Seminar CEEX ERPISA

14 decembrie 2006

Metode neconventionale de
reducere a unor contaminanti
prezenti in medii naturale

Academia Romn
Institutul de Biologie Bucureti
Centrul de Microbiologie
COLECTIVUL DE CERCETARE:
Dr. Mugur tefnescu CS III Responsabil proiect
Dr. Anca Voicu CS I
Dr. Mihaela Marilena Lzroaie CS
Maria Neagu - Contabil ef
Ana Dinu Asistent I
Daniela Mielu Asistent III

Partener n cadrul Proiectului de Cercetare Evaluarea i remedierea polurii istorice

a stratelor acvifere prin tehnologii neconvenionale ERPISA

OBIECTIVELE PROIECTULUI DE
CERCETARE

Studiul documentar al tehnologiilor microbiene de remediere.

Prelevarea probelor din siturile contaminate i studiul microbiotei

indigene.

Izolarea i selectarea microorganismelor hidrocarbon-oxidante;

estimarea potenialului degradativ al contaminanilor petrolieri.

Studii privind capacitatea de biosintez a unor metabolii cu rol n

optimizarea biodisponibilitii i conversiei contaminanilor petrolieri.

Experimente de simulare n laborator privind atenuarea gradului de

poluare, utiliznd microorganisme hidrocarbon-oxidante performante.

Elaborarea protocolului de lucru al biotehnologiei propuse, n vederea

aplicaiilor in situ.

REMEDIEREA MEDIILOR CONTAMINATE CU HIDROCARBURI

- principalele aspecte abordate -

Habitate poluate cu
reziduuri petroliere

Ape reziduale din industria petrolier

lamuri petroliere
Soluri i sedimente din schele i parcuri
petroliere
Ape de suprafa
Acvifere din judetul Prahova
Ap de mare zona Constana

IZOLAREA DE TULPINI MICROBIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE

METOD
METOD RAPID
RAPID DE SCREENING A MICROORGANISMELOR HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE
CARACTERIZAREA TULPINILOR BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE
OB
OBINEREA DE COMPU
COMPUI TENSIOACTIVI BACTERIENI
TOLERAN
TOLERANA UNOR TULPINI BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE LA DIFERITE TIPURI DE HIDROCARBURI,
INCLUSIV BTX
REZISTENTA TULPINILOR
TULPINILOR BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE LA DIFERITE TIPURI DE ANTIBIOTICE
STUDIUL RESPIRA
RESPIRAIEI CELULARE N PREZEN
PREZENA HIDROCARBURILOR
SELECTAREA DE TULPINI BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE HALOTOLERANTE
GRADUL DE HIDROFOBICITATE AL SUPRAFE
SUPRAFEELOR CELULARE N PREZEN
PREZENA DIFERITELOR TIPURI DE
HIDROCARBURI

ROLUL SINERGISMULUI MICROBIAN N DEGRADAREA IEIULUI BRUT

STIMULAREA ACTIVITII BACTERIILOR HIDROCARBON-OXIDANTE PRIN

ADAOS DE NUTRIENI

STIMULAREA BIODEGRADRII IEIULUI BRUT PRIN MBUNTIREA

TRANSFERULUI DE MAS AL CONTAMINANTULUI

INFLUENA NATURII I CONCENTRAIEI SUBSTRATULUI PETROLIER

ASUPRA BIODEGRADRII ACESTUIA

DINAMICA ACTIVITII DEHIDROGENAZICE N CURSUL BIODEGRADRII

IEIULUI BRUT

STUDII DE MICROSCOPIE ELECTRONIC PENTRU EVIDENIEREA

MODIFICRILOR STRUCTURALE INDUSE DE HIDROCARBURI BACTERIILOR
HIDROCARBON-OXIDANTE

EXPERIMENTE DE LABORATOR DE SIMULARE A PROCESULUI DE

BIOREMEDIERE A SOLULUI POLUAT CU IEI BRUT I LAM PETROLIER

EXPERIMENTE DE BIOREMEDIERE A SOLULUI POLUAT CU LAM

PETROLIER DIN PARCURI PETROLIERE

BIOREMEDIEREA = BIOTEHNOLOGIA MEDIULUI

POLUAT, BIOREMEDIATION, ENVIRONMENTAL
BIOTECHNOLOGY

MICROORGANISME UTILIZATE N
BIOREMEDIERE:

