Anesthsie des animaux de laboratoire

Pratique de lanesthsie des animaux de laboratoire. Principes et mthodes.

H. COMBRISSON

Objectifs
L'thique de l'utilisation des animaux en recherche biomdicale a considrablement volu. L'animal est
considr comme un tre sensible, ainsi qu'il est dit dans la loi sur la protection de la nature (10 juillet 1976). De
plus, la rglementation franaise de l'exprimentation animale, application des rglementations europennes,
rend obligatoire le recours l'anesthsie : " Les expriences sur les animaux qui peuvent entraner des
souffrances doivent tre pratiques sous anesthsie gnrale ou locale ou aprs recours des procds
analgsiques quivalents, sauf si la pratique de l'anesthsie ou de l'analgsie est considre comme plus
traumatisante pour les animaux que l'exprience elle-mme. " Ainsi, tout exprimentateur a le devoir moral
d'valuer la douleur qui sera inflige l'animal lors des manipulations et de choisir les moyens adapts pour la
prvenir.
La question de l'valuation de la douleur se trouve ainsi pose. Lors d'intervention chirurgicale, il est commode,
en premire valuation de comparer avec des situations analogues chez l'homme. Cette mthode ne pourrait tre
vritablement raliste que si la douleur tait ressentie de la mme faon chez tout individu, homme ou animal. On
sait que les mcanismes neurologiques de transmission des stimulus nociceptifs sont similaires chez l'homme et
les autres mammifres. On sait galement que les stimulus ncessaires pour dclencher ces mcanismes sont
trs proches. On est cependant incapables d'apprhender la perception de la douleur chez l'animal : on ne peut
pas dterminer si un animal ressent un stimulus nocif de faon identique et avec la mme intensit que l'homme.
De plus, si on connat des variations importantes de la sensibilit la douleur chez l'homme entre les individus, il
en est de mme chez les animaux : variations avec les espces, les souches, les individus.
Outre la prvention de la douleur, l'anesthsie des animaux de laboratoire constitue le moyen souvent le moins
stressant d'obtenir la contention ncessaire une manipulation ncessitant une immobilit de l'animal. On peut
ainsi tre conduit recourir des anesthsiques pour des interventions ne provoquant pas vritable douleur.

Evaluation de la profondeur de l'anesthsie

La difficult de cette apprciation tient au fait que selon les protocoles anesthsiques et les espces animales les
critres diffrent. Il est cependant trs important d'valuer au mieux la perte de conscience des animaux
anesthsis, d'une part pour des raisons thiques, on sait que chez l'homme, la mmoire des procdures
chirurgicales constitue une exprience ngative ; d'autre part pour viter que des ractions sympathiques lies
l'absence de perte de conscience pendant les procdures perturbent les paramtres physiologiques.
L'anesthsie a gnralement pour objectif d'abolir les sensations douloureuses, il est donc particulirement
important d'valuer cette sensibilit, pour cela teste le plus souvent la disparition de rflexes :
Rflexe de retrait de la patte : un membre est tendu et l'exprimentateur pince entre ses ongles ou l'aide d'une
pince la membrane interdigite. Si l'animal retire sa patte (ou mme crie), l'anesthsie n'est pas assez profonde
pour des manuvres chirurgicales.
Chez les rongeurs, ce test peut tre remplac par le pincement de la queue. On peut galement pincer le bord de
l'oreille chez le cobaye ou le lapin ; il rpond alors une sensation douloureuse en secouant la tte et,
ventuellement, par des vocalisations.
Il faut cependant remarquer que les diffrentes zones de l'organisme ne sont pas insensibilises de faon
identique ; il peut arriver qu'un animal ne rponde pas au rflexe de retrait de la patte et pourtant ragisse par
exemple lors de l'ouverture de la paroi abdominale.
Rflexes oculaires : rflexe cornal et palpbral. Chez les carnivores, le porc, les ruminants, les primates, ils
disparaissent au cours du stade III d'anesthsie si l'on a recours aux barbituriques, aux anesthsiques volatiles...

