UMF Carol Davila Bucureti

Organite nedelimitate
de membrane
ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

2012

Organite nedelimitate de membrane

ORGANITE CELULARE
Organitele celulare sunt structuri permanente, cu durat de via mai mic
dect a celulei i care se rennoiesc permanent.
O parte din organite sunt observabile la microscopul optic i pot fi numite
structurale. Ele au dimensiuni de ordinal micrometrilor: mitocondria, aparatul
Golgi, centrul celular, ergastoplasma.
Alte organite pot fi observate numai la microscopul electronic, avnd
dimensiuni de ordinul nanometrilor i sunt numite ultrastructurale: reticulul
endoplasmic neted i rugos, lizozomii, peroxizomii, ribozomii, microtubulii,
microfilamentele.

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Organitele celulare se pot clasifica n: organite delimitate de membrane i

organite nedelimitate de membrane.

ORGANITE CELULARE NEDELIMITATE DE MEMBRANE

RIBOZOM II
Istoric. Ribozomii sunt denumii i granulele lui Palade, deoarece au fost
descoperii la microscopul electronic (n 1951) de savantul american de origine
romn George Emil Palade (19 noiembrie 1912, Iai d. 8 octombrie 2008),
3

Organite nedelimitate de membrane

laureat al premiului Nobel 1974.El a pus n eviden particule intracitoplasmatice

bogate n ARN, la nivelul crora se realizeaz biosinteza proteinelor. Termenul de
ribozom a fost propus de Richard B. Roberts n 1958 .
Etimologie. Denumirea de ribozomi provine de la acidul ribonucleic din
structura acestora i de la cuvntul grecesc soma corp.
Tipuri de ribozomi, localizare . Ribozomii sunt organite citoplasmatice
gsite att la procariote ct i la eucariote. La eucariote, ribozomii sunt prezeni n
toate tipurile celulare, cu excepia hematiei adulte , dar i n matricea unor
organite celulare cum sunt cloroplastele i mitocondriile, unde au rol n sinteza
protein-enzimelor specifice. Ribozomii mitocondriali sunt ntotdeauna mai mici
fa de ribozomii citoplasmatici i comparabili cu ribozomii procariotelor ceea ce
reflect originea pe scara evoluiei a mitocondriei.
Ribozomii sunt gsii n celul sub dou forme : liberi i ataai reticulului
endoplasmic. Starea n care se gsesc ribozomii depinde de prezena n lanul
poliptetidic sintetizat a unei se cvene numite semnal de orientare ctre reticulul
endoplasmic (ER-targeting signal sequence).
Ribozomii liberi
Gsii n citoplasm (citosol)
Pot apare singuri sau n grupuri sub form de poliribozomi sau
polizomi (ataai de un ARNm)
Mai numeroi n celulele implicate n sinteza proteinelor solubile n
citoplasm sau care formeaz structuri citoplasmatice importante sau elemente
motile.
Ribozomii ataai
Se gsesc ataai la exteriorul reticulului endoplasmic formnd RER
4

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Apar n cantiti mai mari n celulele care secret proteine de export ,

proteine

care n general conin puni disulfurice sau aminoacizi cu cisteina

necesitnd sinteza n lumenul RE

Responsabili de sinteza proteinelor care vor intra n constituia
membranelor sau vor fi mpachetate n vezicule i stocate n citoplasm sau
exportate nafara celulei
Celulele angajate n procese intense de sintez proteic conin un numr
foarte mare de ribozomi. Ribozomii sunt responsabili de bazofilia citoplasmei.
Dup valoarea constantei de sedimentare se descriu la procariote ribozomi
70 S i la eucariote ribozomi 80 S (unitatea Svedberg este o msur a ratei de
sedimentare a unui component centrifugat, care depinde att de greutatea
molecular ct i de forma tridimensional a componentului). Aceasta diferen de
structur st la baza utilizrii antibioticelor care

distrug doar ribozomii

procariotici ai bacteriilor fr a aciona asupra ribozomilor 80S. Ribozomii

mitocondriali sunt protejai de aciunea antibioticelor prin prezena dublei
membrane.
Dimensiunile ribozomilor sunt cuprinse ntre 15 30 nm. Structural sunt
formai din ribonucleoproteine RNP- i din molecule de ARNr (3 la procariote i 4
la eucariote). Componenta proteic are rol de a stabiliza structura i influnteaz
mai degraba abilitatea ARNr de a sintetiza proteine dect de a participa direct la
procesul de cataliz. Practic, din punct de vedere funcional ribozomii, prin
componenta ARNr, traduc informatia nscris pe ARNm, pentru a forma lanuri
polipeptidice i de aceea sunt considerai astazi ca particule enzimatice din
categoria ribozimelor. Cele mai cunoscute ribozime naturale sunt: peptidil
5

