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a la ingeniera
gentica
G UA D I DCTI CA
Introduccin
a la ingeniera
gentica
N DICE
Introduccin
Biotecnologa:
aplicaciones de la ingeniera gentica
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3.5. Clonacin.
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Orientaciones didcticas
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Introduccin
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El conjunto de mtodos y tcnicas que se emplean para procesar, estudiar y modificar el ADN
de los seres vivos (tecnologa del ADN recombinante) y sus aplicaciones en distintos campos es lo
que se conoce como Ingeniera gentica. Sus
aplicaciones son:
Desde 1970 se han desarrollado las tcnicas conocidas como tcnicas de ingeniera gentica o tecnologa del ADN recombinante. Permiten manipular
(procesar, modificar) el ADN de cualquier organismo: aislar fragmentos, secuenciarlos, modificarlos,
combinarlos con otros de origen diferente, introducirlos en otro ser vivo Esto es posible gracias a
que todos los seres vivos utilizan las mismas molculas para almacenar su informacin hereditaria,
desde las bacterias hasta las clulas de los organismos animales y vegetales ms complejos. Incluso
los virus, en la frontera entre la vida y la materia
inerte, poseen el mismo lenguaje o cdigo gentico.
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2.1. Conceptos bsicos de gentica.
ADN: cido desoxirribonucleico
Macromolcula formada por C, H, O, N y P, que se encuentra en el interior de las
clulas. Determina las caractersticas de una clula, como su estructura, la produccin de insulina, de pigmentos, toxinas, etc. y dirige su formacin. Las caractersticas del ADN, y de las protenas que se pueden formar a partir de l, se heredan
de los progenitores.
El ADN est constituido por unas unidades sencillas llamadas desoxirribonucletidos. Hay cuatro tipos distintos que nicamente difieren en la base nitrogenada que poseen: adenina (A), guanina
(G), citosina (C) y timina (T). Una molcula de ADN puede tener millones de nucletidos formando
dos hebras que se unen entre s de forma complementaria (A con G y C con T), retorcindose en
forma de doble hlice. La secuencia de stos constituye la informacin gentica.
El ADN es transmitido de generacin en generacin gracias a su capacidad de autoduplicarse (replicacin). Cada molcula de ADN es capaz de copiarse a s misma. Cada clula hija recibe una
copia idntica de dicha molcula.
Cromosoma
Estructura observable en las clulas eucariotas durante el proceso de divisin celular. Est formado
por ADN unido a protenas encargadas de darle
soporte y de colaborar en su expresin.
Protena
Macromolcula de forma globular o fibrilar, cuyas unidades bsicas denominadas aminocidos forman cadenas.
Cada protena posee una funcin determinada en los organismos y se diferencian unas de otras en el nmero
de aminocidos y su secuencia (orden de estos), la cual est determinada por la informacin contenida en uno
o varios genes. Un slo cambio en la secuencia podra variar la funcin de la protena en un organismo.
Aminocido: Molculas simples constituidas por C, H, O, N y S. Existen 20 aminocidos distintos que formen protenas. Cada aminocido posee unas caractersticas qumicas que influyen en la estructura y funcin de la protena de la que forman parte.
Las protenas llevan a cabo mltiples funciones en las clulas: crean estructuras celulares (citoesqueleto, protenas de membrana) o de los tejidos (colgeno); forman las fibras musculares (contrctiles); intervienen acelerando las reacciones qumicas necesarias para la vida (enzimas); activan funciones en numerosos rganos
(hormonas); intervienen en los procesos de defensa del organismo frente a las infecciones (anticuerpos); producen toxicidad a algunos organismos (toxinas, como Bt); algunos dan color a ciertas estructuras (pigmentos);
transportan sustancias como oxgeno (hemoglobina) o grasas (lipoprotenas).
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2.2. Tecnologa del ADN recombinante e Ingeniera Gentica.
Permite obtener una molcula de ADN sintetizada artificialmente usando como molde un ARN mensajero
(ARNm) mediante la enzima transcriptasa inversa.
