Buenas

Prcticas de laboratorio
Segunda parte

Curso intersemestral
M. en I. Pedro S. Valadez Eslava

TEMARIO
Equipos e instrumentos: Verificacin, calibracin y
calificacin
Reactivos y soluciones: Solicitud, recepcin, manejo,
identificacin,
almacenamiento,
preparacin,
procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad
en la preparacin de soluciones.
Manejo y ubicacin segura de reactivos Sistema
CRETIB
Importancia del lavado y verificacin de la limpieza del
material de vidrio.
Sustancias de referencia: Solicitud, recepcin, manejo,
identificacin,
almacenamiento,
preparacin,
procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad,
estndares primarios, secundarios, estandarizacin.
Pureza en base seca y base hmeda.

TEMARIO
Pesado correcto en la balanza analtica: Orden y
limpieza, tipos de pesada, verificacin de la exactitud
y precisin.
Registros y reportes: procedimientos relacionados,
buenas prcticas de documentacin y registros
electrnicos.

Evaluacin de resultados de anlisis: Anlisis de

tendencias: Definicin, registros de tendencias,
evaluacin de tendencias.
Investigacin de resultados fuera de especificaciones:
Definicin, objetivo de la investigacin, pasos de la
investigacin, plan de accin.

TEMARIO
Controles de Cambio y Desviaciones:
Definiciones, objetivo, generacin, seguimiento
hasta su cierre o implementacin.
Evaluacin de los resultados.
Certificados de anlisis

CALIDAD
Humana
Moral
Vida

Proceso (analtico)
Producto (Resultados de anlisis)

DEFINICIN DE CALIDAD
Calidad: Conjunto de caractersticas de un bien
o servicio que nos permiten cumplir y an
rebasar las expectativas del consumidor
Calidad: Cumplimiento con las especificaciones
Servicio o producto de calidad: para que tenga
calidad debe cumplir con una serie de
estndares o requisitos

Calidad
Cumplir en su totalidad con los
requerimientos y expectativas del
cliente.
Hacer las cosas bien desde la primera
vez todo el tiempo.
Mejora continua.

Estudios empricos muestran lo siguiente

* 10 = 10 nuevos clientes
potenciales

* 30
Perdida potencial de clientes
para el futuro y clientes
actuales

Normas internacionales y nacionales

10

DEFINICIN BPL
Los principios de las BPL definen una serie de
reglas y criterios para los sistemas de calidad en
cuanto los anlisis son planeados, monitoreados,
registrados archivados y reportados1

11

Consecuencias regulatorias del NO

cumplimiento de las BPL
Rechazo de los estudios sometidos a las
autoridades.
Solicitud de la repeticin del estudio.
Inhabilitacin para completar el estudio.
Fallas para alcanzar el registro del producto y
licencia.
Cierre del laboratorio tercero autorizado.
Prdida de clientes y credibilidad de la compaa.
Retiro de la licencia del producto.
Retiro de producto del mercado.

12

Los resultados confiables se basan en:

Personal

Equipo

Gestin

Ambiente

Mtodo

Material

13

Impacto social y econmico de un

anlisis errneo,
De un ejemplo para:
Un anlisis forense.

En el comercio.

Monitoreo ambiental.

14

Estudios internacionales comparativos

de aptitud

15

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Los equipos deben adquirirse de proveedores
que tengan la capacidad de proporcionar
soporte tcnico y mantenimiento.

16

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Antes de poner en
servicio un equipo: se
debe calificar, calibrar
o verificar.
Cuando aplique el
equipo debe ser
verifcado o calibrado
antes de su uso.

17

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Contar con los PNOs para su uso,
limpieza y mantenimiento de los equipos.
Contar con los manuales proporcionados
por el fabricante.
Equipos que no cumplen con las
calibraciones deben ser puestos fuera de
servicio.

18

Validacin vs Calificacin
El trmino validacin se usa para procesos de
fabricacin, procedimientos analticos y
software.
El trmino calificacin se emplea para
instrumentos.
AIQ : Calificacin de instrumentos analticos =
proceso de garantizar que un instrumento es
adecuado para el uso al que est destinado.
Referencia USP 37 2013 <1058> Calificacin de
instrumentos analticos

19

Calificacin de instrumentos
analticos*
Coleccin de pruebas documentadas de que un
instrumento se desempea adecuadamente
para su uso previsto.
El uso de un instrumento calificado en los
anlisis contribuye a la confianza en la validez
de los datos generados.
*USP 36 2013 <1058> Calificacin de instrumentos analticos

20

Fases de la calificacin
1

Calificacin de diseo

Calificacin de instalacin

Calificacin de operacin

Calificacin de desempeo

21

CALIBRACIN = ____________

22

VERIFICACIN
Cuando se requieran comprobaciones
intermedias para mantener la confianza en el
estado de la calibracin.

