmetacrilato, permiti la
sustitucin del vidrio en ciertas aplicaciones que requeran cristales resistentes a impactos.
Medidas a tomar
Reciclado mecnico: se recogen las piezas usadas, se clasifican, se trituran, se funden y se moldean
de nuevo.
Reciclado qumico: se somete el plstico a un proceso qumico para obtener compuestos
hidrocarbonatos.
Incineracin: para obtener energa calorfica.
Materia Prima Usada para la Fabricacin de Plsticos
Hay tres grandes etapas:
-
Originalmente, cuando se fabricaban pocos productos, las materias primas utilizadas

eran las celulosas de la madera, sustancias de origen animal como la casena de la leche
y algunos alcoholes producidos por fermentacin.
Posteriormente, el carbn de piedra adquiri importancia y se ampli el nmero y la

variedad de los productos. Este mineral se calcinaba en ausencia de aire y los vapores
condensados formaban el alquitrn de hulla; un lquido negro y espeso que contiene vario
de los qumicos bsicos necesarios para la elaboracin de materiales sintticos.
Desde los aos veinte comenz un cambio gradual hacia el uso del petrleo y del gas
natural como materia prima por su abundancia, conveniencia de manejo y precio.
Actualmente, el carbn ha sido reemplazado casi totalmente por estas mezclas de hidrocarburos y
desde 1942 la industria se ha identificado con el nombre de petroqumica.
Qu son los Plsticos?
Son productos no naturales, obtenidos por el hombre a travs de diversas reacciones qumicas, que
reciben el nombre de polmero, a los que se aade un aditivo.
La finalidad del aditivo es mejorar alguna de las propiedades o caractersticas del plstico.
53
UADER
El plstico obtenido depender tanto de la materia prima utilizada como del proceso seguido.
Fabricacin de los Plsticos
La caracterstica comn a todos los plsticos es la de estar formados por molculas gigantes,
denominadas polmeros o macromolculas, cuyo peso molecular es superior a 10.000.
Estos polmeros se forman por la unin repetida de otras molculas ms pequeas, llamadas
monmeros. La unin se realiza secuenciada: formando una cadena en la que cada monmero que se
repite forma un escaln, siendo el nmero de eslabones o unidades monomricas el grado de
polimerizacin.
Propiedades para ser polmero:
- Esta constituida por uno o varios monmeros repetidos.
- Su peso molecular superior a 10.000.
- Esta compuesto por H y C y otros elementos como O, N, S.
La formacin de un polmero se debe a la afinidad del carbono para unirse consigo mismo de manera
indefinida.
Tipos de Monmeros:
- Olefinas: estos monmeros abren el doble enlace para unirse a otros monmeros. El
polmero recibe el nombre de la olefinas de la que proviene, anteponiendo el prefijo "poli".
Para que se pueda realizar la polimerizacin es necesario un catalizador. La polimerizacin
que se realiza en estos monmeros es por adicin, es decir, en la reaccin entre dos olefinas
con doble o triple enlace se origina un compuesto nuevo (polmero), sin eliminacin de
sustancia alguna.
-
Monmeros funcionalizados: no se necesita catalizador. Entre estos monmeros se realiza

polimerizacin por condensacin. Se elimina una molcula pequea, que suele ser de H 2O,
CH3OH, CIH, etc.
Tipos de Polmeros:
- Homopolmeros: el monmero es el mismo, que se repite a lo largo de la macromolcula.
- Copolmeros: est formado por dos tipos distintos de monmeros. Son muy importantes
desde el punto de vista industrial ya que mejora las caractersticas de sus dos monmeros.
Se clasifican en: alternados, al azar, por bloque y por injerto.
Aditivos ms Importantes
Sirven para obtener plsticos con propiedades determinadas; es necesario aadir los aditivos
adecuados al polmero.
Tipos de aditivos: Colorante, pigmentos, antiignfugos, antiesttico, conductores, estabilizantes,
plastificantes.
Compuestos Principales de los Plsticos
Materia bsica: monmeros que entran en la reaccin qumica.
Cargas: se aaden a la materia bsica con objeto de abaratar el producto obtenido y mejorar sus
propiedades fsicas, qumicas o mecnicas.
Aditivos: tienen como funcin mejorar las cualidades del polmero.
Catalizadores: su misin es iniciar y acelerar el proceso de polimerizacin.
Tipos de Plsticos
1) Termoplsticos: son aquellos plsticos que al ser calentados a temperaturas entre 50 y 200 C
alcanzan un estado de plasticidad que les permite ser moldeados. Esto permite recuperar los plsticos
de desecho para ser remodelados y formar nuevos objetos. Estos plsticos son flexibles y resistentes a
los golpes.
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2) Termoestables: una vez moldeados por el calor, ya no pueden recuperar su forma primitiva. Una
vez endurecido por el calor, ya no es posible que vuelva a adquirir una forma maleable. Son duros
aunque frgiles. Si se calientan, se hacen carbn pero no se ablandan.
3) Elastmeros o cauchos: son muy elsticos. Permiten grandes deformaciones sin rotura recobrando
su forma inicial. No se pueden fundir de nuevo.
4) Fibras: corresponden a una forma comercial de los plsticos termoestables. Sus molculas tienen
una direccin preferencial de ordenacin. Es resistente a la traccin, se puede lavar fcilmente y ni se
arruga, ni se encoge.
Familias de Plsticos ms Importantes
1) Termoplsticos
o
Policarbonato PC
Se obtiene del cido carbnico
Es transparente
Permite el paso de la luz
Tiene una gran resistencia mecnica, tenacidad, y rigidez
Se utiliza para cmaras fotogrficas, cascos de seguridad.
Cloruro de polivinilo PVC