DEFINIIE:
Eliminarea cu ajutorul microorganismelor
a poluanilor din mediu transformarea
poluanilor toxici n compui netoxici, fr
afectarea mediului.

S provin din natur, de preferin din

situsul poluat supus bioremedierii.
S nu fie rezultatul unor activiti de
manipulare genetic.
S nu fie patogene sau toxice.
S manifeste flexibilitate metabolic.
S posede echipament enzimatic
adecvat.
S se dezvolte pe seama agentului
poluant, disprnd odat cu
mineralizarea total a acestuia.
S se integreze n condiiile naturale ale
habitatului, fr s afecteze echilibrul
biologic.
S nu produc efecte nedorite care s
contravin legislaiilor i normelor de
protecie a mediului.

AGENTUL POLUANT

PUNCT
CONTACT

MICROORGANISME

PARAMETRI FIZICO-CHIMICI
(N, P, Mg, K; O2; t0; pH;
umiditate; etc.)

CO2, H2O, biomas microbian,

ali compui netoxici

Elementele implicate n procesul de bioremediere (triunghiul bioremedierii)

PRINCIPALELE CATEGORII DE AGENI POLUANI DEVERSAI N MEDIU

COMPUI ANORGANICI

COMPUI ORGANICI

Metale volatile
Metale nevolatile
Azbest
Materiale radioactive
Cianuri anorganice

Halogenai volatili (H VOCs)

Halogenai semivolatili (H SVOCs)
Nehalogenai volatili (NH VOCs)
Nehalogenai semivolatili (NH SVOCs)
HIDROCARBURI
Pesticide
Bifenili policlorurai (PCBs)
Dioxine, furani
Cianuri organice

COMPUI REACTIVI

Oxidani
Reductori

ETAPELE IMPLEMENTRII BIOTEHNOLOGIILOR ADECVATE

DE REMEDIERE A MEDIULUI POLUAT
Descrierea sitului poluat

Caracterizarea mediului

- fizic
- chimic
- geologic
- climatic
- microbiologic
- vegetaie, etc.

Evaluarea gradului de risc

- identificarea surselor de (hazard) poluare

- identificarea cilor de poluare i a intelor de poluare
- evaluarea probabilitii consecinelor (nalt, medie, sczut, neglijabil)
- evaluarea magnitudinii consecinelor (sever, moderat, blnd, neglijabil)

BIOREMEDIEREA MEDIULUI POLUAT CU HIDROCARBURI

BIOREMEDIEREA INTRINSEC
(bioremedierea pasiv, atenuare natural)

BIOREMEDIEREA STIMULAT

Biodegradare
Evaporare
Sorbie
Degradare chimic (fotooxidare, autooxidare)
Dispersie
Dizolvare

IN SITU
EX SITU

Parametri optimizai:
aport O2
nutrieni
- macroelemente (N, P)
- microelemente (S, K, Mg, Ca, Mn, Fe, Na, Co, Cu, Mo, Zn)
raport echilibrat C:N:P i C:S
co-metabolii
microorganisme hidrocarbon-oxidante

MICROORGANISME HIDROCARBON-OXIDANTE

BACTERII:

CIANOBACTERII:

Achromobacter, Acinetobacter,
Actinomyces, Alcaligenes, Arthrobacter,
Bacillus, Brevibacterium,
Corynebacterium, Flavobacterium,
Micrococcus, Mycobacterium, Nocardia,
Pseudomonas, Spirillum, Vibrio

