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RESUMEN
Los cloroplastos son los orgnulos de las clulas vegetales donde se realiza la
fotosntesis, al convertir la energa lumnica en energa qumica (ATP) y generar
poder reductor (NADPH).1 En la prctica se realizo un protocolo para el
aislamiento de cloroplastos de hojas de espinaca, En l se resumen los principales
reactivos, soluciones, materiales biolgicos, equipos, y condiciones necesarias
para reproducirlo en condiciones de laboratorio, se probo la reaccin de Hills
donde en la suspensin de cloroplastos se desprendi O2 en presencia de luz,
Finalmente, se sugieren diversas aplicaciones para aislar otro tipo de organelas y
sus aplicaciones en el medio cientfico.
PALABRAS CLAVE: cloroplastos, organelas, ATP, NADPH
ABSTRACT
Chloroplasts are organelles of plant cells where photosynthesis takes place ,
converting light energy into chemical energy (ATP ) and generate reducing power
(NADPH )1 In practice a protocol for the isolation of chloroplasts of leaves was
performed spinach, it summarizes the main reagents , solutions, biological
materials , equipment, and conditions necessary to reproduce in laboratory
conditions , the reaction Hills where the suspension of chloroplasts came off O2 in
the presence of light was tested , Finally, suggest several applications for isolating
other organelles and their applications in scientific circles .
KEYWORDS: chloroplasts, organelles, ATP, NADPH
INTRODUCCIN
En 1939, Robn Hill y col. encontraron
que una suspensin de cloroplastos
MATERIALES Y METODOS
Aislamiento de cloroplastos:
Mortero y mano, Papel filtro,
Centrfuga, tubos, Gradilla, Probeta
de 50 ml, Erlenmeyer, beaker,
Embudo, Varilla de vidrio, Pipetas de
2 ml y de 1 ml, Vaso de precipitados
de 50 ml, Balanza, Hojas frescas de
espinaca, Solucin de sacarosa 0.5
M, Propilenglicol al 10%, Agua
destilada.
Se pesaron 6 g de hojas de espinaca
previamente desnerviadas y lavadas
dos veces con agua destilada fra. Se
cortaron las hojas en pequeos
trozos y se maceraron en un mortero
como se ve en la figura 1 y se le
agrego 2 ml de sacarosa 0.5 M
paulatinamente hasta 10ml con la
misma solucin.
Se desecho el sobrenadante y se
suspende el precipitado que contiene
los cloroplastos aislados en 6 ml de
propilenglicol al 10% agitando con
una varilla.
Medida de la reaccin de Hill en los
cloroplastos aislados
Grafica
1.
Comportamiento
de
absorbancia en cada una de las muestras
0.45
0.4
0.35
0.3
Figura 3. Cloroplastos con la solucin tampn
frente a la lmpara
Resultados de la absorbancia:
Tubo 1
0 minutos
3 minutos
6 minutos
9 minutos
Absorbancia
0.224
0.386
0.357
0.425
Resultados de la absorbancia:
Tubo 2
0 minutos
3 minutos
6 minutos
9 minutos
Absorbancia
0.274
0.261
0.253
0.247
Resultados de la absorbancia:
Tubo 3
0 minutos
3 minutos
6 minutos
9 minutos
Absorbancia
0.291
0.243
0.248
0.274
0.25
Tubo 1
0.2
Tubo 2
0.15
Tubo 3
0.1
0.05
0
0 Min.
3 Min.
6 Min.
9 Min.
CONCLUSIONES
Se logro determinar el efecto de la
intensidad luminosa sobre la actividad
fotosinttica de los cloroplastos.
Se identificaron las caractersticas del
aislamiento de los cloroplastos.
Se determinaron las funciones de los
reactivos empleados en la prctica y
se
entendi
la
medicin
de
fotosntesis
a
travs
de
la
ANEXOS
AISLAMIENTO
CLOROPLASTOS
DE
lisosomas
por
gradiente
de
de
equilibrio
de
diferentes
densidades
(masa/volumen. Una solucin es
preparada con la porcin de gradiente
con densidad ms alta en el fondo.
Despus, las partculas a separar son
aadidas al gradiente y luego
centrifugadas. Cada partcula es
procesada (igualmente arriba o abajo)
hasta que alcance un ambiente de
densidad comparable. Este gradiente
de densidad puede ser continuo o
preparado paso a paso.
2. Identifique las posibles funciones
de aislar organelas en el laboratorio.
Anexe
3
artculos que describan el uso de
estas tcnicas
2.1
http://www.medigraphic.com/pdfs/
neumo/nt-2010/nt103d.pdf
Aislamiento
de
organelos
en
macrfagos humanos infectados con
Mycobacterium tuberculosis
2.2
https://ibcmunq.files.wordpress.co
m/2010/03/tp2.pdfhttps://ibcmunq.fi
les.wordpress.com/2010/03/tp2.pdf
Extraccin
y
cuantificacin
de
protenas
2.3
http://www.arareko.net/biology/bac
terial_endosymbionts_of_amoebae
/index.pdf
Identificacin
y
aislamiento de posibles legionella sp.
Como bacterias endosimbiontes de
amebas de vida libre
ANEXOS
MEDIDA
DE
REACCION
DE
HILL
CLOROPLASTOS AISLADOS
LA
EN
1. Identifique la importancia de
este experimento desde el
punto de vista de las
aplicaciones que pueda tener
Aplicaciones:
Determinacin del efecto de la
intensidad luminosa, calidad de la luz,
el pH, la temperatura, sobre la
actividad fotosinttica de cloroplastos
en condiciones in vitro y ex vitro.
Determinar, en condiciones de
laboratorio, el efecto de herbicidas
inhibidores del transporte electrnico
en cloroplastos, as como en la
bsqueda
de
candidatos
ms
eficientes.
Evaluacin y seleccin de lneas
modificadas
genticamente
con
resistencia a herbicidas cuyo sitio de
accin se localice a nivel de
cloroplastos.
Determinar la actividad fitotxica de
algunos compuestos alelopticos
desacoplantes de la cadena de
transporte electrnico en cloroplastos.
Clculo de la tasa de transporte
electrnico en trminos de umol
DCPIP reducido/mg clorofila/h y su
utilizacin como un ndice de vitalidad
cloroplstica.
Determinar la actividad fisiolgica de
toxinas cloroplastos-especficas de
diversos agentes fitopatgenos, as