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FACULTAD DE MEDICINA
GUIA DE
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
2014
DOCENTES DE LA CTEDRA:
NDICE
INTRODUCCIN. 4
PRCTICA N 1
Bioseguridad.
PRCTICA N 2
Coloraciones...11
PRACTICA No.3
Medios de cultivos....20
PRACTICA No. 4
Antibiograma..32
PRACTICA NO. 5
Identificacin de cocos Gram positivos.....38
PRACTICA No. 6
Orina.46
PRCTICA No. 7
Identificacin bioqumica de bacilos Gram negativos...52
PRCTICA No. 8 (PRIMERA PARTE)
Coprolgico y coproparasitario.......57
PRCTICA No. 8 (SEGUNDA PARTE)
Examenes en heces fecales..66
PRCTICA No. 9
Esputo.70
PRCTICA No. 10
Malaria o paludismo....76
PRCTICA No. 11
Infecciones de transmisin sexual.....79
PRACTICA No. 12
Tcnicas bsicas de inmunologa......86
PRCTICA No. 13
Micosis....91
BIBLIOGRAFA.....96
INTRODUCCIN
El diagnstico de las infecciones y el estudio de la Microbiologa Mdica se basan fundamentalmente
en mtodos de laboratorio. Mediante estos mtodos se hicieron precisamente los ms grandes
descubrimientos en Microbiologa, Gentica e Inmunologa. Los estudiantes de Medicina deben, por
tanto estar familiarizados con stos y por ello en la Facultad de Medicina de la PUCE se incluye una
Unidad destinada a cumplir con este paso importantsimo en la formacin de sus alumnos. La presente
gua fue realizada pensando sobre todo en el/la estudiante de medicina de cuarto nivel, que requiere
complementar el estudio terico de la Microbiologa Mdica con la observacin directa y, en muchos
casos, de la puesta en prctica de los mtodos utilizados habitualmente en esta ciencia. La
metodologa expuesta en cada una de las prcticas es sencilla y fcil de ejecutar, pero no por ello deja
de ser suficiente, en el sentido de que son pasos que se siguen en la rutina diaria del laboratorio. Al
inicio de cada prctica se hace una explicacin acerca de la importancia y aplicabilidad del mtodo, su
correlacin clnica diversos aspectos de inters mdico. Luego se entra directamente en la parte
prctica y al final se exponen algunas preguntas de consulta para estimular en el estudiante el afn de
investigacin en esta apasionante rama de la Medicina. El empezar hablando sobre Bioseguridad tiene
un doble objetivo: que los estudiantes aprendan ros protocolos de manejo muestras biolgicas,
potencialmente infecciosas, y de los materiales de laboratorio; y, por otro lado, inducir en ellos la
formacin de hbitos y actitudes acordes con su condicin de futuro miembros del equipo de salud.
Muchos de los mtodos expuestos a continuacin son de uso diario, no solo en los laboratorios, sino
tambin en los consultorios mdicos. La realizacin de un examen en fresco y una tincin bsica de una
muestra de una secrecin corporal, es rpida y sencilla y con el conocimiento bsico adquirido en este
curso se convertir en una herramienta muy til para ayuda en el diagnostico y en el tratamiento de las
infecciones.
Dra. Celia Bowen Fernndez
Dr. Francisco Prez Pazmio
PRCTICA N 1
BIOSEGURIDAD
CONTEXTUALIZACIN
Observa el video en el siguiente link https://www.youtube.com/watch?v=tXt7Zs5GBMw e
imagina los riesgos a los que nos exponemos cuando no cumplimos las normas de
bioseguridad.
CONCEPTUALIZACIN
La
seguridad
en
el
laboratorio
se
puede
definir
como:
"La situacin carente de riesgo o con un riesgo limitado, que resulta del cumplimiento de un
conjunto de normas y prcticas para lograr este fin"
1. Medidas generales de seguridad
Barrera
La seguridad como prevencin viene definida por una serie de barreras. Si estas fallan y
ocure un accidente, es preciso efectuar un tratamiento precoz y adecuado para evitar un
dao
mayor
y
posteriormente
hacer
un
diagnstico
del
fallo.
Las barreras se rompen por fallos humanos y/o errores mecnicos.
Barreras primarias: Las localizadas en tomo al origen del riesgo, como son: - Contenedores,
equipo e instrumental correcto y "buena prctica (la tcnica de trabajo ordenada v rigurosa es
probablemente la mejor proteccin que existe) - Uso de desinfectantes y cabinas de
seguridad.
Barreras terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio: Evitan que los riesgos de
laboratorio puedan repercutir en la comunidad.
Ningn material txico o infeccioso abandone el laboratorio.
Acceso restringido a determinadas reas de laboratorio.
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- Agentes esterelizantes: destruyen toda forma de vida incluidas las esporas. Por ejemplo: los
sistemas de autoclave, calor seco, xido de etileno.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
Actividad 1: Video de Bioseguridad Tarea
Estimados estudiantes, por favor subir un video a la plataforma Moodle con las
respectivas fotos sobre el cumplimiento de las normas de Bioseguridad de cada una de las
prcticas realizadas, as como tambin cuando ests no son cumplidas. No olvidar colocar las
reflexiones debajo de cada foto respecto al aprendizaje obtenido.
Nota: Este portafolio ser entregado al finalizar las prcticas del primer parcial el cual debe
tener una duracin de aproximadamente 4 a 5 minutos
Actividad 2: Responda al siguiente cuestionario:
1. Definicin de seguridad en el laboratorio.
2. Mencione cinco ejemplos (c/u) de barreras primarias, secundarias y terciarias.
3. Cul es la diferencia entre desinfeccin, descontaminacin y esterilizacin? (ejemplo de
c/u).
4. En qu nivel de enseanza se ubica un laboratorio bsico de enseanza y qu equipos
de seguridad necesita? (Revisar Manual de Bioseguridad OMS)
5. Qu requisitos necesita un laboratorio bsico de enseanza?
6. Cul es el smbolo de peligro biolgico?
7. Cmo debe protegerse el personal de laboratorio?
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PRCTICA N 2
COLORACIONES
OBJETIVOS
CONTEXTUALIZACIN
La coloracin Gram debe su nombre al bacterilogo dans Chistian Gram en 1884. La
tincin de Gram aporta dos ideas bsicas para la definicin de las bacterias: el color que
adquieren tras la tincin y la forma que presentan las clulas bacterianas. En lo relativo a
la coloracin tenemos:
- Gram positivos color azul-violeta
- Gram negativos color rojo-rosado
CONCEPTUALIZACIN
Coloracin Gram
Las bacterias se clasifican en Gram positivas y en Gram negativas de acuerdo a los
componentes qumicos de su pared celular. Las Gram positivas poseen una pared
celular poco permeable y resisten la decoloracin. Las Gram negativas poseen una
pared celular ms permeable, se decoloran y luego adquieren la coloracin de la
safranina.
La coloracin Gram consiste en una tcnica de tincin que utiliza 4 componentes: un
colorante bsico (cristal violeta), un mordiente (lugol), un decolorante (alcohol
cetona) y un colorante de contraste (safranina).
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Bacilos Gram-negativos
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Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, y Campylobacter sp, como C.
jejuni
a. Realizacin de la extensln
Producto lquido: Depositar en el centro de un portaobjetos una pequea cantidad del
producto a examinar y extenderlo con la ayuda de un asa de platino o una pipeta de
modo que la extensin sea lo ms fina y homognea posible. Un producto denso puede
ser diluido antes ligeramente.
Cultivo en medio slido: depositar en un portaobjetos una gotita de agua solucin
salina estril y disociar en ella una pequea cantidad de cultivo. Extender para obtener
un frotis fino y homogneo.
Sangre: hacer un frotis como para un examen hematolgico, depositar sobre el primer
tercio de un portaobjetos limpio y desengrasado una pequea gotita de sangre. Hacer
contactar con la misma un portaobjetos de bordes esmerilados, que se inclinar 45 C.
La sangre alcanza por capilaridad todo el borde del portaobjetos que se empujar hacia
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la parte libre del primer portaobjetos que contenga la gota de sangre, hacindolo de un
solo movimiento, sin detener ni volver atrs.
rganos: seccionar un pequeo fragmento. Sujetarlo con una pinza, secar el trozo
seccionado sobre un papel secante, haciendo seguidamente con sta porcin una
extensin o una serie de aposiciones, sin apoyar demasiado, de manera que se
obtengan preparaciones finas.
b. Secado
Dejar secar por s solo el frotis. Se puede acelerar la desecacin calentando ligeramente con
un mechero Bunsen, pero sin calentar jams brutalmente.
c. Fijacin
Cuando la extensin est bien seca, proceder a la fijacin. Slo algunas
coloraciones
especiales no deben ir precedidas de una fijacin. l motivo de la misma es hacer adherir el
frotis al portaobjetos y fijar la morfologa de las bacterias, clulas, por coagulacin rpida de
las protenas.
Puede ser por:
Alcohol flameado: Es la tcnica ms general. Verter sobre la preparacin algunas gotas
de alcohol absoluto. Despus de algunos segundos de contacto, escurrir lo mejor
posible e inflamar despus el alcohol restante.
