ANTIVIRALES

Son frmacos que Inhiben procesos

especficos del virus, como la unin a la
clula, la decapsidacion del genoma
viral o el ensamblaje de los nuevos
virus.

Amantadine / Rimantadine

MODO DE ACCIN DE LAS VACUNAS ANTIVIRALES

1. Penetracin vral:

Pleconaril. agente anti-picornavirus, se pega en el can del poro

bloqueando la entrada del virus a la clula.

Amantadine / Rimantadine: utilizado en tratamiento de la influenza viral tipo

A 1 y 2 modo de accin es inhibir la destruccin de la envoltura viral en los
endosomas celulares. Rimantidina

= mismo efecto pero es menos toxica

2. Replicacin:

Aciclovir: anlogo sisntetico del nucleotido purina guanosina inhibe la

sintesis del ADN viral. Eficaz contra herpesvirus tipo 1 y 2; el virus de la
varicela-zster (VZV), citomegalovirus (CMV) y el virus epstien bar. Modo
de accin

La droga es fosforilada por

la timidina-cinasa (enzima
viral), a monofosfato; el
cual es convertido a
trifosfato de aciclovir por
las cinasas celulares.
El trifosfato de aciclavir
inhibe la DNA polimerasa

Diferencias en sus estruc.

Qumicas

Ganciclovir: inhibe la sintesis del ADN viral. potente inhibicin de la replicacin

del CMV.
Cidofovir: Es el primer anlogo de un nucletido. Muy activo en contra del CMV,
requiere solamente ser difosforilado por las cinasas celulares.
Ribavirina: un anlogo de la purina. eficaz contra: virus DNA y RNA como el virus
respiratorio sincitial (RSV) y los virus de influenza A y B

Vidarabina. (ara A): Es un anlogo de la purina con actividad en contra

del grupo de los herpesvirus (HSV y VZV). Es ms txico que el aciclovir y

el ganciclovir.
Foscarnet: anlogo tipo pirofosfato acta sobre los herpesvirus y la
transcriptasa reversa del HIV. Es inhibidor frente a CMV resistentes a
ganciclovir y de VHS y VVZ resistentes a aciclovir.

Son anlogos de los cidos nucleicos: zidovudina, ganciclovir, vidaravina,

aciclovir.
Inhibicin de la sntesis proteica: interferones.
Alteracin de la fase de maduracin proteica: inhibidores de proteasa,
inhibidores de glucosilacin

Especificos para el
tratamiento de
infecciones por retrovirus
como, el VIH. No son
curativos, pero pueden
disminuir la carga viral y
retrasar la depresin
inmunolgica
Bloquean directamente la
accin de la enzima
Transcriptasa de forma no
competitiva y la
multiplicacin del viruS
Evitan la sntesis de la cadena de ADN
provrico.
El AZT ES un anlogo sinttico de la
pirimidina es la droga ms ampliamente
utilizado en pacientes con SIDA. Otros:
abacavir, tenofovir, Lamivudina (3TC),
Didanosina(ddI), Zalcitabina (ddC),

Son los siguientes: Nevirapine

Delavirdine, Efavirenze
Evitan la formacin de las protenas
estructurales del VIH, necesarias
para la formacin de la partcula
vrica madura.
Son los siguientes: amprenavir,
atazanavir, darunavir, indinavir,
lopinavir/r, nelfinavir, ritonavir y
saquinavir.

diferencias

en

las

estruicturas

quimicas

TOXICIDAD DE ANTIVIRALES (EFECTOS):

Anemia: ZIDOVUDINA (RETROVIR)
Hipersensibilidad: ABACAVIR Marca comercial: Ziagen
Hepatoxicidad: ritonavir (rtv) nombre comercial: norvir
Pancreatitis: DDL, D4T.
Desordenes metablicos: inhibidores de la proteasa
Claculos renales: indinavir
Neuropata periferica (dao a nervios perifericos) : DDL, D4T, ddC

HAART

Es la combinacin de 2 o ms drogas retrovirales que el mdico

receta basndose en factores como la carga viral del paciente, el conteo de

linfocitos CD4+ y los sntomas clnicos.
Aunque no es una cura, la HAART controla la carga viral ayudando a retrasar el
comienzo de los sntomas y as logrando una supervivencia ms larga en las
personas diagnosticadas con VIH/SIDA.

