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Principe
Installer
Le test
Rsultats
Maintenance
GeneXpert MTB/RIF
1. principe
Amplification en temps rel
Dtection ADN de complexe M. tuberculosis
Dtection rsistance la Rifampicine
GeneXpert MTB/RIF
81 pb du gne rpoB
rgion dterminant la rsistance la rifampicine
Ampifications semi-niches
5 sondes : squence sauvage
1 sonde tmoin de la raction
GeneXpert
Molecular Beacon = balise molculaire
Balise molculaire
1.
Balise molculaire
2.
Balise molculaire
3.
Balise molculaire
ADN cible
Hybridation
Signal lumineux
GeneXpert
6 fluorochromes dtects simultanment
Molecular
Beacon
Pas de fluorescence
Excitation
Cible
Fluorescence
GeneXpert : Fluorescence
Canal Excitation
optique (nm)
1
2
3
4
5
6
Emission
(nm)
Couleurs
Quantits de dpart
identiques
Dbuts de cycles identiques
Quantits de dpart
diffrentes
Dbuts de cycles dcals
GeneXpert MTB/RIF
Dbut de cycles Ct
GeneXpert MTB/RIF
Les mutants reconnus par l une des
sondes ont un delta Ct > 4,5
GeneXpert MTB/RIF
Rsultat semi-quantitatif
Rsultat
MTB
Elev
Moyen
Bas
Trs bas
Valeurs de
Ct
< 16
16 - 22
22 - 28
> 28
GeneXpert
La cartouche
11 chambres
ractionnelles
Sonication
Filtre de capture
Mlange
Amplification/dtection
Tube PCR
Corps de la valve
Cartouche GeneXpert
11 chambres ractionnelles
Ractifs
Progression
de
l chantillon
GeneXpert
La cartouche
11 chambres
ractionnelles
Pas de
contact
physique
entre
l chantillon
et le GX
Tube PCR
Corps de la valve
Cartouche GeneXpert
I-CORE
Conducteur
de la valve
Pointe ultrasons
Pointe
ultrasons
Cale conductrice
de la valve,
solidaire de la
cartouche
Bande
optique pour
mesurer la
position
Module GeneXpert
Moteur de la Seringue
Carte mre
Tube PCR
Porte du module
Moteur de la valve conductrice
Chambre du module
Tube PCR
Conducteur
de la valve
Chambre du module
Piston
conducteur
de la valve
I-CORE
insertion du
tube
Cale
conductrice de
la valve
Pointe ultrasons
Cartouche GeneXpert
Balles de
rtention
Bille de prparation de l chantillon
Bille d enzyme et ractifs :
Taq, dNTPs, Tampon, BSA, Mg Cl2, sels, excipients
Corps de la valve
Rservoir
de la
seringue
Billes de verre
Filtre
Ultrasons
Appareil de chauffage
Cartouche
Blocs
optiques
dans le I-core
Tube ractionnel
Contrle de qualit
Contrle du traitement de l chantillon SPC "
Contrle de qualit
Contrle de la sonde"
Avant de dmarrer la raction PCR, !
le GeneXpert Dx System mesure :!
"
- Le signal de fluorescence partir des sondes pour
contrler la rhydratation des billes de ractifs "
- Le remplissage des tubes de raction "
- L'intgrit de la sonde et la stabilit du fluorochrome "
"
Le contrle de la sonde russit s'il rpond !
aux critres d'acceptation attribus.!
Algorithm
Probe Check
Pass
Test
Stopped
Fail
3 probes Pos
Error
Yes
No
NB probes Pos
All
positives
No
Value
SPC
1 Neg or
more Neg
Pos
Negative
MTB Detected
MTB Detected
Non Value
Invalid
GeneXpert MTB/RIF
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Principe
Installer
Le test
Rsultats
Maintenance
Installer GeneXpert
Ordinateur
Systme GeneXpert
Installer GeneXpert
Temprature < 35C
Ventiler la pice
Pas coll la fentre (rideau)
Pas de flux direct dessus
Niveau horizontal
Pas de paillasse avec centrifugeuse
Installer GeneXpert
GeneXpert
de dos
Ordinateur
de dos
Cable eternet
Power
Surge protector
GeneXpert MTB/RIF
Avant de commencer
Charger le CD Xpert MTB/RIF
Installer GeneXpert
Dmarrer le logiciel
1. Ouvrir la session
Mot de passe cphd
2. Allumer le GeneXpert
Double-click sur bouton
GeneXpert DX software
Vrifier modules
Avant de commencer
Le nom du test apparat sur la liste active
Avant de commencer
Avez-vous la bonne dfinition de tests ?