Por el calor: Aplastar la llama de un mechero Bunsen 2 a 3 veces contra la parte
inferior de la preparacin, que sujetaremos con unas pinzas. Este mtodo debe
rechazarse para los productos patolgicos puesto que altera la morfologa de los
elementos celulares.
Por el alcohol en fro: Recubrir la preparacin con alcohol etlico absoluto o metlico.
Dejar actuar 1 o 2 minutos. Escurrir y dejar secar.
Por el cido smico: Ciertas coloraciones necesitan una fijacin previa por el cido
smico en solucin acuosa al 1 por 100. Exponer la extensin hmeda a los vapores de
cido smico durante algunas decenas de segundos. Fijar seguidamente con alcohol
flameado o con alcohol metlico.
Examen de las preparaciones teidas
Las preparaciones coloreadas se examinan con el objetivo de inmersin (100x) sin usar
cubreobjetos.
Depositar sobre el frotis una gota de un aceite especial (aceite de inmersin).
Descender primero el objetivo de 10 x, una vez enfocado pasar al lente de 100 x
sumergindolo en la gota, comprobar el enfoque microscpico con el tornillo
micromtnco.
CUADRO GENERAL SOBRE LA RECOLECCIN Y EL MANEJO DE LAS MUESTRAS
MUESTRA
Lquidos corporales:
amnitico, abdominal,
asctico, biliar, articular,
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pericrdico, pleural
Odo externo
Absceso superficial
Absceso profundo
Catteres
IV,
clavos,
vlvulas prostticas
Puncin suprapbica
Tracto
Crvix
genital
femenino:
Hisopado rectal
Cultivo de materia fecal
Es una tcnica de tincin diferencial que se basa en que las paredes celulares de
ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena
larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos.
Uso:
Para
identificacin
de
bacilo
tuberculoso
(Acido
Desventaja: Emisin de vapores fenlicos por el calentamiento.
alcohol
resistente)
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
Experimentacin
1. Durante la clase los estudiantes deben aprender a manejar el mechero de Bunsen y el
uso de las asa microbiolgicas.
2. Realizarn frotis de muestras biolgicas lquidas, slidas y de esputo.
3. Efectuarn tinciones como la coloracin Gram (dos placas por grupo) y BAAR (una
placa por grupo). Por favor traer mascarilla.
4. Realizar el portafolio de la prctica y subirlo a la plataforma Moodle.
RESPONDER AL CUESTIONARIO:
1. Cules son los reactivos y tiempos empleados para la coloracin Gram y BAAR?
2. Porqu la Escherichia coli puede adquirir el color de la safranina?De qu est
compuesta su pared celular?. Explique brevemente.
3. Porqu el Staphylococcus aureus adquiere el color del cristal violeta y no el de la
safranina? De qu est compuesta su pared celular? Explique brevemente.
4. Porqu el bacilo de Koch se tie con la fucsina fenicada y no con el azul de metileno?
De qu est compuesta su pared celular?. Explique brevemente.
5. Cmo realiza una placa con frotis para coloracin Gram de una muestra de orina y de
un agar sangre?
6. Cmo realiza una placa con frotis para coloracin BAAR de una muestra de esputo y
de orina?
7. Cual es el mtodo para observar las placas teidas con Gram o BAAR en el
microscopio?
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PRACTICA No.3
MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS:
Conocer la importancia y los diferentes medios de cultivo para el crecimiento bacteriano
Realizar tomas de muestras y siembras en medios de cultivo como agar sangre
Observacin en los medios de cultivo las diferentes colonias bacterianas en crecimiento
y realizacin de coloracin Gram
CONTEXTUALIZACIN
Excepto algunas raras excepciones, todo examen bacteriolgico incluye el cultivo del producto
a examinar. El cultivo bacteriano tiene tres propsitos principales:
Facilitar el crecimiento y aislamiento de todas las bacterias presentes en una infeccin.
Determinar cules bacterias que se desarrollan es ms probable que sean la causa de
la infeccin y cules son contaminantes probables o colonizadores.
Obtener desarrollo suficiente de las bacterias relevantes en clnica para permitir su
identificacin y caracterizacin.
Necesario para los estudios complementarios como los de la sensibilidad de las
bacteriuas a los distintos antibiticos.
El cultivo es el proceso de crecimiento de microorganismos mediante la toma de bacterias de
un sitio de infeccin (el ambiente in vivo) por mtodos de recoleccin de muestra y
crecimiento en un ambiente artificial en el laboratorio (el ambiente in vitro).
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO BACTERIANO
Las bacterias pueden ser divididas en auttrofas y hetertrofas. Las primeras comprenden las
bacterias del suelo y el agua que obtienen carbono y nitrgeno de la atmsfera y de la materia
inorgnica simple. Las bacterias hetertrofas reguieren compuestos orgnicos ms complejos
como fuente de carbono y nitrgeno, as como proteinas o sus derivados, tambin requieren
carbohidratos y grasas. Este ltimo grupo de organismos es el ms importante en
bacteriologa mdica.
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facilidad en medios cidos (pH 5) mientras que el medio especial para el crecimiento del
Vibrio cholerae debe ser marcadamente alcalino (pH 9.6)
Semislidos: tiles para investigar movilidad y conservar las bacterias por perodos largos,
contienen de 1-1 5% de agar
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Los medios selectivos contienen uno o ms agentes que inhiben todos los microorganismos
excepto los que son buscados. En otras palabras, estos medios seleccionan el crecimiento de
ciertas bacterias e inhiben el de otras. Los agentes inhibidores utilizados para este propsito
son colorantes, sales biliares, alcoholes, cidos y antibiticos. Un ejemplo es el agar con
alcohol feniletlico, que inhibe el desarrollo de bacilos Gram negativos aerobios y anaerobios
facultativos, y permite el crecimiento de cocos Gram positivos.
Los medios diferenciales emplean un factor (o factores) que permite que las colonias de una
especie o tipo bacteriano exhiban ciertas caractersticas metablicas o de cultivos que pueden
utilizarse para diferenciarlas de otras bacterias que crecen en el mismo agar placa.
Agar chocolate
Componentes/comentarios
Objetivo principal
Agar base nutritivo. El feniletanol Aislamiento selectivo de
inhibe
el
crecimiento
de cocos
grampositivos
y
microorganismos gramnegativos
bacilos
anaerobios
gramnegativos
Medio extremadamente nutritivo , Cultivos de especies de
preparado con adicin de sangre de Haemophilus y especies
cordero calentada sobre 80C hasta patgenas de Neisseria
que el medio se torne parduzco,
para liberar la hemoglobina y
entregar al medio todos los factores
de crecimiento
Agar
Columbia Agar base Columbia con 10 mg de
colistina-cido
colistina por litro, 15 mg de cido
nalidxico (CNA)
nalidxico por litro y sangre de
carnero al 5%
Agar con bilis y esculina Agar base nutritivo con citrato
frrico. La hidrlisis de la esculina
por los estreptococos del grupo D le
otorga un color castao al medio; el
desoxicolato de
sodio
inhibe
muchas bacterias
Agar eosina azul de Base de peptona con lactosa y
metileno (EMB)
sacarosa, eosina y azul de metileno
que actan como indicadores
Aislamiento slectivo
cocos grampositivos
de
Aislamiento diferencial e
identificacin presuntiva de
estreptococos grupo D y
enterecocos
Aislamiento y diferenciacin
de
bacilos
entricos
fermentadores
y
no
fermentadores de lactosa
Agar Hektoen entrico Base de peptona con sales biliares, Medio
diferencial
y
(HE)
lactosa, sacarosa, salicina y citrato selectivo,
para
el
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A menudo se reciben torundas para cultivo; en vez de recogerse material con el asa, deben
emplearse las torundas corno material primario de inoculacin a partir del cual se distribuye
con el asa en la forma descrita ms adelante. Deben ser subrayados ciertos puntos de
importancia sobre el uso del mtodo de placas; por ejemplo, las placas deben estar
preferentemente secas antes de usarse, para que los microorganismos no se extiendan,
impidiendo la formacin de colonias aisladas.
Medios inclinados: Este tipo de cultivo es empleado principalmente para resembrar cepas
aisladas, sea para identificacin ulterior o para base de cultivo. Se requiere prctica y siempre
debe hacerse cerca del mechero de Bunsen; el cuello del tubo o del frasco debe ser flameado
antes de recubrirlo o de volver a colocar el tapn de algodn (mtodo que se usar en la
prctica No. 7 Pruebas bioqumicas).
Cultivos por agitacin: Este medio de cultivo es de empleo particular en el aislamiento de
anaerobios esporulados.
Cultivos por picadura: En este mtodo de material para investigacin es colocado en un
alambre recto e introducido al medio. Debe tenerse cuidado en hacer que el trayecto de la
salida sea el mismo que el de entrada. Ciertos microorganismos tienen un aspecto
caracterstico en el cultivo hendido. El mtodo puede ser tambin empleado para conservar
los cultivos patrn y para comprobar la licuefaccin de la gelatina (mtodo que se usar en la
prctica No. 7 Pruebas bioqumicas).
Cultivos lquidos: Al inocular un medio lquido como el agua de peptona o el caldo con
tioglicolato, el tubo se inclina y el material se extrae el asa por frotamiento contra la pared del
tubo. Cuando ste se endereza, el material se encuentra bajo la superficie del medio.
