Qu es y cul es el objetivo del fraccionamiento celular, la homogeneizacin y la centrifugacin

diferencial?
Fraccionamiento Celular: Es una tcnica de laboratorio, tras la disgregacin, en la que se intenta
reagrupar las partculas, generalmente clulas u orgnulos celulares, de modo que, sus
funciones individuales puedan ser estudiadas.
Homogeneizacin: El fraccionamiento celular comienza con la homogeneizacin, o sea la ruptura
de la clula. El objetivo es romper las clulas sin daar severamente sus organelos.
Centrifugacin diferencial: La centrifugacin diferencial es un proceso de separacin que puede
separar los componentes celulares por centrifugacin repetida, a velocidades cada vez mayores.
En estas condiciones, los componentes de la clula se separan en funcin de su tamao y
densidad: los componentes de gran tamao y ms densos migran ms rpidamente hasta el
fondo a velocidades relativamente bajas y forman un sedimento.
Conversion :
G=1.12 x R x (RPM/1000)^2 donde R: radio en milmetros del centro del rotor a la base de la
camisa de forma horizontal.
Qu soluciones pueden utilizarse en la homogeneizacin qumica, cuales son las ventajas y
desventajas de cada uno de ellos?
Se utilizan sustancias que puedan daar directamente a la pared celular, como:
Solventes Orgnicos:
V= Disuelve lpidos (que forman la pared celular) y la desestabilizan, es barato.
D= Causa un stress moderado en la celula.
Detergentes:
V=Disuelve la membrana celular, por lo que la solubiliza, adems de causar un stress suave a la
clula.
D=En cuanto a costos es moderadamente caro.
Alcalis:
V=Solubilizacion de la membrana por saponificacin de los lpidos que la componen, adems de
ser barato.
D=No es muy recomenble el uso de este mtodo ya que causa un stress muy fuerte en la celula.
Agua (Shock osmtico):
V=Roptura omotica de la membrana, causa un stress muy suave a la celula y es barato.

En la centrifugacin diferencial se obtienen fracciones puras? Fundamenta tu respuesta.

No, debido a que en el pellet han quedado los organelos intactos, mientras que en el
sobrenadante esta una mezcla de fracciones de organelos. La separacin se basa en la distinta
velocidad de sedimentacin de las partculas, en definitiva de la diferencia de masa y de
densidad de las partculas.
Qu otras tcnicas pueden utilizarse para mejorar la purificacin de organelos celulares?
Fundamenta tu respuesta

Otro de los procedimientos consiste en la preparacin en un tubo de centrfuga de una solucin

que puede ser de sacarosa o de otras sustancias, en la cual la concentracin de la sustancia
disuelta va aumentando de arriba a abajo en el tubo. Esto equivale a que existan entonces
diferentes densidades a distinta altura. Si luego se coloca un homogeneizado o una preparacin
un poco ms pura obtenida de alguna clula, y se le somete a una centrifugacin, cada una de
las partculas presentes en el homogeneizado se va a detener en el punto en donde la densidad
del lquido sea igual a la propia. As, los ncleos viajarn hacia la parte inferior del tubo, las
mitocondrias se quedarn en una zona intermedia por arriba de la anterior, y los ribosomas en
una zona todava ms arriba.

El procedimiento que se llama de centrifugacin en un gradiente de concentracin, en ocasiones

permite separar componentes celulares que tienen densidades relativamente semejantes.
Como ya se mencion, las propiedades de las membranas de las partculas subcelulares pueden
estudiarse utilizndolas intactas; se pueden realizar los experimentos directamente con las
partculas obtenidas en la centrifugacin. Sin embargo, si lo que se busca es conocer ms
detalladamente las propiedades de las membranas, y en especial sus componentes, es necesario
en principio utilizar un procedimiento semejante al ya mencionado para la preparacin de las
membranas de los glbulos rojos; el procedimiento consiste en la ruptura de las membranas y su
separacin posteriormente, casi siempre por centrifugacin diferencial. En todos los casos,
cuando se hace la ruptura, cambian las densidades respecto a las clulas u organelos intactos, y
las velocidades de centrifugacin y los tiempos utilizados tienen que ser ms largos.
Las tcnicas para la separacin de los componentes celulares y sus membranas han
evolucionado a tal grado, que ya en esta poca es posible obtener una preparacin de
membranas puras de prcticamente cualquier sistema biolgico.
Qu efecto tiene la urea sobre las membranas celulares?
La urea es un compuesto qumico cristalino e incoloro; de frmula CO(NH2)2. Se encuentra
abundantemente en la orina y en la materia fecal. Es el principal producto terminal del
metabolismo de las protenas en el humano y en los dems mamferos. Las molculas en
solucin estn dotadas de energa cintica y, por tanto tienen movimientos que se realizan al
azar. La difusin consiste en la mezcla de estas molculas debido a su energa cintica cuando
existe un gradiente de concentracin, es decir cuando en una parte de la solucin la
concentracin de las molculas es ms elevada. La difusin tiene lugar hasta que la
concentracin se iguala en todas las partes y ser tanto ms rpida cuanto mayor sea energa
cintica (que depende de la temperatura) y el gradiente de concentracin y cuanto menor sea el
tamao de las molculas.
Algunas sustancias como el agua, el oxgeno, dixido de carbono, esteroides, vitaminas
liposolubles, urea, glicerina, alcoholes de pequeo peso molecular atraviesan la membrana
celular por difusin, disolviendose en la capa de fosfolpidos.
Algunas sustancias inicas tambin pueden cruzar la membrana plasmtica por difusin, pero
empleando los canales constitudos por protenas integrales llenas de agua. Algunos ejemplos
notables son el Na+, K+, HCO3, Ca++, etc. Debido al pequeo tamao de los canales, la difusin
a travs de estos es mucho ms lenta que a travs de la bicapa fosfolipdica
Cules son los colorantes vitales y que aplicacin tienen? Qu tipo de colorante es el
acetocarmin y cual es su fundamento quimico?
Son aquellos que ejercen su accin en las partes vivas de las clulas sin alterar su metabolismo,
y poniendo de relieve sus estructuras. Son preferidos los colorantes vitales que son retenidos por
la clula durante el tiempo necesario para poder realizar la observacin.
El cido carmnico, E-120, C.I. 75470, Natural Red 004, es una sustancia qumica compleja
utilizada como colorante rojo extrado de la cochinilla (Dactylopius coccus) u otros insectos. Se

utiliza como colorante en cosmticos (pintalabios, etc.) y como E-120 en la industria alimenticia
para dar un color rojo a los alimentos o a bebidas, aunque se sustituye cada vez ms por
colorantes sintticos ms baratos. Un sustituto ampliamente utilizado es el Ponceau 4R , un
colorante azoico con el nmero E124. El nombre deriva de la palabra rabe-persa kermes, que es
el nombre de una baya roja. En Europa se utiliza el cido carmnico obtenido a partir de insectos
autctonos al menos desde la Edad de Hierro, y se han descubierto restos, por ejemplo, en
tumbas de la cultura de Hallstadt.
El cido carmnico se utiliza mezclado con cido actico (0.1% Rojo Ponceau, 5% cido actico)
para visualizar protenas sobre membranas de nitrocelulosa. Es un colorante muy usado, ya que
luego puede decolorarse con facilidad con cido actico y metanol, y las protenas pueden ser
visualizadas posteriormente con un anticuerpo (Western blot). Aunque tiene menor sensibilidad
de deteccin que otros colorantes permanentes como Coomassie blue o la plata, es un mtodo
que permite una deteccin rpida.