CONCEPTOS y TECNICAS de

BIOTECNOLOGIA
(FCEyN UBA )
Biotecnologa Industrial
Produccin industrial de Metabolitos
Biorreactores
Miryan Cassanello
PINMATE Dep. Industrias, FCEyN-UBA
E-mail: miryan@di.fcen.uba.ar

Productos biotecnolgicos: estn en todos los sectores de la

vida diaria:
drogas (genricas
y no-genricas)
productos de
belleza
procesamiento de
alimentos para
humanos y
animales
procesamiento
textil y artculos
de limpieza
aplicaciones
industriales:
produccin masiva
de alcohol
suplementos
nutricionales

Relevancia econmica de los

productos generados industrialmente
mediante procesos biotecnolgicos
Estadstica: ao 2002
(Fuente: Kent y Riegel, 2007)

Productos obtenidos mediante procesos biotecnolgicos

Productos

Alcoholes
cidos
orgnicos

Organismo tpico utilizado

Etanol

Saccharomyces cerevisiae

Butanol/acetone

Clostridium acetobutylicum

Acido ctrico

Aspergillus niger

230.000

Acido glucnico

Aspergillus niger

50.000

Acido lctico

Lactobacillus delbrueckii

20.000

Corynebacterium glutamicum

300.000

L-lisina

Brevibacterium flavum

30.000

L-fenilalanina

Corynebacterium glutamicum

2.000

L-arginina

Brevibacterium flavum

2.000

Penicilinas

Penicillium chrysogenum

40.000

Cefalosporinas

Cephalosporium acremonium

10.000

Tetraciclinas

Streptomyces aureofaciens

10.000

Aminocidos Acido Lglutmico

Antibiticos

Mercado
mundial
(ton/ao)
20 millones
2.000

(Fuente: Doran, 1995)

Producto
Enzimas

Organismo tpico utilizado

Mercado mundial
(ton/ao)

Proteasas

Bacillus spp.

600

-Amilasa

Bacillus amyloliquefaciens

400

Glucoamilasa

Aspergillus niger

400

Glucosa isomerasa Bacillus coagulans

100

Pectinasa

Aspergillus niger

10

Xantanos

Xanthomonas campestris

Dextrano

Leuconostoc mesenteroides

200

Vitaminas

B12

Propionibacterium shermanii

10

Vacunas

Difteria

Corynebacterium diphterie

Ttanos

Clostridium tetani

Insulina

Escherichia coli recombinante

< 20 kg/ao

Interfern-2

Escherichia coli recombinante

10

Hormona de
crecimiento

Escherichia coli recombinante o

clulas recombinantes de
mamferos

Polmeros

Protenas
teraputicas

5.000

< 50 kg/ao
Pequea

Pequea

Ingeniera Qumica
Qumica

Biologa
Bioqumica

Biotecnologa AZUL:
Aplicacin en
organismos marinos

Biotecnologa ROJA:
Aplicacin en medicina

Biotecnologa
AZUL

Biotecnologa
ROJA

BIOTECNOLOGIA
Biotecnologa
VERDE
Biotecnologa VERDE:
Aplicacin en agroalimentos

Biotecnologa
BLANCA
Biotecnologa BLANCA (o industrial):
Aplicacin en la industria en general,
productos qumicos, nuevos materiales,
biocombustibles, etc.

BIOTECNOLOGIA
INDUSTRIAL

Biotecnologa : actividad multidisciplinaria que comprende la

aplicacin de los principios cientficos y de la ingeniera al
procesamiento de materiales por agentes biolgicos para proveer
bienes y servicios. (Definicin de la OECD)
Agentes biolgicos: clulas microbianas, animales, vegetales y
enzimas.
Bienes: cualquier producto industrial (alimentos, bebidas,
productos medicinales, etc.
Servicios: especialmente los relacionados con la purificacin de
aguas y tratamiento de efluentes.

Bibliografa libros de texto

Bioprocess Engineering. Basic concepts, Michael L. Shuler, Fikret
Kargi, Prentice Hall Int. Series, 2nd Ed. 2002.
Kent and Riegels Handbook of Industrial Chemistry and
Biotechnology, J.A. Kent (Ed.), Chapter 30: Industrial
Biotechnology: Discovery to Delivery, G. Chotani, T. Dodge, A.
Gaertner, M. Arbige, Springer, 11th Ed. 2007.
Principios de Ingeniera de los bioprocesos, Pauline M. Doran,
Editorial Acribia S.A, Zaragoza, Espaa. 1995. (Traducido 1998)
Biochemical Engineering Fundamentals, James E. Bailey, David. F.
Ollis, McGraw-Hill Int. Ed., 2nd. Ed. 1986.
Biochemical engineering and biotechnology, Ghasem Najafpour,
Elsevier, (2007) ISBN-10: 0444528458; ISBN-13: 978-0444528452
Bioreaction Engineering Principles, Jens Nielsen, John Villadsen,
Gunnar Lidn. Springer, 2da. Ed. (2005). ISBN-10: 0306473496;
ISBN-13: 978-0306473494

Bibliografa algunos reprints de biotecnologia industrial

Xu, J., Ge, X., Dolan, M.C., Towards high-yield production of pharmaceutical
proteins with plant cell suspension cultures. Biotechnology Advances 29 (2011)
278299
Brennan, L., Owende, P., Biofuels from microalgaeA review of technologies for
production, processing, and extractions of biofuels and co-products. Renewable and
Sustainable Energy Reviews 14 (2010) 557577
Huang, T-K., McDonald, K.A., Review: Bioreactor engineering for recombinant
protein production in plant cell suspension cultures. Biochemical Engineering
Journal 45 (2009) 168184
Rosche, B., Li, X.Z., Hauer, B., Schmid, A., Buehler, K., Microbial biofilms: a
concept for industrial catalysis? Trends in Biotechnology 27 (2009) 636643
Lacaze, G., Wick, M., Cappelle, S., Emerging fermentation technologies:
Development of novel sourdoughs. Food Microbiology, 24 (2007) 155160
Gavrilescu, M., Chisti, Y., Biotechnologya sustainable alternative for chemical
industry. Research review paper. Biotechnology Advances, 23 (2005) 471499
Butler, M., Animal cell cultures: recent achievements and perspectives in the
production of biopharmaceuticals. Appl Microbiol Biotechnol, 68 (2005) 283291
Kretzmer, G., Industrial processes with animal cells. Appl Microbiol Biotechnol, 59
(2002) 135142

Objetivo de la
produccin
industrial de
clulas o de
microorganismos

Producir las mismas clulas o

microorganismos (biomasa) en
gran escala
Producir en gran escala
compuestos (intracelulares o
extracelulares) resultantes del
crecimiento celular
(metabolitos)

Metabolitos
Primarios

Metabolitos
Secundarios

Metabolitos primarios
-Molculas generalmente sencillas, que participan de los caminos
metablicos esenciales. Son casi idnticos en todos los organismos.
-Son ms baratos y sencillos de producir, tienen bajo contenido de
actividad biolgica y frecuentemente son commodities
1. Componentes esenciales de las clulas/microorganismos:
protenas, cidos nuclicos, polisacridos (gelanos, xantanos) y
polisteres, cidos grasos (insaturados), esteroles.
2. Derivados del metabolismo intermedio: azcares (fructosa,
ribosa, sorbosa), cidos orgnicos (gluconato, cido lctico,
ctrico, actico, propinico, succnico, fumrico), alcoholes
(xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminocidos (Lys,
Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas (B2, B12), nucletidos
saborizantes (cidos inocnico y guanlico), polisacridos y
polisteres de reserva.
Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos

Metabolitos secundarios
-Molculas mas complejas, que participan de caminos metablicos
no-esenciales, pero confieren capacidades de supervivencia en
situaciones de stress.
-Son muy variados y su estructura es fuertemente dependiente de la
especie y variedad utilizada para su produccin. Se generan en
condiciones particulares y son ms valiosos y complicados de
producir alto contenido de actividad biolgica
-Generalmente son productos especiales (alto precio). Funcionan
en los organismos que los producen como:
1. Armas contra otros microorganismos (antibiticos, toxinas,
inhibidores enzimticos, pesticidas)
2. Factores de crecimiento (hormonas)
3. Ionforos
4. Agentes de interaccin microbiana
5. Efectores externos

PROCESOS BIOTECNOLOGICOS o
FERMENTACIONES
Procesos que se llevan a cabo en un bio-reactor mediante los cuales
se transforman los sustratos de un medio de cultivo (materias primas)
en metabolitos y/o en biomasa (productos) empleando para este fin
microorganismos, clulas o enzimas.
Biorreactor
o
Fermentador
Operaciones
unitarias

Operaciones
unitarias

Principales etapas de un proceso biotecnolgico industrial:

Fermentacin
Propagacin
de los cultivos

Esterilizacin
Preparacin de
medios

Separacin
Purificacin

Tratamiento
de efluentes

1) Propagacin de cultivos: comienza en un tubo de ensayo o un tubo

congelado o liofilizado donde se conserva la cepa de inters, o de
una colonia del microorganismo previamente seleccionado. Se
propaga en el laboratorio progresivamente aumentando el volumen
del medio de cultivo.
2) Fermentacin: Se prepara el medio de nutrientes y se esteriliza. Se
siembra un tanque de inculos cuyo volumen depende de la escala
industrial. Vinoculos~50-1000L y Vfermentador industrial~10-1000 m3).

Principales etapas de un proceso biotecnolgico industrial:

Fermentacin
Propagacin
de los cultivos

Esterilizacin
Preparacin de
medios

Separacin
Purificacin

Tratamiento
de efluentes

3) Separacin y purificacin: operaciones mecnicas de ruptura de

clulas; separacin de insolubles por filtracin, centrifugacin o
sedimentacin; separaciones primarias por extraccin, absorcin,
adsorcin, ultrafiltracin; purificacin por extraccin lquidolquido, extraccin en dos fases acuosas o cromatografa de
afinidad; aislamiento y acondicionamiento del producto.
4) No tiene relacin directa con el producto pero es una etapa
imprescindible por los volmenes involucrados y para preservar el
medio.

Seleccin (screening)
En la seleccin del microorganismo/clula, se debe tener en cuenta:
1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable.
2. La velocidad de crecimiento debe ser alta.
3. La cepa debe estar libre de contaminantes.
4. Sus requerimientos nutricionales deben cubrirse con medios de
cultivo de costo reducido.
5. Deben ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo sin
prdida de sus caractersticas.
6. Debe realizar el proceso fermentativo completo en tiempo corto.
7. Si el objetivo es un producto, este debe ser de alto rendimiento y
de fcil recuperacin a partir del medio de cultivo.

Los nuevos mtodos de screening incorporan tcnicas de ingeniera

gentica para crear diversidad.

Preparacin de medios de cultivo Esterilizacin

Los componentes de los medios de cultivo son los efectores
externos de naturaleza qumica que deben cumplir con los
requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y
suministrar energa para el mantenimiento celular.
Componentes de un medio de cultivo:
1. Macronutrientes, agregados en concentraciones de g/L, fuentes
de C, N, S, P, K y Mg
2. Micronutrientes o elementos trazas, representados por las sales
de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co, agregados en conc. de mg o g/L
3. Factores de crecimiento, constituidos por compuestos orgnicos
que no son sintetizados por las clulas y de funcin metablica
especfica; se suministran en baja concentracin (vitaminas,
algunos aminocidos, etc.)

Preparacin de medios de cultivo Esterilizacin

Los medios pueden clasificarse considerando la naturaleza
qumica de los componentes en:
1. Medios sintticos o medios qumicamente definidos
2. Medios complejos, en cuya composicin intervienen
sustancias de origen animal o vegetal (ej.: extracto de
levadura, macerado de maz, harina de soja, etc.) que aportan
las sustancias fundamentales pero son qumicamente
indefinidas y de composicin variable.
Cualquiera sea el medio de cultivo, se debe esterilizar previamente
a ponerse en contacto con el inculo. Esterilizar significa eliminar
toda forma de vida de un medio o material. Generalmente se lleva
a cabo por filtracin o calentamiento.

Separacin y purificacin (downstream): depende de la

eficiencia del proceso y del producto a obtener

Fermentaciones - fermentadores o biorreactores

Es el corazn del proceso y debe optimizarse para evitar posteriores
etapas de separacin y purificacin.
discontinuas o batch
semicontinuas (fed-batch)
Fermentaciones
continuas
Para el diseo de los biorreactores se debe considerar la cintica del
crecimiento de las clulas o microorganismos (biomasa) y la
velocidad de formacin de los productos deseados.
Cintica de crecimiento de biomasa
Definiciones
Crecimiento en cultivos discontinuos o batch: Factores que afectan
Cuantificacin de la velocidad de crecimiento: Modelos, Ecuacin
de Monod
Crecimiento en cultivos continuos: Quimiostato, turbidistato

Cintica de crecimiento microbiano

Sustrato + biomasa

mayor cantidad
productos
+
de biomasa
extracelulares

S + X

Crecimiento

aumento en el nmero de clulas

aumento del tamao de las clulas

nX

El crecimiento microbiano es un ejemplo de reaccin autocataltica. La velocidad de crecimiento est relacionada con la
concentracin de clulas.
Velocidad especfica neta de
crecimiento (h-1):
X: concentracin msica de clulas (g/L)
t: tiempo (h)

1 dX
neta
X dt

La velocidad especfica neta de crecimiento es la diferencia entre la

velocidad de crecimiento y la velocidad de desaparicin de biomasa
por muerte celular o por metabolismo endgeno:

neta = g k d
Tambin se puede expresar la velocidad en funcin de la
concentracin de nmero de clulas en lugar de la concentracin
msica de las mismas. Si no se pueden medir las dos, se prefiere
la concentracin msica.
Formas de medir la concentracin de clulas
Se busca un mtodo rpido, fcil de seguir en lnea o de respuesta
rpida.
Directos
Mtodos
Indirectos

Determinacin de la concentracin msica de clulas:

Mtodos directos (en ausencia de otros slidos en suspensin):
Masa de clulas secas (centrifugado/filtrado/lavado/secado)
Volumen de clulas centrifugadas en condiciones estndar
Absorcin de luz por clulas en suspensin
Mtodos indirectos: se basan en un efecto que inducen, como ser la
velocidad de consumo de un sustrato o de formacin de un producto.
Productos: etanol, CO2
Sustratos: consumo de O2 o de un sustrato base de C o N
Propiedades fsico-qumicas: viscosidad, pH
Ejemplo: seguir la concentracin de ATP, proporcional a la masa
de clulas.
luciferasa

luciferina + ATP + O 2 LUZ

Sensible
> 10-12 gATP/L

Cintica de crecimiento de un cultivo en batch

Etapas:
1) de latencia o
induccin
2) de crecimiento
exponencial
3) de desaceleracin
4) estacionario
5) de muerte o
declinacin
celular
3)4)
Desaceleraci
n: velocidad
por consumo
de un nutriente
esencial
o generacin
de
Estacionario:
de
crecimiento
nula.
Las
clulas
an
son
5)
Muerte:
el nmerodel inculo
clulas,
definir
el lmite
con
1)
Latenciabaja
: adaptacin
aldifcil
medio.
Depende
del
inculo
2)
Crecimiento
exponencial:
rpida multiplicacin
de
clulas
la
subproductos
txicos
crecimiento
desbalanceado,
las
clulas
deben
activas
y
pueden
producir
metabolitos
secundarios
(ej.
antibiticos,
etapa
(edadanterior.
y tamao)
y de los(composicin
nutrientes.
Sedepuede
adaptar
ex-situ.
crecimiento
balanceado
clulas
constante).
readaptarse
a
las
condiciones
hostiles.
hormonas) productos de la desregulacin celular

1) Latencia: adaptacin del inculo al medio. Depende del

inculo (edad y tamao) y de los nutrientes. Se puede adaptar
ex-situ.
2) Crecimiento exponencial: rpida multiplicacin de clulas 
crecimiento balanceado (composicin de clulas constante).
3) Desaceleracin: por consumo de un nutriente esencial o
generacin de subproductos txicos crecimiento
desbalanceado, las clulas deben readaptarse a las condiciones
hostiles.
4) Estacionario: velocidad de crecimiento nula. Las clulas an
son activas y pueden producir metabolitos secundarios (ej.
antibiticos, hormonas) productos de la desregulacin celular
5) Muerte: baja el nmero de clulas, difcil definir el lmite con
la etapa anterior.