Organite nedelimitate de membrane

transferaza 23S ARNr, RNase P, Group I and Group II introns, GIR1, branching
ribozyme, Leadzyme.
n citoplasm, ribozomii pot disocia reversibil n 2 subuniti: mare i mic
(50 S i 30 S la procariote i 60 S i 40 S la eucariote). Cele 2 subuniti se
asambleaz n funcie de concentraia ionilor de Mg2+ din citoplasm. Pentru ca
cele dou subuniti sa fie mpreun concentraia optim a Mg 2+ este de 10-3 M.
Sub acest nivel subunitile se dezasambleaz i organitul dispare din citoplasm.

Subunitatea mic ribozomal 40S

Alctuit dintr-o molecul ARN: 18S

Conine aprox. 33 lanuri proteice (notate S1S33), cu greutate

molecular mic

Subunitatea mare ribozomal 60S

Alctuit din 3 molecule ARN: 28S, 5,8S (provenite dintr-un transcript

comun de 45S) i 5S

Conine aprox. 50 lanuri proteice (notate L1L50), cu greutate

molecular mic
Numrul acestora difer de la un tip celular la altul, dar este diferit i n
aceeai celul n raport cu momentele de activitate i repaus ale celulei.
Biogeneza ribozomilor. Biogeneza ribozomilor are loc n citoplasma i n
nucleol i implic funcionarea coordonat a peste 200 de proteine i procesarea
celor 4 ARNr

cat si asamblarea acestora cu RNP. RNP sunt sintetizate n

citoplasm n vecinatatea nucleului. Componentele proteice ale subunitilor mare

i mic sunt importate n nucleu prin porii nucleari cu diametru de 120nm. Prin
porii nucleari sunt importate prin transport activ peste 560000 RNP pe minut.
ARNr este transcris cu vitez foarte mare n nucleol aici gsindu-se toate cele 45
6

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

de gene care codific ARNr. Dup aceea este asamblat cu subunitile ribozomale
i este exportat prin porii nucleari n citoplasm.
Funcia ribozomilor. Ribozomii constituie sediul biosintezei proteinelor
prin interaciuni ntre ARNm, ARNt i ARNr fiind denumii aparatul de traducere al
celulei.
Etapele traducerii informaiei genetice
1.

Sinteza aminoacil-ARNt

2.

Iniierea sintezei lanului polipeptidic

3.

Elongarea lanului polipeptidic

4.

ncheierea sintezei lanului polipeptidic

1. Sinteza aminoacil-ARNt

Se realizeaz de ctre aminoacil-ARNt sintetaze 20 de enzime ce

recunosc specific cei 20 aminoacizi i anticodonii asociai de la nivelul moleculeor

de ARNt

Aminoacil-ARNt realizeaz legtura dintre secvena codonilor din

ARNm i structura primar a proteinelor

Situsurile de legare ARN ale ribozomului

Situsul pentru ARNm

Situsuri pentru ARNt

1.

Situsul A: leag aminoacil-ARNt

2.

Situsul P: leag polipeptidul n curs de sintez cuplat cu ARNt

3.

