REACTIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (RFC)

Principiu
FC este un test de diagnostic serologic care permite evidentierea in vitro a reactiei antigen
anticorp Ag / Ac) si are la baza proprietatea complementului (C = alexina) de a se fixa numai pe
anticorpul sensibilizat din complexele Ag / Ac .
C nu se poate combina numai cu unul dintre cele 2 elemente Ag sau Ac, care s- ar gasi singur
in tubul de reactie
Reactia se bazeaza pe proprietatea complexelor imune de a fixa ireversibil C`; odata fixat pe
complexul imun, C` nu se mai poate combina cu alte complexe Ag / Ac,
In cazul in care fixarea C` pe primul complex Ag / Ac nu se manifesta printr-un fenomen direct
observabil, autorii au evidentiat reactia indirect, prin adaugarea unui al 2- lea sistem
indicator Ag / Ac, format din:
Sistemul indicator Ag / Ac
Format din:
Ag: globule rosii (hematii) de berbec
Ac: ser antihematii corespunzator (obtinut prin inocularea hematiilor de berbec la iepure
Fixarea C` pe cel de- al doilea sistem antreneaza liza hematiilor, vizibila cu ochiul liber
Complementul este o componenta normala a serului, care nu variaza in procesul de imunizare,
al carui titru nu este influentat de prezenta anticorpilor.
Prin incalzirea serului de testat la 56C, timp de 30 min, actiunea complementului este
inhibata; eventualii Ac prezenti in ser nu sunt distrusi la aceasta temperatura.
Determinare anticorpi
Materiale necesare:
Serul de cercetat (inactivat termic)
Antigenul: suspensii corpusculare microbiene, solutii coloidale, Ag standardizat, titrat,
gata de utilizat
Complementul (alexina): ser de cobai
In momentul utilizarii, C` este titrat, pentru determinarea unei unitati alexice sau cantitatea
minima de complement care determina hemoliza totala a 1 mL de sistem hemolitic la 37C
Sistemul hemolitic: amestec de hematii de berbec (Ag) 5% in ser fiziologic si ser
hemolitic antioaie (Ac)
Titrarea C` se face punand in contact dilutii crescande de ser de cobai cu cantitate fixa de
sistem hemolitic (termostatare 30 min, la 37C)

Faza I
Se pun in contact:
ser de bolnav (inactivat termic, care poate contine Ac suspectati)
+
Ag (suspensia microbiana, coloidala cunoscuta)
+
alexina de cobai titrata
daca in ser sunt Ac suspectati, sistemul imun Ag/ Ac fixeaza alexina,
daca in ser nu sunt Ac cautati, complexul imun nu se formeaza si alexina ramane libera
Faza aII-a
La elementele din faza I se adauga sistemul hemoltic indicator: hematii berbec sensibilizate cu
Ac anti- hematii
In situatia mentionata, in care alexina poate fi libera (absenta Ac specifici in serul de bolnav),
complexul imun hemolittic reactioneaza cu aceasta si produce hemoliza hematiilor (lichid rosu,
clar).
Cand in faza I se produce reactia Ag/ Ac (datorita prezentei Ac specifici), alexina se fixeaza pe
aceste complexe si nu mai produce liza sistemului hemolitic; hematiile cad in buton.

Daca serul de cercetat contine Ac suspectati (Reactie +), Complementul ramane fixat in primul
sistem imun Ag/ Ac, nu se leaga de sistemul hemolitic- indicator, deci nu are loc hemoliza
(hematiile din godeuri cad in buton, cu lichid clar deasupra),
2

Daca serul de cercetat nu contine Ac cautati (Reactie -), Complementul nu se fixeaza de primul
sistem imun Ag / Ac, ramane liber si se leaga la cel de- al 2- lea complex Ag/ Ac sistem
indicator, hemolitic, contribuind la obtinerea hemolizei.
Hemoliza indica un rezultat negativ (lipsa Ac suspectati in serul de bolnav),
Absenta hemolizei/ hematii in buton: indica un rezultat pozitiv (prezenta Ac cautatti in serul de
bolnav).
Aplicatii:

Reactia Bordet- Wasserman (RBW): serodiagnosticul luesului

Diagnosticul rickettsiozelor (tifos exantematic)
Diagnosticul serologic al leptospirozelor
Diagnosticul febrei recurente, brucelozei, toxoplasmozei, febrei tifoide
Serodiagnosticul gonoreei cronice

* Pentru cresterea sensibilitatii si specificitatii se folosesc tehnici care inlocuiesc fixarea C` la

cald (1 ora la 37) cu reactii de fixare la rece (tehnica Kolmer: 20 ore la +4C),
* Pentru cresterea specificitatii se folosesc Ag cu un grad mare de purificare sau se foloseste
RFC cantitativ, in care reactia se executa cu numar mare de dilutii in ser de cercetat.
* Pentru utilizarea reactiei RFC in actiuni largi de depistare se folosesc micrometode executate
in placi cu godeuri in cadrul carora se face titrare unica (in tabla de sah) a C`; se folosesc
concomitent Ag variate pentru diagnosticul sifilisului, rickettsiozelor, leptospirozelor, brucelozei
(Tehnica Bredstreet si Taylor).
Avantajele reactiei: sensibilitate, specificitate inalte, grad inalt de reproductibilitate.