Crecimiento balanceado: todos los componentes de las clulas

crecen con la misma velocidad la composicin media de las
mismas permanece constante. Es vlido para la etapa de crecimiento
exponencial.
exponencial
En este perodo, la velocidad de crecimiento es independiente de los
nutrientes y resulta en una cintica de primer orden.

1 dX
dX
neta t
g neta =

= neta dt X = X 0e
X dt
X
Tiempo necesario para duplicar la biomasa:

X = 2X 0

ln(2)
d =
neta

Crecimiento no balanceado: los componentes de las clulas no

crecen con la misma velocidad la composicin media se modifica.
Esta situacin caracteriza especialmente a la etapa estacionaria
El estrs producido por la falta de nutrientes o por la existencia de
subproductos o toxinas inhibidoras que generan un medio hostil
induce una reestructuracin de las clulas para adaptarse a las nuevas
condiciones.

g neta = g k d

Puede ocurrir:
La concentracin msica de clulas (X) es constante pero baja el
nmero de clulas viables.
X baja por lisis de clulas. Puede aparecer un segundo perodo
de crecimiento, los productos de lisis o las clulas muertas
constituyen un sustrato alternativo (crecimiento crptico).
X constante pero su metabolismo es activo; cambia la regulacin
celular produciendo metabolitos secundarios.

Coeficiente de mantenimiento: se emplea para definir la velocidad

especfica de consumo de sustrato para energa de mantenimiento.

1 dS
m=
X dt m

Energa de mantenimiento: necesaria

para mantener la membrana celular activa
y el transporte de nutrientes, y para
funciones metablicas esenciales como la
movilidad y la reparacin de estructuras
daadas.

Si no hay sustrato disponible, el mantenimiento inducir prdida de

masa celular (metabolismo endgeno para adaptarse al medio).

Otras definiciones: Coeficientes de rendimiento:

rendimiento se definen en base
a la cantidad consumida de otro componente.
Rendimiento de formacin de clulas por masa
X
YX /S =
de sustrato consumida (g clulas/g S)
S
YX/S es un valor constante en la etapa de
crecimiento exponencial.
Luego de la etapa de crecimiento exponencial, YX/S deja de ser
constante, es un rendimiento aparente porque el sustrato se emplea
para otros fines:

S = Sformacion + Sformacion + Senergia + Senergia

de biomasa

de productos

para crecimiento

para mantenimiento

Tambin se pueden definir rendimientos basados en otros componentes:

X
P
Y
; YP/S =
=
X / O2
DO
S

Ejemplo: Organismos creciendo en condiciones aerbicas en glucosa;

para la mayora de las bacterias y levaduras:

YX /S = 0,4 0,6 g / g ; YX/O = 0,9 1,4 g/g

2

(en condiciones anaerbicas suelen ser menores)

Los rendimientos
dependen del medio
y de la fuente de C.
Para la mayora de
los casos:

YX /S = 1 0,4 g/g

g biomasa

g de C consumido

Relacin del crecimiento de biomasa con la formacin de

productos: Definimos la velocidad
1 dP
especfica de formacin
qP =
= YP / X g
X dt
de producto, qP
Se encuentran 3 situaciones:
(a) qP asociada al crecimiento celular, ej: produccin de una
enzima constitutiva de la biomasa (metabolito primario).

q P = g = YP / X

(b) qP parcialmente asociada (etapa de desaceleracin y

estacionaria), ej: fermentacin de cido lctico, xantanos y algunos
metabolitos secundarios.
q = +
P

(c) qP no-asociada al crecimiento celular (etapa estacionaria, donde

la g=0) ej.: metabolitos secundarios como antibiticos.

q P = = cons tan te;

g = 0

Relacin del crecimiento de biomasa con la formacin de

productos:
1 dP
1 dX
= YP / X g = YP / X
qP =
X dt
X dt

Asociada

q P = g

Parcialmente asociada

q P = g +

Metabolitos primarios

No asociada

qP =

Metabolitos secundarios

Factores que influyen Temperatura del medio

La velocidad de
crecimiento
disminuye por
encima de la Top

La velocidad de
crecimiento
aproximadamente
se duplica cada
T = 10C

-psicrfilos (Top < 20C)

-mesfilos (20<Top<50C)
-termfilos (Top > 50C)

Por encima de Top ocurre muerte celular disminuye el nmero

de clulas viables cuando la velocidad de muerte supera la de
crecimiento.
Ambas velocidades siguen una ecuacin tipo Arrhenius con

'g = A exp( E a / RT )
Ea 1020 kcal/mol

k d = A d exp( E d / RT )
Ed 6080 kcal/mol

La muerte celular es ms sensible a T que el crecimiento

(importante para la esterilizacin)
La T tambin afecta la velocidad de formacin de producto pero
la Top y la Ea suelen ser distintas.
Tambin influye sobre el YX/S porque para T>Top, la energa de
mantenimiento es mayor  baja YX/S
Para organismos inmovilizados puede cambiar el control.

Factores que influyen pH del medio

Rango de
pH ptimo

Variacin de la velocidad especfica de crecimiento con el pH. Existe un

pH ptimo para cada tipo de clula, generalmente prximo a 7. Se puede
incrementar el rango adaptando las clulas por incrementos pequeos.

El pH ptimo suele ser distinto para el crecimiento que para la

formacin de producto.
Los pH aceptables varan en 1 o 2 unidades respecto del ptimo.
El pH ptimo depende de la biomasa, el rango va de 3 a 8.
- levaduras: 3 6
- hongos: 3 7
- clulas vegetales: 5 6
- clulas animales: 6,5 7,5
Algunos organismos pueden regular el pH empleando energa de
mantenimiento.
El pH puede variar mucho por efecto del medio (fuente de N,
aminocidos, CO2)

Factores que influyen concentracin de O2 disuelto (DO):

Es un sustrato importante para las fermentaciones aerbicas.
Debido a la baja solubilidad del O2 en agua, puede ser un limitante de
la velocidad de crecimiento.
La solubilidad del oxgeno en agua depende de la presin, de la
temperatura y de las sales disueltas (a presin atmosfrica es 7ppm).
La concentracin crtica de oxgeno
disuelto CO2,critica es aquella por debajo
de la cual comienza a controlar la
velocidad de crecimiento:
510% de la concentracin de
saturacin para bacterias y levaduras y
1050% de la concentracin
de saturacin para hongos (segn
el tamao)

Transporte de oxgeno a las clulas

El O2 se
introduce por
burbujeo y su
concentracin
depende de la
agitacin.

