Practica de Laboratorio Corre Games

INDICE
Pg.
ndice i
Normas de seguridad que deben seguirse en un laboratorio 1
Material bsico de laboratorio de bioqumica su reconocimiento y empleo ..
Preparacin de soluciones con unidades fsicas de concentracin .. 7

Preparacin de soluciones con unidades qumicas de concentracin .. 11
Ejercicios de preparacin de soluciones 13
Determinacin
del efecto
de la concentracin del sustrato sobre la actividad
enzimtica .. 16
Ejercicios de termodinmica .. 22
Reacciones generales de carbohidratos . 26
Determinacin cuantitativa de los azcares reductores por el metodo de Lane-Eynon
(Fehling modificado) ...........................................................
33
Colorimetra nociones generales .... 37

Determinacin de glucosa en sangre total . 41
Determinacin cualitativa de aminocidos y protenas .... 45
Identificacin de aminocidos por cromatografa sobre papel .. 52
Digestin de protenas ... 56
Reconocimiento de las caractersticas de los lpidos ..... 65
ii
UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

NCLEO ZARAZA
REA DE MEDICINA VETERINARIA
ASIGNATURA: Bioqumica
NORMAS DE SEGURIDAD QUE DEBEN SEGUIRSE EN UN LABORATORIO
(DOCENCIA INVESTIGACIN)
1.
Los equipos y materiales de laboratorio deben ser manipulados con el debido cuidado
(siguiendo las pautas de los manuales).
2.
Nunca trabaje solo en el laboratorio o si alguien no est enterado de su presencia
en el mismo.
3.
No realice experimentos NO AUTORIZADOS.
4.
Infrmese de la ubicacin del extinguidor de incendios, de la ducha de seguridad y
del gabinete de primeros auxilios.
5.
Es imprescindible tener en el laboratorio manual o instructivo que indiquen que
debe hacerse en el caso de que algn reactivo qumico entre en contacto con los ojos, la piel,
la boca o las vas respiratorias.
6.
Est consciente de los peligros involucrados en el manejo de aparatos elctricos.
Todo aparato elctrico debe estar debidamente conectado a tierra.
7.
No fume en el laboratorio.
8.
Todos los cilindros de gases comprimidos deben ser sujetados por una cadena en
forma segura. Adems, deben transportarse utilizando un vehculo apropiado.
9.
vidrio.
Use pantalla de seguridad cuando existe el peligro de explosin de aparatos de
10. En el laboratorio, mantenga protegido los ojos en todo momento (si es posible, con
lentes de seguridad). El uso de lentes de contacto, an que se mantengan debajo de los lentes
de seguridad, est completamente prohibido.
11. No pruebe el gusto de ningn reactivo qumico en el laboratorio. No use el laboratorio
como sitio para comer ni ingerir alimentos, bebidas; utilizando material de vidrio del
laboratorio.
12. Evite respirar humo o emanaciones gaseosas de cualquier tipo. Cuando se produzcan
gases, durante la realizacin de un experimento, este se debe llevar a cabo bajo la campana de
extraccin de gases.
1
13. No llene las pipetas con reactivos qumicos por succionamiento con la boca. Use
bulbos de succin.
14. No introduzca sin lubricacin, tubos de vidrio a travs de los tapones de goma. Al
insertar dichos tubos dentro del tapn debe proteger sus manos con un pao (preferiblemente
de tela). Durante esta operacin, mantenga sus manos lo ms cerca posible una de la otra.
15. El uso de una bata de laboratorio es esencial cuando se usa ropa fcilmente
combustible. Adems proporciona una proteccin adecuada cuando se trabaja con reactivos
qumicos. El calzado que se utiliza debe ser lo suficientemente protegido.
16. Aquellas personas que usen el cabello largo, deben mantenerlo recogido cuando
trabajen en el laboratorio (el cabello es un material fcilmente combustible).
17. Para preparar soluciones diluidas de cidos, a partir de soluciones muy concentradas
deben verterse cuidadosamente el cido sobre el agua, (nunca debe realizarse el proceso
inverso) manteniendo agitacin constante.
18. Si soluciones concentradas de cidos llegan a entrar en contacto con la piel, nunca lave
de inmediato la parte afectada con agua corriente. Lo primero que debe hacerse es eliminar
todo el cido posible utilizando toallas de papel absorbente o tela y luego lavar la parte
afectada con agua corriente por espacio de 10 15 minutos.
19. Todas las personas que trabajen en el laboratorio deben mantener la calma en caso de
ocurrir un accidente en el mismo. Sepa lo que usted hara especialmente en el caso de
desmayos, quemaduras o heridas producto de dichos accidentes.

NCLEO ZARAZA
ACTIVIDAD PRCTICA N 1
MATERIAL BSICO DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
RECONOCIMIENTO Y EMPLEO
La bioqumica es una ciencia experimental, en la que se hace constante la aplicacin de
experiencias, enunciados, leyes, y conocimientos de ciencias bsicas como son la qumica,
matemticas, fsica y biologa; por lo cual el estudiante debe enfrentarse a un laboratorio de
qumica, en el cual deber llevar a cabo las experiencias prcticas, para lograr los objetivos de
la materia.
Debido a lo anterior expuesto, el primer contacto prctico ser con el material de
vidrio, el cul utilizar permanentemente en el laboratorio de bioqumica, por lo tanto se hace
indispensable que el estudiante se familiarice, conozca, domine su uso y cuidado.
MATERIAL DE LABORATORIO
1) VASO DE PRECIPITADO BEAKER: es un recipiente de vidrio, cuya capacidad
vara entre los 5 y 3.000 ml. Se utiliza para contener, calentar y recoger lquidos, adems de
efectuar precipitacin, titulacin, etc.
2) CILINDRO GRADUADO PROBETA GRADUADA: es un cilindro de vidrio con
una base generalmente hexagonal, que lo mantiene vertical. Los ms utilizados son de 10, 25,
50, 100, 250, 500, 1.000 y 2.000 ml de capacidad. Se utiliza para mediciones rpidas de
lquidos que no requieran de gran precisin.
3) MATRAZ: es un equipo de vidrio redondeados y de base plana. Se utilizan para
preparar soluciones, no son recomendables para calentar lquidos. Su capacidad vara entre
los 25 y 2.000 ml.
Existen los matraces aforados, que presentan un cuello largo y estrecho que permite
realizar lecturas exactas del lquido contenido en l, ya que tienen un aforo (marca en el
cuello). Presentan tapa esmerilada. Se usan para preparar y contener cantidad exacta de
soluciones, no para medir soluciones.
4)
ERLENMEYER o FIOLA: recipiente de vidrio con forma cnica. Se utiliza para
calentar lquidos, preparar soluciones, titulaciones, etc. Su capacidad vara entre 10 y 1.000
ml.
5) BURETA: son tubos de vidrio, graduados en milmetros (dcimas, centsimas), las hay
tambin de divisiones menores (micro-buretas). En la parte inferior presentan una llave
3
esmerilada y cnica. Esta llave debe manipularse con la mano izquierda, con la otra mano se
sostiene la varilla de vidrio o recipiente para agitar el lquido que se vierte de la bureta. Se
utilizan para mediciones exactas de lquido (titulaciones).
6) PIPETAS: son tubos de vidrio. Pueden ser aforadas y graduadas.
exclusivamente para medir volmenes de lquidos que van a ser trasvasados.
Se utilizan
Las PIPETAS AFORADAS (VOLUMTRICAS), pueden tener uno o dos aforos, las que
presentan un aforo sirven para medir lquidos desde el aforo hasta la parte inferior y las que
tienen dos aforos, miden volumen de lquidos desde el aforo superior hasta el superior.
Las PIPETAS GRADUADAS, tienen divisiones menores entre los extremos, que puede
ser en dcimas, centsimas y milsimas. Existen dos clases de pipetas graduadas: las que
miden volumen desde el 0 (cero) hasta el extremo inferior de la pipeta y las que miden
volmenes desde el cero hasta la ltima graduacin antes del extremo inferior.
Al tomar una pipeta con la mano, nunca se debe tocar el extremo inferior de la misma, esto
es una medida de precaucin, sobre todo con aquellas pipetas con cidos lcalis, adems
para evitar contaminacin tanto en la solucin como en la reaccin. Otra precaucin que se
debe tener con las pipetas, es que estas deben ser colocadas de tal manera que el lquido
sobrante no se deslice hasta la parte superior.
Procedimiento para el enrasado de la pipeta: se introduce el extremo inferior de la pipeta
dentro del lquido y se aspira por la parte superior, teniendo la precaucin de que el extremo
inferior este dentro del lquido de lo contrario se corre el riesgo de aspirar aire y lquido, que
llegar a la boca del usuario, con el consiguiente peligro. Una vez que el lquido ha
sobrepasado el nivel deseado, se retira de la boca e inmediatamente se tapa el extremo (de la
pipeta) con la punta del dedo ndice, presionando de forma suave y dejando caer, en el mismo
recipiente donde se aspir el lquido la cantidad sobrante hasta llevar el menisco al cero de la
pipeta.
7) TUBOS DE ENSAYOS: son tubos de vidrio, de diferentes dimetros y largo, son uso
mltiples en un laboratorio de qumica.
8)
TUBOS PARA CENTRIFUGADORA: son de vidrio o plstico, cnicos cilndricos
y resisten altas velocidades en la centrifugadora. Se utiliza para decantar soluciones que
contienen slidos en suspensin.
9)
PISETA: envase plstico, con un dispositivo que permite verter lquido.
Para evitar error de paralaje en las lecturas de cualquier material de vidrio graduado, se debe
considerar la tendencia de los lquidos al adherirse a las paredes del recipiente y formar una
superficie lquida cncava convexa llamada menisco. Por lo tanto para leer el volumen del
lquido, se debe colocar la vista a la misma altura del menisco (ni por encima, ni por debajo
del menisco) y determinar la lnea de medida tangente a ste, cuando las soluciones son
oscuras se toma la lnea que coincida con el pico del menisco.
OPERACIONES COMUNES EN UN LABORATORIO DE BIOQUMICA

1) CALENTAMIENTO: el calentamiento es una operacin que se puede llevar a cabo
utilizando diversos medios, los que se emplean mas frecuentemente en el laboratorio son: a
llama directa usando gas de petrleo (propano) y a temperatura controlada (bao de Mara y
estufa) usando la electricidad. El primero mtodo se utiliza con sustancias que al calentarlas
no son inflamables a la velocidad de la llama.
2) PULVERIZACIN: procedimiento que consiste en reducir un slido a partculas muy
pequeas. Existen sustancias que se deben pulverizar para facilitar su solubilidad, puesto que
la divisin de las partculas hace que se aumenten notablemente la superficie que el slido
ofrece al disolvente, y por lo tanto se multiplica la interaccin entre el solvente y soluto.
3) FILTRACIN: consiste en hacer pasar una suspensin de un slido (o de un gas) a
travs de un material poroso o filtro, a los efectos de separar las partculas del slido, las
cuales quedan retenidas en el filtro.
4) DECANTACIN: pueden existir mezclas heterogneas de slidos y lquidos de
distinta densidad y que haya necesidad de separarlos. En caso de slido y lquido, la mezcla
se deja en reposo en un recipiente adecuado (por ejemplo vaso de precipitacin). Al cabo de
un tiempo los componentes slidos ms densos se depositarn en el fondo del recipiente.
5) CENTRIFUGACIN: cuando se desea separar componentes de una mezcla que
demandara mucho tiempo por decantacin simple simplemente hay veces en que esta
decantacin no se produce dentro del tiempo requerido, debido a la poca diferencia de las
densidades de dichos componentes, se recurre al procedimiento llamado centrifugacin. La
centrifugacin se lleva a cabo con aparatos especiales (centrfugas) que constan de un cabezal
con soportes porta tubos, en los cuales se colocan los recipientes con el material a
centrifugar. Este cabezal gira accionado por un motor a velocidad regulable. Por lo general,
el cabezal o motor esta recubierto por una cmara metlica con una tapa o cubierta en la pared
superior, que permite cerrarla en forma firme y segura. La rotacin genera una fuerza
centrfuga que aumenta la velocidad de sedimentacin de las partculas ms densas,
permitiendo as la separacin en un tiempo ms corto.
Los objetivos de la prctica son:

- Que el estudiante sea capaz de reconocer por nombre y estructura los distintos
materiales y equipos utilizados en el laboratorio.
- Que el estudiante conozca el manejo adecuado de los distintos materiales y
equipos del laboratorio.
- Que el estudiante sepa cul es el uso apropiado que se le debe dar a los
distintos materiales y equipos del laboratorio.
5
PROCEDIMIENTO
Dibuje e identifique los materiales y equipos que estn en el laboratorio

NCLEO ZARAZA
PREPARACIN DE SOLUCIONES
CON UNIDADES FSICAS DE CONCENTRACIN
INTRODUCCIN
Las sustancias puras, como se sabe, se presentan en estado lquido, slido y
gaseoso. Por lo general, en la prctica se presentan mezclas de estas sustancias puras y las
mezclas pueden ser homogneas o heterogneas: estas ltimas constan de distintas fases y sus
propiedades fsicas y qumicas se mantienen invariable en la mezcla. Las mezclas
homogneas constan, por el contrario, de una fase nica cuyas propiedades difieren de las de
sus componentes.
Las disoluciones o soluciones, son mezclas homogneas de iones, tomos y
molculas de dos o ms sustancias diferentes. En el estudio de las disoluciones se emplean los
trminos de soluto (es la sustancia disuelta) y solvente o disolvente (es la sustancia que
disuelve o el medio de dispersin). Por lo general se suele llamar solvente a la sustancia ms
abundante, teniendo en cuenta que el agua es el solvente por excelencia. Por lo tanto las
disoluciones estn formadas por soluto ms solvente o disolvente (Disolucin = soluto +
disolvente).
CLASIFICACIN DE LAS SOLUCIONES
1.
Segn el nmero de componentes las disoluciones, pueden ser: Binaria compuesta
por dos componentes, Ternaria que presenta tres componentes, Cuaternaria con cuatros
componentes y etc.
2.
Segn el estado fsico de la disolucin, puede ser: lquido, slido, y gaseoso. Cada
uno de estos se subdividen de acuerdo al estado fsico del solvente y del soluto puro en:
Solvente Gaseoso:
Solvente Slido:
Soluto Gaseoso: todas las mezclas gaseosas, ejem.: aire.

Soluto Lquido: el vapor de agua en el aire.
Soluto Slido: polvo en el aire.
- Soluto Gaseoso: Hidrgeno en Paladio metlico.

- Soluto Lquido: Mercurio en plata (amalgama) en cobre
etc.
Soluto Slido: Oro y plata, cobre y cinc (latn),
hierro y carbono (acero)
7
Solvente Lquido:
Soluto Gaseoso: Oxgeno en agua, soda.