APLICACIONES
Diagnostic
o
Investigaci
n bsica
Vectores

MANEJO DE VIRUS

Tcnicas para su estudio:

Mtodos serolgicos:
ELISA.

WB y ELISA tanto pueden

analizar las protenas, pero
WB cualitativa y algunos
anlisis en tiempo semi
cuantitativa, ELISA pueden
analizar las protenas en tres
modos: cualitativa,
cuantitativa y semi

Western Blot: requiere 3 pasos: 1. Electroforesis, 2 transferencia

gel - membrana y 3 inmunodeteccin
Los Ac secundarios pueden ser: *Ligados a
enzimas (veremos un cambio de color)
*de marcado radiactivo
*de marcada fluorescente

dependiendo del tipo de anticuerpo secundario

utilizado, Los mtodos ms utilizados para
detectar protenas son: 1.
Quimioluminiscencia, 2.
Fluorescencia y 3. Colorimetra.

Hemoaglutinacin es la
propiedad que tienen
ciertos virus para unir y
aglutinar eritrocitos de
mamferos y aves, debido a
las protenas que poseen en

Elisa dot
Inmunodifucion
Aglutinacin
Inmunofluorecencia

La inmunohistoqumica, o IHC, es un
procedimiento especial de coloracin con tinta
que se realiza sobre tejido mamario
canceroso. Se lo utiliza para determinar si
las clulas cancerosas tienen receptores
HER2 y receptores de hormonas en su

La inhibicin de la
hemoaglutinacin (IHA) es la
unin de anticuerpos a la
hemoaglutinina del virus. La
lectura de resultados se
interpreta en sentido contrario a
la hemaglutinacin
:

Inmunohistoquimica
REACCIN
POSITIVA: presencia
inmunodIfusion
de botn.

REACCIN +: Los Ac frente a esos epitopos

producirn la correspondiente aglutinacin y
formacin de IC, evidencindose mediante la
aparicin de un velo malla caracterstico en el
medio.
REACCIN -: s no hay Ac, los Ag particulados
sedimentan formndose un botn bien definido en
el fondo del tubo o pocillo de reaccin.

PRUEBAS DE DETECCION DE VIH

1. PRUEBAS DE DIAGNOSTICO RAPIDO. La aglutinacin y el EIA de

membrana (dot-blot). En caso de dar positivo, se repite la prueba 2 veces.
Si da nuevamente positivo, se hace la prueba de confirmacin WB
2. PRUEBAS DE CONFIRMACIN. Western-Blot
En primer lugar se identificarn, por su posicin en la tira, las bandas
especficas de Reactividad HIV-1 (gp160, gp120, p66, p55, etc.)
ANTIGENO
Para la
interpretacin del
resultado de HIV-2
se seguir el
criterio de la OMS
(reactividad frente
al menos dos
glucoprotenas:
gp140, gp105 o
gp36).

Mtodos moleculares
PCR= detecta La presencia de cidos nucleicos virales. es posible
amplificar un segmento de ADN de manera exponencial

PCR real time= permite cuantificar adems de detectar y amplificar

secuencias de ADN.

RT-PCR= cuantificacin de los niveles de ARN mensajero. usa

molculas de un reportero fluorescente para monitorear la
amplificacin de productos durante cada ciclo de reaccin. EN ESTA
TECNICA disminuyen los falsos positivos.

