Universidad San Pedro

Facultad de Tecnologa Mdica

DIAGNOSTICO VIRAL

Apellidos y Nombres
ALVARADO PANTA, Ana Claudia
Curso:
Virologa
Docente:
Mblo. Arturo Alvarado Aldana
Ciclo:
VI CICLO
Fecha de presentacin:
19 de Setiembre del 2016

Este trabajo va dedicado a Dios que me da la fortaleza y

entendimiento, a mis padres que hacen posible que
todos mis logros y metas se cumplan y a mi esposo por el
apoyo que me brinda en mis estudios y sobre todo a mi
superacin

INDICE
Pgina

Dedicatoria
1
Introduccin
4
Captulo I: Historia de los virus
1.1. Historia
6
1.2. Teora del origen de los virus
8
Captulo II: Caractersticas generales de los virus
2.1. Concepto de virus
9
2.2. Estructura viral
9
2.2.1. Tipo de cpside
10
2.2.2. Genoma Viral
10
2.2.3. Envoltura
11
2.2.4. Composicin qumica
12
Captulo III: Clasificacin de los virus
3.1. Clasificacin de los virus
15
Captulo IV: Ciclo viral
4.1. Ciclo viral
17
4.1.1. Adsorcin
18
4.1.2. Penetracin
18
4.1.3. Denudacin y eclipse
18
4.1.4. Replicacin del cido nucleico
18

4.1.5. Maduracin y liberacin

19
Captulo V: Mecanismos de transmisin
5.1. Mecanismo de transmisin
20
Captulo VI: Accin de las enzimas de restriccin que influyen en la
infeccin viral
6.1. Enzimas de restriccin viral
21
6.2. Tipos
21
6.3. Mtodos de accin
22
6.4. Usos
22
6.5. Beneficios
23
6.6. Cmo actan las enzimas de restriccin tras una infeccin viral?
24
6.6.1. Transduccin
24
6.6.2. Retrovirus
24
Captulo VII: Patogenia Viral
7.1. Citopatognia
26
7.1.1. Efecto citoptico
26
7.1.2. Cuerpos de inclusin
26
7.1.3. Transformacin celular
27
Captulo VIII: Virus y cncer
8.1. Virus y cncer
29
Captulo IX: Diagnostico de laboratorio

9.1. Diagnstico de laboratorio

31
9.1.1. Obtencin de muestra
31
9.1.2. Tcnicas de laboratorio para el diagnstico viral
33
9.1.3. Deteccin de protenas vricas
46
9.1.4. Mtodos de anlisis serolgico
48
Captulo X: Enfermedades virales emergentes y reemergentes
51
Captulo XI: Accin de los antivirales
52
BIBLIOGRAFIA
54
ANEXOS
56

INTRODUCCION

Se puede definir a un virus como un agente infeccioso cuyo genoma est constituido por uno de
los cidos nucleicos y que para producir nuevas partculas virales, debe replicarse en el interior
de clulas vivas utilizando para ello la produccin energtica y capacidad de sntesis del soporte
celular. Los virus estn compuestos mnimamente de cido nucleico y protenas organizados
estructuralmente en varias partes. Cuando una partcula viral tiene todos los elementos para
infectar a una clula, se le denomina virin, compuesto de un genoma y una cubierta de carcter
proteico denominada cpside, siendo este el ejemplo ms simple.
Cada da se da ms importancia al tema de la relacin entre los virus y el cncer, tanto en el
aspecto patognico como en la gentica molecular. La proliferacin y diferenciacin celular es
un proceso cuidadosamente regulado que responde a las necesidades especficas del organismo.
En un organismo joven la multiplicacin celular supera la muerte celular y as el organismo
aumenta de tamao; en un adulto, el proceso de regeneracin y muerte celular est equilibrado
en forma de un estado estacionario. Algunos tipos de clulas, como los eritrocitos humanos,
viven aproximadamente 120 das y, sin embargo, las clulas intestinales tienen pocos das de
vida media, por lo que las clulas intestinales deben ser sustituidas casi inmediatamente, lo que
no ocurre con los eritrocitos. Los mecanismos que regulan la multiplicacin celular fallan y
entonces las clulas comienzan a crecer y dividirse incontrolablemente, el resultado es un clon
de clulas que termina formando una masa celular denominada tumor.
En los ltimos aos se ha observado un incremento cada vez ms creciente de nuevas
enfermedades infecciosas o de otras que ya se consideraban controladas. Las llamadas
enfermedades emergentes y reemergentes son aquellas infecciones nuevas que han aparecido en
una poblacin o que han existido pero estn aumentando rpidamente en incidencia o rango
geogrfico. Factores sociales y econmicos, de la atencin mdica, produccin de alimentos,
cambios en el comportamiento del hombre, cambios ambientales, deterioro de los sistemas de
salud y adaptacin y cambio de los microorganismos se relacionan con el surgimiento o
resurgimiento de diferentes entidades. En este trabajo se present un anlisis de la emergencia y
reemergencia de las enfermedades virales y de los factores que han influido en esta situacin.

Conocer cuando una infeccin es de etiologa viral es muy importante porque determina un
cambio en la conducta clnica y en el manejo teraputico del paciente. El diagnstico viral por el
laboratorio es de gran ayuda para confirmar la etiologa, as como para el seguimiento clnico de
la entidad. Adicionalmente, realizar un diagnstico adecuado permite conocer la epidemiologa
de la infeccin viral y determinar las connotaciones que implica a nivel de salud pblica; tal es
el caso de infecciones como el dengue y la fiebre amarilla. Por las caractersticas estructurales,
ecolgicas y biolgicas de los virus, su demostracin in vitro es y ser uno de los mayores retos
a los que se enfrentan los cientficos. Al igual que la mayora de los microorganismos, los virus
se pueden descubrir ya sea de una forma directa o indirecta. Las pruebas directas son las que

evidencian al virus o algunos de los antgenos virales que se pueden encontrar presentes en los
tejidos o fluidos humanos. Las pruebas indirectas son las que se utilizan con ms frecuencia y
bsicamente demuestran un contacto del husped con el agente viral mediante la determinacin
de anticuerpos especficos contra el virus En muchos casos el diagnstico de infeccin viral se
hace por el cuadro clnico del paciente y la presencia de anticuerpos contra el agente viral
sospechoso; sin embargo, hay algunas tcnicas rpidas para demostrar los antgenos virales y
tambin se sabe de tcnicas para amplificar su material gentico. No obstante la variedad de
pruebas diagnsticas que se han desarrollado, es necesario tener en cuenta que para un ptimo
diagnstico de las entidades virales, debe haber una adecuada indicacin, recoleccin y
transporte de las muestras que se han de analizar para este propsito.

Los mtodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden clasificarse
en directos e indirectos, segn persigan demostrar la presencia del virus o de alguno de sus
constituyentes (antgeno o genoma viral) o bien la respuesta de anticuerpos especficos por parte
del husped en el curso de la infeccin.

CAPITULO I:
HISTORIA DE LOS VIRUS
1.1. HISTORIA
Las enfermedades virales, como la rabia, la fiebre amarilla y la viruela, han afectado a los seres
humanos desde hace muchos siglos. Se conocen jeroglficos que describen la poliomielitis en
la medicina del Antiguo Egipto, aunque en ese entonces no se conoca todava la causa de la

enfermedad. En el siglo X, Al-Razi escribe el Tratado sobre la viruela y el sarampin, que

ofrece la primera descripcin clara de estas enfermedades.
La naturaleza contagiosa de las enfermedades infecciosas (virales y bacterianas) es descrita por
Avicena en la dcada de 1020, en su obra Canon de medicina. En ella describe
la tuberculosis y las enfermedades de transmisin sexual y su propagacin a travs del contacto
fsico, agua y suelo. Sostiene que las secreciones corporales se contaminan por "organismos
extraos" que producen la infeccin e introduce la prctica de la cuarentena como medio para
limitar la propagacin de las enfermedades contagiosas. Cuando la Peste Negra (o peste
bubnica) llega a Al-ndalus en el siglo XIV, Ibn Khatima descubre que las enfermedades
infecciosas son causadas por microorganismos que se introducen en el cuerpo humano. Otro
mdico andaluz del siglo XIV, Ibn al-Khatib (ao 1313-1374), escribe el tratado titulado Sobre
la peste, en el que afirma que las enfermedades infecciosas se pueden transmitir a travs del
contacto corporal y "por prendas de vestir, buques y pendientes." Las causas etiolgicas de la
tuberculosis, de la peste bubnica y de algunas infecciones de transmisin sexual ms tarde se
identificaron como bacterias.

Las primeras vacunas para prevenir las enfermedades virales se descubren en el siglo XVIII. En
1717, Mary Montagu, la esposa de un embajador ingls en el Imperio otomano, observa que las
mujeres locales tienen la costumbre de inocular a sus hijos con fluidos tomados de casos leves
de viruela. A finales del siglo XVIII, Edward Jenner observa y estudia a Miss Sarah Nelmes,
una lechera que haba sufrido la viruela de vaca y que como consecuencia era inmune a la
viruela, un virus similar que afecta a las personas. Jenner desarrolla la vacuna contra la viruela
sobre la base de estas conclusiones. Despus de largas campaas de vacunacin, la
Organizacin Mundial de la Salud (OMS) certifica la erradicacin de la viruela en 1979.
La primera referencia sobre la existencia de los virus se debe al botnico ruso Dimitri Ivanovski
en 1892. Un poco antes, Charles Chamberland desarrolla un filtro de porcelana con poros lo
suficientemente pequeos para retener a las bacterias y separarlas de su medio de cultivo.
Dimitri Ivanovski usa este filtro para identificar al agente causante de la enfermedad
denominada mosaico del tabaco y llega a la conclusin de que debe tratarse de una toxina o
de un organismo ms pequeo que las bacterias, pues atraviesa los filtros que retienen a stas.
Al pasar extractos de hojas de plantas de tabaco infectadas a travs del filtro y luego utilizar el
extracto filtrado para infectar a otras plantas, demuestra que el agente infeccioso no es una
bacteria. Experimentos similares son realizados por varios otros investigadores, con resultados
similares y muestran que los virus son algunos rdenes de magnitud ms pequeos que las
bacterias.

El trmino virus fue acuado por el microbilogo holands Martinus Beijerinck quien,
utilizando mtodos basados en el trabajo de Ivanovski, en 1897 desecha la idea de las toxinas.
Comprueba que el agente causante de la enfermedad del mosaico del tabaco es capaz de
reproducirse, ya que mantiene su poder infeccioso sin diluirse al pasar de unas plantas a otras, y
acua la frase latina "contagium vivum fluidum" (que significa "germen soluble de vida"), la
primera aproximacin al concepto de virus. Poco despus, los microbilogos alemanes
Frederick Loeffler y Paul Frosch descubren que la fiebre aftosa del ganado es tambin
producida por un virus filtrable que acta como agente infeccioso. El primer virus humano
identificado fue el virus de la fiebre amarilla.

A principios del siglo XX, Frederick Twort descubre que tambin las bacterias pueden ser
infectadas por virus. Flix d'Herelle, que trabajaba independientemente, muestra que un
preparado viral origina reas muertas en cultivos celulares realizados sobre agar. Contando las
reas muertas, pudo estimar el nmero original de virus en la suspensin. En la dcada de los
30, con el uso de filtros de tamao de poro inferior, con lastcnicas de cultivo celular in
vitro que permiten la obtencin de gran cantidad de estos agentes, con la ultracentrifugacin y
finalmente con el microscopio electrnico y la difraccin de rayos X, se logra por fin visualizar
a los virus. En 1935, Wendell Stanley cristaliza el virus del mosaico del tabaco y descubre que
est compuesto, en su mayor parte, de protenas. Poco tiempo despus, el virus fue separado en
protenas y cidosnucleicos. En 1939, Max Delbrck y El Ellis demostraron que, en contraste
con los organismos celulares, los bacterifagos se reproducen en "un paso", en lugar de
exponencialmente.
Un problema importante para los primeros virlogos fue la incapacidad de cultivar virus
en medios de cultivo estriles, tal como se hace con los microorganismos celulares. Esta
limitacin requiere que los virlogos mdicos infecten animales vivos, lo cual es peligroso. El
primer avance se produce en 1931, cuando William Ernest Goodpasture demuestra el
crecimiento de la gripe y de otros virus en huevos de gallina fertilizados. Sin embargo, algunos
virus no crecen en huevos y era necesaria una mayor flexibilidad tcnica para el cultivo de los
virus. La solucin llega en 1949 cuando John Franklin Enders, Thomas H. Weller y Frederick
Chapman Robbins desarrollan conjuntamente una tcnica para reproducir el virus de la polio en
cultivos de clulas vivas de animales. Sus mtodos se han extendido y se aplican al crecimiento
de virus y de otros agentes infecciosos que no crecen en medios de cultivo estril.