Se obtiene del acetileno y del cido clorhdrico
Tiene gran resistencia mecnica
Se comercializa en dos formas
PVC rgido: tuberas, ventanas.
PVC plastificado: recubrimiento de cables, mangueras.
Polipropileno PP
Se obtiene por la polimerizacin del propileno
Es de los mas baratos
Tiene una dureza y flexibilidad aceptables
Se utiliza para maletas, csped, bolsas para alimentos.
Polietileno PE
Se obtiene por polimerizacin del etileno
Su color es transparente
Tiene dos formas de comercializacin
De alta densidad HDPE: tiene resistencia mecnicas se utiliza para
juguetes, tuberas.
De baja densidad LDPE: tiene menor resistencia mecnica y se utiliza
para bolsas, sacos de dormir.
Polimetacrilato PMMA
Se obtiene del acetileno
Son transparentes
No se decoloran
Aplicaciones: pilotos de automviles, gafas protectoras.
Poliestireno PS
Se obtiene del benceno y del etileno
Resistente a los agentes externos
Se comercializa de dos formas
Poliestireno duro: transparente. Se usa para filmes de pelcula. Cintas
de video.
Poliestireno expandido: se utiliza en aislamientos, hueveras.
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ABS acrilonitrilo-butadieno-estireno
Es de la misma familia que PS
Se obtiene por copolimerizacin
Es muy resistente
Se utiliza para carcasas de televisores, ordenadores.
2) Termoestables
o
Resinas fenolicas PF
Se obtienen del fenol y del formol
El olor del fenol se mantiene
Se le aaden cargas
Se utiliza en carcasas de motores, manivelas.
Resinas ricas
Proceden de la urea y del formol
No tienen olor
Se obtienen platos, vasos.
Resinas melaminicas MF
Se fabrican a partir de melamina y formol
No desprenden olor ni sabor
Se utiliza para el recubrimiento de tableros
Resinas de polister UP
Se obtiene del alquitrn de la hulla y del estiro!
Son incoloras
Resisten temperaturas de hasta 200
Se emplean en recubrimientos
Resinas de epoxi EP
Se obtienen del fenol y el acetileno
En estado liquido son muy venenosas
Son fciles de trabajar
Se emplean en la fabricacin de adhesivos, barnices.
Poliuretano
Se obtiene de un polister y un derivado del belzon
Se fabrican muchos productos
Esponjosos: esponjas, colchones...
Barnices
Pegamentos
Procesos de Conformacin de Productos Plsticos

La fabricacin de plstico se realiza obtenindose un producto totalmente terminado, sin que precise
proceso posterior alguno.
Mtodos de conformacin ms utilizados:
-
Prensado: el material pulverizado en grnulos, al que se le ha aadido la carga y los aditivos,

se introduce en la parte inferior del molde. Luego se prensa y se le aplica calor hasta que se
vuelve plstico y fluye a los espacios huecos del molde. Una vez endurecido, se saca la
pieza.
Inyeccin: la materia prima se introduce en un recipiente que adquiere gran plasticidad. Un
embolo comprime la masa y la hace pasar al interior del molde. Despus de haber
endurecido, se abre el molde y se saca la pieza.
Termoconformado: se fabrica a partir de planchas rgidas mediante termoconformado
(deformacin en caliente); para ello se coloca la plancha sobre el molde adecuado, de forma
que apoye bien sobre los bordes. Una vez aplicado el cierre, se calienta a la temperatura
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necesaria y se aplica vaco, presin o ambas cosas. Una vez fri, se desmolda.
Extrusin-soplado: el material termoplstico sale en estado plstico por un conducto, por lo
que adquiere una forma tubular a su salida. Inmediatamente se empieza a insuflar aire
caliente a presin, el material se adapta a las paredes internas del molde, enfrindose al
tomar contacto con el metal del molde refrigerado. Se abren las dos mitades del molde
cayendo la pieza construida.
Plsticos Mejorados
-
La evolucin y mejora de plsticos es espectacular.

Plsticos reforzados: formados por dos tipos de materiales; uno le aporta resistencia a la traccin
(denominado material de refuerzo), y el otro es alguno de los estudiados hasta ahora. Ambos estn
unidos formando un todo, es decir, mezclados. Los productos obtenidos tienen propiedades superiores a
los empleados para su fabricacin. Se estn inventando y ensayando nuevos materiales.
Plsticos laminados: las capas de ambos materiales estn solapadas o unidas, pero no mezcladas.
Tipos
Plstico-vidrio: consiste en recubrir con una capa muy fina de plstico transparente, el vidrio.
Se mejora la resistencia frente a choques y sirve de aislamiento trmico.
Plstico-metal: productos metlicos recubiertos por una fina capa de plstico. Ejemplo: las
latas de conserva.
Plstico-papel o cartn: el cartn tiene muchas ventajas, pero tiene un inconveniente de no
soportar la humedad. Para ello se recubre de una fina capa de plstico por ambos lados. Como el
tetrapack.
Plstico-tejidos: aplicacin en el campo de los cueros sintticos, lonas, etc.
Plstico-plstico: en muchos envases que contienen productos alimenticios, cosmticos,
bebidas, etc., es necesario la combinacin de varias capas para conseguir una resistencia exterior
adecuada para garantizar el producto interior.
Pinturas. Origen y Composicin.
Las primeras aplicaciones de la pintura fueron nicamente decorativas. La pintura sin aglutinante,
formada por xido frrico, se usaba en las creaciones artsticas rupestres hacia el milenio 15 a.C. Se
conoce la existencia en Asia de algunos pigmentos, hechos de minerales, mezclas elaboradas y
componentes orgnicos que se usaban en el ao 6000 a.c. Los antiguos egipcios, los griegos, los
romanos, los incas y los antiguos mexicanos conocan el ail, un pigmento azul que se extrae de la
planta del ail. La goma arbiga, la clara de huevo, la gelatina y la cera de abeja fueron los primeros
medios fluidos que se usaron con estos pigmentos. Las lacas se emplearon en China para pintar
edificios en el siglo II a.c. En Europa, el uso de la pintura como proteccin se inicia en el siglo XII d.C.
Aunque los romanos ya conocan el empleo del aceite de linaza como medio fluido para la pintura, los
artistas slo lo utilizaron a partir del siglo XV. El albayalde, un pigmento blanco, tuvo una gran expansin
durante el siglo XVII, y la pintura hecha con mezclas de pigmentos y medios fluidos se empez a
comercializar en el siglo XIX.
Las frmulas de la pintura moderna cuentan con diversas categoras de compuestos qumicos. Hay
dos grandes grupos: Componentes lquidos como vehculo, que a su vez consta de un aglutinante y un
disolvente; y componentes slidos, como los pigmentos y las cargas. Las pinturas se forman mezclando
un pigmento (la sustancia que proporciona el color) con un aglutinante que hace de medio fluido, como
por ejemplo el aceite de linaza, y que se solidifica al contacto con el aire. El aglutinante forma el
recubrimiento fino adherente. El disolvente o diluyente se evapora con rapidez una vez extendida la
pintura.
El aglutinante puede ser aceite no saturado o secante, que es un ster formado por la reaccin de un
cido carboxlico de cadena larga (como el cido linoleico) con un alcohol viscoso, como la glicerina. El
aglutinante puede ser tambin un polmero. Un material de relleno, que contiene componentes en polvo
como el caoln o el sulfato de bario, mejora la resistencia de la pelcula seca de pintura.
Los pigmentos para pinturas son polvos finos que o bien reflejan toda la luz para producir un efecto
blanco, o bien absorben ciertas longitudes de onda de la luz para producir un efecto coloreado. Los
pigmentos blancos ms corrientes son xidos inorgnicos, como el dixido de titanio (TiO 2), el xido de
antimonio (SbO3) y el xido de cinc (ZnO). Se usan tambin otros compuestos inorgnicos insolubles,
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como el sulfuro de cinc (ZnS), el albayalde (hidroxicarbonato, hidroxisulfato, hidroxifosfito o hidroxisilicato