SE UTILIZAN
Para identificar
qu bandas
del gel
contienen
secuencias
complementari

 Southern Se utilizan sondas de DNA (molculas de DNA

marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida)
Northern Se utilizan sondas de RNA

Dot blot La tcnica ofrece importantes ahorros en tiempo. Sin embargo,

no ofrece informacin sobre el tamao de la biomolcula blanco. slo
puede confirmar la presencia o ausencia de una biomolcula o
biomolculas que pueden ser detectados por las sondas de ADN o el
anticuerpo. COMO SE MUESTRA A CONTINUACIN EN EL DIBUJO:

Solamente las muestras

portadoras de la regin de
inters se revelaron (puntos
oscuros). Cuanto mayor es la
cantidad del ADN de inters, mayor
es la intensidad del color negro.

Cultivo de clulas
Diferencias entre clulas normales y tumorales:

mtodos: Para separar los

diferentes tipos celulares
1. La centrifugacin, que
permite separar a las clulas
por tamao.
2. La capacidad de
adherencia al SOPORTE
( vidrio o al plstico) que
tienen algunos tipos
celulares.
3. La unin a ciertos
anticuerpos especficos para
determinados componentes
celulares
4. La unin a ciertos
anticuerpos acoplados a
colorantes fluorescentes

Obtencion inicial de clulas (pasos) : consiste en separar la matriz

extracelular que las mantiene unidas. La muestra se trata con enzimas
proteolticas (como tripsina y colagenasas) que degradan las protenas

de la matriz; y tambin se utilizan agentes (como el EDTA - cido

etilendiaminotetraactico) que elimina la adherencia celular. De esta
forma, y mediante una suave agitacin, se obtiene una suspensin
celular que contiene a todas las clulas presentes en ese tejido

METODOS
CUANTITATIV
OS PARA
TITULAR
VIRUS
Por diluciones
hasta el 50 por
100 del punto
final como:
Aglutinacin y
Inhibicin de la
aglutinacin

Por Unidades
En el manejo de virus, Son
mtodos fsicos:

EFECTO CITOPATICO VIRAL

se conoce como efecto
citopatico al aspecto
macroscpico e histolgico
del dao producido por un
virus en un cultivo celular

Provoca: Sincitios. clula con

varios ncleos resultante de la fusin de
varias clulas. lisis celular,
vacuolizacin, formacin de cuerpos
de inclusin, etc.

Microscopia
electrnica= para
observacin de la particula
viral
ultraCentrifugacin=

Cepas emparentadas (de

otras especies) tambien
provocan respuesta
inmune. EJEMPLO. Viruela
vacuna inmuniza
humanos

CRONOLOGIA VACUNAS: VIRUELA (Jenner 1976), RABIA (Pasteur 1885), POLIO

INACTIVADA (Salk, 1954), POLIO ATENUADO (Sabin 1957). RUBOLA (1966),
SARAMPION Y PAROTIDITIS (1967), HEPATITIS (1975). VARICELA (1995).

PREVENCIN Y TERAPIA ANTIVIRAL

De tipo

Vacunas:

Gnica
Convencional

Convencionales:

producen
anticuerpos y/o clulas de defensa
que neutralizan o destruyen a los
microorganismos patgenos en una
infeccin futura mediante las
propiedades de : ESPECIFICIDAD Y
MEMORIA

De nueva generacin

La virulencia de las partculas virales es reducida

artificialmente mediante pases continuos en
cultivo de clulas diferentes a las del hospedero
natural, o son producidas en cultivos celulares bajo
condiciones adversas como temperatura
subfisiolgica. el virus se adapta y muta.

dirigidas a Generar una respuesta

inmune mas efectiva contra cada
patgeno en particular

CARACTERISTICAS
GENERALES de la
vacunacin :
- Protege a una proporcin
alta de quienes la reciben
-proteccin duradera
- Carece de efectos
secundarios
Vacunas de virus inactivados