1.2. TEORIA DEL ORIGEN DE LOS VIRUS

Existen dos principales teoras con respecto al origen de los virus.

Una teora propone que los virus son consecuencia de la degeneracin de

microorganismos (bacterias, protozoarios y hongos) que alguna vez fueron parsitos
obligatorios de otras clulas, a tal grado que se convirtieron en parsitos intracelulares y
perdieron paulatinamente todos los componentes necesarios para desarrollar un ciclo de
vida libre independiente de la clula hospedera. Sin embargo, el hecho de que la
organizacin de los virus es de tipo no celular, es un importante argumento en contra de
esta teora, ya que las cpsides virales son anlogas, desde el punto de vista
morfogentico, a los organelos celulares constituidos por subunidades de protena, tales
como flagelos y filamentos que forman el citoesqueleto, y no son parecidas a las
membranas celulares. Por otra parte, las envolturas de los virus no muestran similitudes
arquitectnicas con las membranas celulares o en caso de poseer dicha arquitectura es
debido a que la envoltura viral fue adquirida como consecuencia de la protrusin o brote
de la partcula viral a travs de la membrana celular.

La otra teora propone que los virus son el equivalente a genes vagabundos. Por
ejemplo, es probable que algunos fragmentos de cido nucleico hayan sido transferidos
en forma fortuita a una clula perteneciente a una especie diferente a la que pertenecen
dichos fragmentos, los cuales en lugar de haber sido degradados (como ocurre
generalmente), por causas desconocidas podran sobrevivir y multiplicarse en la nueva
clula hospedera.

CAPITULO II:
CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS VIRUS

2.1. CONCEPTO DE VIRUS

Virus (del latn virus, toxina o veneno) es un agente infeccioso microscpico acelular que
solo puede multiplicarse dentro de las clulas de otros organismos.
Los

virus

infectan

todos

los

tipos

de

organismos,

desde animales y plantas,

hasta bacterias y arqueas. Tambin infectan a otros virus; en ese caso reciben el nombre

de virfagos.Los virus son demasiado pequeos para poder ser observados con la ayuda de
un microscopio ptico, por lo que se dice que son submicroscpicos; aunque existen
excepciones entre los Virus nucleocitoplasmticos de ADN de gran tamao o girus, tales como
el Megavirus chilensis, el cual se logra ver a travs de microscopa ptica.

El primer virus conocido, el virus del mosaico del tabaco, fue descubierto por Martinus
Beijerinck en 1899, y actualmente se han descrito ms de 5000, si bien algunos autores opinan
que podran existir millones de tipos diferentes. Los virus se hallan en casi todos los ecosistemas
de la Tierra y son el tipo de entidad biolgica ms abundante.5 6 El estudio de los virus recibe el
nombre de virologa,7 una rama de la microbiologa.

2.2. ESTRUCTURA VIRAL

Los virus ms pequeos y simples estn constituidos nicamente por cido nucleico y protenas.
El cido nucleico es el genoma viral, ubicado en el interior de la partcula, y puede ser ADN o
ARN. Generalmente est asociado con un nmero pequeo de molculas proteicas que pueden
tener actividad enzimtica o cumplir alguna funcin estabilizadora para el plegamiento del cido
nucleico y armado de la partcula viral. Este conjunto de genoma y protenas ntimamente
asociadas es llamado "core", ncleo, nucleoprotena o nucleoide. Este ncleo central est
rodeado por una cubierta proteica, la cpside, que junto con el genoma constituye
la nucleocpside. Las cpsides virales estn formadas por un gran nmero de subunidades
polipeptdicas que se ensamblan adoptando una simetra de tipo helicoidal (nucleocpside en
forma de bastn) o icosadrica (partculas casi esfricas). En algunos virus ms complejos, por
fuera de la cpside se encuentra otra cubierta, la envoltura, que es una estructura membranosa
constituida por lpidos y glicoprotenas. Dicha cubierta viral puede ser considerada una cubierta
protectora adicional.
2.2.1. TIPOS DE CAPSIDE

La cpside es una cubierta proteica externa que encierra y protege al genoma viral de la
accin de nucleasas y otros factores adversos del medio exterior. Adems, en los virus
desnudos carentes de envoltura, la cpside es la encargada de establecer a travs de
alguna de sus protenas la unin con la clula que ser parasitada por el virus.
Asimismo, las protenas de la cpside contienen los determinantes antignicos contra los
que el sistema inmune del husped elaborar la respuesta de anticuerpos en defensa del
organismo.

10

a) Cpside Helicoidal: Tpica de virus vegetales y bacterifagos. Todos los

capsmeros estn constituidos por una protena de 158 aminocidos.
b) Cpside icosadrica: Tpica de virus animales y en menor medida de virus
vegetales y fagos. Los capsmeros se disponen formando un icosaedro.
c) Cpside compleja: El virin tiene al menos dos partes, una cabeza
o nucleocpside y

una cola (a

los

virus

que

presentan

cola

se

les

llama urfagos). La cabeza puede ser de dos tipos: icosadrica (virus

bacterianos de la serie P) o una cabeza constituida por un prisma hexagonal y
en cada extremo una pirmide hexagonal (de la serie T-par, como el fago T2).
La cola puede ser muy sencilla, a veces un tubo hueco que sale de un extremo
de la cabeza; o ser ms compleja.

2.2.2. GENOMA VIRAL

La naturaleza del material gentico de los virus es extraordinariamente flexible.

Presentan los cuatro tipos posibles de cidos nucleicos: ADN monocatenario, ADN
bicatenario, ARN monocatenario y ARN bicatenario. Los cuatro tipos se encuentran en
los virus de animales. Los virus de plantas suelen tener genomas de ARN
monocatenario. Los virus bacterianos suelen contener ADN bicatenario, aunque
tambin pueden tener ADN monocatenario o ARN monocatenario.

El tamao del material gentico viral vara mucho. Los genomas ms pequeos (los de
los virus MS2 y Q) tienen alrededor de 1 x 106 Da, longitud suficiente para codificar
tres o cuatro protenas. Algunos virus incluso ahorran espacio utilizando genes
solapados. En el otro extremo, los bacterifagos T-par, el virus herptico y el virus
vaccinia tienen genomas desde 1 a 1.6 x 108 Da y pueden ser capaces de codificar ms
de 100 protenas.

Los virus ADN muy pequeos, como el bacterifago M13 o los parvovirus, poseen
genomas de ADN monocatenario. Algunos de estos virus tienen fragmentos lineales de
ADN, mientras que otros presentan un nico crculo cerrado.
La mayora de los virus ADN utilizan ADN bicatenario como material gentico. El
dsDNA lineal, con diferentes conformaciones, se encuentra en numerosos virus; otros
tienen dsADN circular. El fago lambda tiene dsDNA lineal con extremos cohesivos, que
permiten que se circularice cuando las bases se complementan. Adems de los
nucletidos normales que se encuentran en el ADN, muchos virus ADN contienen bases

11

no habituales. Por ejemplo, los fagos T-par de E. coli tienen 5-hidroximetilcitosina en

lugar de citosina.

La mayora de los virus ARN utilizan ARN monocatenario (ssARN) como material
gentico. La secuencia de bases de ARN puede ser idntica a la del mARN viral, en
cuyo caso la cadena de ARN recibe el nombre de cadena positiva (por convenio, todo
mARN es de polaridad positiva). No obstante, tambin puede ocurrir que el genoma de
ARN viral sea complementario al mARN viral, en cuyo caso se denomina cadena
negativa. Los virus de la polio y del mosaico del tabaco son virus ARN de cadena
positiva; los virus de la rabia, el sarampin y la gripe son virus ARN de cadena
negativa. Muchos de estos genomas de ARN son genomas segmentados, es decir, estn
divididos en partes separadas. Algunos genomas de virus pueden estar compuestos de
hasta 10 a 12 segmentos.

2.2.3. ENVOLTURAS

La envoltura de un virus es una membrana constituida por una doble capa lipdica
asociada a glicoprotenas que pueden proyectarse en forma de espculas desde la
superficie de la partcula viral hacia el exterior.
Los virus adquieren su estructura mediante un proceso de brotacin a travs de alguna
membrana celular. El nmero de glicoprotenas que presentan los virus animales es muy
variable.
Las glicoprotenas virales que forman las espculas son protenas integrales de
membrana que atraviesan la bicapa de lpidos presentando tres dominios
topolgicamente diferenciables:

Un gran dominio hidroflico hacia el exterior de la membrana

Un pequeo dominio hidrofbico formado por 20-27 aminocidos que

atraviesa la capa lipdica y ancla la glicoprotena a la membrana

Un pequeo dominio hidroflico hacia el interior de la partcula viral.

Este ltimo dominio interacta con las protenas de la nucleocpside, ya
sea directamente o a travs de una protena viral no glicosilada
denominada M (de matriz), que se encuentra en algunos virus animales
por debajo de la bicapa.

Las glicoprotenas virales cumplen diversas funciones biolgicas durante el ciclo de

vida de un virus, siendo esenciales para la infectividad, ya que actan:

12

En la adsorcin a la clula husped

En el proceso de fusin que permite la entrada de la nucleocpside viral

al citoplasma

En la brotacin, que permite la salida del virus envuelto a partir de la

clula infectada. Adems las glicoprotenas son el blanco de reaccin
para el sistema inmune tanto en la respuesta humoral como celular.

2.2.4. COMPOSICIN QUIMICA

a) Protenas virales: El principal constituyente de todos los virus animales son las
protenas. Las protenas son el nico componente de la cpside; son el principal
componente de las envolturas y estn ntimamente asociadas, como protenas
internas, con los cidos nucleicos de muchos virus icosadricos. Todas estas
protenas se denominan protenas estructurales, ya que su funcin es servir como
bloques para la construccin de viriones y casi siempre son codificadas por el
genoma viral. Las protenas estructurales de los virus desempean varias funciones
importantes. La principal es facilitar la transferencia del cido nucleico viral de una
clula husped a otra. Sirven para proteger el genoma viral contra la inactivacin
por nucleasas, participan en la adhesin de la partcula viral a una clula
susceptible, y confieren simetra a la partcula del virus. Las protenas determinan
las caractersticas antignicas del virus. La respuesta inmunoprotectora del husped
se orienta contra los determinantes antignicos de protenas o glucoprotenas
expuestas sobre la superficie de la partcula viral.

b) cido nucleico viral: aunque cuantitativamente no representa el mayor

componente, es fisiolgicamente de gran importancia puesto que en este radica toda
la informacin gentica de la partcula, y se puede decir en este sentido que el virin
es considerado como la forma de conservar y transportar el cido nucleico en el
medio extracelular. Los virus contienen un solo tipo de cido nucleico, sea ADN o
ARN, que codifica la informacin gentica necesaria para la replicacin del virus.
El genoma puede ser de cadena nica o doble, circular o lineal, y segmentado o no.
El tipo de cido nucleico, la cadena y tamao de esta son las caractersticas
principales que se utilizan para clasificar los virus en familias. El tamao del
genoma viral de ADN vara de 3,2 kpb (hepadnavirus) a 375 kpb (poxvirus). El
tamao del genoma viral de ARN vara de casi 7 kb (algunos picornavirus y
astrovirus) a 30 kb (coronavirus).

13

c) Envoltura lipdicas de los virus: las envolturas virales contienen mezclas

complejas de lpidos neutros, fosfolpidos y glucolpido. Como regla general, la
composicin de estas mezclas se asemeja a la membrana de la clula husped en las
cuales el virus se multiplica. La nucleocpside viral adquiere los lpidos cuando
sufre gemacin a travs de una membrana celular en el curso de la maduracin. La
gemacin solo ocurre en sitios donde se han introducido protenas especficas del
virus en la membrana de la clula husped. El proceso de gemacin vara
notablemente segn la estrategia de multiplicacin del virus y la estructura de la
nucleocpside.

d) Glucoprotenas virales: las envolturas virales contienen glucoprotenas. En

contraste con los lpidos de las membranas virales, derivados de la clula husped,
las glucoprotenas de la envoltura son codificadas por el genoma viral. Sin embargo,
los azcares aadidos a las glucoprotenas virales con frecuencia reflejan los de la
clula husped donde crece el virus. Las glucoprotenas de la superficie de una
envoltura viral adhieren la partcula viral a una clula especfica mediante la
interaccin con un receptor celular. Con frecuencia, tambin se les implica en la
etapa de fusin con la membrana durante la infeccin. Adems, las glucoprotenas
son importantes antgenos virales. Como consecuencia de su posicin en la
superficie exterior del virin, casi siempre participan en la interaccin de la
partcula viral con el anticuerpo neutralizante. La estructura tridimensional de la
regin externa expuesta de las dos glucoprotenas de la membrana del virus de la
influenza (hemaglutinina y neurominidasa) se determinaron mediante cristalografia
de rayos X. Estos estudios suministran conocimientos acerca de la estructura
antignica y de las actividades funcionales de las glucoprotenas virales.

