Instituto Politcnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Bioqumica Microbiana

Practica 5:

Oxidacin de azufre y de ion ferroso

por bacterias quimiolitotrficas
Alumnos:

Camacho Galn Araceli

Garca Marrufo Luis Antonio
Ochoa Poblano Apolinar Rafael
Solis Castro Korina Amairani
ASPECTO
Hiptesis
Objetivos
Anlisis de resultados
finales
Discusin de
resultados
Conclusiones
Bibliografa

PORCENT
AJE
1%
1%
1%
4%
2%
1%

Grupo: 5IM1
Equipo: 1
Fecha de Entrega: 15/11/2016

CALIFICACIN

Hiptesis.

Si Thiobacillus thiooxidans y los microorganismos presentes en el consorcio son

microorganismos quimiolitotrficos, entonces oxidaran compuestos inorgnicos como
compuestos reducidos del azufre como fuente de energa.
Si Thiobacillus thiooxidans y los microorganismos del consorcio son microorganismos que
viven en pH cidos, entonces el pH del medio despus del cultivo ser menor al pH inicial.
Si Thiobacillus thiooxidans y los microorganismos del consorcio ocupan el O 2 como aceptor
final de electrones de su cadena respiratoria, entonces crecern mejor en condiciones en las
que se incorpore aire constantemente.
Si Thiobacillus thiooxidans y el consorcio de microorganismos son capaces de oxidar
compuestos del azufre como fuente de energa, entonces su crecimiento se puede determinar
por el precipitado formado.

Objetivos

Determinar el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans y un consorcio de microorganismos

usando mtodos gravimtricos, volumtricos y yodomtricos.
Observar el efecto de microorganismos quimiolitotrficos en el medio donde crecen, midiendo
el H2SO4 formado por mtodos volumtricos.
Observar el efecto de las condiciones de un cultivo con incorporacin de aire y un cultivo
estacionario en la actividad metablica de los microorganismos quimiolittrofos.
Cuantificar los productos generados de Thiobacillus thiooxidans y un consorcio de
microorganismos por la oxidacin de compuestos reducidos del azufre.

Resultados.
Resultados obtenidos

Cultivos
Agitados

Estacionarios

Cultivo de Thiobacillus thiooxidans en azufre elemental (medio A)

1-Azufre utilizado (mg)

48.8

2-H2SO4 formado (mg)

177.49

57.86

3- S0 de SO4= formado (mg)

67.24

18.64

4-pH (pH inicial= 4.5)

1.7 | 4.6

1.8 | 4.5

Cultivo de un consorcio de microorganismos en tiosulfato (medio B)

1-Tiosulfato oxidado (mg)
2-H2SO4 formado (mg)
3-pH (pH inicial= 7)

185.39
77.22
2.3 | 6.7

185.38
51.2
3

6.9

Anlisis de Resultados.
Medio A
Azufre utilizado: Comparando entre el cultivo agitado y el estacionario notamos que aparentemente
no hubo crecimiento en el medio estacionario ya que no hubo consumo de azufre.
H2SO4 formado: Se aprecia una formacin mayor de cido sulfrico en el cultivo agitado, lo cual
muestra que bajo stas condiciones Thiobacillus thiooxidans utiliza los recursos ms eficientemente.
S0 de SO4 formado: Al incorporar aire constantemente es apreciable una mayor produccin de SO 4=
proveniente del azufre elemental.
pH: Se hace notable un crecimiento cuando el medio es acidificado, lo cual es comparable con los
medios no inoculados ya que no hubo acidificacin del medio.
Medio B
Tiosulfato oxidado: Se nota una leve diferencia en la oxidacin de tiosulfato a tetrationato en ambas
condiciones, lo cual indica que para este consorcio no es necesaria la incorporacin de aire para
tener un correcto crecimiento.
H2SO4 formado: Se observa una mayor formacin de cido en el medio al cual se le incorpora aire,
siendo confirmado a su vez por el pH del medio.