Problemas posibles: la
contaminacin de las clulas
con otro tipo de virus ,
contaminacin viral de los
productos
quedese
requiere
un biolgicos
buen control
utilizan en el cultivo celular
calidad.
suero y la albmina bovina.
Las vacunas atenuadas e
VIGILAR control
en ladel
inactivadas
requieren
elaboracin de los productos ya
que pueden con bacterias,
levaduras, hongos y
micoplasma.
se debe evaluar la inocuidad

producidas con partculas virales completas o fraccionadas, inactivando de su

cido nucleico, pero conservan sus propiedades antignicas. la inactivacin se realiza
con: formaldehdo
Ventajas es una vacuna segura, no puede replicarse en las clulas del husped ni
Reacciones adversas de
revertir a su virulencia

vacunas

Desventaja respuesta inmume humoral carece de inmunogenecidad en mucosas

Las reacciones locales pueden ser
dolor, enrojecimiento e
inflamacin en el lugar de
inyeccin, de desaparicin
HEPATITIS B: 3 dosis
espontanea.
la primera nacimiento
la segunda entre el primero y el segundo
Las reacciones sistmicas como
mes

PRODUCCIN de
vacunas virales:

rrrrrr

VACUNAS
PARA VIAJEROS:
VACUNA CONTRA
EL
NOMBRE GENERICO: VACUNA HB
TIPO DE VACUNA: MUERTA, FRACCION DE VIRUS
ANTIGENO: ANTIGENO DE SUPERFICIE DE LA HEPATITIS
(HBSAg)
CEPAS : PICHIA PASTORIS
MEDIO DE CULTIVO: LEVADURA

VACUNAS
EXISTENTES

SARAMPION, LA RUBEOLA,
1. Vacuna del virus de la
Y LAS PAPERAS (TRIPLE
fiebre amarilla (completa,
VIRAL)inactivada)
TIPO DE VACUNA:
viajero que va a
VIVA, VIRAL,
un reaVIRUS
endmica de la
ENTEROS
enfermedad (partes de
America Central y de Sur
Amrica)
2.

Vacuna (completa,
inactivada), contra el
virus de la encefalitis
japonesa ( un flavivirus
como el de la fiebre
amarilla).

3.

Vacuna (completa,
inactivada), contra el
virus de la hepatitis A, se
administra solamente al

Evasin de los virus a las vacunas:

SEROTERAPIA: Suero hiperinmune
antirrbico. Se obtiene de caballos
hiperinmunizados; contiene 299
UI/ml de anticuerpos neutralizantes

ENFERMEDADES INFECCIOSAS SON EL PRINCIPAL PROBLEMA DE SALUD!!

Algunos patgenos mantienen alta morbi/mortalidad, y no es posible una cobertura global con las vacunas actuales
(inmunidad no duradera, vacuna inestable)
Existen situaciones en las que el principio clsico de vacunacin no es aplicable (respuesta inmune dbil, o no
efectiva)
Necesidad de vacunas teraputicas; (HSV, cancer)

VACUNAS DE NUEVA GENERACION

DISEO DE NUEVAS VACUNAS GRACIAS AL:
+ Mayor conocimiento de cmo los patgenos actan, inmunologa de las
infecciones y avances tecnolgicos: ADN recombinante, anlisis masivo de
informacin gentica, etc.

CLASIFICACION:
SE BUSCA disminuir
los costos de
produccin
Son mas seguras que
las vacunas

vacunas recombinantes

mediante tcnicas
de ingeniera
gentica, se
pueden seleccionar
los genes
correspondientes
clonarlos y
expresarlos en
diferentes vectores

subunidades o sintticas (p.i.)

Deletadas

Producidas en forma:

LAS vacunas GENICAS se diferencian de las vacunas clsicas en que inoculan al

paciente con el gen que codifica para el antgeno capaz de inducir una respuesta
inmunitaria especfica.

Figura 1.Esquema del plsmido de una vacuna de DNA tpica.