Soluto Lquido: Alcohol y agua, etc.
Soluto Slido: Sal en agua, etc.
SOLUCIONES SATURADAS, SOBRESATURADAS, SOLUBILIDAD Y

CONCENTRACION.
Algunas substancias como el alcohol y agua son miscibles entre s, en todas
proporciones, pero en la mayora de los casos, la cantidad de una sustancia que se disuelve en
otra tiene lmites definidos. Como el caso del azcar o la sal que se van disolviendo en el
agua, a medida que se agita, pero llega un momento que si agrega mas soluto (azcar o sal)
este no se disuelve (el solvente es incapaz de disolver mas soluto), por lo tanto la cantidad de
soluto disuelto es lo mximo que el solvente puede disolver a una temperatura determinada y
es lo que se llama solucin saturada. Las soluciones sobresaturadas, son aquellas soluciones
que contienen una cantidad de soluto disuelto mayor a lo que le corresponde como solucin
saturada a esa temperatura; estas soluciones son muy inestables y tiende a precipitarse el
exceso de soluto para convertirse en solucin saturada. La solubilidad es la capacidad que
tiene una determinada cantidad de soluto de disolverse en determinada cantidad de solvente.
Concentracin
C =
Cantidad de soluto
Cantidad de solucin
Si se diluye una solucin aumenta el volumen y disminuye la concentracin, pero la

cantidad de soluto permanece constante. Si Cant. de soluto = C * Cant. de solucin, por lo
tanto se tiene que la Cant. Soluto 1 = Cant. soluto2, lo que implica que la C1 * V1 = C2 * V2
(V= Volumen).
Para expresar la concentracin se utilizan las unidades fsicas y qumicas.
Las unidades fsicas de peso mas utilizadas son:
gramo (g)
1 g = 103 mg = 106 g = 109 ng = 1012 pg
miligramo (mg)
1 mg = 10-3 g
microgramo (g)
1 g = 10 -6 g
nanogramo (ng)
1 ng = 10 -9 g
picogramo (pg)
1 pg =10 -12 pg
Las unidades fsicas de volumen mas utilizadas son:

litro (l)
1 l = 103 ml = 106 l = 109 nl = 1012 pl
mililitro (ml)
1 ml = 10-3 l
microlitro (l)
1 l = 10 -6 l
nanolitro (nl)
1 nl = 10 -9 l
picolitro (pl)
1 pl =10 -12 pl
Centmetro cbico = cm 3 = cc
1 ml = 1, 00028 cc pero se consideran iguales (1 ml = 1 cc). En lenguaje cientfico se
utiliza el trmino mililitro (ml)
UNIDADES FSICAS DE CONCENTRACIN
Las ms comnmente utilizadas son:
a. Gramos de soluto por litro de solucin (g/l) y miligramos de soluto por mililitro
de solucin (mg/ml).
b. Partes por milln (ppm): expresa los miligramos de soluto presentes en un litro
de solucin (mg/l) o los microgramos por mililitro de solucin (l/ml) (g/1x106ml).
c. Tanto por ciento en peso (% p/p): se utiliza cuando el soluto y solvente vienen
dadas en unidades de peso y expresa los gramos de soluto contenidos en 100 g de solucin.
d. Tanto por ciento en volumen (% v/v): se utiliza cuando el soluto y solvente son
lquidos y expresa los mililitros de soluto contenidos en 100 ml de solucin.
e. Tanto por ciento de peso / volumen (% p/v): son los gramos de soluto presentes
en 100 ml de solucin.
- Utilizar las unidades fsicas para expresar la concentracin de las soluciones.
- Conocer y comprender los trminos de soluciones saturadas y sobresaturada,
solubilidad, concentracin, soluto y solvente.
- Conocer y comprender la forma de realizar los clculos y transformaciones entre
los varios tipos de unidades fsicas.
- Preparar soluciones a partir de solutos y solventes, expresando sus concentraciones
en las diferentes unidades fsicas.
- Preparar soluciones a partir de soluciones concentradas, expresando sus unidades
fsicas.
PROCEDIMIENTO
1.- Preparacin de una solucin por pesada.
a) Calcule el peso de ___________________________ necesario para preparar ______ ml
de solucin a la concentracin ________________.
b) Pese en un vidrio de reloj, previamente tasado, la cantidad de soluto calculada.
c) Lave con agua un beaker y escrralo. Transfiera al beaker la cantidad de soluto pesada,
luego empleando una piseta con agua destilada remueva cualquier soluto que haya
quedado adherido al vidrio de reloj dejando caer el lavado en el beaker.
Si no tiene Beaker, transfiera la cantidad pesada a un matraz aforado limpio de
_______ml usando un embudo de tallo corto, dejando caer agua destilada de una piseta al
vidrio de reloj, recibiendo el agua del lavado en el matraz.
d) Agregue agua destilada hasta aproximadamente la mitad de la capacidad del matraz y
agite para disolver totalmente el slido.
e) Agregue agua hasta el inicio del cuello del matraz y luego mediante una piseta agregue
ms agua hasta que el menisco de la solucin sea tangente a la lnea del aforo. Tape el
matraz y agtelo para homogeneizar la solucin.
f) Transvase la solucin a un frasco.
g) Colquele una etiqueta al frasco, indicando: nombre del soluto, concentracin de la
solucin y nombre de quien elabor la solucin.
2.- Preparacin de una solucin por dilucin.
a) Calcule el volumen de ______________________ al _____________________
necesario para preparar ______________ de solucin al ____________.
b) Lave una pipeta con agua destilada.
c) Mida con la pipeta el volumen de _____________ calculado y transfiralo a un matraz
aforado de _________ml previamente lavado con agua destilada.
d) Siga los pasos e, f, y g del experimento N 1.
BIBLIOGRAFA
Sienko, M. y R. Plane. 1974. Qumica. Ed. Aguilar S.A. Espaa. 641 pp.
Slabaugh, W. y T. Parsone 1974. Qumica General. Ed. Limusa, S.A. Mxico. 486 pp.
Lehninger, A. 1990. Bioqumica. Ed. Omega S.A. Espaa. 1117 pp.
10

NCLEO ZARAZA
PREPARACIN DE SOLUCIONES
CON UNIDADES QUMICAS DE CONCENTRACIN
Las unidades qumicas de concentracin conforman el otro grupo de unidades para
expresar la concentracin de las soluciones y son las empleadas comnmente para los medios
o fluidos biolgicos de los seres vivos.
UNIDADES QUMICAS DE CONCENTRACIN
1) MOLARIDAD: un mol es la suma de los pesos atmicos de todos los tomos que
aparecen en la frmula de una sustancia (peso frmula o peso molecular), expresado en
gramos.
Molaridad (M): es el nmero de moles de soluto que estn disueltos en un litro de solucin.
M = N de moles de soluto = mol
1 litro de solucin
1
M = N milimoles de soluto = mmol

1 ml de solucin
ml
2) NORMALIDAD: el equivalente gramo de un elemento o compuesto es la cantidad del

elemento o compuesto que se combina o reemplaza a 8 partes de Oxgeno o 1,008 partes de
hidrgeno o bien que desplaza 11,2 litros de hidrgeno o 5,6litros de oxgeno. Equivalente
gramo de hidrgeno es un tomo gramo, que es igual a 1,008 g de hidrgeno.
El peso equivalente de un elemento es igual a su peso atmico dividido por la valencia.
El peso equivalente de un cido o de una base es igual a su peso molecular dividido por
el nmero de hidrgenos o de grupos hidroxilos sustituibles en la frmula.
El peso equivalente de una sal es igual a su peso molecular dividido por el nmero total
de cargas positivas o negativas del catin o anin de la sal respectivamente.
Normalidad (N): es el nmero equivalente gramo de soluto en un litro de solucin.
N de eq g =
masa de sustancia
Peso Equivalente
N = N de eq g = eq-g
1 litro solucin litro
N = Normalidad
Peso Equivalente =
P. M.
Nval
N = miliequivalente de soluto = meq.

1 ml solucin
ml
eq g = Equivalente gramo.
11

Utilizar las unidades qumicas para expresar la concentracin de las soluciones.
Conocer y comprender los trminos de mol, molaridad, equivalente gramo,
normalidad.
Conocer y comprender la forma de realizar los clculos y transformaciones entre
los varios tipos de unidades qumicas.
Preparar soluciones a partir de solutos y solventes, expresando sus concentraciones
en las diferentes unidades qumicas.
Preparar soluciones a partir de soluciones concentradas, expresando sus unidades
qumicas.
PROCEDIMIENTO
1.- Preparacin de una solucin por pesada.
a. Calcule el peso de ___________________________ necesario para preparar ______
ml de solucin a la concentracin ________________.
b. Pese en un vidrio de reloj, previamente tasado, la cantidad de soluto calculada.
c. Lave con agua un beaker y escrralo. Transfiera al beaker la cantidad de soluto
pesada, luego empleando una piseta con agua destilada remueva cualquier soluto que
haya quedado adherido al vidrio de reloj dejando caer el lavado en el beaker.
Si no tiene Beaker, transfiera la cantidad pesada a un matraz aforado limpio de
_______ml usando un embudo de tallo corto, dejando caer agua destilada de una piseta
al vidrio de reloj, recibiendo el agua del lavado en el matraz.
d. Agregue agua destilada hasta aproximadamente la mitad de la capacidad del matraz y
agite para disolver totalmente el slido.
e. Agregue agua hasta el inicio del cuello de matraz y mediante una piseta agregue ms
agua hasta que el menisco de la solucin sea tangente a la lnea del aforo. Tape el
matraz y agtelo para homogeneizar la solucin.
f. Transvase la solucin a un frasco.
g. Colquele una etiqueta al frasco, indicando: nombre del soluto, concentracin de la
solucin y nombre de quien elabor la solucin.
2.- Preparacin de una solucin por dilucin.
a.
Calcule
el
volumen
de
______________________
al
___________________________ necesario para preparar ___________ de solucin al
________________.
b.
Lave una pipeta con agua destilada y luego con el soluto a usar.
c.
Mida con la pipeta el volumen de ____________ calculado y transfiralo a un
matraz aforado de _______ ml previamente lavado con agua destilada.
d.
Siga los pasos g , h e i del experimento N 1.
BIBLIOGRAFA
Sienko, M. y R. Plane. 1974. Qumica. Ed. Aguilar S.A. Espaa. 641 pp. Slabaugh, W. y T.
Parsone 1974. Qumica General. Ed. Limusa, S.A. Mxico. 486 pp.
12
Lehninger, A. 1990. Bioqumica. Ed. Omega S.A. Espaa. 1117 pp.

NCLEO ZARAZA
EJERCICIOS DE PREPARACIN DE SOLUCIONES
Unidades fsicas de peso y volumen, densidad, unidades fsicas de concentracin de solutos en
las soluciones (mg/ml), (g / l), % (p/p, p/v, v/v). Unidades qumicas de concentracin de
solutos en las soluciones (M), (N).
N 1) A cuntos gramos equivalen los siguientes pesos?
a- 5000 mg.
d- 80000000 pg
b- 500000000 ng
e- 475 dg
c- 10000000 g
f- 0,1075 kg
N 2) Expresar:
a- 45mg en g
b- 10454 g en ng
c- 0,745 g en dg
d- 0,0000000345 g en g
e- 475 dg en g
f- 10875 mg en kg
N 3) A cuntos litros equivalen los siguientes volmenes?

a- 375 ml.
b- 4578000 l
c- 1454,35 dl
d- 800000000 pl
e- 0,250 ml
f- 14875 ml.
N 4) Cuantos gramos de soluto contienen 250 ml de cada una de las siguientes soluciones?
a- 37,5% P/V
b- 1,25 % P/V
c- 90% P/V
d- 0,25% P/V
e- 99% P/V
f- 44,75 %P/V
N 5) Cuantos gramos de soluto contiene 300 g de cada una de las soluciones siguientes?
a- 15,75 % P/P
b- 87,6 % P/P
c- 33,30 %P/P
d- 0,87 % p.p
e- 37,5 % en peso
f- 20 % en peso
N 6) Cul es el volumen que ocupan 150g de una solucin X de densidad 1,45 g/ml?
N 7) Cul es la masa de 375 ml de solucin T de densidad 1,08 g/ml?
13
N 8) Cul es la concentracin en % p/v de una solucin al 37,7 % en peso y de densidad

igual a 0,9 g/ml?
N 9) Cuntos gramos se necesitan para preparar 250 ml de una solucin salina de NaCl al
15 % p/v?
N 10) Cuntos gramos se necesitan para preparar 185g de solucin de KCl al 10% p/p?
N 11) Calcule el Peso Molecular (PM) de las siguientes sustancias:
a- NaCl
d- CH3COOH
b- CaCl2
e- CH3COONa
c- NaOH
f- KMnO4
pat.: Na=22,99; Cl=35,45; Ca=40,07; H=1,0; O=16,0; C=12,0; K=39,10; Mn=59,46
N 12) A cuantos moles equivalen o estn contenidos en?:
abc-
50 g. de NaCl
15 g de HCl
25 g KCl
d- 60 g CaCl2
e- 35 g CH3COOH
f- 10 g CH3COONa
N 13) Calcule el Peso Equivalente (PE) de:

abc-
NaCl
CaCl2
NaOH
d- Ca (OH)2
e- H2SO4 (PA S=32,07)
f- HCl
N 14) A cuantos equivalentes-gramos corresponden o estn contenidos en?:

abc-
15 g de NaCl
20 g CaCl2
35 g NaOH
d- 40 g Ca(OH)2
e- 55 g H2SO4
f- 19 g HCl
N 15) Cuantos gramos se necesitan para preparar?:

a- 500 ml de solucin NaCl al 0,5 moles/l
b- 250 ml de Sol CaCl2 al 1 Molar
c- 200 ml de So de CH3COOH al 0,3 M
d- 600 ml de Sol de NaCl al 0,5 eq/l

e- 10 ml de Sol CaCl2 al 1 Normal
f- 200 ml de Sol de CH3COONa al 0,5 N
N 16) En el laboratorio hay una solucin concentrada de cido ntrico (HNO 3) al 45,18% P/P
y densidad 1,285 g/ml. Cul es la concentracin del HNO3 expresada en P/V.
N 17) Calcule el volumen (expresado en ml) de solucin de HCl al 39,11% en peso, densidad
1,20 g/ml necesarios para preparar 0,5 litros de solucin de HCl al 10% P/V.
14
N 18) Calcule al volumen de H2SO4 al 81,42 p/p y densidad 1,20 g/ml, necesario para
preparar 250 ml de solucin de H2SO4 al 5eq/l. Cmo debe escribirse la etiqueta del frasco
para guardar?
N 19) Diga paso a paso el procedimiento a seguir en el laboratorio, indicando: gramos a pesar
del soluto, el equipo y el material de vidrio y sus medidas, que son necesarios para preparar
las soluciones del ejercicio N 15. Qu deben decir las etiquetas de cada solucin?
N 20) Diga paso a paso el procedimiento a seguir en el laboratorio, indicando: el volumen a
medir del soluto y material de vidrio y sus medidas, que se necesitan para preparar las
soluciones de los ejercicios N 17) y N 18), y finalmente para guardar la solucin Qu debe
escribir en la etiqueta?
RESPUESTAS
1.- a) 5g ; b) 0,5g ; c) 10g ; 1) 1x10-5g ; 1) 47,5g ; f) 107,5g
2.- a) 0,045g ; b) 10454 x109ng ; c) 7,45dg ; d) 0,0345g ; e) 0,475g ; f) 0,011kg
3.- a) 0,3751 l ; b) 4,578 l ; c) 145,435 l ; d) 8x10-4 l ; e) 2,5x10-4 l ; f) 14,875 l
4.- a) 93,75g ; b) 3,125g ; c) 225g ; d) 0,625g ; e) 247,5g ; f) 111,875g
5.- a) 47,25g ; b) 262,8g ; c) 99,9 g ; d) 2,61g ; e) 112,5g ; f) 60g
6.- 103,45 ml
7.- 405g
8.- 33,93%p/v
9.- 37,5g
10.- 18,5g
11.- a) 58,44 g/mol ; b) 110,97 g/mol ; c) 39,99 g/mol ; d) 60 g/mol ; e) 81,99 g/mol ; f) 162,56 g/mol
12.- a) 0,8555 mol ; b) 0,4115 mol ; c) 0,3353 mol ; d) 0,5406 mol ; e) 0,5833 mol ; f) 0,1219 mol
13.- a) 58.44g/eq ; b) 55,485g/eq ; c) 39,99g/eq ; d) 37,035g/eq ; e) 49,035g/eq ; f) 36,45g/eq