14

CAPITULO III:
CLASIFICACION DE LOS VIRUS

3.1. CLASIFICACION DE LOS VIRUS

Clasificacin de los virus parsitos de clulas animales

ACIDO
FAMILIA
ENVOLTURA GENERO Y ESPECIE
NUCLEICO

ENFERMEDAD

Papovaviridae
(Papovaivirus)

ADN - bc
circular

Desnudos

VPH

Verrugas

Poxviridae (Poxvirus)

ADN - bc
circular

Envueltos

Virus de la viruela

Viruela

Virus del Herpes

simple I y II

Grietas en los
labios y herpes
genital

Virus de la varicela
zster

Varicela y
herpes zster

Herpesviridae
(Herpesvirus)

ADN - bc
lineal

Adenoviridae
(Adenovirus)

ADN - bc
lineal

Desnudos

Adenovirus humano

Infecciones
respiratorias,
entricas y
oftlmicas

Parvoviridae
(Parvovirus)

ADN - mc
lineal

Desnudos

Virus
adenoasociados

Infecciones en
roedores

Envueltos

15

Clasificacin de los virus parsitos de clulas animales

ACIDO
ENVOLTURA
NUCLEICO

FAMILIA

Reoviridae (Reovirus)

ARN - bc

Orthomixoviridae
(Ortomixovirus)

ARN - mc

Paramixoviridae
(Paramixovirus)

ARN - mc

Rhabdoviridae
(Rabdovirus)

ARN - mc

10

Picornaviridae
(Picornavirus)

11

Togaviridae
(Togavirus)

12

Retrovirus (Retrovirus)

GENERO Y ESPECIE

ENFERMEDAD

Desnudos

Rotavirus

Diarreas infantiles

Envueltos

Virus de la gripe

Gripe

Virus de la parotiditis

Paperas

Virus de sarampin

Sarampin

Envueltos

Virus de la rabia

Rabia

ARN - mc

Desnudos

Enterovirus (Virus de la
polio, Coxsakie y Esho)

Polio, miocarditis,
pericarditis,
Gastroenteritis,
meningoencefalitis

ARN - mc

Envueltos

Virus de la rubola

Rubola

Virus de la
inmunodeficiencia
humana (VIH -1 y VIH -2)

SIDA

Virus de la leucemia de
las clulas T

Leucemia de las
clulas T

ARN - mc

Envueltos

Envueltos

16

CAPITULO IV:
CICLO VIRAL

4.1. CICLO VIRAL

El ciclo vital de los virus se divide en 2 fases:

En la fase extracelular el virus es inerte desde el punto de vista biolgico y recibe el

nombre de virin.

En la fase intracelular el virus infecta a una clula, que ha de presentar en su superficie

protenas receptoras para el virus; una vez que el virus se fija a su receptor puede entrar
en la clula slo el cido nucleico, quedando el cpside fuera, o bien puede entrar tanto
el cpside como el cido nucleico.

A partir de este momento, de forma inmediata o tras un perodo de latencia, el virus se

reproduce en el interior de la clula, utilizando sus orgnulos y enzimas para sintetizar sus
componentes; por tanto, la clula se convierte en esclava de las necesidades del virus,
detenindose su actividad metablica, lo que produce la muerte celular. Una vez formados, los
nuevos virus salen de la clula por rotura de la membrana celular o por gemacin. Estos nuevos
virus infectarn a otras clulas, repitindose el ciclo. Como ejemplos describiremos:

Ciclo ltico: Se denomina as porque la clula infectada muere por rotura al liberarse las
nuevas copias virales.

Ciclo lisognico: Las dos primeras fases de este ciclo son iguales a las descritas en el
ciclo anterior. En la fase de eclipse el cido nucleico viral en forma de ADN bicatenario
recombina con el ADN bacteriano, introducindose en ste como un gen ms. Esta
forma viral se denomina profago, o virus atenuado, mientras que la clula infectada se
denomina clula lisognica.
En este estado el profago puede mantenerse durante un tiempo indeterminado, pudiendo
incluso, reproducirse la clula, generando nuevas clulas hijas lisognicas. El profago se
mantendr latente hasta producirse un cambio en el medio ambiente celular que
provoque un cambio celular, por ejemplo, por variaciones bruscas de temperatura, o
desecacin, o disminucin en la concentracin de oxgeno. Este cambio induce a la
liberacin del profago, transformndose en un virus activo que contina el ciclo de
infeccin hasta producir la muerte celular y la liberacin de nuevos virus.

17

4.1.1. ADSORCION:

La interaccin se realiza entre las protenas de la cola del fago y los receptores
localizados en la pared bacteriana.
Al principio de la fijacin sta es reversible, pudiendo separar fago y bacterias sin
alterarlas. Pero esta fijacin se convierte rpidamente en irreversible, ya que el fago se
modifica en contacto con la bacteria, una enzima (lisozima) de la cola se activa,
atacando las uniones glucosdicas que aseguran la cohesin de la parte glicoproteca de
la pared, provocando as una zona de menor resistencia.

4.1.2. PENETRACION:

La cola del fago se contrae mediante un reagrupamiento de las unidades proteicas de la

vaina caudal, cuyo nmero de discos disminuye a la mitad sin variar la distancia entre
ellos.
El eje tubular penetra en la pared bacteriana a travs de la zona de menor resistencia y el
contenido de la cabeza se introduce en la bacteria dejando en el exterior un despojo
constituido por la cola y la cabeza del fago.

4.1.3. DENUDACION Y ECLIPSE

En esta fase no se observan copias del virus en la clula, pero se est produciendo la
sntesis de ARN, necesario para generar las copias de protenas de la cpsida. Tambin
se produce la continua formacin de cidos nucleicos virales y enzimas destructoras del
ADN bacteriano.

4.1.4. REPLICACION DEL ACIDO NUCLEICO

Fase tarda, comienza la replicacin del ADN del bacterifago participando la enzimas
sintetizadas durante la fase precoz (ADN polimerasa, nucletidos bacterianos y
enzimas) para dar lugar a muchas copias idnticas que se acumularn.

4.1.5. MADURACION Y LIBERACION

ste es el estadio del ciclo viral en el cual el virus se torna infeccioso. Las proteasas
virales o clulas participan a menudo en la maduracin. Una o ms protenas de la
cpside o envoltura pueden sufrir una escisin proteoltica especfica dentro de la

18

partcula la cual lleva a cambios estructurales sutiles en la partcula viral que pueden
aumentar su estabilidad.
Las proteasas codificadas por los virus son blancos atractivos de las terapias antivirales;
por ejemplo, los inhibidores de las proteasas.
Los virus recin formados se liberan al ambiente externo despus de la lisis y escapan
de la clula cuando sta se desintegra (virus lticos) o mediante brotacin a travs de la
membrana plasmtica (como en el caso de los retrovirus, togavirus, ortomixovirus,
paramixovirus, bunyavirus, coronavirus, rabdovirus y hepadnavirus). Los virus que son
liberados por brotacin pueden daar la clula (como en el caso de los paramixovirus,
rabdovirus y togavirus) o no (como los retrovirus). Algunos virus brotan a partir de
otras membranas y son liberados de la clula por un mecanismo semejante a la
seleccin.

19

CAPITULO V:
MECANISMOS DE TRANSMISION

5.1. MECANISMO DE TRANSMISION

Los virus tienen diferentes mecanismos mediante los cuales causan enfermedades a un
organismo, que dependen en gran medida en la especie de virus. Los mecanismos a nivel celular
incluyen principalmente la lisis de la clula, es decir, la ruptura y posterior muerte de la clula.
En los organismos pluricelulares, si mueren demasiadas clulas del organismo en general
comenzar

sufrir

sus

efectos.

Aunque

los

virus

causan

una

disrupcin

de

la homeostasis saludable, provocando una enfermedad, tambin pueden existir de manera

relativamente inofensiva en un organismo. Un ejemplo sera la capacidad del virus del herpes
simple de permanecer en un estado durmiente dentro del cuerpo humano. Esto recibe el nombre
de latencia y es una caracterstica de todos los herpesvirus, incluyendo el virus de EpsteinBarr (que causa mononucleosis infecciosa) y el virus de la varicela zoster (que causa
la varicela). Las infecciones latentes de varicela pueden generarse posteriormente en la etapa
adulta del ser humano en forma de la enfermedad llamada herpes zster. Sin embargo, estos
virus latentes algunas veces suelen ser beneficiosos, incrementando la inmunidad del cuerpo
contra algunos seres patgenos, como es el caso del Yersinia pestis. Cuando alguna enfermedad
viral vuelve a reincidir en cualquier etapa de la vida se conoce popularmente como culebrilla.

Algunos virus pueden causar infecciones permanentes o crnicas, en que los virus continan
replicndose en el cuerpo a pesar de los mecanismos de defensa del husped. Esto es habitual en
las infecciones de virus de la hepatitis B y de la hepatitis C. Los enfermos crnicos son
conocidos como portadores, pues sirven de reservorio de los virus infecciosos. En poblaciones
con una proporcin elevada de portadores, se dice que la enfermedad es endmica. Algunos
virus pueden mutar dentro de las clulas huspedes, reforzando sus defensas contra diversos
antivirales, proceso conocido como mutacin.

20

CAPITULO VI:
ACCION DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCION QUE INFLUYEN EN LA
INFECCION VIRAL

6.1. ENZIMAS DE RESTRICCION VIRAL

Se constat que diversas cepas bacterianas posean una serie de enzimas, llamadas
endonucleasas de restriccin, capaces de cortar el ADN por puntos determinados. Ello
constituye un sistema de defensa de las bacterias contra la invasin de ADN ajeno que se
produce durante una infeccin vrica. Adems, con objeto de salvaguardar los puntos del ADN
propio que son sensibles a la accin de las endonucleasas de restriccin, las bacterias han
desarrollado un sistema de proteccin constituido por otras enzimas, llamadas metilasas, que
metilan (es decir, modifican qumicamente) las bases susceptibles de verse afectadas por la
accin de las endonucleasas de restriccin y las hacen insensibles a ella. La primera enzima de
este tipo se aisl en la bacteria Haemophilus influenzae, en la que el ADN vrico se degradaba
rpidamente. Se descubri que dicha enzima, llamada Hind II, cortaba la doble hlice de ADN
solamente por una determinada secuencia de 6 bases.
Hasta el momento se ha identificado ms de 150 secuencias distintas de ADN reconocidas por
las enzimas de restriccin: estas secuencias se denominan sitios (o loci) de restriccin.

6.2. TIPOS

Existen 3 tipos de enzimas de restriccin:

TIPO I y TIPO III:

Tienen actividad de restriccin (Cortan) y modificacin (Metilan).

Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan

lejos de la secuencia de reconocimiento. Las Tipo III cortan de 5-8 bases antes
o despus de la secuencia que reconocen.

Necesitan ATP para moverse a travs de la molcula de DNA, desde el lugar de

reconocimiento hasta el sitio de corte.

TIPO II:

Solo tienen actividad de restriccin.

Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que

reconocen

Solo requiere Mg++ como cofactor.

No necesitan ATP

21

6.3. METODOS DE ACCION

Son extradas de organismos procariticos (bacterias), donde actan como un mecanismo de

defensa, para degradar material gentico extrao que entre en la clula. Las bacterias tienen la
capacidad de metilar su ADN, lo cual sirve para distinguir entre el ADN extrao y el ADN
propio.

Para empezar, el virus se corta con una enzima de restriccin elegida arbitrariamente y, a
continuacin, los fragmentos resultantes se separan mediante electroforesis en un gel de agar,
segn un proceso en el que, bajo la accin de un campo elctrico, se produce la migracin de las
molculas de ADN cargadas negativamente a travs de un gel poroso de agar. Los fragmentos
pueden tener distintas dimensiones, segn el nmero de veces que las secuencias reconocidas
por la enzima de restriccin estn representadas en el genoma en cuestin. La velocidad de
migracin de las molculas de ADN a travs de los poros del gel es funcin de la longitud de
dichas molculas. Tiendo el gel con sustancias especiales que se unen al ADN, como el
bromuro de etilo, puede observarse una serie de bandas; cada una de stas corresponde a un
determinado fragmento de restriccin cuya dimensin puede establecerse comparndolo con
molculas de ADN de dimensin conocida. Adems, al tratar un genoma con enzimas de
restriccin diferentes, se obtendrn necesariamente fragmentos de restriccin diferentes. Por
regla general, las enzimas de restriccin ms tiles resultan ser aqullas cuyas secuencias de
reconocimiento son escasas y que, en consecuencia, producen un menor nmero de fragmentos
que son ms fcilmente separables en el gel de agar.
Este procedimiento se ha empleado para medir el genoma del virus SV40, que ha resultado estar
compuesto por una secuencia de 5234 pares de bases.

