Bioqumica Clnica

2 aula FFFCMPA
Prof Liane Rotta

Prevalncia ou Probabilidade Pr-Teste

Caractersticas do paciente (histria, exame fsico e
resultados prvios de testes) + prevalncia de uma
doena, numa determinada populao

Probabilidade de que um indivduo tenha uma

doena em um determinado momento.
OU
Reflete a proporo de pacientes com caractersticas
semelhantes, no qual uma determinada doena seria
esperada.

Desempenho dos testes

laboratoriais

Adequados:
Desempenho tcnico
Benefcios operacionais
Desempenho diagnstico
Benefcios clnicos
Benefcios financeiros

Desempenho dos testes laboratoriais

Benefcio clnico: efeito que o uso do teste ter na
estratgia diagnstica, na estratgia teraputica ou no
desfecho clnico.
Benefcio operacional:
Diminuio:
no tempo de internao de um paciente
na necessidade de recursos humanos
na utilizao de outros recursos de sade.

Benefcio econmico: no bem-estabelecido na rea de

assistncia sade

Desempenho dos testes laboratoriais

1. Desempenho tcnico:

preciso, acurcia (exatido)

linearidade (faixa de valores mensurveis e interferentes)
fatores de variabilidade pr-analticos - podem limitar o benefcio do
teste na rotina.

2. Desempenho diagnstico:

sensibilidade
especificidade
valor preditivo positivo ou negativo
taxa de verossimilhana (likelihood ratio)

Caractersticas de desempenho diagnstico levam em

considerao a prevalncia da doena na populao.

1. Desempenho tcnico

Alta
Baixa

* mosca: o que se quer

diagnosticar.

ACURCIA

ACURCIA: capacidade
de centralizar os tiros no
alvo.
PRECISO:
capacidade
de concentrar os disparos
numa
regio
reprodutibilidade
dos
valores)

Baixa

Alta

PRECISO

2. Desempenho diagnstico
Sensibilidade e especificidade: probabilidades dos resultados
dos testes, considerando a presena ou ausncia de doena.
SENSIBILIDADE: a probabilidade de um teste + em pacientes
onde a doena est presente taxa de verdadeiro +.
Falso negativo: pacientes com a doena, que tm um resultado do
teste negativo.

ESPECIFICIDADE: probabilidade de um teste - onde a doena

no est presente taxa de verdadeiro negativo.
Falso positivo: pacientes sem a doena, que tm um resultado do
teste +

Curva ROC
Exame A

Sensibilidade

Demonstra a relao entre o

ndice de verdadeiros +
(S) e falsos + (1 E), de
um teste.
O clculo preciso obtido
medindo-se a totalidade da
rea sob a curva ROC.
Utilizadas para comparar a
capacidade preditiva de 2
testes: quanto melhor o
teste, maior a rea sob a
curva.

Exame B
Sem capacidade
discriminatria

1 - Especificidade

Como interpretar um teste + ou -

Sangue
oculto
Positivo

Ca colo

Sem Ca colo

Total

24 (v+)

271 (f+)

295

Negativo

5 (f-)

6911(v-)

6916

Total

29

7182

7211

Tipos de Amostras em Laboratrio

de Bioqumica
Sangue Venoso - soro ou plasma
Sangue Arterial
Sangue Capilar
Urina
Fezes
Lquor
Escarro e Saliva
Tecidos e clulas
Aspirados (lquidos: pleural, asctico, sinovial,
duodenal)
Clculos Renais

Coleta de sangue

Sangue total: colhido com anticoagulante, contm todos os

elementos celulares e constituintes, com exceo
daquele removido pelo anticoagulante.

Plasma: poro lquida do sangue anticoagulado

Contm os fat. coagulao, exceto aquele removido
pelo anti-coagulante
O fator ausente, quando acrescentado em
concentraes apropriadas, restabelece a coagulao

Soro: poro lquida do sangue coagulado

No contm os elementos celulares, nem a maioria dos fatores da
coagulao
Contm: lipdios, acares, protenas, hormnios, produtos do
metabolismo....