Velocidad de
OTR = k L a LG C*O C O b
transferencia:
2
2
Velocidad de consumo OUR = q X = g X
O2
YX / O
de oxgeno (OUR):
2

Factores que influyen otros factores

Potencial redox: afecta las reacciones de xido-reduccin. Esta relacionado
con la concentracin de O2, el pH y las concentraciones de otros iones.
Potencial de reduccin del medio:

( ( ) ( ))

E (mV )= E 0 + 0 ,06 log PO + log H +

2

Se puede reducir bajando la concentracin de O2 (burbujeo de nitrgeno) o

por agregado de agentes reductores (cistena, Na2S, HCl).
Concentracin de CO2 disuelta puede afectar. Puede ser txica para algunas
clulas y necesaria para otras.
Se regula modificando la concentracin en la corriente de burbujeo.
Fuerza inica: afecta el transporte de ciertos nutrientes desde y hacia el
interior de las clulas. Depende de la concentracin y de la carga de los iones
en el medio:
FI = 12 ci Zi2
i

Generacin de calor por crecimiento microbiano

4050% de la energa suministrada por las fuentes de C se

convierten en ATP (forma en que las clulas acumulan energa)
el resto se libera como calor.
El calor liberado se puede calcular a partir de las entalpas de
combustin del sustrato y de la biomasa formada:

CO 2 + H 2 O
Crecimiento
microbiano y
respiracin
1/YH (kJ/g clula)

celulas
Combustin de
las clulas
Hc (kJ/g)

Ciclo entlpico
para calcular el
calor generado
combustion del
sustrato, H S ( kJ / g )

Sustrato + O 2 CO 2 + H 2 O
HS
YX /S

1
= H c +
YH

YH =

YX /S

HS YX /SH c

Algunos valores tpicos:

Hc ~ 20 25 kJ/g clulas
YH ~0,42 g/kcal (glucosa); 0,30 g/kcal (malato); 0,18 g/kcal (etanol)
0,12 g/kcal (metanol); 0,061 g/kcal (metano)
El grado de oxidacin del sustrato afecta fuertemente la cantidad de
calor que evoluciona por el metabolismo de las clulas.
Para clulas en crecimiento activo, el requerimiento para
mantenimiento es bajo la evolucin de calor est directamente
relacionada con el crecimiento.
Velocidad total de generacin de calor en una fermentacin batch se
calcula considerando la velocidad de crecimiento.
1
Q generado = neta X
V
YH
En una fermentacin aerbica, se correlaciona con la velocidad de
consumo de oxgeno, dado que es el aceptor final de electrones.
Q generado = 0,12 Q O

Configuraciones de refrigerantes en biorreactores: (a) camisa externa

(b) serpentn externo (c) serpentn interno helicoidal (d) serpentn
interno tipo deflector (e) intercambiador de calor externo

Reactor batch de
escala laboratorio

Reactor batch de
escala industrial

Estequiometra del crecimiento microbiano y formacin de

productos Procesos complejos reflejan el transcurso de miles
de reacciones intracelulares.
Es importante poder comparar el rendimiento y la generacin de calor
que se obtiene empleando distintos sustratos la estequiometra de
conversin de sustratos a biomasa y a productos extracelulares se
suele representar por ecuaciones pseudoqumicas simples.

CH m O n + a O 2 + b NH 3 c CH O N + d H 2O + e CO 2
CHmOn representa un mol del carbohidrato empleado como sustrato
CHON representa un mol del material celular
La composicin del material celular depende del tipo de
organismo. Un mol de material biolgico es aquel que
contiene un tomogramo de C

Por que una frmula mnima escrita como: CHaObNd ?

Composicin elemental de la bacteria Escherichia coli
Elemento

% en masa seca

50

20

14

Na

Ca

0.5

Mg

0.5

Cl

0.5

Fe

0.2

Otros

0.3

92% de la masa seca

total esta formado por
C, O, N, H

Componentes minoritarios
no se tienen en cuenta en la
frmula mnima

Los coeficientes estequiomtricos y la frmula mnima se calculan

planteando balances elementales, la informacin del cociente
respiratorio y un balance de electrones disponibles.

CH m O n + a O 2 + b NH 3 c CH O N + d H 2O + e CO 2
Balances
elementales:

C:
H:
O:
N:

1= c + e
m + 3b = c + 2d
n + 2a = c + d + 2e
3b = c

Los balances para H y O pueden no dar informacin correcta por la

gran masa de agua que tienen las clulas se requiere informacin
adicional.
Cociente respiratorio (RQ): moles de CO2 producidos por mol de
O2 consumido provee una indicacin del estado metablico y puede
emplearse para controlar el proceso.
moles CO 2 generados e
RQ =
=
moles O 2 consumidos a

Balance de electrones disponibles:

Para las reacciones mas complejas, con formacin de productos
extracelulares, se agregan componentes Fhay un coeficiente
estequiomtrico ms y se requiere mayor informacin.
Adems, los balances elementales no se relacionan con los
cambios de energa involucrados en la reaccin.
Fse desarroll el concepto de grado de reduccin, , para poder
plantear balances de electrones y protones en bioreacciones.
Grado de reduccin: nmero de equivalentes de electrones
disponibles por tomo-gramo de C. Los electrones disponibles son
aquellos que se transfieren al O2 al formarse CO2 o H2O.

i,sustratos i i = i,productos i i
i :coef .estequiometri cos ; i :grados de reduccion

Cintica de crecimiento microbiano: Modelos

productos
mayor cantidad
Sustrato + biomasa
+
extracelulares
de biomasa

S + X

nX

1 dX
neta g k d
X dt
neta: Velocidad especfica neta de crecimiento (h-1)
g: Velocidad especfica de crecimiento de biomasa (h-1)

kd: constante de muerte celular o disminucin de masa celular por

metabolismo endgeno (h-1)
X: concentracin msica de clulas (g/L)
t: tiempo (h)

Cuantificacin de la cintica de crecimiento: modelos cinticos

Descripcin detallada Fdebera involucrar diferenciaciones en la
estructura de la clula y la segregacin del medio de cultivo en
unidades que pueden tener diferentes concentraciones y propiedades
fsico-qumicas Fmodelos estructurados-segregados
Modelos Estructurados FTienden a representar la estructura de las
clulas. Pueden dividir la clula en sus componentes y considerar las
reacciones y cambio de metabolismo que tienen lugar en cada zona
de la clula, como respuesta a cambios en el medio.
Modelos Segregados FTienen en cuenta que el medio no es
homogneo, permiten variaciones de concentraciones de biomasa y
de nutrientes y diferencias en las propiedades fisicoqumicas del
medio (viscosidad, densidad, pH, T, etc.). Tambin permiten
considerar la posibilidad de agregacin de clulas.

MAYOR COMPLEJIDAD

No estructurados

Estructurados

Segregados

Segregados

No estructurados

Estructurados

No segregados

No segregados

Son ms
realistas, pero
son complejos y
demandantes de
tiempo de
clculo.

MAYOR CAPACIDAD DE REPRESENTAR LA REALIDAD

El grado de realismo y complejidad de un modelo depende del

objetivo Fse debe elegir el modelo ms simple capaz de
representar en forma adecuada al sistema que nos interesa.

Nos restringimos a los modelos No-estructurados/No-segregados

Modelos No-Estructurados FSuponen una composicin fija de
la clula (equivalente a suponer crecimiento balanceado).
-Son estrictamente vlidos para la etapa de crecimiento
exponencial en batch
-No andan bien para transientes, salvo que la respuesta de la
clula sea rpida y/o las perturbaciones sean leves.

Modelos No-Segregados FConsideran un medio homogneo.

-Representan adecuadamente muchos casos.