Le rflexe palpbral est difficile apprcier chez les rongeurs ; chez le lapin, il ne disparat que lorsqu'une
anesthsie trs profonde est tablie.
La position des globes oculaires, la dilatation des pupilles et les mouvements oculaires ne constituent pas de
bons moyens d'valuer la profondeur de l'anesthsie.
Les rflexes sont cependant en grande partie relais mdullaire ; par consquent, l'valuation de leur
persistance ne constitue pas une mthode totalement adquate d'valuation de la perte de conscience et de
l'analgsie. C'est pourquoi il a t propos d'utiliser l'enregistrement de l'lectroencphalogramme (EEG) pour
valuer la perte de conscience. Chez des rats anesthsis au pentobarbital, Haberham et coll. ont enregistr
l'EEG l'aide d'lectrodes pralablement implantes pour valuer la profondeur de l'anesthsie teste par le
rflexe de retrait de la patte. Ils concluent d'une part que le retrait de la patte n'est pas de faon uniforme en
relation avec les changements de l'EEG ; d'autre part, que l'absence de rflexe ne concide pas obligatoirement
avec des tracs EEG de perte de conscience. Cette tude montre que le test de retrait de la patte chez le rat
anesthsi au pentobarbital ne constitue pas une preuve absolue de sa perte de conscience. Nanmoins,
l'enregistrement de l'EEG n'est pas une mthode simple utiliser chez l'animal.
La question de l'opportunit de l'utilisation des myorelaxants (bloquant la transmission neuromusculaire par action
sur le rcepteur post-synaptique l'actylcholine) chez les animaux de laboratoire a fait l'objet d'un ditorial de
Drummond dans la revue Anesthesiology. Le premier point est bien sr le fait que le recours exclusif des
myorelaxants pour assurer une contention chirurgicale n'est pas thiquement acceptable. Cependant, il existe
des indications valables de leur utilisation ; il faut alors qu'elle s'accompagne une anesthsie adquate. Par
exemple, pour l'tude de myorelaxants ou pour des tudes de neurophysiologie pour lesquelles toute activit
lectromyographique pourrait constituer un obstacle, le recours des myorelaxants est obligatoire. La question
qui se pose alors est : comment tre sr que l'animal est rellement profondment anesthsi alors qu'il est
paralys, ce qui empche toute tentative de mouvement ou toute rponse la stimulation de rflexes.
Le recours l'enregistrement de paramtres physiologiques comme la pression artrielle, ou l'EEG ne donne pas
de renseignements totalement srs. Une autre possibilit est de faire en sorte que la concentration alvolaire d'un
anesthsique volatile reste au-dessus d'un seuil. Mais quels moyens a-t-on de fixer prcisment ce seuil chez les
animaux ? Enfin, une mthode est propose : faire une exprience pilote pralable pour dterminer le protocole
anesthsique en l'absence de myorelaxants. Drummond prcise qu'en l'absence de certitude quant la ralit de
l'anesthsie chez l'animal, le doute doit profiter l'animal et l'utilisation des myorelaxants doit tre vite.