14.- a) 0,2566eq ; b) 0,3604 q ; c) 0,8752eq ; d) 1,08eq ; e) 1,1216eq ; f) 0,5212eq
15.- a) 14,61 g , b) 27,7425 g ; c) 3,6 g ; d) 17,532 g ; e) 0,5549 g ; f) 8,199 g
16.- 58,0563 % p/v
17.- 106,54 ml
18.- 62,7341 ml
15

NCLEO ZARAZA
DETERMINACIN DEL EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Una caracterstica especial de la clula, es la capacidad que tiene para llevar a cabo
reacciones qumicas en forma rpida a temperatura ambiente. Esto se debe a la presencia de
un grupo de sustancias proteicas llamadas enzimas, que catalizan estas reacciones de tal
forma, que la velocidad de las mismas sea compatible con los procesos bioqumicos esenciales
para la vida celular. La naturaleza proteica de las enzimas les confiere especificidad; es decir,
que cada enzima por lo general cataliza una determinada reaccin, de all que sean necesarias
miles de ellas para que se realicen las diferentes reacciones qumicas en la clula viva. La
actividad de las enzimas es afectada por factores tales como: concentracin del sustrato,
concentracin de enzima, pH del medio, temperatura del medio, activadores e inhibidores.
Cuando se determina el efecto de un factor sobre la actividad enzimtica, se debe
mantener constantes los otros factores que afectan la actividad de las enzimas.
La catalasa es una enzima que se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza
siendo muy abundante en la sangre, hgado, etc. La funcin de esta enzima es descomponer el
perxido de hidrgeno (H2O2) que se produce en la clula. La reaccin de descomposicin es
la siguiente:
2 H2O2 liq
catalasa
2 H2Oliq
O2 gas
La catalasa es una de las enzimas ms efectivas conocidas, ya que una molcula de ella
puede descomponer 5 millones de molculas de H2O2 por minuto a 0 C.
La actividad de las preparaciones de catalasa puede determinarse por dos mtodos:
a.
Midiendo el volumen de O2 producido por nanometra; o sea, midiendo el
incremento de uno de los productos formados.
b.
Midiendo la concentracin de H2O2 descompuesto; o sea, midiendo la
desaparicin del substrato.
En esta prctica se utilizar el mtodo (b). Para determinar la concentracin de H2O2
descompuesto por la catalasa, se incubar la enzima con una concentracin conocida y en
exceso de H2O2 por un determinado tiempo y a temperatura y pH adecuados. Transcurrido el
16
tiempo de incubacin, la catalasa se inactiva acidificando el medio con H2SO4. Luego se

titula el H2O2 que no ha sido descompuesto por la enzima con una solucin Standard de
permanganato de potasio (KMnO4). Por otra parte, se titula un blanco (control); o sea, un
ensayo en el cual no existe actividad enzimtica y por lo tanto se determina la concentracin
de H2O2 agregada. La reaccin de permanganometra que ocurre es la siguiente:
2KMnO4 + 4H2SO4 + 5H2O2
2KHSO4 + 2MnSO4 + 8H2O
Esta reaccin, el in permanganato de color violeta es reducido por accin del H2O2 a
in manganaso que es incoloro. De all que el punto final de la titulacin con KMnO4 viene
dado por la aparicin de un color rosado proveniente de un exceso de KMnO4.
Determinar el efecto de la concentracin de H2O2 (substrato) sobre la actividad
de la enzima catalasa.
Calcular la velocidad mxima (Vmax) y la constante de Michalelis Menten
(Km), utilizando la grfica de Lineaweaver Burk.
MATERIALES, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTO
MATERILAES POR BATERA
-
Fiolas de 250 ml.

Pipetas graduadas de 5 10 ml.
Buretas de 50 ml.
Soporte universal.
Pinzas para buretas.
REACTIVOS
H2SO4 2N
KMnO4
H2O2 1%.
Buffer Fosfato pH7.
Solucin sangunea 0,1 %.
PROCEDIMIENTO:
a. Ubique 10 fiolas limpias de 250ml, enumrelas del 1 al 10 y preprelas como sigue:

Fiolas N 1 y 2 Aada 2 ml de H2O2. Agregue 8 ml de agua destilada.
Fiolas N 9 y 10 Aada 10 ml de H2O2.
17
b. A cada una de las 10 fiolas agregue 5 ml de buffer pH = 7. Ahora se tendr 10 filas que
contienen 5 concentraciones diferentes de H2O2. Un grupo de 5 filas servir como control
(fiolas impares) y el otro grupo ser incubado con la enzima (fiolas pares).
c. Aada a las 5 fiolas control 5 ml de H2SO4 de concentracin 2eq/L. Agite.
d. Aada a las 5 fiolas a incubar (fiolas pares) 10 ml de enzima.
(OJO): EL TIEMPO DE INCUBACIN DEBE SER CONTROLADO
RIGUROSAMENTE
e. Cinco (5) minutos despus de la adicin de enzima a las fiolas pares, aada 5 ml de H2SO4
2N y agite.
f. Aada 10 ml de la enzima a las fiolas control para complementar el volumen.
g. Titule las 10 fiolas con KMnO4 0,1N hasta obtener un color rosado plido.
h. Calcule los miligramos de H2O2 degradados.
i. Elabore el grfico de Lineaweaver Burk. Revise el fundamento terico y determine los
valore de Km y Vmax.
j. Elabore el valor de Km en mol/l.
Este experimento est resumido en el siguiente cuadro:
FIOLA
H2O2
H2O
BUFFER
H2SO4
ENZIMA
TIEMPO
H2SO4
ml
ml
Min.
ml
ml
ml
ml
1
2
8
5
5
10
2
2
8
5
10
5
5
3
4
6
5
5
10
4
4
6
5
10
5
5
5
6
4
5
5
10
6
6
4
5
10
5
5
7
8
2
5
5
10
8
8
2
5
10
5
5
9
10
5
5
10
10
10
5
10
5
5
OBSERVACIN: Las fiolas con mayor concentracin de H2O2 se mantienen rosadas al
principio de la titulacin, obtenindose un falso punto final. Por lo que al comenzar la
titulacin sta debe hacerse lentamente, gota a gota y agitando hasta que desaparezca este
primer color. Luego la reaccin se hace muy rgida, ya que es autocataltica y desaparece el
problema.
EJEMPLOS DE LOS CALCULOS

1) Al concluir la parte experimental, tendr 10 valores diferentes de KMnO4
correspondientes a los volmenes empleados en la titulacin de las 10 fiolas.
Ejm:
18
Fiola N 1 = 23,7 ml KMnO4

Fiola N 2 = 8,4 ml KMnO4
2) Debido a que los eq-g de KMnO 4 que se consumen es igual a los eq-g de H2O2 que hay
en cada fiola, por tanto se cumple la relacin
VKMnO4 x N KMnO4 = VH2O2 x NH2O2
Sabemos que:
VKMnO4 x N KMnO4 = meq-g. H2O2
Ejem:
Fiola 1
23,7 ml (KMnO4) x 0,05 N (KMnO4) = 1,185 meq H2O2
Fiola 2
8,4 ml (KMnO4) x 0,05 N (KMnO4) = 0,42 meq H2O2
Ya que los equivalentes-gramos de KMnO4 es igual a los equivalentes-gramos de

H2O2, se puede calcular los mg de H2O2 existentes en las 10 fiola. Con los datos siguientes:
3)
PM de H2O2 = 34 g/mol
Valencia del H2O2 =2
PE H2O2= PM = 34 = 17 g/eq
2
2
1 meq-g. H2O2 = 17 mg de H2O2
Se puede calcular los miligramos (mg) de H2O2 que haba en cada fiola.
g
eq-g = ------g = eq-g * PE
PE
Fiola N 1 : 1,185 meq x 17 mg/meq = 20,14 mg de H2O2
Fiola N 2 : 0,42 meq x 17 mg/meq = 7,14 mg de H2O2
4) Como la actividad de las preparaciones de catalasa sern determinadas por medicin de la

cantidad de H2O2 degradado, est ltima se calcula as:
*mg H2O2 iniciales = mg de H2O2 degradados + **mg de remanentes.
* = Fiolas controles (impares), no hubo actividad enzimtica.
** = Fiolas pares donde hubo actividad enzimtica.
Por tanto:
mg de H2O2 degradados = mg de H2O2 inciales mg de H2O2 remanentes
En el caso de la primera concentracin de sustrato, correspondiente al primer par de fiolas (1 y
2), entonces se degradaron:
20,14 mg de H2O2 menos 7,14 mg de H2O2 que d 13 mg de H2O2 degradados.
19
Al finalizar los clculos se tendrn 5 valores correspondientes a la cantidad de H2O2

degradado por la actividad enzimtica para cada una de las cinco concentraciones
inciales de sustrato.
5) En una tabla resumen se deber reflejar los siguientes datos:
Concentracin se sustrato, 1/concentracin de sustrato, Velocidad cataltica, 1/Velocidad
cataltica.
Ejemplo:
Fiola N 1 dio 20,14 mg, el inverso de la concentracin de sustrato (1/ concentracin de
sustrato) es: 1/[S] = 1/20,14 mg = 0,049 1/mg
V representa la velocidad de la reaccin o sea la cantidad de sustrato degradado en unidad de
tiempo (degradacin de H2O2 en 5 minutos en el caso de este experimento).
Por tanto:
Fiolas 2; se degradaron 13 mg de H2O2 en 5 minutos
V= 13 mg /5 min = 2,6 mg/min.
El inverso de la velocidad = 1/V = 1/ 2,6 mg/min = 0,38 min/mg
6)
Con los valores de [S] y V se elabora el grfico de Michaelis-Menten

y con los inversos se realizar el grfico de Lineaweaver-Burker.
7)
Determine a partir de la grafica los valores de Km y Vmx.
Transforme los valores de Km en mol/l, considerando un volumen total de 30 ml.
PREGUNTAS:
Por qu se debe mantener constante el volumen en cada una de las fiolas?
Qu finalidad tiene el buffer utilizado en el experimento?
Cuando se estudia el efecto de un factos sobre la actividad enzimtica, Qu se debe
hacer con los otros factores? Justifique su respuesta.
Qu finalidad tiene el uso de H2SO4 en el experimento?
A qu se debe el color rosado en el punto final de la titulacin?
Deduzca la ecuacin de Lineweaver-Burke, partiendo de la ecuacin de MichaelisMenten
NOTA: Para realizar el reporte de la prctica debe:
1) Elaborar los clculos en hojas aparte.
2) Debe reflejar los resultados en un cuadro resumen
3) Debe realizar las grficas en papel milimetrado
4) No olvide anotar las unidades de Concentracin y velocidad con que trabaj.
20
Realice los clculos y complete el cuadro con sus resultados. En papel milimetrado realice la
grfica
Fiola
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
ml de
KMnO4
consumido
PE de
H2O2
N de
KMnO4
mg de H2O2
remanente
mg de H2O2
degradado
C inicial
de H2O2
(mg/ml)
Velocidad
(V)
(mg/min)
1/C
ml/mg
-----------
----------------------------
--------
-------------------
--------
----------
---------------
-----------------
----------
--------
-------------------
----------
---------------
------------
----------
1/mg
inicial
---------------
-------------
----------
1/V
min/mg
---------------
--------
--------
21