6.4. USOS

Las enzimas de restriccin tienen diferentes aplicaciones que son de gran importancia en
investigaciones en biologa molecular y en las tcnicas que emplea la biotecnologa moderna:

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o bacterifago. El ADN se corta con varias

enzimas de restriccin, solas y en parejas, para determinar el nmero de sitios de corte y
sus posiciones relativas en la molcula, el orden y la distancia entre ellos.

Fragmentar ADN para separacin por electroforesis. Los fragmentos obtenidos despus
de la actuacin de las distintas enzimas de restriccin, se pueden separar por tamaos
mediante la tcnica de electroforesis y as estudiar los distintos fragmentos. Por

22

ejemplo: para la tcnica de Southern blotting o en las usadas para identificar

polimorfismos de ADN en distintos individuos.

Generacin de fragmentos para ser clonados en los vectores apropiados, y crear ADN
recombinante. Se puede cortar una molcula de ADN con una enzima y, con el mismo
tipo de enzima, cortar el fragmento de ADN de inters para clonar. Se unen con ligasas
estas dos molculas de ADN, generando as una molcula de ADN recombinante. Este
vector recombinante puede usarse para transformar clulas que expresen el gen de
inters clonado (si se us un vector de expresin con el promotor adecuado) o puede
usarse simplemente para tener clonado (guardado) ese fragmento de ADN de inters.
Por ejemplo: para los proyectos de secuenciacin de genomas.

6.5. BENEFICIOS

La ingeniera gentica, posible por las enzimas de restriccin, produce una amplia gama de
beneficios mdicos y de otro tipo. Un beneficio mdico es la produccin ms rpida y ms
abundante de insulina, que se utiliza para tratar la diabetes. Los genomas de las bacterias de
reproduccin rpida se modifican para que incorporen el gen humano para la produccin de
insulina. Anteriormente, la insulina tena que ser tomada de cerdos y vacas, una forma de
produccin de insulina que era lenta y costosa y menos eficaz, ya que la insulina tomada de los
animales no funcionaba correctamente en todos los pacientes humanos.

Gracias a las enzimas de restriccin somos capaces de diagnosticar ciertas enfermedades

genticas, bien sean debidas a una variacin en el material gentico (duplicacin, delecin, etc)
o bien sean debidas a una mutacin en una base puntual. El procedimiento para dicho
diagnstico consistira en amplificar por PCR una regin concreta del cromosoma donde
sepamos que debera estar o no ese cambio gentico y aadir la enzima o enzimas de restricin
para que as se realicen los cortes pertinentes. Tras realizar dichos cortes, correremos nuestras
muestras en un gel de electroforesis y veremos las diferencias de tamaos que existen. Si la
mutacin genera una delecin, al correr en la electroforesis observaremos un fragmento menor
al que esperaramos de un paciente sano, de tal manera que lo podramos diagnosticar. Si la
mutacin, por el contrario, genera una mutacin puntual, podremos aprovecharla para utilizar
una enzima en ese punto y que as, si no existe dicha mutacin, ese corte no se producir y
obtendremos un fragmento mayor en el gel de electroforesis.

23

6.6. COMO ACTUAN LAS ENZIMAS DE RESTRICCION TRAS UNA INFECCION

VIRAL?

En la naturaleza, las enzimas de restriccin defienden a las bacterias contra las infecciones
virales cortando el DNA invasor. Las bacterias protegen su DNA incorporando grupos metilo (CH3) en algunos de los nucletidos del DNA. Las enzimas de restriccin no reconocen este
DNA modificado.

6.6.1. TRANSDUCCION

La conjugacin bacteriana se produce cuando un virus bacteriano (bacteriofago) infecta

una clula bacteriana y en el momento de formar los nuevos viriones resultantes del
ciclo de vida del fago, stos incluyen en su material gentico parte del material gentico
de la bacteria. De esta forma, cuando un fago que lleva material gentico de una
bacteria infecta a otra, esta pequea cantidad de material gentico de la primera bacteria
se transmite horizontalmente a la segunda. La transduccin por fagos puede ser
generalizada cuando el fago es capaz de incluir en su partcula vrica un fragmento del
cualquier parte del genoma de la bacteria que infecta o restringida cuando slo se
incluyen ciertas secuencias determinadas en la partcula vrica.

6.6.2. RETROVIRUS

Los retrovirus, son virus de ARN que poseen la enzima transcriptasa inversa, especfica
de estos virus y de la cual derivan su nombre. Esta enzima es capaz de hacer el proceso
normal de transcripcin (sntesis de ARN a partir de un molde de ADN) en sentido
opuesto. Los retrovirus penetran a las clulas a travs de un receptor de membrana. Una
vez en el citoplasma el ARN del virus, primero hace la transcripcin inversa de su ARN
formando ADN complementario (ADNc). Seguidamente el ADNc del virus entra en el
ncleo y se integra en el genoma celular, proceso dirigido por la enzima viral integrasa.

24

CAPITULO VII:
PATOGENIA VIRAL

7.1. CITOPATOGENIA

Calidad de estar en condiciones de causar cambios patolgicos o destructivos en las clulas.

7.1.1. EFECTO CITOPATICO

Se conoce como efecto citoptico al aspecto macroscpico e histolgico del dao

producido por un virus en un cultivo celular el cual es un importante criterio de
diagnstico ya que muchos virus causan efectos citopticos caractersticos.
Entre los cambios citopticos en las clulas se encuentran los siguientes:

DEGENERACION: Se refiere a todas las lesiones causadas por los

virus en el tejido afectado, este dao es causado por distintos factores
como son la sntesis de protenas txicas por parte del virus dentro de la
clula o por la acumulacin de protenas vricas que van a afectar la
configuracin original de la clula; el virus al sintetizar sus protenas
impide que la clula sintetice sus protenas estructurales lo que provoca
la degeneracin de esta hasta llegar a la muerte.

CORPUSCULO: Un cambio caracterstico de las clulas infectadas por

virus es la formacin de cuerpos de inclusin identificable por
microscopa ptica con ayuda de tinciones. Dependiendo del virus estos
cuerpos de inclusin pueden ser simples o mltiples, grandes o
pequeos, redondos o irregulares, intranucleares o intracitoplasmticos
y acidfilos o basfilos.

FUSION CELULAR: Es una caracterstica de la infeccin de

monocapas celulares por paramixovirus, herpesvirus, coronavirus y
poxvirus, es la formacin de sincitios tambin llamados poliocariocitos
o clulas gigantes, esto se da por cambios en la membrana celular que
determinan la fusin de las clulas infectadas con las clulas vecinas no
infectadas.

25

INCORPORACION

DE

ANTIGENOS

LA

MEMBRANA

PLASMATICAS: En muchas infecciones vricas se insertan protenas

codificadas por el virus en la membrana plasmtica de las clulas
infectadas por virus RNA.

MUERTE CELULAR: El evento terminal de muchas relaciones virus

clula es la muerte celular causado por virus citocidas, la apariencia del
dao producido en los cultivos celulares es utilizado como criterio de
diagnstico; la muerte celular puede ser causada por la suspensin de la
sntesis del ARN y de las protenas del husped lo que es incompatible
con la vida de este, otra causa puede ser el acumulo de protenas virales
toxicas para la clula como las protenas de la cpside, las protenas de
viriones se congregan en grandes cristales agregados o en inclusiones
que distorsionan a la clula, otra causa es que las clulas infectadas se
hinchan bastante lo que provoca cambios en la permeabilidad de la
membrana, eventualmente la enzimas de los lisosomas de la clula se
derraman en el citoplasma dando lugar a la digestin autoltica de la
clula.

7.1.2. CUERPOS DE INCLUSION

Zonas del ncleo o del citoplasma de una clula infectada por virus, que muestran
un comportamiento diferente ante la tincin. Algunos cuerpos de inclusin representan
"fbricas de virus", en las cuales se sintetizan los cidos nucleicos vrales o
las protenas. Otras veces slo son artefactos de la tincin y fijacin. Un ejemplo son los
cuerpos de Negri que pueden verse en el citoplasma o en las prolongaciones de
las clulas nerviosas de los animales que han muerto de rabia.
La deteccin de cuerpos de inclusin virales en frotis o tejidos por microscopa ptica
ha sido el mtodo tradicional para demostrar directamente una infeccin viral. En
general los virus que se ensamblan en el ncleo (habitualmente virus de DNA) producen
indicciones intranucleares, en tanto que el ensamblaje citoplasmtico (en forma
predominante, virus de RNA) da como resultado cuerpos de inclusin citoplasmtica.
Las inclusiones intranucleares se encuentran en clulas que han sido infectadas por virus
del herpes simple, VZV, CMV, adenovirus y papovavirus.

Ultraestructuralmente, los cuerpos de inclusin estn compuestos por una mezcla de

desoxiribonucleoproteina y viriones ensamblados; a medida que los viriones atraviesan

26

la membrana nuclear adquieren una membrana que contiene lpidos. Las clulas
infectadas pueden ser mononucleadas y multinucleadas.
Con frecuencia se encuentra un halo alrededor del cuerpo de inclusin. En el citoplasma
de algunas clulas infectadas pueden encontrarse inclusiones granulares basfilas.
En las infecciones causadas por adenovirus pueden encontrarse diversos cuerpos de
inclusin. Las inclusiones tempranas son eosinfilas y pueden ser muy parecidas a las
de las clulas infectadas por herpesvirus. Las inclusiones se hacen ms basfilas a
medida que maduran y llenan en forma progresiva el ncleo. Por ltimo, se hacen
extremadamente basfilas y pueden deformar por completo la clula; estas clulas
diagnsticas se denominan clulas tiznadas y deben diferenciarse de las clulas no
infectadas con ncleos hipercromtidos.
Los cuerpos de inclusin de los adenovirus estn compuestos por nucleoprotena y
numerosos viriones, que suelen exhibir un ordenamiento paracristalino porque su forma
icosadrica permite la agrupacin cercana de las partculas.

7.1.3. TRANSFORMACION CELULAR

La transformacin celular consiste en el paso de una clula normal a una clula anormal. La
clula inicia un proceso de replicacin celular masiva perdiendo el control del ciclo celular y
evadiendo la muerte celular programada.
Las caractersticas de las clulas transformadas:

INESTABILIDAD GENOMICA: Procesos de replicacin y reparacin incorrectos.

Segregacin errnea de los cromosomas, aberraciones cromosmicas; traslocaciones,
transposiciones, u otras, generando la existencia de un mayor nmero de
cromosomas.

ALTERACION DE PROLIFERACION CELULAR: Aparicin de oncogenes

(protooncogenes transformados por mutacin) y alteraciones en los genes supresores
de tumores.

ADQUISICION DE POTENCIAL INVASIVO Y ANGIOGENESIS: Ya que los

tumores requieren mayor irrigacin sangunea como modo de transporte
celular.

ADQUISICION

DE

POTENCIAL

METASTSICO:

La

transformacin celular incluye una gran cantidad de cambios relacionados con

capacidad de excrecin de un conjunto de genes que regulan el paso de una clula normal
a una clula tumoral.

27

Este conjunto de genes tambin son genes de transcripcin que activan una
cascada de genes relacionados con la morfologa celular, no la alteran directamente.

28

CAPITULO VIII:
VIRUS Y CANCER

8.1. VIRUS Y CANCER

Las infecciones virales se asocian con aproximadamente un 15% de todo los cnceres. Los
cnceres de cuello uterino (causada por el virus del papiloma) y del hgado (causado por los
virus de la hepatitis B y C) representan cerca de un 80% de stos. Se cree que estos virus son un
factor que actan en un estadio temprano del proceso que conduce al cncer.
Los virus DNA tienen un genoma que puede contener de 5 hasta 200 kb, por lo que sus
genomas pueden ser lo mismo pequeos que mayores. Aunque todos los virus DNA pueden ser
virus tumorales, comenzaremos con los papovavirus, de los cuales los ms conocidos y
representativos son el SV40 y el virus del polioma.

Estos virus inducen en las clulas infectadas el paso de la fase Go o G1 a la fase S, por lo que la
fase temprana de la infeccin se produce, y se replica tanto en DNA celular como el vrico en
algunas clulas animales denominadas clulas permisivas; a esta fase temprana le sigue una

fase tarda o de sntesis masiva del virus y muerte de las clulas. Por lo que cada
papovavirus tienen sus clulas permisivas; mientras las clulas de ratn son las
permisivas para el virus del polioma, para el SV40 lo son las clulas de mono.
En algunos tipos de clulas denominadas no permisivas hay conexin de la fase tarda de la
infeccin con la fase temprana, y entonces las clulas continan el ciclo celular y se convierten
en clulas permanentemente transformadas (cancergenas). En ocasiones, el virus no puede
pasar a la fase tarda de infeccin y la cluala puede transformar en no permisiva. Al parecer, el
DNA de los papovavirus no se integra en un punto especfico del DNA celular, sino que parece
ser que se integra al azar.