Diferenas consideradas

Coleta de sangue - cuidados

Luvas
Assepsia
Horrio da coleta
Identificao da amostra
Avaliar o volume de sangue a ser retirado e selecionar os
tubos apropriados
Soltar torniquete e depois retirar a agulha
Tempo do processamento
Uso de medicamentos
Escolha do anticoagulante
Homogeneizao da amostra (espuma, hemlise)

Coleta da Amostra
Coleta com Seringa

Sistema a vcuo

O sistema com vcuo consiste de uma agulha, um

adaptador tubo-agulha e o tubo de coleta.
Volume de sangue determinado pelo seu vcuo.
OBS: Seringas para pacientes com veias difceis.

Coleta de sangue
sistema vcuo

Anticoagulante

O sangue colhido com anticoagulante deve ser cuidadosamente

homogeneizado por inverso (5 8 vezes).
Manter sempre a proporo de sangue e anticoagulante correta
para obter qualidade e quantidade de volume necessrio ao exame.
As amostras para hemograma devem ser processadas o mais
rpido possvel. Se caso no for possvel, preserve as amostras
a uma temperatura de 4oC at no mximo 24 horas.
O esfregao sangneo deve ser feito at no mximo 3 horas aps
a colheita.
Verificar a ausncia de hemlise, fibrina ou microcogulos, pois
a presena destes causa alteraes nas contagens celulares.

Tipos de amostra: sangue venoso

Obtido:

Jugular
Externa
Dorso da mo ou do p
Veias da fossa antecubital: mediana, baslica ou
ceflica

Fornece maior quantidade de sangue

Cuidado com pacientes com tendncia
hemorrgica

Sangue venoso
Preparar a seringa e a agulha,
Escolher a veia mais proeminente apalpando-a (mediana, baslica,
ceflica).
Garrotear 5 cm acima do local de coleta, pedir ao paciente para
fechar a mo.
Fazer a assepsia, esperar secar, fixar a veia (distendendo a pele
do paciente).
Introduzir a agulha de uma s vez atingindo o interior da veia (com
o bisel para cima).
Soltar o garrote
Pedir ao paciente para abrir a mo e colher o volume desejado.
Retirar a agulha.
Faa compresso com o algodo.
Distribuir o sangue nos frascos adequados.
Desprezar o material adequadamente.

Tipos de amostra: sangue capilar

Pode ser obtido a partir da ponta da orelha
ou ponta de dedos, ou do calcanhar (em
crianas)
Fornece pouca quantidade de sangue
Evitar regies inflamadas
Indicaes: tipagem sangunea, teste do
pezinho, glicemia.

Procedimento:

Aquecer o local se estiver frio

Fazer assepsia
Perfurar com lanceta os locais indicados
Deve-se desprezar a primeira gota (lquidos
tissulares).
Ao trmino da coleta, limpar o local e colocar
o curativo.

Tipos de amostra: sangue arterial

Local: artria radial (punho), femural (virilha) ou braquial (cotovelo)

RN: catter na artria umbilical

Usado para a avaliao da gasometria: pH, O2 e CO2....

Anticoagulante de escolha: heparina

Procedimento:

Fazer a assepsia.
Preparar o material.
Para a puno arterial no se deve garrotear.
Na gasometria o sangue no pode ser retirado da seringa.
Observao: ao trmino da puno arterial o local deve ser fortemente
comprimido durante, no mnimo, 10 minutos para evitar os hematomas graves.

Complicaes decorrentes das

punes
Hematomas: pode ocorrer se o profissional tirar a
agulha antes do garrote, transfixar a veia ou, em puno
arterial, no for comprimido adequadamente o local;
Alergia: ao lcool iodado (deve-se perguntar antes);
Contaminaes: devido assepsia mal feita ou ao uso
de material no-descartvel (estril) contaminado.

Anticoagulantes
So substncias usadas para prevenir a
coagulao do sangue e evitar a sua
deteriorao
Ca++
Pr-trombina
Trombina
Fibrinognio

Fibrina

Anticoagulantes
EDTA: K2EDTA, K3EDTA, Na2EDTA
Tampa lils
Quela Ca++ de forma irreversvel no pode ser usado para
provas de coagulao
Ac de escolha em hematologia: 0,5 mL para 5 mL sangue
Pequenas quantidades favorecem a coagulao
Grandes quantidade prejudicam a morfologia celular
Plasma (EDTA) pode ser usado para anlises bioqumicas,
exceto para glicose, Na+, K+ e Ca++

Anticoagulante
Citrato de Sdio
Tubo tampa azul
Citrato + clcio: liga-se de forma reversvel, podendo ser
usado nas provas de coagulao
Dilui o sangue
Usado como anti-coagulante nas transfuses
sanguneas (no txico)
Proporo sangue: anti-coagulante
VSG: 1:4
Provas de coagulao 1:9