de plomo) y el sulfato de bario (BaSO 4). Los xidos inorgnicos ms comunes para colores son: el xido
de hierro (III), Fe2O3 (amarillo, rojo o color tierra), el xido de cromo (III), Cr 2O3 (verde), y el xido de
plomo (IV), Pb3O4 (rojo). Los cromatos de plomo, cinc, estroncio y nquel producen distintas gamas de
amarillo y anaranjado. Se utiliza un conjunto de slidos orgnicos para obtener otros colores.
El disolvente o diluyente puede ser: agua; derivados de los hidrocarburos derivados de productos
naturales (destilacin de la resina del pino=aguarrs).
La pintura acrlica es una clase de pintura de secado rpido, en la que los pigmentos estn
contenidos en una emulsin de un polmero acrlico (cola vinlica, generalmente). Aunque son solubles
en agua, una vez secas son resistentes a la misma. Destaca especialmente por la rapidez del secado.
Asimismo, al secar se modifica ligeramente el tono, ms que en el leo.
"Ltex" es la denominacin comn de los polmeros obtenidos mediante polimerizacin en emulsin,
y son dispersiones coloidales de partculas muy pequeas de polmero en un medio continuo. Se pueden
obtener ltex con diferentes monmeros o con mezclas de monmeros (Copolmeros). Como ejemplo de
ltex formados por un homopolmero se tiene el de acetato de polivinilo o PVA, el cual es uno de los
materiales ms antiguamente utilizado en la formulacin de pinturas. Un ejemplo de ltex obtenidos
mediante el uso de dos o ms monmeros es el de los ltex acrlicos (copolmeros del PVA con
poliacrilatos) los cuales se utilizan en una gran variedad de formulaciones de pinturas, recubrimientos y
adhesivos.
El proceso de secado de la pintura depender del tipo empleado. El secado al aire por evaporacin
de solvente ocurre con aglutinantes de alto peso molecular que por s solos forman pelcula. En el
secado por oxidacin/polimerizacin, con el oxgeno del aire se forman compuestos intermedios
portadores de oxigeno que luego se polimerizan por adicin o por divisin seguida de polimerizacin.
Anlisis de Pinturas con Fines Forenses.
El anlisis de fragmentos de pintura en escenas de accidentes de trfico, se puede utilizar para
comparar la evidencia con la de un vehculo especfico. El estudio forense de pintura incluye el anlisis
de los tipos de pigmento o la presencia de aditivos as como su naturaleza fsica color, espesor, capas,
etc.Un chip de pintura, generalmente est compuesto de 4 capas, de afuera hacia adentro: el
recubrimiento superficial (otorga brillo y proteccin a fenmeno ambientales); la capa de color (pintura
propiamente dicha); el primer impresin (acta como fijador) y la superficie sobre la que se aplic el
tratamiento de color.
Capas de un chip de pintura
El examen superficial de un trozo chip de pintura puede revelar defectos tales como micro-grietas,
micro-ampollas o contaminantes. La superficie interior de pintura puede mostrar fibras de la madera,
metal, polvo de tiza de la superficie pintada.
Adems del examen de las superficies de la pintura bajo el microscopio, el examen de un corte
transversal de la pintura puede dar informacin importante:
- El nmero de las distintas capas de pintura en la superficie representada por la muestra de
trozos de pintura.
- Mediciones precisas del espesor de cada capa de pintura y, mediante el examen de
muestras individuales a lo largo, as como mediante el examen de varias muestras de
pintura, la variacin de espesor por capa de pintura tambin puede ser estimado.
- Identificacin de micro-ampollas en la pintura, como las provocados por los disolvente.
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La presencia de residuos o moho en la pintura y entre capas puede ser visto y documentado
Microfotografas de cortes transversales de chips de pinturas
En cuanto al examen qumico, debido a que las pinturas modernas no se disuelven, las tcnicas
qumicas empleadas (aunque no recomendables por ser destructivas) son las cromatogrficas gaseosas,
previa vaporizacin de la muestra por pirolisis. No requiere preparacin de muestra y es fcil de usar. La
composicin de los gases que se desprenden de esta combustin es leda por el cromatgrafo de gases
y posteriormente por un espectrmetro de masas. De esta forma se puede conocer cules son los
materiales componentes de la muestra.
Entre los mtodos no destructivos se encuentra la Espectroscopia Infrarroja (FTIR). Esta tcnica,
utilizada desde hace largo tiempo para el anlisis estructural de molculas orgnicas, permite en forma
relativamente simple identificar la presencia de grupos funcionales en una molcula. Como se dijo
anteriormente, se basa en la interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. Cuando la
radiacin infrarroja es absorbida por una molcula, se excitan los niveles de energa vibracionales de los
distintos cromforos presentes en un sustrato, obtenindose un espectro de absorcin con bandas muy
definidas a ciertas longitudes de onda. Estas bandas de absorcin tpicamente se asocian a la naturaleza
del o los enlaces que forman un par de tomos o un grupo de tomos (grupos funcionales). Al igual que
en todos los espectros de absorcin, un espectro IR se representa grficamente como la intensidad
relativa de la luz transmitida (eje de las ordenadas) en funcin de la longitud de onda, expresada en
[cm-1]. Los espectros infrarrojos se observan desde los 400 o 500 cm -1 a los 4.000 cm-1, rango en el cual
se producen las transiciones vibracionales asociadas a la mayora de los grupos funcionales presentes
en molculas orgnicas y algunas molculas inorgnicas.
Los espectros infrarrojos se obtienen en pastillas de bromuro de potasio anhidro que contienen
aproximadamente un 2% de la muestra. Los resultados se analizan identificando las principales seales
de los espectros y se utilizan para comparar con los resultados cromatogrficos. Luego, los espectros de
absorcin se comparan, testigos con muestras incriminadas.
Espectro de absorcin IR de goma laca testigo
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UADER
UNIDAD XI: COTEJO PERICIAL DE TIERRAS

