AISLAMIENTO DE UNA PROTEINA

BIOQUIMICA CLINICA

16 marzo de 2016

Las protenas son el principal componente estructural y funcional de las

clulas y tienen numerosas e importantes funciones dentro del
organismo que van desde su papel cataltico (enzimas) hasta su funcin
en la motilidad corporal (actina, miosina), pasando por su papel
mecnico (elastina, colgeno), de transporte y almacn (hemoglobina,
mioglobina,
citocromos),
proteccin
(anticuerpos),
reguladora
1
(hormonas), etc. .
Su caracterstica ms importante es que contienen nitrgeno, siendo el
contenido medio de este elemento de un 16%. Son macromolculas
formadas por cadenas de unidades estructurales, los aminocidos. Estos
aminocidos se unen por medio de enlaces peptdicos entre los grupos
carboxilo y el grupo a-amino, con prdida de agua. La secuencia de
aminocidos que componen una protena constituye su estructura
primaria, de vital importancia desde el punto de vista nutricional.
Tambin tienen importancia nutricional, aunque en menor medida, la
estructura secundaria y terciaria. Se clasifican atendiendo a distintos
puntos de vista como son: solubilidad, composicin, forma, propiedades
fsicas, funcin, estructura tridimensional, etctera. La protena supone
aproximadamente el 17% de la masa corporal. A pesar de su diversidad
funcional (enzimtica, de transporte y almacn, mecnica, motilidad,
proteccin, reguladora, etc.) un 25% es protena estructural y
hemoglobina1.
Las protenas pueden clasificarse en tres grupos, en funcin de su forma
y su solubilidad.
Protenas fibrosas: las protenas fibrosas tienen una estructura alargada,
formada por largos filamentos de protenas, de forma cilndrica. No son
solubles en agua. Un ejemplo de protena fibrosa es el colgeno2.
Protenas globulares: estas protenas tienen una naturaleza ms o
menos esfrica. Debido a su distribucin de aminocidos (hidrfobo en
su interior e hidrfilo en su exterior) que son muy solubles en las
soluciones acuosas. La mioglobina es un claro ejemplo de las protenas
globulares2.
Protenas de membrana: son protenas que se encuentran en asociacin
con las membranas lipdicas. Esas protenas de membrana que estn
embebidas en la bicapa lipdica, poseen grandes aminocidos hidrfobos
que interactan con el entorno no polar de la bicapa interior. Las
protenas de membrana no son solubles en soluciones acuosas. Un
ejemplo de protena de membrana es la rodopsina. Debes tener en
cuenta que la rodopsina es una protena integral de membrana y se
encuentra incrustada en la bicapa. La membrana lipdica no se muestra
en la estructura presentada2.

Casena
Caractersticas bioqumicas
La casena es una fosfoprotena, lo cual significa que esta qumicamente
unida a una sustancia que contiene cido fosfrico, la mayora de los
grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos
serina y treonina3.
La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcica como
caseinato clcico4.
De las 4 casenas conocidas, la y no son
solubles en leche y se precipitan en presencia de los iones de calcio, la
appa casena es la nica casena soluble en presencia de iones de
calcio, tambin presenta pocos grupos fosfato (5) y un alto contenido de
carbohidratos dispuestos en una sola cara de su superficie por lo que
esta parte exterior es fcilmente soluble en agua gracias a los grupos
polares. La otra parte de su superficie se une fcilmente a las y
casenas insolubles, lo que da lugar a la formacin y estabilizacin de la
micela3. Esta estabilidad est relacionada con las molculas de kappa
casena, las cuales forman en la superficie una estructura de cepillo con
fuerte entropa5.
En la leche bovina la micela de casena tiene un dimetro de 180 nm, la
superficie de la micela de casena contiene igual cantidad de y
casena con pequeas cantidades de casena, mientras que en el
interior se encuentra principalmente y casena. La kappa casena
tiene un peso monomrico molecular de 19.000 y se encuentra
comnmente como una mezcla de formas proteicas polimricas, aunque
tambin puede formar pequeos agregados en solucin acuosa por
asociacin de las partes hidrofbicas de la molcula5.
La gran cantidad de prolina existente en las casenas normalmente
inhibe la formacin de estructuras ordenadas elicolidales, la presencia
de kappa casena organiza algunas regiones en forma de hlices
cortas y fragmentos laminares6. La kappa casena es la nica
glucosilada, los grupos carbohidratados son unidos a la kappa casena
por los residuos de treonina y serina por va O-glicosidica en la porcin

