Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure
LP10

Diagnosticul de laborator al sifilisului

Treponema pallidum
Produse patologice:
- serozitate din ancrul sifilitic (stadiul I.)
- snge (ex. serologic)

1. Examen direct microscopic

preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat forme spiralate mobile
(rotaie, flexie)

preparate colorate
o coloraie Giemsa
o coloraie negativ (Burri)
o impregnare argentic (Fontana-Tribondeau)
Morfologie: forme spiralate, spire regulate, capete drepte, dimensiuni: 6-16 /0,25m

2. Izolare prin metode biologice

treponemele patogene nu pot fi cultivate pe medii arificiale
inoculare intratesticular la iepure orhit sifilitic
3. Diagnostic indirect serologic
1. Reacii serologice clasice
- evidenierea anticorpilor antilipoidici
- antigen folosit: cardiolipina

reacia de floculare (VDRL)

latexaglutinare (RPR)

reacia de fixare a complementului (RFC)
- pot apare reacii fals pozitive
- pentru confirmare, diagnosticul se completeaz cu reacii moderne (specifice)
2. Reacii serologice moderne
-

evideniaz anticorpii antiproteici

antigene folosite antigene treponemice specifice de gen i de specie
o Reacii cu specificitate de gen:
RFC
CIEF
o Reacii cu specificitate de specie:
FTA Abs (Fluorescent Treponemal Antibody Absorbtion Test)
TPHA (reacie de hemaglutinare pasiv)
TIT (testul se imobilizare a treponemelor)
ELISA

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

Diagnosticul de laborator al leptospirozei

Leptospira interrogans
Leptospira biflexa
Produse patologice
- prima sptmn de boal:
o snge (pentru evidenierea leptospirei)
- din a doua sptmn:
o urin (recoltat dup alcalinizare)
o LCR
o snge pentru serologie
1. Examen direct microscopic
- preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat forme spiralate mobile
- preparate colorate
o coloraie Giemsa
o coloraie negativ (Burri)
o impregnare argentic (Fontana-Tribondeau)
Morfologie:
- forme spiralate, spire regulate, dese i mici, cu capetele ncurbate
- dimensiuni: 6-40 /0,25m
2. Izolare
- pe medii de cultur
o prin nsmnare pe mediul Korthoff (cu ser de iepure)
o incubare: 28-30C, pn la 60 zile
o control: din 5 n 5 zile, prin preparat nativ examinat la microscopul cu fond
ntunecat
-

pe animale de laborator
o cobai, hamster auriu, iepure

3. Diagnostic serologic
- Reacia de aglutinare liz (RAL)
o antigenul folosit: culturi vii de leptospira
o diluii succesive de ser (Ac?)
o preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat
- RFC, IF, Precipitare n gel Mancini, CIEF, ELISA, RIA

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de

Borrelia burgdorferi
Produs patologic
- snge pentru serologie
- LCR
- cpua infectant
1. Examen microscopic direct
- detectarea microscopic a spirochetelolor n sngele uman nu a putut fi realizat
- diagnosticul direct a putut fi realizat totui prin evidenierea microorganismelor n
seciuni tisulare, prin impregnare argentic.
Morfologie:
- forme spiralate, spire neregulate, deformabile n cursul micrii, cu capetele
drepte, dimensiuni: 20-30 /1m
2. Izolare
- s-au obinut colonii pe mediul Kelly modificat, la temperatura de 28-30C, n
microaerofilie
3. Diagnostic serologic
-

se evideniaz anticorpii din snge i din LCR prin imunofluorescen i reacii

ELISA, deorece dau reacii ncruciate cu Treponema pallidum, se efectueaz n
paralel i reacia TPHA.

-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

Diagnosticul de laborator al tuberculozei

Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium bovis
Produsul patologic
- n tuberculoza pulmonar sput, aspirat bronic, lichid pleural, spltur gastric
- n tuberculoza renal urina (toat cantitatea de urin emis dimineaa)
- n tuberculoza genital secreie vaginal, cervical, sperm, secreie prostatic
- n tuberculoza articular, osoas lichid sinovial, puroi
- n tuberculoza ganglionar material din puncie ganglionar, puroi
- n meningita tuberculoas LCR
1. Examen direct
- frotiu colorat Ziehl-Neelsen bacili lungi i subiri, uor ncurbai, roii (acidoalcolorezisteni), fondul preparatului fiind albastru
2. Izolare
- pe mediul Lowenstein-Jensen
- incubare la 37C, pn la 90 de zile
3. Identificare
- caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct)
o factorul cord
-

caractere de cultur
o tipul uman are o cretere eugonic, favorizat de prezena glicerinei

crete n 2-3 sptmni

colonii de tip R, neregulate, uscate, conopidiforme, ca firmiturile de
pine

coloniile se detaeaz uor de pe mediu i se emulsioneaz greu n ser
fiziologic

n mediu lichid formeaz la suprafa un vl gros ce se ntinde mai
repede
o tipul bovin are o cretere disgonic

crete mai lent, ntr-o lun

colonii de tip S, mici, netede

coloniile se detaeaz greu de pe mediu i se emulsioneaz uor n ser
fiziologic

n mediu lichid formeaz la suprafa un vl subire, friabil, cu
dezvoltare lent

inoculare la animale de experien cobaiul

-4-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

4. Antibiograma
-

se efectueaz pe mediul Lowenstein n care au fost incluse tuberculostatice

5. Diagnostic indirect
-

Intradermoreacia Mantoux
o se inoculeaz intradermic tuberculin purificat (PPD, 2 uniti)
o este o IDR alergic
o dac persoana nu a venit n contact cu germenele (nu a fost bolnav, nu a fost vaccinat),
atunci la locul inoculrii nu apare nici o reacie
o dac persoana a mai venit n contact cu germenele (a fost sau este bolnav, a fost
vaccinat), atunci la locul inoculrii se declaneaz o reacie alergic tardiv (dat de
implicarea imunitii celulare), urmat de apariia unui eritem i a unei induraii locale
o reacia se interpreteaz n funcie de mrimea i intensitatea induraiei