Introduccin
Si se realizara un corte transversal en un lugar determinado, la tierra mostrara un patrn
estratificado, formado por capas, cada una de las cuales se denomina horizonte, y al conjunto de capas
presentes, perfil del suelo. A pesar de que los suelos difieren mucho, casi todos consisten de dos o ms
capas horizontales, ubicadas una sobre otras. En el perfil de un suelo tpico se reconocen tres horizontes
principales: A, B y C. El horizonte A0 es el ms superficial y en l se acumulan hojas, restos de plantas
muertas, de animales, etc. El horizonte A acumula el humus por lo que su color es muy oscuro. El agua
de lluvia lo atraviesa, disolviendo y arrastrando hacia abajo iones y otras molculas. A esta accin se le
llama lavado del suelo y es mayor cuando la pluviosidad es alta y la capacidad de retencin de iones
del suelo es baja (suelos poco arcillosos). En los climas ridos el lavado puede ser ascendente, cuando
la evaporacin retira agua de la parte alta del suelo, lo que provoca la llegada de sales a la superficie
(salinizacin del suelo). Por debajo del horizonte A, se encuentra el B o subsuelo, que es la zona de
infiltracin y acumulacin de los minerales lixiviados desde arriba, su color es ms claro que el horizonte
A y contiene ms arcilla. Ms abajo est el horizonte C que es la roca madre original de la cual se deriva
el suelo.
Los componentes inorgnicos de los suelos comprenden pequeos fragmentos de roca y de

minerales de varias clases. El tamao de las partculas vara en tamao desde grandes cantos rodados
hasta partculas pequeas de arcilla que tienen menos de 2m de dimetro. Las cuatro clases de
partculas inorgnicas son: arena gruesa, arena fina, limo y arcilla.
Tipo de suelo
Arena gruesa
Arena fina
Limo
Arcilla
Dimensin
Muy gruesas
Gruesas
Finas
Muy finas
Visible usando
A simple vista
A simple vista
Al microscopio
Al microscopio electrnico
Tamao de la partcula (mm)

0,2 - 2,0
0,02- 0,2
0,002 - 0,02
< 0,002
En todo suelo hay materia orgnica, llamada humus. En un suelo del desierto puede estar en una
proporcin del 1%, mientras que en la turba la proporcin llega al 100%. Una cifra media comn a
bastantes suelos sera la de un 5% (2% de carbono). Est formada por restos de organismos muertos,
excreciones, etc.; tan profundamente transformados que ya no puede advertirse, normalmente, su
estructura original.
Su composicin qumica es muy variada, pero conforme pasa el tiempo los productos orgnicos que
son ms fcilmente degradables van desapareciendo, al final van quedando en mucha ms proporcin
las molculas orgnicas con enlaces resistentes a la degradacin biolgica (molculas aromticas con
abundancia de ciclos y anillos, fenoles, funciones cidas, etc.,).
El humus se encuentra, en su mayor parte, adherido a la arcilla
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Estudio Forense. Toma de Muestras.