Situsul E: leag o molecul de ARNt fr rest aminoacil/peptidil

Organite nedelimitate de membrane

2.Iniierea sintezei lanului polipeptidic

Se formeaz un complex de preiniiere din: subunitatea mic

ribozomal, primul aminoacil-ARNt, iniiator, (ntotdeauna metionin-ARNt) i

factorii eucariotici de iniiere eIF1 eIF4
Complexul se ataeaz pe

ARNm i detecteaz codonul start

(ntotdeauna AUG)
Se formeaz complexul de iniiere prin legarea subunitii ribozomale

60S i pierderea factorilor de iniiere. Met-ARNt este situat n situsul P al

ribozomului. Met-ARNt este folosit o singur dat n sinteza unui lan peptidic i
este numit ARNt de iniiere
n situsul A se ataeaz aminoacil-ARNt corespunztor urmtorului

codon din ARNm

Este catalizat sinteza legturii peptidice dintre metionin i al doilea

aminoacid,

cu

transferul

dipeptidului

pe

al

doile a

ARNt

(sub

aciunea

transpeptidazei din subunitatea 60S) , rezultnd ATNt dipeptidil

Simultan, subunitatea mare ribozomal se deplaseaz cu 3 baze n

direcia 3 a ARNm, astfel nct ARNt iniiator ajunge n situsul E

4. Elongarea

ncepe cnd ARNt-dipeptidil este transferat din situsul A n situsul P,

proces care va continua pe toat lungimea ARNm

ntotdeauna n situsul A se va alinia un alt codon care va fi recunoscut

de anticodonul corespunztor din ARNt i care va lega un nou aminoacid la catena

polipeptidic

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

5. Terminarea sintezei lanului polipeptidic

Are loc cnd n dreptul situsului A ajunge codonul stop (UAA; UAG;

UGA) pentru care nu exist ARNt cu anticodon complementar

Codonii stop sunt recunoscui de o protein numita factor de

terminare, care se leag n situsul A i produce hidroliza legturii dintre catena

polipeptidic i ARNt din situsul P

Lanul polipeptidic este modificat n continuare prin hidroliza i

ndeprtarea radicalului metionil.

PROTEAZOMII
Definiie, structur. Proteazomii sunt complexe moleculare proteolitice
intracelulare, ATP-dependente, implicate n degradarea proteinelor etichetate cu
poli-ubiquitin. Proteazomii se gsesc n toate tipurile celulare (ntr-o celula
uman sunt

n jur de 20.000 30.000 de proteazomi). Proteazomii au fost

descoperiti de Alfred Goldberg i Martin Rechsteiner n 1980.

Complexul proteazomic 26S are masa molecular de 2.400 kDa, form de
butoia i este alctuit din urmtoarele componente:
particula miez sau de baz format din 4 inele suprapuse fiecare alctuit
din apte proteine protomerice: dou inele centrale cu situsuri catalitice
avnd activitate

de treonin-proteaze

(dou situsuri cu activitate

de

chimotripsina care diger aminoacizii hidrofobi, dou situsuri cu activitate

de tripsina care digera aminoacizii bazici si dou situsuri caspazice de
clivare a aminoacizilor acizi) i dou inele fr activitate catalic
cunoscut;
9

Organite nedelimitate de membrane

dou particule reglatoare identice, cte una la fiecare capt al particulei

miez. Fiecare particul reglatoare are n structura sa 14 proteine (numite
PA700) diferite de cele din particula miez, ase dintre acestea fiind ATPaze. Unele dintre subunitile particulei reglatoare au situsuri care permit
recunoasterea ubiquitinei.
Funcie. Degradarea proteinelor este eseniala pentru celul deoarece:
asigur aminoacizi pentru o nou sintez proteic;
ndeparteaz enzimele aflate n exces;
ndeparteaz factorii de transcripie (aciunea genelor) care nu mai
sunt necesari.
n celule exist dou organite intracelulare eseniale n procesele de digestie
a proteinelor denaturate sau inutile (n exces) :
lizozomii: pentru proteine extracelulare ajunse

celul prin

endocitoz, endocitoz mediat de receptori i fagocitoz;

proteazomii: pentru proteine endogene

(proteine

sintetizate

celul), factori de transcriere, cicline ale ciclului celular, proteine

codificate de virusuri, proteine incorect pliate datorit unor greeli de
translaie (produse de gene cu erori) i proteine degradate de
molecule din citosol.
Calea de degradare a proteinelor mediat de ubiquitin a fost descris de
Aaron Ciechanover, Avram Hershko i Irwin Rose care au primit premiul Nobel n
2004.
Proteazomii

