Curva de Crecimiento de Bacterias

INFORME N 04: CURVA DE CRECIEMIENTO DE
BACTERIAS LCTICAS
UNJBG ESIA 2015
CURVA DE CRECIMIENTO DE BACTERIAS (LCTICAS)
I.
OBJETIVOS
Estudiar la curva de crecimiento de bacterias lcticas y al mismo

tiempo construir la curva de sntesis de cido lctico. Comparar los
resultados de una cepa con fecha de vencimiento vencida con una de
fecha no vencida.
II.
FUNDAMENTO TERICO
II.1.
DEFINICIONES
Las cepas de Lactococcus lactis generalmente son aisladas de
productos lcteos o de la leche, sin embargo no todas las cepas
son apropiadas p ra su uso tecnolgico, e tal forma que primero
tiene que demostrar su crecimiento en sustratos natural s o
medios de cultivo sintticos. Su adaptacin y crecimiento
requiere de mu compuestos qumicos que deben existir en los
sustratos o se deben incorporar.
Las bacterias lcticas se encuentran en ambientes muy variados,

pero generalmente estn asociadas con sustratos ricos en
nutrientes. Esto ha d erminado que en su evolucin hayan
perdido muchas capacidades biosintticas, as como la acidad de
esporulacin, innecesarias en sustratos como los alimentos o el
tracto gastrointestinal (Makarova y Koonin, 2007; Pfeiler y
Klaenhammer, 2007). En relacin con los alimentos, forman
parte de la microbiota natural de las superficies de vegetales,
aparecen con frecuencia en leche y derivados, en productos
crnicos y en otros alimentos. En estos sustratos la acidificacin
y otros cambios que acompaan el crecimiento de las bacterias
lcticas, como por ejemplo la produccin de compuestos
antimicrobianos,
exopolisacr
dos
diversas
enzimas,

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contribuyen al aroma, textura, conservacin y valor nu ritivo de

una gran variedad de productos fermentados (Kleerebezem y
Hugenholtz, 2003; Wood, 1997).
Las bacterias se dividen por fisin binaria, la clula madre al
alcanzar un determinado volumen se divide dando dos clulas
hijas, El proceso de fisin binaria consiste en la duplicacin del
material hereditario seguido de la reparticin en las dos clulas
hijas , las que se separan por estrangulamiento de la membrana
celular y la formacin de la pared celular.Esto se realiza en un
tiempo de generacin determinado para cada cepa.
Para determinar el tiempo de vida de una cepa liofilizada es
necesario comparar el crecimiento de la biomasa
con la
velocidad de sntesis del producto final.
dP
dt
dX
= dt
+ X
En esta prctica se trabajar con lactobacillus , utilizados

ampliamente en diversas fermentaciones
en la industria
alimentaria.
II.2.
CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO LQUIDO
Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los

casos las clulas que se producen en cada divisin forman una
suspensin de clulas libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se
pueden diferenciar cuatro fases en la evolucin de los
parmetros que miden el crecimiento microbiano (Fig. 2):
1.-
Fase
lag
microorganismos
condiciones
de
adaptacin
adaptan
ambientales
su
durante
metabolismo
(abundancia
de
la
a
las
que
los
nuevas
nutrientes

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condiciones de cultivo). En esta fase no hay incremento en el

nmero de clulas, pero hay gran actividad metablica,
aumento en el tamao individual de las clulas, en el contenido
proteico, ADN y peso seco de las clulas.
2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de
crecimiento es mxima y el tiempo de generacin es mnimo.
Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad mxima
los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas
durante esta fase se explica con los modelos matemticos
descritos anteriormente.
Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es
inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas
condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el
crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad.
3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de

bacterias (ni la masa u otros parmetros del cultivo). Las
clulas en fase estacionaria desarrollan un metabolismo
diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce
una acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que
pueden tener importancia industrial.
Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se
agota algn nutriente esencial del medio o porque los
productos de desecho que han liberado durante la fase
exponencial hacen que el medio sea inhspito para el
crecimiento
microbiano.
La
fase
estacionaria
tiene
gran
importancia porque probablemente represente con mayor

fidelidad el estado metablico real de los microorganismos en
los ambientes naturales.
4.- Fase de muerte: Si la incubacin contina despus de que
una poblacin microbiana alcanza la fase estacionaria, las
clulas pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero va
a comenzar una disminucin progresiva en el nmero de