VACUNAS GENICAS
Actualmente existen, dos
maneras de introducir este
gen en las clulas del
organismo. Una forma
consiste en insertar el DNA
desnudo mediante
plasmidos. La otra forma es
a travs de vectores
vivos, bacterias o virus
atenuados, que portan los
genes que codifican para

GENES REPORTEROS: Gen cuyo

producto es fcilmente detectable.
Se lo usa en construcciones
genticas para verificar la
transferencia del transgn o para
estudiar la actividad de promotores
y otras secuencias reguladoras.
provocan caractersticas
visualmente identificables que
implican protenas luminescentes y
fluorescentes. Ejemplo: gen que
codifica para la protena verde
CLASIFICACION VACUNAS NUEVA GENERACION:

PROTEINAS INACTIVADAS (SUBUNIDADES O PROTEINAS SINTETICAS)

Contienen un precipitado (lipopolisacaridos, extractos ribosmicos, protenas
purificadas). El organismo recombinante que transporta al gen insertado se

multiplica; y el producto del gen es cosechado, purificado y administrado como una

vacuna. Se aisla el componente responsable de la patogenicidad.
Las vacunas de protenas inactivas se caracterizan por la sntesis de protenas
antignicas in vitro. Se determina la
Secuencia de aminocidos
Tcnicas para la produccin:
*DNA recombinante (VLP, Subunidades)
*sntesis de pptidos sintticos

se puede reproducir su
secuencia mediante la
sntesis qumica y
realizar un pptido de
sntesis idntico al del
virus.

METODOLOGIA: consiste en
tomar DNA viral o clonar la
secuencia gnica de las
protenas que forman el
nucleocapside viral
produciendo
microscpicamente una
estructura semejante al virus
( Virus like particles VLP) se
introducen en un vector de
transferencia ( plasmido o
vector viral ( baculovirus

Ejemplos: toxoides, protenas

virales naturales (hepatitis B),
fraccin viral (gripe), fraccin
bacteriana (tos ferina),
polisacridos capsulares.
Las ventajas que ofrece este sistema de
produccin son:
*pureza de la protena inmunogenica
*codifica multiples epitopes antigenicos
seguridad
*evoca respuesta humoral y celular
*disminucin costos de produccin
*produccin a gran escala
*termo estable
*mejor control en el proceso

DELETADAS :
Los genes responsables de inducir la enfermedad son removidos o modificados
por ingeniera gentica. Los organismos son atenuados, por lo que los genes se
alteran y ya no se expresan.
Hay menor probabilidad de causar enfermedad. Estimula la inmunidad

COMO SE PRODUCEN
LAS VACUNAS POR
DELECCION?

RECOMBINANTES
Se producen grandes cantidades de protenas por insercin de ADN en vectores:
levaduras, bacterias y virus.

PRODUCCION VACUNAS DNA

RECOMBINANTE
-Seleccin del DNA viral
-corte con enzimas de restriccin
.- insercin del fragmento en un
plasmido.
- inyeccin del plasmido modificado
-produccin de antigenos en la
clulas presentadora de antigenos
-estimulacin de linfocitos B
produccin de anticuerpos

TERAPIA GENICA ANTIVIRAL

Alto potencial para el tratamiento de enfermedades hereditarias o infecciosas.
Consiste en la introduccin de material gentico (secuencias o genes
especifico de un virus) dentro de las clulas infectadas con la intencin de
contrarrestar los efectos patolgicos ocasionados o la expresin de un gen o la
funcin de una protena en particular.
TERAPIA GENICA
Acido mucleico

SE BASA EN
LA
UTILIZACION

Oligos antisentidos (DNA de cadena sencilla)

RNA antisentidos
Ribozimas
RNA de inerferencia (tiene doble cadena)

Proteinas Anticuerpos
Receptores virales
Receptores celulares
Dominantes Negativos (protenas anormales con efecto en la protena silvestre)