Este tipo de muestras resulta de sumo inters en numerosos casos delictivos, como cuando se
intenta determinar si un sospechoso estuvo en determinado lugar, a travs de las tierras adheridas a su
calzado, si un vehculo estamp las huellas que se encontraron en el lugar de los hechos, etc.
Cuando un suelo embarrado es pisado por un calzado o los neumticos de un vehculo, en los
dibujos de la suela o el caucho queda adherida la tierra, que slo puede retirarse por lavado o con la
ayuda de algn elemento de raspado. Cuando la tierra est seca en cambio, la adherencia es menor y
ms lbil. Por otro lado, el suelo mojado (barro) adhiere una tierra ms rica, en la que las partculas
grandes quedan incluidas, en tanto en la tierra seca estas partculas mayores caen por su propio peso.
En caso de ser arena, las partculas minerales quedan adheridas con mucha facilidad, en los surcos y en
los pliegues de las telas.
Un pie calzado o un neumtico adhieren la tierra de la superficie del lugar, sin alcanzar mayor
profundidad que la determinada por la dureza del terreno. Por lo tanto, a la hora de tomar la muestra del
lugar del hecho para cotejar con la incriminada, es necesario recordar que la muestra no debe ser
tomada con pala, ahondando en profundidad, ya que la tierra se presenta estratificada y con diferencia
de escasos centmetros puede hallarse composicin diferente. Por ello, se aconseja la toma de muestra
de la tierra del suelo mediante cuchara o elemento similar, que recoja slo la tierra superficial, que es la
que esperamos hallar adherida a los objetos en estudio. Slo en casos de enterramientos, como por
ejemplo si se ha utilizado una pala para enterrar un cadver y en la misma qued tierra adherida, est
indicado efectuar excavacin y una vez delimitado el hoyo, tomar mediante cuchara una muestra de
cada estrato del mismo, a fin de determinar cual de ellos posee igual composicin que la adherida a la
pala.
La toma de muestra de los vehculos debe realizarse de entre los dibujos de los neumticos y
paralelamente de los pasaruedas, ya que de los primeros puede desprenderse la tierra originalmente
adherida por el rodamiento, la cual se pega en los pasaruedas quedando adherida hasta tanto no sea
retirada voluntariamente. En los calzados, debe tomarse fundamentalmente la tierra incrustada en las
suelas, como tambin en las partes superiores. Tambin suele ser de inters levantar del interior de un
vehculo la tierra depositada en las alfombras. Con respecto a las tierras adheridas a las ropas, cuando
sta es escasa puede recurrirse al lavado de la prenda y posterior tamizacin del agua para recoger la
tierra desprendida, que luego se seca en estufa.
Al levantar la tierra del lugar, debe tenerse en cuenta que un mismo terreno puede poseer tierras
diferentes en distintos sectores por lo que es conveniente tomar varias muestras de distintos lugares,
convenientemente rotuladas, numeradas e indicadas en un croquis del lugar. Tambin debe hacerse
hincapi en levantar todo tipo de elemento extrao hallado sobre la tierra, como ser partculas de
ladrillos, de carbn, pastos secos, semillas, etc., porque alguno de estos elementos puede ser hallado en
el objeto a peritar.
Mtodos de Anlisis.
Para desarrollar la tcnica se requiere un laboratorio mnimo en el que se cuente con:
-
Balanza de precisin
Microscopio comparador
Tamices
Centrfuga
Estufa
Espectrofotmetro
La tcnica propuesta se desarrolla en una serie de pasos, en los que se van cotejando diversos
parmetros, de manera que al final, la igualdad de comportamiento de las muestras en todos los pasos
permitir dar un resultado positivo, en tanto que si dos o ms pasos arrojaron resultados diferentes,
podr afirmarse que las tierras son diferentes entre s.
Dado que la posibilidad de adherirse a las prendas, calzados o neumticos, las partculas de mayor
peso presentes en las tierras, es menor que la del resto del material, el cotejo completo se realiza slo
con la fraccin fina de la muestra recolectada, esto es la que pasa por un tamiz de malla determinada. El
resto del material se observa macro y microscpicamente para determinar si existe el mismo tipo de
partculas; en caso de hallarse faltantes en la muestra dubitada, se debe sospechar la prdida de las
mismas, lo que no invalida la posibilidad de un cotejo positivo
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Primeramente se procede al secado y disgregacin de la tierra que ser objeto del examen. Luego,
se procede a la tamizacin para separar la fraccin gruesa (impurezas de tamao considerable: trocitos
de ladrillo, pasto, carbn, vidrios, etc.) de la fraccin fina. Ambos se estudiarn por separado.
En el caso de la fraccin gruesa, se procede al examen con lupa e iluminacin adecuada, en busca
de partculas identificables; todos ellas se discriminarn por tipo y se reservarn en bolsas de nylon
celofn.
Luego, se determina la densidad de la fraccin fina, lo que se vincula directamente con su
composicin: cuanto mayor cantidad de componentes orgnico arcillosos contenga, frente a
componentes minerales, menor ser la densidad. Para su determinacin se toman tantas probetas de
10 ml como muestras se cotejan, se tara cada una de ellas y se pesa en las mismas entre 1 y 3 gr. de la
fraccin fina de la muestra de tierra a cotejar. Seguidamente se agrega agua destilada sobre la tierra,
agitando bien para su suspensin total, lavando las paredes de la probeta a medida que se va llenando,
y enrasando en la marca de 10 ml de cada probeta. La probeta con agua y tierra se vuelve a pesar.
El clculo de densidad se realizar por el clsico mtodo de picnometra para la determinacin de
densidad de slidos que tiene en cuenta que si la probeta contena solo agua hasta la marca de 10
pesara 10 gr. (dado que se trabaja con agua destilada), y por otro lado la tierra sola pesa 1 a 3 gr.,
segn la cantidad elegida. Al agregar la tierra en la probeta este desplaza un volumen de agua igual al
propio, por lo que si enrasamos la probeta a 10, la diferencia entre las dos pesadas es el peso del agua
desplazado por la tierra.
Se procede luego a la determinacin del pH, que normalmente arroja resultados constantes. Sin
embargo, en caso de existir alguna sustancia de inters forense depositada en las tierras, la variacin del
pH que puedan provocar resulta un elemento de cotejo relevante.
La bibliografa recomienda luego un estudio de sedimentacin (directo y por centrifugacin), con
posterior extraccin de sedimento, secado sobre papel de filtro, con determinacin y cotejo de color,
textura, etc. para lo cual no son indispensables conocimientos en geologa, sino que se recurre a tablas
especializadas (tabla Munsell de colores) y cotejo directo con la muestra y los testigos.
Finalmente, se puede examinar la muestra bajo microscopio de comparacin, someterse a
espectrofotometra (el sobrenadante de la centrifuga) analizar los componentes orgnicos de la tierra
mediante cromatografa gaseosa-espectrometra de masas, segn la disponibilidad material. Para esto
ltimo se procede a la extraccin de los componentes del sobrenadante de la centrfuga mediante
cloroformo a pH cido, neutro y alcalino, juntando los extractos para realizar una nica corrida.
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UADER
UNIDAD XII: ESTUDIO DE PLEN