Los productos o protenas vricas pudieran ser los causantes de mantener el estado cancergeno
de las clulas. Por lo dicho hasta ahora, la asociacin entre el cncer y los virus parece estar
relacionado con la presencia de genes transformantes en el genoma viral, la incorporacin al
DNA celular y la no llegada de la clula a la fase tarda.

En los momentos actuales, el virus de Epstein-Barr (virus DNA) constituye, al parecer, la causa
primaria del linfoma de Burkitt y de algunos tumores nasofarngeos, donde se han encontrado el
antgeno caracterstico del virus de Epstein-Barr. Existen, adems, estudios que plantean una

29

alta relacin entre el cncer de hgado y el virus de la hepatitis B (virus DNA), ya que alrededor
del 60% de los pacientes con cncer de hgado presentan antgenos para el virus de la hepatitis
B.

La capacidad transformante del retrovirus no est en su genoma bsico sino en el

material gentico que adquiere del DNA celular normal. Es por eso que los retrovirus
son virus transductores que tienen capacidad para transducir oncogenes, o genes que
inducen cncer. Esta capacidad transductora de los retrovirus permite que genes
normales en algunos animales, al ser adquiridos por estos virus, se comporten como
oncogenes. Esto lleva a la consideracin de que la informacin gentica celular puede
ser la causante de la induccin tumoral y deja claro que nuestros propios genomas
contienen genes que pueden, en ciertas circunstancias, causar cncer.

30

CAPITULO IX:
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

9.1. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

El diagnstico viral por el laboratorio es de gran ayuda para confirmar la etiologa, as como
para el seguimiento clnico de la entidad. Adicionalmente, realizar un diagnstico adecuado
permite conocer la epidemiologa de la infeccin viral y determinar las connotaciones que
implica a nivel de salud pblica; tal es el caso de infecciones como el dengue y la fiebre
amarilla. Por las caractersticas estructurales, ecolgicas y biolgicas de los virus, su
demostracin in vitro es y ser uno de los mayores retos a los que se enfrentan los cientficos.
Al igual que la mayora de los microorganismos, los virus se pueden descubrir ya sea de una
forma directa o indirecta. Las pruebas directas son las que evidencian al virus o algunos de los
antgenos virales que se pueden encontrar presentes en los tejidos o fluidos humanos. Las
pruebas indirectas son las que se utilizan con ms frecuencia y bsicamente demuestran un
contacto del husped con el agente viral mediante la determinacin de anticuerpos especficos
contra el virus En muchos casos el diagnstico de infeccin viral se hace por el cuadro clnico
del paciente y la presencia de anticuerpos contra el agente viral sospechoso; sin embargo, hay
algunas tcnicas rpidas para demostrar los antgenos virales y tambin se sabe de tcnicas para
amplificar su material gentico. No obstante la variedad de pruebas diagnsticas que se han
desarrollado, es necesario tener en cuenta que para un ptimo diagnstico de las entidades
virales, debe haber una adecuada indicacin, recoleccin y transporte de las muestras que se han
de analizar para este propsito.

9.1.1. OBTENCION DE MUESTRA

Un factor determinante y definitivo para el aislamiento viral es la obtencin temprana

de una muestra adecuada, esto debido a que la excrecin del virus tiende a ser por pocos
das y la concentracin de partculas virales disminuye progresivamente con el tiempo.
Adems, la aparicin de anticuerpos en la fase aguda neutraliza el virus y ayuda a
formar complejos inmunes. Tener en cuenta lo anterior es importante, pues si la
concentracin de virus en la muestra clnica es muy baja, se pierde fcilmente la
posibilidad de infectar clulas vivas y por tanto demostrarlo en los cultivos celulares.
Las muestras se deben tomar en las condiciones de mayor esterilidad posible,
identificadas con el nombre del paciente, lugar de procedencia, el tipo de muestra, la
fecha y hora de la toma y un resumen corto de la historia clnica con la solicitud de

31

examen que se desea realizar. Para una muestra clnica adecuada es necesario tener en
cuenta factores adicionales que garanticen la conservacin de las partculas virales
activas, como: el tiempo de transporte de la muestra, la temperatura y el medio de
preservacin que se utilice para ste (es decir medios de transporte que mantengan la
viabilidad viral). Las muestras no se deben dejar a temperatura ambiente o en
incubadora, tampoco es recomendable congelar y descongelar las muestras, pues as se
podra alterar la estructura del agente viral.

Para el aislamiento viral, las muestras clnicas se deben tomar en el momento indicado y
rpidamente inocularlas en clulas vivas.
En su defecto se guardan en nevera entre 4C - 8C o en hielo de agua hasta que sea
posible su inoculacin. Si el tiempo de inoculacin se prolonga ms de 4 das, se
congelan a -70 C y se utiliza un medio de transporte segn sea el tipo de muestra. Se
pueden utilizar algunos criopreservantes para mejorar la recuperacin de los agentes
virales, entre ellos dimetil sulfxido (DMSO), suero, leche descremada, protenas,
sacarosa, glicerol y sorbitol. Muy pocos agentes virales se pueden mantener por un
perodo relativamente largo o de aun das, cuando se transportan en un medio adecuado
y en hielo a 4C.

Los virus desnudos, como enterovirus, rotavirus, adenovirus, etc. se mantienen viables
por varios aos congelados a 20 C.

El estudio srico clsico requiere de dos

muestras de sangre, una en la etapa aguda de la infeccin y otra en la convalecencia,

generalmente con 2 a 4 semanas de intervalo entre ellas, para demostrar una
seroconversin. Si se desea diagnosticar infeccin reciente (IgM) o antigua (IgG) se
puede determinar el nivel del tipo de anticuerpos correspondiente en slo una muestra
de sangre.

9.1.2. TECNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO VIRAL

Son dos tipos de tcnicas que se utilizan:

METODOS DIRECTOS

METODOS INDIRECTOS

Ambos usados para demostrar la presencia del virus o de alguno de sus constituyentes
(antgeno o genoma viral) o bien la respuesta de anticuerpos especficos por parte del
husped en el curso de la infeccin.
a) METODOS DIRECTOS: Dentro de las tcnicas directas es posible incluir:

32

Las que visualizan la partcula viral o su efecto celular especfico como las
tinciones para microscopa de luz, la microscopa electrnica y el cultivo o
aislamiento viral.

Las pruebas para demostracin de antgenos virales: los inmunoensayos

(ELISA, IFA, RIA) y las pruebas de ltex.

Las que evidencian la presencia de material gentico viral como: ensayos

de amplificacin gentica (reaccin en cadena de la polimerasa, PCR) e
hibridacin (sondas, ADN ramificado, etc.)

1) Visualizacin de la partcula viral:

Microscopa de luz: Se efecta mediante tinciones especiales, generalmente son

coloraciones con Wright o Giemsa en extendidos provenientes de lesiones vesiculares
donde se visualizan las inclusiones o los cambios celulares ocasionados por la invasin
viral. Un ejemplo de esto lo constituye el estudio de inclusiones producidas por el
citomegalovirus (CMV) en sedimento urinario y la prueba de Tzank para observar las
clulas infectadas por herpes (o varicela zster), para sta se hace un raspado de la base
de las vesculas y despus de fijarla con metanol, se hace la tincin y se observan las
clulas, que se tornan agrandadas, con mltiples ncleos y un citoplasma que se tie de
oscuro adems de inclusiones intranucleares eosinoflicas. La sensibilidad de esta
tcnica depende de su preparacin, tincin y la experiencia del observador,
generalmente es menor que la de la inmunofluorescencia y el cultivo viral.

Microscopa electrnica: Permite visualizar la partcula viral debido a la gran

resolucin del microscopio electrnico. Para este fin se utilizan dos tinciones especiales
con sales de metales pesados como el uranio o el tungsteno. La primera es la tincin
negativa donde el acetato de uranilo forma una especie de molde viral que permite
detallar la estructura del virus. La segunda tincin es la del sombreado, donde las
partculas virales se ponen en un ngulo donde el metal que se utiliza en ella se deposita
sobre el virus pero no sobre su sombra y slo se visualiza lo que no se ha cubierto con
el metal. Esta tcnica no revela las estructuras internas del virus sino su forma y
dimensiones. El uso de equipo especializado y costoso, el elevado nivel tcnico que
requiere, la baja sensibilidad cuando hay un bajo nmero de partculas virales y el
hecho de que en algunos casos la morfologa per se no es suficiente para un diagnstico
viral definitivo, hacen que este sistema sea poco usado y slo se emplee a nivel
investigativo o acadmico. La microscopa electrnica se ha utilizado para el

33

diagnstico del agente Norwalk, adenovirus entricos, calicivirus, astrovirus y

coronavirus en materia fecal as como de otros virus para los cuales no se tiene
disponibilidad de otras pruebas diagnsticas comerciales o aquellos que no son
cultivables.

Si la concentracin de virus en la muestra clnica es baja, y por tanto no visible

directamente por microscopio electrnico, se pueden utilizar tcnicas que aumenten la
visualizacin, por ejemplo, la inmunoelectromicroscopa, que consiste en el agregado de
anticuerpos especficos antivirales y la formacin de agregados de partculas que son
ms fcilmente visibles que las partculas solas.

Aislamiento viral en cultivo: Los virus son microorganismos intracelulares y para

evidenciarlos, se deben utilizar sistemas basados en lneas celulares que permitan su
desarrollo. La invasin viral se evidencia a travs de un cambio celular o efecto
citoptico (EC) y mediante pruebas complementarias. Los sistemas de cultivos ms
utilizados son:

Cultivos Primarios: Se caracterizan por tener varios tipos de clulas. La

mayora son de crecimiento limitado in vitro, generalmente resisten 5 a 10 sub
cultivos y son permisivas a un amplio rango de virus; p. e., clulas de rin
embrionario humano (REH).

Cepas de clulas diploides: Derivadas de tejidos normales, se utilizan en la

produccin de vacunas, aislamiento viral y como sustratos para probar
materiales txicos. Estn constituidas por un tipo de clulas que retienen su
nmero cromosmico diploide original (Por ejemplo: los fibroblastos de
pulmn).

Lneas celulares continuas y diploides: La primera permite un nmero finito

de sub cultivos y son heteroploides. Para considerar que se ha logrado
establecer una lnea continua, esta debe de haber sido subcultivada por lo
menos 70 veces.

La segunda (continua) Son aquellas que crecen en pasajes sucesivos hasta

aproximadamente 50 sub cultivos y que conservan por lo menos en un 75% el
cariotipo correspondiente a la especie de que provienen.

Son clulas inmortalizadas en el laboratorio, resisten (n) nmero de pases y se

caracterizan por derivarse de tejidos normales o de tumores malignos y se han
pasado por los menos 70 veces in vitro; por ejemplo las clulas Vero (rin de

34

mono verde africano), LLC-MK2 (rin mono rhesus) y BSC-1 (tambin de

tejido normal de rin de mono) y HeLa y HEp-2 derivadas de clulas humanas
malignas. stas generalmente tienen un nmero variable de cromosomas y a
veces tambin son denominadas lneas celulares heteroploides.

Existen otros mtodos para descubrir y caracterizar un virus en cultivo celular cuando
todava no se produce el EC, o ste no es evidente o en los casos en que el virus se debe
reconocer por otras propiedades o caractersticas en cultivo. Dentro de las tcnicas que
ayudan a identificar estas propiedades virales estn:

La Hemadsorcion: Consiste en que cuando el virus infectante incorpora

protenas virales con propiedad de hemaglutininas en la membrana celular, las
clulas infectadas se pueden descubrir por la adsorcin de eritrocitos de ciertas
especies animales, que se puede observar al microscopio de luz. Es el caso de
los ortomixovirus y paramixovirus que se pueden reconocer por la
hemadsorcin de eritrocitos de cobayo a las clulas; la identificacin se
confirma con la inmunofluorescencia directa mediante anticuerpos especficos

2) Pruebas directas para la deteccin del antgeno

Mediante esta tcnica se pueden descubrir antgenos virales circulantes o los que se
encuentran en los tejidos del husped. La sensibilidad de estas pruebas depende de la
cantidad de antgeno presente y su especificidad depende de la calidad de los antisueros
disponibles para este efecto. Estas pruebas permiten una demostracin rpida y son muy
prcticas para el diagnstico, pues los cultivos virales requieren de una infraestructura
adecuada y personal entrenado y slo se pueden realizar en centros de docencia o de
investigacin. Adems, los resultados del cultivo viral requieren por lo menos hasta 8 das.
Las tcnicas ms utilizadas para el descubrimiento directo de antgeno son:

Aglutinacin de ltex: Las partculas de ltex son esferas de poliestireno que se

unen

fcilmente

al

fragmento

cristalizable

(Fc)

de

molculas

de

inmunoglobulina G (IgG) o inmunoglobulina M (IgM), esta ltima es mucho

ms eficiente en aglutinar partculas naturales. Los fragmentos de unin del
anticuerpo (FAb) quedan expuestos y son capaces de unirse al antgeno que se
encuentra en la muestra.