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tales medios mnimos de agar y luego se sellan con cera para preservarlos a las temperaturas
de refrigeracin. Una varilla de agar del cultivo se puede recubrir con parafina lquida y
almacenar durante aos, se ha aplicado esta tcnica para la preservacin de los hongos. A
menudo se almacenan las bacterias esporuladas en suelo estril. En primer trmino se seca
el suelo a la temperatura del ambiente y luego se almacena a la temperatura de refrigeracin.
Desecacin: Algunas bacterias se preservan por desecacin. Se colocan grandes
concentraciones de la muestra en discos de cera u otro material adecuado y luego se pasan a
un desecador. Se elimina el aire en el desecador mediante una bomba de vaco. Despus del
secado, se pueden almacenar los discos de cera en recipientes estriles a 0-5C.
Congelacin: La mayora de las Bacterias pueden ser congeladas en varios tipos, de medios,
se congelan rpidamehte las muestras a temperaturas de -20 a 30C para mantener la mayor
parte de las clulas en un estado viable. Se han empleado con xito temperaturas ultrabajas
utilizando el hidrgeno lquido, a fin de almacenar y preservar una amplia variedad de clulas,
incluso hongos, virus, y hemates.
Congelacin-desecacin (liofilizacin): La formacin de cristales de hielo producidos
durante el proceso de congelacin pueden daar las clulas. Si se congela en primer trmino
la muestra en un bao que contiene hielo seco y acetona o alguna otra mezcla, se puede
extraer el agua que contiene por sublimacin y prevenir as ese inconveniente. Se emplea
comnmente esta tcnica para preservar cultivos y para remitirlos por correo
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
EXPERIMENTACIN:
1. Los estudiantes procedern a realizar siembras en agar sangre cuyos resultados se
observarn en la siguiente semana.
2. Se evaluar el portafolio de coloraciones
3. Realizar el portafolio de la prctica e incluir los resultados, reflexiones y el cuestionario en el
mismo.
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7. El
agar
MacConkey
se
considera
un
medio..porque permite reconocer las
bacterias que fermentan o no la lactosa, tambin es considerado un medio selectivo ya
que contiene y violeta cristal que
inhiben el crecimiento de bacterias no entricas.
8. Cmo se llama el medio de cultivo que sirve para el asilamiento selectivo de cocos
Gram positivos y bacilos anaerobios Gram negativos, inhibiendo el crecimiento de
bacilos Gram negativos?
9. Escriba el nombre de un medio de cultivo que permita el crecimiento de especies de
Neisseria (gonorrhoeae y N. meningitis).
10. Escriba el nombre de un medio de cultivo que reducen el potencial rdox favoreciendo
el crecimiento de anaerobios.
11. Mencione los criterios utilizados con frecuencia para caracterizar el crecimiento
bacteriano.
12. Mencione los 5 factores determinantes para la preparacin de un medo de cultivo.
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PRACTICA No. 4
ANTIBIOGRAMA
OBJETIVOS:
Conocer y realizar el mtodo convencional de difusin en discos
Interpretar la sensibilidad y resistencia que presentan diferentes bacterias a los
antibiticos
CONTEXTUALIZACIN
Las enfermedades infecciosas siempre han sido un problema grave para el hombre, el
hallazgo de sustancias eficaces que pudieran ser utilizadas en el tratamiento de estas
enfermedades se remonta al siglo XVll en el que ya se emplearon sustancias qumicas como
la quinina para la malaria.
Hacia el ao de 1900, el trabajo de Paul Ehrlich marca el inicio de la quimioterapia como
ciencia pues este cientfico establece los principios de la toxicidad selectiva, el desarrollo de la
resistencia a los medicamentos y el uso de la terapia combinada para combatir dicha
resistencia.
Antimicrobiano o antibitico es una sustancia producida por microorganimos o de manera
sinttica, que tiene la capacidad de actuar sobre otros microorganismos inhibindolos o
destruyndolos.
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.
La seleccin de los agente antimicrobianos se denominan batera de antimicrobianos, las
decisiones finales con respecto al contenido de la batera deben ser tomadas por el
laboratorista, el personal mdico (en particular de los especialistas en enfermedades
infecciosas) y de la farmacia.
El siguiente paso es incubar a 35C en un ambiente de aerobiosis sin CO2 ya que puede
alterar el pH de la superficie y consecuentemente el desarrollo de los microorganismos
inoculados, excepto para Haemophilus influenzae y Neisseria gonorrhoeae cuyas variaciones
de estandanzacin fueron determinadas bajo ese parmetro, chequear adecuadamente la
temperatura de la incubadora ya que si sobrepasa la temperatura ideal puede afectar la
prueba.
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El NCCLS publica tablas actualizadas que enumeran los posibles agentes antimicrobianos a
incluir en las bateras de prueba contra determinados microorganismos o grupos de
microorganismos.
DISCOS DE ANTIBITICOS USADOS PARA GRMENES GRAM POSITIVOS Y GRAM
NEGATIVOS TOMANDO EN CUENTA AL PACIENTE AMBULATORI
GRAM POSITIVOS
Oxacilina (ox)
Eritromicina (E)
Clindamicina (cc)
Cefoxitin (fox)
Sulfas (sxt)
Ciprofloxacina (cip)
Vancomicina (va)
GRAM NEGATIVOS
Ampicilina (am)
Cefuroxima (cxm)
Ampicilina + sulbactam (sam)
Gentamicina (gm)
Norfloxacina (nor)
Nitrofurantona (fm)
Sulfas (sxt)
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
EXPERIMENTACIN
1. Continuando con la prctica anterior, cada estudiante realizar la observacin de las
colonias sembradas en agar sangre y realizar la coloracin Gram de dos
colonias diferentes, observar en el microscopio y anotar los resultados de todos los del
equipo de trabajo en un cuadro para el informe pendiente.
2. Se realizar el antibiograma y su respectiva interpretacin. Trabajo grupal.
RESPONDA AL SIGUIENTE CUESTIONARIO:
1. Cmo se llama la tcnica empleada en clases para medicin de sensibilidad de
antimicrobianos?
2. Para qu sirve el caldo de tripticasa soya en el antibiograma?Qu tipo de medio es:
enriquecimiento, universal, selectivo, etc.?
3. Se puede realizar el antibiograma nicamente con el resultado Gram? Qu falta
realizar antes?
4. Se compara el patrn de turbidez Mac Farland con el cultivo realizado en el medio de
Muller Hinton o con el caldo de cultivo TSB?
5. Qu debe hacer cuando la turbidez supera al patrn Mac Farland?
6. A qu temperatura se debe incubar el cultivo lquido (TSB) y el slido (Muller Hinton?
Porqu?
7. Por qu razn se debe obviar el crecimiento de bacterias como Haemophilus
influenzae, Neisseria gonorrhoeae y Streptococcus pneumoniae en el caldo de TSB?
Qu debe hacer?
8. A qu distancia se deben poner los discos de antibiticos en el medio de Muller
Hinton?Porqu?
9. Se puede utilizar Vancomicina en un antibiograma para la Escherichia coli? Porqu?
10. Porqu razn la Nitrofurantona no debe ser utilizada para las vas respiratorias?
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11. Podemos utilizar la Ampicilina para bacterias cuyo resultado Gram es: cocos Gram
positivos dispuestos en cadena?
12. Cmo se llama el mtodo convencional empleado para realizar el antibiograma
empleado en la prctica de nuestra clase?
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PRACTICA NO. 5
IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM POSITIVOS
OBJETIVOS:
Conocer los diferentes fundamentos de las pruebas empleadas para la identificacin
Realizar los diferentes mtodos de identificacin de las familias y gneros de cocos
Gram positivos
Reconocer algunas especies mediante las tcnicas de identificacin empledas
FAMI LIA Micrococcaceae
Son cocos gram positivos, aparecen solos, en pares, tetradas, paquetes de ocho y en
racimos. No mtiles, no esporulados, catalasa (+), reducen nitratos a nitritos.
Las colonias son redondas, lustrosas, blancas aunque tambin existen especies pigmentadas.
Forman esta familia especies Saprfitas, parsitas y patgenas que se encuentran
distribuidas ampliamente en la naturaleza
Los grieros Micrococcus y Staphylococcus forman parte de la flora humana y de animales
pero tambin existen ciertas especies patgenas para el hombre.
El gneio Staphylococcus contiene tres especies de importancia clnica:
Staphylococcus aureus: (facultativo anaerobio)
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Puede infectar cualquier parte del cuerpo humano, es la causa ms comn de infecciones
supurativas, en casos severos puede producir septicemias, es frecuentemente el agente
causal de la ostiomielitis.
Cepas de S. aureus cuando crecen en altas concentraciones de CO2 (30%) pueden producir
una enterotoxina termoestable, causante de envenenamiento por alimentos.
Otras cepas producen una toxina epidermoltica (exfoliativa) causante del sndrome de piel
escaldada.
Staphylococcus epidermidis:
Se lo encuentra en el aire y en la piel. Normalmente no patgeno, pero puede causar
infecciones secundarias de la piel, heridas posquirurgicas y endocarditis posoperatorias.
Staohylococcus saprofiticus:
Se lo encuentra en el aire, polvo y productos animales. Generalmente considerados no
patgenos, pero en ocasiones puede producir infecciones urinarias.