Nommer le systme
Remplacer GeneXpert system
par le nom du lieu d installation par ex
Yaound
GeneXpert MTB/RIF
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Principe
Installer
Le test
Rsultats
Maintenance
GeneXpert MTB/RIF
Ractif
Pipette et
cartouche
Module
GeneXpert MTB/RIF
Matriel non fourni
Echantillon
> 1mL
Sans dbris alimentaire
Conservation < 10 j 4C, < 3 j 4-28C
GeneXpert MTB/RIF
Ractif = isopropanol / soude
Sous hotte
Verser 2 volumes pour
1 volume chantillon
(crachat direct)
GeneXpert MTB/RIF
Ractif = isopropanol / soude
Sous hotte
Verser 1,5 mL pour
500 L culot
dcontamin
(Kubica)
GeneXpert MTB/RIF
Agiter le mlange
Laisser reposer 10 mn
GeneXpert MTB/RIF
Agiter de nouveau
Laisser reposer 5 mn
GeneXpert MTB/RIF
Sur la paillasse, pendant les
5mn d attente, dballer la
cartouche en faisant attention
la partie PCR
GeneXpert MTB/RIF
Retirer de son emballage la pipette plastique fournie
Prlever 2mL d chantillon liqufi
ou 2mL de culot dcontamin - avec le ractif -
GeneXpert MTB/RIF
Dposer 2 mL dans la cartouche
GeneXpert MTB/RIF
Create test
GeneXpert MTB/RIF
Scan cartridge bar code
GeneXpert MTB/RIF
Scanner le code barres de la cartouche
GeneXpert MTB/RIF
Entrer le nom du patient
Module slectionn
GeneXpert MTB/RIF
Poser la cartouche dans le module
dont le voyant vert clignote
et pousser la porte.
Le test dmarre
et le voyant vert cesse de clignoter.
Dure : 1h52
Le voyant s teint
quand le test est termin.
GeneXpert MTB/RIF
Aprs 1h52, le test est termin
Prcautions
Ne pas ouvrir la cartouche l avance
N'ouvrir le couvercle de la cartouche que pour
ajouter un chantillon
Ne pas utiliser une cartouche qui est tombe
ou qui a t agite aprs avoir ajout
l chantillon
Ne pas utiliser une cartouche humide ou
casse ( tube ractionnel )
Ne pas rutiliser les cartouches
Limites GeneXpert
Performances non dmontres
Echantillons non respiratoires ex. sang, LCR, selles ou urine
Echantillons traits par des mthodes autres que la mthode de
Kubica
GeneXpert MTB/RIF
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Principe
Installer
Le test
Rsultats
Maintenance
Fentre de rsultats
Dtection
ADN
complexe
M. tuberculosis
Pas de
mutation
associe la
rsistance
la rifampicine
Fentre de rsultats
Dtection
ADN
complexe
M. tuberculosis,
en faible
quantit,
et mutation
associe la
rsistance
la rifampicine
Fentre de rsultats
Ngatif
pour la
tuberculose
Rsultats invalides
Probe Check Failure 5006,5007,5008 :
Echec du contrle de la sonde
(volume incorrect, viscosit)
Syringue Pressure too high 2008 :
(Echantillon trop visqueux)
SPC NO RESULT :
Echec du contrle damplification
(inhibiteur : sang, aliments)
Pas de rsultat
MTB-NO RESULT :
Echec du rsultat MTB (coupure courant)
Heater Failure 3074, 3075 :
Vrifier ventilation l arrire du GX
Voir un rsultat
View Results
Editer un rsultat
View results
Report
Data Archiver
management
un rsultat
Archive test
Slectionner les runs
Puis OK
Max 4000
.gxx
GeneXpert MTB/RIF
Dtection de M. tuberculosis
Prlvements pulmonaires
Sensibilit : ED+ 98% ED- 75%
Spcificit : 98,3%
GeneXpert MTB/RIF
Dtection de la rsistance la Rifampicine
Sensibilit 96,7%
Spcificit 98,6%
GeneXpert MTB/RIF
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Principe
Installer
Le test
Rsultats
Maintenance
Maintenance
Quotidienne
Enlever les cartouches utilises
Nettoyer le plan de travail autour du GX
Hebdomadaire
Redmarrer l ordinateur et le GX
Dsinfecter l intrieur de la chambre de la cartouche
(Javel 10% puis Ethanol 70%)
Maintenance
Mensuelle
Dsinfecter les surfaces du GX
Dsinfecter le piston
Archiver les rsultats et les sauvegarder sur un CD
Calibration
Calibrer tous les ans ou tous les 2000 tests
Soit changes de modules;
Soit cartouche remote calibration
Tlphone
hotline
Inscrit sur le bord de lappareil
+33.5.63.82.53.19
Lundi - Vendredi 8h-18h
email : support@cepheideurope.fr
Tlphone
hotline
Nom du systme
N srie
Message derreur
Ractif - N lot
Runs impliqus
Descrition de lincident