C-terminal de la molcula, este proceso se incrementa durante la

produccin de calostro7. Tiene ms de 6 sitios de O-glucosilacin lo que
la hace una protena muy heterognea, estos sitios estn distribuidos
entre los residuos 127 a 141 de la cadena compuesta por 169
aminocidos, aun as, la molcula de kappa casena tiene del 30% al
40% de su estructura libre de carbohidratos. La Kappa casena humana
es menos glucosilada que la de cabra o vaca, los residuos
carbohidratados pueden ser ms del 55% del peso de la molcula, en los
bovinos esta porcin corresponde a la galactosa, N-acetil galactosamina
y al cido N-acetil neuraminico8.

Patologas
Fisiopatologa

Material y mtodos
1. Objetivos
I.

II.

Proporcionar al alumno un ejemplo de la separacin de una

molcula, en este caso una protena, a partir de una mezcla
como es la leche, investigando al mismo tiempo cuales son
los principios bioqumicos en que se basa dicho aislamiento.
Estudiar la importancia de la casena desde el punto de vista
nutricional y disponer de un preparado proteico, que junto
con la ovoalbmina (clara de huevo) y la seroalbmina
(suero humano) nos sirva para fines de prcticas de
laboratorio de aminocidos y protenas.

2. Fundamento
I.

En una solucin verdadera la mezcla es homognea y por lo

tanto no se puede separar una determinada molcula por
filtracin v.gr., pero en una solucin micelar o coloidal, como
es en la que se encuentra la casena en la leche es factible
aislarla aprovechando algunas propiedades fisicoqumicas de
las protenas. Por ejemplo, podemos usar la filtracin, la
centrifugacin, la cromatografa o la electroforesis para
separar una protena, tambin sabemos que una protena es
ms soluble mientras ms carga elctrica posea y es menos
soluble mientras ms se acerque a su punto isoelctrico, por
otro lado, la casena por ser rica en residuos de fosfoserina
le permite formar complejos con el calcio, lo cual le da
estabilidad: en este experimento bajaremos el ph al punto
isoelctrico de la casena (4.7) junto con calentamiento, lo
que produce la separacin del calcio y la disminucin de su

solubilidad, teniendo como consecuencia la precipitacin de

dicha protena. Adems, se utilizan solventes orgnicos
como el ter y el alcohol, con lo que se eliminan otras
molculas diferentes a la casena pero que pueden haber
precipitado junto a ella.

3. Material
I.
II.
III.
IV.
V.
VI.
VII.
VIII.
IX.
X.
XI.

Indicador de pH
Muselina
Papel filtro
Esptula
Termmetro
Leche
HCL al 2%
Etanol
ter
Nitrato de plata al 5%
Bao mara a 40 grados C

4. Procedimiento
I.

II.
III.
IV.
V.

Colocar 300ml de leche en un vaso de precipitado de 500ml,

agregar 100ml de agua destilada y calentar hasta 40 grados
centgrados.
Agregue lentamente HCL al 2% hasta observar que empieza
a precipitar la casena.
Agite durante 5 minutos y deje sedimentar durante 20
minutos.
Proceda a decantar el sobrenadante y lave con 300ml de
agua destilada.
Filtre a travs de la muselina.

VI.

VII.
VIII.
IX.
X.
XI.
XII.

Lavar de nuevo el precipitado con agua destilada hasta que

el filtrado est libre de iones cloruro (utilice al NO3Ag para
esto).
Retire el precipitado con una esptula y depostelo en un
vaso limpio.
Aada 50ml de etanol, agite fuerte durante 5 minutos y filtre
en muselina.
Lave el precipitado una vez ms con 50ml de alcohol-ter a
partes iguales.
Agite y filtre de nuevo en muselina.
Lave el precipitado sobre un papel filtro con 50ml de ter y
squelo.
El polvo formado puede diluirse en 100ml de agua destilada.

5. Anlisis de resultados
I.

II.
III.

Investigar la importancia diettica de la casena en el

humano.
Como se clasifica la casena.
Explicar porque se precipitan las protenas con los cidos y
que es el punto isoelctrico.

Bibliografa
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