Modelos cinticos de crecimiento: controlados por sustrato

FSuponen que la cintica depende solamente de un nico sustrato
esencial (por ej., glucosa). Los cambios en los otros sustratos no
afectan. Ms difundido F Modelo de Monod

g(h-1)

g =

m S

Ks + S
S (M)

Supone que un nico sistema

enzimtico controla el consumo de
sustrato y que dicho sistema
determina la velocidad de
crecimiento de biomasa.
biomasa

La premisa es generalmente falsa,

pero la ecuacin de Monod ajusta
una amplia gama de resultados
experimentales y es la expresin
ms empleada para el diseo de
fermentadores.

m: mxima velocidad especfica

g(h-1)

g =

de crecimiento de biomasa
g = m cuando S >> K s

m S

Ks: constante de saturacin o de

velocidad media

Ks + S

g = 12 m

cuando S = K s

S (M)
Monod da buenos resultados para cultivos con baja velocidad de
crecimiento y baja densidad de clulas.
Para cultivos concentrados se usan expresiones similares,
modificando Ks:

g =

m S

K S S0 + S
0

g =

m S

K s + K s S0 + S
1

Nociones de diseo de fermentadores o biorreactores

La eleccin del tipo de reactor y de la estrategia de operacin define
la produccin a obtener y la pureza del producto (nmero y tipo de
impurezas, reactivos sin convertir). Tambin determina si se puede
lograr un producto de calidad constante y una operacin confiable.
En bioprocesos los reactores representan un gran % del capital.
Tipos de reactores comnmente empleados
Discontinuos o batch: una vez que se carga, el proceso
ocurre sin ingreso de sustrato ni salida de productos.
Continuos (quimiostato): hay alimentacion
continua de sustrato y retiro continuo de productos
Semicontinuos (Fed-batch): hay ingreso
continuo o intermitente de sustratos, sin
retiro de productos.

Reactores discontinuos o batch

Produccin de biomasa o de un producto asociado a crecimiento
(metabolito primario):
En un batch se observan 4 etapas:
1) Preparacin para la nueva operacin (limpieza, esterilizacin,
llenado del reactor)
2) Sembrado y perodo de induccin
3) Perodo de crecimiento exponencial
4) Recuperacin del producto del reactor

La suma del tiempo involucrado en las etapas 1+2 y 4 es un tiempo

muerto, tm, a considerar en el diseo del reactor
vara con el tamao del reactor y con el tipo de fermentacin pero
generalmente es del orden de las horas (310 hs)
tiempo total de operacin para llegar a una concentracin final de
biomasa Xf :
Xf
1

tc = tm +
ln
neta X 0

La concentracin final de biomasa, Xf , depende de la cantidad de

sustrato limitante del crecimiento y del rendimiento:
kg
X f X 0 = YX / S S0 S
m3

La mayora de las fermentaciones operan con una relacin Xf/X0 de

aproximadamente 1020. La velocidad de produccin de biomasa
por operacin del reactor batch, rb , se calcula dividiendo la masa
total que podemos formar por el tiempo que lleva la operacin:

rb =

YX / SS0

(1/ neta )ln(Xf

X0 + t m

kg
m 3s

Una operacin en un quimiostato en condiciones ptimas conduce

a una produccin significativamente superior. De todos modos, la
mayora de las fermentaciones son procesos discontinuos.

Por qu?
En muchos casos no interesa el producto asociado a crecimiento;
el crecimiento de las clulas puede incluso inhibir la produccin
del producto deseado. En esos casos el producto deseado se genera
solo con velocidades de dilucin muy bajas, muy por debajo de la
que lleva a la ptima productividad de biomasa.
Para produccin de metabolitos secundarios, la productividad
en un batch puede superar significativamente a la de un
quimiostato.

Otra razn importante para que se prefiera la operacin

discontinua es la inestabilidad gentica. Los microorganismos que
se emplean suelen ser especies que han sido manipuladas y tienen
menor velocidad de crecimiento que las originales.
Un quimiostato impone una seleccin severa cuando hay
mezclas de cultivo, conduciendo a la cepa de mayor velocidad
de crecimiento.

Por qu?
Otro factor a tener en cuenta es la operabilidad y la confiabilidad
de la operacin. Los reactores batch conducen a productos con
mucha variabilidad genera problemas en las etapas de
purificacin. Sin embargo en los sistemas continuos una falla
mecnica o de control de alguna variable de operacin o de la
esterilizacin del proceso puede conducir a problemas severos.
Las consecuencias de una falla de operacin son mas graves
en un sistema continuo y las prdidas mayores.

La economa de mercado influye en la seleccin del reactor. Un

sistema continuo es un sistema dedicado a un dado proceso un
nico producto.
Muchos productos de fermentaciones se requieren en pequeas
cantidades y su demanda es difcil de proyectar. Los sistemas
batch son ms verstiles, el mismo reactor puede emplearse
para distintos productos.

Cultivos continuos Fse agrega un medio con nutrientes frescos en

forma continua, a un volumen de control que contiene las clulas.
Se retiran continuamente productos y parte de las clulas.
-Cuando se alcanza el estado estacionario, X, S y P permanecen
constantes en un dado punto del reactor.
-Los cultivos continuos proveen un medio de cultivo constante para
el crecimiento de las clulas y para la formacin de productos
Fcalidad uniforme de los productos
-Pueden ser una herramienta importante para determinar como un
microorganismo responde al medio, y para generar un producto en
condiciones ptimas.
Sistemas con mezclado
Quimiostato
perfecto: Tanques
Sistemas para
continuos idealmente
Turbidistato
lograr cultivos
agitados (TCIA)
continuos
Flujo Pistn Ideal (FPI): mezclado radial
perfecto y mezclado axial nulo; poco
empleado, salvo para inmovilizados

Quimiostato: el crecimiento de biomasa suele estar controlado

por un nutriente esencial y el resto se agrega en exceso. Las
condiciones qumicas del medio son constantes.

Turbidistato: la concentracin de clulas en el reactor se mantiene

constante. La alimentacin se regula mediante el monitoreo de la
densidad ptica del cultivo. Se alimenta medio fresco cuando la
turbidez supera un lmite prefijado. El volumen se mantiene constante
retirando una cantidad de fluido equivalente a la que se agrega.
Se usa menos que el quimiostato porque es ms elaborado y porque el
medio cambia.
Puede ser muy til
para seleccionar
subpoblaciones que
puedan soportar
condiciones de
stress, porque la
concentracin de
clulas se mantiene
constante.

FPI (Flujo Pistn Ideal):

como no hay retromezclado,

los elementos de fluido con
clulas activas no pueden
inocular elementos de fluido
nuevos aguas arriba
se requiere el reciclo
continuo de clulas para
inoculacin continua del
medio fresco alimentado.

L(+G,S)

L(+G,S)

Un FPI es equivalente a un batch, en el cual la posicin en el

reactor equivale a un dado tiempo en el reactor batch.
Equipos con clulas inmovilizadas (trickling filters) se asemejan
a un FPI y no necesitan el reciclo, se usan extensamente en
tratamiento de efluentes.

Fotobiorreactor tubular helicoidal de

1000 L (Murdoch University, Australia)

Recuperacin de microalgas a partir

del medio de cultivo por filtracin
Cyanotech Corporation
(www.cyanotech.com), Hawaii, USA.

Cultivos continuos: Quimiostato ideal

Es un tanque agitado que se opera con circulacin continua (TCIA)
del medio de cultivo. La mayora requiere control (pH, T y CO2).
Se alimenta medio estril (X0= 0) a un tanque perfectamente
agitado (y aireado si es fermentacin aerbica). Se deja salir la
suspensin de clulas para mantener las concentraciones y el
volumen de lquido constante.

Fv
S0, X0, P0

Burbujeo
de gas

Fv
S, X, P
Las concentraciones a la
salida del reactor son
iguales a las del interior
por la hiptesis de
mezclado perfecto
Volumen de lquido =
volumen de reactor = V

Balances de masa FEcuaciones de diseo

Planteando balances de masa para los distintos componentes, se
obtienen las ecuaciones de diseo.
Masa que Masa que Masa Masa Masa
sale del VC entra al VC consumida generada acumulada
con los con los + dentro del dentro del = dentro del
productos reactivos V.C. V.C. V.C.