Micrococos: (estrictos aerobios)
Forman parte de la flora normal de la piel y mucosas.
Las coloirias son blancas y chiclosas.
Peptococcus:
Son anaerobios estrictos se los considera los Estafilococos anaerbicos, se los encuentra en
cultivos de heridas profundas.
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FAMILlA Streptococcaceae
Son cocos gram positivos que se dividen en un solo plano, formando pares o cadenas,
aerobios y anaerobios facultativos. No producen esporas, no son mtiles. Son catalasa
negativa.
Este gnero contiene organismos patgenos para el hombre. Los ms importantes
son:
GRUPO A: Streptococcus pyogenes
GRUPO B: Streptococcus agalactiae (pigmento)
GRUPO D: Enterococcus faecalis
Streptoccocus pneumoniae y grupo viridans
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Adems las infecciones causadas por Estreptococos del grupo A pueden llevar a sndromes
post-infecciosos de fiebre reumtica, cardiopatas reumticas y glomrulo nefritis aguda.
Los estreptococos tienen hemolisinas que actan de diferente manera en agar sangre:
Hemlisis beta: zona clara alrededor de la colonia
Hemlisis alfa: zona de hemlisis incompleta (verde).
Hemlisis gamma: ausencia de hemlisis
Streptococcus pneumoniae
Son dipldcocos gram positivos, con los extremos alargados en forma de lanza, tambin se
agrupan en cadenas; no forman esporas, no mtiles, poseen una cpsula formada de
polisacridos especficos, lo que permite una tipificacin con antisueros especficos.
Patgenos para el hombre, producen neumonas, meningitis, otitis y endocarditis. Crecen bien
en agar sangre y chocolate en atmsferas que contienen el 10% de CO2.
PRUEBAS DE LABORATORIO
-Catalasa: la catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno (H 2O2) en
oxgeno y agua.El perxido de hidrgeno se forma como uno de los productos finales del
metabolismo oxidativo o aerbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular, el perxido
de hidrgeno es letal para las clulas bacterianas.
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2H2O2
2H2O
O2 (burbujas de gas)
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-Bilis esculina: Los estreptococos del grupo D crecen rpidamente en el agar bilis esculina e
hidrolizan la esculina, que en presencia de iones hierro forman un compuesto de color verde
oliva hasta negro. Las sales biliares presentes inhiben el desarrollo de la flora acompaante.
-Optoquina: se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae (sensibles) y
otras especies de estreptococos a hemolticos (resistentes). La sensibilidad a la optoquina es
una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. La optoquina, que es el
clorhidrato de etilhidrocuprena.
Procedimiento: Se toma una suspensin de colonias puras en caldo Mueller Hinton o
tioglicolato y con un hisopo se estra una placa de agar sangre de carnero al 5 %. Sobre la
estra se coloca el disco de optoquina. Se incuba con atmsfera de CO2 al 5 %(jarra con vela)
durante 24 hs. a 35 C.
Interpretacin: Sensible, cuando hay inhibicin alrededor del disco. Se considera como punto
de corte 16 mm. (discos de 10 mm) o 14 mm (discos de 6 mm). Resistente, cuando el
crecimiento no es inhibido alrededor del disco. Los casos de halos intermedios deben
resolverse por acumulacin de pruebas a favor o en contra.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
EXPERIMENTACIN
1. Se realizarn pruebas de:
- Catalasa para diferenciar a la familia Micrococcaceae de Streptcoccoceae
-Coagulasa para identificar al Staphylococcus aureus
-Novobiocina, bacitracina, optoquina, Camp
- Diferenciar hemlisis en agar sangre
2. Realizar el portafolio de la prctica correspondiente y colocar los resultados obtenidos.
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a. Cuales seran los pasos para la identificacin del microorganimo luego de tomar la
muestra? Coloque los resultados obtenidos en cada paso.
b. Cul sera el microorganismo presente segn los resultados del literal 5.1.?
c. Qu antibiticos empleara?
6. Jos Antonio presenta fiebre reumtica, su mdico solicita realizar exmenes
microbiolgicos para detectar el microorganismo presente:
a. Cuales seran los pasos para la identificacin del microorganimo luego de tomar la
muestra? Coloque los resultados obtenidos en cada paso.
b. Cul sera el microorganismo presente segn los resultados del literal 6.1.?
c. Qu antibiticos empleara?
7. Utilizando una foto explique la prueba de Camp.
8. Verdadero o falso:
Es mejor sembrar al Streptococcus pneumoniae en agar chocolate que en agar sangre
(justifique su respuesta).
9. Mencione dos diferencias entre enterococos y no enterococos.
10. Por qu razn especies de bacterias del gnero Micrococcus crecen bien en agar
sangre en una atmsfera con oxgeno?
11. Cmo identificara al Staphylococcus saprofyticus del Streptococcus pneumoniae?.
Mencione dos pruebas microbiolgicas.
12. Segn el grado de hemlisis como puedo identificar al Streptococcus pneumoniae del
Streptococcus pyogenes?. Mencione dos pruebas microbiolgicas.
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PRACTICA No. 6
ORINA
OBJETIVOS:
Conocer la forma adecuada de recoleccin de una muestra de orina tanto en hombres
como en mujeres
Realizar el examen elemental y microscpico de orina y Gram gota fresca
Conocer la realizacin de un urocultivo y los diferentes microorganismos que pueden
estar presentes
CONTEXTUALIZACIN
El examen general de orina de rutina urianlisis es una de las primeras pruebas usadas
para la identificacin de patologa en las vas urinarias y es parte indispensable de la patologa
clnica. Puede proporcionar una estimacin de la funcin renal, dar informacin sobre las
posibles causas de disfuncin e incluso puede indicar enfermedad sstmica. El examen
general de orina es un estudio cuidadoso y sistemticos de las prpiedades fsicas, qumicas
y microscpicas de la orina. Aunque los datos que se obtienen slo en ocasiones ayudan a
dar un diagnstico tentativo, al mismo tiempo sirven de gua para seleccionar pruebas ms
especficas para un diagnstico definitivo.
RECOLECCIN DE LA MUESTRA
Obtencin limpia del chorro medio de orina
-La informacin adecuada al paciente es esencial, deben prepararse pautas para la obtencin
apropiada de la muestra en una tarjeta impresa, con el procedimiento descrito y
prefentemente ilustrado para asegurar el cumplimiento por parte del paciente.
-Debe indicarse al paciente que se lave y enjuague bien las manos
-Luego que higiniece bien el rea periuretral con un antisptico suave para evitar la
contaminacin.
-Indicar al paciente que se enjuague muy bien, porque el antisptico puede ser
bacterioesttico, en las mujeres se debe hacer que escurra el agua de adelante hacia atrs.
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-Una vez completada la higiene, el paciente debe retraer los labios vaginales o el glande del
pene, empezar a orinar. En cuanto cierta cantidad de orina haya limpiado la entrada uretral
obtener una muestra de orina del chorro medio de la miccin, se coloca el frasco de
recoleccin en posicin con la mano libre, sin tocar la superficie de el borde interno de la
abertura con los dedos, es importante indicar a los varones que la punta del pene no debe
tocar ninguna de las partes del frasco recolector en ningn momento.
-Cuando la muestra est dentro del frasco, se tapa tan pronto como sea posible para evitar la
contaminacin bacteriana proveniente del aire. Es indispensable no tocar la superficie intena
de la tapa. El frasco de recoleccin debe ser estril.
-Llevar de inmediato al laboratorio, cuando hay que esperar ms de una hora se debe
refrigerar.
Parmetro
determinado por
la concentracin
de la orina.
Dependiente
especialmente de
pigmentos
urocrmicos,
urobilina y
uroeritrina
En condiciones
referenciales, la orina
presenta un color de
amarillo plido a ambar
oscuro.
*Rojo/prpura: Porfobilina,
porfobilingeno, uroporfirina.
*Castao /Negro: Bilirrubina, Fenol,
Melanina, Porfirinas.
*Azul/Verde: Biliverdinas, Complejo de
vitamina B.
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- Microscpico: leucocitos, eritrocitos, clulas bajas, clulas altas (se reporta nmero por
campo en 10 campos con lentes 40x), moco, bacterias, cristales, parsitos, hongos (se
reporta por cruces en 10 campos con lentes 40x) y cilindros se reporta nmero por placa (con
lentes de 10x).
Hemates
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Una vez recogida la muestra en las condiciones anteriormente descritas se debe proceder a
cultivar enseguida, no debe pasar ms de una hora entre la recogida de la muestra y el
cultivo.
El cultivo de la muestra de orina comprender preferiblemente una tcnica cuantitativa y otra
cualitativa.
Puesto que en la orina nos encontramos con organismos Gram positivos y negativos es
necesario realizar cultivos para ambos grupos.
As se utilizar agar sangre para los Gram positivos (se puede aadir cido nalidixico
colimicina para evitar crecimiento de Gram negativos) y Mc Conkey o EMB para los Gram
negativos.
El cultivo cuantitativo de la orina puede verificarse bien con una asa de 0.001ml, se utiliza
muestra no centrifugada.
El nmero total de bacterias encontradas por mililitro es el siguiente se cuenta cuantas
colonias crecieron y se multiplica por 1000.