NCLEO ZARAZA
EJERCICIOS DE TERMODINMICA
1. Calcular el cambio de energa libre estndar de la relacin Glucosa -6- fosfato que se
convierte en presencia de una fosfoglucomutasa en Glucosa -1- fosfato. La concentracin
inicial de Glucosa -6- fosfato es de 0,02 mol/l, despus de transcurrida la reaccin se
encuentra que la concentracin de la mezcla al final de la reaccin en equilibrio es
0,001mol/l de Glucosa -1- fosfato y 0,019 de Glucosa -6- fosfato (Resp.
G=1744cal/mol).
2. La Glucosa -1- fosfato se convierte en Fructuosa -6- en dos reacciones sucesivas:
G-1-P G-6-P
(G = - 1,7 Kcal/mol)
G-6-P F-6-P
(G= 0,4 Kcal/mol)
Utilizando los valores de G de cada reaccin anterior, determine el valor de G para la
reaccin G-1-P F-6-P
(Resp. G = - 1,3 Kcal/mol)
3. Calcule la variacin de energa libre estndar de las siguientes reacciones a 25C, a partir
de la constante de equilibrio (Keq.) con un pH = 7,0
a) Glutamato + Oxalacetato Asparto + a Oxoglutarato (Keq= 6,8)
b) H2O
H+ + OH
(Keq= 6,31 x 10-15)
c) Isopropanol + NAD Acetona + NADH + H+ (Keq= 7,2 x 10-9)
d) Malato + NAD Oxalacetato + NADH + H+ (Keq= 7,5 x 10-13)
(Resp.: a) G=-1135,06 cal/mol; b) G=19360,53 cal/mol; c)
G=11,101Kcal/mol; d) G= 1,65 Kcla/mol)
4. Calcule la Keq. para c/u de las reacciones siguientes a pH=7 y temperatura de 25C,
utilizando los valores de G.
a) Glucosa -6-P + H2O Glucosa + P (G= -3,3 Kcal/mol)
b) Glutamina + H2O Glutamato + NH4+ (G= -3,4 Kcal/mol)
(Resp: a) Keq= 263
b) Keq= 312)
5. Calcule la G de c/u de las siguientes reacciones:
a) Fumarato + H2O Malato
La G f (energa libre estndar de formacin) del Fumarato es 144,41 Kcal/mol;
G f del H2O es 56,69 Kcal/mol; G f del Malato es 201,98 Kcal/mol
(Resp.: G=-0,88Kcal/mol)
b) D-Glucosa 2 Etanol + 2 CO2
22
La G f de la Glucosa es 219,45 Kcal/mol; la G f del Etanol es -43,39 Kcal/mol;

la G f del CO2 es -94,45 Kcal/mol
(Resp.: G= -6,238Kcal/mol)
6. Calcule la G de la siguiente reaccin
ATP + H2O ADP + Pi + H+
A partir de los valores de G las siguientes reacciones
Glucosa + ATP Glucosa -6-P + ADP + H+ (G= -4,0Kcal/mol)
Glucosa -6-P + H2O Glucosa + Pi
(G= -3,3 Kcal/mol)
Resp: G= -7,3Kcal/mol)
7. Calcule la G de la siguiente reaccin
ATP + H2O ADP + Pi + H+
A partir de los valores de G las siguientes reacciones
Glutamato + NH3 Glutamina + H2O
(G= +3,4 Kcal/mol)
Glutamato + ATP + NH3 Glutamina + AD + Pi (G= - 3,9 Kcal/mol)
Resp: G=-7,3Kcal/mol)
8. Las tres primeras reacciones que ocurren en la combustin de Glucosa son:
Glucosa + ATP Glucosa -6-P + ADP
(G= -3,42 Kcal/mol)
Glucosa -6-P Fructuosa -6-P +
(G= +0,5 Kcal/mol)
Fructuosa -6-P + ATP Fructuosa -1,6-P+ ADP (G= -3,4 Kcal/mil)
Calcule al G de cada reaccin, teniendo en cuenta las siguientes concentraciones, presentes
en eritrocitos humanos
[Glucosa] = 5000mol
[G-6-P] = 83mol
[ATP] = 1850mol
[ADP] = 138mol
[F-6-P] = 14mol
[F-1-,6-P] = 31mol
Resp: 8191,84 cal/mol
23
24
25

NCLEO ZARAZA
REACCIONES GENERALES DE CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos o glcidos son polihidroxialdehidos o polihidroxicetonas y sus
derivados, los cuales desempean dos funciones biolgicas principales, una como combustible
y otra como elementos estructurales. Los carbohidratos ms sencillos, monosacridos y
disacridos, que poseen un sabor dulce son comnmente llamados azcares.
REACCIONES BASADAS EN LA ACCION DE ACIDOS FUERTES CONCENTRADOS
Los carbohidratos al ser sometidos a la accin de cidos fuertes no oxidante (HCl,
H2SO4) y de calor, son deshidratados produciendo furfural o hidroximetil furfural. Estos
compuestos se condensan con los fenoles: resorcinol, orcinol y -naftol, dando origen a
compuestos coloreados.
Resorcinol
Orcinol
-Naftol
REACCION DE MOLISH
Esta reaccin se basa en al formacin de derivados sulfricos a partir de los
carbohidratos, por accin deshidratante del cido sulfrico y permite reconocer cualquier
carbohidrato libre o combinado.
En las pentosas, el derivado furfrico que se forma es el furfural y en las hexosas el
hidroximetil furfural.
H2SO4
(CONC.) + H2O
Pentosa
Furfural
26
H2SO4 (concentrado) + H2O
Hexosa
Hidroximetil furfural
REACCIONES DE OXIDACIN DE AZUCARES

REACCION DE BENEDICT
Esta reaccin se utiliza para detectar la presencia de carbohidratos reductores o sea
aquellos carbohidratos que poseen un grupo aldehdo o cetnico libre o parcialmente
libre. La reaccin se efecta en medio ligeramente alcalino, en este medio los
carbohidratos reductores originan formas enlicas intermedias, denominadas enodoles,
las cuales reducen rpidamente el ion cprico a cuproso. Estos iones cuprosos se
combinan con los iones oxhdricos produciendo hidrxido cuproso de color rojo. Por lo
tanto, la aparicin de un precipitado rojo, indica la presencia de una azcar reductora.
Como ejemplo de la accin de los lcalis diluidos sobre los azcares, tenemos la
isomerizacin de la D-glucosa, la cual se representa a continuacin.
La probable reaccin de reduccin del cobre por el azcar es la siguiente:
Azcar reductor
Azcar cido
27
El cobre se encuentra acoplado con citrato, este complejo suple de iones cpricos al
medio. El hidrxido cuproso Cu(OH), precipita en forma de xido cuproso rojo, segn la
siguiente reaccin:
2 Cu (OH)
H2O
+ Cu2O
Oxido cuproso
(rojo)
REACCION DE BARFOED
Esta reaccin al igual que la anterior permite reconocer azcares reductores, pero al
contrario de la reaccin de Benedict se realiza en medio cido; esto trae como
consecuencia que la reaccin sea ms lenta, porque no se forman enodiles. Pero el
precipitado final es de xido cuproso como en Benedict.
H
H C - COO
H
H
Cu + 2H2O
+ Cu2O + 4CH3 - COOH

Oxido
Acido
cuproso
Actico
(rojo)
H C - COO
D - Glucosa
Acetato Cprico
cido Glucnico
Los monosacridos reaccionan ms rpidamente que los disacridos, por lo cual este
ensayo nos permite diferenciarlos.
REACCION DE YODO
Esta reaccin permite reconocer la presencia de polisacridos tales como: almidn y
glucgeno, dando el primero un color azul intenso y el segundo un color caoba.
El almidn se encuentra en dos formas, la amilosa y la amilopectina. La amilosa est
constituida por molculas de glucosa unidas de forma tal que se hacen solublen en agua, pero
se hidratan formando micela que dan un color azul con le yodo. En tales micelas la cadena
polisacrido est retorcida formando un arrollamiento helicoidal. La amilopectina es muy
ramificada y produce disoluciones coloidales micelares que dan una coloracin rojo-violcea
con yodo.
Es importante destacar que los productos de degradacin del glucgeno y almidn
tambin dan reacciones de coloracin caractersticas con el yodo.
28

- Identificar distintos tipos de carbohidratos mediante reacciones de coloracin.
- Identificar el carbohidrato contenido en una muestra problema.
MATERIALES Y REACTIVOS
- Soluciones acuosas al 1% de almidn, arabinosa, fructuosa, galactosa, manosa y
sacarosa.
- cido clorhdrico concentrado.
- Floroglucinol al 6%.
- Alfa-Naftol al 5% en alcohol etlico al 95%.
- cido sulfrico concentrado.
- Solucin alcohlica de yodo 0,1M.
- Reactivo de Barfoed. Solucin acuosa de cido lctico y acetato de cobre.
- Reactivo de Seliwanoff. Solucin de resorcinol en cido clorhdrico concentrado.
- Reactivo de Bial de 5 y 10 ml.
- Gradilla de tubos de ensayo.
- Beaker de 800 y 1000 ml.
- Cilindro graduado de 25 y 50 ml.
PROCEDIMIENTO
1.- REACCION DE MOLISCH.

Tome 5 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 5.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 2
2 ml de agua
Tubo 3
2ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 4
Pedacito de
papel
(celulosa)
Tubo 5
2 ml de
solucin
problema
Luego a cada uno de los tubos de ensayo aada 5 gotas de naftol al 5%. Agite, incline el tubo
y deje deslizar cuidadosamente por las paredes del tubo 1 ml. de H 2SO4 concentrado de modo
que el cido se deposite en el fondo.
Observe: en caso de haber un carbohidrato libre o combinado, aparecer un anillo de color
violeta en la interface de los dos lquidos el cabo de pocos segundos.
2.- REACCION DE TOLLENS
Tubo 1
2 ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 2
2 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
2ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 4
2 ml de
solucin
problema
29
A cada tubo de ensayo aada 2 ml. de cido clorhdrico (HCl) concentrado, 5 gotas de
floroglucinol al 6% y agite cuidadosamente. Caliente en bao de mara por cinco minutos
(todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la aparicin de un color rojo indica la presencia de pentosas. Es importante advertir
que la galactosa y los cidos urnicos dan resultados parecidos.
3.- REACCION DE SELIWANOFF
Coloque en cada tubo 2,5 ml de reactivo de Seliwanoff y luego aada a cada tubo de ensayo
la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
1 ml de
fructosa
(cetohexosa)
Tubo 2
1 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
1ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 4
1 ml de
solucin
problema
Coloque los tubos a bao de mara hirviendo por 2 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la aparicin de una colocacin roja indica la presencia de cetosas.
4.- REACCION DE BIAL
Tubo 1
1 ml de
fructosa
(cetohexosa)
Tubo 2
1 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
1ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 4
1 ml de
solucin
problema
Aada a cada uno de los tubos de ensayo 2,5 ml del reactivo de Bial. Mezcle y ponga en bao
de mara hirviendo por 5 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: en presencia de pentosa se desarrollar un color verde.
5.- REACCION DE BENEDICT
Tubo 1
2 ml de lactosa
Tubo 2
2 ml de glucosa
Tubo 3
2ml de sacarosa
(disacrido
reductor)
(monosacridos
reductor)
(disacrido no
reductor)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo aada 3 ml de reactivo de Benedict cualitativo, agite y caliente en bao
mara por 10 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la formacin de un precipitado rojo ladrillo, indica la presencia de un carbohidrato
reductor.
30
6.- REACCION DE BARFOED

Tubo 1
2 ml de lactosa
Tubo 2
2 ml de glucosa
Tubo 3
2ml de sacarosa
(disacrido
reductor)
(monosacridos
reductor)
(disacrido no
reductor)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo, aada 2,5 ml. de reactivo de Barfoed. Coloque a bao mara por 10
min (todos los tubos al mismo tiempo).
Resultado: Se observar un precipitado rojo que aparecer ms rpido en presencia de
monosacridos que en presencia de disacridos. La reaccin de Barfoed es positiva en
presencia de carbohidratos reductores. Aqu al comparar los resultados se podr diferenciar
monosacridos de disacridos reductores.
7.- REACCION DE YODO (LUGOL 5-10-100)
Tubo 1
2 ml de glucosa
(monosacrido)
Tubo 2
2 ml de
sacarosa
(disacrido)
Tubo 3
2ml de
lactosa
(disacrido)
Tubo 4
2 ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 5
2 ml de
solucin
problema
A cada tubo de ensayo, aada 2 ml de agua destilada y 2 gotas de solucin de yodo al

0,01mol/l. Agite bien.
Observe: la aparicin de una coloracin variable desde azul hasta el pardo rojizo indica la
presencia de un polisacarido.
EJERCICIOS
1.- Cual es el efecto de los cidos fuertes concentrados (HCl y H2SO4) sobre las pentosas y
las hexosas? Haga la reaccin correspondiente.
2.- Con qu objetivo se utiliza la reaccin de Seliwanoff?
3.- Haga un esquema de la degradacin enzimtica del almidn.
4.- Dados los siguientes azcares: sacarosa, lactosa y glucosa. Qu resultados obtendr
(positivo o negativo) usando la prueba de Barfoed?
5.- Cul de los carbohidratos con los qu trabaj result ser no reductor?
31
6.- Si una solucin problema contiene ribosa, prediga resultados en el siguiente cuadro
(Indique positivo o negativo).
PRUEBA
Molish
Yodo
Benedict
Barfoed
RESULTADOS
Bial
Seliwanoff
Tollens
BIBLIOGRAFA
Harper, H.A. 1.989. Manual de Qumica Fisiolgicas. 11 Ed. Manual Moderno S.A. Mxico.
Lehinger, A. 1.967. Bioqumica. Ed. Omega S.A.
Litwack, G. 1.967. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Ed. Interamericana. Mxico.

NCLEO ZARAZA
ACTIVIDAD PRACTICA N 7
32
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LOS AZUCARES REDUCTORES POR EL

METODO DE LANE-EYNON (Fehling modificado)
Entre los diferentes mtodos existentes para la evaluacin cuantitativa de azcares
reductores, existe uno que por su sencillez se emplea preferentemente. Este es el mtodo de
Lane-Eynon (Fehling modificado).
Es un mtodo volumtrico y se basa en las propiedades que tiene los azcares
reductores en el medio alcalino, de reducir el ion cprico a cuproso. Como se sabe el
carbohidrato se oxida con la consiguiente reduccin del agente oxidante. A pesar del curso no
especifico de la reaccin, se ha observado que cuando las condiciones para al reduccin del
cobre son rigurosamente controladas, la cantidad de ion cprico reducido a cuproso es
directamente proporcional a la cantidad de azcar reductor presente en la muestra analizada,
es decir que cantidades equimolares de los diferentes azcares reductores difieren en la rata a
la cual reducen el cobre. El ion cuproso formado durante la reaccin precipita como xido
cuproso (Cu2O) de color rojo ladrillo.
Al igual que los ensayos cualitativos de Benedict y Barfoed, esta reaccin se basa en la
propiedad de los azcares reductores de reducir el cobre de cprico a cuproso. Debido a que la
reaccin ocurre en medio alcalino se forman enodioles como en el caso de Benedict.
A continuacin se indica la reaccin de oxidacin del grupo carbonilo:
Complejo tartrato cprico

de sodio y potasio (suple
de Cobre al medio)
HC=O
2+
R
Azcar
Reductor
Cu(OH)2
(Soluble
como
Tartrato)
R COOH + 2CuOH + H2O

Azcar
Oxidado
33
2CuOH
Cu2O +
Precipitado
Rojo
H2O

Estandarizar el reactivo de Fehling con una solucin de glucosa de concentracin
conocida.
Determinar la concentracin de una solucin de glucosa de concentracin desconocida.
- Materiales:
1 Embudo
3 Fiola de 250 ml
2 Pipeta de 5 ml
1 Bureta de 50 ml
1 Pinza para sostener Bureta
Perlas de ebullicin
Beaker de 250 ml
Mechero y rejilla metlica
Trpode
Soporte para bureta
Bombona de gas
- Reactivos:
Solucin A (sulfato de cobre).
Solucin B (Tartrato alcalino).
Solucin estndar de glucosa, entre 0,2% y 0,45%
Azul de metileno, al 0,2%
Solucin de Glucosa de concentracin desconocida.
PROCEDIMIENTO
1.- Valoracin del reactivo de Fehling.
En una fiola de 250 ml, que contiene algunas perlas de agitacin, coloque 5ml de la
solucin A (sulfato de cobre), 5ml de la solucin B (tartrato alcalino) y 10 ml de agua (para
compensar la evaporacin).
Enrace una bureta con solucin de glucosa estndar de concentracin conocida.
34
Coloque la fiola sobre el trpode y la rejilla a fin de que sea calentada usando el
mechero a llama suave.
Cuando la solucin en la fiola inicie la ebullicin deje caer gota a gota desde la bureta
la solucin de glucosa estndar.
Antes de que todo el cobre se reduzca (lo cual se evidencia por la desaparicin del
color azul del Cu+2) agregue 1ml de la solucin de azul de metileno al 0,2% sin extinguir la
llama. Complete la titulacin dentro del minuto siguiente, con pequeas adiciones de la
solucin estndar del azcar, hasta que el indicador, azul de metileno, sea decolorado. La
glucosa, una vez que ha reducido todo el Cu+2 comienza a reducir al azul de metileno y lo
decolora apareciendo un color rojo ladrillo. En ese momento se detiene la titulacin ya que el
cobre ha sido reducido. Registre el volumen de la solucin estndar de glucosa consumido.
Azul de metileno + Azcar
Oxidado
reductor
Azul de metileno + Azcar

reducido
oxidado
2.- Determinacin de la concentracin de la solucin problema.