Anticoagulante
Heparina:

Tampa azul escuro ou verde

Anti-coagulante natural
Neutraliza a trombina, impedindo a formao de fibrina
10 a 50 mUI/mL sangue (1mg = 130UI)
Sal de Na+,K+ em frasco de 5000UI (0,1mL de heparina/23mL de sangue)
Vantagens:
No altera a morfologia e o tamanho celular (timo)
No tem ao osmtica sobre as hemcias

Desvantagens:
Hematologia: fundo do esfregao azulado
Preo

Usado para: dosagem de metais (Pb, Zn, Cu...) e gasometria

Tubos/cor/setor
Tampa

Anticoagulante

Setor

Material

EDTA

Hemato/Bioq.

Sangue

Gel separador com

ativador de cogulo

Bioqumica ou
Imunologia

Soro

Siliniconizado sem
AC

Bioqumica ou
Imunologia

Soro

Citrato de sdio

Coagulao

Plasma

Fluoreto de sdio e
EDTA

Bioqumica

Plasma

Sequncia de coleta recomendada

1.
2.
3.
4.

Tubos sem aditivos

Tubos para amostras estreis
Tubos para provas de coagulao
Tubos com outros aditivos (ex: fluoreto,
EDTA e gel)

Repertrio da Anlises

Etapa pr-analtica:
Preparo do paciente

1. O paciente foi corretamente preparado?

2. O paciente est em uso de medicamentos
provavelmente interferentes?

Repertrio da Anlises
Obteno da Amostra
1. Foi conferida a identificao do paciente?
2. A amostra foi obtida no momento
adequado?
3. Foi utilizado o anti-coagulante correto?
4. A amostra foi conservada corretamente?
5. A identificao est correta? No houve
troca de amostras?

Repertrio da Anlises
Processamento da amostra
1. As clulas foram separadas no tempo
correto?
2. O armazenamento foi correto (refrigerao,
proteo da luz)
3. A amostra est turva ou hemolisada e
adequada para o teste?

Repertrio da Anlises

Etapa analtica:
Pipetagem da amostra

1.
2.
3.
4.
5.

A vidraria e ponteiras esto corretamente

limpas?
As ponteiras esto bem conservadas e de boa
qualidade
Foi utilizada a pipeta correta?
A pipetagem foi correta?
Troca de amostras?

Repertrio da Anlises

Etapa analtica:
Adio do reagente

1.
2.
3.
4.
5.

O reagente foi corretamente preparado?

Est dentro do prazo de validade e foi
armazenado corretamente?
Ocorreram modificaes visuais no reagente
(turvao, precipitao, mudanas de cor)
Foi pipetado o volume recomendado?
A mistura reagente/amostra foi homogeneizada?

Repertrio da Anlises

Etapa analtica:
Incubao

1.
2.

3.

O tempo e a T de incubao esto corretos?

Na dosagem de enzimas, aps a mistura de
amostra e substrato, foi observado o tempo
crtico de incubao?
O nvel do banho-maria estava superior ao
nvel dos reagentes nos tubos?

Repertrio da Anlises

Etapa analtica:
Medida Fotomtrica

1.
2.
3.
4.

Manuteno do aparelho?
Foram verificados os zeros e ?
Cubeta limpa e bem posicionada?
Volume de reagente suficiente para leitura?

Repertrio da Anlises

Etapa ps-analtica:
Clculos

1. Esto corretos?
2. O resultado est dentro da linearidade?
3. Foi feita a diluio da amostra e a diluio
foi considerada no momento dos clculos?

Repertrio da Anlises

Etapa ps-analtica:
Curva de calibrao ou fator

1. A curva de calibrao ou fator esto

corretos?
2. O valor do fator est prximo daqueles
anteriormente obtidos?

Repertrio da Anlises

Etapa ps-analtica:
Valores dos controles

1. Os valores dos controles esto dentro dos

limites estabelecidos?
2. Observam-se tendncias ou desvios na
anlise dos mapas de controle?

Repertrio da Anlises

Etapa ps-analtica:
Resultados

1.
2.
3.
4.

Esto legveis para impedir erros de interpretao?

Esto limpos, com digitao de boa qualidade?
Valores de referncia - metodologia?
possvel comparar os resultados com o quadro
clnico do paciente, para confirmao de resultados
fora da faixa de referncia?