Una bacteriuria infenor o igual a 10.000 grmenes por ml se considera que no tiene
significacin patolgica, ms all de los 100,000 grmenes por ml, la infeccin urinaria es
prcticamente segura.
Entre 10.000 y 100.000 grmenes por ml, la repeticin del examen y el contexto clnico son
indispensables para una correcta interpretacin.
La presencia de 104 /ml de un solo tipo de bacilo Gram negativo es una indicacin consistente
de infeccin de vias urinarias, en especial en varones. En algunas ocasiones en mujeres
jvenes con disuria e infeccin de vas urinarias agudas tendrn 102 o 103 por mililitro.
Es importante la identificacin del microorganismo causante de la infeccin y que el cultivo
sea puro para luego realizar un antibiograma.
As, la interpretacin de los resultados del cultivo de orina depende del mtodo de recogida y
entrega al laboratorio, de los tipos y nmero de bacterias presentes y de la valoracin de
estos hallazgos en relacin con el cuadro clnico del paciente.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
EXPERIMENTACIN
1. Cada grupo de trabajo recibir una muestra de orina para que le realicen un EMO,
Gram gota fresca y un urocultivo. Para esta actividad los estudiantes deben revisar los
procedimientos mencionados y la manera en que se deben reportar. Se evaluar el
informe durante la clase.
2. Realizar un portafolio de la prctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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PRCTICA No. 7
IDENTIFICACIN BIOQUMICA DE BACILOS GRAM NEGATIVOS
OBJETIVOS:
Con un asa estril tomar material e inocular un tubo con caldo RM/VP.
Incubar a 35 C por un mnimo de 48 horas.
Transferir 2.5 ml de la suspensin a un tubo.
Agregar 5 gotas del indicador y observar si hay cambio de color.
Agregar 5 gotas del indicador rojo metilo y observar si hay cambio de color.
Ensayo positivo: el reactivo permanece rojo.
Ensayo negativo: el reactivo se torna amarillo-naranja.
Si el resultado es negativo continuar la incubacin de la bacteria por 24 horas ms.
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2. ENSAYO DE VOGES-PROSKAUER
Principio
El piruvato es un intermediario en el metabolismo de la glucosa. A partir del cido pirvico
un microorganismo puede seguir varios caminos. Algunos lo rompen para formar como
productos finales cidos lctico, actico o frmico. Otros metabolizan el piruvato por el
camino del butilenglicol para formar como productos finales acetona (acetilmetilcarbinol) y
2,3-butanodiol (diacetilo). El ensayo de Voges-Proskauer (VP) detecta estos productos
metablicos. En presencia de oxgeno e KOH, la acetona se oxida a diacetilo, que da un
complejo rojo. La sensibilidad del ensayo se aumenta por el agregado de alfa-naftol antes
del agregado de KOH.
Procedimiento y resultados:
3.PRUEBA DE LA UREA
Principio
La urea es una diamida del cido carbnico, cuya hidrlisis por accin de la ureasa da 2
molculas de amonaco. La ureasa es una enzima constitutiva que se sintetiza
independientemente de la presencia o no de la urea. La prueba determina la capacidad de
la bacteria de desdoblar la urea, con la consiguiente alcalinizacin del medio. Es una
actividad caracterstica de especies de Proteus y se usa para diferenciar Klebsiella (+) de
Escherichia (-) y Proteus (+ rpido) de Providencia (-); Yersinia pseudotuberculosis (+) de
Yersinia pestis (-)
Procedimiento y resultados
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54
55
Tomar material con un asa e inocular el tubo control y los tubos con los aminocidos
Cubrir todos los tubos con una capa de vaselina estril.
Incubar a 37C
Efectuar las lecturas da por da hasta 4 das, registrando los resultados da por da
Ensayo positivo: medio turbio y prpura a prpura amarillento
Ensayo negativo: color amarillo
Tubo control: permanece con su color original o se vuelve amarillo si el organismo
es un fermentador de glucosa (se debe ver turbidez en el tubo)
citrato como nica fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinizacin del medio
Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a
pH 7,6. Cuando el resultado es positivo el medio de cultivo se vuelve azul y cuando es
negativo se mantiene verde.
Procedimiento
Se inocula el agar inclinado en una sola estra en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en
un medio slido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir
falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inculo. Incubar a 35C
durante 4 das. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estra,
acompaado o no de un viraje del indicador al azul.
Resultados
(+)Klebsiella spp , ( - ) Escherichia Coli
8. FENILALANINA DESAMINASA
Las desaminasas catalizan la prdida de NH3 en un aminocido originando un cido
carboxlico. Las bacterias que desaminan la fenilalanina producen cido fenilpirvico que
con Fe3Cl en solucin cida produce un color verdoso ( resultado positivo) y cuando es
negativo es de color amarillo (reactivo es de color amarillo).
7. MALONATO
El fundamento es igual al citrato, de esta manera se puede observar si se utiliza al
malonato como fuente de carbono.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
1. Efectuar la siembra en los medios de cultivo para la identificacin de bacilos Gram
negativos, partiendo de un medio Mac conkey en donde un microorganismo "x" se ha
desarrollado. Trabajo grupal, venir estudiando la prctica, se evaluar durante la
clase.
2. Realizar el portafolio de la prctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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La consistencia de las heces nos puede dar una idea del estado de vida del parsito que
buscamos, as para protozoarios intestinales: las formas qusticas sern posiblemente ms
observadas en heces formadas o semiformadas, pastosas; mientras que los trofozoitos se
hallarn en heces semilquidas y lquidas.
En el caso de los helmintos intestinales, huevos, larvas se pueden encontrar en heces fecales
de cualquier consistencia. Se puede sospechar de infeccin amebiana cuando las heces
fecales estn Iquidas y gaseosas.
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MOCO: su aparicin suele ser reconocida macroscpicamente. Si est mezclado con las
heces, dando un aspecto brillante, procede del intestino delgado. Moco en colon distal, moco
opaco, mezclado con clulas epiteliales, sangre o pus es indicativo de un proceso inflamatorio
(enteritis o colitis).
El moco tambin est presente en heces fecales de pacientes con infeccin donde se hallarn
trofozoitos.
RESTOS ALIMENTICIOS: normalmente no hay restos alimenticios macroscpicos o estos
son escasos. La digestin deficiente en algunos tramos del tubo gastrointestinal se evidencia,
en el examen coprolgico, por la aparicin de restos alimenticios ingeridos, siempre que el
defecto no haya sido compensado en tramos inferiores. Sin embargo seala trastornos
anteriores al colon: gstricos, pancreticos de intestino delgado, etc.
Para el uso clnico corriente basta la observacin macroscpica de las heces y el examen
microscpico de las preparaciones clsicas
En general, una aceleracin global del trnsito gastrointestinal determina la presencia de
restos groseros de los alimentos en las heces (lientera) y al examen macroscpico la
aparicin de esteatorrea, creatorrea y amilorrea.
SANGRE: normalmente no debe existir sangre macroscpica. Patolgicamente se observa en
hemorroides, tumores de colon distal, etc.
b. Microscpico:
Para el examen microscpico se necesita de las siguientes soluciones:
Solucin salina al 0,85%:
- Conserva la motilidad de los trofozoitos,
- No es buena par la identificacin definitiva de ciertas especies de protozoarios intestinales
en su fase qustica debido a que la estructura interna est probremente definida
- Los trofozoitos se presentan mtiles, transparentes, refrctiles y se pueden observar dentro
de ellos glbulos rojos fagocitados.
- Los quistes aparecen redondos, contorno definido, se ven bien los cuerpos cromatoides
(refrctile
- Para huevos y larvas de helmintos intestinales tambin es muy til esta solucin.
Solucin de lugol:
- Hace ms notable la estructura interna de los parsitos intestinales.
Los quistes se tien rnuy bien con el lugol haciendo posible la identificacin correcta de la
especie: se puede observar el nmero y estructura del nucleo, la cromatina toma un color caf
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oscuro, el citoplasma un color amarillo o naranja, las masas de glucgeno se tien de caf
rojizo. Los cuerpos cromatoides son menos visibles que en solucin salina
- Destruye la motilidad de los trofozoitos.
- Se observan mejor las caracterfsticas morfolgicas de huevos y larvas de helmintos
intestinales.
-Facilita tambin la observacin de los siguientes elementos:
CLULAS:
- La presencia de clulas epiteliales es indicativo de irritacin gastrointestinal.
- Los eritrocitos no deben ser observados en condiciones normales. Su presencia evidencia
sangrado en la parte baja del apararato digestivo.
- Los leucocitos normalmente no se observan o son escasos. Nmeros elevados aparecen
en las inflamaciones gastrointestinales; indican principalmente infeccin bacteriana. Se
pueden observar macrfagos y leucocitos en los casos de disentera amebiana crnica con
invasin bacteriana secundaria. Los eosinfilos son numerosos en la amebiasis
especialmente en la fase aguda.