Se hace lo mismo que en le caso anterior, pero la titulacin del Fehling de efecta con
la solucin de glucosa de concentracin desconocida.
EJEMPLO PARA EL CLCULO DE LA CONCENTRACIN DE LA SOLUCIN
PROBLEMA.
Suponiendo que la concentracin conocida de glucosa es de 4,5 mg/ml y que los
resultados obtenidos en la valoracin del reactivo de Fehling fue 20 ml de solucin glucosa de
concentracin conocida y en la titulacin de la solucin de glucosa de concentracin
desconocida fue de 30ml.
Si se tiene en cuenta que, la cantidad de glucosa reduce a un mismo volumen de la
solucin A (sulfato de cobre), por lo tanto son la misma. Entonces se puede decir que:
C=
Cant. de soluto
Cant. de solucin
C = concentracin
Si despejamos cant. de soluto tenemos:

Cant. de soluto (glucosa)
= C x Cant. de solucin
= 4,5 mg/ml x 20 ml = 90 mg de glucosa
90 mg de glucosa
X
X =
1 ml x 90 mg de glucosa
30 ml de la solucin problema
30 ml de solucin problema
1 ml
= 3 mg
Por lo tanto la concentracin de la muestra problema es de 3 mg/ml
35
Otra forma de resolver el problema

C1 = 4,5 mg/ml (concentracin conocida de glucosa)
V1 = 20 ml
(volumen de la solucin 1)
C2 = X
(concentracin desconocida de glucosa)
V2 = 30 ml
(volumen de la solucin 2)
V1 x C1 = V2 x C2
20 ml x 4,5 mg/ml = 30 ml x C2
Despejamos C2
C2 = 20 ml x 4,5 mg/ml =
30 ml
90 mg/ml = 3 mg/ml
30
BIBLIOGRAFA
Litwack, G. 1.967. Bioqumica Experimental. Ediciones Omega S.A.
347 pp.

NCLEO ZARAZA
36
COLORIMETRIA NOCIONES GENERALES

Se han desarrollado varios mtodos analticos basados en la absorcin de la energa
radiante.
Dichos mtodos son de considerable utilidad prctica en el anlisis qumico puesto que
se puede aplicar en la determinacin de cantidades muy pequeas de sustancias, obteniendo
por lo general una exactitud del 1 al 2% de la cantidad del constituyente.
Los mtodos analticos basados en la absorcin de la luz por la materia implican la
medicin de intensidades de radiacin electromagntica.
b
Radiacin incidente
Intensidad I
Solucin Problema
En anlisis
Concentracin
Radiacin emergente
I
Intensidad I = Intensidad incidente

Intensidad I = Intensidad transmitida
La absorcin selectiva de radiacin electromagntica cuando sta pasa a travs de una
solucin hace que el haz de luz emergente difiera del incidente.
Es razonable esperar que el valor de la intensidad de la luz transmitida (I), ha de estar
influenciando por la intensidad incidente (I), por el espesor del medio absorbente y por la
concentracin del soluto absorbente. La Ley de Lambert y Beer relaciona todos estos factores,
la cual se expresa matemticamente mediante la siguiente ecuacin:
I
= A = x c x b = log T
I
El termino logaritmo de la ecuacin se conoce como la absorbancia y se represente por
la letra A.
Log
-
La letra, , es el coeficiente de extincin molar.

La letra c, es la concentracin de la sustancia absorbente y se representa en moles /
litros.
La letra b, es el espesor de la cubeta, la cual viene dada en cm.
Cuando se cumple la Ley de Lambert y Beer, es una constante para diferentes

concentraciones de un mismo soluto y c es directamente proporcional a la cantidad de luz
absorbida por la solucin. Es este caso una grafica de los datos experimentales en trminos de
absorbancia (A) en funcin a la concentracin (c), dar una lnea recta que pasa por le origen.
En la practica no se determina directamente el Log I / I, midiendo I e I en la
solucin. Se compara la solucin con un blanco adecuado (es decir el solvente solo en una
cubeta idntica), por lo tanto I se obtiene del blanco I de la solucin. El coeficiente I /
37
I, se conoce como tramitancia que representa por lo tanto la fraccin de luz que es
transmitida.
ESPECTROFOTOMETRO:
Los mtodos de absorcin son clasificados comnmente sobre la base de los
instrumentos y las tcnicas empleadas a las medidas. De este modo, un mtodo
espectrofotomtrico emplea un espectrofotmetro, instrumento que mide la absorcin de
radiacin electromagntica y consiste en esencia de una fuente de luz, un monocromador de
prisma o de red, un detector fotoelctrico de radiacin y otros accesorios adecuados. En el
trabajo analtico son empleados comnmente espectrofotmetros ultravioleta infrarrojos y
visibles.
FOTMETRO:
Es un instrumento sencillo constituido por un detector fotoelctrico, una fuente de luz
y filtros para registrar la radiacin. Estos instrumentos estn restringidos a la regin visible del
espectro.
Las partes principales de un espectrofotmetro son:
1
Fuente
de
luz lmpara
de mercurio
UV
Regulador
Selector de la
intensidad de longitud
de
la
luz onda
diagrama
monocromador
rendija
Cubeta
muestra
5
Detector
fotoclula
galvanmetro
potencimetro
Registrado
r
De acuerdo al esquema un espectrofotmetro funciona de la forma siguiente:

Un haz de energa radiante sale de 1, su intensidad se regula en 2, el ancho de la banda
se selecciona en 3, produciendo luz monocromtica o luz de cierta longitud de onda (). Esta
luz monocromtica pasa travs de la solucin 4, donde es parcialmente absorbida. La
intensidad de la luz que emerge a la parte 5 o detector donde la fotoclula enva sus datos
luminosos al registrador, el cual da los datos.
Recipiente para la muestra
Las cubetas deben ser hechas de un material transparente a la radiacin de la regin
espectral de inters. Para las determinaciones en la regio visible se usan cubetas de vidrio,
cuarzo o slice fundido. En la regin ultravioleta no se puede utilizar el vidrio por que este
material no deja pasar la luz ultravioleta. Las cubetas pueden ser cilndricas o rectangulares y
por lo general su dimetro (b o espesor de la cubeta) es de 1 cm.
Detector de Radiacin
La mayora de los dispositivos utilizados para este propsito convierten la energa
radiante en energa elctrica, que luego puede ser medida. Entre los detectores usados para la
38
radiacin visible y ultravioleta, se tiene la clula fotovoltaica o foto elemento y la clula

fotoelctrica o fototubo.
Spectronic 20
Descripcin
Este es un espectrofotmetro de lectura directa y de un solo haz, el sistema
monocromador consiste de una red de reflexin de lente y un par de rendijas fijas. Debido a
que la red produce una dispersin que es independiente de la longitud de onda, se obtiene una
anchura de banda constante de 20 nm (nanmetros) a lo largo de la regin en que opera. El
instrumento emplea solo fototubo. Su intervalo normal es de 350 nm, aunque est puede ser
extendido hasta los 900 nm, por el uso de un uso fototubo sensible al rojo y un filtro rojo.
d
g
Muestra
a)
Fuente de luz
b)
Lentes
c)
Rendija de entrada
d)
Red
e)
Control de luz
Construccin de experto de absorcin

Se denomina la tramitancia de la solucin en estudio mediante o en funcin de la
longitud de onda desde 440 mm hasta 620 mm. Se hacen las lecturas para las longitudes de
ondas sealadas en el experimento, se convierten los valores de tramitancia en absorbancia.
Luego se hace la grfica donde la curva correspondiente se 5 a la longitud de onda a la cual
39
corresponde el mximo de absorbencia ptima, por ejemplo espectro de absorcin para

KMmO4.
LONGITUD DE ONDA ()
(nm)

NCLEO ZARAZA
40
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE TOTAL
Con relacin a la glucosa y su determinacin cuantitativa en sangre, es preciso
distinguir tres terminologas:
1.- Por glucosa sangunea se entiende la concentracin de la sustancia qumica
especfica, glucosa, en la sangre.
2.- El trmino azcar en sangre incluye, adems de la glucosa, otros azcares como:
galactosa, fructosa y las pentosas.
3.- La terminologa que se aplica a todos los componentes presentes en la sangre
susceptibles de reducir los iones cpricos en solucin alcalina caliente, es la de sustancia
reductoras en sangre; ellos incluyen no solamente los azcares, sino una serie de otros
compuestos de diferentes naturaleza qumica, tales como: glutatin, glucurnidos, cido
ascrbico y cido rico.
4.- Adems, se debe tener en cuenta que los carbohidratos son deshidratados por la
accin de los cidos concentrados no oxidantes y calor producindose furfural o 5
hidroximetil furfural y estos se condensan con los fenoles para producir compuestos
coloreados.
Con frecuencia se utiliza indistintamente la terminologa: azcares en sangre y
substancias reductoras en sangre, generalmente para designar lo que corresponde a la primera
aceptacin.
Existen varias tcnicas para determinar cuantitativamente azcar en sangre. La tcnica
ms antigua y quizs la ms utilizada para determinar azcar en sangre se basa en el poder
reductor de los carbohidratos.
El mtodo colorimtrico utilizando el cido dinitrosaliclico determina la presencia del
grupo carbonilo (aldehdo o cetona) libre, presente en los azucares reductores. Este mtodo se
lleva a cabo en condiciones alcalinas donde el grupo funcional aldehdo y cetona, presente
por ejemplo en la glucosa o fructosa respectivamente, son oxidados y simultneamente el
cido 3,5-dinitrosaliclico es reducido a 3-amino, 5-nitrosaliclico. Esta reaccin desarrolla
una coloracin roja lo cual permite determinar la concentracin del azcar presente por
espectrofotometra.
41
Cuando se requiere estudios completamente especficos de la glucosa, se utiliza el

mtodo enzimtico de la glucosa oxidasa. Esta enzima transforma la glucosa en cido
glucnico, produciendo simultneamente una cantidad equimolecular de perxido de
hidrgeno, el cual a su vez oxida un cromgeno (sustancia que genera un color) adecuado,
apareciendo un producto coloreado que puede medirse con el espectrofotmetro.
En la mayor parte de los estudios clnicos, pueden ser todava suficientes algunas de
las tcnicas antiguas poco especificas.
- Elaborar y emplear correctamente una curva de calibracin para el anlisis colorimtrico de
carbohidratos.
- Determinar la concentracin de Glucosa en una muestra de sangre (Humano, Ovino,
Bovino o Canino)
NOTA: El estudiante consultar por s mismo los siguientes puntos, que sern materia de
examen.
a) Estructura qumica, estereoisomera y propiedades qumicas de glucosa.
b) Relacin entre glucosa y substancias tales como: almidn, glucgeno y celulosa,
estructura e importancia de estas ltimas.
c) Importancia de la glucosa y papel central en el metabolismo de los glcidos.
d) Significado de los trminos: glicemia y glucosuria, hipoglucemia y hiperglucemia.
e) Mtodo de reconocimiento de carbohidratos, basados en la accin de los cidos
fuertes concentrados.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
1. Equipos y materiales
- Espectrofotmetro
- Centrifugadora
- Bao Mara
- Pipetas
- Tubos de ensayos
- Gradilla
2. Reactivos
- Solucin del reactivo del cido Dinitrosaliclico 1%
o cido dinitrosaliclico 10g
o Sulfito de Sodio 0.5g
o Hidrxido de Sodio 10g
o Fenol 2g (opcional)
42
o Completar con agua a 1 litro

Solucin de tartrato de Sodio Potasio al 40%
Solucin de Glucosa al 0,4%
Muestra problema Sangre total (sin heparina) o suero
PROCEDIMIENTO
1. Si tiene como muestra problema sangre total centrifugue a alta velocidad por 5 min. Para
obtener el suero (parte lquida)
Tubos
Glucosa
ensayos 0.4%
(ml)
H2O
(ml)
Concentracin Suero
final en cada (ml)
tubo
Solucin
Dinitrosaliclico
(ml)
-----------
3,00
-------
3,00
1,50
1,5
-------
3,00
0,75
2,25
-------
3,00
0,60
2,40
-------
3,00
0,45
2,55
-------
3,00
0,30
2,75
-------
3,00
-----------
2,00
------------------
1,00
3,00
-----------
2,00
------------------
1,00
3,00
Ab
575nm
T
575 nm
2. Tome ocho tubos de ensayo limpios y enumrelos del 1 al 8.

