Sunteți pe pagina 1din 19

CULTURA DE EMBRIONI ZIGOTICI

Seminele, rezultatul propagrii


sexuate
Seminele, rezultate prin dubla fertilizare
caracteristic
propagrii
sexuate
a
spermatofitelor, reprezint forma cea mai
perfecionat de dezvoltare a unor organe de
propagare i supravieuire pe parcursul evoluiei.
Embrionul, nceputul noii generaii sporofitice a
plantelor, i are originea, la criptogamele
superioare, n zigotul situat n gametofitul femel.

Structuri florale implicate n reproducerea


sexual

Structuri florale implicate n reproducerea


sexual

Embriocultura
n semirrele mature embrionul are deja o structur
bipolar complet, cu un meristem radicular i unul
caulinar, care prin diviziuni i difereniere vor da
natere viitoarei plantule.
Embriocultura reprezint un proces complex care se
deosebete n multe privine de cultura de celule i
esuturi in vitro.
Cu toate c embrionul reprezint o plant n miniatur,
cu proprii si hormoni endogeni i capabil de nutriie
autotrof, utilizarea unor medii de cultur suplimentate
cu concentraii sczute de fitohormom are efecte
pozitive asupra dezvoltrii embrionilor in vitro".

Embriocultura
Supravieuirea embrionilor zigotici n condiii
artificiale este corelat cu dimensiunea lor n
momentul prelevrii, deci cu stadiul dezvoltrii
acestora.
Embrionii imaturi sunt dependeni nutriional de
esutul matern, ovular, i devin autonomi progresiv,
o dat cu maturarea lor n interiorul seminei.
Prin urmare n stadiile timpurii ale dezvoltrii
embrionii sunt heterotrofi, evoluia lor normal
depinznd de metaboliii care difuzeaz de la
endosperm.

Embriocultura
Abia n stadiul cordiform avansat embrionul ncepe
s devin capabil de nutriie autotrof.
Astfel, n cazul proembrionilor mediile de cultur
artificiale trebuie s aib o compoziie mai
complex, iar asigurarea unor condiii fizice
optime (ca pH, lumin, temperatur de incubare)
este mult mai strict.
Adesea se recomand introducerea n mediul de
cultur a unor extracte naturale de endosperm, ca
i alte ingrediente complexe, ca extract de mal,
extract de drojdii, hidrolizat de casein.

Embriocultura
Totodat, deoarece endospermul natural are o
presiune osmotic ridicat, se recomand
introducerea n mediile de cultur artificiale a
unor concentraii ridicate de zaharoz sau de
manitol.

Juan Pablo Manzur; & colab, Sci. agric. (Piracicaba,


Braz.) vol.71 no.6 Piracicaba Nov./Dec. 2014

APLICAII ALE EMBRIOCULTURII N


AMELIORAREA PLANTELOR
Tehnologia culturii de embrioni zigotici are aplicaii
importante n ameliorarea plantelor de interes economic,
prin creterea considerabil a eficienei etapelor de
obinere i de evaluare a unor hibrizi valoroi.
Embriocultura in vitroa fost utilizat cu succes pentru
studierea unor probleme fundamentale n embriologa
experimental.
Cultura de embrioni a fost folosit i ca test n evaluarea
capacitii mutagene a substanelor iradiate asupra
esuturilor vii.
Cultura de embrioni a fost folosit pentru studierea biologia
seminei
Embriocultura in vitroa fost utilizat cu succes depirea
strii de laten a semintelor la numeroase specii de plante.

CULTURA EMBRIONILOR HIBRIZI


Practicile de ameliorare bazate pe ncruciri
sexuate conduc adesea la obinerea de semine
hibride ai cror embrioni au viabilitate redus.
Cu toate c acetia posed de regul potenialul
dezvoltrii normale, la scurt interval dup
fecundare se instaleaz disfuncii la nivelul
endospermului, astfel c n lipsa unui flux continuu
de substane nutritive de la endosperm, embrionul
nu i poate completa programul dezvoltrii sale
normale.

CULTURA EMBRIONILOR HIBRIZI


Au fost descrise numeroase mecanisme care stau la
baza disfunciei endospermului, ntre care:
dezintegrarea endospermului imediat dup fecundare,
privnd embrionul de sursa imediat de nutriie,
comportarea anormal a antipodelor, care afecteaz
aportul de nutrieni ai endospermului,
instalarea sterilitii somato-plastice determinat de
hiperplazia nucelei, mpiedicnd transportul nutrienilor
spre embrion
sau chiar izolarea embrionului printr-un esut endotelial
bogat, provenit din proliferarea tumoral a epidermei
interne a integumentului.

CULTURA EMBRIONILOR HIBRIZI


Demonstrarea capacitii embrionilor izolai din
semine

neviabile

rezultate

din

ncruciri

interspecifice, intervarietale sau intergenerice, de


a

crete

perspectiva

condiii

depirii

artificiale,
barierelor

deschis

ncrucirilor

sxuate care au de regul ca rezultat formarea


de embrioni avortivi.

embryo rescue

Embriologa Experimental
Perfecionarea metodelor de cultur a fcut posibil studiul
cerinelor creterii progresive a embrionilor tineri, al efectului
substanelor hormonale i al condiiilor de mediu asupra
organogenezei embrionare, ca i al nutriiei i metabolismului pe
parcursul embriogenezei progresive.
Capacitatea creterii n condiii in vitro" a embrionilor detaai din
semine mature a fost demonstrat la numeroase genuri i specii
de plante; s-a evideniat faptul c embrionii maturi devin n scurt
timp autotrofi, necesitnd medii de cultur foarte simple.
Embrionii imaturi, n faza cordiform sau de torpedo nu
supravieuiesc pe mediile propice dezvoltrii embrionilor maturi, i
ca urmare s-a studiat rolul fiziologic al unor extracte naturale,
majoritatea de origine endospermic (lapte de cocos, extract
endospermic de porumb) asupra stimulrii creterii embrionare.

Obinerea hibrizilor interspecifici


Obinerea a numeroi hibrizi interspecifici a fost posibil ca rezultat
al excizrii embrionilor imaturi i cultivarea ulterioar a acestora in
vitro.
Aceste tehnici au permis realizarea transferului interspecific sau
intergeneric de cromozomi sau de fragmente cromozomale,
reprezentnd o alternativ mai avantajoas dect cea a hibridrii
somatice prin fuziuni de protoplati; embrionii interspecifici i
intergenerici prezint avantajul c etapele fuziunii nucleare,
formarea pereilor celulari, diviziunile celulare iniiale i inducerea
dezvoltrii embrionare, care impieteaz asupra aplicrii tehnologiei
protoplatilor la o gam larg de specii de interes economic, pot fi
evitate prin recuperarea embrionilor hibrizi i n acest mod cresc
ansele realizrii cu succes a operaiilor de ameliorare a plantelor.

CULTURA DE EMBRIONI l
DEPIREA STRII DE LATEN A SEMINTELOR

Culturile de embrioni s-au dovedit deosebit de utile in


elucidarea unor factori care determin un blocaj al
dezvoltrii la seminele unor specii, astfel c acestea nu
germineaza chiar dac se afl n condiii optime de
umezeala, oxigen, temperatur, etc.
Procesul de laten se poate datora:
fie unor inhibitori endogeni,
fie unor factori fizici externi.
Astfel, seminele unor specii manifest un tip de laten
care este ntrerupta sub aciunea luminii (semine pozitiv
fotoblastice), in timp ce in alte cazuri lumina inhib
germinarea (semine negativ fotoblastice).

CULTURA DE EMBRIONI l
DEPIREA STRII DE LATEN A
SEMINTELOR
Se presupune c expunerea la lumina conduce la
producerea de enzime citolitice care descompun pericarpul
t endospermul, nlturnd astfel rezistena mecanica la
expansiunea embrionului.
Seminele altor specii ies din starea de laten numai ca
urmare a unor expuneri prelungite la temperaturi sczute,
iar seminele unor cereale nu germineaz dect dup civa
ani de depozitare n condiii de umiditate atmosferic
redus.
Toate aceste stri de laten au putut fi depite prin culturi
de embrioni n condiii artificiale, obinndu-se informaii
valoroase cu privire la inhibitorii endogeni i promotorii
creterii, responsabili de meninerea embrionilor n stare
latent sau activ.

CULTURA DE EMBRIONI l
DEPIREA STRII DE LATEN A SEMINTELOR
Seminele orhideelor manifest o laten impus de
imaturitatea embrionilor, deoarece seminele mature conin
embrioni n stadiul globular, a cror dezvoltare morfologic i
germinare se realizeaz numai n sol, prin asocierea cu o
ciuperc micorizal.
Inc din 1922, Knudson a realizat germinarea embrionilor n
absena ciupercii simbiotice, pe medii nutritive agarizate
suplimentate cu agaroz, fcnd posibil propagarea
asimbiotic a orhideelor la scar comercial.
Germinarea prin metode convenionale a seminelor
paraziilor fanerogamici obligatorii s-a dovedit foarte dificil n
absena contactului cu planta gazd. Prin cultivarea
embrionilor acestor specii n condiii aseptice, n prezena
unor substane specifice de tipul hormonilor de cretere i al
aminoacizilor, s-a realizat declanarea germinrii seminelor
acestor specii n absena plantei gazd.