Universidad de Crdoba

Qumica Orgnica
Ingeniera de Alimentos
Anlisis Cualitativo elemental de una muestra orgnica

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Objetivo General: Separar los pigmentos ms abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la
cromatografa de capa fina.

Teora relacionada
La cromatografa en capa fina es otro mtodo para separar, y en algunos casos tratar de identificar, los dos o ms compuestos
orgnicos existentes en una mezcla. Esta tcnica se parece en muchos aspectos a la cromatografa en columna
En principio, la realizacin de una cromatografa en capa fina es muy sencilla. Una placa de vidrio se recubre con una capa
fina de un absorbente adecuado; en la parte inferior se deposita una mancha (una gota) con la solucin conteniendo el
compuesto o la muestra orgnicos que se va a ensayar ; se deja que un disolvente adecuado se ascienda por la capa de
absorbente debido a la capilaridad y el compuesto (o compuestos) se localiza en la placa bien por su color, en el caso de
sustancias coloreadas, o bien con la ayuda de un indicador ( o mediante el empleo de luz ultravioleta) , en el caso de
compuestos incoloros.
Los compuestos diferentes ascienden con unas velocidades distintas por la capa de absorbente en relacin al disolvente, y esto
ocasiona la separacin de los componentes de una mezcla. En ciertas ocasiones se puede intentar la identificacin de los
componentes midiendo la velocidad de migracin de las manchas con respecto al frente del disolvente y comparndola con
los compuestos conocidos.
Fundamentalmente sirven las mismas consideraciones, a la hora de determinar la velocidad a la que un compuesto determinado
se mueve a lo largo de la superficie de un absorbente, tanto para la cromatografa en columna como para la cromatografa en
capa fina. El compuesto mvil es atrado por los puntos ms polares del absorbente debido a las fuerzas electroestticas siendo
reversible esta unin. El disolvente tambin interacciona con el absorbente mientras el compuesto lo hace tambin con el
disolvente. Esta triple interaccin entre el soluto, el disolvente y el absorbente fija las velocidades relativas a las que el frente
del disolvente y el soluto ascienden por la capa de vidrio.
Al igual que en la cromatografa en columna un soluto ms polar est ms atrado por el absorbente que un soluto menos
polar. As, pues los compuestos como los alcoholes, los cidos carboxlicos, y las aminas son atrados con ms fuerzas que el
absorbente que los compuestos del tipo hidrocarburos o sus derivados halogenados. En consecuencia los primeros compuestos
citados ascienden ms despacio que los citados ltimamente.
La actividad del absorbente tambin influye en la velocidad de migracin del soluto. Los absorbentes ms activos enlazan
ms intensamente las molculas del soluto, siendo la velocidad de migracin de estas por superficie del absorbente
relativamente lenta. Los dos absorbentes ms utilizados en cromatografa en capa fina son la almina activada y el gel de
slice. Su actividad est muy influida por su contenido en agua igual que ocurre en cromatografa en columna. Las muestras
ms activas son las que contienen menos agua.
La polaridad del disolvente tambin influye la velocidad en la que asciende un soluto por la capa de absorbente. Para un soluto
y absorbente dados el cambio de un disolvente menos polar a otro ms polar produce una atraccin mayor del disolvente por
el soluto y, por tanto, ste se desplazar sobre el mayor absorbente con mayor velocidad.
Es posible calcular el valor del Rf para la cromatografa en capa fina igual que en la cromatografa en papel. El valor Rf se
define como el cociente entre las distancias recorridas por el compuesto utilizado como soluto y la recorrida por el disolvente

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en el mismo tiempo. Los valores Rf para un compuesto dado varan mucho, evidentemente, al cambiar el disolvente o el
absorbente.

MATERIALES:
2- Pitas de 5 ml
1-Motero con su mano
1-Capilar
3- Frascos de compotas. Trado por los estudiantes

REACTIVOS:
1- Placa cromatogrfica de slica gel de 20 x 20 en aluminio.
Etanol (10 ml)
cido Actico (1 ml)
Cloroformo (10 ml)
Diclorometano (10 ml)
Acetato de etilo (10 ml)
Tolueno (10 ml)
Heptano (10 ml)
Acetona (10 ml).
Una hoja de espinaca y repollo morado. Trada por estudiantes

PROCEDIMIENTO.
1- Obtencin de los pigmentos. Triture una hoja de espinaca con etanol, hasta cuando salga un lquido (solucin de
pigmentos).
2- Preparacin de eluente. Prepare 4 mL de la mezcla de solventes (benceno etanol, cloroformo, butanol, acetato de etilo,
acetona, hexano, diclorometano etc) o use uno solo.
3- Aplicacin de la muestra y cromatografa. Introduzca la punta de un capilar en la solucin de los pigmentos. Cuando la
solucin haya ascendido en el capilar, retrelo y toque momentneamente y con mucha suavidad un punto de la placa - en el
centro a 0,5 cm. del borde inferior -. Se debe lograr una manchita circular de unos 3 - 5 mm. de dimetro . Si se estima que
no quedo suficiente muestra en la mancha, se puede hacer una segunda aplicacin en el mismo punto. Esperar a que el solvente
se evapore de la placa, para cromatografia.

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Luego con una pinza se coge la placa por su parte superior limpia y se introduce con mucho cuidado, verticalmente - mancha
hacia abajo - , en el cilindro volviendo luego a separarlo en una cmara (frasco de compotas traer)
El solvente al entrar en contacto con la parte inferior de la placa empieza a ascender y cuando llega a la mancha empieza el
proceso de cromatografa . Deje que el solvente llegue hasta el nivel superior del adsorbente en la placa , retire la placa con
cuidado con las pinzas y deje que el solvente se evapore .
Cuntas manchas ve en la placa ? . De qu color son ? . Cul es su posicin ? .
Discuta con el profesor los resultado y repita la experiencia tantas veces como sea necesario para encontrar el mejor sistema
de separacin de los pigmentos.
Disolventes y Reveladores empleados frecuentemente en cromatografas en papel y en capa delgada
Compuesto
Sistema disolvente
Reveladores de manchas
(fase mvil)
Acidos orgnicos
Mezclas de cido frmico o actico con Azl de bromofenol o verde de bromocresol en
etanol, 2-propanol, n-butanol o cetonas alcohol
Derivados hidroxmicos de cidos Acdo isobutrico-fenol
Solucin de cloruro frrico
orgnicos
Aminocidos
Fenol, fenol-amonaco, terc-butanol
Solucin 0,1% de ninhidrina en etanol
2,4-dinitrofenilhidrazonas
de Eter-hexano, acetonahexano
Solucin al 10% de KOH
compuestos carbonlicos
Aminas
1-butanol-amoniaco
Solucin de ninhidrina o de yodo
Derivados fenlicos
1-butanol-cido actico
Fluoroborato de p-nitro fenil diazonio
2,4-dinitrobenzoatos de alcoholes
Metanol-acetona, metanol-hexano
Solucin al 5% de KOH
Azcares
1-butanol-cido actico; acetato de etilo- Solucin de nitrato de plata, solucin 0,3% de cido
piridina-agua
hiprico-etanol.