3.
Coloque las cantidades de glucosa, agua, suero y solucin de cido dinitrosaliclico que
se indica en el siguiente cuadro. (Determine la concentracin de los tubos del 1 al 6)
4. Agite cada tubo de ensayo y tpelos para evitar perdida por evaporacin.
5. Caliente cada tubo de ensayo en un bao de mara a 90C por 10 min. Se desarrollar un
color rojo
6. Aada 1 ml de tartrato de sodio potasio a cada tubo de ensayo, para estabilizar el color.
7. Deje enfriar a temperatura ambiente o en agua fra.
8. Calibre el espectrofotmetro con el contenido del tubo de ensayo N 1 (Blanco)
43
9. Determine la absorbancia y tramitancia a cada tubo de ensayo (del 2 al 8) en el

espectrofotmetro a una longitud de onda de 575 nm.
CALCULOS
a) Sobre papel milimetrado, trace en la abscisa la concentracin en mg/100ml y en la
ordenada la absorbancia en nm: los puntos a ubicar en el eje de coordenada corresponden
a las concentraciones de los tubos del 2 al 6 con su correspondiente absorbancia. Trace la
mejor recta posible partiendo del origen. De esta manera obtendr la curva de calibracin.
b) A partir de la Curva de Calibracin, obtenga la concentracin correspondiente a la
absorbancia obtenida en las muestra de sangre (tubos 7 y 8).
VALORES NORMALES DE GLUCOSA:
Humanos:
80
- 120 mg/100ml de sangre.
Ovejas:
55
Bovinos:
40
Cabras:
40
Perro:
80
-160 mg/100ml de sangre.
NOTA: El estudiante consultar por s mismo los siguientes puntos, que sern materia de
examen.
a) Estructura qumica, estereoisomera y propiedades qumicas de glucosa.
b) Relacin entre glucosa y substancias tales como: almidn, glucgeno y celulosa,
estructura e importancia de estas ltimas.
c) Importancia de la glucosa y papel central en el metabolismo glucdico.
Significado de los trminos: glicemia y glucosuria, hipoglicema y hiperglicema

NCLEO ZARAZA
44

DETERMINACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS Y PROTENAS
Las protenas son sustancias qumicas orgnicas de alto peso molecular, constituidas
por muchos aminocidos, que juegan un papel importante en la estructura y dinmica de la
materia viva.
Solamente 20 diferentes aminocidos se encuentran formando parte de las protenas,
sin embargo no todas las protenas contienen todos esos 20 aminocidos.
En esta prctica se utilizarn reacciones cualitativas de coloracin que permitirn
detectar la presencia de grupos qumicos presentes en aminocidos y protenas, las reacciones
son:
1)
Reaccin de la Ninhidrina
Esta es una reaccin general para determinar la presencia del grupo amino. Se
considera una reaccin general para cualquier aminocido y es debido a la presencia del grupo
amino. (de manera que todos los aminocidos y por supuesto las protenas,
dan positiva esta reaccin. No obstante, cualquier sustancia no proteica que contenga el grupo
tambin da positiva la reaccin. La reaccin se efecta en tres etapas.
Reduccin de la Ninhidrina oxidada por accin del aminocido.
a.
H
R - C - COOH
NH2
aminocido
+ Ninhidrina Oxidada
R - C - COOH + Ninhidrina Reducida
NH
iminocido
b.
Hidrlisis del iminocido producido para formar un - cetocido, el cual se
descarboxila bajo las condiciones de una reaccin.
45
H
R - C - COOH +
NH
iminocido
R - C - COOH
R - C - COOH
O
cetocido
R-C-H
CO2
cetocido
Aldehdo con un Carbono
menos que el aminocido
c.
Finalmente, el 3 producido reacciona con cantidades equimolares de
ninhidrina oxidada y ninhidrina reducida para formar un compuesto de color azul violeta, el
cual es proporcional a la cantidad de aminocido presente.
Ninhidrina oxidada
Ninhidrina reducida
46
Compuesto violeta
Esta reaccin se desarrolla mejor a un pH neutro. Todos los aminocidos dan color
azul violeta con ninhidrina, con excepcin de la prolina e hidroxiprolina que dan color
amarillo.
2)
Reaccin del Biuret:
Esta reaccin es caracterstica para aquellos compuestos que poseen dos o ms enlaces
peptdicos. La denominacin Biuret, se debe a que el compuesto orgnico Biuret tambin da
positiva esta reaccin. La reaccin del Biuret se basa en la formacin, en medio alcalino, de
un compuesto de coordinacin de color violeta entre el in cprico (Cu +2 ) y 4 tomos de
nitrgenos, provenientes de las cadenas peptdicas.
Complejo de color violeta
O = C
H2O
HN
R - CH
NH
Cu + 2
O = C
HC - R
C = O
HN
R - CH
C = O
NH
H2O
HC - R
47
3)
Reaccin Xantoproteca:
Con esta reaccin se puede identificar la presencia de los aminocidos aromticos

tirosina y triptfano.
La reaccin se basa en la nitracin del anillo bencnico con cido ntrico, produciendo
derivados del nitrobenceno de color amarillo. Estos derivados amarillos se tornan anaranjados
al alcalinizar la solucin con NH4 NaOH. En las condiciones de la reaccin, la fenilalanina
(aminocido aromtico), es difcil de nitrar por cuanto se requiere de la presencia de un
catalizador.
4)
Reaccin de Milln:
Esta reaccin es especfica para el grupo hidroxifenil. Por lo que el aminocido
tirosina da positiva esta reaccin. Se cree que el grupo hidroxifenil primero forma derivados
nitrados con el HNO3, que luego reaccionan con el mercurio y forman complejos de color
rojo.
5)
Reaccin de Sakaguchi:
Esta es una reaccin especfica para el grupo guanidina. Por lo tanto el aminocido
arginina da positiva esta reaccin.
H 2N
C
H
- N - R
Restos de Guanidina
HN
La guanidina en solucin alcalina da color rojo en presencia de - naftol e
hipobromito de sodio.
-
Reconocer los grupos - amino de los aminocidos.

Diferenciar aminocidos libres de compuestos con 2 o ms enlaces peptdicos.
Identificar aminocidos aromticos.
Identificar el aminocido arginina.
Identificar una solucin problema.
MATERIALES y REACTIVOS
Materiales:
Tubos de ensayo.
Beakers de 250 y 500 ml.
Buretas de 50 ml.
Mecheros.
48
%.
Frasco goteros.
Reactivos:
Solucin de ninhidrina al 1%.
Solucin de NaOH 2,5 N.
Solucin de sulfato de cobre 1 %.
cido ntrico concentrado.
Hidrxido de amonio concentrado.
Reactivo de Milln (Solucin de mercurio en cido ntrico concentrado)
Solucin alcohlica de - naftol al 1 %.
Solucin de NaOH 5 %.
Solucin de hipobromito de sodio (NaBro) al 10 % Hipoclorito de sodio.
Soluciones de Leucina, Metionina, Lisina, Triptfano, Tirosina y Arginina al 0,1
PROCEDIMIENTO:
1. REACCIN DE NINHIDRINA
Tubo 1
2 ml de Leucina
(aminocido)
Tubo 2
2 ml de Albumina
de huevo (protena)
Tubo 3
2ml de agua
destilada
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo, agregue 1 ml de solucin de ninhidrina al 1 %.

Coloque los tubos de en bao de mara con agua hirviente por unos 10 min.
Retire los tubos del agua hirviente y deje enfriar.
Observe: la aparicin de un color violeta indica la presencia de grupos aminos.
2. REACCIN DEL BIURET:

Tubo 1
2 ml de Lisina
(aminocido)
Tubo 2
Tubo 3
2 ml de
2 ml de Albumina
Gelatina
de huevo (protena)
(polisacrido)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo, agregue 1 ml de NaOH 2,5 N y agite.

Agregue unas gotas de solucin de sulfato cprico al 1 %. (4 gotas)
Observe: la aparicin de un color violeta indica la presencia de dos o mas enlaces peptdicos.
49
3. REACCIN XANTOPROTECA:
A
Tubo1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 ml de
2 ml de
2 ml de
2 ml de
Albumina de 2 ml de Tirosina
Triptfano
metionina
solucin
huevo
(aminocido)
(aminocido)
(aminocido)
problema
(protena)
cada tubo de ensayo, agregue 1 ml de cido ntrico (HNO3) concentrado.
Caliente en bao Mara por 10 min.
Remueva el tubo y deje enfriar.
Agregue lentamente 15 a 20 gotas NH4OH concentrado.
Observe: el cambio de color amarillo hacia anaranjado en la interface indica la presencia de
aminocidos aromticos.
4. REACCIN DE MILLN:
Tubo 1
2 ml de
Triptfano
(aminocido)
Tubo 2
2 ml de
Albumina de
huevo
(protena)
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 ml de Tirosina
(aminocido)
2 ml de lisina
(aminocido)
2 ml de
solucin
problema
A cada tubo de ensayo agregue unas 20 gotas del reactivo de Milln.

Caliente el tubo en bao de mara por unos 5 min.
Observe: la aparicin de un color rojo indica la presencia del grupo hidroxifenil.
5. REACCIN DE SAKAGUCHI:
Tubo 1
2 ml de Arginina
(aminocido)
Tubo 2
2 ml de
Albumina de
huevo
(protena)
Tubo 3
Tubo 4
2 ml de metionina
(aminocido)
2 ml de
solucin
problema
A cada tubo agregue 1 ml de NaOH al 5 %, 2 gotas de - naftol al 1 % y 2 gotas de

hipobromito de sodio al 10 % y mezcle muy bien.
Observe: la aparicin de un color rojo indica la presencia del grupo guanidina.
50
PREGUNTAS
1.- Que grupos se liberan en la reaccin de la Ninhidrina?
2.- Es adecuada la reaccin de la Ninhidrina para distinguir aminocidos de protenas?
3.- Qu es el Biuret?
4.- Con que reaccin distinguira usted un aminocido de una protena?
5.- Escriba la frmula estructural de la tirosina e identifique el grupo responsable de la
reaccin de Milln?
6.- Qu otros aminocidos dan positiva la reaccin de Milln?
7.- La Lisina podra dar positiva la reaccin Xantoproteca? Por qu?
8.- Escriba la frmula estructural de la Arginina y seale el grupo guanidina?
BIBLIOGRAFA
Conn, E. E. y P. K. Stumpf. 1972. Bioqumica Fundamental. Ed. Limusa Wiley S.A. Segunda Edicin. Mxico.
623 pp.
Daniel, L. J. y L. Neal. Laboratory Experimens in Biochesmestry V. de Cornell, New York.
Litmack, G. 1960. Bioqumica Experimental. Un Manual de Laboratorio. Ed. Omega S.A. Barcelona, Espaa .
51

NCLEO ZARAZA
IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA
SOBRE PAPEL
La cromatografa es uno de los procedimientos ms eficaces de resolver mezclas
complejas. Puede definirse como el proceso que se caracteriza por el paso uniforme de una
mezcla fluida (gas o lquido) a travs de una sustancia relativamente inmvil (lquida o
slida), la cual permite la migracin diferencial de los componentes de la mezcla. La
separacin de las mezclas se ve afectada por la afinidad diferencial de los componentes, por la
fase estacionaria (slida o lquido) y por la fase mvil (gas o lquido). Los fenmenos fsico
qumicos responsables de esta afinidad por la fase estacionaria son la absorcin, intercambio
de iones y la capilaridad absorcin. La distincin entre estos tres tipos es bastante arbitrara,
por que con frecuencia resulta difcil saber cual de estos tres fenmenos opera o si en realidad
se hallan simultneamente varios en operacin.
CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL
La cromatografa sobre papel se basa principalmente en la particin de los
componentes de una mezcla entre dos fases lquidas, debido a diferencias en la solubilidad de
los componentes en cada fase. La funcin del papel (celulosa) es servir de soporte inerte del
solvente acuoso (fase estacionaria). La fase mvil es una mezcla lquida que consiste en un
solvente orgnico saturado de agua.
Los solutos de la mezcla se mueven en la direccin del flujo del solvente a una
velocidad que es regulada por su atraccin por la fase acuosa estacionaria o por la fase
orgnica mvil.
En la cromatografa sobre papel se pone una mezcla de solutos a lo largo de una lnea
de origen, trazada sobre papel de filtro. Se seca la hoja de papel al aire. Se coloca la hoja en
el solvente y se deja que esta migre verticalmente por la capilaridad, atravesando la muestra, o
en forma descendente por gravedad; con lo que queda desarrollado el cromatograma. La
primera forma se le denomina cromatografa ascendente y a la segunda descendente.
52
Una vez medida la distancia recorrida por el solvente desde la lnea base y la recorrida
por cada compuesto, se calcula el Rf, que es el cociente entre la distancia recorrida por el
compuesto y la recorrida por el solvente.
Distancia recorrida por el compuesto
Rf
=
Distancia recorrida por el solvente
El valor de Rf es caracterstico de cada sustancia en condiciones definidas (sistema de

solvente, temperatura, forma de desarrollo, tipo de papel). Asa que, los compuestos que
tienen distinto Rf, deben separarse. En ningn sistema puede el Rf de un soluto ser mayor a la
unidad, siempre es menor a uno.
Dos sustancias distintas pueden tener el mis o Rf, en un sistema determinado de
solventes. De all que sea preciso confirmar de otro modo la identidad de una sustancia
caracterizada cromatograficamente. Cuando se quiere aumentar la resolucin se emplea la
cromatografa bidimensional. Se pone el material a cromatografiar cerca de una esquina del
papel. Se desarrolla el cromatograma de modo descrito anteriormente en una direccin, se
seca y se desarrolla entonces en otro sistema de solvente, en una direccin perpendicular a la
seguida por el primer solvente. Si las sustancias que van a ser separadas por cromatografa de
papel, absorben las radiaciones ultravioletas o fluorescen, sus manchas se pueden localizar
rpidamente, observando el cromatograma bajo una luz ultravioleta, muy intensa. Tambin
pueden emplearse otros procedimientos, como es el rociado sobre el papel, con un reactivo,
que reaccione con la muestra dando como resultado un producto colorado. Para aminocidos
se usa ninhidrina que forma productos color violeta al reaccionar con estos. Este ltimo
proceso recibe el nombre de Revelado.
La cromatografa sobre papel se utiliza en bioqumica para obtener sin grandes
tcnicas excelentes separaciones de aminocidos, pptidos, azcares, nucletidos y otros
metabolitos de bajo peso molecular.
La cromatografa de papel es la tcnica de anlisis ms usada en bioqumica, en la
separacin cuantitativa y en la identificacin de aminocidos en una mezcla.