- Los PMN (polimorfonucleares) pueden ser identificados por presentar forma redonda o
irregular, de 10 a 20 , citoplasma claro, refringente, granuloso y el ncleo escasamente
notable. Se los puede observar mejor si se aade una gota de cido actico al 10% a la
emulsin de heces. Se debe informar en que cantidad se encuentran por campo. Si se
observan ms de 10 leucocitos por campo, se hace una lmina y se colorea con Wright, se
hace el recuento diferencial y si hay mayor cantidad de neutrfilos (polimorfonucleares) la
infeccin es causada por bacterias, si hay mayor cantidad de mononucleares la infeccin es
de tipo viral.
CRISTALES:
- Oxalato de calcio, y fosfato triple: son encontrados con frecuencia y carecen de
significado clnico al igual que escasos cristales de cidos grasos.
- Cristales de hematoidina: son agujas amarillas que se presentan en grupo o haces
despus de hemorragia intestinal.
- Cristales de Charcot-Leyden: tienen forma de rombos alargados, normalmente se
encuentran en el citoplasma de los eosinfilos. Se observan ocasionalmente en las
infecciones parasitarias, especialmente en amebiasis invasora.
ALIMENTOS NO DIGERIDOS:
- Sustancias vegetales: las clulas vegetales se observan en varias etapas de
descomposicin. Los pelos vegetales son de tamao variable (50-300), truncos en un
extremo y delgados en el otro, curvos, de color amarillo plido o transparentes.
En su interior se observa un conducto central estrecho, vaco, entre dos capas transparentes
que refractan la luz. Los pelos vegetales se asemejan a las larvas de Strongyloides.
- Sustancias animales: las fibras de carne digerida tiene un tamao de 100-200, de forma
oval, rectangular, redondeada, De color amarillo o trasparente, sin grnulos ni estriaciones en
su interior. Poseen estriaciones longitudinales y transversales cuando no han sido digeridas
adecuadamente,
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PARSITOS
a. Nemtodos: Gusanos redondos
Ascaris lumbricoides: Se observan huevos que miden aprox. 45-75 x 30-50
micras, presenta una clula rodeada por tres capas, producen una patologa de
dolor de estmago y desnutricin.
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Hymenolepis nana : Huevos ovoides, mide aprox. 50 micras tiene una membrana
interna y una externa, tambin puede causar trastornos nerviosos.
c. Protozoarios: Amebas
Entamoeba histoltica: Se observan quistes que miden aprox. 20 micras, se
observa con uno a cuatro ncleos. Pueden causar lesin de la mucosa intestinal.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
Recolectar las evidencias de la prctica y adjuntarlo al portafolio de la segunda parte.
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OBJETIVOS:
-Conocer y poner en prctica diversas pruebas qumicas en heces fecalesque ayudan a
diagnosticar enfermedades de origen gastrointestinal
-Realizar siembras y coloraciones en heces fecales sospechosas de microorganimos
bacterianos infecciosos
ANALISIS QUMICOS
Reaccin qumica, pH: Las heces normales son neutras o ligeramente alcalinas, pero esto
depende de mltiples factores: dietticos, endgenos, etc. por lo que las variaciones tanto en
la salud como en la enfermedad son irregulares y de escaso valor clnico. Para su medicin
se emplea una tira de papel indicador universal. Sobre el cual se aplica una pequea cantidad
de material fecal. Se espera unos minutros y se compara con la escala de colores.
Azcares reductores: tienen importancia en diarreas de infantes, especialmente si padecen
intolerancia o mala absorcin de carbohidratos. Para su examinacin se utiliza pastillas
Clinitest, las cuales reaccionan con cualquier sustancia reductora de las heces como glucosa,
lactosa, sacarosa, maltosa, etc.
Pigmentos biliares: en el examen coprolgico de un individuo sano no debe encontrarse
bilirrubina ni biliverdina. La presencia de estos puede deberse a trnsito o ictericia hemolltica.
La ausencia de estercobilina y estercobilingeno (no hay pigmentos biliares en la luz
intestinal) indica una ictericia obstructiva con heces aclicas.
Grasas: la presencia de un exceso de grasas (esteatorrea) en las deposiciones obedece a
mecanismos tales como trnsito acelerado, dficit enzimtico, hipersecrecin endgena.
Pueden estar presentes las grasas neutras sin desdoblar o los cidos grasos y jabones.
Se realiza tinciones con Sudn lll o lV para cualificarlas. Tambin se realiza dosificacin de
grasas. Se considera patolgica la materia fecal que contiene una cantidad total de grasas por
encima del 30%.
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Rotavirus: Los rotavirus del grupo A constituyen la principal causa de gastroenteritis grave en
nios de todo el mundo. Producen unos 125 millones de infecciones cada ao en los pases
en desarrollo y son causa de ms de 800.000 fallecimientos anuales. Las infecciones
humanas son producidas principalmente por rotavirus del grupo A y, en menor medida, o con
otras caractersticas epidemiolgicas, por los grupos B y C.
Sangre oculta: el examen qumico de sangre en las deposiciones tiene inters cuando se
sospecha de la existencia de hemorragias digestivas subclnicas, es decir, sin que se avisen
visiblemente en forma de melenas, las causas pueden ser neoplsicas o inflamatorias. Por
ejemplo en la parasitosis por anquilostoma o tenias.
La prdia de 50 - 75 ml sangre (tubo gastrointestinal superior) provoca una coloracin roja
oscura, negra de las heces (melena). Una hemorragia de 2 a 3 das ocasiona prdidas de ms
de 1000 ml de sangre. La sangre oculta puede persistir hasta 5 a 12 das. Heces de un color
rojizo brillante se presentan por prdidas ms leves (tubo gastrointestinal bajo). Se debe
adems descartar una coloracin anormal de las heces causada por colorantes de alimentos.
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Reporte:
- Si hay variedad de leucocitos se reporta como % de PMN (diferencial)
lnterpretacin:
Mayor cantidad de neutrfilos: infeccin bacteriana
Mayor cantidad de mononucleares: infeccin viral
PMN
Neutrfilos
Mononucleares
Linfocitos y Monocitos
COPROCULTIVO
Obtngase la muestra de una evacuacin, tracto rectal o escobillado anal.
Suspndase una pequea cantidad en caldo GN (enriquecimiento para Salmonella y
Shiguella) y un medio diferencial para bacterias que no fermenten la lactosa (EMB
Macconkey), las no fermentadoras son las patgenas, Hektoen Agar e identificacin de las
colonias aisladas con una bioqumica o APl.
Para la determinacin de bacterias especficas como Campylobacter se siembra en medios
especficos para estas bacterias.
Medio de transporte: Cary Blair
Caldo GN
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
Colocar en el portafolio la primera parte de la prctica y adjuntar reportes de exmenes de
heces fecales: Coprocultivo, PMN, sangre oculta y pH, incluir reflexiones.
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PRCTICA No. 9
ESPUTO
OBJETIVOS:
-Obtener muestras de esputo vlidas que provengan del sistema respiratorio inferior
-Detectar diferentes microorganismos que pueden causar infecciones en las vas respiratorias
bajas mediante el anlisis del esputo utilizando diversas tcnicas microbiolgicas
CONTEXTUALIZACIN
En las condiciones habituales de la clnica diaria, no es una muestra representativa de la
situacin existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con secreciones procedentes
de todo el rbol traqueo-bronquial y con la flora saprfita de la orofaringe. No obstante es un
mtodo fcil y rpido cuya utilidad o relacin entre resultado obtenido y verdadera etiologa
depende en gran medida de su correcta obtencin, control de calidad antes de iniciar su
procesamiento, tipo de agente que se pretenda detectar y valoracin adecuada del resultado.
El anlisis del esputo es una herramienta bsica, til y comnmente utilizada en el campo de
la Medicina debido a que la tcnica de obtencin de la muestra es relativamente sencilla y
segura. Permite el estudio, diagnstico y seguimiento de mltiples enfermedades de tipo
inflamatorio, infeccioso y/o tumoral, tanto pulmonares como sistmicas que cursen con
afectacin pulmonar.
TCNICA PARA LA OBTENCIN DE LA MUESTRA
Material necesario:
- Frasco estril de boca ancha y hermtico.
- Suero fisiolgico estril y nebulizador.
Tcnica:
-Enjuagar la boca con agua destilada estril o solucin salina.
-Obtener el esputo tras una expectoracin profunda, preferentemente matinal.
-De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones
de suero fisiolgico estril (15 ml durante 10 minutos), siendo til adems realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria.
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Transporte y conservacin:
Envo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas). Si esto no es posible, conservar en
frigorfico a 4C.
Observaciones:
- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibitico.
- No es til para anaerobios.
- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
- La expectoracin debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (ms de 25
leucocitos polimorfonucleares y menos de 10 clulas epiteliales por campo 10x).
EXAMENES
a) Examen macroscpico:
La descripcin del esputo o de las secreciones producidas con la tos debe comprender
el color, la consistencia, aspecto, el olor entre otros, as:
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Este anlisis nos ayuda a tener un diagnstico previo de lo que podra tener el paciente,
por ejemplo, los esputos muy abundantes y purulentos sugieren un absceso pulmonar o
una bronquiectasia; los esputos sanguinolentos, sangrado (hemoptisis); los esputos
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b) Examen microscpico:
Tmense porciones de moco, pus, material caseoso. Examnese en forma de preparacin
hmeda y frotis coloreado.
excesivo.