35

Cuando los antgenos tienen varios eptopes (o estructuras antignicas

repetitivas), los anticuerpos multivalentes acoplados a mltiples partculas de
ltex se unen al antgeno y se produce un entramado de las partculas de ltex
que dan como resultado una aglutinacin visible. Esta tcnica se aplica
ampliamente en el laboratorio de microbiologa, porque es fcil de realizar,
requiere slo unos minutos y no necesita equipo, pues se mente para la
demostracin de antgenos de rotavirus en materias fecales

Inmunofluorescencia directa (IFA): La demostracin de antgeno se hace

mediante la utilizacin de un anticuerpo marcado con un fluorocromo
(conjugado) que es especfico para el antgeno que se ha de descubrir. Este
proceso implica la preparacin de un extendido en placa de la muestra, del
tejido o de una monocapa celular inoculada con la muestra, luego se fija, se
coloca el conjugado con fluorescena y despus de una incubacin y un lavado,
la placa se observa en el microscopio de fluorescencia. La IFA ha tenido gran
aplicacin y se usa con frecuencia para el diagnstico de infecciones virales del
tracto respiratorio en nios. La muestra, que puede ser un aspirado nasal, se
concentra mediante centrifugacin y se hacen placas que se fijan y se prueban
con el antisuero para el virus por descubrir. Esta tcnica se sigue para el
diagnstico del virus de influenza, el RSV, paperas, sarampin, coronavirus,
ADV, HSV y CMV Particularmente para RSV y sarampin tiene una
sensibilidad mayor que el cultivo viral.

La IFA tambin es til para confirmar los hallazgos de cultivo viral y la

combinacin de estos dos mtodos mejora el diagnstico. Este mtodo es
fcilmente aplicable en tejidos que se pueden colocar sobre una placa a manera
de huella y a partir de sta aplicar la tcnica; un ejemplo es el caso de biopsias
de cerebro para el diagnstico de encefalitis por herpes simple y para rabia en
cerebros de animales. Esta tcnica se ha desarrollado para el diagnstico de
CMV que se basa en el cultivo viral combinado con tincin de anticuerpos por
IFA donde la positividad al segundo da es de 52% mientras que con el cultivo
solamente es 2%; al octavo da con el mtodo combinado la positividad
aumenta a 85% comparada con el cultivo donde slo alcanza 27%. Este
aumento de la positividad se atribuye a la IFA; su eficiencia evidente amerita su
empleo.

36

Inmunoensayo, ensayos de captura de antgeno, inmunocromatografa: Son

inmunoensayos en fase slida donde se fijan los anticuerpos especficos para el
virus en la superficie de una matriz, tubo o microplaca y luego se pone en
presencia del suero o muestra que contiene el antgeno que se quiere demostrar;
una vez ocurre la reaccin antgeno-anticuerpo, se hace un lavado y se agrega
un anticuerpo marcado, que depende de la marcacin del anticuerpo. La prueba
se denomina radioinmunoensayo (RIA) o inmunoensayo ligado a enzimas
(ELISA o EIA) dependiendo del trazador que se utilice para evidenciar la
reaccin. Se denomina RIA cuando el anticuerpo se marca con un istopo
radioactivo, el ms utilizado es el yodo En la tcnica ELISA el anticuerpo se
marca con una enzima que puede ser la fosfatasa alcalina (FA) o la peroxidasa
de rbano (PR) y para revelar la reaccin se coloca el sustrato especfico para la
enzima que es modificado por sta y produce un compuesto coloreado. En el
caso de la FA el sustrato es el paranitrofenilfosfato y para la PR es el perxido
de hidrgeno en una solucin de ortofenilendiamina (OPD) que hace visible la
reaccin. Para la cuantificacin se mide la absorbancia en una longitud de onda
determinada en un espectrofotmetro. La absorbancia ser directamente
proporcional a la cantidad de antgeno descubierto. Estas tcnicas se utilizan
ampliamente en el diagnstico de hepatitis A y B, rotavirus, el agente Norwalk,
ADV, el RSV, parainfluenza, influenza A y B1. Para la hepatitis B la
demostracin de antgeno de superficie diagnstica la infeccin activa y en VIH
la demostracin del antgeno p24 es til en el diagnstico de la infeccin en
nios y en pacientes que se encuentran en ventana inmunolgica, adems es de
gran utilidad en el pronstico y la progresin de la infeccin as como en el
control de la terapia antirretroviral.

3) Tcnicas de diagnstico molecular

Comprenden las tcnicas que evidencian o descubren el material gentico especfico viral
conservado y replicable ya sea que se encuentre en un fluido, en una clula o tejido, ya sea
activo o latente. Estas tcnicas, que son ms rpidas que las tradicionales, permiten hacer
estudios en tejidos almacenados y se pueden clasificar en dos categoras:

Ensayos de Hibridacin:

Hibridacin con sondas: Los recientes avances en el campo de la biologa molecular y

el conocimiento cada vez mayor de los virus que causan infecciones importantes en la

37

comunidad, han hecho posible que en el momento se disponga de fragmentos de ADN

del material genmico especfico y altamente conservado de un determinado virus que
se utiliza como sonda. sta frente a sus secuencias complementarias se hibrida para
formar una molcula dplex. Esta tcnica se puede aplicar ya sea para confirmar la
identificacin de un virus en cultivo o descubrirlo directamente en una muestra. Se
pueden utilizar clulas o tejidos fijados con sustancias que conserven la morfologa
celular y la integridad del ADN o ARN. Para estudios de ARN se requieren tejidos
frescos congelados rpidamente con nitrgeno lquido y para estudios de ADN se
pueden emplear tanto tejidos fijados como congelados. Las sondas preparadas a partir
del ADN o ARN especfico se pueden purificar por clonacin o copia en un plsmido
del ADN o del ADNc obtenido de transcripciones de ARN. Utilizando el plsmido
como vector y bacterias como huspedes, es posible producir sondas genticas en
grandes cantidades. Los fragmentos de ADN o ARN (sondas) se someten a un anlisis
de hibridacin (o apareamiento con el complementario que se encuentra en el material
que se va a probar); ste se puede hacer ya sea con ADN o ARN tisular en solucin,
directamente en tejidos o clulas por hibridacin in situ, o se puede efectuar sobre ADN
o ARN transferidos en membranas de nitrocelulosa a partir de una electroforesis en gel
de agarosa. Las sondas se pueden marcar con radioistopos (P32, I125, S35), enzimas,
avidina o molculas quimioluminiscentes para que la formacin de las molculas dplex
sea descubierta. Las sondas radioactivas requieren el empleo de autorradiografa para su
descubrimiento mientras que las sondas marcadas con enzimas se demuestran por
mtodos colorimtricos.

La sensibilidad de las sondas depende de la cantidad de material gentico para la

hibridacin y su especificidad depende de la calidad de la sonda. Una de las principales
limitaciones de esta tcnica se ve cuando existe una baja cantidad de ADN o ARN y ste no
se descubre. Muchas de estas pruebas tienen una sensibilidad que les permite descubrir 105 106 molculas o aun 103 -104 molculas; sin embargo, esto puede ser insuficiente en muchas
situaciones clnicas. Esta tcnica se sigue con xito para evidenciar la presencia de
papilomavirus en biopsias o raspados cervicales, en la demostracin in situ de cantidades
pequeas de virus de la hepatitis B, virus Epstein Barr (EBV), HSV tipo I, CMV, ADV y
rotavirus. Se dispone de estuches comerciales de sondas para el descubrimiento de CMV,
HSV y ADV5. Tambin se utilizan para identificar las secuencias complementarias del
virus de hepatitis E, identificar el parvovirus B19 en suero, en leucocitos, en secreciones
respiratorias, en orina y tejidos; para los virus de hepatitis A, B y C tambin hay sondas
disponibles.

38

4) Tcnicas para la amplificacin del cido nucleico

Reaccin en cadena de polimerasa: Conocida como PCR mediante esta tcnica se

pueden encontrar cantidades mnimas de un agente infeccioso en una muestra
clnica gracias a la amplificacin selectiva y repetitiva de una secuencia de
nucletidos de un microorganismo determinado que hace un proceso de sntesis de
ADN. La PCR consta de tres pasos:

La desnaturalizacin del ADN en la muestra, lo que se logra al someterlo a altas

temperaturas (95C) para lograr la separacin de las cadenas

La hibridacin de los cebadores (a 55C) que son unos fragmentos cortos de

ADN complementarios a los extremos 5' y 3' de las secuencias por amplificar y
a partir de los cuales se inicia la sntesis, stos son especficos de la secuencia
del microorganismo que ha de descubrir

La extensin de estos cebadores por la enzima ADN polimerasa (a 72C)

termoestable (la taq polimerasa extrada de la bacteria Thermus aquaticus) que
produce dos bandas de ADN que son idnticas a la banda blanco original.

Estas reacciones se llevan a cabo de una forma automatizada en un equipo denominado

termociclador. As, en cada ciclo de estos tres pasos, se duplica el material gentico en
un factor de 2n (donde n es el nmero de ciclos) hasta que ste se evidencia fcilmente
en un gel de agarosa y se confronta con una sonda especfica para confirmar la
identificacin final del material encontrado.
La PCR se utiliza para descubrir VIH, CMV, virus de la hepatitis B, papilomavirus,
hantavirus, herpes 6 y 8, as como una gran variedad de patgenos (bacterias, parsitos,
etc.). La PCR presenta una sensibilidad y especificidad altas, pero varan segn el
ensayo para el que se ha diseado. Es una alternativa cuando otras pruebas no ofrecen
mayor sensibilidad y en entidades en las que no hay mayor disponibilidad de pruebas
diagnsticas. Sin embargo, posee algunas limitaciones, como la necesidad de cebadores
especficos para encontrar determinado microorganismo y por ello hay la posibilidad de
falsos positivos, lo que implica un conocimiento adecuado de la secuencia de
nucletidos del agente. Adems, la prueba se debe efectuar en condiciones adecuadas de
astringencia, es decir, una temperatura, pH y concentracin de cebadores y nucletidos
apropiados.
Es importante tener en cuenta que una PCR positiva no siempre indica infeccin activa,
pues demuestra material gentico y se puede tratar de una infeccin latente o presencia

39

de material gentico de un agente no infectivo; por tanto su interpretacin se hace en el

contexto clnico de la persona.
Una de las mayores ventajas de la PCR, es que puede evidenciar una infeccin aunque
el individuo se encuentre en ventana inmunolgica, lo que permite disminuir la
transmisin de estas infecciones, en el caso del virus de hepatitis B reduce la
demostracin a 11 das post infeccin y en la hepatitis C la reduce de 59 a 25 das.

Sistema QB replicasa: La QB replicasa es una ARN polimerasa que replica el ARN

que tiene la estructura genmica del ARN del bacterifago QB. Una pequea
secuencia blanco insertada se puede incluir en el ARN genmico y esto permite su
hibridacin con una secuencia blanco especfica. La QB replicasa, amplificar la
sonda mil millones de veces, para que luego sea descubierta. Este mtodo es rpido,
altamente sensible y cuantitativo; sin embargo, todava presenta problemas de
inespecificidad.

ADN ramificado: Es un sistema de amplificacin, donde lo que se amplifica es la

seal en lugar del blanco de cido nucleico, esto se hace mediante pasos sucesivos
de hibridacin. El cido nucleico viral se captura por hibridacin, con un
oligonucletido unido a una fase slida y una segunda sonda especfica para el virus
que contiene a su vez una sonda para el bADN amplificador. Este bADN tiene
mltiples cadenas ramificadas a manera de rbol y cada una de estas ramas es un
sitio de hibridacin con una sonda marcada con una enzima, que reacciona con un
sustrato que permite la demostracin colorimtrica o quimioluminiscente. Esta
prueba se ha aplicado para el diagnstico de HCV, VIH, CMV y hepatitis. Tambin
sirve para monitorear los niveles de ARN de HCV y VIH durante y despus del
tratamiento.