Desarrollar en el estudiante la habilidad en la determinacin cualitativa de
aminocidos mediante este tipo de anlisis.
Efectuar la separacin de una mezcla de aminocidos, mediante
cromatografa ascendente sobre papel.
53
Identificar cada aminocido por comparacin del valor del Rf, con las
sustancias patrones empleadas.
MATERIALES y RECTIVOS
-
Materiales
Papel de filtro Whatman cortado en tiras de (28 X 12cm)
Tubos capilares.
Cubetas de vidrio con tapas.
Estufa a 100 C.
Engrapadora.
Reactivos
Butanol: cido actico: agua. 4: 1: 1 (v / v)
Soluciones patrones de aminocidos 0,1 %
Muestra problema.
Revelador de ninhidrina ( 1 % )
PROCEDIMIENTO
a. Sobre un papel de filtro Whatman N 1 (28 X 12cm) trazar, con lpiz de grafito, una
lnea a 1 cm. del borde inferior del papel y paralelo al lado ms largo, teniendo cuidado de no
tocar el papel con los dedos. Sobre esa lnea marcar puntos, con lpiz, cada 1,5 cm. De
separacin entre ellos. Sobre estos puntos colocar con el capilar (palillo) una gota de solucin
de aminocido, dejar secar y repetir la aplicacin. Escribir el nombre del aminocido aplicado
y el nmero de la muestra problema, debajo de cada punto. Pueden aplicar mezclas de
aminocidos, gota sobre gota una vez seca la anterior.
b. Coloque en el extremo superior de la hoja de papel una varilla de vidrio, para lo cual
utilice tirro, con cuidado de no tocar con las manos el extremo inferior del papel.
c. Introduzca el papel en la cmara o cubeta de vidrio que contiene el solvente, tpela y
deje que el frente del solvente ascienda durante una media hora.
d. Retire el papel y marque inmediatamente con un lpiz en frente del solvente.
e. Seque el papel en la estufa a 100 C por 5 min.
f. Roci con la solucin reveladora de ninhidrina y seque en la estufa por 5 min.
g. Localice las manchas, delinee con lpiz de grafito, marque el punto central de cada
mancha y guarde el cromatograma para la identificacin de la muestra problema.
h. Anote el color de las manchas.
54
i. Determine el valor del Rf, de cada una de las manchas que aparecen.
j. Por comparacin de Rf, identifique los o el aminocido presente en la muestra problema.
k. Anexe el cromatograma al informe
PREGUNTAS
1.
Cundo la mezcla de aminocido es muy compleja? Explique porque se utiliza
la cromatografa bidimensional?
2.
Explique por qu ser puede emplear en algunos casos, varios solventes en la
resolucin de una mezcla de aminocidos
3.
Explique las ventajas y desventajas de este mtodo cromatogrfico.
4.
En qu sentido afecta la polaridad de las cadenas laterales de los aminocidos, su
migracin o movilidad a travs del papel?
5.
Haga una descripcin de las cromatografas de gases, intercambio inico y
separacin de geles.
BIBLIOGRAFA
Bohinski, R. C. 1978. Bioqumica. Ed. Revert. Caracas.
Conn, E. E. y P. K. Stumpf. 1972. Bioqumica Fundamental. Ed. Limusa Wiley S.A.
Segunda Edicin. Mxico. 623 pp.
Harper, H. A. 1978. Manual de Qumica Fisiolgica. Ed. El Manual Moderno. S. A. 13
Edicin. Mxico.
Litmack, G. 1960. Bioqumica Experimental. Un Manual de Laboratorio. Ed. Omega S.A.
Barcelona, Espaa.
55

NCLEO ZARAZA
DIGESTIN DE PROTENAS
Se entiende por digestin a todas las modificaciones qumicas que sufren los alimentos
ingeridos por los animales, debido a la accin de enzimas y hormonas. Los alimentos estn
formados por molculas complejas (protenas, polisacridos, triacilgliceridos, etc) sobre las
cuales actan las enzimas y hormonas presentes en el tracto gastro-intestinal hidrolizando
dichas molculasy liberando compuestos qumicos relativamente simples, solubles o
emulsionables en agua (aminocidos, monosacridos, cidos grasos libres, etc) que pueden ser
absorbidos por las vellosidades de la mucosa que recubre el intestino delgado.
Algunas sustancias que forman los alimentos son de por s molculas pequeas que no
necesitan modificaciones para ser absorbidas por la mucosa duodenal. Estas sustancias
incluyen: la glucosa, fructosa, manosa, galactosa (que son osas), las sales inorgnicas como
son los cloruros, los fosfatos, bicarbonatos de sodio, potasio, y calcio; adems, los cidos
ctricos, propinico, pirvico y butrico y tambin el glicerol o glicerina.
A las enzimas que actan en la digestin de las protenas en forma general se les
conoce como enzimas proteolticas o enzimas pptidasas. Muchas de esas enzimas son
segregadas por la clula en forma inactiva o cimgeno.
1. Enzimas proteolticas que actan durante la digestin gstrica (estmago).
a. Pepsingeno o propepsina: Es un precursor inactivo (CIMGENO) contenido
en las clulas principales de la regin fndica del estmago de todos los mamferos. Es
una protena con PM de 45.000 Dalton, que es activada a pepsina por el cido
clorhdrico (HCl) diluido (concentracin de 0,1 N) o por la misma pepsina preforma.
56
ESQUEMA DE LA ACTIVACIN DEL PEPSINGENO A PEPSINA ACTIVA.

Pepsinogeno (PM = 45.000dalton)
HCl
Pepsina preformada
Complejo proteico Pepsina-inhibidor+5 pptidos (PM=5x1000 Dalton)
HCl
PEPSINA + COMPLEJO PROTEICO INHIBIDOR

Pepsina
4 PPTIDO
Pasa al duodeno
b. Pepsina: Es la principal enzima proteoltica contenida en el jugo gstrico que se

encuentra en los estmagos de todos los mamferos. Los protones (H +) catalizan la
conversin del pepsingeno a pepsina y sta es estable a pH entre 1,0 y 2,90.
c.
La pepsina es una ENDOPEPTIDASA porque cataliza la hidrlisis de los enlaces
peptdico internos de las cadenas polipeptdicas (protenas)que se introducen como alimentos.
Preferentemente hidrolizan las protenas naturales donde se encuentran los enlaces entre los
aminocidos L-fenilalamina y L-tirosina. La pepsina acta sobre las protenas a un pH entre
1,5 y 2,9 a la temperatura ptima de 37 a 40C. A temperaturas superiores se desnaturaliza y
pierde su actividad enzimtica.
La hidrlisis de una macromolcula proteica por accin endopeptdica de la pepsina en
el estmago, se puede esquematizar segn el siguiente esquema aproximado:
57
MACROMOLCULA PROTEICA
(Protena natural)
Pepsina + HCl
METAPROTENA CIDAS
(Sintoninas)
Pepsina + HCl
PROTEOSAS PRIMARIAS (precipitan con sulfato amnico a media saturacin)

(Albumosas)
Pepsina + HCl
PROTEOSAS SECUNDARIAS (precipitan con sulfato amnico a saturacin)

(Albumosas)
PEPTONAS (no precipitan con solucin saturada de sulfato amnico)
Pasan al duodeno
La especie humana carece de la rennina (fermento Lab. o quimosina).

La pepsina es la enzima determinante del proceso de la coagulacin de la leche.
2. Enzimas proteolticas que actan en el intestino delgado
a. Tripsingeno: Esta proenzima es fabricada por el pncreas, donde las clulas de
los acinos pancreticos elaboran el jugo pancretico, que luego desemboca en el
duodeno por el conducto pancretico de Wirsung.
El tripsingeno es una protena inactiva que al llegar al duodeno se activa en tripsina
por accin de la enzima enteropepsidasa (anteriormente denominada enteroquinasa), la
cual es producida por la mucosa del intestino delgado y forma parte del jugo entrico o
intestinal. Tambin, la presencia de tripsina preformada posee el mismo efecto
activante, segn el siguiente esquema:
58
TRIPSINOGENO (forma parte del jugo pancretico)
Enteropeptidasa (forma parte del jugo entrico o intestinal)
Tripsina preformada
pH 7-9
TRIPSINA +
HEXAPEPTIDO
b. Tripsina: Es una protena que consta de 223 aminocidos. Tiene accin
proteoltica: cataliza la hidrlisis de los polipptidos provenientes de la digestin en el
estmago por la accin de la pepsina. Tambin, desintegra las protenas naturales no
hidrolizadas por la accin de la pepsina. Acta como una endopeptidasa, formando
polipptidos de menor tamao. La tripsina cataliza la reaccin de hidrlisis
preferentemente entre los aminocidos L-Lisina y L- Arginina. Tiene una dbil accin
coagulante sobre la leche.
c. Quimotripsingeno: Esta proenzima o Cimgeno es elaborada por el pncreas y
forma parte del jugo pancretico. Al llegar al duodeno se activa por accin de la tripsina,
originando quimitripsina activa que acta a un pH de 7,2 y 9,0. Tiene poder de
coagulacin sobre la leche mayor que el de la pepsina. Su accin proteoltica
endopeptidsica es equivalente a la de la tripsina, degradando protenas naturales en
polipptidos y pptido de peso molecular variable, catalizando la hidrlisis
preferentemente de los enlaces peptdicos entre los aminocidos L-tirosina y LFenilalanina.
d. Procarboxipeptidasa: Son elaboradas en el pncreas y forman parte del jugo
pancretico. Al llegar al duodeno se activa por accin de la tripsina hasta
carboxipeptidasa. Acta como exopeptidasa y cataliza la hidrlisis de los enlaces
peptdicos terminales de polipptidos y oligopptidos que contengan el grupo funcional
carboxilo libre. Son enzimas que contienen Zinc.
e. Aminopeptidasa, Leucinopeptidasa y Aminopeptidasa: Son protenas
enzimticas que contienen magnesio o manganeso. Catalizan la hidrlisis de una gran
59
variedad de polipptidos y pptidos hasta dipptidos Actuando como exopeptidasas, por

catalizar la hidrlisis de enlaces peptdicos terminales que contengan libre el grupo
amino. Estas protenas enzimticas son elaboradas por la mucosa intestinal del
duodeno donde se elabora el jugo intestinal o entrico.
f. Tripeptidasa y Dipeptidasa: Intervienen como catalizadores de la hidrlisis de
los tripptidos y dipptidos hasta la obtencin de aminocidos correspondientes, son protenas
que se forman en el intestino delgado.
Los aminocidos se absorben a travs de las vellosidades de la mucosa del duodeno,
pasan al sistema circulatorio (vena-porta) y en los ribosomas del hgado y otros rganos
forman nuevas protenas.
3. Fibrina
Para demostrar la hidrlisis enzimtica de una protena por accin de las enzimas
pepsina y tripsina, se ha escogido la protena fibrina que se obtiene del fibringeno durante el
proceso de la coagulacin de la sangre, mediante agitacin con una varilla a la que la fibrina
se adhiere. La fibrina es una protena que no existe en la sangre circulante.
La fibrina resulta de la actuacin de la enzima Trombina sobre la protena Fibringeno:
Fibringeno
Fibrina
El fibringeno y la fibrina son dos protenas muy semejantes, pues contienen los
mismos aminocidos. La fibrina es insoluble en agua, alcohol y ter. Se hincha y luego se
disuelve lentamente en cido clorhdrico al 3 por mil (hidrlisis qumica)
60
ESQUEMA DE LA HIDRLISIS ENZIMTICA DE UNA PROTENA NATURAL

ESTOMAGO
(medio cido por el HCl)
pH 1-3
DUODENO
pH 8-9
PROTENA NATURAL
METAPROTEINA
ACIDA (sintoninas)
Pepsina + HCl +
H2O
PROTEOSA PRIMARIA
PROTENA NATURAL
(no hidrolizadas por la pepsina)
(albumosas)
Pepsina + HCl +
H2O
Tripsina y aminotripsina
+ H2O
PROTEOSA
SECUNDARIA
PROTEOSA
(albumosas)
Tripsina y aminotripsina
+ H2O
Pepsina + HCl +
H2O
PEPTONAS
(duodeno)
PEPTONAS
(estmago)
Tripsina y Quimotripsina
+ H2O
Pasan al duodeno
POLIPEPTIDOS
+ H2O
+ H2O
CARBOXIPOPIPEPTIDOS + AMINOPOLIPEPTIDOS
Carboxipeptidasa y
Tripsina + H2O
Aminopolipeptidasa y Tripsina + H2O
DIPEPTIDOS
Dipeptidasa + H2O
AMINOACIDOS
61 en
Se absorben a travs de las vellosidades de la mucosa duodenal y pasan al sistema circulatorio (vena porta). Luego,
los ribosomas de las clulas son utilizados para la sntesis de protenas intrnsecas.

- Demostrar el efecto proteoltico de las enzimas pepsina y tripsina sobre una protena natural.
- Observa el poder coagulante de la pepsina sobre la leche.
- Evidenciar el efecto de la temperatura y el pH sobre la actividad de las enzimas.
Materiales
-Tubos de ensayo
-Gradilla
- Pipetas de 5ml
- Bao de mara
-Tirro
Reactivos
-Fibrina
-Solucin acuosa de pepsina al 0,5%
-Solucin acuosa de tripsina al 1,0%
-Hidrxido de sodio al 1 N
-cido clorhdrico al 0,4%
-Leche de vaca
PROCEDIMIENTO
El estudiante recibir nueve (9) tubos de ensayo, seis de los cuales contendrn una
cantidad de fibrina ya pesada (0,1-0,2 g) y los tres (3) restantes tubos estarn vacos. Marcar
los seis (6) tubos que contienen fibrina con las letras A, B, C, D, G e I. Los que no contienen
fibrina se marcan con las letras E, F y H.
1. Accin proteoltica (hidrolizante) de la pepsina sobre la protena fibrina (sustrato).
a. En el tubo de ensayo A coloque 5 ml de solucin de pepsina al 0,5%, agite
varia veces por 10 a 20 min. Luego agregue 5 ml de la solucin de HCl al
0,4%, agitando 10 min. por inversin (cerrando la boca del tubo con la yema
del dedo pulgar). A continuacin agregar 5 ml de agua destilada y de nuevo
agitar por inversin como anteriormente. Dejar el tubo en reposo.
b. En el tubo de ensayo B agregue 5 ml de solucin de pepsina y agite como se
indic para el tubo A. Luego espere 10 min. y aada 10 ml de Agua destilada y
agite por 10 minutos ms. Dejar el tubo en reposo.
62
c. En el tubo C agregue 5 ml de HCl al 0,4% y agite como se indic para el tubo