Es til para obtener genes de clulas eucariotas (animales, vegetales, levaduras) que suelen estar interrumpidos por
fragmentos de
La enzima transcriptasa inversa es de origen
ADN que no
vrico y supone la excepcin al dogma de la
tienen informabiologa molecular que explica el flujo de la incin para la snformacin gentica desde el ADN al ARNm y
de ste a las protenas. Los retrovirus pueden
tesis de la proobtener un ADN en la clula infectada partir
tena (intrones).
del ARN del genoma vrico y as dirigir la maAs se pueden
quinaria celular para la fabricacin de mlticonseguir genes
ples copias de dicho virus. Los virus de la
sin interrupciones
gripe son retrovirus.
para ser incluidos
en microorganismos y que sean stos los que fabriquen el producto,
como es el caso de las bacterias productoras de insulina humana.
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ADN
Una vez secuenciado se pueden identificar las regiones con informacin para la sntesis de protenas, las regiones que regulan su expresin y deducir la secuencia de aminocidos de la protena
a la que da lugar.
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ARN m
Protena
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1. Transcripcin: sntesis de ARNm
2. Traduccin: sntesis de protenas
3. Transcripcin inversa (virus): sntesis de ADN a partir de la
informacin contenida en el ARN vrico.
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2.2.5. Hibridacin de cidos nucleicos.
Para encontrar la localizacin de un gen en un
cromosoma se aade una sonda (fragmento de
ADNc monocatenario o ARN) marcada radiactivamente con la secuencia complementaria del gen
que queremos identificar. El aumento de temperatura puede desnaturalizar el ADN (se separan
las hebras de la doble hlice) y al disminuirla se
renaturaliza (se vuelven a unir). Si la sonda se
une a una hebra complementaria, al revelar la
radiografa se observa el lugar (locus) donde se
encuentra el gen en el cromosoma. Permite la
realizacin de mapas cromosmicos e identificar
la localizacin de los genes que producen enfermedades o cualquier otra caracterstica.
de transformacin bacteriana (captacin de molculas de ADN presentes en el medio de cultivo) o transduccin (utilizando un virus bacterifago lisognico). En eucariotas, muchas clulas
vegetales pueden recibir ADN externo mediante
la bacteria Agrobacterium tumefaciens portadora del plsmido Ti. Es frecuente utilizar levaduras, cuyo genoma est bien estudiado y son fciles de cultivar (Saccharomyces cerevisiae) o
en clulas animales en cultivo mediante microinyeccin o usando pistolas de genes que
disparan proyectiles recubiertos de ADN.
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Biotecnologa:
Aplicaciones de la ingeniera gentica
Ya hemos definido con anterioridad qu es y qu beneficios aporta la biotecnologa. La mejor manera de abordar este enorme campo es ofrecer al docente ejemplos concretos, que, seguro, atraigan ms la atencin y el inters de los discentes.
En la mayora de las aplicaciones biotecnolgicas se utilizan microorganismos. El papel de la ingeniera gentica
es mejorar las caractersticas de stos para optimizar los procesos.
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Produccin de adhesivos
Se estn intentando producir adhesivos biolgicos por ingeniera gentica.
Por ejemplo, se aisl el gen de una protena adhesiva del mejilln (Mytilus
edulis), y se ha logrado expresar en microorganismos. Se espera que de
tener xito, esta protena adhesiva pueda emplearse en adhesivos para
dentistas y mdicos.
Obtencin de caucho
Se han iniciado estudios para
ver la viabilidad de obtener
caucho por ingeniera gentica,
a partir de genes de la planta
productora Hevea brasiliensis.
Obtencin de melaninas
Las melaninas, usadas para bronceadores, protectores solares de plsticos,
etc., se suelen obtener de modo qumico o por procedimientos ineficientes de extraccin de organismos. Se han localizado y aislado los genes de
sntesis de melanina en la bacteria del suelo Streptomyces antibioticus, y
se han transferido a otras bacterias ms fciles de manejar, logrndose
en ellas su expresin.