Si el volumen de control V.C. es un QUIMIOSTATO

Un quimiostato opera en estado estacionario F se cancela el trmino

de acumulacin de masa:
Masa que sale Masa consumida Masa que entra Masa generada

= al V.C. con +
del V.C. con +

los productos dentro del V.C. los reactivos dentro del V.C.

Quimiostato - ecuaciones de diseo

Masa que sale Masa consumida Masa que entra Masa generada

= al V.C. con +
del V.C. con +

los productos dentro del V.C. los reactivos dentro del V.C.

Fv
S0, X0, P0

Fv
S, X, P

Balance de masa de clulas:

FV X = FV X 0 + V neta X

FV X = FV X 0 + V g k d X

FV: caudal volumtrico de medio

de cultivo agregado (L/h)

Gas

Definiendo el factor de dilucin como caudal/volumen: D = FV/V

DX = DX 0 + g k d X

Si se alimenta medio estril (X0= 0) y

el mecanismo endgeno es despreciable

DX = DX 0 + g k d X

D = g

Importancia de este resultado: En un quimiostato en

D= g EE, alimentado con medio estril y en condiciones
en las que el metabolismo endgeno es despreciable,
la velocidad o factor de dilucin, D, iguala a la
velocidad de crecimiento de clulas
F se puede manipular la velocidad de crecimiento como un parmetro
independiente modificando las variables de operacin
F el quimiostato es una herramienta experimental poderosa

Si la velocidad de crecimiento sigue la expresin de Monod

D = g =

m S
Ks + S

S: concentracin de sustrato limitante

del crecimiento de biomasa en EE

Si se impone un factor de dilucin D > m , las clulas no se podrn

reproducir lo suficientemente rpido para mantenerse F se lavan, o
se vaca el quimiostato (washout)

BM sustrato en estas condiciones (EE y sin metabolismo endgeno):

Masa que sale Masa consumida Masa que entra Masa generada
= al V.C. con +

del V.C. con +

los productos dentro del V.C. los reactivos dentro del V.C.

FVS

1
1
+ Vg X M + Vq P X
YP /S
YX /S

Formacin de biomasa

FVS0

Formacin de producto

FV: caudal volumtrico de medio de cultivo agregado (L/h)

S: concentracin de sustrato limitante del crecimiento (g/L)
V: volumen del reactor (L)
g: velocidad especifica de crecimiento de biomasa (1/h)
X: concentracin de biomasa (g/L)
qP (gP/gclulas/h): velocidad especfica de productos extracelulares
YMX/S (g clulas/gS) : mximo rendimiento de biomasa a partir de S
YP/S (gP/gS) : rendimiento de producto extracelular a partir de S

Concentracin msica de clulas en estas condiciones (EE y sin

metabolismo endgeno):

D S0 S

= X

YXM/S

+ X

qP
YP /S

Como adems g = D , si la formacin de

M
X
=
Y
S S
X /S 0
productos extracelulares es despreciable:

Estrictamente, YX /S depende de la concentracin de sustrato y de la

velocidad de crecimiento, no es exactamente igual para cualquier S0
La productividad en un fermentador continuo se
obtiene como el producto del factor de dilucin por la
concentracin de clulas, DX (g/Lh)

Productividad en un quimiostato, suponiendo vlida Monod (EE sin

metabolismo endgeno ni formacin de productos extracelulares): se obtiene del

producto del factor de dilucin por la concentracin de clulas, DX (g/Lh):

X = YXM/S S0 S
D = g =

mS

Ks +S

S=

DK s

m D

D
Ks
M

DX = YX /S DS0

D
m

La velocidad de dilucin que maximiza la produccin de biomasa se obtiene

de derivar DX con respecto a D e igualar a cero:

D op ( X )

Ks

= m 1

+
K
S
s
0

Normalmente Ks<< S0 Dop(X)

D = m , o sea al punto de lavado

Es muy difcil lograr una operacin estable para D m. Generalmente, se

usa un valor de D algo menor que Dop(X) como solucin de compromiso
para mejorar la estabilidad con buena productividad.

Reemplazando la expresin de Dop en la ecuacin que da la productividad

de biomasa DX:

DX )op

D op K s

= YXM/SD op S0

D
m
op

Se obtiene la mxima productividad de biomasa que se puede alcanzar en

un quimiostato en EE, sin metabolismo endgeno y sin formacin de
productos extracelulares:

DX )op

Ks
M

= YX /S m 1

+
K
S
s
0

S + K K K +S
s
s
s
0
0

Normalmente Ks<< S0 DX)op YX /S mS0

))

Efecto del factor de dilucin sobre la concentracin de clulas,

D (1/h) S (kg/m )
concentracin de sustrato y la productividad.
0.06
0.006
3

0.5

1
3

0.4

0.12
0.24
0.31
0.43
0.53
0.6
0.66
0.69
0.71
0.73

S0

0.8

X (kg/m )

0.3

0.6

0.2

0.4

0.013
0.033
0.04
0.064
0.102
0.122
0.153
0.17
0.221
0.21

X (kg/m3)
0.427
0.434
0.417
0.438
0.422
0.427
0.434
0.422
0.43
0.39
0.352

DX
3

0.1

0.2

S (kg/m )
0

0
0

0.2

0.4

0.6

0.8
-1
D (h )

(kg/h.m
0.3)
0.2
0.1
0
0

0.2

0.4

-1
0.6 D (h0.8
)

Algunas aplicaciones de los sistemas continuos:

- produccin de algunas protenas
- tratamiento de efluentes, en particular cuando se emplean
microorganismos o enzimas inmovilizadas.
- produccin de etanol
- produccin de productos asociados a crecimiento,
especialmente en gran escala (por ejemplo, cido
lctico)
Modificaciones de los sistemas continuos para emplearse en
bioprocesos
Quimiostato con reciclo
La generacin de biomasa es autocatalitica F mayor
concentracion de biomasa lleva a mayor velocidad de
crecimiento.
Para lograr en un quimiostato una concentracin de biomasa
mayor, se pueden reingresar al reactor las clulas que salen.

Quimiostato con reciclo: el reciclo de clulas incrementa la

productividad y tambin la estabilidad en algunos sistemas, dado
que minimiza las perturbaciones (ej.: en tratamiento de efluentes,
muy sujeto generalmente a las variaciones en la alimentacin).

Fv
S0,X0,P0

Fv
S1,cX1,P1

Gas

: relacin de reciclo
basada en caudales
volumtricos.
Fv(1+)
c: factor de concentracin
S1,X1,P1
relacin de la
concentracin de
clulas en la corriente
Fv
de reciclo sobre la que
S1,X2,P1
sale del reactor

Separador de clulas: puede ser

por filtracin, centrifugacin o
sedimentacin

Balances de biomasa :
Masa que Masa que Masa Masa Masa
sale del VC entra al VC consumida generada acumulada
con los con los + dentro del dentro del = dentro del
productos reactivos V.C. V.C. V.C.

(1+ ) FV X1

(FV X 0 + FVcX1 )
fresca

V neta X1 = 0

reciclo

En EE: dX1/dt = 0
y si se alimenta medio
estril X0=0

Fv
S1,cX1,P1

V neta X1 = (1+ ) FV X1 FV cX1

neta = D(1+ c )

Gas

Fv
S0,X0,P0

Fv(1+)
S1,X1,P1
Fv
S1,X2,P1

Fv
S0,X0,P0

Fv
S1,cX1,P1

Fv(1+)
S1,X1,P1
Fv
S1,X2,P1

Gas

neta = D[1+ (1 c)]

Como c > 1 (1-c) < 0

 neta < D
Cuando hay reciclo, el
quimiostato puede operar con
una velocidad de dilucin
mayor que la de crecimiento

BM sustrato limitante (en EE):

Masa que sale Masa consumida Masa que entra Masa generada

= al V.C. con +
del V.C. con +

los productos dentro del V.C. los reactivos dentro del V.C.