Interfrences anesthsie - exprimentation

Tout protocole anesthsique est susceptible de provoquer des effets secondaires multiples. Dans le cadre de
l'utilisation exprimentale des anesthsiques, il convient de les prendre en compte afin d'viter les interfrences
avec l'exprimentation.
Un premier type d'interfrence est rencontr lorsque l'enregistrement des paramtres tudis est effectu
pendant l'anesthsie. Un exemple est donn par une tude publie en 1999 par Hayton et coll. Ils ont compar
les effets de 4 types d'anesthsie sur les tudes de potentiels voqus chez le rat par stimulation du membre
antrieur et postrieur. Les anesthsiques tests taient : ktamine-xylazine, mdtomidine, isoflurane et fentanyl
/fluanisone-midazolam. Ils concluent que ce dernier protocole se rvle avoir le moins d'influence sur les
paramtres mesurs, tandis que l'isoflurane et la mdtomidine ont les effets les plus marqus : augmentation de
la latence et diminution de l'amplitude des rponses.
Un deuxime type d'interfrence de l'anesthsie avec l'exprience peut se rencontrer mme si les paramtres
sont tudis aprs l'anesthsie. Un exemple frquent est donn par les effets d'induction enzymatique. Une tude
de Commissaris et coll. a montr que la demi-vie du pentobarbital chez les rats traits de faon chronique
(injection intra-pritonale (IP) et distribution d'aliment contenant du pentobarbital pendant 6 jours conscutifs)
est seulement 12% de celle mesure chez des rats contrles (150 min versus 18 min) aprs administration IP de
20 mg/kg de pentobarbital.
Une tude ralise sur des microsomes hpatiques isols de rats a montr que de nombreux anesthsiques (18
sont tests) inhibent le mtabolisme, mdi par le cytochrome P450, de l'aminopyrine (substrat synthtique) et de
l'acide arachidonique (substrat endogne) (LaBella et Queen, 1993). Il existe une corrlation trs significative
entre les concentrations absolues ncessaires pour l'anesthsie (EC50) et l'inhibition du cytochrome P450 (Ki ou
IC50). Les valeurs de Ki varient entre 0,26 et 1,48 fois la valeur de EC50 correspondante, sauf pour 2 composs
halogns (chloroforme et halothane) qui s'avrent 2,5 fois moins puissants pour inhiber l'activit enzymatique
que pour l'activit anesthsiante :

Anesthsique
Chloroforme
Enflurane
Halothane
Pentobarbital
Thiopental

Ki / EC50
2,41|
1,30
2,54
0,72
0,48

Tableau I : Puissance inhibitrice (Ki) de diffrents anesthsiques sur l'activit aminopyrine dmthylase de
microsomes hpatiques de rats, rapporte la concentration anesthsique efficace (EC50). (d'aprs LaBella et
Queen, 1993)

Ces effets d'induction enzymatique peuvent interfrer avec des tudes portant sur des mtabolismes ; par
ailleurs, ils sont tout fait nfastes lorsque des anesthsies doivent tre rptes chez les mmes individus.

Anesthsie par espces

Cet article n'a pas la prtention de donner de faon exhaustive les protocoles anesthsiques utiliss chez les
animaux de laboratoire. Notre objectif se restreindra aux protocoles les plus frquents, chez les espces les plus
utilises. Nous avons galement exclu les carnivores pour lesquels les techniques d'anesthsie en
exprimentation sont gnralement identiques celles qui sont utilises en clinique. Le lecteur pourra se rfrer
deux ouvrages de rfrence : Flecknell (1996) et Kohn et coll. (1997).

Anesthsie des rongeurs

Les rongeurs sont, de loin, les animaux les plus utiliss en exprimentation (> 80 %) ; nanmoins, leur petit
format rend plus difficile l'administration de produits par voie intraveineuse (IV) par exemple. De ce fait, pendant
trs longtemps, les mthodes les plus courantes ont t soit l'anesthsie l'ther dans des cloches de verre, soit
l'anesthsie par le pentobarbital en IP. Des protocoles anesthsiques plus nombreux et plus raffins se sont par
la suite dvelopps.

Anesthsiques volatiles
Ether : trs longtemps largement utilis, l'ther est pratiquement abandonn du fait d'une part de son caractre
inflammable, donc dangereux et d'autre part de la qualit mdiocre de l'anesthsie qu'il procure, s'accompagnant
d'effets irritants sur l'appareil respiratoire.
CO2 : l'utilisation de CO2 en proportion 50/50 avec de l'oxygne peut induire une anesthsie de courte dure
indique par exemple pour le prlvement de sang au sinus rtro-orbitaire.
Mthoxyflurane : peut tre utilis en remplacement de l'ther dans des dispositifs peu coteux (cloche de verre
ou vaporisateurs).
Halothane : l'anesthsie chez les rongeurs est ralise en utilisant une chambre d'induction puis un appareil
anesthsie dlivrant le mlange adquat par un masque. L'halothane a un effet d'activation enzymatique mais
seulement si l'application est de plus de 30 60 min ;de plus il a une action hpatotoxique. L'halothane est un
bon anesthsique chez le cobaye, animal rput difficile anesthsier.
Isoflurane : est l'anesthsique volatile le plus rcent utilis en mdecine vtrinaire. Il prsente une plus grande
scurit d'emploi que l'halothane.

