AISLAMIENTO DEL COLESTEROL DEL TEJIDO NERVIOSO (CEREBRO)

GENERALIDADES
El colesterol es una de las cuatro biomolculas que constituyen el metabolismo
biolgico de los animales. Dentro de los lpidos pertenece al grupo de los
insaponificables, debido a que no puede formar esteres. Se encuentra depositado
en tejidos corporales, plasma sanguneo, hormonas, pncreas, cerebro e hgado. Es
muy importante en la fisiologa animal, pues es el precursor de muchas hormonas y
es el constituyente de mayor importancia en las membranas celulares y de las
lipoprotenas plasmticas. Existen en las grasas animales pero no en las vegetales
(1).
El colesterol se encuentra ampliamente distribuido en todas las clulas del
organismo, pero especialmente en las del tejido nervioso. Es una molcula
hidrfoba, rgida y compacta con cuatro anillos fundidos y una cadena
hidrocarbonada ramificada de ocho miembros unida al anillo D en la posicin 17. El
colesterol presenta tambin un grupo hidroxilo polar en el C-3 (1).
Aproximadamente la mitad del colesterol del organismo se origina de su sntesis y
el resto es proporcionado por una alimentacin promedio. El hgado sintetiza ms o
menos 10% del total en los seres humanos, el intestino cerca de 15% y la piel una
gran porcin del resto. Prcticamente los tejidos que contienen clulas nucleadas
son capaces de sintetizar colesterol. La fraccin microsmica y el citosol son
responsables de su sntesis (4).
El colesterol se sintetiza en el cerebro de animales jvenes durante el crecimiento.
Con el aumento de la edad el nivel de hidroximetilglutaril CoA reductasa decrece
bruscamente, y el cerebro de mamferos llega a ser menos capaz de sintetizar
colesterol, aunque en el adulto puede demostrarse un nivel bajo de actividad.
Mientras que la mayora del colesterol del cerebro adulto no est esterificado, se
encuentran esteres del colesterol a concentracin relativamente alta en lugares de
activa mielinizacin.

TRASPORTE DE LPIDOS SANGUNEOS

La totalidad de los lpidos en plasma se encuentran asociados con protenas
formando complejos lipoproteicos que aseguran su transporte. Existen diferentes
tipos de lipoprotenas que difieren entre s tanto en composicin lipdica como
proteica. De acuerdo a su densidad se distinguen cuatro tipos de lipoprotenas:
Quilomicrn
Lipoprotena de muy baja densidad (VLDL)
Lipoprotena de baja densidad (LDL)
Lipoprotena de alta densidad (HDL)
El colesterol asociado a las lipoprotenas de baja densidad (LDL-colesterol) es el
denominado como "colesterol malo", ya que es la principal lipoprotena que lleva el
colesterol del hgado al resto del organismo. El colesterol que se asocia a protenas
de muy baja densidad (VLDL) y a quilomicrones tambin es considerado colesterol
malo.

Al colesterol asociado a la lipoprotena alta densidad se le denomina HDL-colesterol,

y se le conoce como "colesterol bueno" ya que su principal funcin es recoger el
colesterol de los tejidos, y llevarlo al hgado.
PRINCIPIOS BIOQUMICOS
1. Extraccin de colesterol del tejido nervioso
El colesterol como sustancia de carcter lipoideo es insoluble en agua y soluble en
los solventes apolares como el ter, benceno, cloroformo, acetona, disulfuro de
carbono y alcohol caliente.
Cuando el colesterol es sometido a una solucin clorofrmica que es un compuesto
orgnico no polar logra solubilizarse mediante el establecimiento de pequeos
enlaces intermoleculares (fuerzas de Vander Walls o interacciones hidrofobias),
adems debido a la naturaleza alcohlica del colesterol por la presencia de su
grupo hidroxilo, se esterifica fcilmente con otros alcoholes y solventes (3).
La presencia de un doble enlace en su molcula hace que fcilmente pueda
oxidarse o reducirse. A partir del doble enlace dando como resultado formas
cetnicas (colesterona).
Basados en la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos, es posible extraer y
purificar lpidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferentes solventes y
posteriores fraccionamientos de los extractos para obtener fracciones ricas en:
esteroles, glicerofosfolpidos y esfingolpidos.
2.

Reconocimiento de colesterol (Reaccin de Salkovsky)

Cuando a las soluciones clorofrmicas de colesterol se les adiciona un volumen

igual de cido sulfrico concentrado (1 ml), y se mezclan suavemente, se desarrolla
un color rojo caracterstico en la capa clorofrmica, mientras que la porcin sulfrica
adquiere una coloracin amarilla, con fluorescencia verde.
El colesterol por accin de agentes deshidratantes como el cido sulfrico y
anhdrido actico se transforma en un hidrocarburo con dobles enlaces conjugados:
colesterileno, donde el color resulta de la formacin de los dobles enlaces o bien a
partir de la condensacin de 2 molculas de colesterol para formar biesteroides (2).
RESULTADOS ESPERADOS
Al extraer el colesterol de un tejido con un solvente apolar se espera que al ser
sometido este a la accin de un agente deshidratante, como el cido sulfrico,
produzca una separacin en capas, en donde el extracto superior de cloroformo
resulta coloreado de rojo debido a la formacin de un biesteroide, mientras que la
capa inferior presentar un color rojo amarillento con fluorescencia verde.
INTERFERENCIAS O FUENTES DE ERRORES

Las concentraciones de cloroformo y tejido nervioso pueden estar presentes

en cantidades desiguales, esto implica una mala reaccin o reaccin
incompleta.
Si el tejido nervioso ya esta en proceso de descomposicin, se produce la
ruptura de las molculas que componen el tejido.
El proceso de solidificacin del tejido nervioso no se lleva a cabo de la
manera esperada, lo cual produce una pobre liberacin de colesterol.
Contacto del colesterol con sustancias solubles o polares como el agua .
Evaporacin acelerada de la fase clorofrmica

Secado insuficiente del tejido analizado con el yeso.

BIOSINTESIS DE COLESTEROL
El acetil-CoA sirve como nico precursor para la biosntesis del colesterol. Aunque el
hgado es el lugar principal de la sntesis del colesterol, se sabe que otros tejidos
sintetizan este esterol, por ejemplo: intestino, piel, corteza adrenal, pared arterial y
otros.
La biosntesis est regulada en parte por el aporte de colesterol. Niveles dietticos
altos de colesterol o la presencia de precursores del mismo, dan lugar a una
depresin de su sntesis heptica. Los factores que causan disminucin en los
niveles de colesterol sirven para estmulo de la biosntesis.
En la regulacin del nivel de colesterol tienen importancia las hormonas tiroideas ya
que afectan a todos los aspectos del metabolismo de los lpidos, su efecto ms
acentuado es en la liplisis. Uno de los efectos particulares de las hormonas
tiroideas es la tendencia a disminuir el colesterol del plasma. Esto incluye dos
efectos: por un lado hay un aumento en la absorcin celular de las lipoprotenas de
baja densidad (LDL) con las molculas de colesterol relacionadas y por otro una
tendencia para incrementar la degradacin del colesterol y las lipoprotenas de baja
densidad (LDL).
Es usual que estos efectos sobre el metabolismo de los lpidos se observen en
situaciones fisiopatolgicas relacionadas con una hipersecrecin de hormonas
tiroideas o en estado de deficiencia tiroidea, en los cuales la hipercolesterolemia es
una de las caractersticas de la misma.
CATABOLISMO DEL COLESTEROL
La desaparicin del colesterol incluye:
a.
Excrecin como esteroles en la bilis y conversin en cidos biliares. El
principal destino del colesterol es su degradacin para formar cidos biliares y sus
derivados, las sales biliares
Colesterol cido Clico (principal cido biliar)
La adicin de una molcula de acil-CoA trae consigo la formacin de colilCoA, molcula intermediaria en la sntesis de las dos sales biliares
mayoritarias, el cido tauroclico y el cido gliclico.
b. Produccin de 3 clases principales de hormonas esteroideas: progestgenos,
corticoesteroides y hormonas sexuales. La pregnenolona es la primer
hormona esteroidea derivada del colesterol y su sntesis es estimulada por la
ACTH (Hormona Adenocorticotrpica). A partir de sta se obtiene
progesterona, la cual a su vez da origen a los corticoesteroides y a las
hormonas sexuales.
Precursor de la vitamina D por accin de la luz solar sobre el
colesterol en la piel.
Ciertos depsitos patolgicos como clculos de colesterol en
canalculos biliares y placas que contienen colesterol en arterias.
3

Esquema de la ruta de biosntesis del colesterol

COLESTEROL Y SU RELACIN CON PATOLOGAS DE LA PRODUCCIN EN

BOVINOS DE LECHE
En la produccin lechera es fundamental cubrir las demandas energticas para el
mantenimiento y la produccin. Debido a la fisiologa especial que presentan los
rumiantes, donde aproximadamente un 90% de la glucosa es producida por el
hgado, la existencia de un dficit energtico en la racin puede ser compensada
movilizando las reservas energticas almacenadas en el tejido lipdico.
La puesta a disposicin durante la fase de "vaca seca" de una racin fuertemente
energtica, es la condicin necesaria y suficiente para la adquisicin de un estado
de esteatosis generalizado de numerosos tejidos (msculos) y rganos (hgado y
riones).
Despus del parto de un rumiante con alto potencial gentico lechero, el rpido
desequilibrio entre la energa disponible de origen alimentario y la energa exigible
para la produccin de leche, obliga a la movilizacin de las reservas lipdicas
perifricas (lipomovilizacin).
Se trata de una medida proteccionista impuesta por factores genticos, ligados al
carcter lechero, que refuerza la esteatosis anablica preparto extraheptica. A
continuacin va seguido de una intensa liplisis producida a partir de las grasas de
reserva, liberando glicerol y cidos grasos libres, precursores de triglicridos en el
hgado; esta liplisis inhibe el centro de la alimentacin (o excita el centro de la
saciedad?) determinando un sndrome de anorexia - hiporexia. Estos dos ltimos
sndromes se pueden deber adems a la liberacin de estrgenos en la cercana del
parto, insuficientemente metabolizados en hgado.

Las anomalas del racionamiento energtico, antes y despus del parto, son
suficientes para desencadenar ciertos aspectos de los trastornos genitales,
mamarios, digestivos, locomotores y otros ms sutiles.
Los animales que cursan con un dficit energtico presentan elevada la
concentracin de lpidos en sangre y en leche; esto es uno de los sntomas ms
destacados del dficit de energa que padecen las vacas lecheras en los comienzos
de la lactancia e indica la movilizacin lipdica compensatoria que se produce.
Los lpidos que se movilizan se acumulan en el hgado y llevan a una alta proporcin
de animales que padecen el sndrome de hgado graso, lo que influye en forma
negativa en la salud del animal.
REFERENCIAS
1.
2.
3.
4.

5.

Devlin, M. Thomas. 1999. Bioqumica libro de texto con aplicaciones clnicas. 3 ed. Editorial
REVERT S.A. Espaa. pp. 186
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ed. Editorial Revert S.A. Espaa. pp. 79-80.
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Aranda, M.V; Brave, N; Casagrande,R; 2002 Colesterol en Bovinos Disponible en: www.produccionanimal.com.ar