Tuberculosis pulmonar: Es una enfermedad infecciosa, causada por Mycobacterium
tuberculosis. Infecciones ocasionadas por micobacterias atpicas (bacilos tuberculoides)
tales como: M. Kansasii, M. marinum, M. flavescens, M. gordonae, M. obuense.
Neumona bacteriana: Pulmona o neumonitis es una enfermedad inflamatoria de los
pulmones. La neumona puede afectar a un lbulo pulmonar completo (neumona lobular), a
un segmento de lbulo, a los alvolos prximos a los bronquios (bronconeumona) o al tejido
intersticial (neumona intersticial). La neumona bacteriana es una infeccin de los pulmones
causada por bacterias. El Streptococcus pneumoniae, un organismo Gram positivo que a
menudo coloniza la garganta, es la bacteria que con ms frecuencia causa neumona en
todos los grupos de edad excepto en recin nacidos. Otra causa importante de neumona por
bacterias Gram positivas es la causada por el Staphylococcus aureus. Tambin ocasionan
neumona bacterias del gnero Pseudomonas (bacilos Gram negativos), Klebsiella (bacilos
Gram negativos), Haemophilus influenza (cocobacilo Gram negativo).
Neumona viral: Es una inflamacin (irritacin e hinchazn) de los pulmones causada por
una infeccin con un virus que puede ser influenza, parainfluenza, adenovirus, rinovirus,
virus del herpes simple, virus sincicial respiratorio, hantavirus y citomegalovirus.
Neumona atpica: Se refiere a la neumona causada por ciertas bacterias a saber:
Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae y Chamydophila pneumoniae.
Enfermedades pulmonares parasitarias: Se producen ms comnmente por un nemtodo
como el Strongyloides stercoralis o el Ascaris lumbricoides. Tambin estn enfermedades
pulmonares causadas por parsitos trematodos como el Paragonimus westermani.
Fibrosis qustica (FQ): Es una enfermedad hereditaria frecuente que afecta al organismo
en forma generalizada, causando discapacidad progresiva y muerte prematura.
Neoplasias pulmonares: Tumores o cnceres del pulmn. Se atribuye al hbito de fumar,
asbesto, derivados del carbn, radiaciones ionizantes, xido de hierro, gas mostaza, nquel,
petrleo, uranio y cloruro de vinilo.
Asma bronquial: Es una enfermedad en la que se inflaman los bronquios, lo que produce
obstruccin de las vas areas, marcada por ataques recurrentes de disnea paroxstica, con
produccin de silbido debido a la contraccin espasmdica de los bronquios.
Esputo: mucoide viscoso generalmente presenta eosinofilia.
Neumoconiosis: Condicin caracterizada por la deposicin permanente de cantidades
sustanciales de partculas de materia en los pulmones, generalmente de origen ocupacional
o ambiental, y por la reaccin tisular a su presencia. Como por ejemplo al inhalar polvo de
piedras, arenas o pedernales que contienen bixido de silicio, con formacin de cambios
fibrticos nodulares generalizados en ambos pulmones.
Neumona por hongos: Infecciones con hongos del gnero Aspergillus, Pneumocistis,
Blastoyces dermatitidis, Coccidioides immitis (generalmente se presenta en pacientes con
SIDA), Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum. La infeccin ocasionada por el
Histoplasma capsulatum, est considerada una de las principales micosis endmicas del
continente americano.
Neumona por aspiracin: Tipo de neumona que se produce por la aspiracin de
alimentos, de lquidos, o del contenido gstrico en el tracto respiratorio superior.
Absceso pulmonar: Es la inflamacin de los pulmones y de las vas respiratorias que llevan
a ellos (bronquios) debido a la inhalacin de materiales extraos.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN:
- Se realizar el examen macroscpico de la muestra y se observar una preparacin
hmeda para rechazar o aceptar la muestra de esputo.
- Examen microscpico: Montaje hmedo directo y con KOH (para visualizar hongos),
GRAM y BAAR .
- Realizar el portafolio de la prctica y subirlo a la plataforma.
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PRCTICA No. 10
MALARIA O PALUDISMO
CONTEXTUALIZACIN
Los parsitos causantes de la malaria o paludismo son protozoarios esporzoarios del gnero
Plasmodium. Las dos especies que existen en el Ecuador, en las zonas tropicales y
subtropicales son Plasmodium vivax y Plasmodium falciplarum.
Se transmiten por la picadura de un vector, el mosquito del gnero Anopheles.
DIAGNOSTICO POR LABORATORIO
Cllnicamente la malaria puede confundirse con otras enfermedades febriles. Si el paciente ha
tomado drogas antipaldicas que no curaron su malaria, el diagnstico se hace diffcil.
El diagnstico principal se hace por la bsqueda de parsitos circulantes, aunque a veces se
recomienda mejor realizar la prueba luego del paroxismo febril, para poder localizar los
trofozoitos jvenes.
El examen se hace por frotis de gota gruesa teidos con Giemsa, o por frotis extendidos
teidos con Wright y Giemsa. Tambin existen pruebas para la deteccin del antgeno del
parsito y reacciones inmunolgicas para demostrar la presencia de anticuerpos.
En la sangre circulante se pueden encontrar todas las formas del ciclo eritrocito (merozoitos,
trofozoitos o formas anilladas, esquizontes), incluso a veces los gametocitos, a excepcin de
los esquizontes de Plasmodium falciparum.
El recuento de parsitos es importante para determinar el grado de infeccion, seguir la
evolucin del paciente, para el pronstico y para la evaluacin de la eficacia del tratamiento.
Gota gruesa
Es ms eficaz que el extendido, pues permite visualizar mayor numero de parsitos, por la
mayor cantidad de sangre que se estudia en cada campo microscpico. Es necesario lisar los
eritrocitos para permitir la visualizacin de los parsitos.
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Frotis extendido
Facilita la observacin del detalle mor'folgico de los parsitos y su relacin con los entrocitos,
por lo tanto permite confirmar la especie con mayor certeza.
MUESTRAS
Se puede utilizar sangre totalobtenida en un tubo que contenga EDTA. Muchas veces resulta
conveniente tambin tornar una muestra capilar para realizar los frotis. No se recomienda usar
sangre con heparina o con citrato de sodio.
COLORACION DE GIEMSA
Fundamento: Los parsitos causantes der patudismo se encuentran en la sangre; una parte
de su evotucin ocurre en el interior de los glbulos rojos. Estos parsitos se detectan en
extensiones sanguneas teidas con los colorantes de Giemsa.
Preparacin de las extensiones sanguneas
-Cuando se debe obtener la muestra.- Por lo general los parsitos son ms numerosos en la
sngre al final de un ataque de fiebre. La recoleccin de sangre se debe hacer invariablemente
antes de que se administren medicamentos antipaldicos.
- Preparar un frotis sanguneo para un examen minucioso por especies
- Preparar una gota gruesa para deteccin de los parsitos
- No se recomienda conservar los frotis sin tincin durante ms de 4 das.
Tincin
Antes de teirlas fijense las extensiones solo con metanol (2 a 3 minutos). Evtese que este
alcohol toque las gotas gruesas.
1. Haga una dilucin delcolorante de giemsa 1:10 con agua amortiguada,
2. Coloque los portaobjetos en una bandeja de tincin y cbralos con el colorante diluido.
3. Deje reposar por 30 minutos.
4. Lave la tincin con agua amortiguada.
5. Escurra el agua y deje secar el frotis
OBSERVACIN MICROSCPICA DEL PARSITO:
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACION
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PRCTICA No. 11
INFECCIONES DE TRANSMISIN SEXUAL
CONTEXTUALIZACIN
La importancia de este tipo de infecciones es cada vez mayor, pues su incidencia va cada vez
en aumento. Varios son los factores que intervienen: aumento de densidad y movilidad de las
poblaciones, dificultad para lograr cambios en la inadecuada conducta sexual de las personas.
Adems se debe tomar en cuenta que para la mayora de estas infecciones no existen
todava vacunas disponibles.
Cuando se sospecha clnicamente de una infeccin de transmisn sexual (lTS) se hacen
pruebas especficas para confirmar el diagnstico. Estas pueden consistir en anlisis de
sangre, orina, estudios del flujo vaginal o del lquido seminal, y pruebas inmunolgicas. Un
aspecto muy importante en el diagnstico es recordar que se pueden producir infecciones
mltiples.
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Ureaplasma urealyticum
Puede ser responsable de uretritis no gonococcicas en varones.
Son difciles de aislar, requiere de medios de cultivo especiales. Las colonias tienen
apariencia de huevos fritos, muy pequeas.
Cultivos: caldos de peptona con infusin de corazn y 2% de agar (pH7.8), 7% de lquido
asctico humano o de suero de animal (caballo o conejo), 37C por 48 a 96 horas.
Muestras: Hisopos rectales, secreciones uretrales o genitales.
El diagnstico puede tambin ser serolgico.
Cndida albicans
Es una levadura oval que produce un seudomicelio en cultivo, en los tejidos y exudados. Son
Gram positivas. En agar Sabouraud crecen colonias blandas color cremoso.
Puede causar vulvovaginitis, con irritacin, prurito y secrecin.
Muestras: raspados, exudados
Pruebas: Gram y cultivos en medios comunes o Agar de Nickerson.