Triple hlice DNA: hibidiza con la doble hlice del DNA formando una
triple hlice bloqueando el mecanismo de trascripcin del gen diana.
Doble hlice RNA: con el RNA mensajero hibridiza formando una hlice de
doble cadena bloqueando el mecanismo de traduccin por 2 mecanismos:
1.- la sntesis de la protena bloqueando la lectura del RNAm por los
ribosomas y 2.- reduce la vida media del RNA mensajero por
degradacin

Los elementos
antisentido son
Secuencias
complementarias al gen
que se desea reprimir
su mecanismo de
accin consiste en el
apareamiento de bases
con las secuencias
blanco ( DNA o RNA

Los virus son mejores blancos para

la terapia con elementos
antisentidos debido a que acarrean
genes diferentes a los de las clulas del
husped contra cual se pueden dirigir
los antisentidos y bloquear su
expresin. Ejemplos: HIV, Hepatitis B y

OLIGOS ANTISENTIDO

Son secuencias sintticas cortas de 15 a 25 pb

Son especificos debido a su complementaridad de bases
Se producen en grandes cantidades
su efecto es pasajero
Su enlace de fostatodiester tiene una vida media de 1 hora en suero
Para hacerlos ms resistentes se modifica su estructura: el O d cada
grupo fosfato se reemplaza por S o CH3
Administracin de oligos antisentido para tratamiento de retinitis causado
por infecciones de Cytomegalovirus (CMV) en pacientes con sida

RNA ANTISENTIDOS.

mas largos y son sintetizado por las clulas en su interior = produccin

constante del RNA antisentido,
son introducidos a la celula (transfeccion) en un plasmido o un vector viral.

RIBOZIMAS
Son molculas de RNA con actividad cataltica,
estas secuencias se unen al RNAm del gen blanco que se desea reprimir a
travs de sus regiones antisentidos
Se forma un complejo hibrido con las secuencias especificas del gen
blanco, y los dominio cataltico de la Ribozima cortan al RNAm
ventajas: no son consumidos y una molcula puede inactivar a un gran
nmero de molculas de RNAm
RNA DE INTERFERENCIA (RNAi)
funciona como un sistema inmune a nivel celular. Es decir, que le permite a la
clula distinguir informacin gentica que le es propia, de la que no lo es
El RNA de interferencia consiste en la introduccin de un RNA doble
cadena dentro de las celulas provocando una degradacin especifica a un
gen particular con la misma secuencia,
las enzimas denominadas dicer (RNAsa III) cortan al RNA doble cadena
en fragmentos de 21 a 23 pb,
en la actualidad se estn realizando ensayos invitro de la inhibicin de la
proliferacin viral para HIV y Hepatitis C
herramienta eficaz para reducir la expresin de un gen.

QU SON LAS VACUNAS CONTRA EL CNCER?

Las vacunas contra el cncer pertenecen a una clase de sustancias que se conocen como
modificadoras de respuesta biolgica. Los modificadores de respuesta biolgica trabajan al
estimular o restaurar la habilidad del sistema inmunitario para combatir infecciones y
enfermedades. Hay dos tipos amplios de vacunas contra el cncer:

Vacunas preventivas (o profilcticas), las cuales tratan de impedir que

se presente el cncer en gente sana.
Vacunas de tratamiento (o teraputicas), las cuales tienen como objeto
el tratamiento de un cncer existente al reforzar la respuesta
inmunitaria natural del cuerpo contra el cncer. Las vacunas de tratamiento
son una forma deinmunoterapia.

Cmo funcionan las vacunas contra cncer?

Las vacunas preventivas de cncer se dirigen a sustancias infecciosas que causan
o contribuyen a que se forme el cncer
Las vacunas de tratamiento de cncer se disean para que funcionen al
activar las clulas T citotxicas
Tanto las vacunas de prevencin de cncer como las vacunas tradicionales
estn basadas en antgenos que llevan las sustancias infecciosas
Cmo se producen?
Mediante antgenos, uso de clulas cancerosas debilitadas o muertas o
por molculas con instrucciones genticas para antgenos asociados
con cncer.

Vacuna teraputica