Introduccin.
Polen es el nombre colectivo de las microsporas (granos de polen) de las plantas con semilla
(espermatfitos). El grano de polen tiene una cubierta resistente que facilita su viabilidad mientras es
transportado de la planta que lo ha originado a otra (proceso de polinizacin). Se llama Palinologa al
estudio del polen en todos sus aspectos.
El grano de polen contiene un individuo masculino reducido a dos o tres clulas. Una vez ocurrida la
polinizacin, una vez llegado el grano de polen a la superficie receptiva en la planta de destino, se
produce su germinacin. Del grano surge el tubo polnico, que es una emanacin de citoplasma a travs
de la cual migran los ncleos masculinos en direccin a la oosfera (el gameto femenino) y el ncleo polar
(en las angiospermas hay una fecundacin doble).
El polen de las plantas anemfilas (conferas, gramneas) es seco y poco denso, pequeo o con
sacos areos. El de las plantas zofilas (jaras, amapolas) suele ser rugoso y adhesivo, por la presencia
de ciertos aceites, lo que facilita que se agregue y, sobre todo, que se adhiera al cuerpo de los
polinizadores. El polen aceitoso de las plantas entomfilas (rosas, claveles) es muy nutritivo y es la
recompensa que reciben muchos agentes, sobre todo los menos especializados, como los escarabajos.
Granos de polen de diferentes plantas
Los granos de polen son estructuras microscpicas, de 10-60 micras (m) de dimetro, por lo general
redondeadas u ovaladas, en cuyo interior se encuentra el material reproductor. Para proteger dicho
material, el grano de polen est recubierto por dos membranas protectoras: una externa (llamada EXINA)
y otra interna ms delgada (llamada INTINA)
Tanto la Intina como la Exina no son murallas infranqueables, ya que tienen que dejar pasar el
material gentico cuando la planta es fecundada. Ello ocurre a travs de los POROS, o a travs de
surcos alargados (llamados COLPOS). Dependiendo del nmero de Poros que tenga un polen, se puede
clasificar en Monoporado, Biporado, Triporado, Multiporado, etc., y si lo que tiene son Colpos, en
Bicolpados, Tricolpados, etc. Con frecuencia los plenes tienen a la vez Poros y Colpos, y en este caso
de denominan Colporados (Monocolporados, Bicolporados, etc.). Algunos plenes no tienen poros ni
colpos visibles, y se llaman "Inaperturados". Todo ello ayuda a distinguir al microscopio los distintos tipos
de polen.
Adems, la Exina (superficie exterior) tiene una textura y un relieve superficial muy diverso, y se tie
fcilmente con colorantes, lo cual asimismo sirve para distinguir los plenes al microscopio:
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UADER
Los plenes se captan con un aparato captador. Este lleva una veleta que orienta la boquilla en la
direccin de la que viene el viento. Lleva adems una bomba de vaco que aspira un flujo constante de
aire a travs de la boquilla, de forma que los plenes impactan en una cinta plstica impregnada de
vaselina que se encuentra situada en un cilindro que efecta un giro completo cada semana.
Cada semana se cambia la cinta, y la cinta de la semana anterior se corta en fragmentos
correspondientes a cada da de la semana. Cada fragmento se coloca en una placa de cristal, se tie
con un colorante, se mira al microscopio y se identifican y cuentan los plenes que se observan. De esta
manera se pueden conocer, no slo las concentraciones de cada polen observado (en granos por metro
cbico de aire), sino tambin el da e incluso la hora a la que dichas concentraciones se han producido.
Inters Forense.
El valor forense que adquieren los granos de polen es enorme. Presentes en todo lugar y con
posibilidad de adherirse a ropas objetos, constituyen un elemento de cotejo de gran inters cuando se
desea determinar si una persona estuvo presente en un lugar donde existe un tipo de floracin particular.
Sin conocimientos en palinologa no es posible realizar una clasificacin exhaustiva que permita
determinar a que tipo de planta pertenece el polen encontrado y remitido para estudio; si es posible
realizar un cotejo directo entre una muestra incriminada y una testigo. Sin embargo, en ningn caso
sirven para realizar afirmaciones concluyentes: al igual que otras evidencias sirven para vincular
descartar tal vinculacin entre un sujeto y un lugar.
Levantamiento y Procesamiento de la Evidencia.
El polen puede ser extrado de muestras de tierra, ropas, muebles, electrodomsticos, etc. En el
primer caso, para la toma de muestras del piso suelo del lugar del hecho, se toma un trozo de gasa, de
10 x 10 cm. y se apoya en seco sobre la superficie, frotando el mismo para lograr la adhesin del polen.
Hay que tener en cuenta que el polen, al momento de adherirse a las ropas, lo hace por simple contacto
de las prendas con la superficie, por lo que la toma de muestra se debe hacer de la misma manera.
En caso de que el hecho a investigar haya transcurrido un tiempo considerablemente antes de la
toma de la muestra en el lugar, se debern tomar muestras de polen de diferentes capas de tierra,
procediendo primero a una muestra superficial y luego, con ayuda de una cuchara similar, se excavar
de a pocos centmetros por vez, tomando muestras independientes para diferentes profundidades.
El levantamiento sobre muebles objetos varios se realiza de manera anloga a lo expresado para
las muestras del suelo: frotamiento de una gasa seca sobre la superficie a peritar. Todas estas muestras
se empaquetarn en sobres de papel diferentes y se enviarn al laboratorio convenientemente rotuladas.
Ya en el laboratorio, tanto las prendas, zapatillas y gasas se someten a lavado con agua limpia,
raspando las mismas a fin de favorecer el desprendimiento de los granos que pudieran contener. Luego,
se escurren las muestras.
Con el agua del lavado el sobrenadante de la centrifugacin de cotejo de tierra, se debe rescatar el
material del medio, utilizndose para tal fin una serie de tamices (desde los 300 micrones hasta los 25
micrones) a fin de retener en el ltimo las partculas de carcter microscpico del tamao de los granos
de polen, eliminado partculas minerales no deseadas. El material recogido estar compuesto por
diatomeas, biolitos, polen, minerales, limo fino, arcilla, etc.
Se procede entonces al aislamiento de los granos de polen mediante centrifugado y posterior
agregado de una solucin de cloruro de zinc (densidad 1,9 g/cm 3). Esta solucin provoca la flotacin de
todo material de menor densidad que la misma, entre el cual se cuenta el polen. Al centrifugar
nuevamente, se podrn ver partculas flotando. El sobrenadante se trasvasa a otro tubo, que se
completa con agua y se centrifuga nuevamente, repitindose la operacin hasta no ver ms material
flotante.
Al sedimento de la ltima centrifugada se le agrega una solucin de fucsina en etanol. Al sedimento
coloreado se lo mota en un portaobjetos con gelatina, que se fija con mechero y se sella mediante
esmalte transparente y se observa al microscopio.
Estudio Microscpico.
Los granos de polen aislados, coloreados y montados en el portaobjetos son observados al
microscopio microscopio comparador para la observacin sistemtica simultanea de las muestras a
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cotejar. Una vez hecho el anlisis, los soportes se pueden conservar por tiempo indefinido pudiendo
confeccionar una archivo.
Si bien es cierto que un palinlogo puede realizar un examen completo y determinar a que planta
corresponde un grano de polen determinado, el examen que se plantea sirve en caso de contar con
muestras de cotejo; claro que, el material recuperado y analizado puede ser enviado al especialista a fin
de que oriente sobre la especie vegetal que se debe buscar, en relacin con el hecho que se investiga.
Como cualquier clula, los plenes se caracterizan por su tamao y su forma. Pero en el caso de los
granos de polen, hay otras caractersticas que los describen, como son la estructura y la escultura
(ornamentacin) de su exina y las aperturas que pueden presentar, de las que debe observarse el tipo
(poros, colpos, la combinacin de ambos o su ausencia), el nmero y la disposicin en la superficie del
grano.
El conjunto de las caractersticas de un polen es constante para cada planta y hace posible identificar
con ms o menos precisin de qu txon procede el polen. Es necesario el uso de la palabra txon (que
designa cualquier unidad de determinacin dentro de un sistema jerrquico de categoras) porque no
siempre puede identificarse de que especie procede el polen; en bastantes casos la precisin llega slo
al nivel de gnero (es decir, a un grupo de especies), familia (es decir, a un grupo de gneros), o incluso
a un grupo de familias o categoras superiores.
FORMAS DE LOS GRANOS DE POLEN
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ABERTURAS DE LOS GRANOS DE POLEN
...
.
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PARED DEL GRANO DE POLEN
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UNIDAD XIII: ESTUDIO DE PLVORAS