Discusin:
Las bacterias quimiolitotrficas tiene la facilidad de crecer en medios minerales teniendo como fuente
de carbono el CO2 y su poder reductor requerido para la reduccin del dixido de carbono es
obtenido mediante la oxidacin de compuestos inorgnicos. En el caso de las bacterias del azufre
estas pueden utilizar sulfuro, azufre elemental o tiosulfato como donador de electrones.
Se estudi la agitacin de los medios como una de las variables que influye en el crecimiento de los
microorganismos quimiolitotrficos. Los microorganismos utilizados, los medios de cultivo empleados
y las condiciones de los mismos se mantuvieron constantes. Posteriormente se determin
indirectamente el crecimiento de los microorganismos
mediante la cuantificacin de sustratos
residuales o de los productos oxidados.
Posteriormente se rest la cantidad de productos oxidados y de sustratos residuales obtenidos en los
matraces inoculados a los matraces sin inoculo los cuales se encontraban en condiciones de
agitacin y con la finalidad de cuantificar solo la cantidad de productos oxidados y sustratos por los
microrganismos; de manera anloga se realiz a los cultivos en condicin estacionaria.
Thiobacillus thiooxidans es una bacteria oxidante del azufre; ocupando por lo tanto el azufre
elemental contenido en el medio A como donador de electrones y oxidndolo hasta sulfato que al
ionizarse se forma cido sulfrico lo cual se pudo denotar con una disminucin del pH inicial de 4.5 a
1.7-1.8 en el medio agitado y estacionario inoculado con lo que se comprob el crecimiento de
Thiobacillus thiooxidans y el consorcio de microorganismos respectivamente; tambin se verifico que
en los medios inoculados no hubo formacin de este producto ya que no hubo cambio en el pH
inicial.

Ecuacin 1.

+
1
2

S +1 O 2+ H 2 O SO 4 + 2 H
2

Es importante mencionar que el microorganismo empleado es auttrofo y aerobio estricto por lo que
se emplea CO2 como nica fuente de carbono y O2 como aceptor final de electrones.
Mediante el mtodo de acidez titulable se cuantifico el cido sulfrico formado y los resultados
obtenidos permitieron visualizar con claridad que Thiobacillus thiooxidans presenta un crecimiento
mayor cuando el medio se mantiene en agitacin en comparacin con un medio estacionario, de
igual forma en la determinacin del azufre proveniente de sulfatos se observ que a mayor contacto
con el aire producido como consecuencia de la agitacin se favorece la solubilizacin de O 2 y CO2
en el medio, lo que favorece el crecimiento del microorganismo y por lo tanto la produccin de
metabolitos tambin aumenta.
La cuantificacin del azufre residual se realiz mediante un mtodo gravimtrico, el cual no es
especifico, por lo que los resultados pudieron verse modificados por varios factores como la
sensibilidad de la balanza analtica, perdida de filtrado o debido a que distintos analistas realizaron
las pesadas.
En el medio B se evalu el crecimiento de un consorcio de bacterias que emplea tiosulfato como
fuente de energa formando sulfatos que posteriormente se ionizan y producen cido sulfrico,
causando en el medio una disminucin del pH inicial de 7.0 a 2.3 en el medio agitado y de 3.0 en el
medio estacionario. Al analizar los resultados de la cuantificacin de cido sulfrico es posible
determinar que los microorganismos empleados crecen mejor en un medio con agitacin. Sin
embargo, mediante una titulacin yodomtrica se cuantifico el tiosulfato oxidado y se obtuvieron
resultados similares en ambos medios, lo cual permite suponer que la agitacin no es un factor que
modifique el crecimiento del consorcio bacteriano.

Ecuacin 2.

+
2

S 2 O2
+O
+
H
3
2
2 O SO 4 +2 H

Conclusiones:
Se determin el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans y del consorcio de microorganismos.
Los microorganismos quimiolitotrficos tienen mayor actividad metablica al encontrarse en
condiciones de agitacin que en el cultivo estacionario.

Se produjo la acidificacin de los medios al llevarse a cabo la oxidacin de las diversas

fuentes de energa y la formacin de cido sulfrico.

Bibliografa:
[1] Cook, Thomas M. (1964) Growth
Bacteriol. 88:620623.

of Thiobacillus thiooxidans in

shaken

culture. J.

[2] Gottschalk, G. (1986) Chemolithotropic and Phototrophic Metabolism. Bacterial metabolism 2

edicin; Paginas consultadas 283 y 284.
[3] Pars R et al Bioqumica de los microorganismos Reverte; Paginas Consultadas 273-275.