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Trichomonas vaginalis
Es un parsito protozoario mastigophoro (flagelado). Tiene forma de pera, con una membrana
ondulante alineada, posee un flagelo posterior recto y 4 flagelos anteriores.
Se la puede observar en ftotis directos de secreciones vaginales.
Muestras: secreciones uretrales y vaginares, los frotis se los puede teir con hematoxilina,
Wright-Giemsa o ticin de Gram.
Gardnerella vaginalis
Se lo asla de mujeres que sufren vaginitis, sepsis neonatal, bacteremia post partum, y de
hombre con uretritis no especfica.
En los frotis hmedos produce clulas indicadoras (clulas gua o clue cells), que son clulas
epitetiates vaginales con muchos bastoncillos minsculos. Se ha comprobado que estas
bacterias no requieren ningn factor especial de crecimiento y se los observa como
cocobacilos gram negativos. Las colonias son pequeas grises, beta hemolticas.
Una prueba rpida de su presencia es colocar unas gotas de KOH al 10% en preparaoiones
en fresco de secreciones vaginales; es caracterstico encontrar un olor a pescado por la
presencia de aminas.
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Treponerrna pallidum
Son espiroquetas muy mtiles, no se le puede cultivar in vitro.
Se puede hacer la observacin directa en microscopio de campo oscuro en lquidos tisulares
exprimidos de las lesiones superficiales tempranas.
El diagnstico se lo hace en base a pruebas serolgicas: tesis no treponmicos para
screening: VDRL o su variante, el RPR. EI test confirmatorio es el FTA-Abs (prueba
Treponmica)
Haemophilus ducreyi
Causa la enfermedad venrea chancroide" (chancro blando), que es una lcera desgarrada
de los genitales.
Son cocobacilos Gram-negativos- pequeos, dificiles de cultivar, puesto que requieren del
llamado factor X, crece mejor a partir de raspados de la base de la lcera sembradas en agar
chocolate con 1% de isovitalex vancomicina (3g/ml).
Se incuba en atmsferde CO2 al 10%, a 37C.
Chlamydia trachomatis
Son bacterias parsitas intracelulares estrictias, no mtiles. Gram negativas.
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Calymatobacterium granulomatis
Casa de la enfermdad venrea'"granuloma inguinale", caracterizada por la presencia de
hinchazones en los genitales, nalgas y abdomen con lesiones granulornatosas que pueden
ser ulcerativas o sangrantes.
Es un bacilo Gram negativo, no mtil, pleomrfico, con extremos redondeados, que se colorea
bipolarmente y aparece como "imperdibles".
Difcil de cultivar, Requrere de bajas tensiones de oxfgeno. Se pueden utilizar embriones de
pollo de 5 das y se desarrolla despus de las 72 horas a 35C.
Hrpes virus 1
El HSV-2 causa el herpes genital. El herpes genital primario puede ser grave y durar largo
tiempo. Produce lesiones vesculo-ulcerativas en el pene del varn o cuello, vulva, vagina y
perin en la mujer. Las lesiones son dolorosas y se acompaan de fiebre, malestar general y
linfadenopata inguinal.
El diagnstico del laboratorio se realiza por aislamiento del virus de las lesiones, pero ms
prcticos resultan los tests inmunolgicos.
HAV, HBV y HCV
Son los virus de la hepatitis. El HAV se transmite por vla oral-fecal y los otros dos por contacto
sexual o por vfa parenteral. El diagnstico se realiza por pruebas inmunolgicas.
VIH
Pertenece a los retrovirus. La enfermedad (SIDA) se caracteriza por una, depresin del
sistema immunitario y por desarrollo de neoplasias poco comunes como el Sarcoma de
Kaposiy por otras infecciones oportunistas graves.
El diagnstico de laboratorio se hace por aislamiento del virus por PCR, conteo de linfocitos
CD4 de sangre perifrica, mdula sea o plasma. Las pruebas inmunolgicas con suero del
paciente por ELISA (test de screening) y la confirmacrn por la tcnica de Western-Blot.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
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PRACTICA No. 12
TCNICAS BSICAS DE INMUNOLOGA
Objetivos:
CONTEXTUALIZACIN
Las reacciones de antgeno y anticuerpo son muy especficas. Un antgeno reaccionar slo
con el anticuerpo estimulado por antgenos de su propia clase o muy relacionados. Debido a
su elevada especificidad, las reacciones entre un antgeno y un anticuerpo pueden usarse
para identificar uno por medio del otro.
Esta especificidad es la base de las reacciones serolgicas. Las posibles reacciones cruzadas
entre antgenos relacionados pueden limitar la especificidad de la prueba.
Las reacciones de antgenos con anticuerpos se utilizan para identificar componentes
especficos en mezclas. Los microorganismos y otras clulas poseen diversos antgenos, y
por tanto, pueden reaccionar con numerosos anticuerpos diferentes.
Antgeno: sustancia que reacciona con anticuerpos o receptores de clulas T, despertadas por
inmungenos.
Anticuerpo: Protena producida a causa de la introduccin de un antgeno, y que tiene la
capacidad de combinarse con el antgeno que estimul su produccin.
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Anlisis inmunosorbente con enzima enlazada (ELlSA): Este mtodo tiene numerosas
variantes depende de la conjugacin de una enzima o un antgeno o un anticuerpo. La enzima
se detecta por anlisis de su actividad con su sustrato.
Para medir antgenos, anticuerpos conocidos se fijan a una fase slida, se incuba con
diluciones del suero problema, se lava e incuba de nuevo con una anti- inmunoglobulina
marcada con una enzima. La actividad enzimtica medida por adicin del sustrato especfico
con desarrollo de color es una funcin directa de la cantidad de anticuerpo unido.
lnmunofluorescencia: Colorantes fluorescentes pueden unirse por covalencia a molculas
de anticuerpo y hacerse visibles con ayuda de luz ultravioleta en el microscopio de
fluorescencia. Este anticuerpo, marcado puede usarse para identificar antgenos por ejemplo
en la superficie de bacterias como estreptococos, treponemas o en clulas en cortes
histolgicos u otro tipo de muestras.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
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Efectuar varias pruebas inmunolgicas tales como: ASTO, VDRL, HIV y observar sus
resultados.
Realizar el portafolio de la prctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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MICOSIS
COLECCIN DE ESPECMENES
La tcnica para la coleccin de material para cultivo de hongos es importante, ya que muchas
levaduras y mohos no patgenos: Son frecuentes contaminantes en especmenes clnicos y
pueden crecer ms y enmascarar los hongos patgenos significantes.
Especnenes cutneos y superficiales
Suspender la medicacin, lavar con agua y jabn secar bien al aire. Todo material puede ser
transportado al laboratorio en un sobre de papel limpio y estril. El material es viable por
meses.
Piel: Las lesiones cutneas requieren raspados del borde activo. Material suficiente y
representativo para cultivo y examen microscpico deber ser colectado y transportado al
laboratorio.
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Uas: Las uas infectadas no deben ser cortadas con tijeras. No colecte detritus de debajo de
la ua infectada. Primero, remueva la parte superficial no infectada de la ua por raspado.
Cuando se alcanza la porcin enferma, remuvala por raspado y envela al laboratorio.
Especmenes subcutneos
Todo material debe ser enviado al laboratorio en un contenedor estril. Transporte e
inoculacin rpida son necesarios ya que muchos especmenes pueden tambin contener
bacterias que pueden crecer y enmascarar y consecuentemente inhibir o retardar el
aislamiento de los hongos patgenos.
Especmenes sistmicos (tejidos profundos)
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Lavados gstricos
Lavados gstricos en ayunas debern ser colectados cuando no sea posible obtener esputo.
Debern ser colectados en tubos estriles. Una serie de tres especmenes es recomendada.
Orina
El espcimen de eleccin es la porcin media del chorro de la miccin de la maana obtenida
limpiamente. Mltiples especmenes de este tipo son superiores a un especimen recolectado
de 24 horas. Mantener refrigerado antes de procesar.
Fluidos pleural, espinal, articular y otros
Los especmenes de fluidos deben ser remitidos en contenedores estriles, prefieren grandes
cantidades de especimen ya que muy pocos organismos pueden estar presentes. Examine
mientras estn frescos o refrigrelos.
Mdula sea
Los especmenes de mdula sea son enviados en 0,1 ml de anticoagulante EDTA.
Tejidos
Los especmenes de tejido deben ser remitidos en un contenedor estril. Si el tejido est seco,
mjelo tigeramente con solucin salina al 0.85% y refrigrelo hasta ser procesado. Todo tejido
debe ser molido o finamente cortado cuidadosamente.
HONGOS
Examen macroscpico
Examen microscpico directo del material clnico (KOH 10%)
Cultivos
Reportes preliminares:
Dentro de 24 horas de la recepcin de especfmenes con el resultado de la coloracin
Despus de 7 das de incubacin (si no se detecta crecimiento) reportando No hay
crecimiento en siete das
Reportes finales:
Los reportes finales sern enviados al completarse los procedimientos de identificacin o
despus de 28 das de incubacin si no hay evidencia de crecimiento fungal.
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ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIN
Revisar los medios de cultivos con crecimiento de hongos y compare con cultivos
bacterianos.
Realice reflexiones sobre los resultados obtenidos junto con las fotos respectivas
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BIBLIOGRAFIA
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