23

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Todas las operaciones
realizadas con los equipos
deben quedar registradas,
incluyendo soporte de
resultados y los criterios de
aceptacin, documentacin
de la falla encontrada, como
y cuando se detect el
problema y la accin
tomada.

24

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Rotular los equipos
calibrados incluyendo la
fecha en la que fueron
calibrados y su fecha de
vencimiento.

Los procedimientos
deben indicar que
hacer en caso de
fallas.

25

NIVELES DE SEGURIDAD
Debe protegerse la
configuracin del
hardware y software
para que no se hagan
cambios que puedan
invalidar los
resultados

26

Equipos que procesan datos

Para los sistemas que manejan datos se debe asegurar
que:
Calculos y la transferencia de datos son
sistemticamente sujetas a verificaciones apropiadas.
Se cuenta con software validado
Se cuenta con procedimientos para proteger la
integridad de los datos
Se les da mantenimiento para que trabajen
adecuadamente
Existen procedimientos para la generacin y el control
de los cambios.
Se cuenta con un sistema de respaldo continuo, el cual
controla el acceso a los datos.

27

PREGUNTA
Las autoridades regulatorias han establecido
guas respecto a la frecuencia de calibracin de
balanzas? Con base en qu se puede
establecer la frecuencia?

2
8

PREGUNTA
Para la adquisicin de equipos,
Cul (es) de los siguientes
enunciados no corresponde?
a) Especificaciones del equipo y/o
sistema
b) Que se desea medir
c) Instalaciones
d) Adquirir Tecnologa obsoleta
e) Mantenimiento
f) Alta complejidad en su manejo

29

PESADO EN LA BALANZA ANALTICA

Cunto pesar?

Pesar

Manejar el vocabulario

Tipo de pesada

Tomar la can:dad a

Balanza vericada

pesar de la tcnica
o calcularlo uno mismo.

y calibrada.

Manejo adecuado
de la muestra

Evitar prdida o
contaminacin.

Clculos

Manejar las
unidades y la
pureza
correctamente

Registrar el dato.

29

30

USO PESAS Y BALANZAS (41) USP

Pesar aproximadamente con exactitud: la

incertidumbre de la medicin (error sistemtico
+ error aleatorio), debe ser menor al 0.1 % de la
lectura

30

31

Criterio de aceptacin
2 veces la desviacin estndar de al menos 10
pesadas, dividida entre la cantidad pesada no
excede el 0.001.

2 x DE
=
X
31

32

Ejercicio
La balanza que estoy usando es adecuada para pesar 20 mg ?

32

33

Respuesta

33

34

Pregunta
Indique con qu paso inicia la pesada:
P
__________
Indique con que paso termina la pesada:
R
________

E
_ _ _

____

35

Reactivos
El laboratorio debe contar con una poltica y
procedimientos para la seleccin y compra de
los suministros que afectan la calidad de los
anlisis.
Deben existir procedimientos para la compra,
recepcin y el almacenamiento de reactivos,
deben recibirse con su certificado de anlisis
Los reactivos no deben ser utilizados hasta que
hayan sido inspeccionados, o verificados.

36

Reactivos
En algunos casos una lista de proveedores
previamente calificados debe establecerse.
Etiquetas de los reactivos deben indicar:
Nombre, fabricante, fecha de recepcin, cuando
aplique la concentracin, factor de
estandarizacin, fecha de caducidad,
condiciones de almacenamiento.

37

Reactivos
Para reactivos preparados en el laboratorio
adems:
Fecha de preparacin y nombre y/o iniciales de
quien prepar.
Para soluciones preparados por dilucin:
nombre del fabricante de la solucin original,
fecha de preparacin, fecha de estandarizacin,
factor de dilucin, nombre y/o iniciales de quien
prepar.

38

Transportancin - subdivisin de
reactivos
Siempre que sea posible transportar en su
contenedor original.
Si se requiere subdividir es necesario:
Limpieza escrupulosa, uso de contenedores
completamente indentificados.