Ensayo de transcriptasa reversa: Es una prueba aplicada a los retrovirus que

pueden ser descubiertos por la actividad de ADN polimerasa dependiente de ARN
que se halla en los cultivos de linfocitos. Adems, los ensayos de transcripcin de
ARN a ADN se utilizan en combinacin con la PCR en el caso de virus con ARN y
son denominados RT-PCR. Ejemplo, para demostrar el genoma de virus como el
VIH, VHC.

b) TECNICAS INDIRECTAS: Estas son las tcnicas serolgicas tradicionales para

descubrir anticuerpos contra determinado agente viral, teniendo en cuenta que la
exposicin al agente produce una respuesta por parte del sistema inmune que genera

40

la produccin de anticuerpos especficos. Estos ensayos se pueden clasificar en tres

grupos con base en la cuantificacin de la reaccin antgeno-anticuerpo.

Los que dependen de la capacidad del anticuerpo que se une al antgeno

para ejercer alguna funcin no relacionada con el virus, por ejemplo: la
fijacin

del

complemento

(FC),

hemaglutinacin

indirecta

(HI),

aglutinacin por ltex.

Los que miden la capacidad de los anticuerpos para bloquear la funcin

viral especfica como la neutralizacin, la inhibicin de la hemaglutinacin
(IH), la inhibicin de la neuraminidasa (que mide la capacidad de los
anticuerpos para bloquear la infectividad viral), la hemaglutinacin viral y
la actividad de neuraminidasa.

Los que miden directamente la interaccin antgeno-anticuerpo como por

ejemplo: la IFA indirecta, el RIA, ELISA y el Western blot.

1) Tcnicas indirectas tipo a:

Fijacin del complemento: La FC es un proceso de dos pasos, esta tcnica emplea el

complemento para lisar los eritrocitos que, a su vez, funcionan como indicadores.
Durante el primer paso, el antgeno reacciona con el anticuerpo que se encuentra en la
muestra de suero del paciente, en presencia de complemento (casi siempre de suero de
conejo) titulado previamente. Si el antgeno y el anticuerpo reaccionan, se activa la va
clsica del complemento, luego se aade el indicador constituido por eritrocitos
cubiertos con anticuerpos y de esta forma, si el complemento se fija y se activa por el
complejo antgeno viral-anticuerpos del paciente, los eritrocitos no se lisarn. Si durante
la primera fase no hay unin antgenoanticuerpo el complemento permanece libre y se
une al complejo indicador y produce la lisis de eritrocitos.

Una de sus aplicaciones es determinar anticuerpos contra agentes de baja prevalencia

como los virus Coxsackie. Los anticuerpos que fijan el complemento aparecen
tardamente comparados con los descubiertos por otras pruebas y tienen una vida corta,
lo que puede ser til para determinar la actividad de ciertas infecciones, como por
ejemplo la rubola.

Hemaglutinacin indirecta: Los eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos

antgenos y se pueden utilizar como sistema indicador. As, si se descubren los
anticuerpos, la reaccin se revelar como una hemoaglutinacin que se puede advertir

41

fcilmente a simple vista. Existe una amplia variedad de antgenos que se pueden unir a
los glbulos rojos, entre ellos los carbohidratos que se adhieren con rapidez, en el caso
de las protenas se requiere un proceso de pretratamiento con cido tnico o con cloruro
de cromo. Este sistema se usa para demostrar anticuerpos contra toxinas como la de la
difteria o del ttanos. Tambin para descubrir anticuerpos contra el virus de fiebre
amarilla, VZV, influenza, parainfluenza y dengue.

Aglutinacin de ltex: Es similar a la tcnica de ltex ya descrita slo que en este caso
el antgeno se encuentra fijo a la partcula de ltex y, por tanto, se espera descubrir los
anticuerpos que se encuentran en la muestra. Estos ensayos generalmente son pruebas
de filtro (tamizaje) pues slo determinan la presencia o no de anticuerpos. Los
resultados se pueden interpretar como inmune (si es positivo) o susceptible (si es
negativo), como en el caso de determinar el estado inmune para el virus de la rubola.
La informacin que suministra corresponde a exposicin al agente o infeccin pasada y
aunque, como se ha afirmado, la IgM es una aglutinina muy buena, generalmente las
pruebas de ltex no son especficas para sta. En virologa se utiliza con ms frecuencia
la tcnica de aglutinacin de ltex directa.

2) Tcnicas indirectas tipo b:

Neutralizacin viral: Demuestra anticuerpos por su efecto inhibitorio en la infectividad

viral. Este ensayo mide funciones virales especficas, por lo que es bastante selectivo,
de esta forma la neutralizacin viral slo mide anticuerpos para antgenos especficos
sobre la superficie viral. Si los anticuerpos se encuentran en el suero del paciente que se
pone a incubar con una suspensin del virus, los anticuerpos reaccionarn con los
antgenos virales, y cuando la suspensin se ponga en presencia de las clulas
permisivas al virus (en cultivo celular) el resultado ser la neutralizacin de la invasin
celular y la no evidencia del EC. En caso de no existir anticuerpos en el suero de
paciente, se producir la invasin celular y como consecuencia se har evidente el EC
caracterstico. Para realizar esta prueba se debe disponer de lneas celulares adecuadas y
por lo general se hace en laboratorios donde se tiene toda la infraestructura para los
cultivos celulares. Esta tcnica se ha utilizado para el diagnstico de las infecciones por
dengue.

Inhibicin de la hemaglutinacin: Algunos antgenos virales tienen capacidad para

aglutinar eritrocitos de diversas especies, sin embargo la presencia de anticuerpos

42

especficos en el suero del paciente evitan la aglutinacin de los eritrocitos por tales
antgenos; cuando esto ocurre se evidencia la presencia de anticuerpos. Para
cuantificarlos se hacen diversas diluciones del suero con el fin de hacer una titulacin y
determinar el nivel de anticuerpos del paciente. Esta prueba al principio se utiliz para
demostrar anticuerpos contra rubola y dengue, pero se ha reemplazado por ELISA,
pues la IH no puede diferenciar entre anticuerpos tipo IgM (infeccin aguda) o IgG
(infeccin antigua), sin embargo an se utiliza para influenza y para otros virus menos
abundantes que poseen actividad hemaglutinante como los arbovirus (Por ejemplo el
virus de la fiebre amarilla), reovirus y algunos enterovirus.

3) Tcnicas indirectas tipo c:

IFA indirecta: En una placa se ponen las clulas infectadas con un virus determinado,
que tienen antgenos de ste en su membrana, y se fijan; luego se agrega el suero del
paciente y despus de una incubacin, si hay anticuerpos en el suero, se forma un
complejo antgeno-anticuerpo, que se revela por medio de un conjugado fluorescente.
Cuando existen los anticuerpos en el suero problema y se aade el conjugado
fluorescente (anti IgG, IgA, IgM) ocurre una segunda reaccin antgeno-anticuerpo, que
origina un patrn especfico de fluorescencia segn los anticuerpos que reaccionen con
el sustrato. Este patrn slo se podr observar en un microscopio de fluorescencia. Las
caractersticas del patrn dependen de los antgenos reconocidos por el anticuerpo ya
sea intracitoplasmticos o intranucleares. Este conjugado reacciona con anticuerpos del
tipo IgM, IgG e IgA, pero cuando se necesita descubrir la fase aguda de la infeccin, el
conjugado debe ser especfico para las cadenas pesadas de la IgM.

Esta tcnica se ha utilizado para descubrir anticuerpos contra rubola, VIH, CMV y
HSV. Sin embargo, recientemente ELISA la ha desplazado porque ofrece una
especificidad similar y se puede leer mediante equipos automatizados lo que elimina la
subjetividad inherente al observador en IFA y la necesidad del microscopio de
fluorescencia.

ELISA: La prueba ELISA indirecta tiene un principio semejante al de la ELISA directa,

slo que en este caso, un antgeno especfico est unido a una fase slida que puede ser
un tubo, microplaca o perlas de vidrio; luego se aade el suero del paciente que posee
los anticuerpos y despus se adiciona el conjugado constituido por un anti-anticuerpo
IgG o IgM unido a una enzima; posteriormente se adiciona el sustrato especfico para la

43

enzima, que lo va a modificar y produce un compuesto coloreado, cuya intensidad es

proporcional a la concentracin de anticuerpo en el suero del paciente.

Mediante esta tcnica se pueden sealar niveles de IgM e IgG con ensayos por separado
para evitar los falsos positivos y negativos. Su utilidad en virologa es bsicamente para
determinar anticuerpos contra antgenos especficos del dengue, HSV, VIH, RSV,
CMV, rubola, hepatitis A, B y C principalmente, y en infecciones por EBV se usa para
demostrar marcadores serolgicos tempranos de la infeccin, que se pueden utilizar en
el manejo de huspedes inmunocomprometidos. Su especificidad depende del antgeno
que se utilice en la fase slida.

En otra modalidad de ELISA se usa el sistema biotina/avidina-estreptavidina, mtodo

que se fundamenta en sistemas con distintos marcadores unidos a la biotina y
demostrados por reacciones enzimticas, de color o quimioluminiscentes que portan la
avidina, la estreptavidina o la biotina. La biotina ligada a un anticuerpo, nucletidos,
protena o lecitina, se une a una molcula blanco que puede ser anticuerpo (in directa) o
antgeno (directa), la avidina o estreptavidina se marcan con una molcula demostrable
como una enzima, una sustancia fluorescente o un metal. La avidina o la estreptavidina
marcada se unen a la biotina y de esta forma se descubre la molcula blanco11. Hay
otras modalidades de ELISA, que son pruebas rpidas que se pueden observar
visualmente y se utilizan en laboratorios rurales o de primer nivel; son las ELISA de
cartucho donde los antgenos se encuentran inmovilizados sobre una membrana de
nitrocelulosa en un cartucho, se adiciona el suero y se filtra a travs de una membrana,
se hace un lavado y se usa un anticuerpo marcado especfico para la inmunoglobulina
que se quiere demostrar; despus de un lavado se aplica el sustrato. Un resultado
positivo se observa porque se produce un compuesto coloreado a manera de mancha
(dot blot) donde se encuentra el antgeno inmovilizado. Esta prueba se puede hacer en
10 minutos y se utiliza sobre todo para determinar anticuerpos contra VIH.

Inmunoblot o Western blot: A partir de un extracto viral se hace una electroforesis de

protenas en un gel de poliacrilamida, lo que permite la separacin de las protenas
virales de acuerdo con su peso molecular, y mediante un sistema de transferencia, se
fijan a una membrana de nitrocelulosa. Esta membrana que luce un mapa de protenas,
se corta en tiras delgadas verticales y cada una de ellas quedar con un perfil de
protenas, despus se pone a reaccionar el suero del paciente donde se encuentran los
anticuerpos especficos para las protenas virales que se hallan en la membrana y
despus de un lavado, se aplica el conjugado que es un antianticuerpo marcado con

44

peroxidasa de rbano, se incuba, se lava y posteriormente se adiciona el sustrato

enzimtico. Una reaccin de unin antgeno y anticuerpo se observar como una banda
de color caf que hace evidente la unin de los anticuerpos que reaccionaron con la
protena que migr en ese sitio.
Esta prueba es muy especfica y se utiliza como suplementaria y confirmatoria en
infeccin por el VIH o HTLV-I cuando ELISA da resultados contradictorios o difciles
de interpretar. Tambin se utiliza para diferenciar entre infeccin por VIH1 y VIH2.

9.1.3. DETECCION DE PROTEINAS VIRICAS

La metodologa se basa en la especificidad de la reaccin antgenoanticuerpo, que se

evidencia de diferentes formas. Se requiere de una clara definicin del componente
antignico del virus a investigar (interno o externo, estructural o temporal, completo o
parcial, etc.), as como del tipo de anticuerpo a usar (monoclonal, policlonal,
biosinttico, etc.).

Las tcnicas de inmunodiagnstico permiten detectar la presencia de antgenos y/o de

anticuerpos y pueden desarrollarse como mtodos directos o indirectos. En el mtodo
directo el anticuerpo especfico tiene acoplado un marcador y slo se puede usar para
detectar antgeno. En el mtodo indirecto el anticuerpo especfico (anticuerpo primario)
no est marcado y la formacin del complejo antgenoanticuerpo se evidencia mediante
un anticuerpo marcado anti anticuerpo primario (anticuerpo secundario conjugado); este
mtodo puede emplearse para detectar tanto antgeno como anticuerpo. Se han
desarrollado mltiples sistemas para optimizar el diagnstico basado en la reaccin
antgeno anticuerpo, que implican la formacin de sandwiches con los diferentes
reactantes. Unos mtodos, denominados de competencia, miden la variacin del
resultado haciendo competir el anticuerpo en estudio con un anticuerpo conocido. Con
frecuencia se adsorbe un anticuerpo especfico a una fase slida inerte, para capturar
el virus o antgeno presente en la muestra y mejorar la sensibilidad o especificidad de la
tcnica: mtodos de captura. Una forma simple de inmunodiagnstico la constituye la
aglutinacin, fenmeno visible a simple vista similar a lo observado al determinar
grupos sanguneos; esta reaccin se ha perfeccionado con la adsorcin de antgenos o
anticuerpos a fases slidas (esferas de ltex, placas, hemates pretratados, etc.).