Anabaena, Nostoc, Oscillatoria

LEVURI:

Candida, Rhodotorula, Saccharomyces

FUNGI FILAMENTOSI:

Aspergillus, Cladosporium, Fusarium,

Penicillium, Graphium, Trichoderma,
Paecilomyces

ALGE:

Amphora, Chlorella, Chlamydomonas,

Dunaliella, Porphyridium, Ulva

CARACTERISTICI FIZIOLOGICE ALE MICROORGANISMELOR

HIDROCARBON-OXIDANTE
Adeziunea celulelor microbiene la suprafee hidrofobe
Sinteza de compui tensioactivi cu proprieti emulsionante
Sisteme de transport a hidrocarburilor prin membranele celulelor
Utilizarea hidrocarburilor ca unic surs de C i energie, n mod selectiv:
1. n-parafine (n-alcani)
2. izoparafine (izoalcani)
3. aromatice mononucleare
4. cicloparafine (cicloalcani, naftene)
5. aromatice polinucleare (PAHs)
6. asfaltene

Donori de electroni = hidrocarburi

BIODEGRADAREA
HIDROCARBURILOR

Reaciii enzimatice
- oxigenaze
- dehidrogenaze
- hidrolaze

Acceptori de electroni

Calea aerob:
O2 CO2, H2O, biomas
Calea anaerob:
NO3, NO2, Fe3+, Mn4+, SO42-,
CO2 N2, Fe2+, Mn2+, S2-, CH4

FACTORII CARE INFLUENEAZ BIOREMEDIEREA MEDIILOR

POLUATE CU REZIDUURI PETROLIERE
FACTORI
FIZICI

caracteristicile mediului poluat (permeabilitate, porozitate, granulozitate, etc.)

prezena O2
umiditate
temperatur
pH, Eh
aderena poluantului la particulele de sol sau sedimente

FACTORI
CHIMICI

natura i concentraia poluantului

gradul de toxicitate al poluantului
concentraia compuilor toxici
solubilitatea poluantului (>1000 mg/l)
bioaccesibilitatea poluantului
prezena sau absena unui co-substrat
salinitatea mediului
prezena nutrienilor accesibili
coninutul organic din mediu
biodegradabilitatea poluantului (BOD/COD>0,1)

FACTORI
BIOLOGICI

densitatea microorganismelor indigene capabile s degradeze poluantul

PROCESE MOLECULARE I BIOCHIMICE DE ADAPTARE A

MICROORGANISMELOR LA AGENI POLUANI (inclusiv xenobiotici)
9 Inducerea sistemelor enzimatice specifice substratului
9 Dezvoltarea unei subpopulaii specifice
9 Selecia de mutante
9 Mecanisme genetice de aprare

TEHNOLOGII DE BIOREMEDIERE
BIOREMEDIEREA SOLULUI

IN SITU:

EX SITU:
Bioreactoare
Land farming
Bioslurry
Biopile
Composting (static / agitare mecanic)

BIOREMEDIEREA APELOR
SUBTERANE
EX SITU:

IN SITU:

Bioaugmentare (enhanced bioremediation)

Land treatment
Co-metabolism
Bioslurry
Bioventilare (bioventing)
Biosparging
Biofiltrare
Stimulare cu ageni tensioactivi
Fitoremediere

Bioaugmentare (enhanced bioremediation)

Bioventilare (bioventing)
Barbotare cu aer
Biofiltrare
Biosparging
Co-metabolism
Stimulare cu ageni tensioactivi
Bariere permeabile / impermeabile

Bioreactoare

BIOREMEDIEREA MEDIULUI
MARIN

Bioaugmentare
Stimulare cu ageni tensioactivi
Utilizare de resturi vegetale adsorbante

Bioremedierea solurilor
Tehnologii IN SITU

Biotehnologie bazat pe stimularea procesului de degradare a contaminanilor din sol

prin injectarea de aer atmosferic, nutrieni (azot i fosfor)
Destinat decontaminrii IN SITU a POLs (petroleum, oils and lubricants)
FACTORI LIMITANI:

Slab aerare a solului

Saturare cu ap a solului
Procente reduse de nutrieni (azot si fosfor)
Biodegradare aerob redus, prin cometabolism sau anaerobioz
Temperatura sczut

Bioremedierea solurilor
Tehnologii IN SITU

BIOREMEDIEREA SOLURILOR CONTAMINATE PRIN

INJECIE DE AP OXIGENAT

Aplicat n situri cu poluare constant i n pnza de ap freatic

CONTAMINANI
Hidrocarburi petroliere
BTEX
MTBE
VOCs
Compui halogenai
Ioni metalici

EFECTE
- Stimularea microbiotei existente
- Creterea vitezei de bioremediere prin
circulaia apei n sol
- Metabolizarea aerob a contaminanilor,
declorurarea acestora, imobilizarea IN SITU a
metalelor dizolvate, prin aportul de O2

ENHANCED BIOREMEDIATION
(BIOSTIMULARE, BIOAUGMENTARE)
Bioremedierea solurilor
Tehnologii IN SITU

Biotehnologie de cretere a ratei de biodegradare a

solului contaminat, prin aport de nutrieni i oxigen,
dizolvai n ap de injecie. Activitatea microbian este
stimulat prin circulaia apei, suplimentat cu inocul
Proces aerob sau anaerob

CONTAMINANI

PAHs
SVOCs
BTEX
pesticide

LAND FARMING

Bioremedierea solurilor
Tehnologii EX SITU

Excavare, etalare pe o
platform ce permite
colectarea fluidelor de
drenaj, amestecare

Monitorizare
Tratament ntrerupt n sezonul rece

Tehnologie de remediere EX SITU a solului

contaminat, prin umezire, aerare, aport de
nutrieni i ageni de gonflare, pentru
favorizarea aerrii i circulaiei fluidelor, n
vederea creterii ratei de degradare
microbiene a contaminanilor

CONTAMINANI
SVOCS
VOCS
PAHS
HO
NHO
P

BIOPILES
Bioremedierea solurilor
Tehnologii EX SITU

Biotehnologie derivat din metoda Land Farming, bazat pe ridicarea solului contaminat
n movile de civa metri nlime, asigurndu-se aerarea i umiditatea + aportul de
nutrieni. Contaminanii sunt redui la CO2 i H2O, n interval de 3-6 luni

COMPOSTING
Bioremedierea solurilor
Tehnologii EX SITU

Biotehnologie care comparativ Land

Farming-ului
necesit
condiii
termofile (55-60 C) ce favorizeaz
activitile bio-degradative.
Solul
poluat
cu
contaminani
biodegradabili este aditivat cu ageni
de gonflare de tipul: paielor, fnului,
pnuelor de porumb, care permit
buna circulaie a apei i a aerului,
elemente indispensabile
metabolismului microbian aerob.

TIPURI DE TEHNOLOGII

STATIC PILE COMPOSTING

Movilele sunt aerate prin suflante
sau pompe
MECHANICALLY AGITATED IN
VESSEL COMPOSTING
solul contaminat este plasat n
utilaje care realizeaz amestecarea
i aerarea
WINDROW COMPOSTING
plasare n movile lungi, amestecate
periodic cu utilaje specifice

BIOREMEDIEREA APELOR SUBTERANE

Tehnologiile de depoluare a
(Bioventing)
acioneaz
i
decontaminrii apelor subterane

solurilor
asupra

TRATAREA APELOR SUBTERANE

n sistem recirculare

Sonde de extracie
Tratarea microbian, la suprafa, prin adaos
de nutrieni i oxigen n apele extrase
Tratamente aerobe (oxygen respiration)
- reducerea hidrocarburilor petroliere contaminante
alifatice (Hexan) i aromatice (Benzen, Naftalen)
Tehnologii: Direct sparging of air
Injection well oxygen
Saturarea cu ap cu un volum rodicat de
aer sau oxigen
Adiia de ap oxigenat
Tratamente anoxice (nitrat respiration)
Tratamente anaerobe (non-oxigen respiration)
Tratamente co-metabolice
Contaminani: solveni clorurai

