DETERMINAREA NUMARULUI TOTAL

DE DROJDII SI MUCEGAIURI
DETERMINAREA NUMARULUI TOTAL DE DROJDII SI
MUCEGAIURI
DEFINITII
Drojdii - microorganisme eucariote, mono sau pluricelulare, care se reproduc asexuat prin
inmugurire sau, mai rar, prin sciziune. Unele drojdii se pot reproduce si sexuat (meioza).
Majoritatea drojdiilor sunt saprofite si multe dintre ele au activitate fermentativa.
Mucegaiuri - microorganisme eucariote, care prezinta organe de reproducere diferentiate.
Sunt agentii mucegairii.
Tipuri de produse alimentare pentru care se recomanda analiza (Anexa 1)
PRINCIPIUL METODEI
Prin aceasta metoda, numarul de drojdii si mucegaiuri se apreciaza indirect, pe baza coloniilor
generate de celulele acestor microorganisme prezente in proba de analizat, care se formeaza
cand proba sau o dilutie a acesteia vine in contact cu un mediu nutritiv gelozat, dupa
termostatare la 25C timp de 72 de ore.
ECHIPAMENTE

Omogenizator

Balanta analitica

Termostat reglat la 25C

Baie de apa pentru fluidificarea mediului de cultura reglata la 45C

MATERIALE SI STICLARIE

25g produs alimentar

225 ml 0.1% apa peptonata

Cutii Petri 10 cm sterile

Pipete de 1 cm3 si 10 cm3 sterile

Eprubete cu ser fiziologic steril, cate 9 cm3 per eprubeta

Baloane cu ser fiziologic steril

Pungi sterile pentru omogenizarea probelor solide sau semisolide

Numarator de colonii

Reactivi pentru determinare

Mediu de diluare: Solutie ser fiziologic
Mediu de cultura: Anexa 2

DESCRIEREA MODULUI DE LUCRU

Se cantaresc 25 g proba produs alimentar, peste care se adauga 225 ml apa peptonata. Se
omogenizeaza timp de 1 min.
Pentru diluarea probei se aplica schema de dilutie din figura 1.

Figura 1 Schema de lucru pentru realizarea dilutiilor si inocularea probelor

*Toate probele se realizeaza in duplicat.

Cu o pipeta sterila se transfera in fiecare cutie Petri sterila, cate 1 cm2 proba de analizat, daca
produsul este lichid sau cate 1 cm2 dilutie initiala, in cazul altor produse. Se realizeaza apoi
prima dilutie decimala a probei de analizat (10 -1). Se repeta aceste operatii cu dilutiile
urmatoare, folosind cate o noua pipeta sterila pentru fiecare dilutie decimala (Fig.1).
Se toarna in fiecare cutie Petri cate cca. 15 cm 2 mediu PCA (Plate Count Agar) cu temperatura
de 455C.
Mediile se uniformizeaza rapid in placi, prin rotirea placilor in plan orizontal, apoi sunt lasate
in repaus pana se produce solidificarea lor.
* Se noteaza pe capacul placilor numele probei, mediul utilizat, dilutia inoculata, temperatura la care
se va face termostatarea.

Dupa solidificarea mediului placile se termostateaza cu capacul in jos, pentru 3-5 zile la
temperatura de 25-28C.
REZULTATE
Se retin cutiile care contin 15.300 de colonii. Numarul de ufc de drojdii si mucegaiuri per ml
sau gram de produs se calculeaza ca medie ponderata, cu formula urmatoare:

unde
C - suma coloniilor numarate in toate cutiile retinute;
n1 - numarul de cutii retinute dintr-o dilutie
n2 - numarul de cutii retinute din dilutia succesiva
d - factorul de dilutie corespunzator primei dilutii din care s-a realizat retinerea
placilor.
Rezultatele calculate se rotunjesc la doua cifre semnificative.
Se exprima gradul de contaminare printr-un numar cuprins intre 1,0 si 9,9 multiplicat cu 10x,
unde x este puterea atribuita lui 10.
Daca cele doua cutii Petri, la nivelul probei de analizat (produse lichide) sau al dilutiei initiale
(alte produse) contin mai putin de 15 colonii, se face media aritmetica, m, a coloniilor
numarate in cele doua cutii.
Rezultatul se exprima sub forma:

- numar de ufc de drojdii si mucegaiuri estimat per ml:

NE=m (produse lichide)
- numar de ufc de drojdii si mucegaiuri estimat per gram
NE=md-1 (alte produse), in care d este factorul de dilutie al dilutiei initiale (alte produse).
Daca cele doua cutii Petri , la nivelul probei de analizat (produse lichide) sau al dilutiei
initiale (alte produse) nu contin nicio colonie, rezultatul se exprima sub forma:
-

mai putin de o ufc de drojdii sau mucegaiuri per ml (produse lichide);

mai putin de 1d-1 ufc de drojdii sau mucegaiuri pe gram (alte produse)

ANEXA 1
GRUPELE PRINCIPALE DE PRODUSE PENTRU CARE SE RECOMANDA
ANALIZA

ANEXA 2

CONDITII DE CULTIVARE SI COMPOZITIA MEDIILOR DE CULTURA PENTRU

NUMARAREA MICROORGANISMELOR
Conditiile particulare de lucru conform prevederilor din normativele romanesti
adaptate la conditiile ISO (SR ISO) sunt prezentate in tabelul 1.
Tabelul 1. Conditii de cultivare pentru numararea microorganismelor impuse de normativele ISO

Grup de microorganisme

Medii de cultura

Conditii de termostatare
Temperatura/timp

Numar
total
de
microorganisme aerobe,
care se dezvolta la 30C
(bacterii,
drojdii
si
mucegaiuri)
Drojdii si mucegaiuri

- PCA

30C/72h 3h

- YGC
- OGA (OGYE)

25C/5 zile

Compozitia mediilor de cultura recomandate pentru evaluarea diferitelor categorii de

microorganisme este prezentata in tabelul 2.
Tabelul 2. Compozitia mediilor de cultura recomandate pentru determinarea si confirmarea numarului
de unitati formatoare de colonii

Indicator microbiologic

Compozitie medii de cultura, gl-1

Numar total de microorganisme

PCA

(engl. Plate count agar1);

SMA- Standard methods agar2))
Triptona..........................5,0g
Extract de drojdie...........2,5g
Glucoza anhidra...............1,0
Agar-agar.............12,0-18,0g
Apa pana la ..............1000ml
pH=7,2
Mediul este disponibil comercial.

Drojdii si mucegaiuri

YGC

(Extract de drojdie, glucoza, cloramfenicol agar )

Extract de drojdie..............5g
Glucoza...........................20g
Cloramfenicol.................0,1g
Agar-agar.........................15g
Apa pana la..............1000 ml
pH=6,6
OGA (OGYE)

(Oxitetraciclina glucoza agar)

Extract de drojdie..............5g
Glucoza...........................20g
Agar-agar.........................16g
Apa pana la...............1000ml
pH=7,2
In momentul utilizarii, in mediul fluidificat se
adauga 100 ml solutie 1mg/ml oxitetraciclina.
Geloza nutritiva (geloza alba)
Agar-agar..................................12.18g
Apa pana la.............................1000 ml