degradeaz

proteinele

peptide

mici

care

sunt

apoi

hidrolizate de exopeptidaze citoplasmatice. Digestia proteinelor ncepe cnd

proteinei ce urmeaz a fi digerate i se ataeaz un mic polipeptid numit
10

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

ubiquitin. Ubiquitina (Ub) este o protein globular de 76 de aminoacizi i are un

capt C-terminal aflat n spaiul apos (citosol). Are aceeai structura la bacterii,
drojdii si mamifere. Proteinele destinate procesului de degradare sunt conjugate
cu ubiquitina care se leag de captul N-terminal al unui reziduu de lizin.
Urmeaz ataarea altor molecule de ubiquitin cu formarea unui lan.
Ubiquitina este ataat proteinei ce urmeaz a fi digerat sub influena a
trei enzime:
E1 (enzima de activare a Ub) care modifica Ub n aa fel nct Gly din
captul C-terminal s reacioneze cu Lys de pe protein;
E2 (enzima de conjugare a Ub) care ataeaza Ub la protein;
E3 (Ub ligaze) cu rolul de a recunoate proteina substrat i de a i lega
ubiquitina.
Legarea ubiquitinei reprezint semnalul care permite proteinei s intre n
complexul proteazomic.

Etapele procesului de digestie

complexul protein-ubiquitin se leag de situsul de recunoastere al
ubiquitinei de pe particula reglatoare;
proteina este depliat i transferat n cavitatea central a particulei
miez;
se desfac anumite legaturi peptidice ale lanului sub aciunea
situsurilor active din inelele centrale, rezultatul fiind un set de
peptide avnd n medie 8-10 aminoacizi;

11

Organite nedelimitate de membrane

fragmentele

de

peptide

prsesc

particula

miez

pe

cale

necunoscut putnd fi degradate n continuare pn la aminoacizi

individuali de ctre peptidaze din citosol sau pot fi incorporate in
clasa I a moleculelor de histocompatibilitate pentru a fi prezentate
sistemului imun ca potentiale antigene ;
particula reglatoare elibereaz apoi ubiquitina pentru a fi refolosit.
Un mare procent dintre proteinele care sunt sintetizate in citosol nu ating
niciodata starea funcional deoarece conin erori de structur aprute n urma
proceselor de translaie sau pliere. Aceste produse ribozomale defecte sunt rapid
ubiquitinizate i degradate in proteazomi, re prezentnd o sursa importanta de
peptide din clasa MHC I.

Astfel, peptidele mici cu 8-10 aminoacizi sunt

transportate n reticulul endoplasmic (RE) de ctre un transportor asociat cu

complexul de prezentare a antigenelor (TAP). n RE peptidele se leag i
stabilizeaz

heterodimerii

de

MHC

I, legare

supravegheat

de

proteine

chapoerone cum ar fi BiP, calreticulina i ERp57. Dup asamblare moleculele de

MHC purttoare de peptide antigenice sunt translocate prin aparatul Golgi spre
suprafaa celular, unde sunt expuse i vor ntlni celule T purttoare de receptori
specifici complementari (TCR) care distrug celula inta infectat. Majoritatea
substraturilor care au epitopi MHC I sunt conjugate cu un lant multiubiquitinat,
care l orienteaz catre proteazom pentru a fi degradat.
Calea de degradare proteazomic este esenial pentru numeroase procese
celulare inclusiv rspunsul din stresul oxidativ.
Proteazomii

regleaz

numeroase

aspecte

ale

transcripiei

mecanisme proteolitice ct i prin mecanisme non-proteolitice.