Deversarea apelor decontaminate n ape de

suprafa

PARAMETRI
Conductivitatea hidraulic a acviferului
Biodegradabilitatea contaminanilor
Microbiota indigen

AIR SPARGING BIOREMEDIATION

(IN SITU AIR STRIPPING; IN SITU VOLATILIZATION)

Tehnologie IN SITU de reducere a

constituenilor volatili ai contaminanilor
petrolieri adsorbii n sol i dizolvai n
apa subteran

Injecia de aer n subteran favorizeaz

volatilizarea contaminanilor

GLOSAR
(termeni biotehnologici cu utilizare frecventa)

Adverse effect
Benthic

Bioassay

Bioavailable
Biota
Bioturbation

Capping

Ecological status

EQS
Groundwater

reduced chemical or ecological status

living in, on or closely associated with aquatic
sediment at some life stage
laboratory or field experiment, in which a lower
species is exposed to whole sediment, or its pore
contaminants are available in such a quantity that it
causes a toxic effect to this test species (Brils et al.,
1997)
available to living organisms
living organisms
resuspension of settled sediment due to activity of
biota
covering of contaminated sediment with clen
sediment
expression of the quality of the structure and
functioning of aquatic ecosystems associated with
surface water
Environmental Quality Standard
all water which is bellow the surface of the ground in
the saturation zone and in direct contact with the ground or
subsoil

Hazard

set of inherent properties of a contaminant which makes it capable

of causing adverse effect (van Leeuwen and Hermens, 1995)

HOC
Hyporheic

Hydrophobic Organic Compounds

Impact
Management
Model ecosystem

PAH
PCB
Pelagic
Pollution

POP
Risk

saturated sediment zone, under and laterally adjacent to freshwater

bodies where there is active exchange between ground water and
surface water (Palmer et al., 2000)
an observable, adverse effect
a set of continuous interventions in order to achieve sustainability
intermediate sized systen, such as a dug-out pond or in situ
enclosure, that can be replicated and manipulated to test both
structural and functional parameters, representative for ecosystem
(Touart, 1994)
Polycycling Aromatic Hydrocarbon (hazardous compound)
Polychlorinated Byphenyle (hazardous compound)
living in the water column
the direct or indirect introduction, as a result of human activity, of
substances or heat into the air, water or land which may be harmful
to human health or the quality of aquatic ecosystems or terrestrial
ecosystems directly depending on aquatic ecosystem, which result
in damage to material property, or interfere with amenities and
other legitimate uses of environment
Persistent Organic Polutant (hazardous compound)
the probability of an adverse effect from a given exposure to a
contaminant (van Leeuwen and Hermens, 1995)

Sediment

suspended or deposited solids, of mineral as well as organic nature,

acting as a main component of a matrix, which has been, or is
susceptible to be transported by water

Toxicity Identification Evaluation

TIE
Toxic effect

Triad approach

the simultaneous observation of the three complementary

components: hazard assessment through chemical analysis, risk
assessment through sediment laboratory or field assays and impact
assessment through a field inventory of the benthic community

TSS
Wetlands

Total Suspended Solids

reduced functioning of an organism, with mortality being the most

drastic expression of that, due to exposure to a contaminant

areas of marsh, fen, peatland or water, whether natural or artificial,

permanent or temporary, with water that is static or flowing, fresh,
brackish or salt including areas of marine water the depth of which at
low tide does not exceed six meters. Wetland may incorporate
riparian and coastal zones adjacent to the wetland and islands or
bodies of marine water deeper than six meters at low tide lying within
the wetlands