Que es la citometria de flujo?

La citometra de flujo es un mtodo analtico que permite la medicin rpida de

ciertas caractersticas fsicas y qumicas de clulas o partculas suspendidas en
lquido que producen una seal de forma individual al interferir con una fuente
de luz.
Una de las caractersticas analticas ms importantes de los citmetros de flujo
es su capacidad de medir mltiples parmetros celulares, como el tamao,
forma y complejidad y, por supuesto, cualquier componente celular o funcin
que pueda ser marcada con un fluorocromo.
Las aplicaciones de la citometra de flujo son numerosas, lo cual ha permitido
el empleo de estos instrumentos de manera amplia en los campos, tanto de la
investigacin biolgica como mdica.
Aplicacin:

Aplicaciones
Las aplicaciones fundamentales de esta tcnica se dan en biologa molecular,
celular y medicina ya que permite la identificacin de antgenos celulares mediante
tcnicas de inmunofluorescencia y el estudio del contenido de ADN y fases del
ciclo celular
La Citometra de flujo se utiliza en biomedicina en los siguientes campos:
En hematologa: contaje celular, frmula leucocitaria, contaje reticulocitario,
anlisis de mdula sea.
En industria farmacutica y farmacologa: estudios de cintica celular.
En inmunologa: Determinacin de subpoblaciones
inmunofenotipificacin de leucemias y linfomas

linfocitarias,

En oncologa: diagnstico, tratamiento y monitoreo de este.

En microbiologa: diagnstico bacteriano y vrico, sensibilidad a antibiticos.
En gentica: cariotipo, diagnstico de portador, diagnstico prenatal.

 En biologa celular, la citometra de flujo permite estudiar numerosos

parmetros celulares tales como la viabilidad, el metabolismo celular.

Las aplicaciones ms relevantes de la citometra de flujo en la prctica mdica

se relacionan con la hematologa e inmunologa clnicas, midiendo parmetros
como nmero y clasificacin de clulas sanguneas.
Esta tcnica es empleada tambin en el conteo de
subpoblaciones de linfocitos en pacientes son VIH
caracterizacin de leucemias agudas y sndromes linfoproliferativos crnicos,
En los ltimos 20 aos, el anlisis de enfermedades pulmonares de origen
inmunolgico
sarcoidosis,
neumona
eosinoflica
o
neumonitis
por
hipersensibilidad, Clasificacin de neoplasias, Cuantificacin de stem cell o
clulas progenitoras (CD34) Estudio de funcin neutrofilica (estallido
respiratorio, fagocitosis) Estudio funcin plaquetaria, Anlisis de DNA y RNA
celular

La citometra de flujo ha encontrado amplia utilidad en ciencias como la

inmunologa, hematologa, oncologa, anatoma patolgica y biologa celular 2 .
La conjugacin de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o
policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribucin de
determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular,
permitiendo identificar subpoblaciones celulares

Muestras:

Nos permite observar la clula, ncleo, cromosomas, mitocondrias y otras

partculas en suspensin.

En la actualidad los citmetros son capaces de analizar en un segundo

miles de partculas.

: Tipo de muestra

Aspirados de mdula sea, sangre perifrica y sangre de cordn umbilical.

Tambin pueden emplearse los productos de leucofresis y transfusin como los
concentrados de hemates, de plaquetas y el plasma. Se estudian, adems,
especmenes procedentes de tejidos linfoides como ganglio linftico, bazo y timo;
y de tejidos no linfoides, como, por ejemplo: piel, hgado, mucosa gstrica e
intestino. En este caso, pueden haberse obtenido por procedimientos quirrgicos,
biopsia o puncin-aspiracin con aguja fina.
De igual forma, el inmunofenotipaje se puede utilizar para el estudio de distintos
fluidos corporales, adems de lquidos: cefalorraqudeo (LCR), pleural y asctico.
Para el estudio de las leucemias agudas, preferentemente se usa el aspirado de la
MO por puncin de la cresta ilaca o el esternn, de modo firme y rpido, con el
empleo de agujas de biopsia de 14 a 8 G, que permitan obtener un nmero
suficiente de partculas de la MO en suspensin. Puede utilizarse tambin la SP
cuando la cantidad de blastos exceda el 50 %.
La cantidad de muestra necesaria depender del nmero de marcadores
antignicos a analizar, 1 mL de sangre total es suficiente para determinar hasta
diez antgenos. Se recomienda realizar el conteo total de leucocitos contenidos en
la muestra a estudiar, para determinar la cantidad de L necesarios para cada
determinacin, a travs de la siguiente frmula:
Para el anlisis del inmunofenotipo de las Leucemias Agudas por Citometra de
flujo se recomienda usar EDTA en vez de heparina sdica, debido al uso previo del
contador hematolgico y para no alterar la conformacin de los antgenos a
estudiar. Para la determinacin de antgenos de activacin plaquetaria y de los
productos de leucofresis, se recomienda usar cido citrato dextrosa (ACD) y
fosfato citrato dextrosa (CPD), respectivamente.
En todos los casos, la muestra debe conservarse a temperatura ambiente

Principio:

Principios de la tcnica: la tcnica se basa en el principio de Coulter sobre

la impedancia. Las clulas individualizadas y puestas en una solucin con
pH ajustado, se hacen pasar por un canal de unos 0,2 micrometros. El canal

est atravesado por una luz lser que incide perpendicularmente y es

captada al otro lado del canal por un detector (denominado receptor de
dispersin frontal). El lser ser tratado con lentes para enfocarlo sobre
el paso del canal y adems que la luz incidente sea monocromtica. Al
pasar la clula se corta el haz del lser sobre el receptor durante un tiempo
equiparable al tamao de la clula. Un ordenador toma el tiempo que
transcurre con el paso de la clula (microsegundos) y tras pasar todas las
clulas de la poblacin da los datos de la variacin en el tamao de las
clulas de la poblacin.