12

att

prin

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

interactioneaz cu cromatina ca urmare a ubiquitinizarii histonei H2b

i induce metilarea histonei H3;
regleaza transcripia prin turn-overul activatorilor;
regleaza recrutarea i schimbul co-activatorilor i co-represorilor prin
ambele mecanisme;
recruteaz ARN polimeraza la locul transcripiei;
intervin n elongare;
sunt necesari pentru terminarea transcripiei.
Blocarea digestiei intrace lulare la nivelul proteazomilor poate ajuta la
protejarea celulei. Blocarea degradrii se face cu inhibitori de proteazomi care
produc acumularea intracelular a proteinelor greit mpachetate sau degradate i
marcate cu ubiquitina. Consecina este declanarea unui rspuns de tip heat
shock care protejeaja celula de ageni toxici sau temperaturi crescute.
Implicaii clinice. Companiile de medicamente se afl permanent n cutarea
unui inhibitor de proteazomi care s susin abilitatea unei celule de a:
rezista n condiii de ischemie sau la meninerea organelor dup
transplant;
modula cantitatea i durata de via a ciclinelor i a factorilor de
transcripie;
trata cancerelor cu medicamente ca Velacade care inhib proteoliza
mediat de ubiquitin.
Bortezomib este un medicament inhibitor de proteazomi, utilizat in
tratamentul mielomului multiplu boala cu niveluri ridicate de proteazomi.

13

Organite nedelimitate de membrane

Medicamentul blocheaz aciunea proteolitic a proteazomului i inhib ciclinele

stopnd diviziunea haotic a celulelor canceroase.
Inhibitorii de proteazomi sunt substante de viitor i n tratamentul bolilor
autoimune cum ar fi lupusul eritematos diseminat (LES) i artrita reumatoid. Der
asemenea, fibroza chistic este o boal produs de degradarea prea rapid a
transportorului de clor la nivelul proteazomilor.

INCLUZIUNILE CELULARE
Incluziunile celulare sunt depozite de molecule organice i anorganice care
apar n citoplasma celulelor, avnd caracter tranzitoriu sau definitiv, ireversibil,
normal sau patologic.
Incluziunile

fiziologice

sunt

cele

mai

mobilizabile,

modificndu-se

permanent n raport cu starea celulei sau n funcie de necesitile organismului.

Spre deosebire de organite, incluziunile nu au funcii specifice. n funcie de
proveniena lor incluziunile se pot clasifica n: exogene i endogene. Incluziunile
celulare exogene pot apare n celule n condiii fiziologice (spre exemplu
carotenul din morcovi) sau n condiii patologice (incluziuni de metale grele sau
particule de de azbest, siliciu, carbon, praf).
Incluziunile celulare endogene sunt de cele mai multe ori depozite
intracelulare de lipide , glucide, proteine, pigmeni, ioni, etc.
Incluziunile de natur glucidic
Depozitele de glucide din celulele animale sunt sub form de glicogen, iar
cele din celulele vegetale sub form de amidon.
Celulele animale bogate n depozite glucidice sunt hepatocitele i celulele
musculare la nivelul crora se gsesc cantiti mari de incluziuni de glicogen.
Depozitele de glicogen sunt utilizate n situaia n care celula este supus unor
activiti mecanice intense (ex. contracia muscular), sau n condiii de activitate
14

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

intens de sintez. Aceste depozite se formeaz prin glicogenogenez i sunt

utilizate de celul n urma procesului de glicogenoliz.
Glicogenul poate fi pus n eviden la MO prin coloraia carmine amoniacal
Best, evideniindu-se sub form de plaje mai mult sau mai puin ntinse, dar nu
ocup niciodat ntreaga citoplasm. Incluziunile de glicogen apar la ME sub
form de bastonae (particule alfa) sau de rozet (particule beta). n patologie se
observ

depozite

mari

de

glicogen

boala

Pompe

caracterizat

prin

hepatomegalie.
Incluziunile de natur lipidic
Incluziunile lipidice pot fi ntlnite n celul n urmtoarele circumstane:
-tranzitoriu celula hepatic postprandial, sub form de picturi lipidice
izolate, proporionale ca numr cu cantitatea de lipide ingerate, sunt repede
metabolizate i dispar din citoplasm la cateva ore dup ingestie
-temporar, pe o durata de timp variabil n celulele secretorii din glanda
mamar n lactaie, dispar din celul dup terminarea perioadei de lactaie
-permanent n celule

specializate

ale

esutului conjunctiv numite

adipocite, celule grase sau lipocite. Aceste celule sunt de 2 tipuri : adipocite albe
i adipocite brune.
Adipocitele albe formeaz esutul adipos alb, alctuind paniculul adipos. Au
form rotunjit cnd sunt izolate sau poligonal cand sunt grupate. Incluziunea
lipidic este unic - unilocular i ocup ntreaga citoplasm care este mpins
spre periferia celulei, predominant n jurul nucleului. Celula capt aa -numitul
aspect de inel cu pecete. Aceste celule au rol n metabolismul lipidic, de
protecie a principalelor organe i n termogenez la nivelul tegumentului (n
hipoderm).
Adipocitele brune formeaz esutul adipos brun, bine dezvoltat la nounscut i n copilrie i care apoi involueaz. La adult persist n regiunea
15