A. Luego espere 10 min. y agregue 10 ml de agua y agite por 10 minutos ms.
Dejar el tubo en reposo.
d. En un tubo de ensayo (sin marcar), aada 6 ml de solucin de pepsina al 0,5%
y caliente a ebullicin por unos minutos, retire y enfre en el fregadero con
agua. Tome con una pipeta 5ml de esta solucin de pepsina que ha sido
calentada a ebullicin y agrguela al tubo de ensayo D. Adems, agregue al
tubo de ensayo D, 5 ml de HCl al 0,4%, agitar constantemente. A los 10 min.
de agregar el HCL, aada 5 ml de agua destilada, mezcle y deje en reposo.
OBSERVACIONES:
- En el tubo de ensayo A, se observa poca cantidad de precipitado, que corresponde a la fibrina
no hidrolizada, por tanto una gran parte de la fibrina ha sido hidrolizada.
- En el tubo de ensayo B, se observa mayor cantidad de precipitado que en el tubo de ensayo
A, explique por qu.
- En el tubo de ensayo C, tambin se observa mayor cantidad de precipitados que en el tubo de
ensayo A, explique por qu.
- En el tubo de ensayo D, tambin se observa mayor cantidad de precipitados que en el tubo de
ensayo A, explique por qu.
2. Accin lacto-coagulante de la pepsina.
a. En el tubo de ensayo E, coloque 2 ml de solucin de pepsina al 0,5%, agregue
5 ml de leche y agite constantemente por un minuto. Deje el tubo en reposo.
b. En un tubo de ensayo (sin marcar), aada 3 ml de solucin de pepsina al 0,5%
y caliente a ebullicin por unos minutos, retire y enfre en el fregadero con
agua. Tome con una pipeta 2ml de esta solucin de pepsina que ha sido
calentada a ebullicin y agrguela al tubo de ensayo F. Agregue al tubo de
ensayo F 5 ml de leche y agite constantemente por un minuto.
c. Introduzca los tubos E y F en el bao mara a 37C por 20 min.
OBSERVACIONES:
- En el tubo de ensayo E, se observa que la leche se coagul, mientras que en el tubo de
ensayo F no se observa el fenmeno de coagulacin de la leche. Explique los resultados.
3. Accin proteoltica (hidrolizante) de la tripsina sobre la protena fibrina (sustrato).
a. En el tubo de ensayo G, coloque 5 ml de solucin de tripsina al 1%, agite
varias veces por 10 a 20 min. Luego agregue 5 ml de agua destilada, y agite
por inversin durante 10 min. Transfiera, aproximadamente, la mitad del
63
contenido del tubo de ensayo G al tubo de ensayo H. Dejar en reposo el tubo de

ensayo G.
b. Al tubo de ensayo H agregue 2 o 3 gotas de solucin de NaOH al 1 N y mezcle
por inversin. Dejar en reposo el tubo de ensayo H.
c. En un tubo de ensayo (sin marcar), aada 6 ml de solucin de tripsina al 1% y
caliente a ebullicin por unos minutos, retire y enfre en el fregadero con agua.
Tome con una pipeta 5ml de esta solucin de tripsina que ha sido calentada a
ebullicin y agrguela al tubo de ensayo I. Adems, agregue al tubo de ensayo
I, 4 o 6 gotas de NaOH al 1 N, agitar constantemente por inversin durante 10
min., luego aada 5 ml de agua destilada, mezcle y deje en reposo.
OBSERVACIONES:
- En el tubo de ensayo H, se observa poca cantidad de precipitado, que corresponde a la
fibrina no hidrolizada, por tanto una gran parte de la fibrina ha sido hidrolizada.
- En el tubo de ensayo G, se observa mayor cantidad de precipitado que en el tubo de ensayo
H, explique por qu.
- En el tubo de ensayo I, se observa mayor cantidad de precipitado que en los tubos de ensayo
G y H, explique por qu.
64

NCLEO ZARAZA
RECONOCIMIENTO DE LAS CARACTERSTICAS DE LOS LPIDOS
Los lpidos con los carbohidratos y las protenas son alimentos importantes para
muchos animales. Adems, los lpidos tienen gran importancia bioqumica por ser la forma
principal de almacenamiento de energa y por su papel en las estructuras celulares. As mismo,
tienen gran importancia comercial en la elaboracin de jabones, detergentes, grasas y de
diversos aceites usados en la industria de la pintura.
Las grasas animales y vegetales son mezclas de diversos glicridos, por lo cual sus
propiedades qumicas dependen de los componentes de esa mezcla. Por otra parte, los
glicridos son steres de los cidos grasos con glicerina, en los cuales solo vara el tipo y
nmero de molculas de cido graso que lo constituyen.
Propiedades ms Relevantes de los Lpidos.
1) Solubilidad
Una de las caractersticas principales de los lpidos es su insolubilidad en agua y su
solubilidad en solventes orgnicos, esta propiedad permite el aislamiento y fraccionamiento de
los diferentes lpidos. Al esterificarse la glicerina con los cidos grasos se pierden los grupos
oxidrilos de la glicerina y los grupos carboxlicos de los cidos grasos, es decir, los grupos
polares; convirtindose estos steres (aceite o grasa) en sustancias no polares y por lo tanto,
no solubles en solventes polares pero s en los solventes no polares, como ster, cloroformo,
tetracloruro de carbono, etc.
2) Composicin de los acilgliceroles
Los cidos grasos reaccionan con la glicerina formando glicridos. Estos compuestos
difieren de los cidos grasos, as que las propiedades de un determinado glicrido dependen
nicamente del tipo de cido graso que contienen. Adems, pueden ser hidrolizados en varias
formas, liberndose as sus constituyentes. La glicerina de la grasa de deshidrata y se produce
aldehdo acrlico o acrolena (propenal), de olor muy irritante y que reduce el nitrato de plata
amoniacal del papel filtro, por lo cual este se ennegrece.
CH2OH
CH2
65
K(SO4)2
CHOH
CH2OH
Glicerina
CH
CHO
Acrolena
2H2O
agua
La acrolena es la sustancia que comunica el olor caracterstico a las grasas quemadas.

Resumiendo: el bisulfato de potasio acta como deshidratante del lpido, originando este
compuesto reductor. Esta reaccin permite reconocer la glicerina en cualquier compuesto:
glicridos, fosfolpidos, etc.
3) Saponificacin
Los lcalis concentrados hidrolizan las grasas produciendo glicerina y sales alcalinas de
los cidos grasos que lo forman, los cuales reciben el nombre de jabones. El proceso se
denomina saponificacin. Por lo tanto, un jabn es una sal metlica de un cido aliftico
superior, formndose siempre que se hidroliza una grasa en medio alcalino.
En el experimento de saponificacin se obtiene un jabn que aparece como una pasta

homognea. En este experimento se basa la determinacin del ndice de saponificacin, el cual
da una idea de la composicin de la grasa en estudio en cuanto al tamao de los cidos grasos
que la forman.
Jabones insolubles
Los cidos grasos superiores dan sales de calcio o de plomo, insolubles en agua,
formndose un precipitado de ellas.
2R COONa + CaCl2
2R COONa + (CH3COO)2Pb
(R COO)2 Ca
+2NaCl
(R COO)2 Pb + CH3COONa
Los jabones de potasio, sodio y amonio se disuelven con facilidad en el agua, al

contrario de los jabones de magnesio, plomo y calcio, que son insolubles y representan una
forma en al cual se elimi9nan estos metales por el intestino.
4) Acidez libre
66
El aceite neutro posee un pH en los lmites de la neutralidad, ya que los cidos grasos se
encuentran en l completamente esterificados. El aceite rancio, al contrario, es francamente
cido, lo cual se debe a la liberacin de los cidos grasos presentes en su molcula.
La fenolftalena, es un indicador, que es incolora en medio cido y roja en medio alcalino
(esto explica el resultado del experimento de acidez libre).
En un medio neutro (aceite neutro) es suficiente una gota de KOH para alcalinizar el
medio y hacer virar el indicador, obtenindose la coloracin caracterstica de la fenolftalena
en medio alcalino.
En un medio cido (aceite rancio) es necesario agregar mayor cantidad de lcali, para
neutralizar la acidez existente, por lo cual el color rojo se establecer mas tarde y nicamente
cuando da haya neutralizado todos los cidos presentes.
- Evidenciar propiedades ms relevantes de los glicridos, como son: solubilidad,
composicin, saponificacin y acidez libre.
PROCEDIMIENTO.
1) Experimento 1. Solubilidad de los lpidos.
Experimento 1-A
a) Coloque en un tubo de ensayo 15 gotas de aceite neutro.
b) Agregue 10 ml de agua, mezcle bien, deje reposar y anote lo que observa.
c) Despus que la capa de aceite se haya separado de nuevo en la superficie del agua, se
aade 3 o 4 gotas de solucin jabonosa, mezcle bien, deje reposar y anote lo
observado.
Observe como se forma una emulsin poco estable en el agua y con el agua jabonosa
la emulsin es ms estable pero no se disuelve.
Experimento 1-B
a) Coloque 10 gotas de aceite neutro en un tubo de ensayo que contiene 2 ml de solvente:
alcohol, cloroformo o tetracloruro de carbono. Anote las observaciones.
Observe como el aceite se solubiliza completamente en el solvente.
2) Experimento 2. Composicin de los acilgliceroles y Reconocimiento de la glicerina.
Tome dos tubos de ensayo e identifquelos con los nmeros 1 y 2. Prepare los tubos ya
identificados de la siguiente manera:
a) En el tubo marcado con el N 1 coloque 1 ml de aceite neutro y en el tubo N 2 vierta
10 gotas de glicerina.
b) Agregue a ambos tubos (aproximadamente) 1 g de bisulfato de potasio (KHSO4).
c) Introduzca en la boca de cada tubo una tira de papel humedecida en solucin de
nitrato de plata amoniacal (reactivo de Tollens).
d) Caliente ambos tubos a la llama directa usando el mechero.
e) Anote las observaciones. Compruebe si se producen vapores blancos que tienen un
olor muy irritante. Adems, si el papel toma una coloracin negruzca.
67
3) Experimento 3. Saponificacin
a) Vierta en un beaker 2 ml de aceite neutro.
b) Agregue 10 ml de alcohol absoluto. Mezcle bien.
c) Aada 10 ml de NaOH al 10%. Vuelva a mezclar bien.
d) Caliente lentamente y agite constantemente hasta la evaporacin del lquido.
e) Retire el beaker del fuego y aada 20 ml de agua. Mezcle bien.
f) Anote las observaciones. Determine como se form una pasta suave, poco consistente
y homognea.
g) Guarde la solucin en un tubo de ensayo para los experimentos siguientes.
4) Experimento 4. Jabones insolubles

Tome dos tubos de ensayo e identifquelos con los nmeros 1 y 2.
a) En los tubos de ensayo 1 y 2 vierta 3 ml de solucin jabonosa obtenida en el
experimento 3.
b) Aada en el tubo1, 1 ml de cloruro de calcio al 5%.
c) Aada en el tubo 2, 2 ml de acetato de plomo al 5%.
d) Observe como aparece un precipitado blanco en cada tubo.
5) Experimento 5. Acidez libre

Tome dos tubos de ensayo e identifquelos con los nmeros 1 y 2.
a) Vierta en el tubo de ensayo N1, 1 ml de aceite neutro (aceite fresco).
b) Agregue 5 ml de alcohol absoluto.
c) Aada 2 gotas de fenolftalena y mezcle bien.
d) Agregue luego gota a gota, solucin de hidrxido de potasio (KOH) 0,1N.
e) Anote el nmero de gotas de lcalis necesarias para producir el cambio de color.
f) Repita el experimento en el tubo N 2, usando en lugar de aceite neutro, aceite rancio.
g) Observe y anote los resultados en ambos tubos y las diferencias entre ambos. Constate
como en el con aceite neutro, aparece una coloracin rojiza al agregar 1 o 2 gotas de
KOH, mientras que el tubo con aceite rancio es necesario aadir una cantidad mayor
de lcali para obtener el mismo color.
Este experimento es la base para la determinacin del ndice de acidez de una grasa.
68
69

Practica de Laboratorio Corre Games

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Practica de Laboratorio Corre Games

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

INDICE

Preparacin de soluciones con unidades fsicas de concentracin .. 7

de la concentracin del sustrato sobre la actividad

Colorimetra nociones generales .... 37

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

No realice experimentos NO AUTORIZADOS.

Use pantalla de seguridad cuando existe el peligro de explosin de aparatos de

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

PISETA: envase plstico, con un dispositivo que permite verter lquido.

OPERACIONES COMUNES EN UN LABORATORIO DE BIOQUMICA

Los objetivos de la prctica son:

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

Soluto Gaseoso: todas las mezclas gaseosas, ejem.: aire.

- Soluto Gaseoso: Hidrgeno en Paladio metlico.

Soluto Gaseoso: Oxgeno en agua, soda.

SOLUCIONES SATURADAS, SOBRESATURADAS, SOLUBILIDAD Y

Si se diluye una solucin aumenta el volumen y disminuye la concentracin, pero la

1 g = 103 mg = 106 g = 109 ng = 1012 pg

Las unidades fsicas de volumen mas utilizadas son:

1 l = 103 ml = 106 l = 109 nl = 1012 pl

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

M = N milimoles de soluto = mmol

2) NORMALIDAD: el equivalente gramo de un elemento o compuesto es la cantidad del

N = miliequivalente de soluto = meq.

Los objetivos de la prctica son:

Lehninger, A. 1990. Bioqumica. Ed. Omega S.A. Espaa. 1117 pp.

N 3) A cuntos litros equivalen los siguientes volmenes?

N 8) Cul es la concentracin en % p/v de una solucin al 37,7 % en peso y de densidad

N 13) Calcule el Peso Equivalente (PE) de:

N 14) A cuantos equivalentes-gramos corresponden o estn contenidos en?:

N 15) Cuantos gramos se necesitan para preparar?:

d- 600 ml de Sol de NaCl al 0,5 eq/l

13.- a) 58.44g/eq ; b) 55,485g/eq ; c) 39,99g/eq ; d) 37,035g/eq ; e) 49,035g/eq ; f) 36,45g/eq

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

tiempo de incubacin, la catalasa se inactiva acidificando el medio con H2SO4. Luego se

2KMnO4 + 4H2SO4 + 5H2O2

2KHSO4 + 2MnSO4 + 8H2O

Fiolas de 250 ml.

a. Ubique 10 fiolas limpias de 250ml, enumrelas del 1 al 10 y preprelas como sigue:

EJEMPLOS DE LOS CALCULOS

Fiola N 1 = 23,7 ml KMnO4

23,7 ml (KMnO4) x 0,05 N (KMnO4) = 1,185 meq H2O2

8,4 ml (KMnO4) x 0,05 N (KMnO4) = 0,42 meq H2O2

Ya que los equivalentes-gramos de KMnO4 es igual a los equivalentes-gramos de

Valencia del H2O2 =2

4) Como la actividad de las preparaciones de catalasa sern determinadas por medicin de la

Al finalizar los clculos se tendrn 5 valores correspondientes a la cantidad de H2O2

Con los valores de [S] y V se elabora el grfico de Michaelis-Menten

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

La G f de la Glucosa es 219,45 Kcal/mol; la G f del Etanol es -43,39 Kcal/mol;

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

H2SO4 (concentrado) + H2O

REACCIONES DE OXIDACIN DE AZUCARES

La probable reaccin de reduccin del cobre por el azcar es la siguiente:

+ Cu2O + 4CH3 - COOH

Los objetivos de la prctica son:

1.- REACCION DE MOLISCH.

6.- REACCION DE BARFOED

A cada tubo de ensayo, aada 2 ml de agua destilada y 2 gotas de solucin de yodo al

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LOS AZUCARES REDUCTORES POR EL

Complejo tartrato cprico

R COOH + 2CuOH + H2O

Los objetivos de la prctica son: