CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

Para separacin y determinacin de iones, haciendo uso de resinas de

intercambio inico. Se fundamenta en los equilibrios de intercambio entre los
iones de una disolucin y los iones del mismo signo que estn en la superficie
de un slido de elevada masa molecular y esencialmente insoluble
Constitucin de las resinas:
1. Parte estructural: Polmero con matriz tridimensional
2. Parte funcional: Grupo inico, homogneamente distribuido
Clasificacin de las resinas:
a). Resinas catinicas:
-

De acidez fuerte (grupos de cido sulfnico)

De acidez dbil (grupos de cido carboxlico)

b). Resinas aninicas:

-

De basicidad fuerte (grupos de amina cuaternaria)

De basicidad dbil (grupos de amina primaria)

El intercambio se representa de las siguientes maneras:

Intercambio catinico: RSO

+M

+
Intercambio aninico: RN(CH ) OH + A
33

RSO

+
+
M +H

+ RN(CH ) A + OH
33

Las fases mviles utilizadas suelen ser disoluciones acuosas que pueden
contener cantidades moderadas de metanol u otros disolventes orgnicos
miscibles en agua.

Se utilizan detectores de conductividad electroltica , requiriendo en la mayora

de los casos de una columna supresora, cuyo objetivo es eliminar las
interferencias ocasionadas por la elevada conductividad del eluyente
Aplicaciones:
Variedad de sistemas orgnicos y bioqumicos que incluyen: drogas y sus
metabolitos, sueros, conservadores de alimentos, mezclas de vitaminas,
azcares y preparaciones farmacuticas

CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN POR TAMAOS

Denominada tambin cromatografa de permeacin o filtracin en gel o de

geles permeables, se aplica a especies de alto peso molecular
A diferencia de otros mtodos cromatogrficos, no implica una interaccin
fsica o qumica entre los analitos y la fase estacionaria
Los rellenos de las columnas estn constituidos por pequeas partculas
polimricas o de slice (aprox 10 ) que contienen una red uniforme de
poros.
La separacin de los componentes se lleva a cabo debido a que, las molculas
con tamaos mayores que los poros del relleno pasan fuera de las partculas y
son las primeras en eluir, mientras que las de menor tamao penetran a travs
de laberintos de poros, retrasando su aparicin
TEORA DE LA CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN
Vt= Vg+ Vi+ V0
Ve= V0 + Kvi

Para las molculas grandes K=0, para las pequeas K=1

De donde:
Vt= Volumen total
Vg= Volumen ocupado por la matriz slida del gel
Vi= Volumen del disolvente retenido en los poros
V0= Volumen libre exterior a las partculas del gel

APLICACIONES:

Filtracin en gel (disolventes acuosos y rellenos hidroflicos)(muestras

solubles en agua)

Separacin de molculas de alto peso molecular de productos naturales

de las especies de bajo peso molecular y de las sales. Ejemplo: las
protenas de los aminocidos y de los pptidos de bajo peso molecular
Gel permeable (disolventes no polares y rellenos hidrofbicos)(muestras
solubles en disolventes orgnicos poco polares)

Separacin de homlogos y oligmeros. Ejemplo: separacin de cidos

grasos.

3.4 CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la
distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
En cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs
de una columna que contiene a la fase fija.
La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna
generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase estacionaria.
Luego de colocar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase
mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad.

 Caractersticas:
Columnas de vidrio
Dimetros de 1 a 5 cm
Longitudes de 50 a 500 cm
Fase estacionaria slida con de partcula de 150 a 200 m
Tiempo de separacin: varias horas
Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao
de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de 3 a
10 m, lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr
que fluya la fase mvil.
Se ha convertido en la tcnica de separacin ms ampliamente utilizada,
debido a:
Su sensibilidad
Fcil adaptacin a determinaciones cuantitativas
Separacin de especies no voltiles o termolbiles
Aplicacin a sustancias que son de inters primordial en la
industria
De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita
trabajar con las altas presiones requeridas.
Dependiendo del tipo de fase fija y del tipo de fenmeno fsico que
provoca la separacin, la cromatografa lquida de alta resolucin puede
ser:
1. Cromatografa de adsorcin
La fase fija es un slido y se utiliza casi exclusivamente slice (slica) y
en mucha menor medida almina.
2. Cromatografa de reparto
En casi todos los casos, como fase estacionaria se utilizan compuestos
unidos qumicamente a un soporte slido de slica. Se la subdivide en
cromatografa en fase normal y fase reversa.
En la cromatografa en fase normal, la fase fija es polar (como por
ejemplo agua o trietilenglicol) y los compuestos menos polares eluyen
primero.
En la cromatografa en fase reversa, el compuesto unido qumicamente
es un hidrocarburo aliftico y se emplean fases mviles polares. En este
caso, las sustancias ms polares eluyen primero.

 3.

Cromatografa inica

Se utilizan columnas rellenas con resinas de intercambio inico para

separar y determinar iones.
4.

Cromatografa de exclusin por tamao

La fase fija est formada por partculas polimricas o de slice que

contienen una red uniforme de poros y llevan a cabo un fraccionamiento
relacionado con el tamao molecular.
Las molculas de tamao mayor son excludas y eluyen primero,
mientras que las ms pequeas que penetran en los poros son retenidas ms
tiempo.
Un equipo para cromatografa lquida de alta resolucin puede
representarse por el siguiente esquema:

FASE MVIL
La fase mvil puede ser un solvente puro o una mezcla de solventes.
Cuando se trata de una mezcla, puede programarse la bomba para que
tome solventes de diferentes botellas (de vidrio o acero inoxidable) en
una proporcin determinada y realice la mezcla en una cmara de
mezclado. El mtodo se denomina elucin con gradiente
Cuando durante toda la separacin se utiliza siempre el mismo solvente,
se denomina elucin isocrtica
SISTEMA DE BOMBEO Y DE INYECCIN
Se utilizan tres tipos de bombas:
Recprocas
De desplazamiento
Neumticas
La introduccin de la muestra puede hacerse de dos maneras:
Por medio de una jeringa
A travs de una vlvula

El tamao de la muestra es de dcimas de l a 500 l

COLUMNAS
Columnas analticas:

Longitud: de 10 a 30 cm

Dimetro interno: 4 a 10 mm

Tamao de partcula: 5 a 10 m

Eficiencia: de 40,000 a 60,000 platos/m

Precolumnas
Para aumentar la vida de la columna, elimina materia en suspensin y
contaminantes del disolvente
DETECTOR
Tipos:
a) Los que se basan en una medida de una propiedad de la disolucin.
Ejemplos: ndice de refraccin, densidad, constante dielctrica, que se modifica
con la presencia del analito.
b) Detectores basados en la medicin de una propiedad del soluto, ejemplo:
Absorbancia en el UV, Fluorescencia, Infrarrojo, etc.