El sistema usado para marcar los anticuerpos define la denominacin de diferentes

tcnicas. En el caso de la inmunofluorescencia (IF), el anticuerpo est conjugado con
una molcula que emite fluorescencia bajo la estimulacin con luz de una longitud de

45

onda determinada. Tanto en la tcnica de ensayo inmunoenzimtico (ELISA) como en

las inmunocitoqumicas, el anticuerpo va acoplado a una enzima (fosfatasa alcalina o
peroxidasa) que reacciona con un sustrato cromgeno, dando origen a un producto
coloreado, que se detecta a simple vista o bien al microscopio ptico. El cambio de
color se puede cuantificar midiendo la absorbancia en un espectrofotmetro. En la
tcnica de radioinmunoanlisis (RIA) el anticuerpo est marcado con un elemento
radioactivo y el complejo antgeno anticuerpo se detecta en un contador gama. Estas
tcnicas han tenido habitualmente el carcter de cualitativas, pues determinan la
presencia de una reaccin especfica. Sin embargo se ha avanzado con el desarrollado
de sistemas para cuantificar la cantidad de antgeno o anticuerpo, mediante uso de
diluciones sucesivas de la muestra (HAI para influenza o rubeola), medicin de la
intensidad de la reaccin (Por ejemplo ELISA cuantitativo) o el recuento de clulas
infectadas positivas (Por ejemplo antigenemia para CMV).

Actualmente se han

desarrollado cientfica y comercialmente muchas tcnicas con variados sistemas de

deteccin y de marcacin, para diagnosticar o tipificar muchos agentes; debe analizarse
cuidadosamente la sensibilidad, especificidad, rapidez, costo, aplicabilidad, etc. de ellas
antes de decidir su uso.

9.1.4. METODOS DE ANALISIS SEROLOGICOS

El objetivo de estas tcnicas es detectar la respuesta inmune humoral del husped

(anticuerpos).

Su

fundamento

es

la

formacin

de

un

complejo

antgeno

anticuerpo virus y suero del paciente que puede demostrarse por diversos
procedimientos.

REACCION DE NEUTRALIZACION:

Se basa en la prdida de la capacidad infectiva de un virus al unirse al anticuerpo

especfico, formando un complejo antgenoanticuerpo. Estos complejos no infectivos
se pueden detectar inoculando la mezcla en un husped vivo, animales de
experimentacin o en cultivos celulares, donde no produce efecto pues la capacidad
infectiva del virus ha sido neutralizada por los anticuerpos del paciente. Por el contrario,
en ausencia de anticuerpos especficos no se forma el complejo, el virus mantiene su
capacidad infectiva y es capaz de producir un efecto biolgico caracterstico en el
husped. Esta tcnica tambin permite definir los serotipos virales, pues la reaccin
de neutralizacin refleja el grado de inmunidad del husped frente al agente especfico.

46

Por esto, generalmente se considera como tcnica de referencia para metdicas que
miden anticuerpos. Sin embargo, es una tcnica sofisticada, pues requiere de un
laboratorio con capacidad de mantener huspedes vivos y la reaccin demora varios
das, el tiempo que tarda el virus en producir un efecto demostrable.

REACCION DE INHIBICION DE LA HEMAGLUTINACION

Se basa en la prdida de la capacidad hemaglutinante de un virus al formarse el

complejo antgenoanticuerpo. Se utiliza en el diagnstico de virus con capacidad de
aglutinar glbulos rojos (influenza, rubola, sarampin, etc.), que al unirse a los
anticuerpos especficos pierden esta propiedad. Esto se demuestra haciendo reaccionar
la mezcla de antgeno con anticuerpos (suero del paciente) con glbulos rojos, los que
no se unen y sedimentan formando un botn o punto; en ausencia de anticuerpos
especficos se expresa la propiedad hemaglutinante del virus, que se visualiza por la
formacin de una malla de aglutinacin en el tubo o pocillo en que se realiza la
reaccin. Esta tcnica se hace en microplacas de plstico en forma manual y demora 3 a
5 horas en dar resultados. Actualmente se usa principalmente en diagnstico y
caracterizacin de virus influenza. Los anticuerpos inhibidores de la hemaglutinacin
tienen buena correlacin con los neutralizantes en reflejar nivel de inmunidad, y su
medicin es ms sencilla (Por ejemplo el sarampin, rubola).

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO

En esta tcnica el complejo virusanticuerpo especfico debe competir por captar

complemento con otro sistema, formado por glbulos rojos de cordero sensibilizados
con hemolisina (anticuerpo antiglbulos rojos de cordero). Si en la primera reaccin se
forma el complejo antgenoanticuerpo, se consume o fija el complemento que hay en
el medio y al agregar los glbulos rojos sensibilizados no se produce la hemlisis
porque no hay complemento libre y los eritrocitos sedimentan al fondo del tubo o
pocillo formando un botn. En cambio, si no se forma el primer complejo, el
complemento queda libre, se une a los glbulos rojos sensibilizados y los lisa. Esta
tcnica es relativamente compleja, pues usa muchos reactivos, los que deben estar
debidamente estandarizados. Su sensibilidad y especificidad no son muy altas y han
sido superadas por otras tcnicas. Los anticuerpos fijadores del complemento duran slo
algunos aos despus de la infeccin, de modo que son indicadores de un proceso
reciente.

47

OTRAS TECNICAS SEROLOGICAS

Muchas de las mismas tcnicas descritas para deteccin de antgenos se pueden usar
para determinar anticuerpos: aglutinacin, inmunodifusin radial, ELISA, IF, RIA, etc.
Debe destacarse que algunas pueden medir IgG o IgM en forma diferencial y es una de
las formas de hacer un diagnstico rpido de una infeccin reciente. En efecto, la
respuesta inmune primaria se caracteriza por un alza de IgM, seguida de un aumento de
IgG, a diferencia de la secundaria que es casi exclusivamente por IgG. Luego, la
demostracin de IgM especfica contra un virus sugiere una infeccin reciente, hecho
que debe valorarse cuidadosamente por la existencia frecuente de falsos positivos.

Western Blot:

Este mtodo permite evidenciar la reactividad de un suero frente a antgenos

virales que han sido inmovilizadas en una matriz de nitrocelulosa. Para ello una
vez purificadas las partculas virales, se separan las protenas de acuerdo a su
peso molecular mediante electroforesis en un gel de acrilamida y las bandas se
transfieren a un papel de nitrocelulosa que sirve como soporte de la reaccin.
Las muestras de sueros a ensayar se incuban sobre el papel y los anticuerpos
especficos se unirn a las protenas virales ancladas.

Radioinmunopresipitacion (RIPA):

Esta tcnica permite detectar la unin de anticuerpos especficos presentes en el

suero del paciente dirigidos contra protenas virales que contienen un
aminocido marcado radioactivamente (35Scistena o 35Smetionina). El
complejo antgeno anticuerpo formado precipita por la adicin de protena A
sefarosa que se une a la fraccin constante de las inmunoglobulinas. Mediante
el uso de calor y agentes denaturantes se rompe el complejo, se separan los
componentes en una electroforesis y las bandas de los antgenos, precipitados
por los anticuerpos especficos, se revelan en una placa radiogrfica.

48

CAPITULO X:
ENFERMEDADES VIRALES EMERGENTES Y REEMERGENTES

Son aquellas infecciones nuevas que han aparecido en una poblacin o que han existido pero
estn aumentando rpido en incidencia o rango geogrfico. Dentro de estas se destacan las
identificadas recientemente cuyo agente infeccioso es nuevo; las conocidas antes pero silentes
en la naturaleza, que reaparecen en forma de epidemias y brotes; aquellas cuya incidencia va en
aumento en relacin con otros factores como deforestacin, sobrepoblacin, deterioro
ambiental, pobreza; y aquellas relacionadas con la resistencia a los antibiticos y medicamentos.

Los factores que influyen en la emergencia y reemergencia de las enfermedades infecciosas son
de gran complejidad. En general existe una interaccin que condiciona la emergencia o
reemergencia de una enfermedad. Estos factores pueden clasificarse en sociales y econmicos
(empobrecimiento, hambruna, guerras civiles, crecimiento no planificado de la poblacin,
migraciones, deterioro urbanstico), relativos a la atencin mdica (trasplante de rganos y
tejidos, utilizacin de drogas inmunosupresoras, uso indiscriminado de antibiticos), produccin
de alimentos (globalizacin del suministro de estos, cambios en la industria alimentaria
incluidos el empaque y la preparacin), cambios en el comportamiento del hombre (en la
conducta sexual, drogadiccin, viajes, dietas, recreacin en exteriores, la utilizacin de las
guarderas para nios, los hogares de ancianos y las clnicas de da), los cambios ambientales
(deforestacin/reforestacin, variacin en los ecosistemas hdricos, sequas e inundaciones,
calentamiento global), sistemas de salud (deterioro de los programas de salud, vigilancia
epidemiolgica inadecuada, carencia de personal bien entrenado), adaptacin y cambio de los
microorganismos (incremento en la virulencia, produccin de toxinas, desarrollo de resistencia
natural y resistencia adquirida, aparicin de grmenes como cofactores de enfermedades). En
general se considera que los de mayor importancia son los relativos a las poblaciones y el
ambiente.

Los cambios son inevitables y sus consecuencias muchas veces son impredecibles e ineludibles.
Varios aspectos merecen una vigilancia constante que debe permitir detectar los cambios locales
y sus posibles consecuencias. Entre los aspectos a vigilar se encuentran los relativos a la higiene
de los alimentos; la calidad del agua de consumo; los niveles de roedores, vectores y parsitos;
el grado de resistencia de los agentes a las drogas antimicrobianas y en general los patrones de
resistencia de los patgenos ms relevantes.

49

CAPITULO XI:
ACCION DE LOS ANTIVIRALES

Los antivirales son aquellos compuestos capaces de inhibir una o varias etapas del ciclo de
multiplicacin viral dentro de la clula husped. En la prctica se procura, para una
quimioterapia selectiva, que una droga inhiba la replicacin viral a concentraciones no txicas
para el husped. Sin embargo, el desarrollo de este tipo de drogas se encuentra obstaculizado
por la dificultad que presenta el virus al utilizar la maquinaria intracelular para su replicacin.
La clave para una quimioterapia exitosa, sera entonces, la inhibicin de la replicacin viral sin
afectar el funcionamiento de la clula husped. Y de esta forma minimizar la aparicin de
efectos adversos.

Los virus se pueden dividir en dos grandes grupos en dependencia del contenido de sus cidos
nucleicos (DNA o RNA) El anlisis de estos cidos nucleicos virales y de las protenas que
estos codifican han proporcionado informacin sobre sitios potencialmente blanco de los
antivirales.
Sntesis de cidos nucleicos virales es guiada por una enzima codificada por el virus tanto
durante la adicin de nucletidos al cido nucleico como durante la fosforilacion de dichos
nucletidos. Ejemplo de estas enzimas son la ya mencionada timidina- quinasa del herpes
simple, la DNA polimerasa DNA-dependiente del citomegalovirus y el herpes simple y la
transcriptasa reversa viral (DNA polimerasas- RNA dependiente ) del HIV y del virus de la
Hepatitis B.

La clasificacin de los antivirales se puede realizar por su mecanismo de accin o su perfil de

actividad. Todos interfieren en distintas etapas de la replicacin viral:

Son anlogos de los cidos nucleicos: zidovudina, ganciclovir, vidaravina, aciclovir.

Bloqueo de la adhesin y penetracin: amantadina, oseltamivir.

Inhibicin de la sntesis de ADN: aciclovir, foscarnet.

Inhibicin de la sntesis proteica: interferones.

Alteracin de la fase de maduracin proteica: inhibidores de proteasa, inhibidores de

glucosilacin.

50

51

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ANEXOS

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Imagen 01: Estructuracin de un virus donde muestra su cpside y los

cidos nucleicos que lo conforman.

Imagen 02: Estructura del virus con su protena gp120, donde

observamos su transcriptasa inversa que participar en los
mecanismos de accin del virus

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Imagen 03: Efecto citoptico del virus herpes VHS 1 sobre fibroblastos humanos MRC 5
(Teido con cristal violeta)
A) Fibroblastos sin el virus
B) Fibroblastos con el virus del herpes (Efecto citoptico)

Imagen 04: Mecanismo de accin de los virus

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Imagen 05: Accin de las enzimas de restriccin

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