Qumica Balstica
Dentro de la qumica balstica se encuentran aquellos estudios que se realizan cada vez que aparece
involucrada en un hecho un arma de fuego. Esta rama de la qumica forense abarca los estudios sobre el
arma; sobre quien efectu el disparo y sobre la superficie que recibe el impacto.
Anlisis sobre el Arma
Mediante este estudio se trata de determinar si el arma secuestrada ha sido disparada, efectuando la
investigacin sobre los restos de plvora no-combustionada semi-combustionada que esta pudiera
tener en el interior del can, recmara, alvolos, etc. Cabe destacar que los restos de plvora que se
encuentran en el can sern indicativos de que efectivamente el arma ha sido disparada, ms no se
puede determinar la antigedad de los mismos, como as tambin no es posible determinar la cantidad
de estos, pues los restos de plvora de un disparo son expulsados por los gases de deflagracin del
siguiente, que a su vez deposita nuevos residuos.
Para el anlisis de plvora en el interior del can se puede aplicar la prueba de la difenilamina
sulfrica la prueba de Peter Gries-von Illoswa.
Prueba de la Difenilamina Sulfrica. El reactivo se prepara disolviendo 50 mg. de difenilamina en
2 ml. de agua destilada y agregando 10 ml. de cido sulfrico en forma lenta y refrigerando.
Para la obtencin de los restos de plvora, se procede al hisopado del interior del can, as de cmo
los alvolos recmara. Mediante un pinza se desprende el algodn sobre una caja de Petri y sobre
este se agregan unas gotas del reactivo. La presencia de granos de plvora no combustionada se revela
mediante la aparicin de hilos de color azul que parten del algodn e invaden la base de la caja de vidrio.
Esto se debe a que los iones nitrato de la plvora sin combustionar reaccionan ante la presencia del
cido sulfrico dando cido ntrico, que a su vez transforma la difenilamina en difenilbencidina, la cual se
oxida dando un cromforo, el violeta de difenilbencidina.
Prueba de Peter Gries-von Illoswa. Esta se basa en la bsqueda de los iones nitrito de la plvora
semi-combustionada. Para realizarla, en primer lugar se desensibiliza un papel fotogrfico sumergindolo
en una solucin reciente de tiosulfato de sodio al 5-10%, eliminndose as los bromuros y la plata,
quedando la capa de gelatina al descubierto. Luego, se sumerge el papel desensibilizado en una
solucin acuosa de cido sulfanlico al 0,8%, se deja secar al aire y se suspende luego en una solucin
de -naftil amina al 0,5% en alcohol metlico, dejando nuevamente secar en posicin vertical. El papel
preparado de este modo se puede guardar para ser utilizado cuando sea necesario.
Una vez obtenido el hisopo con el material obtenido del interior del can del arma, el mismo se retira
mediante pinza y se sacude el material adherido para que se desprenda y caiga sobre el papel
fotogrfico. Se coloca encima del mismo un trozo de gasa seca, posteriormente un trozo de gasa mojada
y escurrida con cido actico al 25% y sobre el conjunto se apoya una plancha caliente durante 1-2
minutos. Al retirar la plancha se observarn sobre el papel mculas rojo-anaranjadas, correspondientes a
los granos de plvora semi-combustionada.
Esta reaccin tiene su fundamento en la reaccin de diazotacin del cido sulfanlico en presencia del
nitrito y una posterior copulacin con la -naftil amina formando una sal que presenta color.
Anlisis sobre las Manos del Autor
Dermotest
La prueba del guantelete de parafina, desarrollada para determinar si una persona ha disparado un
arma de fuego, a travs de la deteccin de sustancias oxidantes (como los nitratos presentes en la
plvora) mediante reactivo de difenilamina sulfrica, es una de las pruebas ms cuestionadas de la
qumica forense. Este se debe a que:
a) Una prueba de parafina positiva no indica necesariamente que la persona haya disparado
una arma de fuego.
68
UADER
b) Una prueba de la parafina negativa no indica necesariamente que la persona no haya

disparado un arma de fuego.
A nivel mundial la prueba de la parafina se sigue usando nica y exclusivamente como medio de
orientacin pero jams de certeza, (en policas de reciente formacin, que no tienen laboratorio ni
tcnicos especializados) ya que esta es una prueba para observar nitratos y nitritos en la plvora, y la
plvora no tiene slo esos componentes. Adems, esta famosa Prueba de Parafina, en la que se busca
nitrito y nitratos, da resultado positivo cuando la persona manipula, entre otros los siguientes elementos:
fertilizantes; algunos cosmticos; algunos alimentos; tierra; tabaco; orina; toda sustancia oxidante;
blanqueadores; detergentes; etc.
Deteccin de Plomo, Bario y Antimonio
La tcnica que a continuacin se describe, fue desarrollada en el Divisin Criminalstica de la polica
de la provincia de Entre Ros, a fin de hacer lo ms sencilla posible la recoleccin de la muestra,
generalmente a cargo de personal no-especializado, y chequeando toda posibilidad de interferencia a fin
de dar el valor de certeza deseado. Se modificaron varios pasos de tcnicas descritas por otros autores,
aumentando la sensibilidad de la prueba, disminuyendo la probabilidad de falsos positivos y simplificando
al mximo la tarea operativa.
La toma de muestras se efecta mediante cinta adhesiva transparente base celofn, aplicando sobre
los sectores de cada mano donde se supone se encuentran los restos de deflagracin, es decir, parte
superior de los dedos ndice y pulgar y el espacio interdigital entre ambos hasta la mueca (tambin,
cara, brazos, pecho, etc. en caso de armas largas). Efectivizada la toma, se monta cada cinta en un
portaobjetos limpio.
La cintas se procesan de a una por vez. Primero se retira la cinta del porta y se coloca en una caja de
Petri y se sumerge en solucin acuosa de cido clorhdrico al 1% p/p durante 1 min.; posterior a este, se
retira y se escurre por leve agitacin. Luego, sumergir en buffer de pH 3 (1,9 gr. de bitartrato de sodio;
1,5 gr. de cido tartrico; 100 ml. de agua destilada) durante 1 min. Paralelamente, colocar reactivo de
radizonato de sodio al 0,2% de preparacin reciente sobre el porta y aplicar sobre este la cinta,
previamente escurrida.
Se debe observar al microscopio a 10x. La aparicin de precipitados color violeta-fucsia rojo-fucsia,
revelan la presencia de plomo del proyectil y/o fulminante. Cuando estos precipitados sean de color
pardo-rojizo, se est en presencia de bario procedente del fulminante.
Una vez practicada la reaccin anterior, se coloca la cinta en otra caja de Petri y se lava con solucin
de cido clorhdrico 6N durante 1 min. Se deposita sobre un portaobjetos unas gotas de solucin acuosa
de cido fosfomolbdico al 5%; aplicar la cinta con el mismo lado engomado hacia el vidrio y observar al
microscopio a 10X.
La aparicin de mculas puntuales de color azul que rodean a un ncleo oscuro revelan la presencia
de antimonio proveniente del fulminante (aunque hay proyectiles que contienen este elemento en su
composicin)
Anlisis sobre el Blanco
Primeramente mencionar, que en caso de disparos con arma de fuego, el tipo y cantidad de indicios
balsticos que arriben al punto de impacto dependern de la distancia de disparo y de si hubo materiales
interpuestos entre el arma y la superficie.
69
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En base a la dispersin de los grnulos de plvora (no-combustionada y semi-combustionada) es

posible determinar qumicamente un intervalo en el que fuera posible encontrar una distribucin como la
del objeto a peritar.
En caso de tener que realizar el anlisis sobre tela (prenda que vesta la vctima) se debe aplicar la
tcnica de Peter Gries-von Illoswa descrita precedentemente, utilizando un papel fotogrfico de tamao
acorde para poder visualizar claramente la imagen de la dispersin.
Si el estudio se debe realizar sobre piel humana, se aplicar sobre la zona de impacto una cinta
adhesiva de muy buena calidad, retirando la misma para practicar la bsqueda de metales (plomo, bario
y antimonio)
En ambos casos, una vez obtenido la imagen de dispersin de los indicios balsticos, se debe
proceder a la ejecucin de disparos de cotejo sobre superficie acorde a la situacin, utilizando el arma
incriminada (en caso de tenerla, sino no corresponde hacerlo con otra) a diferentes distancias. El cotejo
directo entre la dispersin incriminada y las testigos arrojar un resultado posible respecto de la distancia
aproximada a la que pudo ser ejecutado el disparo.
70
UADER
BIBLIOGRAFA
Apuntes de la ctedra.
CARO, P. y otros. (2004). Manual de qumica forense. Buenos Aires: La Rocca.
DEEDRICK, D; KOCH, S (2004). Microscopy of hair. Forensic Science Communications [Online].
January 2004 Volume 6 Number 1. Disponible: http://www.fbi.gov/hq/lab/fsc/current/backissu.htm
MACHADO SCHIAFFINO, C. (1995). Pericias. Buenos Aires: La Rocca.
SIEGEL J., KNUPFER G., SAUKKO P. (Ed.)(2000) Encyclopedia of forensic sciences, ThreeVolume Set, 1-3. Ed. Elsevier.
Varios Autores. (1983). Tratado de criminalstica. Tomo II. Buenos Aires: Editorial Policial.
http://www.cienciaforense.com.cl
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http://www.lap.uab.cat
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71

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Facultad de Ciencia y Tecnologa

Prof. Lic. Ral Cerolini

UNIDAD II: MANCHAS de SEMEN

UNIDAD III: ANLISIS de ADN en GENTICA FORENSE

UNIDAD IV: ANLISIS PERICIAL de PELOS

UNIDAD V: REVENIDOS QUMICOS

UNIDAD VI: MTODOS INSTRUMENTALES de ANLISIS QUMICOS

UNIDAD VII: ESTUDIO de VIDRIOS

UNIDAD VIII: ESTUDIO de INCENDIOS

UNIDAD IX: ESTUDIO DE FIBRAS

UNIDAD X: PLSTICOS y PINTURAS

UNIDAD XI: COTEJO PERICIAL de TIERRAS

UNIDAD XII: ESTUDIO de POLEN

UNIDAD XIII: ESTUDIO de PLVORAS

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UNIDAD V: REVENIDOS QUMICOS

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Arriba, Esquema del corte del metal en el que se ha realizado la marcacin.

Abajo, mismo corte, en el que se ha realizado el limado de la marcacin.

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UNIDAD VI: MTODOS INSTRUMENTALES DE ANLISIS QUMICOS

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