39

Reactivos y soluciones
Deben estar etiquetadas, indicando la identidad,
ttulo o concentracin, requerimientos de
almacenamiento y fecha de expiracin.
Soluciones que presenten deterioro o fuera de
la fecha de uso no deben ser utilizadas.

40

Reactivos y soluciones
Preparacin de reactivos en el laboratorio.
Deben emplearse procedimientos escritos que
estn de acuerdo con farmacopeas u otros
estndares. Se deben guardar los registros de
la preparacin y la estandarizacin
(normalizacin) de las soluciones volumtricas

41

Reactivos y soluciones
Para soluciones volumtricas preparadas por
dilucin:
Nombre del fabricante original del reactivo.
Fecha de preparacin.
Fecha de estandarizacin o normalizacin.
Factor de dilucin.
Nombre de la persona que la prepar.

42

Reactivos y soluciones
Inspeccin
Todos los contenedores de reactivos deben
inspeccionarse para asegurarse que el sello est
intacto, antes de enviarse al cuarto o central de
almacenamiento o laboratorio.
Estas inspecciones deben de ser registradas en la
etiqueta del reactivo, anotando la fecha y las
iniciales de la persona que realiz la inspeccin

43

Reactivos y soluciones
Almacenamiento.
Los stocks de reactivos deben ser almacenados en
un rea condiciones de almacenamiento
apropiadas. El almacn debe contar con botellas
limpias, viales, cucharas o esptulas, embudos y
etiquetas, segn se requiera para el dispensado de
reactivos de su contenedor original a uno de
pequeo volumen. Se debe contar con equipo de
seguridad especial, para la transferencia de
grandes volmenes de lquidos corrosivos.

44

Pregunta
Qu informacin debe contener la etiqueta de
un reactivo?

45

Pregunta
La primera tarea que debe realizar al llegar a
nuevo trabajo, es asignar fecha de caducidad a
los reactivos y soluciones, Con base en qu
establecera la fecha de caducidad?

46

SUSTANCIAS DE REFERENCIA

47

SUSTANCIA DE REFERENCIA
Para qu tipo de determinaciones se
emplean las sustancia de referencia?

48

SUSTANCIA DE REFERENCIA
SECUNDARIA
Es obtenida valorando una materia
prima contra una sustancia de
referencia primaria.
Se la llama tambin Estndar de
trabajo.

49

Pureza en base seca y base hmeda

Pureza en base seca
(BS):
Pureza
de
la
sustancia
de
referencia despus
de someterla al
procedimiento de
secado indicado en
la etiqueta.

Pureza
en
hmeda (BH):

base

Pureza del estndar

tal cual se encuentra
(As it is).

50

EJERCICIO
Escriba que significa que un estndar de
Mebendazol tenga una pureza de 99.3% en
base seca:
99.3 %(BS) =--------------------------------------------

51

Registro de las sustancias de referencia

Nmero de identificacin del material

Descripcin precisa del material.
Fuente de sumistro del material
Fecha de recepcin
Nmero de lote u otro cdigo de indentifiacin
Uso desigando del material de referencia: por ejemplo:
material de referencia para infrarrojo o impureza para
cromatografa en capa fina.
Ubicacin de almacenamiento en el laboratorio
Condiciones de almacenamiento
Cualquier otra informacin adicional
OECD solicita incluir el nmero de CAS

52

INSPECCIN DE LAS SUSTANCIAS DE

REFERENCIA
Inspeccionar a intervalos regulares: verificar que
no se han deteriorado y que se estn
empleando las condiciones de almacenamiento
adecuadas
Registrar los resultados de la inspeccin en una
bitcora, firmar y fechar.

53

Sustancias de refefencia
Registro y etiquetado:
Identificar con un nmero nico, ya sea que sean
recin recibidos o preparados en el laboratorio.
(Estndares de trabajo o sustancias de referencia
secundarias).
Un nuevo nmero de identificacin debe ser
asignado para cada nuevo lote.
El nmero de identificacin debe estar indicado en
cada vial.
El nmero de identificacin debe anotarse en el
registro analtico, cada vez que la sustancia de
referencia es usada.

54

RESGUARDO DE LAS SUSTANCIAS DE

REFERENCIA

55

MUESTRAS
Sin una muestra no hay anlisis,
sin una muestra adecuada no
debera haber anlisis.

56

MUESTRAS
Cada muestra recibida debe contar
con una solicitud de anlisis

57

VERIFICACIN DE LA TEMPERATURA

58

TRAZABILIDAD

59

PATRONES DE REFERENCIA

60

PATRON DE REFERENCIA
Contar con un programa y procedimiento para la
calibracin de los patrones de referencia.
Los patrones deben calibrarse por un organismo
que pueda proveer trazabilidad.
Los patrones de calibracin se deben utilizar
solo para ese propsito.
Los patrones de referencia deben calibrarse
antes y despus de cualquier ajuste.

61

CONTROL DE CAMBIOS
Debe existir un procedimiento que incluya
identificacin, documentacin, revisin y aprobacin
de los cambios en: insumos, especificaciones,
procedimientos, mtodos de anlisis, procesos de
fabricacin, instalaciones, equipos, sistemas crticos
y sistemas de cmputo.
Los cambios deben ser aprobados por el
responsable de la Unidad de Calidad, asegurando
su seguimiento y cierre.

62

PREGUNTA
Usted va a someter un control de Cambios para
cambiar el ensayo de un mtodo microbiolgico
a un mtodo HPLC, Qu soporte documental
debe anexar para realizar el cambio?

63

Desviacin
DE: Separar , Alejar
VA: Camino

64

17025 Desviaciones
Las desviaciones respecto de los mtodos de
ensayo y de calibracin deben ocurrir solamente si
la desviacin ha sido documentada, justificada
tcnicamente, autorizada y aceptada por el cliente.
Auditoras adicionales. Cuando la identificacin de
no conformidades o desvos ponga en duda el
cumplimiento del laboratorio con sus propias
polticas y procedimientos, o el cumplimiento con
esta Norma Internacional, el laboratorio debe
asegurarse de que los correspondientes sectores
de actividades sean auditados, segn el apartado
4.14, tan pronto como sea posible.

65

17025 Desviaciones
Acciones preventivas.
4.12.1 Se deben identificar las mejoras necesarias y
las potenciales fuentes de no conformidades.
Cuando se identifiquen oportunidades de mejora o
si se requiere una accin preventiva, se deben
desarrollar, implementar y realizar el seguimiento de
planes de accin, a fin de reducir la probabilidad de
ocurrencia de dichas no conformidades y
aprovechar las oportunidades de mejora.

66

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

El xito de muchas valoraciones y pruebas
farmacopeicas depende de la limpieza del
material del material de vidrio utilizado.

67

PREENJUAGUE DEL MATERIAL

68

DETERGENTES
Los detergentes deben
ser proporcionados por
proveedores
certificados.

69

VERIFICACIN DE LA LIMPIEZA
Implementar una prueba para dictaminar si el
material esta limpio.

cido

Alcalino

Neutro

70

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

Algunas pruebas donde la limpieza es crtica:
Pirgenos, carbono orgnico total, valoraciones
de heparina sdica y actividad de vitamina B12,
determinacin de minerales y componentes a
niveles de trazas.

71

OTRAS SOLUCIONES PARA LA LIMPIEZA

DEL MATERIAL
Mezcla crmica
Hidrxido de potasio en alcohol
Fosfto disdico o trisdico al 10 %
Peroxidisulfato de amonio

7
2

PREGUNTA
Qu enunciados no corresponden para evitar posible
contaminacin debida al uso previo del material en otro
anlisis? Indique al menos tres cuidados que debe tener con
este material.
a) Contener soluciones inorgnicas por periodos prolongados en el material
de vidrio y mucho mejor si es volumtrico.
b)

Lavar lo mas pronto posible material que este en contacto con

soluciones concentradas.

c)

Dejar separadas las juntas, llaves y vlvulas esmeriladas despus de su

uso.

d)

Limpiar el material con cepillos gastados para rayar el vidrio y aumentar

las posibilidades de contaminacin.

e) Evitar poner el vidrio en contacto con soluciones de cido fluorhdrico

lcalis concentrados.

73
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-052-SEMARNAT-2005, QUE ESTABLECE LAS
CARACTERSTICAS, EL PROCEDIMIENTO DE IDENTIFICACIN, CLASIFICACIN
Y LOS LISTADOS DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS.

Esta Norma Oficial Mexicana establece el

procedimiento para identificar si un residuo es
peligroso, el cual incluye los listados de los residuos
peligrosos y las caractersticas que hacen que se
consideren como tales.
Los residuos peligrosos, en cualquier estado fsico,
por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, inflamables, txicas, y biolgicoinfecciosas, y por su forma de manejo pueden
representar un riesgo para el equilibrio ecolgico, el
ambiente y la salud.

74

CRETIB.- El acrnimo de clasificacin de las

caractersticas a identificar en los reactivos.
C: Corrosivo
R: Reactivo
E: Explosivo
T: Txico
I: Inflamable
B: Biolgico - Infeccioso

75

IDENTIFICAR CON EL CDIGO CRETIB

76

Biolgico-Infeccioso
Son aquellos materiales generados durante los
servicios de atencin mdica que contengan
agentes biolgico-infecciosos segn son
definidos en esta Norma, y que puedan causar
efectos nocivos a la salud y al ambiente.

77

78

El laboratorio de microbiologa debe contar con reas

separadas:
rea separada para poder realizar pruebas
Limpia
de esterilidad

reas

Cuenta con diferenciales de presin que

ayuden al control de la contaminacin a
travs de barreras de entrada de aire
(presin positiva) .

Barreras: Vestimenta de proteccin, procedimientos de sanitizacin,

cabinas de seguridad dedicadas, procedimiento para manejar derrames de
cultivos y personal entrenado.

Cepario
Lavado
Incubacin

rea separada para poder realizar el

manejo de los microorganismos (presin
negativa).

79

Se debe establecer la limpieza y sanitizacin de reas

donde se ejecuten actividades que necesitan ambientes
controladas (manufactura y acondicionamiento de
productos farmacuticos estriles y no estriles,
anlisis microbiolgicos).
La limpieza y sanitizacin se debe realizar con agentes
que hayan probado su efectividad para disminuir la
carga microbiana (agentes clorados, fenlicos, aminas
cuaternarias, etc.)
Estos agentes de limpieza se preparan con agua
purificada
con
una
calidad
microbiolgica
comprobable.

80

Preparacin
Seguir al pie de la letra la preparacin de acuerdo a lo
especificado en marbete del fabricante o de la tcnica.
Precaucin en el calentamiento! El oscurecimiento de
los medios es una indicacin del sobre calentamiento
(Reaccin de Maillard).

Esterilizacin
Autoclave calificada y bajo un modelo de carga validado.
Hay medios de cultivo que solo se hierven y no necesitan
esterilizacin. El procedimiento debe especificar los
cuidados que deben tenerse con estos medios (dosificar
bajo campana de flujo laminar, en contenedores
estriles, etc.)
Filtracin por membrana.

Verificacin del registro de esterilizacin

Verificar los parmetros de esterilizacin (temperatura,
tiempo y presin).

81

Verificacin del pH
Verificar pH una vez que el medio se encuentre a
temperatura ambiente (25C).
Extraer aspticamente la muestra.
Para superficies de agar se recomienda usar un
electrodo plano.
El valor de pH de los medios deber estar en un
intervalo de +/- 0.2 del valor indicado por el
fabricante.

82

83

84

Se evala cada lote de medio listo para usar y cada partida de

medio preparado.
Procedimiento
Lista de microorganismos a utilizar para realizar la promocin a
cada medio de cultivo.
Realizacin de la cuenta viable.
Preparacin
de
la
solucin
estandarizada
de
los
microorganismos a emplear. La cantidad de microorganismos a
usar debe estar entre 10-100 UFC/inculo.
Almacenamiento e identificacin de la solucin estandarizada.
Inoculacin de los medios e incubacin.
Interpretacin de resultados.

85

Evaluacin de los resultados de los

ensayos
Al terminar los anlisis, se revisan los resultados
y cuando sea apropiado se evaluan
estadsticamente para determinar si son
congruentes y si cumplen con las
especificaciones.

86

ANLISIS DE TENDENCIAS
Sistema que se establece para evaluar la
distribucin de los resultados con respecto
al tiempo, con la finalidad de identificar
alguna tendencia en los resultados

87

ANLISIS DE TENDENCIAS
17025:
Para establecer acciones correctivas se
podra incluir el anlisis de las tendencias.
Los resultados de los ensayos deben ser
registrado en forma tal que se puedan
detectar tendencias.

88

Implementacin del sistema

Generar alertas en tiempo real para

detectar problemas potenciales, at the
Bench, para iniciar oportunamente la
investigacin.

89

Mtodo grfico para determinar

resultados OOT

90

Tres resultados consecutivos estn de un

solo lado del lmite central
Tiempo
(meses)
0
3
6
9

% Valoracin
99.4
98.2
97.1
96.0

91

INVESTIGACIN DE RESULTADOS
FUERA DE ESPECIFICACIONES (OOS)

DEFINICIN:
RESULTADOS
QUE
NO
CUMPLEN CON LAS ESPECIFICACIONES

92

RESULTADOS FUERA DE
ESPECIFICACIONES (OOS)
Falla
para
cumplir
cualquier
especificacin registrada, en controles
en proceso, o especificaciones de
liberacin o estabilidad.

93

Especificaciones
Lmites farmacopeicos o lmites registrados
95.0 %
96.0 %

104.0 %

94

RESULTADO FUERA DE TENDENCIA,

CUESTIONABLE O ATPICO (OOT)

Resultado que se encuentra dentro de

las especificaciones pero esta fuera de
la tendencia histrica del producto.

95

Ejemplo de resultado atpico

Resultado valoracin
Especificacin interna
95.0 % - 105.0 %

RESULTADO

100.2 %

TPICO

99.4 %

TPICO

100.3 %

TPICO

98.7 %

TPICO

100.7 %

TPICO

99.1 %

TPICO

96.3 %

ATPICO

96

PREGUNTA
Por qu los resultados fuera de
tendencia deben investigarse si no estn
fuera de especificaciones?

97

RESULTADO ABERRANTE (OUTLIER)

Resultado
extremo
el
cual
es
significativamente diferente de las
dems observaciones del mismo
anlisis o de los resultados histricos
del producto

98

Ejemplo de resultado aberrante

Resultado valoracin
Especificacin interna
95.0 % - 105.0 %

RESULTADO

100.2 %

TPICO

99.4 %

TPICO

100.3 %

TPICO

98.7 %

TPICO

100.7 %

TPICO

99.1 %

TPICO

73.3 %

ABERRANTE

99

OBJETIVO DE LA INVESTIGACIN
Determinar si el resultado fuera de especificaciones
es representativo o no de la poblacin

Determinar la causa del resultado fuera de

especificaciones

100

UTILIDAD DE LA INVESTIGACIN
ACCIONES A TOMAR
Tomar acciones preventivas para evitar su
recurrencia.
Las autoridades regulatorias quieren encontrar
que se tomaron acciones oportunas para
eliminar la causa raz y que fueron efectivas

101

POSIBLES RESULTADOS DE LA
INVESTIGACIN

Error del laboratorio

Posibilidades
Error del proceso

DIAGRAMA DE FLUJO

102

Paso 1. DETECCIN
(Formato A)

En caso de sospecha de resultado aberrante,

aplicar la prueba de desviacin
estudentizada extrema, para determinar si es
estadsticamente un resultado aberrrante

Si

Causa
encontrada

No
Paso 2: INVESTIGACIN NIVEL 1
(Formato B)

No
Causa
encontrada

Si

No
Paso 3: INVESTIGACIN NIVEL 2
(Formato C)

No

Causa
encontrada

En caso de sospecha de resultado aberrante,

aplicar la prueba de desviacin
estudentizada extrema, para determinar si
es estadsticamente un resultado aberrrante

No
Paso 4 PROTOCOLO DE REPITES
(Formato D)

Anlsis estadstico: X +/- 3 DE, para

Determinar si el resultado fuera de
especificaciones
se confirmar o no
Finaliza la investigacin en el paso
5 (Formato E)

Si

Paso 5 CIERRE DE LA INVESTIGACIN

(Formato E)

No

Se requiere plan
de accin?

Si
Paso 6 PLAN DE ACCIN
(Formato A del plan de accin)
Paso 7 ACCIONES REQUERIDAS
(Formato B del plan de accin)
Paso 8 VERIFICACIN DE EJECUCIN Y EFECTIVIDAD DE
LAS ACCIONES REQUERIDAS
(Formato C del plan de accin)
Paso 9 CIERRE
(Formato D del plan de accin)

103

INVESTIGACIN
En caso de confirmarse el resultado fuera de
especificaciones, se procede a generar una No
conformidad o desviacin

VALIDACIN DE METODOS ANALTICOS

DEFINICIN
PROCESO POR EL CUAL QUEDA
ESTABLECIDO, POR ESTUDIOS DE
LABORATORIO, QUE LA CAPACIDAD DEL
METODO SATISFACE LOS REQUISITOS
PARA LAS APLICACIONES ANALTICAS
DESEADAS.

VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

Una parte integral del desarrollo de un

mtodo analtico es la validacin del
mismo, es decir, el mtodo debe probarse
para determinar su efectividad.

GUIAS NACIONALES
Gua de Validacin de mtodos analticos
emitida por el Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos. (2002)

GUIAS NACIONALES
Gua de validacin de mtodos analticos:
limpieza de equipos, Comisin Interinstitucional
de Buenas Prcticas de fabricacin, Mxico
D.F., 2004

GUIAS INTERNACIONALES
ICH
EURACHEM
FDA
FDA (CDER)
CDER Bioanalticos
Otros pases

CONFERENCIA INTERNACIONAL DE
ARMONIZACIN

Gua ICH
CONFERENCIA INTERNACIONAL DE ARMONIZACIN
Validation of Analytical procedures:

Text and Methodology Q2 (R1)

GUAS INTERNACIONALES

DECISIONES IMPORTANTES BASADAS EN

RESULTADOS ANALTICOS
oLiberacin de lotes.
oRechazo de lotes.
oReproceso de lotes.
oEstablecimiento de fechas de caducidad
basadas en estudios de estabilidad.
oDeterminacin de trazas para liberacin de
equipos para fabricacin.
oLa
necesidad
de
realizar
estudios
toxicolgicos adicionales, si aparecen nuevas
impurezas o si las impurezas conocidas
rebasan los lmites.

OBJETIVO
El objetivo de un mtodo debe ser claramente
entendido para determinar las caractersticas que
deben ser evaluadas.
La validacin debe proveer la seguridad de que el
mtodo ser Libre de problemas durante su uso.

CONDICIONES PARA VALIDAR

Los instrumentos deben de estar calificados/
validados, antes de empezar con las actividades
de validacin.
Contar
con
sustancias
de
referencia
adecuadamente caracterizadas.
El personal debe estar adecuadamente
capacitado.
Contar con procedimientos para la validacin y
reporte de mtodos analticos.

CONDICIONES PARA VALIDAR

CONTAR CON UN MTODO ANALTICO CON

UN BUEN DESEMPEO, QUE INDIQUE QUE
HAY POSIBILIDADES DE SER VALIDADO
CON XITO.

PARMETROS DE DESEMPEO
PRUEBA DE
IMPUREZAS
Contenido/
Potencia/
Valoracin

Contenido/
Valoracin

Limite

Precisin/Adecuabilidad del Sistema

SI

SI

SI

Linealidad del sistema.

SI

SI

NO

NO

Especificidad

SI

SI

SI

SI

Exactitud y repetibilidad

SI

SI

NO

NO

Linealidad del mtodo

SI

SI

NO

NO

Precisin intermedia

SI

SI

NO

NO

Estabilidad de la muestra y referencia

SI

NO

NO

Limite de deteccin

NO

NO

SI

NO

Limite de cuantificacin

NO

SI

NO

NO

Robustez

NO

Tolerancia

NO

PARMETRO DE
DESEMPEO

* Puede ser requerido segn la naturaleza del mtodo

IDENTIFICACIN

ETAPAS DE LA VALIDACIN DE MTODOS

ANALTICOS
1. SISTEMA: SE TRABAJA CON SUSTANCIAS DE
REFERENCIA
2. MTODO (PLACEBO): SE TRABAJA CON LOS
EXCIPIENTES (PLACEBOS) Y SUSTANCIAS DE
REFERENCIA.
3. MTODO (PRODUCTO TERMINADO) :
PROBAMOS EL METODO CON PRODUCTO
TERMINADO

RELACION ENTRE EXACTITUD Y PRECISIN

Exacto y preciso

RELACIN CONCENTRACIN DE ANALITO, % RSD (CV)

REFERENCIA (% RSD)

CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)

CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)

VALIDACIN INADECUADA = PROCEDIMIENTOS INADECUADOS

DECISIONES
EQUIVOCAS

RESULTADOS
OOS

VALIDACION
INADECUADA

RETRASOS

OOS= Resultado fuera de especificaciones.

REPETICIONES

PREGUNTA
Mencione 3 razones por las cuales los
procedimientos analticos deben estar
validados.

REVALIDACIN
Se requiere cuando hay:
Cambios en el proceso de sntesis de la
sustancia activa.
Cambios en la composicin del producto
terminado
Cambios en el mtodo analtico.
Cuando le mtodo es transferido de un
laboratorio a otro laboratorio (WHO)

126

Buenas prcticas de cromatografa

Los sistemas de cromatografa de lquidos se
consideran como un conjunto de partes o
mdulos.

Columna
Bomba

Detector

Inyector

Computadora

127

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Es una parte integral de
varios procedimientos
analticos.
Nos permite confirmar
que el mtodo se esta
desempeando
adecuadamente, es
una herramienta de
diagnstico.

128

EL CROMATOGRAMA
T0

TIEMPO DE LA FASE MVIL

TR TIEMPO DE RETENCIN
( DETERMINA
LA IDENTIDAD DEL COMPUESTO)

tR B

tR A

T0

W1/2 B

W1/2 A
WA

WB

129

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Parmetros de adecuabilidad del sistema
Repetibilidad de inyeccin de la solucin de
referencia
Resolucin
Coleo
Nmero de platos tericos
Factor de capacidad
Tiempo de retencin
Tiempo de retencin relativo

130

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

131

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

La adecuabilidad del sistema es especfica
para cada mtodo
A pesar que la adecuabilidad del sistema puede
realizarse durante el anlisis, generalmente es
realizada Antes de proceder con el anlisis de
las muestras

131

132

SECUENCIA DE INYECCIN

133

CRITERIOS DE ACEPTACIN
Manual del CNQFB.
Para cada inyeccin se recomienda reportar:
K> 2
R > 2
T<2
C. V. < 2.0%
Nmero de platos tericos (N)
Retencin relativa (Rr)

134

Coeficiente de variacin
(CV, RSD, o DER)
Datos de 5 rplicas deben emplearse para
calcular el coeficiente de variacin, si el CV
requerido por el mtodo es < 2.0 %.
Datos de 6 rplicas deben emplearse si el CV
solicitado por el mtodo es mayor a 2.0%.

135

SIMETRIA DEL PICO (Coleo o Tailing)

Es especialmente importante reportarlo en
pruebas de impurezas, si el coleo es muy alto
podra enmascarar otras impurezas.
Cuando el coleo se incrementa, la integracin
se vuele menos confiable y la precisin puede
verse comprometida.

136

MTODOS PARA ANALIZAR CANTIDADES

BAJAS DE ANALITOS
Preparar una solucin de sensibilidad: Sirve
para demostrar que se tiene una adecuada
relacin Seal/ruido.
Determinar tambin la reproduciblidad de las
rplicas de inyecciones.

136

137

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Todos los factores que son crticos para el
mtodo deben ser identificados e incluidos en la
adecuabilidad del sistema.
Si no se cumple la adecuabilidad del sistema los
factores crticos deben ser ajustados.

137

138

CASOS ESPECIALES
Cuando la especificacin es muy cerrada
Ejemplo: 99.0 % - 101.0 % un CV de 2.0 % no
sera adecuado.
Emplear el criterio recomendado por la
Farmacopea britnica (BP), de 1/6 el rango de la
especificacin en este caso..
Rango: 2 X 1/6 = 0.33 % de CV

139

Confrontacin de estndares
(Estndar Check)
Cuntos soluciones de referencia deben
prepararse en un anlisis espectrofotomtrico o
cromatogrfico?

140

Confrontacin de estndares
(Estndar Check)
Si se emplean dos estndares, calcular la
confrontacin de estndares:

Re spuesta St1 Concentracin St2

%=
X
X100
Conentracin St1
Re spuesta St2
Dependiendo del mtodo el % de confrontacin debe
encontrarse entre: 98.0 102.0 % o 97.0 103.0 %

141

Certificados de anlisis
1. Nmero de registro de la muestra
2. Fecha de recepcin
3. Nombre y direccin del laboratorio que
analiz la muestra.
4. Nombre y direccin de quin realiz el
anlisis
5. Nombre, descripcin y nmero de lote de la
muestra.
6. Nombre y direccin del fabricante original y si
corresponde, del distribuidor o acondicionador

142

Certificados de anlisis
7. Referencia a las especificaciones del ensayo
y la muestra.
8. Resultados de las pruebas realizadas
(promedio, desviacin estndar) y sus lmites.
9. Conclusin sobre si la muestra se encuentra
o no dentro de especificaciones.
10. Fecha de caducidad o reanlisis.
11. Fecha del anlisis
12. Firma del director o persona autorizada por
el laboratorio.