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clulas viables y cuando esto ocurre se dice que la poblacin

ha entrado en fase de muerte.
2.3.
MEDIDA
DEL
CRECIMIENTO
ENUMERACIN
DE
MICROORGANISMOS
Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de
microorganismos.
Los mtodos mas utilizados son el recuento de viables en placa y el
mtodo turbidimtrico:
1.- Recuento de viables: Consiste en la dilucin de una muestra
(con solucin salina estril, buffer fosfato, agua peptona) hasta que
las bacterias se diluyan lo suficiente como para contar con precisin.
Se siembra un volumen determinado de cultivo o muestra sobre el
medio de cultivo slido adecuado para estimar el nmero de viables
contando el nmero de colonias que se forman puesto que cada una

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de estas deriva de una clula aislada. Las placas de final de la serie

debe tienen entre 25 y 250 colonias (o entre 30 y 300 colonias).
Menos de 25 las colonias no son aceptables por razones estadsticas,
y ms de 250 colonias en una placa es probable que produzcan
colonias muy cerca unos de otros para ser distinguidos como distintas
unidades formadoras de colonias (UFC).
En ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es
demasiado baja, stos se pueden recolectar por filtracin a travs de
una membrana (de 0.2 m de tamao de poro) y posterior colocacin
de la membrana en un medio de cultivo adecuado para que se formen
las colonias.
Las relaciones de dilucin, pueden presentarse ya sea con dos puntos

(:) o barras (/). Una barra indica la proporcin de una parte a un
conjunto, por ejemplo, 1 / 2 significa 1 de 2 partes, con de un total de
2 partes. Dos puntos indica la proporcin de 1 parte a 2 partes, con
un total de 3 partes. As, 1 / 2 es igual a 1:1, pero 1:2 es igual a 1 / 3.
III.
MATERIALES Y METODOS

BACTERIAS LCTICAS
01 vaso de precipitado
de 1 lt estril
Placas petri
Equipo de
incubacin
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Pipetas de 10, 5, 2 ,1 ml
Tubos de ensayo
Equipo de acidez
titulable

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Cepas de lactobacillus,
Agar Rogosa.
IV.
PROCEDIMIENTO
Sembrar la leche con lactobacillus.
Incubar a 43 C.
Controlar el proceso de fermentacin realizar las siembras y

titulaciones
necesarias.
Utilizar
una
vencimiento recientemente vencida.
Comparar con los resultados anteriores.
cepa
con
fecha
de

BACTERIAS LCTICAS
V.
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RESULTADOS
Cuadro de recuento de bacterias segn el tiempo.

N
Hora de
D(acide
anlisis
z)
Recuento de
Bacterias
lcticas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10:25
11:05
11:30
12:03
12:36
13:08
13:40
14:20
15:00
18
20
21
30
43
50
55
60
65
Ufc/ml
16x105
42x105
70x105
75x105
85x105
110x105
220x105
530x105
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BACTERIAS LCTICAS
16:48
14:24
12:00
9:36
Tiempo
7:12
4:48
2:24
0:00
0
20000000
40000000
60000000
Recuento de bacterias ufc/ml
Conforme va aumentando el tiempo aumenta el numero de bacterias

esto se debe a que el crecimiento bacteriano es bueno debido a un
buen mtodo de siembra y utilizando los mediaos anaerbicos
adecuados.
En la fase estacionaria ya no hay ni multiplicacin ni infeccin. En el
caso de la bacteria de leche
es en esta fase en la que entran en
accin ejerciendo su actividad gastrointestinal sobre la flora intestinal

y otros organismos patgenos.
VI.
CONCLUSIONES
El
crecimiento
bacteriano
puede
considerarse
como
el
crecimiento de poblaciones de muchos millones de clulas

cuyas caractersticas son esencialmente estadsticas, y el
comportamiento de la clula individual es tomado como una
frecuencia.
El crecimiento de las bacterias en cultivo puede determinarse
midiendo experimentalmente el incremento de la materia
celular (protoplasma) o del incremento del nmero de clulas.

BACTERIAS LCTICAS
Las posibilidades fisiolgicas de
UNJBG ESIA 2015
los microorganismos
se
relacionan inversamente con sus necesidades nutricionales, ya

que, la sntesis de componentes celulares a partir de materia
inorgnica o compuesto inorgnicos simples es obviamente un
proceso ms complejo de lo que sera si los productos de
partida fueran sustancias orgnicas complejas qumicamente
ms parecidas a los constituyentes finales de la clula.
VII.
BIBLIOGRAFIA
1. Microsoft Corporation, Enciclopedia CD-ROM Microsoft Encarta
Bsica 2001, Estados Unidos 2000.
2. Freeman, Bob A; Microbiologa de Burrows 22a Edicin, Editorial
Interamericana, Espaa 1986. Pags. 57-62.

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