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Biofertilizantes
Para mejorar la capacidad biosinttica de vegetales se utilizan microorganismos fijadores de nitrgeno como
alternativa al uso de nitratos. Se enriquecen los suelos con Rhizobium (bacteria simbionte en las races de leguminosas, donde forma ndulos) y bacterias nitrificantes para aumentar la produccin vegetal y disminuir la
contaminacin producida por los fertilizantes convencionales. Se estn intentando conseguir la formacin de
ndulos simbiontes en otros cultivos mediante la introduccin de los genes implicados en el proceso de fijacin de nitrgeno en otras plantas que no pertenecen a la familia de las leguminosas
Plantas transgnicas
Ya hemos mencionado el ejemplo del maz resistente a plagas de insectos. En otros cultivos tambin se obtienen nuevas caractersticas por ingeniera gentica para mejorar su produccin: algodn resistente a lepidpteros; retraso de maduracin en el meln y en el tomate; soja, acelgas, trigo y alfalfa resistente a
herbicidas En muchos de los casos se emplea para su modificacin el plsmido Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens.
Se han conseguido plantas transgnicas con distintas capacidades: resistencia a plagas, retraso en la maduracin del fruto, vegetales enriquecidos con protenas animales (arroz dorado) o productores de molculas
de inters industrial (Arabidopsis thaliana produce polmeros plsticos biodegradables)
Las principales plantas transgnicas son: soja, maz, algodn, arroz, colza, patata, tomate, tabaco, clavel. Algunas de sus modificaciones se nombran en la pelcula: claveles azules, patata con vacuna
contra el clera
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Diagnstico clnico
Se utilizan sondas de ADN, que son fragmentos de ADNc marcados, complementarios de una de las hebras del gen buscado. Se utilizan para la prevencin y diagnstico del cncer o para detectar la presencia
de patgenos.
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Embrin inyectado
con el transgn
Cabra productora de
leche con el
anticoagulante
Leche con el
anticoagulante
Transgn
Gen codificador
del anticoagulante
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3.5. Clonacin
La clonacin consiste en la obtencin de copias idnticas de una molcula o de un ser vivo. Se pueden
clonar genes (paso imprescindible en cualquier aplicacin de ingeniera gentica), clulas (para cultivos
celulares), tejidos, rganos e, incluso, seres vivos.
En biotecnologa aplicada a la agricultura, se pueden
producir plantas completas a partir de una clula
modificada genticamente. En aplicaciones industriales es muy frecuente la clonacin de levaduras.
La clonacin de clulas animales permite realizar
cultivos de tejidos en el laboratorio. Es de mucho inters el cultivo de clulas madre, especialmente
de clulas madre embrionarias que, al no estar an
diferenciadas, tienen activados todos sus genes y,
por tanto, son totipotentes.
La obtencin de organismos clnicos se inaugur
con la creacin de la oveja Dolly, en 1996, por un
equipo de investigadores del Instituto Roslin de
Edimburgo. En su caso se utiliz una tcnica de
transferencia nuclear de clulas de glndula mamaria cultivadas in vitro a un ovocito no fecundado cuyo ncleo haba sido extrado.
Actualmente se obtienen animales clnicos mediante
dos tcnicas. Por disgregacin de clulas embrionarias (de manera semejante a la que da lugar a los gemelos idnticos) y por transferencia del ncleo desde
una clula embrionaria a un ovocito enucleado, de tal
forma que al fusionarse ambas clulas, el clon se
comporta como si fuera un cigoto que, al desarrollarse, dar lugar a un nuevo individuo. De esta forma se
obtienen actualmente terneros clnicos.
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tren los supuestos efectos negativos, ni mucho menos los que podran aparecer a largo plazo (recordamos que la ingeniera gentica y sus aplicaciones
arrancan en la dcada de los 70 en el pasado siglo
XX). En segundo lugar, porque existen intereses multimillonarios que se encuentran en manos de unas pocas empresas biotecnolgicas y la legislacin an es
vaga, especialmente en algunos pases en que llega a
ser inexistente. Quin pone lmites a las prcticas de
estas empresas? Quin legitima sus investigaciones
y actuaciones? La respuesta no es sencilla, pues buscarla corresponde a la sociedad entera.
La biotica puede ayudarnos a indagar en los problemas ticos planteados por la investigacin biomdica y la biotecnologa cuando stos influyen y
afectan a la propia vida, la humana y la del resto
de seres vivos.
SUGERENCIAS
Las patentes de los genes modificados, son
patrimonio de la humanidad? son los mecanismos que permiten a las empresas financiar sus carsimas investigaciones?
Provocarn los monocultivos transgnicos
prdida de biodiversidad?
Los organismos modificados genticamente
(transgnicos), pueden afectar al medio ambiente? con qu fin son diseados?
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