Anesthsiques injectables
Barbituriques : le plus utilis est le pentobarbital, gnralement administr par voie IP La dose recommande
est de 30 60 mg/kg par cette voie ; elle est de 30 40 mg/kg par voie IV. Chez les souris, la dose
recommande pour l'anesthsie par voie IP est de 40 70 mg/kg. Il existe une grande variation de la sensibilit
cet anesthsique en fonction des souches de souris.

L'analgsie provoque par le pentobarbital chez les rongeurs est insuffisante pour les interventions chirurgicales
lourdes ; il convient dans ce cas de prvoir en complment un protocole d'analgsie.
Ktamine : l'utilisation de la ktamine seule produit chez les rongeurs une rigidit musculaire et une anesthsie
insuffisante pour une intervention chirurgicale. En revanche, la ktamine peut tre associe de faon intressante
l'acpromazine, au diazpam, la xylazine ou la mdtomidine.
L'association ktamine&endash;xylazine peut, par exemple, tre administre chez le rat par voie IM ou IP ; Elle
provoque une bonne sdation avec une induction rapide d'une dure de 90 120 min. Cette association peut
galement tre utilise chez la souris. On peut associer ktamine et mdtomidine. Une tude de Cruz et coll.
value, chez la souris, cette association (ktamine 40 mg/kg et mdtomidine 1mg/kg par voie IP). Elle provoque
une bonne sdation, ralisant ainsi une trs bonne contention chimique avec une induction rapide. Un avantage
de cette association est la possibilit d'antagoniser les effets par administration d'atipamzole ; les animaux se
rveillent rapidement et les effets secondaires sont ainsi limits.
La tiltamine associe au zolazpam peut tre utilise chez les rongeurs. La dose chez les rats est de 20 40
mg/kg IP, l'analgsie est variable ; de plus, les rflexes habituellement tests ne disparaissant pas, il est difficile
d'valuer la profondeur de l'anesthsie. Chez la souris, la dose de 80 mg/kg donne une sdation mais une
mauvaise analgsie.
Chez le cobaye, Radde et coll. ont effectu une tude comparative de l'anesthsie produite par tiletaminezolazpam, pentobarbital, mthoxyflurane, ktamine-xylazine, et ktamine-xylazine plus mthoxyflurane. Ils
concluent que l'association ktamine-xylazine donne analgsie et sdation suffisantes pour des procdures
moyennement douloureuses ; l'addition de mthoxyflurane potentialise la fois l'anesthsie et l'analgsie.
Propofol : induit rapidement une anesthsie de bonne qualit qui peut tre prolonge par une perfusion dbit
constant. L'inconvnient de cet anesthsique est la ncessit d'une induction par voie IV qui est stressante chez
le rat. Brammer et coll. proposent de pallier cet inconvnient par une administration pralable de fentanylfluanisone par voie IP (0,5 1 ml/kg). Une injection en bolus de 0,1 ml de propofol permet alors d'induire une
anesthsie qui pourra tre maintenue par une perfusion (4 6 ml/kg/h).
a-Chloralose et urthane : ces anesthsiques peuvent tre utiliss seuls ou associs. Ils prsentent l'intrt de
perturber relativement peu les paramtres physiologiques cardio-vasculaires et respiratoires ; en revanche, ils
sont tous deux trs toxiques et doivent tre rservs des anesthsies sans rveil. Chez le rat, l'a-chloralose
forte dose provoque des convulsions. De plus, il a un pouvoir analgsique faible ; il ne doit donc pas tre utilis
pour des procdures chirurgicales. L'urthane peut tre utilis chez les rats la dose de 0,5 1,5 g/kg IP ; il
provoque une anesthsie profonde avec une trs bonne myorelaxation, le temps de sommeil pouvant aller
jusqu' 24 heures. L'association a-chloralose-urthane (250 400 mg/kg urthane + 35 40 mg/kg a-chloralose)
donne une bonne anesthsie pour une dure d'environ 6 heures.
L'urthane est un produit fort pouvoir carcinogne et mutagne chez les rongeurs ; de ce fait, son utilisation doit
s'accompagner de mesures svres de protection des exprimentateurs.
Une tude de Shimokawa et coll. est effectue chez des rats implants pour l'enregistrement chronique de la
pression artrielle, de l'ECG et de l'activit nerveuse sympathique rnale. Ils comparent l'activit sympathique
chez des rats anesthsis par rapport celle d'animaux vigiles. Les anesthsiques tests taient : pentobarbital,
a-chloralose, urthane. Ils concluent que ces produits affectent de faon trs diffrente le fonctionnement du
systme sympathique. Ils proposent comme meilleur choix l'association a-chloralose-urthane.

