Replicacin Procariota

Dr. Carlos A. Cruz Cruz

Replicacin del ADN

Es el proceso necesario para que se realice la
divisin celular.
Ocurre en la fase S del ciclo celular.
El mecanismo de replicacin se basa en la
complementariedad de bases.
Inicialmente se plantearon tres posibles modelos
de replicacin:
o

Modelo conservativo

Modelo dispersivo

Modelo semiconservativo

Posibles modelos en la replicacin del

ADN

CONSERVATIVO

DISPERSIVO

SEMICONSERVATIVO

Experimento de Meselson y Stahl

CONTROL (Centrifugacin del ADN
conocido)
ADN
ADN ADN 14N y
14N
15N
ADN 15N

RESULTADOS DEL
EXPERIMENTO
1 generacin

2 generacin

Descarta el modelo
conservativo

Cultivo con
15N

3 generacin

Descarta el modelo
dispersivo

INTERPRETACIN DEL EXPERIMENTO

Cultivo con
3 generacin
14N

1 generacin

2 generacin

SIGNIFICADO DE LA REPLICACIN DEL

ADN
- La replicacin es un proceso previo a la divisin celular. Si
una clula se va a dividir NECESITA replicar el ADN
-

La replicacin consiste en la formacin de nuevas cadenas

de ADN a partir de desoxirribonucletidos y utilizando la
informacin existente en una molcula de ADN vieja.

Estas nuevas cadenas se van a repartir de manera

equitativa entre cada una de las dos clulas hijas formadas
en el proceso de divisin celular

REPLICACIN ADN
Las enzimas que llevan a cabo la sntesis de
cidos nucleicos SLO son capaces de hacerlo
en sentido 53
La replicacin es un proceso muy complejo pero
se desarrolla con gran fidelidad.
La copia de secuencias de millones de pares de
bases se realiza con una tasa de errores
prcticamente insignificante.

REPLICACIN DEL ADN

COMPONENTES NECESARIOS:
DESOXIRRIBONUCLEOTIDOS TRIFOSFORILADOS: dATP, dGTP,
dCTP y dTTP (millones)
PROTENAS: Protenas de iniciacin y fijacin SSBP (Single
Strand Binding Protein = Fijacin a la cadena)
ENZIMAS:

HELICASA: Rompe puentes de hidrgeno

TOPOISOMERASA: Elimina tensiones y superenrrollamientos
RNA POLIMERASA: Sntesis de Cebador: ARN (10-30)
DNA POLIMERASA III : LA REINA REPLICA: Conductora
DNA POLIMERASA I: Reparadora y sustituye al cebador
LIGASA: Une los fragmentos de Okazaki de la retrasada (2.000)

DNA Polimerasas
Enzimas que pueden sintetizar una nueva cadena de DNA
a partir de otra de referencia.
Solamente pocas DNA polimerasas participan en la
replicacin del DNA: Replicasas
La mayor parte de las DNA polimerasas se ven
involucradas en la reparacin de DNA.
La sntesis de DNA no depende de una sola enzima sino
de un complejo enzimtico multimrico.
La actividad replicativa es tan solo una de las funciones
asociadas al replisoma.

DNA Polimerasas de E. coli

DNA pol I
PROTEINAS

DNA polA
GENES

Existen tres DNA polimerasas procariotas muy bien estudiadas (de 5 en total):
DNA polimerasa I codificada por DNA polA = reparacin de DNA daado y de manera
secundaria en la replicacin semiconservadora del DNA.
DNA polimerasa II, tambin involucrada en reparacin de dao.
DNA polimerasa III, protena multimrica, principal replicasa involucrada en la sntesis de
novo de DNA.
Actividad de DNA pol I es muy superior a las otras dos.

Primera en ser
descubierta

Para poder estudiar a la principal replicasa es necesario crear mutantes para DNA pol I.

DNA Polimerasas Procariotas

Cinco enzimas bien conocidas.
DNA Pol I
Implicada en la reparacin de DNA daado.
Exonucleasa tanto 5' 3' (Nick-translation)
Exonucleasa 3' 5' (proofreading).
DNA Pol II
Involucrada en la replicacin de DNA daado TLS.
Polimerasa 5' 3'.
Exonucleasa 3' 5'.
DNA Pol III
Principal replicasa procariota con actividad de exonucleasa.
DNA Pol IV y V
Miembros de familia Y (Polimerasas de Sntesis Translesional).

DNA Polimerasas
Todas las DNA polimerasas conocidas (tanto eucariotas como
procariotas) poseen una caracterstica fundamental:
extienden la cadena de DNA aadiendo nucletidos aislados
uno a la vez a partir de un hidroxilo terminal 3 y en Direccin
5' 3' (sntesis), la lectura de la cadena de referencia se da
en sentido 3' 5'.
La seleccin del nucletido a aadir no depende de la
polimerasa sino de la cadena empleada como referencia
(resultado de complementariedad).
La fidelidad del proceso replicativo depende de la
especificidad del apareamiento de bases.
No obstante, el apareamiento de bases per s debera tener
una tasa de error de aproximadamente 1:1000 nucletidos.

DNA Polimerasas
Sabemos que la tasa de error en bacterias no es tan elevada, en realidad de 1:100'000,000 o
1:10,000'000,000
Equivalente a menos de una 1 base equivocada por genoma.
Esto sugiere que existe un mecanismo especficamente dedicado a monitorear y corregir los
errores de escritura de la polimerasa.

Tipos de errores introducidos por DNA Pols

Substituciones = introduccin de bases nucleotdicas equivocadas (mal apareadas con la
referencia).
Corrimiento del marco de lectura = introduccin o delecin (indels) de nucletidos.

2. REPLICACIN ADN
FASES REPLICACIN PROCARIOTAS

1)

INICIACIN

2)

ELONGACIN

3)

TERMINACIN

REPLICACIN DEL ADN EN PROCARIOTAS

En las bacterias existe un solo origen de replicacin, denominado Ori C y, a partir de
este nico punto de origen, la replicacin progresa en dos direcciones, de manera
que existen dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin.

REPLICACIN ADN EN PROCARIOTAS

1) INICIACIN
- Reconocimiento del sitio de inicio de la replicacin.
- Separacin de las cadenas parentales de ADN
- Estabilizacin parcial de esas cadenas como cadenas sencillas de ADN
(Protenas SSB).
- Se forma el Complejo de iniciacin: Comienza la sntesis del ARN
cebador tanto en la cadena retardada como en la cadena conductora

REPLICACIN SEMICONSERVATIVA DEL ADN

La replicacin del ADN en procariotas es bidireccional, ya que a partir
del punto de origen progresa en dos direcciones opuestas, existiendo
dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin.
Cuando se mira solamente una de las horquillas de replicacin, una
de las hlices se sintetiza de forma continua, la hlice conductora
(tambin llamada hlice lder), mientras que la otra hlice se sintetiza
de manera discontinua, hlice retardada (tambin llamada hlice
retrasada), a base de fragmentos cortos o fragmentos de OKAZAKI.
Como una hlice se sintetiza de forma continua y la otra lo hace de
forma discontinua, se dice que la replicacin es semidiscontinua

REPLICACIN ADN

2) ELONGACIN
- La ADN Polimerasa III acta en ambas cadenas.
- Se forman la cadena contnua y fragmentos de Okazaki discontnuos.

2. REPLICACIN ADN

REPLICACIN DEL ADN

REPLICACIN ADN

3) TERMINACIN
- La ADN Polimerasa I degrada los cebadores y los reemplaza por ADN
complementario.
- La ADN ligasa une todos los fragmentos de ADN de Okazaki.

REPLICACIN DEL ADN

REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Muy similar a lo que ocurre en procariotas.
Las histonas antiguas se fusionan con la hebra
conductora
Gran nmero de replicones u horquillas.
Ms lento (10 veces) por la existencia de histonas.
Fragmentos de Okazaki ms pequeos.
Ocurre durante la interfase en el periodo o fase S
del ciclo celular.
Ocurre siempre en el interior del ncleo.

ENZIMA

FUNCIN

ADN Pol

Sntesis Hlice retardada. Sntesis del cebador: 10 bases de ADN y 25

de ARN.

ADN Pol

Sntesis de la Hlice conductora y ensamblaje de la mayor parte de

los fragmentos de la cadena retardada.

ADN Pol

Al parecer desempea algn papel en la duplicacin del DNA

nuclear.

ADN Pol

Unin de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250

pb)y reparacin del DNA.

ADN Pol

Sntesis ADN mitocondrial.

Hasta la fecha se han aislado cinco diferentes DNA polimerasas de clulas

eucariotas.

Las ADN polimerasas eucariticas tienen una

diferencia interesante con las ADN polimerasas
de E. coli, ya que se utilizan dos polimerasas
diferentes:
ADN polimerasa hlice retardada
ADN polimerasa hlice conductora

PROCARIOTAS.

EUCARIOTAS.

La replicacin del DNA ocupa la mayor parte del ciclo celular

y la divisin de la clula ocurre tan pronto como termina la
sntesis de DNA.
La replicacin se lleva a cabo en un solo origen de
replicacin.
Su protena de unin se conoce como SSB.
Existen tres tipos de ADN-polimerasa, la I, es la encarga de
reparar la hebra; la II, de ayudar a la III; y la III, agrega las
bases a la hebra.
La sntesis de DNA (y de las histonas) queda confinada
nicamente a una parte del ciclo celular, en concreto a la
fase sinttica (fase S ) de la interfase.
Tiene varios orgenes de replicacin.
El DNA eucariota no se replica en forma de DNA desnudo, sino
en forma de cromatina, en la cual el DNA est estrechamente
asociado a unas protenas llamadas histonas.
La protena de unin se conoce como protena de
replicacin A (RPA).
Las polimerasas, son ms complejas, y adems, la polimerasa
de la hebra continua es diferente a la de la hebra discontinua.
De la hebra continua se encarga la polimerasa y de la
discontinua, la .