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de germeni din

genul Mycoplasma
M. hominis
M. pneumoniae
M. genitalium, M. orale, M. salivarium
Produsul patologic
- periaj endobronsic, lavaj bronho-alveolar
- grataj al mucoaselor
- urin
- aspirat gastric (nou-nscui)
- secreie vaginal
- snge (dg. serologic)
1. Examen direct
- n produs patologic se pot cuta antigenele bacteriene prin tehnici imunologice:
imunofluorescen direct, imunoprecipitare, reacii imunoenzimatice
2. Cultivarea
- dificil (timp 5-21 zile) - necesit medii bogate n colesterol, extract de levur,
precursori pentru sinteza de acizi nucleici
- creste lent, n atmosfer microaerofil
- Mycoplasma hominis - creste pe medii speciale cu arginin, n 1-4 zile
3. Identificare
- Caractere morfotinctoriale
o sunt bacterii foarte mici, cu dimensiuni de 300 nm motiv pentru care nu pot fi
evideniate la microscopul optic.
o nu au perete bacterian, lipsa peretelui bacterian le confer o foarte mare
plasticitate si polimorfism
-5-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

o apar ca forme filamentoase, bacilare, cocoide.

Caractere de cultur
o coloniile apar n cteva zile, sunt foarte mici, vizibile cu lupa
o coloniile au aspect de ou prjit.
Caractere biochimice
o fermentarea glucozei
o hidroliza ureei si argininei
Identificare antigenic
o se detecteaz anticorpii specifici prin

imunofluorescen,

ELISA

Imunoblot
o prezena IgM specifice sau cresterea titrului de anticorpi n seruri pereche
recoltate la 15 zile interval sunt martorii unei infecii recente.

n infeciile cauzate de micoplasmele genitale diagnosticul este exclusiv bacteriologic

si presupune izolarea pe medii.

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de germeni din

genul Chlamydia
Chlamydia trachomatis
Chlamydophyla psittaci
Chlamydophyla pneumoniae
-

bacterii mici, 0,2 m, cocoide, parazii intracelulari obligatorii cu perete rigid,

multilaminat, asemntor ca structur cu cel al bacteriilor Gram negative.

Chlamydia trachomatis
Produsul patologic
- raclajul blnd al mucoaselor pentru a recolta celule
- se examineaz:
o produs endouretral, din endocolul uterin (recoltor special burete/perie)
o raclat conjunctival
o de la nou nscut se recolteaz secreia nasofaringian
o de la cazurile de linfogranulomatoz venerian se examineaz aspiratul
ganglionar si puroiul din fistul.
1. Examen direct
- se pot aplica tehnici de imunofluorescen direct care utilizeaz anticorpi
monoclonali anti-Chlamydia trachomatis, marcai, pentru evidenierea corpusculilor
elementari.
-6-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP10

2. Cultivare
- izolarea se poate face pe culturi celulare (Mac Coy, HeLa.) sau ou de gin embrionat
- n celulele infectate se formeaz incluzii citoplasmatice, nconjurate de o matrice
bogat n glicogen - din acest motiv, incluziile chlamydiene pot fi evideniate prin
colorare cu iod (Lugol).
- coloraia Giemsa, mai frecvent utilizat permite diferenierea incluziilor tinere
alctuite din corpi reticulai care se coloreaz n albastru si a incluziilor mature n care
predomin corpii elementari care se coloreaz n rou.
3. Identificare
- cele mai sensibile metode de diagnostic sunt cele de biologie molecular:
o hibridizare
o PCR.
4. Diagnosticul serologic
o evidenierea anticorpilor formai fa de antigenele cu specificitate de gen,
specie i tip prin RFC, IF, ELISA, Western blot
o prezena anticorpilor de tip IgM sau seroconversia este semn de infecie recent
o n infeciile genitale se caut anticorpi de tip IgA a cror prezen denot o
infecie activ

Chlamydophila psittaci
Produs patologic
- pentru diagnosticul psitacozei/ornitozei
o sput
o tampon nasofaringian
o esut pulmonar
o snge diagnostic serologic
1. Examen direct
- evidenierea acizilor nucleici prin PCR
2. Diagnostic serologic
- se determin prezena anticorpilor prin IF

Chlamydophila pneumoniae
Produs patologic:
- sput, lavaj bronho-alveolar
- snge - serologie
Detectarea acizilor nucleici prin PCR - diagnostic rapid i specific.
Izolarea este dificil, nu se practic n diagnosticul de rutin.
Diagnosticul se bazeaz pe serologie, evidenierea anticorpilor prin IF indirect sau ELISA.
Seroconversia apare la 3 sptmni de la debutul bolii.
-7-