Organite nedelimitate de membrane

interscapular i inghinal. Celulele adipoase brune au form rotunjit, conin n

citoplasm numeroase incluziuni lipidice adipocit multilocular. Nucleul este
sferic, eucromatic, situat central, iar citoplasma are aspect vacuolar, spumos
datorit numeroaselor incluziuni lipidice.
n patologie se pot observa numeroase incluziuni lipidice n hepatocite la
alcoolici.
Incluziuni de natur proteic
Apar n celule secretorii exo- i endocrine n momente de supraproducie ,
cnd nu pot fi exocitate n acelai ritm cu cel n care se produc i rmn stocate in
citoplasm sau atunci cnd exocitoza este mediat de receptori, necesitnd un
semnal extracelular. Aceste incluziuni se gsesc n vezicule delimitate de
endomembrane.
Frecvent, n celulele glandelor salivare, ale stomacului sau n celulele
pancreasului exocrin se pot observa vezicule secretorii, care conin precursori
enzimatici (zimogeni). Aceti precursori sunt precursorul amilazei n glande
salivare, pepsinogenul n ce lulele principale ale stomacului i tripsinogenul n
pancreas. Veziculele sunt stocate la polul apical al celulelor i se elibereaz prin
exocitoz.
Incluziuni de natur glicoproteic
Aceste incluziuni apar la polul apical al celulelor epiteliale care secret
mucus stocat n vezicule delimitate de membrane sub form de precursor
denumit mucinogen. Mucinogenii sunt eliberai din celul prin exocitoz, se
hidrateaz i formeaz mucusul. Cel mai edificator exemplu de celul secretoare
de glicoproteine este celula caliciform singura gland unicelular, gsit n
epiteliul din tractul digestiv i respirator. Rolul mucusului este acela de a proteja
mucoasele. Iritaiile locale duc uneori la eliberarea ntregului coninut celular.

Incluziunile pigmentare
Pot apare n condiii fiziologice i patologice.
16

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Incluziuni fiziologice
Melanina pigment negru evident n epidermul pielii, n SNC substana
neagr i locus caeruleus. n celulele pielii, pigmentul este sintetizat n
melanocite, celule stelate, cu aspect de fulg de nea n microscopia optic.
Pigmentul este apoi transferat i depozitat n cheratinocite, n cantiti variabile n
funcie de ras.

Lipofuscina sau pigmentul de uzur se observ pe msura naintrii n

vrst a organismului, n special la nivelul miocardocitelor i al celulelor nervoase,
dar i n macrofage. Lipofuscina este de fapt produsul nedigerat al unor reacii
litice la nivel subcelular. Pe msur ce organitele mbtrnesc sunt degradate i
ceea ce nu poate fi reutilizat din structura lor rmne sub forma lipofuscinei.
Deoarece neuronii nu se divid de -a lungul anilor se acumuleaz pigment, numit
de aceea pigment de uzur. Lipofuscina se acumuleaz i n celulele adipoase,
fiind responsabil de culoarea galben a adipocitelor.
Macrofagele pot conine lipofuscin provenit din cele mai variate surse:
celule moarte, organite proprii, bacterii moarte etc.

Hemosiderina - este reziduul nedigerabil rezultat n urma distrugerii

hematiilor, cuvntul hemo- provenind de la hemoglobin,care conine fier.
Macrofage bogate n hemosiderin se pot observa n cantiti mari n splin i
ficat, locurile de elecie pentru distrugerea hematiilor mbtrnite. In coloraia HE
poate fi confundat cu lipofuscina sau melanina, dar se evideniaz specific prin
coloraia cu albastru de Prusia pentru fier.

Incluziuni patologice
Pigmenii biliari pot apare n anumite condiii patologice sub form de
bilirubin n celulele Kupfer sau chiar n hepatocite.

17