1
1
(1+ )FVS1 + Vg X1 M + Vq P X1
= FVS0 + FVS1
YP /S
YX /S
Formacin de biomasa

Formacin de producto

BM sustrato limitante
(en EE y en ausencia de productos extracelulares):

1
1
(1+ )FVS1 + Vg X1 M + Vq P X1
= FVS0 + FVS1
YP /S
YX /S

1
V g X1 M = FV S0 + S1 (1+ )FVS1
YX /S

X1 =

YXM/S S0 S1

Si k d = 0 g = neta = D[1+ (1 c)]

)
X1 =

YXM/S S0 S1
1+ (1- c )

La concentracin de clulas en un quimiostato en EE con reciclo se

incrementa por el factor 1/[1+(1-c)]

Si es vlida Monod
y para kd=0
S=

K s [1+ (1- c )]D

m [1+ (1-c)]D

X1,cr
X1,sr

g =

mS
Ks +S

neta = D[1+ (1 c)]

K s [1+ (1- c )]D

S
X1 =
0
[1+ (1-c)]
m [1+ (1- c)]D
YXM/S

Velocidad de
generacin de
biomasa

Fv
S0,X0,P0

Fv
S1,cX1,P1

Fv(1+)
S1,X1,P1

c = 2 ; = 0.5
V
con reciclo

sin reciclo

Gas
Fv
S1,X2,P1

Quimiostatos mltiples en cascada: en algunas fermentaciones,

particularmente para la produccin de metabolitos secundarios (ej.:
un antibitico), conviene separar las etapas de crecimiento de
biomasa y de formacin del producto deseado pues las condiciones
ptimas son diferentes
F con mltiples quimiostatos, se pueden fijar condiciones
distintas en cada uno: pH, temperatura, conc. de nutrientes

por ejemplo, se pueden ajustar las condiciones para tener:

-Un primer tanque donde se promueva el crecimiento de biomasa
-Un segundo tanque donde se promueva la formacin de producto(*)
(*) el crecimiento ser desbalanceado y un modelo no-estructurado
no es el ms apropiado. Los resultados sern aproximados.

Fv,S0,X0

Quimiostatos mltiples en cascada:

Fv,S0,X0

Primer quimiostato
S1 =

Fv,X2,S2

Fv,X1,S1

K s D1

m D1

X1 = YXM/S S0 S1

X1
S1

X2
S2
V1

V2

en EE, vlido Monod y con metabolismo endgeno despreciable

Segundo quimiostato

BM de biomasa FV X1 FV X 2 + V2 neta , 2 X 2 = V2

dX 2
dt

= 0 en EE

X1

X 2 X1 = neta , 2 X 2 neta , 2 = D 2 1
X
V2
2

FV

Como X1 < X2

neta,2 < D2

Ejemplo de aplicacin de un sistema multietapa con agregado de una

corriente: cultivo de clulas modificadas por ingeniera gentica
En general se agregan promotores a los sistemas con clulas que
contienen ADN recombinante para inducir la produccin de la
protena de inters.
La presencia del promotor favorece la produccin de la protena
pero reduce la velocidad de crecimiento de las clulas que contienen
plsmidos, respecto de las que lo han perdido.
un quimiostato de una nica etapa tendr problemas de
inestabilidad gentica.
empleando un sistema de 2 etapas:
Primer quimiostato para produccin de clulas (sin promotor)
Segundo quimiostato para produccin de la protena (c/promotor):
Se logra mantener la estabilidad gentica por el continuo agregado
de clulas frescas.

Operacin con alimentacin semi-continua Fed-batch:

En este tipo de sistemas se agregan nutrientes frescos al fermentador
en forma continua o intermitente. Muy apropiado para mitigar
problemas de inhibicin por sustrato
Xf,Sf,Pf
S0,X0,P0
Fv,S0 (X0)

V0
X0,S0,P0
1)Carga

Vf

Xf,Sf,Pf
3)Recuperacin
del producto

X,S,P
2)Realimentacin

1) Desde la carga hasta el momento de la realimentacin peridica,

el sistema se comporta como un batch: X = X + Y M S S
0

X /S

(0 )

Xm es la mxima X a alcanzar con S0 , que se da

X m = YXM/SS0
cuando S << S0 y para la cual tambin X0 << Xm

Operacin con alimentacin semi-continua Fed-batch:

Cuando X Xm , se agrega una corriente de

Fv,S0 (X0)
nutrientes frescos con un caudal volumtrico
Fv y de una concentracin S0. La variacin de
volumen es:
dV
= Fv V = V0 + (Fv ) t
dt
V
Durante la realimentacin, el BM de biomasa
X,S,P
es:
dV
dX
d(VX )
=V
+X
FV X 0 + V neta X =
2)Realimentacin
dt
dt
dt
entra + se genera = se acumula

dX
dX FV
X dV
= X 0 + neta X
= DX 0 + X neta D
X neta D
dt V
V dt
dt

Como el sustrato se consume casi todo dX/dt 0

neta D
(condicin de estado cuasi-estacionario). Luego:
Como D porque V, neta va disminuyendo continuamente.

Operacin con alimentacin semi-continua Fed-batch:

BM para el sustrato:
Vg X Vq X d(VS)
Fv,S0 (X0)
FVS0
P =
dt
YXM/ S YP / S
entra se consume = se acumula
Si no consideramos la formacin de
V
productos y dado que la masa de sustrato
se mantiene siempre
g (XV )
X,S,P
baja y constante: FVS0 =
2)Realimentacin
YXM/ S

d(XV )

= neta (XV ) FVS0 YXM/ S (XV )= X 0 V0 + FVS0 YXM/ S t

dt
(es igual en ausencia de metabolismo endgeno)

Es decir, la masa de clulas generadas es linealmente proporcional

al tiempo, lo cual se observa experimentalmente en un fed-batch.

Operacin con alimentacin semi-continua Fed-batch:

Variacin de las
concentraciones de
biomasa, sustrato y
producto, y de la
velocidad de
crecimiento y volumen
del cultivo en funcin
del tiempo, para el
primer ciclo de un
reactor alimentado
(fed-batch):

(h-1)

V (mL)
1000
X (g/L)
P (g/L)

0.6
V (mL)

800

600

0.4

(h )
-1

400

0.2
200
P (g/L)

X (g/L)

0
0

0.5

1.5

t 2(h)

Sistemas con microorganismos inmovilizados: la inmovilizacin

de microorganismos tiene aplicacin si los productos son
extracelulares
Ventajas sobre los cultivos con clulas en solucin:

Proveen una alta concentracin de clulas

Las clulas se usan en forma continua y se eliminan costosos
procesos de recuperacin y reciclo de clulas
Se eliminan el problema del washout a altas velocidades de
dilucin
Se pueden lograr altas productividades
Se puede lograr un medio local favorable que conduce a mayores
rendimientos y una mejor performance del biocatalizador
En algunos casos mejora la estabilidad gentica
En algunos casos disminuye el dao por abrasin de las clulas

Sistemas con microorganismos inmovilizados

Desventajas respecto de los cultivos en solucin:

El problema ms grave es que no se pueden emplear para

productos que no sean excretados de las clulas
La inmovilizacin generalmente conduce a problemas de
limitaciones por transferencia de masa
El sistema se torna muy heterogneo por las limitaciones de
transporte y es difcil de controlar
Si las clulas estn vivas, el crecimiento y la evolucin de gases
ocasiona problemas y puede conducir a ruptura del soporte.
Los mtodos de inmovilizacin son similares a los que se utilizan
para enzimas. Se complica con las clulas vivas.

Activa: captura o unin de clulas por

Inmovilizacin
mtodos fsicos o qumicos
Pasiva: formacin de biofilms, crecimiento
de mltiples capas de clulas sobre un
soporte slido

Tambin se pueden emplear reactores de membrana, generalmente

tubulares (la estructura se asemeja a un intercambiador de calor de
carcasa y tubos). Los tubos son de una membrana semipermeable.
Las clulas se inoculan en la carcasa y el sustrato se bombea por los
tubos, a los cuales difunde el producto.
Un buen soporte debe ser rgido y qumicamente inerte; debe
contener a las clulas firmemente y tener alta capacidad.