Histria de caso
Foi retirada uma amostra de sangue de uma
mulher de 65 anos para verificar sua
concentrao de potssio no soro, j que
durante algum tempo ela tomou diurticos
base de tiazida. O clnico geral deixou a
amostra no seu carro e na manh seguinte a
deixou no laboratrio.
Imediatamente
depois
da
dosagem
o
bioqumico telefonou para o mdico. Por qu?

Como so expressos os resultados

bioqumicos?
Quantidade do analisado em um volume de

amostra.
O SI preconiza expressar os resultados em

unidades molares

Mol/L

No Brasil utiliza-se principalmente mg/dL ou

mg%

Tipos de Reaes Bioqumicas

Reao
Colorimtrica

Ponto final

Reao
Ultravioleta

Cintica de tempo fixo

Cintica contnua

Cintica de
dois tempos

Tipos de Reaes em Bioqumica Clnica

Reaes de Ponto Final:
Reaes que formam um produto cuja
concentrao chega a um ponto mximo,
permanecendo inalterada por um determinado
tempo, em funo da estabilidade do produto.
Muitos ensaios usam esta reao e a concentrao
do analito medida por leituras fotomtricas.
Bastante utilizada, tanto para reaes manuais,
quanto automatizadas.

Reao de Ponto Final

Absorbncia (nm)

0,6
0,5

0,4

0,3
0,2
0,1

a
0
0

10

12

14

Tempo (minutos)

A: incio da formao do produto

B-C: perodo de estabilidade onde a medida fotomtrica realizada
C: perda da estabilidade do produto

Tipos de Reaes em Bioqumica Clnica

Reaes cinticas:
A velocidade de formao do produto
medida durante um intervalo de tempo.
Geralmente
enzimticas.

aplicada

dosagens

Reao Cintica Contnua

medidas contnuas
Absorbncia (nm)

0,35

0,3

D6

0,25
0,2

b
a

D3
D1

0,15
0,1
0,05
0
0

10

Tempo (minutos)

A-B: fase inicial da reao (V no constante)

B-C: reao com V constante onde pode-se calcular o
abs/minuto (D1-D6), usadas para calcular o resultado
C: reduo da V da reao, por consumo do substrato

12

14

Vantagens da reao cintica contnua

Elimina o uso de brancos (1 leitura o branco).
A monitorizao contnua da abs permite calcular a vel. da
reao, possibilitando, nos clculos, considerar os intervalos
onde a velocidade da reao constante.
Os curtos tempos de incubao minimizam a possibilidade de
inibio pelo produto e reduzem o tempo total.
Reaes que usam o UV so mais facilmente adaptveis a
uma grande variao da atividade enzimtica.
Facilmente automatizveis.

Importante: controle da T

Reaes Cinticas
Reaes cinticas de tempo fixo
Quando as reaes utilizam um tempo fixo
de incubao e a formao de produtos
interrompida por qualquer processo.

Vantagens da reao cintica de tempo

fixo
No requer fotmetros com T controlada, possibilitando
a incubao em B.M com T constante.
Todas as dosagens enzimticas podem ser
interrompidas, mas nem todas podem utilizar uma
reao cintica contnua.
Quando a reao colorimtrica, pode-se utilizar um
sistema de reagentes que formam produtos com maior
abs e obter uma sensibilidade melhor que nas reaes
cinticas contnuas.
Facilmente automatizada.

Vantagens da reao cintica de tempo

fixo
Reaes que usam NAD+/NADH, necessitam menor
quantidade, reduzindo o custo do reagente.
Muitas vezes pode-se eliminar as reaes acopladas,
necessrias nas reaes de cintica contnua, reduzindo
os problemas de otimizao e de custos dos reagentes.
Nas dosagens de amostras com elevada atividade
enzimtica pode-se reduzir o tempo de incubao e
eliminar a diluio da amostra.
Cuidado: Rigoroso controle do tempo e da T.
Intervalo entre vrias amostras.

Reao Cintica de Dois Tempos

0,4
Absorbncia (nm)

0,35
0,3
0,25
0,2

0,15

0,1
0,05
0
0

30

60

90

120

150

180

210

240

270

300

Tempo (segs)

Uma das diferenas de Abs (B-A, C-B, D-C, e-D) pode

ser usada para clculo do resultado.