Anesthsie des lapins

Les lapins sont trs souvent considrs comme les animaux les plus difficiles anesthsier. Des explications
peuvent venir de grandes variations individuelles des rponses aux anesthsiques, de leur sensibilit aux
dpresseurs respiratoires, de la difficult les intuber ...

Anesthsiques volatiles
L'utilisation de l'halothane ou de l'isoflurane chez les lapins constitue de loin la meilleure anesthsie pour les
actes chirurgicaux lourds. Il faut cependant au pralable induire l'anesthsie et, de prfrence, intuber les
animaux. Flecknell et coll. ont tudi les effets de l'induction de l'anesthsie par l'halothane ou l'isoflurane soit au

masque soit dans une enceinte d'anesthsie. Ils concluent que tous les animaux prsentent des phases d'apne
(30-120 s) associe une bradycardie marque, ce qui augmente le risque de mortalit lie l'anesthsie. Tous
les animaux tentent d'viter de respirer le gaz, ce qui suggre qu'il constitue un stimulus aversif.

Anesthsiques injectables
Pentobarbital : il peut tre utilis par voie IV chez le lapin (25 60 mg/kg). Outre les inconvnients dj cits
pour les rongeurs, la dose ncessaire pour obtenir l'anesthsie chez le lapin est proche de la dose provoquant
l'apne. Il convient donc d'une part de trouver le bon rythme d'administration (1/3 de la dose puis injecter
lentement par exemple) et, le cas chant, de pratiquer des manuvres de stimulation de la ventilation.
Ktamine : elle ne donne pas seule une myorelaxation ni une analgsie suffisante ; elle est donc gnralement
utilise en association, le plus souvent avec la xylazine (22 50 mg/kg ktamine, 2,5 10 mg/kg xylazine). Cette
association permet l'intubation et peut s'avrer suffisante pour des procdures chirurgicales mineures. La
ktamine peut galement tre associe la mdtomidine.
Propofol : Aeschbacher et Webb en 1993 tudient l'induction de l'anesthsie par le propofol, le signe
caractrisant la perte de conscience choisi tant l'absence de mchonnement lors de l'introduction dans la
bouche d'une sonde endotrachale. L'induction tait obtenue avec une dose (ED95) de 8,45 mg/kg avec un dbit
d'injection de 20 mg/kg/min. Ils prconisent d'utiliser une dose d'induction de 5 14 mg/kg avec une grande
scurit, les dpressions respiratoires ne survenant que pour des doses trs suprieures. En l'absence de
nouvelle administration, le rveil est rapide et calme.
Hellebrekers et coll. proposent d'associer le propofol (3mg/kg IV) la mdtomidine (0,35 mg/kg IM) ; ils
observent une bonne qualit d'anesthsie permettant des procdures chirurgicales sans dpression respiratoire.
Ils comparent ces rsultats avec l'association mdtomidine (0,35 mg/kg IM) et ktamine (5mg/kg) ; celle-ci
donne une dure d'anesthsie plus longue et de qualit comparable, mais un apport d'oxygne est ncessaire
pour viter une hypoxie.
Ces quelques exemples de protocoles d'anesthsie ne sont pas des " recettes " ; il importe particulirement dans
le cadre de l'anesthsie en exprimentation de bien dfinir les objectifs atteindre, les interfrences viter en
fonction de l'espce, voir de la souche d'animaux utiliss. Un examen attentif de tous les lments prendre en
compte du fait des procdures prvues et des animaux choisis est ncessaire pour garantir la fois la ralit de
la protection de l'animal et la qualit des tudes.

Bibliographie
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