Fermentadores: Equipos comnmente empleados

Tanques agitados
Columnas de burbujeo
Air-lift o reactor de arrastre
Lechos rellenos

H/D~36

Esquema de un tanque agitado

Esquema de una
columna de burbujeo
H/D~12

Tanques agitados de escala

laboratorio

Tanques agitados de escala

laboratorio con clulas
inmobilizadas

Fermentadores comerciales de escala laboratorio (V ~ 2-20 litros)

Global Medical Instrumentation http://www.gmi-inc.com

Fermentadores de escala banco-piloto (V ~ 15-75 litros)

Fermentadores de
escala piloto
V ~ 100-1000 litros

Biorreactor de
escala piloto

Planta piloto de bioprocesos

Esquema de un tanque
agitado de mayor escala

Variables que se controlan en un biorreactor industrial

Esquema de un fermentador
tipo tanque agitado de escala
industrial (100m3).

H ~ 15 m de alto
D ~ 4,2 m de dimetro
Tiene lneas de vapor
para realizar la
esterilizacin in situ de
las vlvulas, caeras y
sellos. Se debe esterilizar
tambin el aire que
ingresa por filtracin o
por calentamiento.

Biorreactor de
escala industrial

Reactor tanque industrial

-generalmente de acero inoxidable 316L SS, puede operar presurizado.
-debe minimizar zonas muertas y permitir la insercin de sensores
-relacin de aspecto H/D=2.53.0 para crecimiento de bacterias porque
mejora la transferencia de oxgeno. Para clulas animales se usan tanques
de baja relacin de aspecto H/D=1.5 para facilitar el mezclado
-se debe poder vaciar
totalmente
-si tiene menos de
500L pueden ser de
vidrio

Reactor tanque agitado: tipos de turbinas empleadas y efectos en la

agitacin que inducen

Agitacin inducida por turbinas

radiales del tipo Rushton

Agitacin inducida por turbinas

axiales

Interior de un
tanque agitado

Reactor tanque agitado: efecto de los baffles

Los baffles mejoran notablemente la turbulencia, rompen los vrtices

que se forman por la agitacin. Se los ubica levemente desplazados
de la pared para disminuir la formacin de zonas estancas.

Reactor tanque agitado: efecto de los baffles en un reactor de 2L

400rpm sin baffles

vrtice

400rpm con baffles

Agitacin y distribucin de gas en reactores agitados

La determinacin de la velocidad de transferencia de oxgeno y el
calor liberado son claves para el diseo de los fermentadores.
La velocidad de transferencia de O2 depende de la dispersin de gas,
que es funcin del tipo de reactor; ej: en tanques agitados, aumenta al
aumentar la velocidad de agitacin.
> RPM

Influencia de la velocidad de agitacin sobre la turbulencia y la

dispersin de gas inducida por agitacin mecnica en un reactor
de laboratorio de 2L.

300 rpm

450 rpm

750 rpm

Fraccin gaseosa (adimensional)

Tomografa de una seccin del

reactor agitado.
Jets gaseosos de los inyectores de gas
Perfil de velocidades (cm/s) del lquido
en un reactor gas-lquido agitado. Se
observa la formacin del vrtice
caracterstico de las turbinas radiales.

Reactor agitado en
suspensin de escala
banco: 20cm de
dimetro y de alto
(volumen ~ 8L)

Reactor tanque agitado:

Problemas ocasionados por

la evolucin de espuma:
-peligro de contaminacin
-complica la circulacin de
gases
vrtice
-complica el mezclado
-cambian las velocidades
de transferencia masa y de
calor

Configuraciones comunes de fermentadores: columnas de burbujeo

Columna de burbujeo de escala banco: V~10L

Columnas de burbujeo
Regmenes de flujo en columnas de
burbujeo: depende del caudal de gas y del
distribuidor que se emplee

Columnas de burbujeo para el

cultivo de algas

Configuraciones comunes de fermentadores

Configuraciones de recirculacin interna inducida por el flujo de

aire Air-lift

Air-lift con
insercin de
aire en el
tubo central

Air-lift con insercin

de aire en el anillo y
mezclado en el tubo
central

Air-lift con insercin de aire en

el tubo central y recirculacin
inducida

Reactor air-lift de
laboratorio con entrada de
aire en el anillo circular
Zona donde se produce la
separacin entre el gas que se
libera hacia el exterior del
reactor y el lquido que recircula
Riser: zona donde se hace la
inyeccin de aire, el flujo es
ascendente y contiene burbujas
Downcomer: zona donde el lquido
desciende, a lo sumo tiene pequeas
burbujas disueltas

Air-lift vertical con mezclado en el tubo central: perfiles

de velocidades, energa cintica y tensin de deformacin

Escala
banco
(0,2 x 2)m

Shear Stress

Kinetic Energy

Reactor de tipo air-lift circulante

Airlifts de forma
triangular para el
cultivo de algas
(planta piloto de
cogeneracin de
energa del MIT)

Configuraciones comunes de fermentadores

Reactores de lecho fijo uso frecuente en tratamiento de efluentes y
en producciones dedicadas
Reactores trickle-beds o de lecho a goteo
Cocorriente
Contracorriente

Columnas de burbujeo
rellenas

Inmovilizacin pasiva (biofilms):

Los biofilms son grupos de clulas que crecen en multicapas
sobre soportes slidos.
El soporte puede ser inerte o biolgicamente activo.
La formacin de biofilms es comn en equipos de fermentacin
industriales (ej: tratamiento de efluentes y fermentaciones de hongos).
La interaccin entre las clulas y el soporte puede ser muy compleja.
Los biofilms presentan ventajas y desventajas similares a las de los
sistemas de microorganismos inmovilizados en forma activa.
Las condiciones dentro de un biofilm grueso varan con la posicin y
afectan la fisiologa de las clulas porque los nutrientes difunden
hacia el interior del film y los productos hacia fuera.
El espesor del biofilm afecta la performance: biofilms muy finos van
a dar baja velocidad de crecimiento por la baja concentracin de
biomasa y los muy gruesos tienen problemas difusionales, que pueden
ser o no un inconveniente, dependiendo de lo que se quiera lograr.
Normalmente existe un espesor de film optimo para el crecimiento de
biomasa y otro para la formacin de productos.

Estrategias de escalado:

-Multiplicacin
-Reglas de uso
-Anlisis del rgimen
y escalado hacia menor
tamao
La multiplicacin implica
replicar muchas veces el
resultado que se obtiene
en un reactor de escala
relativamente pequea, en
lugar de llevar a cabo el
proceso en un reactor de
mayor tamao.

Produccin de cido glucnico

Produccin de gluconato de sodio con A. niger

Produccin de antibitico

Produccin de lisina (10000 ton/ao)

en 20 fermentadores de 250 m3

Drogas medicinales

Reglas de uso : basadas en anlisis dimensional y criterios de

similaridad de algunos parmetros

% de uso en la industria

Criterio de escalado

30

Potencia/Volumen

30

kLaLG

20

Velocidad en la punta del agitador

20

Concentracin de oxgeno

Otras: velocidad (rpm) del agitador o impeler; dimetro del

agitador; caudal desplazado por el impeler; caudal desplazado
por el impeler, por unidad de volumen; numero de Reynolds

Anlisis del rgimen

y escalado hacia
menor tamao

La concentracin de
oxgeno es diferente en
distintas zonas del
reactor. Se puede simular
considerando varios
reactores con distinta
alimentacin de oxgeno

Modelo del sistema que supone

dos compartimientos con distinta
concentracin de oxigeno